KR101747904B1

KR101747904B1 - Pharmaceutical composition for treatment of malignant mesothelioma comprising cisplatin and resveratrol as an active ingredients

Info

Publication number: KR101747904B1
Application number: KR1020160068586A
Authority: KR
Inventors: 이상한; 이윤진; 허수학
Original assignee: 순천향대학교 산학협력단
Priority date: 2016-06-02
Filing date: 2016-06-02
Publication date: 2017-06-16

Abstract

본 발명은 시스플라틴 및 레스베라트롤을 유효성분으로 함유하는 악성 중피종 치료용 약학 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은, 정상 세포에 영향을 주지 않는 저농도에서 악성 중피종 세포의 증식 억제 효과가 우수하다. 또한, 바필로마이신 A를 시스플라틴 및 레스베라트롤과 함께 처리하는 경우에는 악성 중피종 세포의 약물에 대한 저항성을 억제한다. 따라서, 시스플라틴, 레스베라트롤 및 바필로마이신 A의 병용 투여는 악성 중피종 세포의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.The present invention relates to a pharmaceutical composition for treating malignant mesothelioma containing cisplatin and resveratrol as an active ingredient. The composition is excellent in inhibiting proliferation of malignant mesothelioma cells at low concentrations that do not affect normal cells. In addition, treatment of barbulomycin A with cisplatin and resveratrol inhibits the resistance of malignant mesothelioma cells to drugs. Therefore, the combined administration of cisplatin, resveratrol, and barfilomycin A can be usefully used for the treatment of malignant mesothelioma cells.

Description

시스플라틴 및 레스베라트롤을 유효성분으로 함유하는 악성 중피종 치료용 약학 조성물{PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR TREATMENT OF MALIGNANT MESOTHELIOMA COMPRISING CISPLATIN AND RESVERATROL AS AN ACTIVE INGREDIENTS}[0001] PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR MALIGNANT MESOTHELIOMA COMPRISING CISPLATIN AND RESVERATROL AS AN ACTIVE INGREDIENTS [0002] The present invention relates to a pharmaceutical composition for treating malignant mesothelioma comprising cisplatin and resveratrol as an active ingredient.

본 발명은 시스플라틴 및 레스베라트롤을 유효성분으로 함유하는 악성 중피종 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a pharmaceutical composition for treating malignant mesothelioma containing cisplatin and resveratrol as an active ingredient.

악성 중피종은 석면에 노출될 경우 발생빈도가 높은 암종으로, 평균적으로 약 10-30년의 잠복기를 거친 후 발병된다. 악성 중피종은 증상이 비특이적이고, 대다수가 진행이 이루어진 상태에서 진단되기 때문에 외과적 절제나 방사선 요법보다는 항암제 치료에 의존하고 있다. 그러나, 이는 암 치료법에 저항성을 나타내는 대표적인 악성 종양으로 알려져 있다.Malignant mesothelioma is a highly prevalent type of cancer when it is exposed to asbestos, and it occurs after an average latency of about 10-30 years. Malignant mesothelioma relies on chemotherapy rather than surgical resection or radiotherapy because the symptoms are nonspecific and the majority are diagnosed with progression. However, this is known as a representative malignant tumor showing resistance to cancer treatment.

현재까지 악성 중피종의 치료에 효과적인 약물들이 개발되고 있으나, 정상 세포에 대한 독성과 암 세포의 저항성을 해결하지 못하고 있다. 따라서, 정상 조직에서는 독성을 유도하지 않고, 항암 약물에 대한 저항 인자를 차단할 수 있는 악성 중피종의 치료를 위한 약물의 개발이 요구된다.To date, effective drugs for the treatment of malignant mesothelioma have been developed, but they do not address the toxicity of normal cells and the resistance of cancer cells. Therefore, the development of a drug for the treatment of malignant mesothelioma, which does not induce toxicity in normal tissues and can block the resistance factor against anticancer drugs, is required.

이와 관련하여, 대한민국 공개특허 제10-2013-0124640호는 퀘르세틴을 포함하는 악성 중피종 치료용 조성물에 대하여 개시하고 있다.
In this regard, Korean Patent Publication No. 10-2013-0124640 discloses a composition for treating malignant mesothelioma including quercetin.

한편, 시스플라틴은 백금을 함유하는 중금속 화합물로서, 유방암, 방광암, 위암, 자궁경부암 등과 같이 다양한 암의 치료에 사용되고 있다. 상기 화합물은 DNA 가닥에서 인접한 2개의 구아닌과 결합하여 사슬 내 가교를 형성하고, DNA 합성을 억제함으로써, 암 세포의 성장 및 증식을 억제한다. 또한, 레스베라트롤은 폴리페놀계 화합물로서 포도 등과 같은 식품에 존재한다. 레스베라트롤은 항산화, 항방사능, 항염증 및 항바이러스 활성 등이 있다고 보고되어 있다. 아울러, 바필로마이신 A는 마크로라이드(macrolide) 계의 항생제로, H⁺-ATPase 저해제이다. 바필로마이신 A는 박테리아 또는 진균류의 성장을 억제하고, 항암활성을 나타내는 것으로 알려져 있다.
On the other hand, cisplatin is a heavy metal compound containing platinum and is used for the treatment of various cancers such as breast cancer, bladder cancer, stomach cancer, cervical cancer and the like. The compound binds to two adjacent guanines in a DNA strand to form intrachain crosslinking and inhibits DNA synthesis, thereby inhibiting the growth and proliferation of cancer cells. In addition, resveratrol is a polyphenolic compound that exists in foods such as grapes. Resveratrol has been reported to have antioxidant, anti-radioactivity, anti-inflammatory and antiviral activity. In addition, barproximin A is an antibiotic of the macrolide system and is an H ⁺ -ATPase inhibitor. Barfilomycin A inhibits the growth of bacteria or fungi and is known to exhibit anticancer activity.

대한민국 공개특허 제10-2013-0124640호Korean Patent Publication No. 10-2013-0124640

본 발명의 목적은 시스플라틴 및 레스베라트롤을 포함하는 악성 중피종 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for treating malignant mesothelioma including cisplatin and resveratrol.

본 발명의 다른 목적은 시스플라틴, 레스베라트롤 및 바필로마이신 A를 포함하는 악성 중피종 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for treating malignant mesothelioma comprising cisplatin, resveratrol, and barfilomycin A.

본 발명의 또 다른 목적은 바필로마이신 A를 함유하는 제1성분; 및 시스플라틴 및 레스베라트롤을 함유하는 제2성분을 포함하는 악성 중피종 치료용 약학적 키트를 제공하는 것이다.
It is another object of the present invention to provide a pharmaceutical composition comprising a first component comprising bar philomin A; And a second component comprising cisplatin and resveratrol. The present invention also provides a pharmaceutical kit for treating malignant mesothelioma.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 시스플라틴 및 레스베라트롤을 유효성분으로 함유하는 악성 중피종 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating malignant mesothelioma containing cisplatin and resveratrol as an active ingredient.

