KR101750909B1 - 광합성 세균 배양액을 포함하는 수용성 절삭유 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 광합성 세균 배양액을 포함하는 방청능 및 내부패성이 증진된 수용성 절삭유에 관한 것이다. 상기 광합성 세균 배양액을 포함하는 수용성 절삭유는 방부제를 포함하지 않아도 내부패성이 우수할 뿐만 아니라, 방청성이 증진되어 금속 가공에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

광합성 세균 배양액을 포함하는 수용성 절삭유{WATER-SOLUBLE CUTTING OIL COMPRISING CULTURE MEDIUM OF PHOTOSYNTHETIC BACTERIA}
본 발명은 광합성 세균 배양액을 포함하는 방청성 및 내부패성이 증진된 수용성 절삭유에 관한 것이다.
철, 알루미늄 및 각종 합금을 비롯한 금속, 유리, 세라믹 등을 절·연삭하기 위한 가공은, 절삭공구에 의하여 공작물로부터 불필요한 부분을 제거하는 가공작업의 하나이다. 이러한 가공작업을 통해 공작물을 원하는 형상, 치수, 혹은 표면으로 가공할 수 있다. 절삭가공의 과정에서 공작물과 공구 사이의 접촉면에서 큰 마찰이 일어나고, 이에 의해 발생하는 열에 의해서 공구나 공작물에 손상이 가거나, 가공이 원하는 대로 되지 않는 문제가 발생한다. 이 문제를 해결하기 위하여 절삭가공 시, 절삭유가 사용되고 있다. 절삭유는 공작물과 공구 사이의 마찰을 감소시켜 윤활성을 부여한다. 또한, 절삭유는 금속 공작물의 냉각 성능 향상 및 공구의 수명을 연장시킨다. 이와 같은 절삭유는 수용성 및 비-수용성 절삭유가 있다.
비-수용성 절삭유는 광물유를 기초로 하여 황이나 염소를 함유하는 유제이다. 그러나 이와 같은 비-수용성 절삭유는 절삭가공 중 유제의 온도가 올라가면 발화의 위험이 있다. 또한, 고속회전 가공으로 인한 유제 입자의 비산으로 주변환경이 오염되고, 공장 바닥이 미끄러워져 안전 사고의 위험성이 증가한다. 또한, 인체 유해성이 증가하는 문제점을 갖는다. 따라서, 비-수용성 절삭유는 절삭되는 부분이 클때 주로 사용되고, 대부분이 수용성 절삭유를 사용한다.
수용성 절삭유는 윤활기유, 윤활제, 극압첨가제, 지방산, 방청첨가제, 유화제, 방부제 등의 원료를 포함한다. 상기 수용성 절삭유는 물에 희석하여 사용되는데, 이로 인해 절삭 작업시 수반되는 높은 마찰열, 금속 칩(chip) 혼입, 유제의 산화 및 노화 등에 의해 방청 성능이 저하될 수 있다. 따라서, 가공된 금속의 녹발생, 또는 비철금속의 변색 또는 부식이 진행될 수 있다. 또한, 미생물에 의한 부패로 절삭유에서 악취가 발생하고, 그에 따라 빈번한 유제 교환 및 첨가제 보충으로 경제적 문제를 유발시킨다.
일반적으로 절삭유의 부패를 방지하기 위하여 살균능(bactericidal activity) 또는 살진균능(fungicide activity)이 있는 물질이 방부제로서 첨가된다. 그 예로는 포르말린 또는 그 유도체, BIT, MIT, IPBC, 소듐 2-피리딘티올-1-옥사이드(sodium 2-pyridinethiol-1-oxide, C5H4NOSNa) 등이 있다. 대한민국 특허 제0134087호에서는 수용성 절삭유의 부패를 방지하기 위해 아민류의 화합물을 첨가하여 항균성이 우수한 수용성 절삭유를 제조하였다. 그러나 이와 같은 방부제는 인체에 대한 독성을 나타내는 문제점이 있다.
이에, 금속에 대한 부식방지, 절삭유의 부패방지 및 인체 유해성을 감소시키기 위한 절삭유 조성물의 개발이 연구되고 있으나, 미미한 실정이다.
본 발명자들은 광합성 미생물 및 유용미생물군(EM)을 포함하고 산화 안정성 및 내부패성을 갖는 수용성 절삭유를 제조하였다.
대한민국 특허 제0134087호
본 발명의 목적은 인체에 유해한 방부제 대신 광합성 세균 배양액을 포함하는 수용성 절삭유를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 수용성 절삭유의 제조방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 광합성 세균 배양액을 포함하는 절삭유를 제공한다.
상기 다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 광합성 세균을 1차 배양하는 단계; 상기 배양한 광합성 세균을 EM과 혼합하여 2차 배양하는 단계; 및 상기 2차 배양액을 수용성 절삭유에 혼합하는 단계를 포함하는, 방청 효과가 증진된 절삭유 제조방법을 제공한다.
본 발명의 광합성 세균 배양액을 포함하는 수용성 절삭유는 방부제를 포함하지 않아도 내부패성이 우수할 뿐만 아니라, 방청성이 증진되어 금속 가공에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 방청 효과를 비교하기 위하여, 수용성 절삭유에 못과 금속 칩을 넣은 직후 촬영한 사진이다. 구체적으로, 수용성 절삭유로서, 시판중인 삼육사의 1종1호 수용성 절삭유, 및 상기 수용성 절삭유에, 본 발명의 광합성 세균 배양액(BIOFM), 또는 시판중인 광합성 세균(A사 광합성 미생물: 아쿠아리더스 PSB(하비월드사, 한국); B사 광합성 미생물: Jell Na 광합성 미생물 생균제(한 바이오, 한국); C사 EM 발효액: EM 활성액(코넴바이오사, 한국); 및 D사 EM 발효액: EM-K(이엠팜, 한국))을 첨가한 것을 사용하였다.
