KR101755017B1 - Method for preparation of extracts of Dudleya brittonii and composition for anti-cancer or anti-oxidation comprising the extracts of Dudleya brittonii as active ingredient - Google Patents

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허태회
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Abstract

본 발명은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 제조방법 및 선녀배 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암 또는 항산화용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 열수를 이용한 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 선녀배 추출물을 유효성분으로 포함하는, 암 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항산화 또는 항암용 식품 조성물 및 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암 또는 항산화용 조성물에 따르면, 악성 흑색종 세포내의 ROS수준이 감소하고, 상기 세포의 생존율과 증식이 감소되며, PINK1 mRNA발현이 감소하는 것을 확인하였는 바, 강한 항암 및 항산화 활성을 나타내므로, 항암 또는 항산화를 목적으로 하는 의약품, 식품 및 화장품 등에 이용될 수 있다.The present invention relates to the use of Dudleya brittonii) relates to a method of manufacturing an extract and fairy pear extract or antitumor composition containing the antioxidant as an active ingredient, fairy times using hot water and more particularly (Dudleya brittonii extract, and a cosmetic composition for antioxidant or anticancer, which comprises, as an active ingredient, an extract of Ahnseobu mackerel prepared by the above-mentioned method.
The Dudleya brittonii extract as an active ingredient decreased the ROS level in the malignant melanoma cells and decreased the survival rate and proliferation of the malignant melanoma cells and decreased the expression of PINK1 mRNA, Anticancer and antioxidant activity, it can be used for medicines, foods and cosmetics intended for anticancer or antioxidation.

Description

선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 제조방법 및 선녀배 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암 또는 항산화용 조성물{Method for preparation of extracts of Dudleya brittonii and composition for anti-cancer or anti-oxidation comprising the extracts of Dudleya brittonii as active ingredient}TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to a method for preparing an extract of Dudleya brittonii and an anticancer or antioxidant composition comprising the extract of Dudley brittonii as an active ingredient. as active ingredient}

본 발명은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 제조방법 및 선녀배 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암 또는 항산화용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 열수를 이용한 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 제조방법 및 상기 제조방법으로 제조된 선녀배 추출물을 유효성분으로 포함하는, 암 예방 또는 치료용 약학 조성물, 항산화 또는 항암용 식품 조성물 및 항산화용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to the use of Dudleya brittonii) relates to a method of manufacturing an extract and fairy pear extract or antitumor composition containing the antioxidant as an active ingredient, fairy times using hot water and more particularly (Dudleya brittonii extract, and a cosmetic composition for antioxidant or anticancer, which comprises, as an active ingredient, an extract of Ahnseobu mackerel prepared by the above-mentioned method.

선녀배(Dudleya brittonii)는 다육식물(succulent plant)의 일종으로 Britton's dudleya 또는 Giant Chalk Dudleya 라고도 불리며 대한민국에서는 선녀배(仙女盃)라는 이름으로 불린다. 주로 미국(United States) 남서부 지방이나 멕시코(Mexico) 북서부 지방 또는 바하칼리포르니아(Baja California)에서 서식하고 있으며, 바위틈이나 모래 절벽 등의 험한 환경에서 주로 자란다(Pahl, Jack. Dudleya brittonii - New Crop Report. 2013. Retrieved from the University of Minnesota Digital Conservancy, http://hdl.handle.net/11299/162315). Dudleya brittonii is a kind of succulent plant, also known as Britton's dudleya or Giant Chalk Dudleya, and is called in Korea in the name of 仙女 배. It lives mainly in the southwest of the United States or in the northwest of Mexico or in Baja California and grows mainly in harsh environments such as rocky cliffs and sand cliffs (Pahl, Jack. Dudleya brittonii - New Crop Report 2013. Retrieved from the University of Minnesota Digital Conservancy, http://hdl.handle.net/11299/162315).

현재 천연물의 효능에 대해 연구가 세계적으로 활발하지만 선녀배의 추출법이나 성분, 효능 등에 대한 연구는 이루어지지 않은 상황이다. 또한 한국공개특허 제2011-0067595호에서도 선인장과 다육식물의 무배지 생장방법에 대해서 개시하고 있으나, 선녀배의 성분이나 효능 등에 대해서는 개시하고 있지 않다.Research on the efficacy of natural products is currently active around the world, but studies on the extraction methods, components, and efficacy of marine ginseng have not been conducted. Korean Patent Laid-Open Publication No. 2011-0067595 also discloses a method for growing a seedless plant of a cactus plant and a succulent plant, but does not disclose the composition or efficacy of the seedlings.

다른 다육식물 중 효능이 밝혀진 식물로 Prickly Pear(opuntia) 속의 식물들이 있다. 이 식물들은 현재 암세포에 대한 세포독성효과, 항산화 효과(R. A. Chavez-Santoscoy & J. A. Gutierrez-Uribe & S. O. Serna-Saldivar. Phenolic Composition, Antioxidant Capacity and In Vitro Cancer Cell Cytotoxicity of Nine Prickly Pear (Opuntia spp.) Juices. Plant Foods Hum Nutr (2009)), 당뇨를 유도한 쥐(rat)의 당뇨병을 조절하는 효과(Augusto Trejo-Gonzfilez, Genaro Gabriel-Ortiz, Ana Maria Puebla-Pdrez, Maria Dolores Huizar-Contreras, Maria del Rosario Munguia-Mazariegos, Silvia Mejia-Arreguin, Edmundo Calva. A purified extract from prickly pear cactus (Opuntia fuliginosa) controls experimentally induced diabetes in rats. Journal of Ethnopharmacology 55 (1996} 27 33) 등의 효과들이 연구되어 논문으로 발표되었다. Among the other succulent plants, there are some plants in Prickly Pear (opuntia). These plants are currently used for cytotoxic and antioxidant effects against cancer cells, antioxidant effects (RA Chavez-Santoscoy & JA Gutierrez-Uribe and SO Serna-Saldivar. Phenolic Composition, Antioxidant Capacity and In Vitro Cancer Cell Cytotoxicity of Nine Prickly Pear (Opuntia spp.) Juices (Plant Proteins Hum Nutr (2009)), the effect of controlling diabetes in diabetic rats (Augusto Trejo-Gonzfilez, Genaro Gabriel-Ortiz, Ana Maria Puebla-Pdrez, Maria Dolores Huizar-Contreras, Maria del Rosario Munguia-Mazariegos, Silvia Mejia-Arreguin, and Edmundo Calva. Effects of Prickly pear cactus (Opuntia fuliginosa) controls experimentally induced diabetes in rats. Journal of Ethnopharmacology 55 (1996) 27 33 .

이런 추출물을 이용한 실험이나 천연소재의 추출물을 이용한 화장품이나 다른 제품들에서는 주로 유기용매를 이용한 추출법이 사용되어 왔다. 유기용매로는 메탄올이나 에탄올이 주로 사용되는데 상업적으로 메탄올은 인체에 독성을 가지기 때문에 사용을 자제하는 추세이다. 이런 유기용매를 이용하게 되면 스테로이드계열의 물질이 추출될 확률이 매우 높고 스테로이드를 추출하는 데에도 유기 용매가 사용된다(H. Leon Bradlow. EXTRACTION OF STEROID CONJUGATES WITH A NEUTRAL RESIN. Institute for Steroid Research, Montefiore Hospital and Medical Center, New York, N. Y. 10467 Received December 4, 1967). 또한 자주 사용되는 메탄올 자체가 독성을 띠고 스테로이드 계열은 화장품이나 인체에 사용하는 제품에는 의약품을 제외하면 사용을 자제하거나 법적으로 제한하고 있다. 국내에서도 화장품 성분에 스테로이드계열의 부작용과 함량 및 함유 자체를 제한하는 법규가 마련 되어 있고 독성을 띄는 유기용매 추출보다는 친환경적인 추출법을 이용하는 것이 추세이다.Extraction methods using organic solvents have been used in experiments using these extracts or in cosmetics or other products using natural extracts. As an organic solvent, methanol or ethanol is mainly used. Methanol is apt to be used because it is toxic to human body. When these organic solvents are used, the possibility of extracting steroids is very high, and organic solvents are also used to extract steroids (H. Leon Bradlow, Institute for Steroid Research, Montefiore Hospital & Medical Center, New York, NY 10467 Received December 4, 1967). In addition, frequently used methanol itself is toxic, and steroids are prohibited to use or legally limit the use of cosmetics or products for human use except for medicines. Domestic cosmetic ingredients have sterilization side effects, limitations on the content and content itself, and use of eco-friendly extraction methods rather than toxic organic solvent extraction is a trend.

이러한 배경하에, 본 발명자들은 항암 또는 항산화 효과를 나타내면서 부작용이 적은 천연물을 찾고자 연구 노력한 결과, 종래에 선녀배의 추출법이나 성분, 효능 등에 대한 연구가 이루어지지 않은 상황에서 선녀배로부터 추출물을 얻어 항암 및 항산화 활성에 대해 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.Under these circumstances, the inventors of the present invention have made efforts to search for natural products having anticancer or antioxidative effects and less side effects, and as a result, in a situation where studies on the extraction method, components, Thus confirming antioxidant activity.

한국공개특허 제2011-0067595호(2011년 06월 22일)Korean Patent Publication No. 2011-0067595 (June 22, 2011)

본 발명의 하나의 목적은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.One object of the present invention is to provide a dummy brittonii ) extract as an active ingredient. The present invention also provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer.

본 발명의 다른 목적은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화 또는 항암용 식품 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method and apparatus for < RTI ID = 0.0 & brittonii ) extract as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 포함하는 항산화용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.A further object of the present invention is to provide a method for the treatment of a < brittonii ) extract as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 항암 및 항산화 효능이 개선된 선녀배 추출물의 제조방법을 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a method for preparing an avian embryo extract having improved anticancer and antioxidant efficacy.

상술한 바와 같은 목적을 달성하기 위한, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른암 예방 또는 치료용 약학 조성물은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.In order to achieve the above-mentioned object, the pharmaceutical composition for cancer prevention or treatment according to the preferred embodiment of the present invention is a Dudleya brittonii ) extract as an active ingredient.

일 실시예에 있어서, 상기 암 예방 또는 치료용 약학 조성물의 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 한다. 이때, 상기 물은 80 ℃ ~ 100 ℃의 열수가 바람직하다.In one embodiment, the extract of the pharmaceutical composition for preventing or treating cancer is characterized by being extracted with water, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof. At this time, the water is desirably hot water of 80 to 100 캜.

일 실시예에 있어서, 상기 암은 피부암이 바람직하다.In one embodiment, the cancer is preferably a skin cancer.