또한, 본 발명은 시스플라틴, 레스베라트롤 및 바필로마이신 A를 유효성분으로 함유하는 악성 중피종 예방 또는 치료용 약학 조성물를 제공한다.In addition, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating malignant mesothelioma containing cisplatin, resveratrol and barfilomycin A as an active ingredient.

또한, 본 발명은 약제학적으로 치료가능한 양의 바필로마이신 A를 유효성분으로 함유하는 제1성분; 및 약제학적으로 치료가능한 양의 시스플라틴 및 레스베라트롤을 유효성분으로 함유하는 제2성분을 포함하는, 악성 중피종 예방 또는 치료용 약학적 키트를 제공한다.
The present invention also provides a pharmaceutical composition comprising a first component comprising as an active ingredient a pharmaceutically therapeutically effective amount of barfilomycin A; And a second component comprising a pharmaceutically therapeutically effective amount of cisplatin and resveratrol as an active ingredient.

본 발명의 시스플라틴 및 레스베라트롤을 함유하는 조성물은, 정상 세포에 영향을 주지 않는 저농도에서 악성 중피종 세포의 증식 억제 효과가 우수하다. 또한, 바필로마이신 A를 전처리하고 시스플라틴 및 레스베라트롤을 함께 투여하는 경우에는 항암제에 내성을 갖는 악성 중피종 세포를 효과적으로 억제할 수 있다. 따라서, 시스플라틴, 레스베라트롤 및 바필로마이신 A의 병용 투여는 악성 중피종 세포의 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
The composition containing cisplatin and resveratrol of the present invention is excellent in the effect of suppressing proliferation of malignant mesothelioma cells at a low concentration that does not affect normal cells. In addition, in the case of pre-treating bar philomin A and administering cisplatin and resveratrol together, it is possible to effectively inhibit malignant mesothelioma cells resistant to anticancer drugs. Therefore, the combined administration of cisplatin, resveratrol, and barfilomycin A can be usefully used for the treatment of malignant mesothelioma cells.

도 1a는 정상 중피세포 및 악성 중피종 세포에서 시스플라틴(Cis) 또는 레스베라트롤(Res)의 단독 처리에 의한 세포의 성장 억제 효과를 확인한 그래프이다.
도 1b는 정상 중피세포 및 악성 중피종 세포에서 시스플라틴 및 레스베라트롤의 병용 처리에 의한 세포의 성장 억제 효과를 확인한 그래프이다.
도 1c는 정상 중피세포 및 악성 중피종 세포에서 시스플라틴 및 레스베라트롤을 다양한 농도의 조합으로 처리한 뒤, 세포의 성장 억제 효과를 확인한 그래프이다.
도 2a는 악성 중피종 세포에서 시스플라틴 및 레스베라트롤의 처리에 의한 세포자멸사 유도 여부를 DAPI 염색으로 확인한 결과이다.
도 2b는 악성 중피종 세포에서 시스플라틴 및 레스베라트롤의 처리에 의한 세포자멸사 유도 여부를 FACS 분석으로 확인한 결과이다.
도 3a는 악성 중피종 세포에서 시스플라틴 및 레스베라트롤의 처리에 의한 자가포식 관련 단백질의 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 3b는 악성 중피종 세포에서 시스플라틴 및 레스베라트롤의 처리시간에 따른 자가포식 작용의 활성화를 확인한 결과이다.
도 3c는 악성 중피종 세포에서 바필로마이신 A(Baf)를 전처리한 뒤 시스플라틴 및 레스베라트롤을 처리하였을 때 세포자멸사 관련 단백질의 발현 변화를 확인한 결과이다.
도 3d는 바필로마이신 A(Baf)를 전처리한 뒤 시스플라틴 및 레스베라트롤을 처리하였을 때 악성 중피종 세포의 성장 억제를 확인한 결과이다.
도 3e는 바필로마이신 A를 농도를 달리하여 전처리한 뒤 시스플라틴 및 레스베라트롤을 처리하였을 때 악성 중피종 세포의 성장 억제를 확인한 그래프이다.
도 3f는 바필로마이신 A를 전처리한 뒤 시스플라틴 및 레스베라트롤을 처리하였을 때 악성 중피종 세포의 세포자멸사 증가를 확인한 결과이다.FIG. 1A is a graph showing the effect of suppressing the growth of cells by the treatment of cisplatin (Cis) or resveratrol (Res) alone in normal mesothelial cells and malignant mesothelioma cells.
FIG. 1B is a graph showing the effect of inhibiting the growth of cells by the combined treatment of cisplatin and resveratrol in normal mesothelial cells and malignant mesothelioma cells.
FIG. 1C is a graph showing the effect of treating cisplatin and resveratrol in various concentrations in normal mesothelial cells and malignant mesothelioma cells, and confirming the growth inhibitory effect of cells.
2A shows the results of DAPI staining for inducing apoptosis induced by treatment with cisplatin and resveratrol in mesothelioma cells of malignant mesenchyme.
FIG. 2B shows the results of FACS analysis of the induction of apoptosis induced by treatment with cisplatin and resveratrol in mesothelioma cells.
FIG. 3A shows the results of confirming the expression of autopoiesis-related proteins in cisplatin and resveratrol in malignant mesothelioma cells.
FIG. 3B shows the results of confirming the activation of autophoresis by treatment time of cisplatin and resveratrol in mesothelial cells of malignant mesenchyme.
FIG. 3c shows the results of confirming the expression of apoptosis-related proteins when pretreated with barfilomycin A (Baf) in malignant mesothelioma cells and then treated with cisplatin and resveratrol.
FIG. 3D shows the results of inhibiting the growth of mesothelioma cells after treatment with cisplatin and resveratrol after pretreatment with bafilomycin A (Baf).
FIG. 3E is a graph showing inhibition of the growth of malignant mesothelioma cells when cisplatin and resveratrol were pretreated with different concentrations of barfilomycin A and treated with cisplatin and resveratrol.
FIG. 3f shows the results of confirming the increase of apoptosis of malignant mesothelioma cells when pretreated with barfilomycin A and then treated with cisplatin and resveratrol.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 시스플라틴 및 레스베라트롤을 유효성분으로 함유하는 악성 중피종 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating malignant mesothelioma containing cisplatin and resveratrol as an active ingredient.