도 2는 수용성 절삭유에 본 발명의 광합성 세균 배양액, 또는 시판중인 광합성 세균을 첨가하였을 때의 방청 효과를 비교한 결과 사진이다. 구체적으로, 시판중인 수용성 절삭유에 시판중인 광합성 세균을 첨가하고, 녹이 발생한 시점에 본 발명의 광합성 세균 배양액을 첨가한 수용성 절삭유와 비교한 것이다:
A: 하비월드사의 광합성 세균과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(4시간 후 촬영);
B: 한 바이오사의 광합성 세균과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(6시간 후 촬영);
C: 코넴바이오사의 EM 발효액과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(1일 후 촬영);
D: 이엠팜의 EM 발효액과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(1일 후 촬영);
E: 1차 배양한 광합성 미생물과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(6시간 후 촬영); 및
F: 음성 대조군과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(1일 후 촬영).
도 3은 수용성 절삭유에 못과 금속 칩을 넣은 직후 촬영한 사진이다. 구체적으로 시판중인 제우스사의 1종1호 수용성 절삭유, 및 상기 수용성 절삭유에, 본 발명의 광합성 세균 배양액, 또는 시판중인 광합성 세균을 첨가하였을 때 방청 효과를 비교하였다.
도 4는 본 발명의 광합성 세균 배양액, 또는 시판중인 광합성 세균의 방청 효과를 비교한 결과 사진이다. 구체적으로 시판중인 수용성 절삭유에 시판중인 광합성 세균을 첨가하고, 녹이 발생한 시점에 본 발명의 광합성 세균 배양액을 첨가한 수용성 절삭유와 비교한 것이다:
A: 하비월드사의 광합성 세균과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(2시간 후 촬영);
B: 한 바이오사의 광합성 세균과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(1시간 후 촬영);
C: 코넴바이오사의 EM 발효액과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(27시간 후 촬영);
D: 이엠팜의 EM 발효액과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(20시간 후 촬영);
E: 1차 배양한 광합성 미생물과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(2시간 후 촬영); 및
F: 음성 대조군과 본 발명의 광합성 세균 배양액의 비교(1일 후 촬영).
도 5는 방부제 및 방청제가 첨가되지 않은 수용성 절삭유에 철제 못과 주철 주물 칩을 넣은 직후 촬영한 사진이다.
도 6은 본 발명의 광합성 세균 배양액을 첨가한 수용성 절삭유의 방청 효과를 확인한 결과 사진이다(S-1: 비교예 9; S-2: 비교예 10; S-3: 비교예 11; S-4: 비교예 12; S-5: 실시예 19; S-6: 실시예 20; 및 S-7: 실시예 21).
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 광합성 세균 배양액을 포함하는 절삭유를 제공한다.
본 명세서에서 사용된 용어 "광합성 세균(photosynthetic bacteria)"은 빛 에너지를 이용하여 생육하는 세균을 의미한다. 상기 광합성 세균은 광합성 원핵생물이 있고, 여기에는 남조, 프로클로론(prochloron), 광합성 세균 등이 있다. 구체적으로, 일 실시예에 의하면, 상기 광합성 세균은 자색 비유황 세균일 수 있다.
상기 자색 비유황 세균은 자색 세균 중에서 주로 말산 또는 락트산과 같은 저분자 유기 화합물 또는 H2를 광합성의 전자 공급체로 이용한다. 또한, 상기 세균은 CO2를 환원동화하여 생육할 수 있는 광합성 세균으로, Rhodospirillaceae 과에 속한다. 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 자색 비유황 세균은 로도박터 속(Rhodobacter sp.) 균으로서, 로도박터 스페로이드스(Rhodobacter sphaeroides)일 수 있다.
상기 로도박터 스페로이드스는 그람 음성균으로, 통성혐기성균이다.
본 명세서에서 사용된 용어 "광합성 세균 배양액"은 상기와 같은 광합성 세균을 단독으로 또는 유용미생물군(EM)과 함께 배양시킨 것을 의미한다. 상기 광합성 세균 배양액은 광합성 세균을 단독으로 배양하여 수득한 배양액; 유산균, 효모 및 고초균에서 선택되는 적어도 하나의 미생물을 광합성 세균과 혼합 배양하여 수득한 배양액; 또는 유용미생물군(EM)과 광합성 세균을 혼합 배양하여 수득한 배양액일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "유용미생물군(effective microorganisms, EM)"은 자연계에 존재하는 많은 미생물 중에서 사람에게 유익한 미생물 수십 종을 조합하여 배양한 것이다. 광합성 세균, 유산균, 효모, 고초균 및 방선균 등이 EM을 구성하고 있는 주요 균종이며, 이들 균들 간의 복잡한 공존관계에 의해 생성되는 발효 생성물이 EM의 효과를 나타낸다. 구체적으로, 상기 EM은 광합성 세균, 유산균 및 효모를 포함할 수 있다. 또한, 고초균을 더 포함할 수 있다. 이와 같은 유용미생물군은 'EM-1', 'EM-5', 'EM-X', 'EM-Z', 'EM Bokashi', 'EM Ceramics', 'EM FPE', "Activated EM' 등과 같은 상품명으로 시판되고 있으며, 누구나 용이하게 이를 구입하여 사용할 수 있을 정도로 공지된 것이다.
상기 유산균은 글루코스와 같은 당류를 분해하여 젖산을 생성하는 세균이다. 유산균은 젖산발효에 의해 젖산을 생성하며, 유제품, 김치류, 양조식품 등의 식품 제조에 이용한다. 또한, 포유류의 장 내에 서식하여 잡균에 의한 이상발효를 방지하는 역할을 하기도 한다. 그람 양성균이며, 통성혐기성균 또는 혐기성균이다. 유산균은 락토바실러스속과 스트렙토코커스속의 여러 종류가 알려져 있다.
상기 효모는 빵, 맥주, 포도주 등을 만드는데 사용되는 미생물로, 광합성능이나 운동성도 갖지 않는 단세포 생물의 총칭이다. 효모는 육탄당과 같은 단당류를, 무기호흡을 통해 산소의 공급이 없이도 분해하여 에너지를 얻을 수 있으며, 이 과정에서 알콜과 이산화탄소를 배출한다. 효모는 10℃ 내지 37℃의 온도 조건에서 성장할 수 있다.