또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 항암 또는 항산화용 식품 조성물은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.In addition, the anticancer or antioxidant food composition according to the preferred embodiment of the present invention may contain Dudleya brittonii extract as an active ingredient.

일 실시예에 있어서, 상기 항암 또는 항산화용 식품 조성물의 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 한다. 이때, 상기 물은 80 ℃ ~ 100 ℃의 열수가 바람직하다.In one embodiment, the extract of the anticancer or antioxidant food composition is extracted with water, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof. At this time, the water is desirably hot water of 80 to 100 캜.

또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 항산화용 화장료 조성물은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다.In addition, the cosmetic composition for antioxidation according to a preferred embodiment of the present invention may contain Dudleya brittonii extract as an active ingredient.

또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 항암 및 항산화 효능이 개선된 선녀배 추출물의 제조방법은 선녀배(Dudleya brittonii) 잎을 분쇄하여 선녀배 분쇄물을 제조하는 단계; 상기 선녀배 분쇄물에 물을 첨가하는 단계; 및 상기 선녀배 분쇄물 및 물로부터 선녀배 추출물을 제조하는 단계;를 포함할 수 있다.In addition, a method for preparing an avian embryo extract having improved anticancer and antioxidant activity according to a preferred embodiment of the present invention is described in Dudleya brittonii ) leaves to prepare a neem blight ; Adding water to the neem blend; And a step of preparing a beef stomach extract from the neem groundbreaking product and water.

일 실시예에 있어서, 상기 선녀배 추출물을 제조하는 단계는, 상기 선녀배 분쇄물 및 물을 80℃ 내지 100℃ 및 0.4kgf/cm3의 조건에서 반응시켜 선녀배 추출물을 제조하는 것을 특징으로 할 수 있다.In one embodiment, the step of preparing the dextrose extract comprises reacting the dextrose pre-disintegration product and water at a temperature of 80 to 100 ° C and 0.4 kgf / cm 3 .

일 실시예에 있어서, 상기 선녀배 추출물을 6,500rpm 및 4℃의 조건에서 원심분리하는 단계를 더 포함할 수 있다.In one embodiment, the step of centrifuging the marine embryo extract at 6,500 rpm and 4 ° C may further comprise the step of centrifuging.

본 발명의 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 제조방법 및 선녀배 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암 또는 항산화용 조성물에 따르면, 악성 흑색종 세포내의 ROS수준을 vehicle에 비해 20% 수준까지 감소시키고, 세포의 생존율과 증식은 40~50%까지 감소시키며, PINK1 mRNA발현이 감소하는 것을 최초로 확인하였는 바, 강한 항암 및 항산화 활성을 나타내므로, 항암 또는 항산화를 목적으로 하는 의약품, 식품 및 화장품 등에 이용될 수 있다.The Dudleya brittonii extract and an anti-cancer or antioxidant composition containing the extract as an active ingredient, the ROS level in malignant melanoma cells is reduced to 20% of that of the vehicle, and the survival rate and proliferation of the cells are 40 ~ 50%, and it was confirmed that PINK1 mRNA expression was decreased for the first time. As a result, it shows strong anticancer and antioxidant activity and can be used for medicines, foods and cosmetics for anticancer or antioxidant purposes.

도 1은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 B16-F10 세포 내 ROS 농도에 미치는 영향을 나타낸다.
도 2는 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 B16-F10 세포에 대한 생존율에 미치는 영향을 나타낸다.
도 3은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 B16-F10 세포에 대한 증식과 생장에 미치는 영향을 나타낸다.
도 4는 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 B16-F10 세포의 PINK1 mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸다.Figure 1 is a cross- brittonii extract on the ROS concentration in B16-F10 cells.
FIG. 2 is a cross- brittonii extract on the survival rate of B16-F10 cells.
FIG. 3 is a schematic view of a Dudleya brittonii extract on the proliferation and growth of B16-F10 cells.
Figure 4 is a schematic view brittonii extract on the expression of PINK1 mRNA in B16-F10 cells.

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시 예를 가질 수 있는바, 특정 실시 예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에서 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The present invention is capable of various modifications and various embodiments, and specific embodiments are illustrated in the drawings and will be described in detail in the detailed description. It is to be understood, however, that the invention is not to be limited to the specific embodiments, but includes all modifications, equivalents, and alternatives falling within the spirit and scope of the invention. DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.The terminology used in this application is used only to describe a specific embodiment and is not intended to limit the invention. The singular expressions include plural expressions unless the context clearly dictates otherwise. In the present application, the terms "comprises" or "having" and the like are used to specify that there is a feature, a number, a step, an operation, an element, a component or a combination thereof described in the specification, But do not preclude the presence or addition of one or more other features, integers, steps, operations, elements, components, or combinations thereof.

제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어서는 안 된다. 상기 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다.The terms first, second, etc. may be used to describe various components, but the components should not be limited by the terms. The terms are used only for the purpose of distinguishing one component from another.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 보다 상세하게 설명하고자 한다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

도 1은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 B16-F10 세포 내 ROS 농도에 미치는 영향을 나타낸다. 도 2는 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 B16-F10 세포에 대한 생존율에 미치는 영향을 나타낸다. 도 3은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 B16-F10 세포에 대한 증식과 생장에 미치는 영향을 나타낸다. 도 4는 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물의 B16-F10 세포의 PINK1 mRNA 발현에 미치는 영향을 나타낸다.Figure 1 is a cross- brittonii extract on the ROS concentration in B16-F10 cells. FIG. 2 is a cross- brittonii extract on the survival rate of B16-F10 cells. FIG. 3 is a schematic view of a Dudleya brittonii extract on the proliferation and growth of B16-F10 cells. Fig. 4 shows the effect of Dudleya brittonii extract on the expression of PINK1 mRNA in B16-F10 cells.

본 발명의 용어 "선녀배(Dudleya brittonii)"는 다육식물(succulent plant)의 일종으로 Britton's dudleya 또는 Giant Chalk Dudleya 라고도 불리며, Plante 계, saifragales 목, crassulaceae 과, dudleya 속의 D. brittonii 종으로 주로 미국(United States) 남서부지방이나 멕시코(Mexico) 북서부지방 또는 바하칼리포르니아(Baja California)에서 서식하고 있다. 아직까지 선녀배의 추출법이나 구체적인 성분, 효능에 대해서는 알려진 바 없었는바, 본 발명에서는 선녀배의 추출물이 항암 및 항산화 효과가 있음을 확인한 것이다.The term " Dudleya " brittonii "is a species of succulent plant, also known as Britton's dudleya or Giant Chalk Dudleya, plante, saifragales, crassulaceae and D. brittonii species in the dudleya, mainly in the southwestern United States and Mexico ) In the northwestern region or in Baja California. The extraction method, specific ingredients and efficacy of the marine stomach have not yet been known. In the present invention, the extract of the marine stomach has anti-cancer and antioxidative effects It is confirmed.

본 발명의 용어 "선녀배 추출물"이란 선녀배를 추출하여 수득한 추출물을 의미하는데, 본 발명의 목적상, 선녀배 추출물은 선녀배를 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명에 있어서, 상기 추출물에는, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나도 포함될 수 있다.For the purpose of the present invention, for the purpose of the present invention, the present invention provides a method of extracting a female moth, which comprises extracting a female moth with a water, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent thereof, ≪ / RTI > In addition, in the present invention, the above extract may contain any one of the extract obtained by the extraction treatment, the diluted solution or the concentrate of the extract, the dried product obtained by drying the extract, or the adjusted product or the purified product.

본 발명의 바람직한 실시예에 따른 항암 및 항산화 효능이 개선된 선녀배 추출물의 제조방법은, 선녀배(Dudleya brittonii) 잎을 분쇄하여 선녀배 분쇄물을 제조하는 단계; 상기 선녀배 분쇄물에 물을 첨가하는 단계; 및 상기 선녀배 분쇄물 및 물을 80℃ 내지 100℃ 및 0.4kgf/cm3의 조건에서 반응시켜 선녀배 추출물을 제조하는 단계;를 포함할 수 있다.A method for preparing an avian embryo extract having improved anticancer and antioxidant activity according to a preferred embodiment of the present invention comprises the steps of: brittonii ) leaves to prepare a neem blight ; Adding water to the neem blend; And the step of reacting the pre-ground powder and water at a temperature of 80 to 100 ° C and 0.4 kgf / cm 3 to prepare a prey extract.

일 실시예에 있어서, 상기 선녀배 추출물을 6,500rpm 및 4℃의 조건에서 원심분리하는 단계를 더 포함할 수 있다.In one embodiment, the step of centrifuging the marine embryo extract at 6,500 rpm and 4 ° C may further comprise the step of centrifuging.

본 발명의 바람직한 실시예에 따른 암 예방 또는 치료용 약학 조성물은 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 포함할 수 있다. 여기서, 상기 암 예방 또는 치료용 약학 조성물의 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것을 특징으로 한다. 이때, 상기 물은 80 ℃ ~ 100 ℃의 열수가 바람직하다.The pharmaceutical composition for preventing or treating cancer according to the preferred embodiment of the present invention may contain Dudleya brittonii extract as an active ingredient. Herein, the extract of the pharmaceutical composition for preventing or treating cancer is characterized by being extracted with water, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof. At this time, the water is desirably hot water of 80 to 100 캜.

열수 추출법을 사용하게 되면 스테로이드 계열과 지용성 비타민, 단백질 계열 물질의 추출을 피할 수 있다. 또한 기존에 알려진 유기용매를 이용한 추출에 의해 밝혀진 물질과는 다른 물질이 추출되어 새로운 물질을 발견할 확률이 증가한다.예컨대, Saponin의 경우 거의 대부분의 식물에 존재하고 많은 효능이 밝혀져 있는 스테로이드 계열의 물질로서, 이런 이미 알려진 물질의 추출을 피할 수 있게 된다. 또한 추출 과정 또한 유기용매에 비해 간단하고 소요되는 시간 또한 짧아 유기용매 추출법에 비해 이점이 매우 많다. The use of hydrothermal extraction can avoid extraction of steroids, fat-soluble vitamins, and protein-based materials. For example, in the case of saponin, a steroid-like substance which exists in almost all plants and has a great effect, As a material, it becomes possible to avoid extraction of such already known substances. In addition, the extraction process is simpler than the organic solvent, and the time required for the extraction is shorter, which is more advantageous than the organic solvent extraction method.