상기 시스플라틴은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물일 수 있다:The cisplatin may be a compound represented by the following Formula 1:

[화학식 1][Chemical Formula 1]

상기 레스베라트롤은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물일 수 있다:The resveratrol may be a compound represented by the following Formula 2:

[화학식 2](2)

본 발명의 조성물에서 상기 시스플라틴 및 레스베라트롤은 1:0.01~2, 1:0.03~1 또는 1:0.05~0.8의 몰비로 혼합될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면 상기 시스플라틴 및 레스베라트롤이 1:0.06~0.75의 몰비로 혼합될 수 있다. 상기 조성물에 포함되는 시스플라틴 및 레스베라트롤의 중량비는 1:0.001~3, 1:0.005~2 또는 1:0.01~1일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 시스플라틴 및 레스베라트롤의 중량비는 1:0.01~0.6일 수 있다.In the composition of the present invention, the cisplatin and resveratrol may be mixed in a molar ratio of 1: 0.01 to 2, 1: 0.03 to 1, or 1: 0.05 to 0.8. According to one embodiment of the present invention, the cisplatin and resveratrol may be mixed in a molar ratio of 1: 0.06 to 0.75. The weight ratio of cisplatin and resveratrol contained in the composition may be 1: 0.001 to 3, 1: 0.005 to 2, or 1: 0.01 to 1. According to an embodiment of the present invention, the weight ratio of cisplatin to resveratrol may be 1: 0.01 to 0.6.

상기 조성물은 정상 중피세포에는 영향을 주지 않는 저농도로 시스플라틴 및 레스베라트롤을 포함함에도 불구하고, 악성 중피종 세포의 성장을 억제함으로써 악성 중피종의 치료에 사용될 수 있다.
The composition can be used for the treatment of malignant mesothelioma by inhibiting the growth of malignant mesothelioma cells, even though it contains cisplatin and resveratrol at low concentrations which do not affect normal mesophilic cells.

본 발명의 시스플라틴 또는 레스베라트롤은 상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 화합물일 수 있다.The cisplatin or resveratrol of the present invention may be a compound represented by the above formula (1) or (2).

본 발명의 바필로마이신 A는 하기 화학식 3으로 표시되는 화합물일 수 있다:The bar philomycin A of the present invention may be a compound represented by the following formula (3)

[화학식 3](3)

상기 바필로마이신 A는 스트렙토미세스 그리세우스(Streptomyces griseus)에서 유래한 것일 수 있으며, 합성되거나 추출된 것일 수 있다. 또한, 상기 바필로마이신 A는 시판되는 것을 사용하여도 무방하다. 상기 바필로마이신 A는 시스플라틴 및 레스베라트롤의 투여에 의한 암 세포의 자가포식 작용을 억제함으로써, 항암 활성을 증대시킨다.The bar-pillomycin A may be derived from Streptomyces griseus and may be synthesized or extracted. Further, commercially available products of the above-mentioned barfilomycin A may be used. The above-mentioned bar-pillomycin A inhibits autopoiesis of cancer cells by administration of cisplatin and resveratrol, thereby enhancing anticancer activity.

상기 악성 중피종은 항암제에 내성을 가질 수 있다. 상기 항암제는 세포신호 전달 억제제, 유사분열 억제제, 알킬화제, 삽입 항암제, 항-대사제, 토포아이소머라제 억제제, 면역요법제 또는 항-호르몬제일 수 있다.The malignant mesothelioma may have resistance to an anticancer drug. The anti-cancer agent may be a cell signaling inhibitor, a mitotic inhibitor, an alkylating agent, an anti-cancer drug, an anti-metabolite, a topoisomerase inhibitor, an immunotherapeutic agent or an anti-hormone agent.

상기 시스플라틴, 레스베라트롤 및 바필로마이신 A는 1:0.01~2:0.001~0.005의 몰비로 혼합될 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면 상기 시스플라틴, 레스베라트롤 및 바필로마이신 A는 1:0.06~0.75:0.0015~0.004의 몰비로 혼합될 수 있다. 상기 조성물에 포함되는 시스플라틴, 레스베라트롤 및 바필로마이신의 중량비는 1:0.001~3:0.0001~0.05, 1:0.005~2:0.0003~0.03 또는 1:0.01~1:0.0007~0.01일 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면, 상기 시스플라틴 및 레스베라트롤의 중량비는 1:0.01~0.6:0.0009~0.008일 수 있다.
The cisplatin, resveratrol and barfilomycin A may be mixed in a molar ratio of 1: 0.01 to 2: 0.001 to 0.005. According to an embodiment of the present invention, the cisplatin, resveratrol, and barfilomycin A may be mixed at a molar ratio of 1: 0.06-0.75: 0.0015-0.004. The weight ratio of cisplatin, resveratrol and barbulomycin contained in the composition may be 1: 0.001 to 3: 0.0001 to 0.05, 1: 0.005 to 2: 0.0003 to 0.03, or 1: 0.01 to 1: 0.0007 to 0.01. According to an embodiment of the present invention, the weight ratio of cisplatin to resveratrol may be 1: 0.01 to 0.6: 0.0009 to 0.008.

본 발명의 약학 조성물은, 동일하거나 유사한 활성을 갖는 것으로 공지된 물질을 하나 이상 추가로 함유할 수 있다.The pharmaceutical compositions of the present invention may additionally contain one or more substances known to have the same or similar activity.

상기 조성물에는 부형제, 윤활제, 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 첨가제가 추가로 함유될 수 있다.The composition may further contain one or more pharmaceutically acceptable additives selected from the group consisting of excipients, lubricants, wetting agents, sweetening agents, fragrances and preservatives.

본 발명의 조성물은 통상의 방법에 따라 제형화될 수 있다. 특히 포유동물에 투여된 후 유효성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화될 수 있다. 상기 제형에 따라 본 발명의 조성물은 개체에 적절하게 투여될 수 있다. 상기 투여는 경구 또는 비경구 투여일 수 있고, 그 예로는 진피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하내, 코안, 경막외 및 구강경로 등이 포함될 수 있다.The composition of the present invention can be formulated according to a conventional method. And may be formulated employing methods known in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient, especially after administration to a mammal. According to the formulation, the composition of the present invention can be administered to an individual as appropriate. Such administration may be oral or parenteral administration, and examples thereof include intradermal, intramuscular, intraperitoneal, intravenous, subcutaneous, intranasal, and oral routes and the like.

경구 투여를 위한 고형 제제는 정제, 알약, 연질 또는 경질 캅셀제, 환제, 산제 또는 과립제일 수 있다. 한편, 비경구 투여를 위한 형태는 크림, 로션제, 연고제, 경고제, 액제, 패취제 또는 주사제 등이 포함될 수 있다.Solid form preparations for oral administration may be tablets, pills, soft or hard capsules, pills, powders or granules. On the other hand, forms for parenteral administration may include creams, lotions, ointments, alerts, solutions, patches or injections.