상기 고초균은 자연계에 널리 분포하는 비병원성 세균으로, 특히 공기, 마른 풀, 하수, 토양 속에 존재한다. 막대 모양의 간균으로 편모가 있어 활발히 운동하며, 균체의 중앙에 원형 또는 난원형의 아포(芽胞)를 형성한다. 고초균은 글리코겐을 함유하는 그람 양성균이고, 다수의 탄수화물을 분해하여 산을 생성한다. 또한, 30℃ 내지 70℃의 온도 조건에서 잘 성장한다.
상기 방선균은 토양, 식물체, 동물체, 하천, 해수 등에 균사체 및 포자체로 존재하는 미생물로서, 세균에 가까운 원핵생물 즉, 세균의 방선균목으로 분류된다. 세포의 크기가 세균과 비슷하며 세포가 마치 곰팡이의 균사처럼 실 모양으로 연결되어 발육하며 그 끝에 포자를 형성한다. 토양 중 방선균은 각종 유기물의 분해, 특히 난분해성 유기물 분해에 중요한 역할을 하며 항생물질을 만들기도 한다.
본 발명에 따른 EM에 포함되는 광합성 세균의 농도는 1.0x104 내지 1.0x106 cfu/g, 1.0x105 내지 9.0x105 cfu/g, 또는 2.0x105 내지 3.5x105 cfu/g일 수 있다. 한편, 유산균의 농도는 1.0x105 내지 1.0x1010 cfu/g, 1.0x106 내지 5.0x109 cfu/g 또는 3.0x106 내지 2.0x109 cfu/g일 수 있다. 또한, 상기 효모의 농도는 1.0x104 내지 1.0x108 cfu/g, 1.0x105 내지 5.0x107 cfu/g 또는 3.0x105 내지 3.0x107 cfu/g일 수 있다. 또한, EM에 포함되는 고초균의 농도는 1.0x103 내지 1.0x105 cfu/g, 1.0x104 내지 5.0x104 cfu/g 또는 3.0x104 내지 4.0x104 cfu/g일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 광합성 세균, 유산균, 효모 및 고초균의 농도는 각각 약 3.1x105 cfu/g, 약 1.9x109 cfu/g, 약 2.8x107 cfu/g 및 약 3.1x104 cfu/g일 수 있다
본 발명에 따른 배양액은 당밀, 밀기울, 쌀겨 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 배지를 사용하여 광합성 세균을 혼합 배양하여 수득할 수 있고, 구체적으로는 당밀을 사용할 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "당밀" 또는 "당밀 활성액"은 동일한 의미로 사용되었으며, 이는 광합성 세균 및 EM이 발효 과정에서 먹이로 사용하는 물질로, 세균의 활성화에 필요한 주성분을 의미한다. 상기 당밀은 1 내지 3%(w/w)의 칼륨, 1.5 내지 3%(w/w)의 마그네슘, 0.1 내지 1%(w/w)의 칼슘, 15 내지 35%(w/w)의 수분 및 45 내지 55%(w/w)의 당을 포함한다. 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 당밀은 1.85%(w/w)의 칼륨, 2.24%(w/w)의 마그네슘, 0.79%(w/w)의 칼슘, 20 내지 30%(w/w)의 수분 및 50 내지 60%(w/w)의 당을 포함한다.
상기 배지는 항산화 물질을 더 포함할 수 있다. 상기 항산화 물질로는 항산화 효과가 있다고 알려진 물질이면 모두 사용할 수 있다. 구체적으로, 상기 항산화 물질은 인진쑥, 사자발쑥, 개똥쑥, 민들레, 고추씨, 솔잎 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나일 수 있다. 상기 인진쑥, 사자발쑥, 개똥쑥, 민들레, 고추씨 또는 솔잎은 별도의 가공 없이 이용할 수 있으나, 절단하여 사용하거나, 추출물 또는 가루형태로 사용할 수 있다. 추출물 또는 가루형태로 가공하여 절삭유에 첨가하는 과정은 통상의 기술자에 의해 적절히 수행될 수 있다.
본 발명에서는 배양한 광합성 세균을 EM 및 영양원(배지)이 1:1 내지 1:5, 구체적으로 1:3의 부피비로 혼합된 혼합물에 접종하여 광합성 세균 배양액을 제조한다. 이때, 발효 온도는 10℃ 이상, 구체적으로는 10℃ 내지 30℃, 더욱 구체적으로는 15℃ 내지 25℃에서 수행될 수 있고, 발효기간은 1일 이상, 구체적으로 3 내지 10일, 더욱 구체적으로 5 내지 8일 동안 수행될 수 있다. 발효 과정에서 접종되는 광합성 세균의 함량은, 총 발효량을 기준으로 0.1 내지 20 부피%, 구체적으로는 1 내지 10 부피%, 더욱 구체적으로는 3 내지 9 부피%일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 광합성 세균의 함량은 3, 5, 8 또는 10 부피%일 수 있다.
본 명세서에서 사용된 용어 "수용성 절삭유"는 금속 절삭에서 절삭성, 가공의 정도 향상(금속의 표면조도) 및 냉각, 및 공구의 수명을 연장하기 위해 사용되는 기름을 의미한다. 상기 수용성 절삭유는 일반적으로 물에 희석하여 사용된다. 수용성 절삭유는 윤활기유, 윤활제, 유화제, 계면활성제, 물 등을 포함하고 있다. 또한, 이외에도 기타 첨가제로 소포제, 방부제, 색소, 향(perfume) 등을 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면, 본 발명의 수용성 절삭유는 윤활기유, 유화제, 극압첨가제 및 소포제를 포함할 수 있다.
상기 절삭유는 윤활기유, 유화제, 극압첨가제 및 소포제에서 선택되는 하나 이상의 성분을 포함할 수 있다. 이때, 상기 윤활기유, 유화제, 극압첨가제 및 소포제의 종류는 당업자에 의해 적절히 선택되어 질 수 있으며, 혼합 비율은 요구되는 절삭유의 물성에 따라 적절히 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 수용성 절삭유에 포함될 수 있는 윤활기유는 광유기유, 채종유, 해바라기유, 대두유, 겨자유, 폴리에틸렌글리콜 에스테르(polyethylene glycol(PEG) ester), 알콜 에스테르, PEG, PAG(poly alkylene glycol), E/O(ethylene oxide), P/O(propylene oxide), 코폴리머(copolymer), 염화파라핀(C10-13 chlorinated paraffin), 황을 함유하는 에스테르, 인계 극압 첨가제, PAO(poly alpha olefin) 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 상기 황을 함유하는 에스테르의 예는 폴리설파이드(polysulfides), 디-tert-도데실(di-tert-dodecyl), KENLUBE SX 202 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 또한, 인계 극압 첨가제의 예는 레오포스 65(Reofos 65)일 수 있다.