일 실시예로서, 본 발명은 선녀배의 열수 추출물을 이용하여 악성 흑색종 세포(B16 F10, melanoma)에 대한 영향을 조사하였다. 악성 흑색종은 멜라닌 세포에서 유래되는 악성 종양으로 높은 사망률을 일으킨다. 이런 악성 흑색종뿐만 아니라 수많은 암세포에서 ROS는 중요한 역할을 한다. ROS는 두가지 종류가 존재한다. 한 개 또는 더 많은 unpaired electron을 가지고 있는 free radical ROS와 unpaired electron을 가지고 있지 않은 non-radical ROS의 두가지가 존재하는 것으로 알려져 있다(Dunyaporn Trachootham, Jerome Alexandre and Peng Huang. Targeting cancer cells by ROS-mediated mechanisms: a radical therapeutic approach?. NATURRE REVIEWS | Drug Discovery. Published online 29 May 2009). 하지만 체내에서 non-radical에서 radical ROS로 변화 될 수 있다. In one embodiment, the present invention was conducted to investigate the effect of hot-water extract of marine algae on malignant melanoma cells (B16 F10, melanoma). Malignant melanoma is a malignant tumor originating from melanocytes, causing high mortality. ROS plays an important role in many cancer cells as well as in these malignant melanomas. There are two kinds of ROS. Free radical ROS with one or more unpaired electrons, and non-radical ROS without unpaired electrons (Dunyaporn Trachotham, Jerome Alexandre and Peng Huang, Targeting cancer cells by ROS-mediated mechanisms : a radical therapeutic approach. NATURRE REVIEWS | Drug Discovery Published online 29 May 2009). However, it can be changed from non-radical to radical ROS in the body.

암세포에서 ROS는 일반세포 보다 높은 수준으로 유지되며 암세포의 대사, 발생, 전이에 연관되어 있을 뿐만 아니라 암 발생의 원인이 되는 염증 발생에도 중요한 역할을 한다. ROS가 cytokine의 분비를 유도하여 염증의 발생을 유도하기도 한다. 흑색종은 주로 피부에서 많이 발생하게 되는데 세포가 자외선에 노출되게 되면 산화적 스트레스가 발생하게 되어 활성산소종의 발생을 증가시키고 SOD(superoxide dismutase)와 같은 항산화 효소의 발생을 저해시킨다. 그리고 세포의 대사나 생장 그리고 apoptosis 등에서 미토콘드리아가 중요한 역할을 하는데 미토콘드리아 내부에 위치하다 방출되면 세포의 죽음을 유도하는 cytochrome C나 mitochondria와 연관되어 작용하는 BCL-2, BCL-XL, BAX등 apoptotic protein 들이 매우 많다(Emily H.-Y. A. Cheng, Michael C. Wei, Solly Weiler, Richard A. Flavell, Tak W. Mak. BCL-2, BCL-XL Sequester BH3 Domain-Only Molecules Preventing BAX- and BAK-Mediated Mitochondrial Apoptosis. Molecular Cell, Vol. 8, 705?711, September, 2001, Copyright (c) 2001 by Cell Press). ROS 또한 일반적으로 증가하면 미토콘드리아의 손상을 일으키는 것으로 알려져 있다(S. Papa, V.P. Skulachev. Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis and aging. Molecular and cellular biochemistry 174: 305-319,1997). 이렇게 악성 세포의 생장과 죽음 그리고 미토콘드리아 대사는 ROS와 관련이 깊어 선녀배 추출물이 세포내의 ROS의 변화에 미치는 영향을 조사하였다. 그리고 손상된 미토콘드리아의 mitophagy를 유도하는 PINK-1 mRNA 발현의 변화를 확인하기 위하여 quantitative PCR을 사용하였고 선녀배 추출물의 직접적인 항암 작용을 조사하기 위하여 세포증식 및 세포생존률을 측정하였다. 그 결과 농도의존적으로 ROS, 세포 증식, 세포 생존율 모두 감소하였는바, 선녀배 추출물이 새로운 항암 물질임을 확인하였다. In cancer cells, ROS is maintained at a level higher than that of normal cells, and is involved not only in the metabolism, development and metastasis of cancer cells but also in inflammation that causes cancer. ROS induces the secretion of cytokines leading to the development of inflammation. Melanoma occurs mainly in skin. When cells are exposed to ultraviolet rays, oxidative stress occurs, which increases the production of reactive oxygen species and inhibits the generation of antioxidant enzymes such as superoxide dismutase (SOD). Mitochondria play an important role in cell metabolism, growth, and apoptosis. They are located inside mitochondria. When they are released, apoptotic proteins such as cytochrome C or mitochondria-related BCL-2, BCL-XL and BAX BCL-2 Sequencing BH3 Domain-Only Molecules Preventing BAX- and BAK-Mediated Mitochondrial Apoptosis (BCL-2) Molecular Cell, Vol. 8, 705-711, September, 2001, Copyright (c) 2001 by Cell Press). ROS is also known to cause damage to mitochondria (S. Papa, V. P. Skulachev, Reactive oxygen species, mitochondria, apoptosis and aging, Molecular and cellular biochemistry 174: 305-319, 1997). Thus, the growth and death of malignant cells and mitochondrial metabolism were closely related to ROS, and the effect of the extract of the females on the changes of ROS in the cells was investigated. Quantitative PCR was used to identify changes in PINK-1 mRNA expression leading to mitochondrial mitochondrial damage. Cell proliferation and cell viability were measured in order to investigate the direct anticancer effects of the extracts. As a result, ROS, cell proliferation and cell survival rate were all decreased in a dose - dependent manner.

본 발명에서 예방 및 치료대상 암은 특정 암으로 한정되지 않으며, 바람직하게는 유방암, 폐암, 위암, 간암, 혈액암, 뼈암, 췌장암, 피부암, 머리 또는 목암(head or neck cancer), 피부 또는 안구 흑색종, 자궁육종, 난소암, 직장암, 항문암, 대장암, 난관암, 자궁내막암, 자궁경부암, 소장암, 내분비암, 갑상선암, 부갑상선암, 신장암, 연조직종양, 요도암, 전립선암, 기관지암 또는 골수암을 들 수 있으며, 더욱 바람직하게는 피부암일 수 있다.The cancer to be prevented and treated in the present invention is not limited to a specific cancer but preferably includes a breast cancer, lung cancer, stomach cancer, liver cancer, blood cancer, bone cancer, pancreatic cancer, skin cancer, head or neck cancer, Endometrial cancer, cervical cancer, small intestine cancer, endocrine cancer, thyroid cancer, pituitary cancer, kidney cancer, soft tissue tumor, urethral cancer, prostate cancer, bronchial cancer, uterine cancer, uterine cancer, ovarian cancer, rectal cancer, Cancer or bone marrow cancer, more preferably skin cancer.

본 발명에서 선녀배 추출물은 vehicle과 비교하여 10-4에서 10-7까지 감소하고 10- 8농도에서 vehicle과 비슷한 수준으로 상승하였다. 10-5, 10-6과 10-7에서 약 50% 가량으로 감소하였다. 이를 통해 선녀배 추출물이 세포의 증식을 억제하고, 미토콘드리아의 대사를 방해하며, 세포를 죽이는 작용을 했을 것으며, in vitro에서 선녀배 추출물이 B16-F10세포에 세포 독성을 가지는 것으로 항암 작용을 나타내는 것을 확인하였다(도 2).Was increased to a similar level as in the vehicle 8 concentration-fairy times in the present invention the extract is compared to the decrease in the vehicle 10-4 to 10-7 and 10. 10 -5 , 10 -6 and 10 -7 , respectively. In this study, it was shown that the extract of Bacillus thuringiensis inhibited cell proliferation, interfered with the metabolism of mitochondria, and killed cells. In vitro , Bacillus thuringiensis extract showed cytotoxicity to B16-F10 cells (Fig. 2).

또한 선녀배 추출물을 처리하였을 때 24시간, 48시간 72시간 시간이 지남에 따라 vehicle과 세포 수의 차이가 10-4에서 10-7까지 40%~50%까지 감소한 것을 확인하였다. 10- 8농도에서는 Vehicle과 비슷한 수준으로 증식하는 것을 확인하였다. 즉, 선녀배 추출물은 B16-F10 세포에 대해 in vitro에서 세포의 증식을 억제하거나 생존율을 감소시키는 것을 확인하였다(도 3의 a, b, c). 이를 통해 ROS가 감소되면서 예상되었던 세포증식 억제효과를 확인하였으며, 선녀배 추출물이 B16-F10 세포의 cell cycle arrest를 유도하여 세포 증식을 억제하였음을 알 수 있다.In addition, it was confirmed that the difference in the number of cells and cells between 10 -4 and 10 -7 was reduced by 40% ~ 50% over 24 hours, 48 hours, and 72 hours after the treatment of the marine embryo extract. At the concentration of 10 - 8 , it was confirmed to proliferate to a level similar to that of Vehicle. In other words, it was confirmed that the extract of Bryce canis inhibited cell proliferation or decreased survival rate of B16-F10 cells in vitro (Fig. 3, a, b, c). As a result, the inhibition of cell proliferation was confirmed by the decrease of ROS, and the extract of Bacillus subtilis showed cell cycle arrest of B16-F10 cells and inhibited cell proliferation.

본 발명에서 용어 "예방"은 상기 조성물의 투여로 상기 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "치료"는 상기 조성물의 투여로 상기 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 의미한다.The term "prevent" in the present invention means all the actions of inhibiting or delaying the onset of the disease upon administration of the composition, and "treatment" means any action that alleviates or alleviates symptoms of the disease do.

본 발명의 상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나, 보다 효과적인 예방 또는 치료를 위하여, 본 발명의 선녀배 추출물은 1일 0.0001 내지 100 mg/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 mg/kg으로 투여함이 바람직하고, 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다.The preferred dosage of the pharmaceutical composition of the present invention varies depending on the condition and the weight of the patient, the degree of disease, the type of drug, the administration route and the period of time, but can be appropriately selected by those skilled in the art. However, for more effective prevention or treatment, it is preferable to administer the herbal extract of the present invention at a dose of 0.0001 to 100 mg / kg per day, preferably 0.001 to 100 mg / kg per day, It may be administered or divided into several doses.

본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 마우스, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, humans, and the like in various routes. All modes of administration may be expected, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intra-uterine or intracerebroventricular injections.