본 발명의 조성물은 환자의 나이, 성별, 체중, 병증의 정도, 투여 경로에 따라 통상의 기술자에 의해 적절히 투여될 수 있다. 투여는 1일 1회 또는 1일 수회일 수 있다.
The composition of the present invention can be suitably administered by a person skilled in the art according to the age, sex, weight, degree of pathology and administration route of the patient. The administration may be once a day or several times a day.

또한, 본 발명은 약제학적으로 치료가능한 양의 바필로마이신 A를 유효성분으로 함유하는 제1성분; 및 약제학적으로 치료가능한 양의 시스플라틴 및 레스베라트롤을 유효성분으로 함유하는 제2성분을 포함하는, 악성 중피종 예방 또는 치료용 약학적 키트를 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition comprising a first component comprising as an active ingredient a pharmaceutically therapeutically effective amount of barfilomycin A; And a second component comprising a pharmaceutically therapeutically effective amount of cisplatin and resveratrol as an active ingredient.

본 발명의 약학적 키트는 악성 중피종의 예방 또는 치료를 위하여, 제1성분 및 제2성분이 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 제1성분 및 제2성분이 순차적으로 투여되는 경우, 제1성분의 투여 30분 내지 180분, 60분 내지 120분, 80분 내지 100분 전후로 제2성분을 투여할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 의하면 제1성분의 투여 90분 후에 제2성분을 투여할 수 있다.The pharmaceutical kit of the present invention may be administered sequentially or simultaneously with the first component and the second component for the prevention or treatment of malignant mesothelioma. When the first component and the second component are administered sequentially, the second component may be administered for 30 minutes to 180 minutes, 60 minutes to 120 minutes, and 80 minutes to 100 minutes for administration of the first component. According to one embodiment of the present invention, the second component can be administered 90 minutes after the administration of the first component.

상기 약학적 키트에 포함된 제1성분 및 제2성분을 병용 투여하여 항암제에 저항성을 나타내는 악성 중피종의 자가포식 작용을 억제함으로써, 항암 활성을 증대시킬 수 있다. 이때, 상기 제2성분은 시스플라틴 및 레스베라트롤이 1:0.01~2, 1:0.03~1 또는 1:0.05~0.8의 몰비로 포함된 것일 수 있다. 또한, 바필로마이신 A는 제2성분에 포함되는 시스플라틴의 몰농도를 기준으로 1:0.001~0.005의 비율로 제1성분에 포함될 수 있다. 한편, 상기 제2성분에 포함되는 시스플라틴 및 레스베라트롤의 중량비는 1:0.001~3, 1:0.005~2 또는 1:0.01~1일 수 있고, 이때 바필로마이신 A는 시스플라틴의 중량을 기준으로 1:0.0001~0.05, 1:0.0003~0.03 또는 1:0.0007~0.01일 수 있다.The first component and the second component contained in the pharmaceutical kit may be administered in combination to inhibit the autopoietic action of malignant mesothelioma which is resistant to the anticancer agent, thereby increasing the anticancer activity. At this time, the second component may contain cisplatin and resveratrol in a molar ratio of 1: 0.01 to 2, 1: 0.03 to 1, or 1: 0.05 to 0.8. In addition, the bar philominin A may be contained in the first component at a ratio of 1: 0.001 to 0.005 based on the molar concentration of cisplatin contained in the second component. On the other hand, the weight ratio of cisplatin and resveratrol contained in the second component may be 1: 0.001 to 3, 1: 0.005 to 2 or 1: 0.01 to 1, wherein the barfilomycin A is 1: 0.0001 to 0.05, 1: 0.0003 to 0.03, or 1: 0.0007 to 0.01.

상기 투여는 포유동물, 구체적으로 인간에게 투여되는 것일 수 있다.
The administration may be administered to a mammal, particularly a human.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명이 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail by the following examples. However, the following examples are intended to be illustrative of the present invention, but the present invention is not limited thereto.

실시예Example 1. One. 시스플라틴Cisplatin 및 And 레스베라트롤에On resveratrol 의한 악성 중피종 세포의 성장억제 효과 확인 Of Inhibiting the Growth of Malignant Mesothelioma Cells

1-1. 1-1. 시스플라틴Cisplatin 또는 or 레스베라트롤Resveratrol 단독 처리에 의한 효과 확인 Confirmation of effect by single treatment

시스플라틴 또는 레스베라트롤을 각각 첨가하였을 때, 정상 중피세포 또는 악성 중피종 세포의 성장억제 효과를 MTT 분석을 통해 확인하였다.When cisplatin or resveratrol was added, the growth inhibitory effect of normal mesothelial cells or mesothelioma cells was confirmed by MTT analysis.

먼저, 정상 중피세포인 Met-5A 세포(CRL-9444™, ATCC, 미국)를 Eagle's BSS, 75 mM의 L-글루타민, 1.25 g/ℓ의 중탄산나트륨, 3.3 mM의 표피성장인자(EGF), 400 nM의 하이드로코르티손, 870 nM의 인슐린, 20 nM의 HEPES 및 10%의 우태아 혈청이 함유된 199 배지를 이용하여 배양하였다. 한편, 악성 중피종 세포인 MSTO-211H 세포(CRL-2081™, ATCC, 미국) 및 H-2452 세포(CRL-5946™, ATCC, 미국)는 10%의 우태아 혈청, 1 mM의 글루타민, 100 unit의 페니실린 및 100 ㎍/㎖의 스트렙토마이신이 첨가된 RPMI-1640 배지를 이용하여 배양하였다. 배양된 세포를 96-웰 플레이트에 웰 당 3x10³개의 세포가 되도록 분주하여 24시간 동안 배양한 후, 시스플라틴(시그마, 미국)을 150, 300, 450 또는 600 μM의 농도로, 또는 레스베라트롤(시그마, 미국)을 30, 60, 90 또는 120 μM의 농도로 첨가하였다. 이를 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 24, 48 또는 72시간 동안 각각 배양한 뒤, MTT 분석 키트(Roche Diagnostics, 미국)를 사용하여 MTT 분석을 하였다.Met-5A cells (CRL-9444 ™, ATCC, USA) were transfected with Eagle's BSS, 75 mM L-glutamine, 1.25 g / l sodium bicarbonate, 3.3 mM epidermal growth factor nM hydrocortisone, 870 nM insulin, 20 nM HEPES, and 10% fetal bovine serum. MSTO-211H cells (CRL-2081 ™, ATCC, USA) and H-2452 cells (CRL-5946 ™, ATCC, USA) were treated with 10% fetal bovine serum, 1 mM glutamine, 100 units Of penicillin and 100 [mu] g / ml of streptomycin in RPMI-1640 medium. The cultured cells were cultured for 24 hours in a 96-well plate at a density of 3 × 10 ³ cells / well. Cisplatin (Sigma, USA) was added at a concentration of 150, 300, 450 or 600 μM, or resveratrol (Sigma, USA) was added at a concentration of 30, 60, 90 or 120 μM. MTT assay was performed using MTT assay kit (Roche Diagnostics, USA) after culturing for 24, 48, or 72 hours at 37 ° C and 5% CO ₂ .