한편, 상기 수용성 절삭유에 포함될 수 있는 유화제는 PEG, 아민, 알콜, TOFA(tall oil fatty acid), 올레산, INA(isononanoic acid), NDA(neo decanoic acid), OTA(octanoic acid), 폴리옥시에틸렌(9) 옥틸페놀에스테르, 폴리옥시에틸렌 라우릴에스테르, PEG 에스테르, 폴리옥시에틸렌트리데실에스테르, 소르비탄 모노올레이트류, SM30(polyoxyethylene(30) stearyl amine), 아크릴화 지방산 아미드, 폴리에틸렌 글리콜 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
또한, 상기 극압첨가제는 염화파라핀, 인계에스테르, 황 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 상기 소포제는 2-에틸헥산올, 무정형 실리카 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 무정형 실리카는 변성된 실리콘의 계통이며, AFE1226, AFE1266, LZ5674 등을 포함한다.
본 발명에 따른 수용성 절삭유는 필요에 따라 방청제 또는 방부제를 더 포함할 수 있다.
본 발명은 광합성 세균을 1차 배양하는 단계; 상기 배양한 광합성 세균을 EM과 혼합하여 2차 배양하는 단계; 및 상기 2차 배양액을 수용성 절삭유에 혼합하는 단계를 포함하는, 방청 효과가 증진된 절삭유 제조방법을 제공한다.
본 발명에 따른 광합성 세균, EM 또는 배양액은 상기 서술한 바와 같다.
상기 제조방법에서, 본 발명에 따른 광합성 세균은 총 발효량을 기준으로 0.1 내지 20 부피%, 1 내지 10 부피%, 3 내지 9 부피%로 포함될 수 있다.
상기 발효는 10℃ 이상, 10℃ 내지 30℃, 15℃ 내지 25℃의 온도에서, 1일 이상, 3 내지 10일, 5 내지 8일 동안 수행될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
I. 광합성 세균 배양액의 방청 효과 확인
실시예 1. 광합성 세균 1차 배양액의 제조-(1)
광합성 세균인 로도박터 스페로이드스(Rhodobacter sphaeroides)(빛모음, 이삭, 한국)를 배양하였다. 구체적으로, 500 ㎖의 상기 광합성 세균을, 20 g의 염화암모늄, 20 g의 탄산수소나트륨, 20 g의 초산나트륨, 20 g의 염화나트륨, 40 g의 인산수소칼륨, 40 g의 유산마그네슘, 2 g의 효모 엑기스를 물에 용해시켜 총량이 2 ℓ로 맞춰진 액체 배지에서 배양하였다. 이때, 배양 온도는 20℃이며, 접종되는 광합성 세균은 4.0x107 cfu/㎖ 이상이 되도록 하였다.
미생물의 성장 곡선 중 감쇄기에 위치한 미생물을 선별하여 다음 실험에 사용하였다. 배양 4일 후, 가스 발생량이 줄고 세균의 사체가 관찰되어 감쇄기에 도달했다고 판단하여, 배양 4일 후의 배양액으로 2차 배양을 수행하기로 하였다.
실시예 2. 광합성 세균 1차 배양액의 제조-(2)
광합성 세균인 로도박터 스페로이드스(두산에코비즈넷, 한국)를 배양하였다. 상기 광합성 세균은 배양 배지(DS-PSB, 두산에코비즈넷, 한국)와 함께 제공되는 균주로서, 이를 상기 배양 배지에서 배양하였다. 구체적으로, 1 ℓ의 광합성 세균을 분말형태의 배지 1(비료성분) 및 액상형태의 배지 2(증식촉진성분)를 물에 용해시켜 총량을 100 ℓ로 맞춘 배지에서 배양하였다. 이때 배양은 35℃에서 수행되었고, 상기와 동일하게 미생물의 성장 곡선이 감쇄기에 도달하였을 때의 배양액을 2차 배양에 사용하였다.
실시예 3. 광합성 세균의 2차 배양액의 제조-(1)
상기 실시예 1에서 배양한 배양 4일째의 로도박터 스페로이드스 배양액을 유용미생물군(EM, EM바이오, 한국) 및 당밀 활성액(EM바이오, 한국)에 접종하여 실온에서 7일간 배양하였다. 이때, 0.4 ㎏의 당밀 및 0.3 ㎏의 EM 원액을 19.2 ㎏의 물에 용해시킨 배양 배지에 0.1 ㎏의 실시예 1의 광합성 세균을 접종하여 이를 배양하였다.
실시예 4. 광합성 세균의 2차 배양액의 제조-(2)
상기 실시예 2에서 배양한 배양 4일째의 광합성 세균 배양액을 다양한 농도로, EM(코넴바이오, 한국) 및 당밀 활성액(코넴바이오, 한국)에 접종하여 실온에서 7일간 배양하였다. 이때, 0.4 ㎏의 당밀 및 0.3 ㎏의 EM 원액을 19.2 ㎏의 물에 용해시킨 배양 배지에 0.1 ㎏의 실시예 2의 광합성 세균을 접종하여 이를 배양하였다.
실시예 5 내지 8. 광합성 세균의 2차 배양액의 제조-(3)
상기 실시예 2에서 배양한 광합성 세균 배양액을 하기 표 1의 조성을 갖는 배양 배지에 접종하여 실온에서 7일간 배양하였다.
실시예 2 배양액
(kg)		 당밀
(kg)		 EM 원액
(kg)		 소금
(kg)		 설탕
(kg)		 물
(kg)		 합계
(kg)
실시예 5 3.0 10 2.0 5 5 75.0 100
실시예 6 5.0 10 2.0 5 5 73.0 100
실시예 7 8.0 10 2.0 5 5 70.0 100
실시예 8 10.0 10 2.0 5 5 68.0 100
실시예 9. 인진쑥이 첨가된 광합성 세균 2차 배양액의 제조
배양 배지에 0.1 ㎏의 인진쑥(Artemisia capillaris Thunb.) 가루를 추가로 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 8과 동일한 조건 및 방법으로 인진쑥이 첨가된 광합성 세균 2차 배양액을 제조하였다.