본 발명의 상기 선녀배 추출물을 유효성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 바람직하게 상기 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 경피흡수제, 겔제, 로션제, 연고제, 크림제, 첩부제, 카타플라스마제, 페이스트제, 스프레이, 피부 유화액, 피부 현탁액, 경피 전달성 패치, 약물 함유 붕대 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, which comprises the extract of the present invention as an active ingredient, may further comprise an appropriate carrier, excipient or diluent commonly used in the production of a pharmaceutical composition. Preferably, the composition is in the form of tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, solutions, emulsions, syrups, sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze- The composition may have any one of formulations selected from the group consisting of ointments, creams, patches, cataplasms, pastes, sprays, skin emulsions, skin suspensions, transdermal patches, drug-containing dressings and suppositories, It may, but is not limited to, various forms of parenteral administration.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propyleneglycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 61(tween 61), 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.In the case of formulation, a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant is usually used. Solid formulations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, which may contain one or more excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose lactose, gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc, and the like are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, syrups and the like. Various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like may be included in addition to water and liquid paraffin, which are simple diluents commonly used. have. Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used as the non-aqueous solvent and suspension agent. As a suppository base, witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerogelatin and the like can be used.

본 발명의 바람직한 실시예로서, 본 발명은 선녀배(Salsola collina Pallas) 추출물을유효성분으로 포함하는, 항암 또는 항산화용 식품 조성물을 제공한다. 상기 선녀배 추출물에 관해서는 전술한 바와 같으며, 본 발명의 추출물은 항암 또는 항산화 효과를 갖기 때문에 식품조성물에 첨가할 수 있다.As a preferred embodiment of the present invention, the present invention provides an anticancer or antioxidant food composition containing an extract of Salsola collina Pallas as an active ingredient. As described above, the above-described extract of the fresh mackerel is as described above, and the extract of the present invention can be added to a food composition since it has anticancer or antioxidative effect.

본 발명의 용어 "항암"은 암세포의 증식을 억제하거나 암세포를 죽이는 등의 역할을 하는 것을 의미하며, 본 발명에서 암의 예방, 치료 또는 개선 등의 용어와 혼용할 수 있다. 본 발명의 선녀배 추출물의 항암활성에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.The term "anti-cancer" of the present invention means inhibiting the proliferation of cancer cells or killing cancer cells, and may be used in combination with terms such as prevention, treatment, or improvement of cancer in the present invention. The anticancer activity of the present invention of the present invention is as described above.

본 발명의 용어 "항산화"는 산화를 억제하는 작용을 의미하는 것으로, 인체는 산화촉진물질(prooxidant)과 산화 억제물질(antioxidant)이 균형을 이루고 있으나 여러 가지 요인들에 의하여 이런 균형상태가 불균형을 이루게 되고 산화 촉진 쪽으로 기울게 되면, 산화적 스트레스(oxidative stress)가 유발되어 잠재적인 세포손상 및 병리적 질환을 일으키게 된다. 이러한 산화적 스트레스의 직접적 원인이 되는 활성 산소종(reactive oxygen species, ROS)은 불안정하고 반응성이 높아 여러 생체물질과 쉽게 반응하고, 체내 고분자들을 공격하여 세포와 조직에 비가역적인 손상을 일으키거나 돌연변이, 세포독성 및 발암 등을 초래하게 된다. NO, HNO2, ONOO-와 같은 활성 질소종(reactive nitrogen species, RNS)은 염증 반응 시 대식세포 호중구 및 다른 면역 세포들의 면역 반응으로 인해 다량 생성되며, 이때 ROS도 같이 생성된다. 상기와 같은 활성산소는 체내에서 세포를 산화시켜 파괴시키며, 그에 따라 각종 질환에 노출되게 된다. 따라서, 본 발명의 선녀배 추출물을 식품에 포함시키면 항산화 효과를 달성함으로써, 건강증진에 기여할 수 있다.The term "antioxidant" of the present invention means an antioxidant action. The human body has a balance between prooxidant and antioxidant, but due to various factors, And leaning towards oxidative stimulation leads to oxidative stress leading to potential cellular damage and pathological disease. Reactive oxygen species (ROS), which is a direct cause of oxidative stress, is unstable and highly reactive. It reacts easily with various bio-materials, attacks irreversible damage to cells and tissues, Cytotoxicity and carcinogenesis. Active nitrogen species (RNS) such as NO, HNO 2 , and ONOO - are produced by the immune response of macrophage neutrophils and other immune cells during inflammatory reaction, and ROS is also produced. Such active oxygen oxidizes and destroys cells in the body, thereby exposing them to various diseases. Therefore, when the extract of the present invention is incorporated into a food, an antioxidative effect can be achieved, thereby contributing to health promotion.

본 발명의 식품조성물은 항산화효과를 통해 상기 활성산소로 인해 발생하는 질환의 예방, 치료 또는 개선효과를 가질 수 있다. 상기 활성산소로 인해 발생하는 질환들은 동맥경화증, 루게릭병, 파킨슨병, 알츠하이머, 근위축 색경화증 및 헌팅톤병을 포함하는 퇴행성 신경질환, 심근경색, 협심증, 관상동맥질환, 허혈성 심장질환을 포함하는 심혈관 질환, 뇌졸중을 포함하는 허혈성 뇌질환, 당뇨병, 위염 및 위암을 포함하는 소화기계 질환, 암, 백혈병, 노화, 류마티스 관절염, 간염, 아토피성 피부염 등 다양한 질환을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 활성 산소에 의해 발생되는 노화일 수 있다.The food composition of the present invention may have an effect of preventing, treating or improving a disease caused by the active oxygen through an antioxidative effect. The diseases caused by the active oxygen include, but are not limited to, degenerative neurological diseases including arteriosclerosis, Lou Gehrig's disease, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, muscular atrophy scarring and Huntington's disease, myocardial infarction, angina pectoris, coronary artery disease, And may include various diseases such as ischemic brain diseases including diabetes, gastritis and gastric cancer, cancer, leukemia, aging, rheumatoid arthritis, hepatitis, atopic dermatitis, etc., Lt; / RTI >

도 1을 참조하면, 선녀배 추출물이 B16-F10 세포주의 세포내 ROS 변화에 미치는 영향을 조사하기 위하여 B16-F10세포에 선녀배 추출물을 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8의 농도로 처리하고 세포내 ROS를 측정하였다. Vehicle과 비교하여 10-4부터 10-7 농도까지 감소하고 10-8에서 vehicle 수준으로 상승하였다. 10-7에서 vehicle 대비 약 80% 정도로 가장 큰폭으로 감소하였다. 이에 따라 선녀배 추출물의 B16-F10 세포에 대한 농도 의존적인 항산화 효능을 확인하였다(도 1의 a, b, c). 1, in order to investigate the effect of the extract of Bacillus thuringiensis on the intracellular ROS activity of B16-F10 cell line, B16-F10 cells were treated with 10 -4 , 10 -5 , 10 -6 , 10 -7 , 10 -8 , and the intracellular ROS was measured. Compared with vehicle, it decreased from 10 -4 to 10 -7 concentration and increased from 10 -8 to vehicle level. 10 -7 to about 80% of the vehicle. Thus, a concentration-dependent antioxidant efficacy against B16-F10 cells was confirmed (Fig. 1 (a), (b) and (c)).

본 발명의 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 선녀배 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상의 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 본 발명의 조성물은 천연물로부터 유래한 추출물을 유효성분으로 하므로 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 혼합량에 큰 제한은 없다.When the composition of the present invention is used as a food additive, it may be added as it is or may be used in combination with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to ordinary methods. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to the intended use (prevention, health or therapeutic treatment), and may further include a food-acceptable food-aid additive. Since the composition of the present invention contains an extract derived from a natural substance as an active ingredient, there is no problem in terms of stability, so there is no great limitation on the amount of the mixture.

본 발명의 식품 조성물은 통상적인 의미의 식품을 모두 포함할 수 있으며, 기능성 식품, 건강기능식품 등 당업계에 알려진 용어와 혼용 가능하다.The food composition of the present invention may include all foods having a conventional meaning, and may be mixed with terms known in the art such as functional foods, health functional foods, and the like.

본 발명의 용어 "기능성 식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.The term "functional food" in the present invention means a food prepared and processed by using a raw material or ingredient having functionality useful to the human body according to Law No. 6727 on health functional foods, and " And function of the nutrient for the purpose of obtaining a beneficial effect in health use such as controlling the nutrient or physiological action.

또한, 본 발명의 용어 "건강기능식품"은 건강보조의 목적으로 특정성분을 원료로 하거나 식품 원료에 들어있는 특정성분을 추출, 농축, 정제, 혼합 등의 방법으로 제조, 가공한 식품을 말하며, 상기 성분에 의해 생체방어, 생체리듬의 조절, 질병의 방지와 회복 등 생체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발휘할 수 있도록 설계되고 가공된 식품을 말하는 것으로서, 상기 건강식품용 조성물은 질병의 예방 및 질병의 회복 등과 관련된 기능을 수행할 수 있다.The term "health functional food" of the present invention refers to a food prepared by processing a specific ingredient as a raw material for the purpose of health assisting or by extracting, concentrating, refining, mixing, or the like a specific ingredient contained in a food raw material, Refers to a food which is designed and processed so that the body control function such as bio-defense, regulation of biorhythm, prevention and recovery of disease and the like can be sufficiently exhibited to the living body by the above components. Recovery, and so on.

본 발명의 조성물이 사용될 수 있는 식품의 종류에는 제한이 없다. 아울러 본 발명의 선녀배 추출물을 활성성분으로 포함하는 조성물은 당업자의 선택에 따라 식품에 함유될 수 있는 적절한 기타 보조 성분과 공지의 첨가제를 혼합하여 제조할 수 있다. 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림 류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 본 발명에 따른 추출물을 주성분으로 하여 제조한 즙, 차, 젤리 및 주스 등에 첨가하여 제조할 수 있다.There is no limitation on the kind of food in which the composition of the present invention can be used. In addition, the composition comprising the extract of the present invention as an active ingredient can be prepared by mixing other suitable auxiliary ingredients, which may be contained in food, with known additives according to the selection of a person skilled in the art. Examples of foods that can be added include dairy products, such as meat, sausage, bread, chocolates, candies, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, ice cream, various soups, drinks, tea, Vitamin complex, and the like, and can be prepared by adding to the juice, tea, jelly, and juice prepared from the extract of the present invention as a main component.

또한, 본 발명에 적용될 수 있는 식품에는 예컨대, 특수영양식품(예: 조제유류, 영,유아식 등), 식육가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예: 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예: 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예:스낵류), 유가공품(예: 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예: 과실, 채소류 음료, 두유류, 발효음료류 등), 천연조미료(예, 라면스프 등) 등 모든 식품을 포함할 수 있다.Examples of foods that can be used in the present invention include special nutritional foods such as crude oil, milk, baby food, meat products, fish meat products, tofu, mushrooms, noodles such as ramen noodles, (Such as soy sauce, doenjang, kochujang, mixed potatoes), sauces, confectionery (eg snacks), dairy products (eg fermented milk, cheese), other processed foods, kimchi, pickles ), Beverages (such as fruit, vegetable beverages, beverages, fermented beverages, etc.), and natural seasonings (eg, ramen soup, etc.).