구체적으로, 배양한 세포에 20 ㎕의 MTT 용액(5 ㎎/㎖)(시그마, 미국)을 첨가하고, 3시간 동안 상기와 동일한 조건에서 반응시켰다. 반응 후, 배양액을 제거하고 200 ㎕의 DMSO(시그마, 미국)를 첨가하여 형성된 포마잔(formazan) 크리스탈을 용해시킨 뒤, 450 ㎚에서 흡광도를 계산하였다. 그 결과, 대조군의 흡광도를 기준으로 각 실험군의 흡광도 비율을 계산하여 도 1a에 나타내었다.Specifically, 20 쨉 l of MTT solution (5 mg / ml) (Sigma, USA) was added to the cultured cells and reacted for 3 hours under the same conditions as above. After the reaction, the culture solution was removed and the formazan crystal formed by adding 200 μl of DMSO (Sigma, USA) was dissolved, and the absorbance at 450 nm was calculated. As a result, the absorbance ratio of each experimental group was calculated based on the absorbance of the control group and shown in FIG. 1A.

도 1a에 나타난 바와 같이, 정상 중피세포와 비교하여 악성 중피종 세포에서 시스플라틴 또는 레스베라트롤에 의한 세포 사멸이 농도의존적으로 증가하였다. 구체적으로, MSTO-211H 및 H-2452 세포주에서, 시스플라틴에 대한 IC₅₀ 값은 각각 292 μM 또는 446 μM이었고 레스베라트롤에 대한 IC₅₀ 값은 각각 82 μM 또는 109 μM이었다. MSTO-211H 세포에 비하여 H-2452 세포에서 시스플라틴 및 레스베라트롤에 대한 저항성이 높았다.
As shown in FIG. 1A, cell death by cisplatin or resveratrol was increased in a concentration-dependent manner in malignant mesothelioma cells as compared with normal mesothelial cells. Specifically, in the MSTO-211H and H-2452 cell lines, IC ₅₀ values for cisplatin were 292 μM or 446 μM, respectively, and IC ₅₀ values for resveratrol were 82 μM or 109 μM, respectively. Resistance to cisplatin and resveratrol was higher in H-2452 cells than in MSTO-211H cells.

1-2. 1-2. 시스플라틴Cisplatin 및 And 레스베라트롤Resveratrol 병용 처리에 의한 효과 확인 Confirmation of effect by combination treatment

상기 실시예 1-1에서 H-2452 세포에 독성을 나타내지 않았던 시스플라틴 및 레스베라트롤의 농도로, 상기 두 화합물을 병용 처리하였을 때 상승효과를 확인하였다.The synergistic effect was confirmed when the above-mentioned two compounds were co-treated at the concentrations of cisplatin and resveratrol which did not show toxicity to H-2452 cells in Example 1-1.

구체적인 실험은 상기 실시예 1-1과 동일한 조건 및 방법으로 수행하였으며, 40 μM의 시스플라틴 및 30 μM의 레스베라트롤을 각각 또는 함께 첨가하여 24, 48 또는 72시간 동안 반응시킨 뒤 흡광도를 측정하였다. 그 결과, 대조군의 흡광도를 기준으로 각 실험군의 흡광도 비율을 계산하여 도 1b에 나타내었다. 상승효과는 복합지수(combination index, CI)가 1보다 작을 때 상승적, 1과 같을 때 상가효과, 1보다 클때 길항효과가 있는 것으로 평가하였다.Specific experiments were carried out under the same conditions and the same method as in Example 1-1, and 40 μM of cisplatin and 30 μM of resveratrol were added or added together for 24, 48 or 72 hours, and the absorbance was measured. As a result, the absorbance ratio of each experimental group was calculated based on the absorbance of the control group and shown in FIG. 1B. The synergistic effect was evaluated as a synergistic effect when the combination index (CI) was less than 1, a synergistic effect when it was equal to 1, and an antagonistic effect when the combination index was greater than 1.

도 1b에 나타난 바와 같이, 시스플라틴 및 레스베라트롤을 병용 처리하였을 때가, 상기 화합물을 단독으로 처리하였을 때와 비교하여 상승적인 세포 사멸 효과가 있음을 확인하였다.
As shown in Fig. 1B, when cisplatin and resveratrol were used in combination, it was confirmed that there was a synergistic cell death effect as compared with the case where the compound was treated alone.

1-3. 1-3. 시스플라틴Cisplatin 및 And 레스베라트롤의Resveratrol 병용 처리 농도에 따른 효과 확인 Confirmation of effect according to concurrent treatment concentration

다양한 농도의 조합으로 시스플라틴 및 레스베라트롤을 처리하였을 때, 상승효과를 확인하였다.Synergy was observed when cisplatin and resveratrol were treated at various concentrations.

구체적인 실험은 상기 실시예 2-1과 동일한 조건 및 방법으로 수행하였으며, 0, 40, 80 또는 120 μM의 시스플라틴과 0, 10, 20 또는 30 μM의 레스베라트롤을 다양한 조합으로 첨가하여 48 또는 72시간 동안 반응시킨 뒤 MTT 분석 결과를 도 1c에 나타내었다.Specific experiments were carried out under the same conditions and the same manner as in Example 2-1, and cisplatin of 0, 40, 80 or 120 μM and resveratrol of 0, 10, 20 or 30 μM were added in various combinations for 48 or 72 hours The results of MTT analysis after the reaction are shown in Fig. 1C.

도 1c에 나타난 바와 같이, 다양한 농도의 조합으로 시스플라틴 및 레스베라트롤을 처리하였을 때 상승적인 세포 사멸 효과가 있음을 확인하였다. 또한, 이와 같은 병용 처리는 정상 중피종 세포와 비교하여 악성 중피종 세포에서 더욱 높은 세포 사멸 효과를 나타내었다.
As shown in FIG. 1C, it was confirmed that when cisplatin and resveratrol were treated at various concentrations, there was a synergistic cell death effect. In addition, this combination treatment showed a higher cytotoxic effect in malignant mesothelioma cells as compared with normal mesothelioma cells.