실시예 10. 사자발쑥이 첨가된 광합성 세균 2차 배양액의 제조
인진쑥 대신 사자발쑥(Artemisia princeps Pampanini)을 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 9와 동일한 방법으로 사자발쑥이 첨가된 광합성 세균 2차 배양액을 제조하였다.
실시예 11. 개똥쑥이 첨가된 광합성 세균 2차 배양액의 제조
인진쑥 대신 개똥쑥(Artemisia annua Linne)을 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 9와 동일한 방법으로 개똥쑥이 첨가된 광합성 세균 2차 배양액을 제조하였다.
실시예 12. 민들레가 첨가된 광합성 세균 2차 배양액의 제조
인진쑥 대신 민들레(Taraxacum platycarpum)를 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 9와 동일한 방법으로 민들레가 첨가된 광합성 세균 2차 배양액을 제조하였다.
실시예 13. 고추씨가 첨가된 광합성 세균 2차 배양액의 제조
인진쑥 대신 고추(Capsicum annuum)의 씨를 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 9와 동일한 방법으로 고추씨가 첨가된 광합성 세균 2차 배양액을 제조하였다.
실시예 14. 솔잎이 첨가된 광합성 세균 배양액의 제조
인진쑥 대신 소나무(Pinus densiflora)의 잎을 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 9와 동일한 방법으로 솔잎이 첨가된 광합성 세균 2차 배양액을 제조하였다.
실험예 1. 광합성 세균 배양액의 방청 효과 확인
상기 실시예 2 내지 4에서 제조된 광합성 세균 배양액을 각각 하기 표 2에 기재된 바와 같은 농도가 되도록 수용액을 만든 뒤, 상기 수용액에 30 g의 철제 못을 넣고 실온에서 녹의 발생을 관찰하였다.
사용된 광합성
세균 배양액		 광합성 세균 배양액의
희석 농도(부피%)		 녹 발생 여부 녹 발생까지의 시간
대조군(물) 0.0 발생 3 시간
실시예 2 0.3 발생 4 시간
실시예 3 0.1 발생 4 시간
0.3 발생 5 시간
0.6 발생 7 시간
1.0 발생 8 시간
2.0 발생 5일 이후
3.0 발생 13일 이후
실시예 4 0.1 발생 5 시간
0.3 발생 6 시간
0.6 발생 8 시간
1.0 발생 9 시간
실시예 5 1.0 발생 9 시간
실시예 6 1.0 발생 3일 이후
실시예 7 1.0 발생 4일 이후
실시예 8 1.0 발생 6일 이후
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 본원 실시예 2 내지 8에서 제조된 광합성 세균 1차 배양액 및 광합성 세균 2차 배양액은 방청 효과를 증진시켰다. 이는 첨가된 광합성 세균 2차 배양액의 양과 비례하였다.
또한, 상기 실시예 9 내지 14에서 제조한 항산화 물질이 포함된 광합성 세균 2차 배양액의 방청 효과를 상기와 동일한 방법으로 확인하였다. 이때 배양액은 0.5 또는 1.0 부피%의 농도로 희석하여 사용하였다.
광합성 세균 배양액의
희석 농도(부피%)		 녹 발생 여부 녹 발생까지의 시간
대조군(물) 0.0 발생 3 시간
실시예 9 0.5 발생 3일 이후
1.0 발생 7일 이후
실시예 10 0.5 발생 3일 이후
1.0 발생 7일 이후
실시예 11 0.5 발생 3일 이후
1.0 발생 7일 이후
실시예 12 0.5 발생 3일 이후
1.0 발생 7일 이후
실시예 13 0.5 발생 3일 이후
1.0 발생 7일 이후
실시예 14 0.5 발생 3일 이후
1.0 발생 7일 이후
그 결과, 상기 표 3에서 보여지는 바와 같이 광합성 세균 배양액의 희석 농도에 비례하여 방청 효과가 증진되었고, 이와 같은 효과는 항산화 물질의 첨가에 의해 더욱 향상되었다.
실험예 2. 동결 및 해동 후 방청 효과의 변화 확인
본 발명의 광합성 세균 2차 배양액이 동결 및 해동 후에도 방청 효과를 유지하는지 여부를 확인하였다.
먼저, 상기 실시예 2에서 제조한 10 ㎏의 광합성 세균 1차 배양액을 4.2 ㎏의 당밀, 2.0 ㎏의 EM 원액, 0.3 ㎏의 소금, 1.4 ㎏의 설탕, 82 ㎏의 물 및 0.1 ㎏의 인진쑥이 혼합된 배양액에서 실온으로 7일간 배양하여 광합성 세균 2차 배양액을 제조하였다. 제조된 2차 배양액을 냉동실(-15℃)에서 22시간 동안 동결시킨 후 이를 상온에서 해동한 것과 계속 상온에서 보관한 것을 사용하여 방청 효과를 비교 확인하였다. 방청 효과는 광합성 세균 2차 배양액을 0.5 부피%로 포함하는 수용액을 만든 뒤, 상기 수용액에 30 g의 철제 못을 넣고 녹의 발생을 관찰하여 확인하였다.
그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.
동결 여부 녹 발생 여부 녹 발생까지의 시간
광합성 세균
2차 배양액		 ○ 발생 3일 이후
× 발생 3일 이후
표 4에서 보는 바와 같이, 배양액의 동결 여부는 방청 효과에 영향을 미치지 않았다.
II. 광합성 세균 2차 배양액을 포함한 수용성 절삭유의 방청 효과 확인
실시예 15 및 16. 광합성 세균 배양액이 첨가된 시판 수용성 절삭유의 제조-(1)
실험예 2에서 제조된 광합성 세균 2차 배양액 및 실시예 2에서 제조된 광합성 세균 1차 배양액을 시판중인 수용성 절삭유인 삼육사의 1종1호 수용성 절삭유에 2 부피%의 농도가 되도록 희석하여 각각 실시예 15 및 16의 광합성 세균 배양액이 포함된 수용성 절삭유를 제조하였다.