본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다When the health functional food composition of the present invention is used in the form of a drink, it may contain various sweeteners, flavors, or natural carbohydrates as an additional ingredient such as ordinary beverages. In addition to the above, the health functional food composition of the present invention may contain various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickening agents, pH adjusting agents, stabilizers, , Alcohols, carbonating agents used in carbonated drinks, and the like. It can also contain flesh for the production of natural fruit juices, fruit juice drinks and vegetable drinks

본 발명의 바람직한 실시예로서, 본 발명은 선녀배(Salsola collina Pallas) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화용 화장료 조성물을 제공한다. 상기 선녀배 추출물에 관해서는 전술한 바와 같으며, 본 발명의 추출물은 항산화 효과를 갖기 때문에 항산화 효과를 목적으로 화장료 조성물에 첨가할 수 있다.As a preferred embodiment of the present invention, the present invention provides a cosmetic composition for antioxidation comprising an extract of Salsola collina Pallas as an active ingredient. Since the extract of the present invention has the antioxidative effect, the extract of the present invention can be added to the cosmetic composition for the purpose of antioxidative effect.

본 발명의 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 상기 유화 제형으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 상기 가용화 제형으로는 유연화장수 등이 있다. 적합한 제형은 이에 제한되지는 않으나, 예를 들어 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 바이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태일 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태일 수 있다.The cosmetic composition of the present invention can be produced in the form of a general emulsified formulation and a solubilized formulation. Examples of the emulsified formulations include nutritive lotions, creams, essences, and the like, and the solubilization formulations include softening longevity. Suitable formulations include, but are not limited to, solutions, gels, solid or paste anhydrous products, emulsions obtained by dispersing the oil phase in water, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic (liposomes) A cream, a skin, a lotion, a powder, an ointment, a spray, or a conical stick. It may also be in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant.

상기 화장료 조성물은 추가적으로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장료 조성물에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.The cosmetic composition may further contain at least one selected from the group consisting of fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickening and gelling agents, softening agents, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, perfumes, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, Auxiliaries such as ionic sequestering agents, chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, moisturizers, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or any other ingredients conventionally used in cosmetic compositions ≪ / RTI >

상술한 바와 같이, 본 발명의 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항암 또는 항산화용 조성물에 따르면, 스테로이드 계열의 물질이 추출되거나 독성을 가지는 유기용매를 이용하는 유기용매 추출법 대신 열수를 이용한 추출법을 사용하여 염증이나 아토피 등의 부작용을 유도할 수 있는 스테로이드 계열의 추출을 방지하고 이미 알려진 지용성 물질 사포닌 등의 추출을 피하였다. 또한, 선녀배 추출물의 농도 별 처리에서 세포내 ROS수준은 농도의존적으로 감소하였다가 vehicle과 같은 수준으로 증가되었다. 이는 선녀배 추출물의 in vitro에서 최초로 항산화 효능을 확인한 것이다. B16-F10세포에서 선녀배 추출물의 항산화 효능을 확인하고 WST-1 assay의 결과와 비교하여 농도의존적으로 ROS가 감소하면서 미토콘드리아의 활성을 저해하는 것으로 예상된다. 또한 세포 생장 곡선에서도 농도의존적으로 세포의 증식을 억제하는 것을 나타내어 선녀배 추출물의 항산화 효과와 항암작용을 in vitro에서 최초로 확인하였다. As described above, according to the present invention, Dudleya brittonii extract as an active ingredient, it is possible to obtain an anticancer or antioxidant composition by extracting a steroid-based substance or using an extraction method using hot water instead of an organic solvent extraction method using an organic solvent having toxicity to induce side effects such as inflammation and atopy The extraction of steroids which can be avoided and the extraction of known lipophilic substances such as saponin is avoided. In addition, intracellular ROS levels decreased in a dose - dependent manner and increased to the same level as that of vehicle. This was the first antioxidant efficacy test in vitro of the marine rumen extract. It is anticipated that the antioxidant activity of the extract of Bombyx mori is obtained from B16-F10 cells and that the activity of mitochondria is inhibited while ROS decreases in a concentration-dependent manner as compared with the result of WST-1 assay. In addition, cell growth curves shown in that the concentration-dependently inhibited the proliferation of the cells was confirmed that the antioxidant effects as anticancer action of fairy-fold in the first extract in vitro.

이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 다만, 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다 할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It should be understood, however, that these examples are for illustrative purposes only and are not to be construed as limiting the scope of the present invention.

실시예Example 1:  One: 선녀배A beautiful ship 추출물의 제조 Preparation of extract

선녀배 잎을 3~4cm가량 자른 후, 증류수로 씻고, 잎의 무게를 측정하였다. 그후 잎을 잘게 자르고 막자 사발을 사용하여 빻아준 다음 삼각 플라스크(DONG SUNG SCIENCE)로 옮기고 측정한 무게의 3배의 증류수를 첨가하였다. 그리고 autoclave(DAIHAN Scientific)를 이용하여 100℃, 0.4kgf/cm3에서 15분간 추출을 행하고, 상온에서 식힌 뒤, 50ml conical tube(DAIHAN Scientific)에 옮기고 6,500rpm, 4℃에서 10분간 원심분리한 뒤, 거름종이로 걸러서 옮겨 담았다. 그리고 Syringe filter(Sartorius, Minisart® Syringe Filter)를 이용하여 걸러낸 후 사용하였다.The leaves were cut 3 to 4 cm long, washed with distilled water, and weighed. After that, the leaves were finely chopped and ground using a mortar and then transferred to a triangular flask (DONG SUNG SCIENCE) and three times the weight of distilled water was added. Then, the cells were extracted with an autoclave (DAIHAN Scientific) at 100 ° C and 0.4 kgf / cm 3 for 15 minutes, cooled at room temperature, transferred to a 50 ml conical tube (DAIHAN Scientific), centrifuged at 6,500 rpm at 4 ° C for 10 minutes , Filtered by a filter paper. Then, they were filtered using a syringe filter (Sartorius, Minisart® Syringe Filter) and then used.

실시예Example 2: 세포배양 2: Cell culture

Mus musculus (mouse) B16-F10 세포를 100mm cell culture plate(SPL life science)에 DMEM high glucose(WELGEN)에 10% fetal bovine serum (GemCell), 1% penicillin-streptomycin (GIBCO)를 넣고 37℃ incubator(Thermo Fisher Scientific), 95% air, 5% CO2 조건에서 배양하였다. 0.05% Trypsin-EDTA(WELGENE)를 이용하여 계대 배양하였다.B16-F10 cells were inoculated into DMEM high glucose (WELGEN) in a 100-mm cell culture plate (SPL life science) and incubated at 37 ° C with 1% penicillin-streptomycin (GIBCO) Thermo Fisher Scientific), 95% air, 5% CO 2 . And subcultured using 0.05% Trypsin-EDTA (WELGENE).

실시예Example 3:  3: 유세포Flow cell 분석(Flow  Analysis cytometrycytometry analysis) analysis)

B16-F10 cell을 60mm cell culture plate(SPL life science)에 5x104수 만큼 4ml DMEM high glucose(10%FBS, 1% penicillin-streptomycin)배지에 24시간 동안 배양한 후, 선녀배 추출물을 계열희석법으로 희석하여, 처리 후 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8의 농도가 되도록 4ul씩 처리하였다. Vehicle은 증류수를 4ul 처리 하였다. 추출물 처리 후, 12시간 동안 배양한 후, DCF-DA(dichlorofluorescein diacetate, Sigma Aldrich)를 4ul 넣어주고 30분간 배양기에서 반응시켰다. 그 후, 배지를 제거하고 PBS(phosphate buffered saline) 1ml 로 plate를 washing한 뒤 500ul trypsin-EDTA(WELGENE)를 넣어주고 1분간 배양기에서 반응시켰다. 그 후 세포를 1.5ml tube(Axygen)에 옮긴 뒤 5,000rpm에서 5분간 원심분리하고 상층 액을 제거하였다. 그리고 200ul PBS를 넣어주고 resuspension한 후 5,000rpm에서 5분간 원심분리하였다. 그후 300ul PBS-1%BSA(bovine serum albumin, Roche Applied Science)-0.01% sodium azaid로 resuspension한 뒤 flow cytometry(GUAVA easycyte) 를 이용하여 DCF의 형광(green fluorescence HLog, median) 값을 측정하였다. 선녀배 추출물을 처리하지 않은 vehicle을 1로 기준으로 비교하여 도 1에 나타내었다.B16-F10 cells were cultured for 24 hours in 4 ml of DMEM high glucose (10% FBS, 1% penicillin-streptomycin) in a volume of 5 × 10 4 cells in a 60 mm cell culture plate (SPL life science) Diluted, and treated with 4ul each to a concentration of 10 -4 , 10 -5 , 10 -6 , 10 -7 , and 10 -8 . Vehicle was treated with 4ul of distilled water. After the extract treatment, the cells were cultured for 12 hours, and then 4 μl of DCF-DA (dichlorofluorescein diacetate, Sigma Aldrich) was added thereto, followed by incubation for 30 minutes in an incubator. Subsequently, the medium was removed, and the plate was washed with 1 ml of PBS (phosphate buffered saline). Then, 500 ul trypsin-EDTA (WELGENE) was added thereto and incubated for 1 minute in the incubator. The cells were then transferred to a 1.5 ml tube (Axygen), centrifuged at 5,000 rpm for 5 min and the supernatant was removed. Then, 200 ul of PBS was added and resuspension was performed, followed by centrifugation at 5,000 rpm for 5 minutes. After resuspension with 300 μl of PBS-1% bovine serum albumin (Roche Applied Science) -0.01% sodium azaid, fluorescence (green fluorescence HLog, median) of DCF was measured using flow cytometry (GUAVA easycyte). The results are shown in Fig.