실시예Example 2. 2. 시스플라틴Cisplatin 및 And 레스베라트롤에On resveratrol 의한 by 세포자멸사Apoptosis 유도 확인 Induction confirmation

2-1. 2-1. DAPIDAPI 염색을 통한 Through dyeing 세포자멸사Apoptosis 유도 확인 Induction confirmation

시스플라틴 및 레스베라트롤에 의한 세포증식 억제가 세포자멸사 유도에 의한 것인지 확인하기 위하여 DAPI 염색을 통해 핵의 형태를 확인하였다.To determine whether the inhibition of cell proliferation by cisplatin and resveratrol was induced by apoptosis, the morphology of the nucleus was confirmed by DAPI staining.

먼저, 6-웰 플레이트에 5x10⁴개의 세포가 되도록 악성 중피종 세포인 MSTO-211H, H-2452 또는 H-28(CRL-5820™, ATCC, 미국)을 분주한 것을 제외하고는, 상기 실시예 1-1에 기재된 바와 같은 조건 및 방법으로 40 μM의 시스플라틴 및 30 μM의 레스베라트롤을 첨가하고, 이를 37℃, 5% CO₂ 조건하에서 48시간 동안 배양하였다. 트립신을 처리하여 배양된 세포를 수득한 후, PBS로 세척하고 100% 메탄올을 첨가하여 세포를 고정시켰다. 고정된 세포를 슬라이드에 분산시킨 후, 2 ㎍/㎖의 DAPI 용액(시그마, 미국)을 첨가하여 염색하였다. 염색된 세포를 Fluoview 공초점레이저현미경(Fluoview FV10i, Olympus Corporation, 일본)을 사용하여 관찰 및 촬영한 결과를 도 2a에 나타내었다.First, MSTO-211H, H-2452 or H-28 (CRL-5820 (TM), ATCC, USA) was dosed to 6-well plate so as to have 5 × 10 ⁴ cells. -1 and 40 [mu] M cisplatin and 30 [mu] M resveratrol were added under the conditions and the method as described in Example 1, and the cells were cultured at 37 [deg.] C and 5% CO ₂ for 48 hours. Treated with trypsin to obtain cultured cells, washed with PBS, and fixed with 100% methanol. After fixed cells were dispersed on the slide, 2 쨉 g / ml of DAPI solution (Sigma, USA) was added and stained. The stained cells were observed and photographed using a Fluoview confocal laser microscope (Fluoview FV10i, Olympus Corporation, Japan), and the results are shown in FIG.

도 2a에 나타난 바와 같이, 시스플라틴 및 레스베라트롤을 병용 처리한 경우, 디메틸설폭사이드(DMSO)를 처리한 대조군과 비교하여 염색질 응축이 약 38.1% 증가하였고, 핵의 절편화가 약 20% 증가하였다.
As shown in FIG. 2A, when cisplatin and resveratrol were used together, the chromatin condensation was increased by about 38.1% and the nucleus fragmentation was increased by about 20% as compared with the control group treated with dimethylsulfoxide (DMSO).

2-2. 2-2. FACSFACS 분석을 통한 Through analysis 세포자멸사Apoptosis 유도 확인 Induction confirmation

시스플라틴 및 레스베라트롤의 병용 처리에 의해 세포자멸사가 유도되는지 여부를 FACS 분석을 통해 확인하였다.It was confirmed by FACS analysis whether apoptosis was induced by the combination treatment of cisplatin and resveratrol.

구체적으로, 상기 실시예 2-1에 기재된 바와 같은 조건 및 방법으로 40 μM의 시스플라틴 및 30 μM의 레스베라트롤을 첨가하고, 이를 48시간 동안 배양하였다. 트립신을 처리하여 배양된 세포를 수득하여 이를 아넥신 V-FITC로 염색하여 Muse™ 세포분석기(Biocompare, 미국)를 사용하여 분석하였다.Specifically, 40 μM of cisplatin and 30 μM of resveratrol were added under the same conditions and in the same manner as described in Example 2-1, and the cells were cultured for 48 hours. The cultured cells were treated with trypsin, stained with Annexin V-FITC, and analyzed using a Muse ™ cell analyzer (Biocompare, USA).

그 결과, 도 2b에 나타난 바와 같이, 시스플라틴 및 레스베라트롤을 병용 처리한 경우, MSTO-211H, H-2452 또는 H-28 세포주에서 세포자멸사한 세포가 각각 49.66%, 24.41% 및 23.85%로 나타났다.
As a result, as shown in FIG. 2B, when cisplatin and resveratrol were used in combination, apoptotic cells in the MSTO-211H, H-2452 or H-28 cell lines were 49.66%, 24.41% and 23.85%, respectively.

실시예Example 3. 3. 바필로마이신Vathulomycin A에 의한 By A 자가포식Self-predation 활성 변화의 확인 Identification of activity changes

시스플라틴 및 레스베라트롤을 병용 처리하였을 때 세포의 자가포식에 어떠한 영향을 미치는지 확인하지 위하여, 자가포식 기능 관련 단백질인 beclin-1 및 LC3A 단백질의 발현 변화를 확인하였다.In order to confirm the effect of cisplatin and resveratrol on the cell self-feeding, we examined the expression of beclin-1 and LC3A proteins, which are related proteins of autopatch function.

먼저, 6-웰 플레이트에 5x10⁴개의 세포가 되도록 악성 중피종 세포를 분주하고, 75 nM 농도의 바필로마이신 A를 첨가하고 1.5시간 후, 40 μM의 시스플라틴 및 30 μM의 레스베라트롤을 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 1-1에 기재된 바와 같은 조건 및 방법으로 세포를 배양하였다.First, except that the dispensing of mesothelioma cells, the addition of pillow bar azithromycin A of 75 nM concentration and the addition of 1.5 hours, resveratrol of cisplatin and 30 μM of 40 μM to a 5x10 ⁴ cells in 6-well plates Cells were cultured by the conditions and methods as described in Example 1-1 above.

배양된 세포의 배지를 제거하고 70 ㎕의 RIPA 용액[1x PBS, 1% NP-40, 0.5% 소듐디옥시콜레이트, 0.1% 도데실황산나트륨(SDS) 및 10 ㎍/㎖ 페닐메탄술포릴플루오리드(PMSF)]을 첨가하여 세포를 용해시켰다. 통상의 방법으로 용해된 세포의 단백질 농도를 정량한 뒤, NuPAGE 4-12% 폴리아크릴아마이드 젤(Invitrogen, 미국)에 각 웰 당 40 ㎍이 되도록 단백질을 로딩하여 이를 분리하였다.The medium of the cultured cells was removed and the cells were washed with 70 μl of RIPA solution (1 × PBS, 1% NP-40, 0.5% sodium deoxycholate, 0.1% sodium dodecyl sulfate (SDS) and 10 μg / ml phenylmethanesulfolyl fluoride PMSF) was added to dissolve the cells. The protein concentration of the dissolved cells was determined by a conventional method, and the protein was loaded on NuPAGE 4-12% polyacrylamide gel (Invitrogen, USA) so as to be 40 μg per well.