실시예 17 및 18. 광합성 세균 배양액이 첨가된 시판 수용성 절삭유의 제조-(2)
삼육사의 1종1호 수용성 절삭유 대신, 제우스사의 1종1호 수용성 절삭유를 사용한 것을 제외하고는, 상기 실시예 15 및 16과 동일한 조건 및 방법으로, 각각 실시예 17 및 18의 광합성 세균 배양액이 포함된 수용성 절삭유를 제조하였다.
비교예 1 내지 4. 시판 중인 광합성 세균 배양액이 첨가된 시판 수용성 절삭유의 제조-(1)
실험예 2의 광합성 세균 배양액 대신, 시판중인 광합성 세균인 아쿠아리더스 PSB(하비월드사, 한국), Jell Na 광합성 미생물 생균제(한 바이오, 한국), EM 활성액(코넴바이오사, 한국) 및 EM-K(이엠팜, 한국)를 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 15와 동일한 조건 및 방법으로, 각각 비교예 1 내지 4의 광합성 세균 배양액이 포함된 수용성 절삭유를 제조하였다.
비교예 5 내지 8. 시판 중인 광합성 세균 배양액이 첨가된 시판 수용성 절삭유의 제조-(2)
삼육사의 1종1호 수용성 절삭유 대신, 제우스사의 1종1호 수용성 절삭유를 사용한 것을 제외하고는, 상기 비교예 1 내지 4와 각각 동일한 조건 및 방법으로, 각각 비교예 5 내지 8의 광합성 세균 배양액이 포함된 수용성 절삭유를 제조하였다.
실험예 3. 광합성 세균 배양액에 의한 수용성 절삭유의 방청 효과 증진 확인
상기 실시예 15 내지 18과 비교예 1 내지 8에서 제조한 수용성 절삭유의 방청 효과를 확인하였다. 구체적으로, 방청 효과는 상기 절삭유에 30 g의 철제 못 및 주철 주물 칩(chip) 20 g을 넣고 녹의 발생을 관찰하여 확인하였다. 이때, 대조군으로는 광합성 세균 배양액을 첨가하지 않은 삼육사 1종1호 또는 제우스사 1종1호 수용성 절삭유를 사용하였다.
그 결과, 삼육사의 1종1호 수용성 절삭유를 이용한 방청 효과 확인 결과는 표 5에, 제우스사의 1종1호 수용성 절삭유를 이용한 방청 효과 확인 결과는 표 6에 나타내었다. 또한, 결과를 확인한 사진을 도 1 내지 4에 나타내었다.
녹 발생 여부 녹 발생까지의 시간
삼육사 1종1호 발생 1일 이후
실시예 15 발생 14일 이후
실시예 16 발생 6 시간
비교예 1 발생 4 시간
비교예 2 발생 6 시간
비교예 3 발생 1일 이후
비교예 4 발생 1일 이후
녹 발생 여부 녹 발생까지의 시간
제우스사 1종1호 발생 1일 이후
실시예 17 발생 15일 이후
실시예 18 발생 2 시간
비교예 5 발생 2 시간
비교예 6 발생 1 시간
비교예 7 발생 27 시간
비교예 8 발생 20 시간
그 결과, 상기 표 5 및 표 6에서 나타난 바와 같이, 본 발명의 광합성 세균 배양액을 첨가하는 경우, 시판되고 있는 수용성 절삭유의 방청 효과를 증진시켰다(실시예 15 및 17). 다만, 비교예 1, 2, 5 및 6과 실시예 16 및 18은 아무것도 첨가하지 않은 삼육사 1종1호 또는 제우스사 1종1호 수용성 절삭유보다 녹 발생까지의 시간이 짧았다. 이는 상기 첨가된 광합성 세균이 수용성 절삭유의 에멀젼 형태를 깨뜨려서 방청 효과를 감퇴시킨 것으로 보인다.
III. 방청제 및 방부제를 포함하지 않고 광합성 세균 배양액을 포함한 수용성 절삭유의 방청 효과 확인
실시예 19. 광합성 세균 2차 배양액을 포함하는 수용성 절삭유의 제조-(1)
실시예 3에서 제조한 광합성 세균 2차 배양액을 사용하여 방청제 및 방부제가 포함되지 않은 수용성 절삭유를 제조하였다.
구체적으로, 2 부피%의 광합성 세균 2차 배양액, 40 부피%의 광유기유(鑛油基油)(제우스 유화, 한국), 10 부피%의 채종유(천경실업, 한국), 5 부피%의 염화파라핀(남덕물산, 한국), 5 부피%의 톨유지방산(tall oil fatty acid, TOFA)(GNO, 한국), 5% 부피의 SM30(stearyl amine 30; 유화제)(동남합성, 한국), 4 부피%의 모노폴 OP1019(polyoxyethylene(9) octylphenol ether; 비이온 계면활성제)(SJ켐, 한국), 15 부피%의 보릭 아미드(boric amide)(코스모스 FNC, 한국), 5 부피%의 이염기산(dibasic acid)(코스모스 FNC, 한국), 2 부피%의 DCHA(dicyclohexylamine)(SPC, 한국), 0.2 부피%의 2-에틸헥산올(2-ethylhexanol; 소포제)(성원PLS, 한국) 및 6.8 부피%의 물을 혼합하여 수용성 절삭유를 제조하였다.
실시예 20. 광합성 세균 2차 배양액을 포함하는 수용성 절삭유의 제조-(2)
실시예 3에서 제조한 광합성 세균 2차 배양액 대신 실시예 4에서 제조한 광합성 세균 2차 배양액을 사용한 것을 제외하고는, 상기 실시예 19와 동일한 조건 및 방법으로 수용성 절삭유를 제조하였다.
실시예 21. 광합성 세균 2차 배양액을 포함하는 수용성 절삭유의 제조-(3)
실시예 3에서 제조한 광합성 세균 2차 배양액 대신 실시예 9에서 제조한 광합성 세균 2차 배양액을 사용한 것을 제외하고는, 상기 실시예 19와 동일한 조건 및 방법으로 수용성 절삭유를 제조하였다.