도 1을 참조하면, 선녀배 추출물이 B16-F10 세포주의 세포내 ROS 변화에 미치는 영향을 조사하기 위하여 B16-F10세포에 선녀배 추출물을 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8의 농도로 처리하고 DCF-DA를 처리하고 flow cytometry analysis를 통하여 세포내 ROS를 측정하였다. Vehicle과 비교하여 10-4부터 10-7 농도까지 감소하고 10-8에서 vehicle 수준으로 상승하였다. 10-7에서 vehicle 대비 약 80% 정도로 가장 큰폭으로 감소하였다. 이에 따라 선녀배 추출물의 B16-F10 세포에 대한 농도 의존적인 항산화효능을 확인하였다(도 1의 a, b, c). 1, in order to investigate the effect of the extract of Bacillus thuringiensis on the intracellular ROS activity of B16-F10 cell line, B16-F10 cells were treated with 10 -4 , 10 -5 , 10 -6 , 10 -7 , 10 -8 , treated with DCF-DA and measured by intracellular ROS using flow cytometry analysis. Compared with vehicle, it decreased from 10 -4 to 10 -7 concentration and increased from 10 -8 to vehicle level. 10 -7 to about 80% of the vehicle. Thus, a concentration-dependent antioxidant efficacy against B16-F10 cells was confirmed (Fig. 1 (a), (b) and (c)).

일반적으로 정상세포 내에서 ROS는 세포에 생존이나 분화 등을 조절하는데 관여하는 것으로 알려져 있으며, 높은 수준의 ROS는 세포의 유전자나 단백질과 반응하여 손상을 입히거나 돌연변이를 일으키고 이에 따라서 암 발생을 일으키기도 한다. 따라서 일반적으로 암세포는 정상세포에 비해 항산화 작용 관련 유전자나 단백질로 SOD, GPx(glutathione peroxidase), glutathione, vitamin C 등의 물질의 발현이나 활성이 저해되어 있는 것으로 알려져 있다. 때문에 암세포는 높은 ROS 수준을 유지하는 것으로 알려져 있다. 이 ROS는 주로 세포내의 미토콘드리아에서 생성되는 것으로 superoxide anion, hydrogen peroxide, hydroxyl radical 등이 알려져 있는데(Alberto mantovani, Paola Allavena, Antonio Sica & Frances Balkwii, Cancer-related inflammation. NATURE; Vol 454;24 July 2008), 이런 암세포의 높은 수준의 ROS를 감소시키는 효과는 암세포의 미토콘드리아 대사를 저해하여 암세포의 대사 작용을 방해하는 것으로 여겨진다.In general, ROS is known to be involved in the regulation of cell survival or differentiation in normal cells. High levels of ROS react with cellular genes or proteins to cause damage or mutagenesis, leading to cancer . Therefore, it is generally known that cancer cells have an inhibitory effect on the expression or activity of substances such as SOD, GPx (glutathione peroxidase), glutathione and vitamin C, which are antioxidant related genes and proteins, compared with normal cells. Therefore, cancer cells are known to maintain high ROS levels. This ROS is mainly produced in intracellular mitochondria and is known as superoxide anion, hydrogen peroxide and hydroxyl radicals (Alberto mantovani, Paola Allavena, Antonio Sica and Frances Balkwii, Cancer-related inflammation. , It is believed that the effect of reducing the high level of ROS of such cancer cells inhibits the metabolism of mitochondria of cancer cells, thereby inhibiting the metabolism of cancer cells.

또한 이런 활성산소의 증가는 염증과 관련된 유전자 발현을 유도하여 염증을 일으키는데 만성적인 염증은 암이 형성되는데 중요한 역할을 한다(Inpyo Choi, Reactive Oxygen Species and Cancer, Hanyang Med Rev .2013;33:118-122, Simone Reuter, Subash C. Gupta, Madan M. Chaturvedi, and Bharat B. Aggarwal. Oxidative stress, inflammation, and cancer: How are they linked?. Free Radic Biol Med. 2010 December 1; 49(11)). ROS에 의해 발생된 세포내의 산화적 스트레스는 암과 관련된 NF-kB, p53, β-catenin/Wnt, AP-1 등의 여러 유전자를 발현시키는 역할을 하는 것으로 알려져 있다. 또한 이런 유전자들의 발현은 염증과 관련된 cytokines이나 세포 주기를 조절하는 유전자들과 연관이 있다. 따라서 선녀배 추출물의 B16-F10세포에서 ROS를 감소시키는 효과는 암세포의 대사 방해를 통한 생장이나 증식 억제, 염증 관련 유전자의 발현 억제를 통한 암세포 증식이나 발생을 억제하는 효과를 나타내다. 또한 Nf-kB는 활성화 되면 염증 반응에 중요한 역할을 하는 IL-1이나 IL-6의 생성을 증가시킨다. In addition, chronic inflammation plays an important role in the formation of cancer (Inpyo Choi, Hanyang Med. Rev. 2013; 33: 118- 122, Simone Reuter, Subash C. Gupta, Madan M. Chaturvedi, and Bharat B. Aggarwal. Oxidative stress, inflammation, and cancer: How are they linked? Oxidative stress in cells induced by ROS is known to play a role in the expression of several genes related to cancer such as NF-kB, p53, β-catenin / Wnt and AP-1. Expression of these genes is also associated with inflammation-related cytokines or genes that regulate the cell cycle. Therefore, the effect of decreasing ROS in B16-F10 cells of the marine embryo extracts inhibits the growth or proliferation of cancer cells through inhibition of the metabolism of cancer cells, and suppresses cancer cell proliferation or development through inhibition of the expression of inflammatory genes. In addition, Nf-kB increases the production of IL-1 and IL-6, which play an important role in the inflammatory response when activated.

이런 증가는 암세포의 전이와 증식에 영향을 준다. 또한 ROS의 증가는 세포의 actin cytoskeleton reorganization과도 연관이 있어 암세포의 이동과 전이에 연관 되어 있다. B16 F10 세포에서 ROS 발생을 증가 시킬 경우 전이가 증가하는 것으로 밝혀져 있는데 ROS에 의하여 Rac1 이 활성화되고 WAVE2가 발현되면 actinpolimerization이 일어나 세포의 이동에 영향을 주는 것으로, ROS를 감소시킬 경우 Rac1 활성과 WAVE2 발현이 줄어 ROS증가에 의한 전이를 억제하는 것으로 밝혀졌다(Sun joo Park, Yong Tae Kim, and You Jin Jeon. Antioxidant Dieckol Downregulates the Rac1/ROS Signaling Pathway and Inhibits Wiskott-Aldrich Syndrome Protein (WASP)-Family Verprolin- Homologous Protein 2 (WAVE2)-Mediated Invasive Migration of B16 Mouse Melanoma Cells. Mol. Cells 33, 363-369, April 30, 2012). 따라서 선녀배 추출물의 ROS 감소효과는 이런 단백질들의 생성을 억제하여 세포증식뿐만 아니라 암세포의 전이를 억제하는 작용을 할 것이고 SOD나 glutathione과 유사한 물질을 함유한다.This increase affects cancer cell metastasis and proliferation. In addition, the increase of ROS is related to the actin cytoskeleton reorganization of the cells and is related to the migration and metastasis of cancer cells. The expression of WACE2 by ROS is activated by actinolysis, which affects cell migration. When ROS is decreased, Rac1 activity and WAVE2 expression are decreased when ROS is decreased in B16 F10 cells. (WASP) -Family Verprolin-1 (RAS) Signaling Pathway and Inhibits Antioxidant Dieckol Downregulates Rac1 / ROS Signaling Pathway and Inhibits (WASP) -Family Verprolin- Homologous Protein 2 (WAVE2) -Medicated Invasive Migration of B16 Mouse Melanoma Cells., Mol. Cells 33, 363-369, April 30, 2012). Therefore, the effect of ROS reduction on the extracts of Bacillus thuringiensis inhibits the production of these proteins and inhibits the cell proliferation as well as the metastasis of cancer cells, and contains substances similar to SOD or glutathione.

실시예Example 4: 세포 사멸 효과 분석 4: Analysis of cell killing effect

B16 F10 cell을 96well plate(SPL life science)에 2x103수만큼 100ul DMEM high glucose(10%FBS, 1% penicillin-streptomycin)배지에 24시간 동안 배양한 후, 선녀배 추출물을 계열희석법으로 희석하여, 처리 후 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8의 농도가 되도록 1ul씩 처리하였다. Vehicle은 증류수를 1ul 처리 하였다. 처리 후 24시간동안 배양한 후, WST(Water soluble tetrazolium)-1 solution(DoGenBio, EZcytox)을 well당 10ul씩 넣어준 후 배양기에서 2시간 동안 반응시켰다. 그 후 micro plate spectrophotometer(SUNLIZE, Thecan)를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다. B16 F10 cells were cultured in 96-well plates (SPL life science) at a density of 2 × 10 3 in 100 μl of DMEM high glucose (10% FBS, 1% penicillin-streptomycin) for 24 hours, diluted with serial dilution, After treatment, treatment was carried out with 1ul each to a concentration of 10 -4 , 10 -5 , 10 -6 , 10 -7 , and 10 -8 . Vehicle treated with 1ul distilled water. After 24 hours of incubation, WST (Water soluble tetrazolium) -1 solution (DoGenBio, EZcytox) was added to the wells in an amount of 10 μl per well and incubated for 2 hours in the incubator. The absorbance was then measured at 450 nm using a microplate spectrophotometer (SUNLIZE, Thecan).

WST-1 assay는 Tetrazolium salt가 살아있는 세포의 미토콘드리아에서 생성되는 dehydrogenase와 반응하여 오렌지색의 formazan을 생성하는 반응을 이용하는 실험이다. Dehydrogenase는 미토콘드리아 대사가 활발하고 살아있는 세포의 수가 많을수록 많이 생성되어 증가한다. 그 결과 선녀배 추출물을 처리 했을 때 vehicle과 비교하여 10-4에서 10-7까지 감소하고 10- 8농도에서 vehicle과 비슷한 수준으로 상승하였다. 10-5, 10-6과 10-7에서 약 50%가량으로 가장 감소하였다. 이를 통해 선녀배추출물이 세포의 증식을 억제, 미토콘드리아의 대사를 방해, 세포를 죽이는 작용을 했을 것으로 예상된다. 따라서 in vitro에서 선녀배 추출물이 B16-F10세포에 세포 독성을 가지는 것으로 항암 작용을 나타내는 것을 확인했다(도 2).The WST-1 assay is an experiment in which Tetrazolium salt reacts with dehydrogenase produced in the mitochondria of living cells to produce orange formazan. Dehydrogenase is activated by mitochondrial metabolism and the number of living cells is increased and increased. As a result, it was decreased from 10 -4 to 10 -7 when compared with vehicle when treated with marine extract and increased to the level of vehicle at 10 - 8 concentration. 10 -5 , 10 -6 and 10 -7 , respectively. It is anticipated that the marine vetch extract inhibited cell proliferation, interfered with the metabolism of mitochondria, and killed cells. Therefore, it was confirmed that the extract of Bacillus thuringiensis is cytotoxic to B16-F10 cells in vitro and exhibits anticancer activity (Fig. 2).