분리된 단백질을 Immuno-Blot PVDF 멤브레인으로 이동시키고, 5% 탈지유를 포함하는 용액을 첨가하여 상온에서 전처리하였다. 상층액을 제거하고 1:500 비율로 희석한 1차 항체를 첨가하여 25℃에서 2시간 동안 반응시킨 뒤, 이를 PBS로 세척하였다. 여기에, 각각의 1차 항체에 해당하는 2차 항체를 1:5,000의 비율로 희석하여 첨가하고, 25℃에서 1시간 동안 반응시킨 뒤, ECL 키트(Santa Cruz Biotechnology, 미국)를 사용하여 단백질 밴드를 검출하였다. 이때, Beclin-1(#3495) 및 LC3A(#4599)에 대한 1차 항체는 Cell Signaling Technologies에서, HRP-결합 2차 항체는 Santa Cruz Biotechnology에서 구입하였다. 한편, 대조군인 β-actin(#A2228)에 대한 1차 항체는 시그마사에서 구입하였다.The separated proteins were transferred to an Immuno-Blot PVDF membrane, and a solution containing 5% skim milk was added and pretreated at room temperature. The supernatant was removed, and a primary antibody diluted 1: 500 was added. After reacting at 25 ° C for 2 hours, the supernatant was washed with PBS. The secondary antibody corresponding to each of the primary antibodies was diluted at a ratio of 1: 5,000, and the mixture was reacted at 25 DEG C for 1 hour. Then, an ECL kit (Santa Cruz Biotechnology, USA) . At this point, the primary antibody for Beclin-1 (# 3495) and LC3A (# 4599) was purchased from Cell Signaling Technologies and the HRP-conjugated secondary antibody was purchased from Santa Cruz Biotechnology. On the other hand, the primary antibody to the control group, β-actin (# A2228), was purchased from Sigma.

한편, 바필로마이신 A를 처리하였을 때 자가포식 기능 관련 단백질의 발현 변화와 세포자멸사 관련 단백질들의 발현 변화를 상기와 동일한 방법으로 확인하였다. 이때, 절단된 카스파제-3(#9664), PARP(#9542) 및 절단된 PARP(#9541)에 대한 1차 항체는 Cell Signaling Technologies에서, 프로카스파제-3(SC-7148)에 대한 1차 항체는 Santa Cruz Biotechnology에서 구입하였다.On the other hand, the expression of the autopoiesis related protein and the expression of the apoptosis related proteins were confirmed in the same manner when the treatment with barfilomycin A was carried out. At this time, the primary antibody against truncated caspase-3 (# 9664), PARP (# 9542) and truncated PARP (# 9541) was obtained from Cell Signaling Technologies, 1 for pro-caspase- The secondary antibody was purchased from Santa Cruz Biotechnology.

그 결과, 도 3a에 나타난 바와 같이, MSTO-211H 세포에서 beclin-1 및 LC3A 단백질의 발현에는 변화가 없었으나, H-2452 세포에서는 상기 단백질의 발현이 증가하였다. 이로부터 시스플라틴 및 레스베라트롤의 병용 처리에 의해 H-2452 세포에서 자가포식 작용이 활성화된 것을 알 수 있었다.As a result, the expression of beclin-1 and LC3A proteins was not changed in MSTO-211H cells, but the expression of the protein was increased in H-2452 cells, as shown in FIG. From this, it was found that the autophoretic action was activated in H-2452 cells by the combination treatment of cisplatin and resveratrol.

한편, 도 3b는 H-2452 세포에서 시스플라틴 및 레스베라트롤을 12, 24 또는 48시간 동안 처리하였을 때, 처리시간 의존적으로 자가포식 작용이 활성화되었음을 나타낸다.On the other hand, FIG. 3B shows that when autologous cisplatin and resveratrol were treated for 12, 24, or 48 hours in H-2452 cells, autopatching was activated in a time-dependent manner.

또한, 도 3c에 나타난 바와 같이 자가포식 작용 억제제인 바필로마이신 A를전처리한 경우, 프로카스파제-3 및 PARP 단백질의 절단을 유도하였다.
In addition, as shown in FIG. 3C, pretreatment with barfilomycin A, an autophagy inhibitor, induced the cleavage of pro-caspase-3 and PARP proteins.

실시예Example 4. 4. 바필로마이신Vathulomycin A에 의한 악성 중피종 세포의 성장억제에 대한 시너지 효과 확인 A to identify the synergistic effect on growth inhibition of mesothelioma cells

상기 실험 결과, H-2452 및 MSTO-211H 세포에 시스플라틴 및 레스베라트롤을 처리하면 자가포식 관련 단백질의 발현이 변화되었다. 이에, 상기 세포주에서 바필로마이신 A를 첨가하였을 때 세포 생존율의 변화를 확인하였다.As a result of the above experiment, treatment of cisplatin and resveratrol with H-2452 and MSTO-211H cells changed the expression of autopoiesis related protein. Thus, the addition of barfilomycin A to the cell line confirmed the change in cell viability.

75 nM 농도의 바필로마이신 A를 첨가하고 1.5시간 후, 40 μM의 시스플라틴 및 30 μM의 레스베라트롤을 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 1-1과 동일한 방법으로 MTT 분석을 하였다. 그 결과, DMSO를 처리한 대조군의 흡광도를 기준으로 각 실험군의 흡광도 비율을 계산하여 도 3d에 나타내었다.MTT analysis was carried out in the same manner as in Example 1-1, except that 40 μM of cisplatin and 30 μM of resveratrol were added after 1.5 hours of addition of 75 μM of verapilomycin. As a result, the absorbance ratio of each experimental group was calculated on the basis of the absorbance of the control group treated with DMSO and is shown in FIG.

도 3d에 나타난 바와 같이, 시스플라틴 및 레스베라트롤을 병용 처리한 경우 MSTO-211H 세포의 생존율이 약 47.9%였으나, 바필로마이신 A를 전처리한 경우 약 40.2%로 감소하였다. 한편, H-2452 세포는 시스플라틴 및 레스베라트롤을 병용 처리한 경우에는 약 71.5%의 세포 생존율을 나타내었지만, 바필로마이신 A를 전처리하였을 때 세포 생존율이 약 46.5%로 현저히 감소하였다.
As shown in FIG. 3D, when the cisplatin and resveratrol were used in combination, the survival rate of MSTO-211H cells was about 47.9%, whereas the pretreatment of barfilomycin A decreased to about 40.2%. On the other hand, H-2452 cells showed a cell viability of about 71.5% when cisplatin and resveratrol were used in combination, but cell viability was markedly reduced to 46.5% when pretreated with barfilomycin A.