비교예 9. 광합성 세균을 포함하지 않는 수용성 절삭유의 제조
광합성 세균 2차 배양액을 첨가하지 않는 것을 제외하고는, 상기 실시예 19와 동일한 방법으로 수용성 절삭유를 제조하였다.
비교예 10. 광합성 세균의 1차 배양액을 포함하는 수용성 절삭유의 제조
실시예 3에서 제조한 광합성 세균 2차 배양액 대신 실시예 2에서 제조한 광합성 세균 1차 배양액을 사용한 것을 제외하고는, 상기 실시예 19와 동일한 조건 및 방법으로 수용성 절삭유를 제조하였다.
비교예 11. 유용미생물군을 포함하는 수용성 절삭유의 제조-(1)
실시예 3에서 제조한 광합성 세균 2차 배양액 대신 EM 바이오사의 유용미생물군을 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 19와 동일한 조건 및 방법으로 수용성 절삭유를 제조하였다.
비교예 12. 유용미생물군을 포함하는 수용성 절삭유의 제조
실시예 3에서 제조한 광합성 세균 2차 배양액 대신 코넴 바이오사의 유용미생물군을 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 19와 동일한 조건 및 방법으로 수용성 절삭유를 제조하였다.
실험예 4. 광합성 세균 2차 배양액을 포함하는 수용성 절삭유의 방청 효과 확인
상기 실시예 19 내지 21 및 비교예 9 내지 12에서 제조된 수용성 절삭유를 2.0 부피%로 희석한 절삭유 수용액을 제조한 뒤, 상기 수용액에 30 g의 못 및 20 g의 금속 칩(chip)을 넣고 녹의 발생을 관찰하였다.
그 결과를 하기 표 7에 나타내었다.
녹 발생 여부 녹 발생까지의 시간
실시예 19 발생 3일 이후
실시예 20 발생 4일 이후
실시예 21 발생 6일 이후
비교예 9 발생 5 시간
비교예 10 발생 5 시간
비교예 11 발생 6 시간
비교예 12 발생 5 시간
그 결과, 상기 표 7에서 보여지는 바와 같이, 본 발명의 광합성 세균 2차 배양액을 포함하는 실시예 19 내지 21의 수용성 절삭유에서는 3 내지 6일 이후에 녹이 발생한 반면, 비교예 9 내지 12의 수용성 절삭유에서는 5 내지 6시간 이후에 녹이 발생하였다. 이로부터 본 발명의 광합성 세균 2차 배양액이 우수한 방청 효과를 나타내는 것을 알 수 있었다.
IV. 수용성 절삭유의 항균력 확인
본 발명의 광합성 세균 배양액이 포함된 수용성 절삭유의 항균력을 다음의 실험들을 통해 확인하였다.
우선, 무방부제 수용성 절삭유 A-1(식물성 기유 타입), 무방부제 수용성 절삭유 A-2(합성 기유 타입), 방부제 수용성 절삭유 A-3(A-2와 동일한 조성에 BIT, MIT, CMIT 등의 방부제가 추가된 것), 무방부제 수용성 절삭유 B-1(식물성 기유 타입), 무방부제 수용성 절삭유 B-2(합성 기유 타입), 방부제 수용성 절삭유 B-3(B-2와 동일한 조성에 BIT, MIT, CMIT 등의 방부제가 추가된 것)를 다음과 같이 제조하였다.
A-1: 2 부피%의 실시예 9의 광합성 세균 배양액, 40 부피%의 대두유(천경실업, 한국), 10 부피%의 채종유(천경실업, 한국), 5 부피%의 저급 지방산(TOFA)(GNO, 한국), 5 부피%의 SM30(동남합성, 한국), 3 부피%의 모노폴 OP1019(SJ켐, 한국), 15 부피%의 보릭 아미드(코스모스 FNC, 한국), 11 부피%의 이염기산(코스모스 FNC, 한국), 2 부피%의 DCHA(SPC, 한국), 0.2 부피%의 2-에틸헥산올(성원PLS, 한국) 및 6.8 부피%의 물을 혼합하여 수용성 절삭유를 제조하였다.
A-2: 대두유 대신 합성 기유 (제우스 유화, 한국)를 사용하는 것을 제외하고는, A-1과 동일한 조성으로 수용성 절삭유를 제조하였다.
A-3: A-2와 동일한 조성에서 2 부피%의 물 대신에 방부제로서 MBX(대흥상사; 5-클로로-2-메틸-4-아이소티아졸린-3-온(1.1 중량%) 및 1,2-벤즈아이소티아졸린-3-온 (4 중량%) 함유)를 혼합하여 수용성 절삭유를 제조하였다.
B-1: 2 부피%의 실시예 9의 광합성 세균 배양액, 40 부피%의 대두유(천경실업, 한국), 10 부피%의 채종유(천경실업, 한국), 10 부피%의 저급지방산(GNO, 한국), 7 부피%의 SM30(동남합성, 한국), 7 부피%의 모노폴 OP1019(SJ켐, 한국), 10 부피%의 보릭 아미드(코스모스 FNC, 한국), 7 부피%의 이염기산(코스모스 FNC, 한국), 2 부피%의 DCHA(SPC, 한국), 0.2 부피%의 2-에틸헥산올(성원PLS, 한국) 및 6.8 부피%의 물을 혼합하여 수용성 절삭유를 제조하였다.
B-2: 대두유 대신 합성 기유(제우스 유화, 한국)를 사용하는 것을 제외하고는, B-1과 동일한 조성으로 수용성 절삭유를 제조하였다.
B-3: B-2와 동일한 조성에서 2 부피%의 물 대신에 방부제로서 MBX(대흥상사; 5-클로로-2-메틸-4-아이소티아졸린-3-온(1.1 중량%) 및 1,2-벤즈아이소티아졸린-3-온 (4 중량%) 함유)를 혼합하여 수용성 절삭유를 제조하였다.
실험예 5: 미생물 오염도 분석
상기 A-1 내지 B-3의 절삭유 30 ml를 트립틱 소이 아가 배지(tryptic soy agar medium; TSA 배지)에 접종한 후, 30℃에서 3일 동안 배양하였다.