실시예Example 5: 세포 증식 저해 효과 5: Inhibition effect on cell proliferation

B16 F10 cell을 60mm cell culture plate(SPL life science)에 2x103수 만큼 4ml DMEM high glucose(10%FBS, 1% penicillin-streptomycin)에 12시간을 배양 한 후 선녀배 추출물을 계열희석법으로 희석하여, 처리 후 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8의 농도가 되도록 4ul씩 처리하였다. Vehicle은 증류수를 4ul 처리 하였다. 24시간 동안 배양기에서 배양한 뒤 배지를 제거하고 PBS 1ml로 washing 한 뒤 새 배지 4ml을 넣어주고 다시 추출물을 농도 별로 처리 한 뒤, 24시간 배양을 반복하여 72시간 까지 배양 하였다, 그리고 24시간 마다 배지를 제거하고 PBS 1ml로 washing 한 뒤, trypsin-EDTA(WELGENE)를 500ul넣어주고 1분간 incubator에서 반응 시킨 뒤 500ul 배지를 넣어주고 cell을 1.5ml tube(Axygen)에 옮긴 뒤, cell 10ul에 trypan blue 10ul를 가한 뒤 1분간 반응시키고 hemocytometer를 이용하여 cell counting을 하였다. 즉, 선녀배 추출물이 B16-F10 세포의 증식과 생장에 주는 효과를 조사 해보기 위하여 B16-F10 세포에 선녀배 추출물을 24시간 마다 농도 별로 처리하고 세포 수를 trypan blue와 hemocytometer를 이용하여 counting하였다. B16 F10 cells were cultured for 12 hours in 4 ml of DMEM high glucose (10% FBS, 1% penicillin-streptomycin) in a volume of 2 × 10 3 on a 60-mm cell culture plate (SPL life science), diluted with serial dilution, After treatment, the cells were treated with 4ul each to a concentration of 10 -4 , 10 -5 , 10 -6 , 10 -7 , and 10 -8 . Vehicle was treated with 4ul of distilled water. After 24 hours of incubation, the medium was removed, and the cells were washed with 1 ml of PBS. After 4 ml of fresh medium was added, the extract was treated for each concentration, and the cells were cultured for 24 hours for 72 hours. After washing with 1 ml of PBS, 500 μl of trypsin-EDTA (WELGENE) was added and reacted in an incubator for 1 min. Then, 500 μl of the medium was added to the cell. The cell was transferred to a 1.5 ml tube (Axygen) And the cells were counted using a hemocytometer. In order to investigate the effect of the extract on the proliferation and growth of B16-F10 cells, B16-F10 cells were treated with concentration-specific extracts every 24 hours and counted using trypan blue and hemocytometer.

Trypan blue staining은 살아있는 세포를 구분 할 수 있는 방법으로 살아 있는 세포는 세포막이 작동하여 ATP를 이용한 exocytosis에 의해 trypan blue를 세포 밖으로 방출시키는 작용을 통해 살아있는 세포를 구별할 수 있게 해준다. 선녀배 추출물을 처리하였을 때 24시간, 48시간 72시간 시간이 지남에 따라 vehicle과 세포 수의 차이가 10-4에서 10-7까지 40%~50%까지 감소한 것을 확인하였다. 10- 8농도에서는 Vehicle과 비슷한 수준으로 증식하는 것을 확인하였다. 이 결과를 토대로 볼 때 선녀배 추출물은 B16-F10 세포에 대해 in vitro에서 세포의 증식을 억제하거나 생존율을 감소시키는 것을 확인하였다(도 3의 a, b, c). 이를 통해 ROS가 감소되면서 예상되었던 세포증식 억제효과를 확인하였으며, 선녀배 추출물이 B16-F10 세포의 cell cycle arrest를 유도하여 세포 증식을 억제하였음을 알 수 있다. 정상세포에서는 ROS가 증가하면 cell cycle을 조절하는 p53, p21 등의 발현이 늘어나 cell cycle arrest가 일어나는 것으로 알려져 있다(Johannes Boonstra*, Jan Andries Post. Molecular events associated with reactive oxygen species and cell cycle progression in mammalian cells. Gene 337 (2004)).Trypan blue staining is a method that can distinguish living cells. Living cells are able to distinguish living cells by the action of cell membranes and the release of trypan blue by exocytosis using ATP. As a result, it was confirmed that the difference in the number of cells and cells between 10 -4 and 10 -7 was reduced by 40% ~ 50% over 24 hours, 48 hours and 72 hours. At the concentration of 10 - 8 , it was confirmed to proliferate to a level similar to that of Vehicle. Based on these results, it was confirmed that the bait extract was effective for inhibiting cell proliferation or reducing the survival rate of B16-F10 cells in vitro (Fig. 3, a, b, c). As a result, the inhibition of cell proliferation was confirmed by the decrease of ROS, and the extract of Bacillus subtilis showed cell cycle arrest of B16-F10 cells and inhibited cell proliferation. In normal cells, when ROS increases, cell cycle arrest occurs due to increased expression of p53, p21, etc. (Johannes Boonstra *, Jan Andries Post. Molecular events associated with reactive oxygen species and cell cycle progression in mammalian cells. Gene 337 (2004)).

하지만 이미 일반세포보다 ROS level이 증가하여 있는 암세포의 경우 ROS level이 증가하거나 감소하는 경우 모두 다 cell cycle arrest를 유도할 가능성이 있다.  However, in the case of cancer cells whose ROS levels are already higher than those of normal cells, all cases of increasing or decreasing ROS levels may induce cell cycle arrest.

실시예Example 6:  6: PINK1PINK1 mRNAmRNA 발현 감소를 통한 미토콘드리아 손상 유도 효과 Induction effect of mitochondrial damage through reduction of expression

B16 F10 cell을 100mm cell culture plate(SPL life science) 에 3x105수 만큼 10ml배지에 배양 한 후, 선녀배 추출물을 농도별로 처리한 후, 12시간을 배양기에서 배양하였다. 배지를 제거 후 1XPBS 5ml로 washing 후, 1X PBS 4ml로 washing 후 PBS를 완전히 제거하였다. 그리고 plate당 1.5ml씩 Trizol(Invitrogen) 1.5ml을 넣고 cell을 lysis시켜 750ul씩 1.5ml tube(Axygen)에 나누어 옮김. 상온에서 5분간 반응시킨 후, chloroform을 150ul씩 넣어주고 15초간 inverting하고, 3분간 상온에서 반응시켰다. 그리고 12,000rpm 4℃, 15분간 원심분리 하고 상층액만을 수거하여 1.5ml tube에 농도 별로 옮겼다. 500ul isopropanol을 넣고 10분간 반응시킨 후, 12,000rpm 4℃, 10분간 원심분리한 후, 상층액을 제거하였다. 75% ethanol 25% (0.1%)DEPC treat water을 10ml넣고 vortex(Scientific Industries)하고 7,500rpm 4℃, 5분간 원심분리하고 상층액을 제거하였다. 55℃ heating block(DAIHAN Wisd)에서 RNA pellet을 건조시킨 후, DEPC water를 50ul를 넣고 55℃ heating block에서 10분간 pellet을 녹여주어 total RNA를 추출하였다. 그리고 0.2ml PCR tube(GUNSTER)에서 0.1% DEPC water 8.5ul, Oligo dt mix 1ul, dNTP mix 1ul, RNA 2.5ul를 넣고 65℃ 5분간 반응시킨 후, ice에서 1분간 cooling하였다. 그리고 5X first strand buffer(Invitrogen) 4ul, 0.1M DTT(Invitrogen) 1ul, RNase inhibitor(Invitrogen) 1ul, SuperScript III(Invitrogen) 1ul를 넣어주고 50℃ 60분, 70℃ 15분간 반응시켜 cDNA를 합성하였다. Micro spectrophotometer (Tech&innovation)을 이용하여 cDNA의 농도를 측정하였다. 그리고 100pm, 10pm/ul농도로 cDNA를 희석하고 real-time PCR용 96well plate에 증류수 7ul, 10pm Primer mix Forward+reverse(Bioneer)를 2ul, cDNA 100pm 이나 10pm을 1ul, qPCR MasterMix(Bioneer, AccuPower® 2XGreen Star qPCR MasterMix))을 10ul넣어주고 quantitative PCR(Thermo Fisher Scientific, applies biosystems, StepOnePlus Real-Time PCR system)을 진행하였다. CT값을 측정하여 vehicle을 1로 기준으로 하여 그래프로 나타내었다.B16 F10 cells were cultured in 100 ml cell culture plate (SPL life science) at a concentration of 3 × 10 5 cells / ml in 10 ml culture medium. After the medium was removed, the cells were washed with 1 × PBS (5 ml), followed by washing with 4 ml of 1 × PBS, and then the PBS was completely removed. Add 1.5ml of Trizol (Invitrogen) per plate and lysis the cells. Transfer 750ul into each 1.5ml tube (Axygen). After reacting at room temperature for 5 minutes, chloroform was added in an amount of 150, inverted for 15 seconds, and reacted at room temperature for 3 minutes. Then, centrifugation was carried out at 12,000 rpm at 4 ° C for 15 minutes. Only the supernatant was collected and transferred to a 1.5 ml tube by concentration. After reacting for 10 minutes with 500 ul of isopropanol, centrifugation was carried out at 12,000 rpm at 4 ° C for 10 minutes, and then the supernatant was removed. 75% ethanol 25% (0.1%) 10 ml of DEPC treat water was added and vortex (Scientific Industries) was centrifuged at 7,500 rpm at 4 ° C for 5 minutes and the supernatant was removed. The RNA pellet was dried at 55 ° C in a heating block (DAIHAN Wisd), 50 μl of DEPC water was added, and the total RNA was extracted by dissolving the pellet in a heating block at 55 ° C for 10 minutes. In a 0.2 ml PCR tube (GUNSTER), 0.1% DEP water 8.5ul, Oligo dt mix 1ul, dNTP mix 1ul, and 2.5ul of RNA were added, reacted at 65 ℃ for 5 minutes and then cooled on ice for 1 minute. CDNA was synthesized by incubation at 50 ° C for 60 min and 70 ° C for 15 min with 4 μl of 5X first strand buffer (Invitrogen), 1 μl of 0.1M DTT (Invitrogen), 1 μl of RNase inhibitor (Invitrogen) and 1 μl of SuperScript III (Invitrogen). The concentration of cDNA was measured using Micro spectrophotometer (Tech & innovation). Then, cDNA was diluted to 100 pm and 10 pm / μl, and 2 μl of distilled water, 10 μl of primer mix forward + reverse (Bioneer), 1 μl of cDNA 100 pm or 10 pm, and qPCR MasterMix (Bioneer, AccuPower® 2XGreen Star qPCR MasterMix) was added to each well and quantitative PCR (Thermo Fisher Scientific, applies biosystems, StepOnePlus Real-Time PCR system) was performed. CT values were measured and plotted against vehicle 1 as a reference.