각 시료에서 미생물의 성장 여부를 관찰한 결과, 어느 시료에서도 세균이나 곰팡이와 같은 미생물이 검출되지 않았다. 따라서, 모든 시료가 미생물에 의해 오염되지 않았음을 알 수 있다.
실험예 6: 미생물 사멸효과 분석 (Challenge test)
광합성 미생물이 첨가된 절삭유의 항균성을 확인하기 위해, 상기 A-1 내지 B-3의 절삭유에 시험균 혼합액을 106 cfu/㎖의 양으로 각각 접종하였다.
시험균 혼합액은 대장균(Escherichia coli ATCC 8739), 슈도모나스 애루기노사(Pseudomonas aeruginosa ATCC 15442), 버크홀데리아 세파시아(Burkholderia cepacia ATCC 15442), 클렙시엘라 뉴모니애(Klebsiella pneumoniae ATCC 4352), 엔테로박터 애로제네스(Enterobacter aerogenes ATCC 13048), 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium KCTC 1925), 스태필로코커스 오레우스(Staphylococcus aureus ATCC 6538), 마이크로코커스 루테우스(Mycrococcus luteus ATCC 9341), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아가리쿠스 브라실리엔시스(Agaricus brasiliensis)를 포함하였다.
균주 접종 직후, 얻어진 시험 용액을 TSA 배지에 도말하여 30℃에서 3일 동안 배양하였다. 또한, 시험 용액을 30℃에서 보관하면서 2일 후에 TSA 배지에 도말하여 상기와 동일하게 배양한 후 균주의 생육을 관찰하였다.
균주의 생육 관찰 결과를 하기 표 8에 나타내었다.
절삭유 시료 초기 2일 후
A-1 3 0
A-2 3 0
A-3 3 0
B-1 3 0
B-2 3 0
B-3 3 0
등급 시스템
0: 세균 발생 없음
1: 미량의 오염 (1-9 콜로니) 3: 중간 정도의 오염(>100 콜로니)
2: 약한 오염 (10-99 콜로니) 4: 심한 오염(TNTC)
상기 표 8의 결과에서 볼 수 있는 바와 같이, 균주 접종 초기에는 100 콜로니 이상의 균주가 발생되었지만, 배양 2일 후에는 광합성세균 배양액이 첨가된 절삭유와 방부제가 첨가된 절삭유 모두 항균성을 나타내었다.

Claims (17)

  1. 광합성 세균 배양액을 포함하는 수용성 절삭유로서,
    상기 절삭유는 방청 효과가 증진된 것이며,
    상기 광합성 세균 배양액이 유산균, 효모 및 고초균에서 선택되는 적어도 하나의 미생물을 광합성 세균과 혼합 배양하여 수득된 1차 배양액을 유용미생물군(EM)과 혼합 배양하여 수득된 2차 배양액이고,
    상기 광합성 세균이 로도박터 스페로이드스(Rhodobacter sphaeroides)이며,
    상기 2차 배양액이 인진쑥, 사자발쑥, 개똥쑥, 민들레, 고추씨, 솔잎 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나를 포함하는 배지에 1차 배양액을 배양하여 수득된 것이고,
    상기 광합성 세균 배양액이 수용성 절삭유 총 부피를 기준으로 0.1 내지 5 부피%로 포함되는, 수용성 절삭유.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 제1항에 있어서, 상기 배양액은 당밀, 밀기울, 쌀겨 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 배지에 광합성 세균을 배양하여 수득되는 것을 특징으로 하는, 수용성 절삭유.
  7. 삭제
  8. 삭제
  9. 삭제
  10. 제1항에 있어서, 상기 절삭유가 윤활기유, 유화제, 극압첨가제 및 소포제로 구성되는 것을 특징으로 하는, 수용성 절삭유.
  11. 제10항에 있어서, 상기 윤활기유는 광유기유, 채종유, 해바라기유, 대두유, 겨자유, 폴리에틸렌글리콜 에스테르(polyethylene glycol(PEG) ester), 알콜 에스테르, PEG, PAG(poly alkylene glycol), E/O(ethylene oxide), P/O(propylene oxide), 코폴리머(copolymer), 염화파라핀(C10-13 chlorinated paraffin), 황을 함유하는 에스테르, PAO(poly alpha olefin) 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 수용성 절삭유.
  12. 제10항에 있어서, 상기 유화제가 PEG, 아민, 알콜, TOFA(tall oil fatty acid), 올레산, INA(isononanoic acid), NDA(neo decanoic acid), OTA(octanoic acid), 폴리옥시에틸렌(9) 옥틸페놀에스테르, 폴리옥시에틸렌 라우릴에스테르, PEG 에스테르, 폴리옥시에틸렌트리데실에스테르, 소르비탄 모노올레이트류, SM30(stearyl amine 30), 아크릴화 지방산 아미드, 폴리에틸렌 글리콜 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 수용성 절삭유.
  13. 제10항에 있어서, 상기 극압첨가제가 염화파라핀, 인계에스테르, 황 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 수용성 절삭유.
  14. 제10항에 있어서, 상기 소포제가 2-에틸헥산올, 무정형 실리카 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 수용성 절삭유.
  15. 광합성 세균을 1차 배양하는 단계;
    상기 배양된 광합성 세균을 유용미생물군(EM)과 혼합하여 2차 배양하는 단계; 및
    상기 2차 배양액을 수용성 절삭유에 혼합하는 단계를 포함하고,
    상기 1차 배양이 유산균, 효모 및 고초균에서 선택되는 적어도 하나의 미생물을 광합성 세균과 혼합 배양하는 것이며,
    상기 광합성 세균이 로도박터 스페로이드스(Rhodobacter sphaeroides)이고,
    상기 2차 배양이 인진쑥, 사자발쑥, 개똥쑥, 민들레, 고추씨, 솔잎 및 이의 혼합으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나를 포함하는 배지에서 배양하는 것이며,
    상기 혼합이 2차 배양액을 수용성 절삭유 총 부피를 기준으로 0.1 내지 5 부피%의 양으로 혼합하는, 방청 효과가 증진된 절삭유 제조방법.
  16. 삭제
  17. 제15항에 있어서, 상기 2차 배양이 15℃ 내지 25℃의 온도에서 수행되는 것을 특징으로 하는, 절삭유 제조방법.
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