Primer sequencePrimer sequence

Mus-PINK1. Forward: 5'-TCA GCT GCC TGA GAT GCC TG-3'Mus-PINK1. Forward: 5'-TCA GCT GCC TGA GAT GCC TG-3 '

Mus-PINK1. Reverse: 5'-CAG GAA GAG AGG AGG GC-3'Mus-PINK1. Reverse: 5'-CAG GAA GAG AGG AGG GC-3 '

qPCR 결과 10pm농도의 cDNA에서 PINK1 mRNA의 발현이 선녀배 추출물의 농도에 의존하여 감소하는 것을 확인하였다. PTEN-induced kinase-1 (PINK-1)은 serine/threonine kinase의 일종이다. 미토콘드리아가 스트레스를 받아 비정상적으로 작동을 하는 것을 막아주기 위하여 발현하는 것으로 알려져 있다. 손상된 미토콘드리아를 발견하면 PINK1이 활성화되고 parkin 단백질을 미토콘드리아로 이끌어 미토콘드리아의 degradation을 유발한다. PINK-1이 암세포에서 발현이 감소하면 미토콘드리아 손상을 복구할 수 없게 되고 암세포는 사멸에 이르게 된다. 따라서 선녀배 추출물이 B16-F10 세포의 미토콘드리아 손상을 유도하는 것임을 알 수 있다.The qPCR results showed that the expression of PINK1 mRNA was decreased in the cDNA of 10 pm concentration depending on the concentration of the extract of Pseudomonas aeruginosa. PTEN-induced kinase-1 (PINK-1) is a type of serine / threonine kinase. It is known that mitochondria are expressed to prevent them from working under stress. Detecting damaged mitochondria activates PINK1 and directs parkin proteins to the mitochondria, leading to degradation of the mitochondria. Decreased expression of PINK-1 in cancer cells leads to inability to repair mitochondrial damage and death of cancer cells. Therefore, it can be concluded that the extract of Bacillus thuringiensis induces mitochondrial damage of B16-F10 cells.

본 발명의 추출물 또는 화합물을 포함하는 약학조성물 제제의 예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Examples of the pharmaceutical composition containing the extract or the compound of the present invention will be described, but the present invention is not intended to be limited thereto but is specifically described.

제제예Formulation example 1.  One. 산제의Sanje 제조 Produce

선녀배 추출물 300 mgSeaweed Extract 300 mg

유당 100 mgLactose 100 mg

탈크 10 mgTalc 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.The above components are mixed and filled in airtight bags to prepare powders.

제제예Formulation example 2. 정제의 제조 2. Preparation of tablets

선녀배 추출물 50 mgSeaweed Extract 50 mg

옥수수전분 100 mgCorn starch 100 mg

유당 100 mgLactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mgMagnesium stearate 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.After mixing the above components, tablets are prepared by tableting according to the usual preparation method of tablets.

제제예Formulation example 3. 캅셀제의 제조 3. Preparation of capsules

선녀배 추출물 50 mgSeaweed Extract 50 mg

옥수수전분 100 mgCorn starch 100 mg

유당 100 mgLactose 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mgMagnesium stearate 2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.The above components are mixed according to a conventional capsule preparation method and filled in gelatin capsules to prepare capsules.

제제예Formulation example 4. 주사제의 제조 4. Preparation of injections

선녀배 추출물 50 mgSeaweed Extract 50 mg

주사용 멸균 증류수 적량Sterile sterilized water for injection

pH 조절제 적량pH adjuster

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.(2 ml) per 1 ampoule according to the usual injection preparation method.

제제예Formulation example 5.  5. 액제의Liquid 제조 Produce

선녀배 추출물 100 mgSeabream extract 100 mg

이성화당 10 g10 g per isomer

만니톨 5 g5 g mannitol

정제수 적량Purified water quantity

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.Each component was added to purified water in accordance with the usual liquid preparation method and dissolved, and the lemon flavor was added in an appropriate amount. Then, the above components were mixed, and purified water was added thereto. The whole was adjusted to 100 ml with purified water, And sterilized to prepare a liquid preparation.

제제예Formulation example 6.  6. 건강 식품의Of health food 제조 Produce

선녀배 추출물 1000 ㎎1000 mg

비타민 혼합물 적량Vitamin mixture quantity

비타민 A 아세테이트 70 ㎍70 [mu] g of vitamin A acetate

비타민 E 1.0 ㎎Vitamin E 1.0 mg

비타민 0.13 ㎎0.13 mg of vitamin

비타민 B2 0.15 ㎎0.15 mg of vitamin B2

비타민 B6 0.5 ㎎0.5 mg vitamin B6

비타민 B12 0.2 ㎍0.2 [mu] g vitamin B12

비타민 C 10 ㎎10 mg vitamin C

비오틴 10 ㎍Biotin 10 μg

니코틴산아미드 1.7 ㎎Nicotinic acid amide 1.7 mg

엽산 50 ㎍50 ㎍ of folic acid

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎Calcium pantothenate 0.5 mg

무기질 혼합물 적량Mineral mixture quantity

황산제1철 1.75 ㎎1.75 mg of ferrous sulfate

산화아연 0.82 ㎎0.82 mg of zinc oxide

탄산마그네슘 25.3 ㎎Magnesium carbonate 25.3 mg

제1인산칼륨 15 ㎎15 mg of potassium phosphate monobasic

제2인산칼슘 55 ㎎Secondary calcium phosphate 55 mg

구연산칼륨 90 ㎎Potassium citrate 90 mg

탄산칼슘 100 ㎎100 mg of calcium carbonate

염화마그네슘 24.8 ㎎24.8 mg of magnesium chloride

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하Although the composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixture is comparatively mixed with a composition suitable for health food as a preferred embodiment, the compounding ratio may be arbitrarily modified, and the above ingredients are mixed according to a conventional method for producing healthy foods , To produce granules

고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.And can be used in the manufacture of a health food composition according to a conventional method.

제제예Formulation example 7. 건강 음료의 제조 7. Manufacture of health drinks

선녀배 추출물 1000 ㎎1000 mg

구연산 1000 ㎎Citric acid 1000 mg

올리고당 100 g100 g of oligosaccharide

매실농축액 2 gPlum concentrate 2 g

타우린 1 gTaurine 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖가 되도록 혼합한다. 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85 ℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2 ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다. 상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.Purified water is added and mixed to a total of 900 ml. The above components were mixed according to a conventional health drink manufacturing method, and the mixture was stirred and heated at 85 ° C for about 1 hour. The resulting solution was filtered to obtain a sterilized 2-liter container, which was sealed and sterilized, It is used in the production of the health beverage composition of the invention. Although the compositional ratio is relatively mixed with a component suitable for a favorite drink, it is also possible to arbitrarily modify the compounding ratio according to the regional or national preference such as the demand class, the demanding country, and the use purpose.

한편, 상기에서는 본 발명을 특정의 바람직한 실시예에 관련하여 도시하고 설명하였지만, 이하의 특허청구범위에 의해 마련되는 본 발명의 기술적 특징이나 분야를 이탈하지 않는 한도 내에서 본 발명이 다양하게 개조 및 변화될 수 있다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명백한 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to preferred embodiments thereof, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed embodiments, but, on the contrary, It will be apparent to those skilled in the art that changes may be made.

Claims (11)

선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 피부암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
A pharmaceutical composition for preventing or treating skin cancer, which comprises an extract of Dudleya brittonii as an active ingredient.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인 피부암 예방 또는 치료용 약학조성물.
The method according to claim 1,
Wherein the extract is extracted with water, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof.
제2항에 있어서,
상기 물은 80 ℃ 내지 100 ℃의 열수인 피부암 예방 또는 치료용 약학 조성물.
3. The method of claim 2,
Wherein the water is hot water at 80 캜 to 100 캜.
삭제delete 선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화용 식품 조성물.
An antioxidative food composition comprising an extract of Dudleya brittonii as an active ingredient.
제5항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 알코올 또는 이들의 혼합용매로 추출한 것인 항산화용 식품 조성물.
6. The method of claim 5,
Wherein the extract is extracted with water, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or a mixed solvent thereof.
제6항에 있어서,
상기 물은 80 ℃ 내지 100 ℃의 열수인 항산화용 식품 조성물.
The method according to claim 6,
Wherein the water is hot water at 80 캜 to 100 캜.
선녀배(Dudleya brittonii) 추출물을 유효성분으로 포함하는, 항산화용 화장료 조성물.
 Dudleya brittonii ) extract as an active ingredient.
선녀배(Dudleya brittonii) 잎을 분쇄하여 선녀배 분쇄물을 제조하는 단계;
상기 선녀배 분쇄물에 물을 첨가하는 단계; 및
상기 선녀배 분쇄물 및 물로부터 선녀배 추출물을 제조하는 단계;를 포함하는 항암 및 항산화 효능이 개선된 선녀배 추출물의 제조방법.
 Dudleya brittonii ) leaves to prepare a neem blight ;
Adding water to the neem blend; And
And a step of preparing an extract from the above-mentioned pre-ground powder and water.
제9항에 있어서,
상기 선녀배 추출물을 제조하는 단계는, 상기 선녀배 분쇄물 및 물을 80℃ 내지 100℃ 및 0.4kgf/cm3의 조건에서 반응시켜 선녀배 추출물을 제조하는 것을 특징으로 하는 항암 및 항산화 효능이 개선된 선녀배 추출물의 제조방법.
10. The method of claim 9,
The step of preparing the marine mammary gland extract comprises reacting the marine glandular meal and the water at a temperature of 80 to 100 ° C and 0.4 kgf / cm 3 to produce a glandular marrow extract. Wherein the method comprises the steps of:
제9항에 있어서,
상기 선녀배 추출물을 6,500rpm 및 4℃의 조건에서 원심분리하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항암 및 항산화 효능이 개선된 선녀배 추출물의 제조방법.
10. The method of claim 9,
Further comprising the step of centrifuging the herbaceous embryo extract at 6,500 rpm and 4 ° C.
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