실시예Example 5. 농도별로 첨가한 5. Added by concentration 바필로마이신Vathulomycin A에 의한 악성 중피종 세포의 성장억제에 대한 시너지 효과 확인 A to identify the synergistic effect on growth inhibition of mesothelioma cells

바필로마이신 A의 농도를 달리하여 전처리하였을 때, 시스플라틴 및 레스베라트롤의 병용 처리에 시너지 효과를 확인하였다.Synergistic effects of cisplatin and resveratrol in combination treatment were confirmed by pretreatment with varying concentrations of barfilomycin A.

구체적으로, 0, 75 또는 150 nM 농도의 바필로마이신 A를 첨가하고 1.5시간 후, 40 μM의 시스플라틴 및 30 μM의 레스베라트롤을 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 1-1과 동일한 방법으로 MTT 분석을 하였다. 그 결과, DMSO를 처리한 대조군의 흡광도를 기준으로 각 실험군의 흡광도 비율을 계산하여 도 3e에 나타내었다.Specifically, the same procedure as in Example 1-1 was repeated except that 40 μM of cisplatin and 30 μM of resveratrol were added after 1.5 hours of addition of bar philomin A at a concentration of 0, 75 or 150 nM. Respectively. As a result, the absorbance ratio of each experimental group was calculated based on the absorbance of the control group treated with DMSO and is shown in FIG. 3E.

도 3e에 나타난 바와 같이, 바필로마이신 A를 75 또는 150 nM로 전처리하였을 때, 시스플라틴 및 레스베라트롤의 병용 처리에 의한 세포 사멸 효과가 더욱 증가하였다.
As shown in FIG. 3E, when apoptotic treatment with bar philomin A was performed at 75 or 150 nM, the cytotoxic effect of cisplatin and resveratrol was further increased.

실시예Example 6. 6. 바필로마이신Vathulomycin A 첨가에 의한 악성 중피종 세포의 A treatment of malignant mesothelioma cells 세포자멸사Apoptosis 증가 효과 Increase effect

시스플라틴 및 레스베라트롤을 병용 처리하기 전, 바필로마이신 A를 전처리하였을 때, 악성 중피종 세포의 세포자멸사에 대한 영향을 확인하기 위하여 FACS 분석을 하였다.Before pretreatment with cisplatin and resveratrol, pretreatment with barfilomycin A, FACS analysis was performed to confirm the effect of apoptosis on malignant mesothelioma cells.

75 nM 농도의 바필로마이신 A 또는 5 mM 농도의 NAC를 첨가하고 1.5시간 후, 40 μM의 시스플라틴 및 30 μM의 레스베라트롤을 첨가한 것을 제외하고는, 상기 실시예 2-2와 동일한 방법으로 실험을 하였다.Experiments were carried out in the same manner as in Example 2-2, except that 40 μM of cisplatin and 30 μM of resveratrol were added after 1.5 hours of addition of bar philomicin A at a concentration of 75 nM or NAC at a concentration of 5 mM Respectively.

그 결과, 도 3f에 나타난 바와 같이, 시스플라틴 및 레스베라트롤을 처리하기 전에 바필로마이신 A를 전처리하는 경우 세포자멸사를 증가시켰으나, NAC를 전처리하는 경우 세포자멸사를 감소시켰다.As a result, pretreatment with barfilomycin A before treatment of cisplatin and resveratrol increased apoptosis, but decreased apoptosis when pretreated with NAC, as shown in FIG. 3f.

따라서, 바필로마이신 A는 세포 내 자가소화 작용을 억제함으로써, 레스베라트롤 및 시스플라틴에 대해 저항성을 나타내는 악성 중피종의 세포사멸을 증가시킨다.Thus, bar-pillomycin A inhibits cellular autolysis, thereby increasing the cell death of malignant mesothelioma, which is resistant to resveratrol and cisplatin.

Claims

시스플라틴 및 레스베라트롤을 유효성분으로 함유하는 악성 중피종 예방 또는 치료용 약학 조성물.
A pharmaceutical composition for preventing or treating malignant mesothelioma containing cisplatin and resveratrol as an active ingredient.

제1항에 있어서, 상기 시스플라틴이 하기 화학식 1로 표시되는 화합물인, 약학 조성물:
[화학식 1]
.
The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the cisplatin is a compound represented by the following formula (1):
[Chemical Formula 1]
.

제1항에 있어서, 상기 레스베라트롤이 하기 화학식 2로 표시되는 화합물인, 약학 조성물:
[화학식 2]

.
2. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the resveratrol is a compound represented by the following formula 2:
(2)

.

제1항에 있어서, 상기 시스플라틴 및 레스베라트롤이 1:0.01~2의 몰비로 혼합된, 조성물.
The composition of claim 1, wherein the cisplatin and resveratrol are mixed in a molar ratio of 1: 0.01 to 2.

시스플라틴, 레스베라트롤 및 바필로마이신 A를 유효성분으로 함유하는 악성 중피종 예방 또는 치료용 약학 조성물.
A pharmaceutical composition for preventing or treating malignant mesothelioma containing cisplatin, resveratrol, and barfilomycin A as an active ingredient.

제5항에 있어서, 상기 바필로마이신 A가 하기 화학식 3으로 표시되는 화합물인, 약학 조성물:
[화학식 3]

.
6. The pharmaceutical composition according to claim 5, wherein the barfilomycin A is a compound represented by the following formula 3:
(3)

.

제5항에 있어서, 상기 악성 중피종이 항암제에 내성을 갖는, 약학 조성물.
6. The pharmaceutical composition according to claim 5, wherein the malignant mesothelioma is resistant to an anticancer agent.

제5항에 있어서, 상기 시스플라틴, 레스베라트롤 및 바필로마이신 A가 1:0.01~2:0.001~0.005의 몰비로 혼합된, 약학 조성물.
6. The pharmaceutical composition according to claim 5, wherein the cisplatin, resveratrol and barfilomycin A are mixed in a molar ratio of 1: 0.01 to 2: 0.001 to 0.005.

약제학적으로 치료가능한 양의 바필로마이신 A를 유효성분으로 함유하는 제1성분; 및
약제학적으로 치료가능한 양의 시스플라틴 및 레스베라트롤을 유효성분으로 함유하는 제2성분을 포함하는, 악성 중피종 예방 또는 치료용 약학적 키트.
1. A pharmaceutical composition comprising: a first component comprising a pharmaceutically therapeutically effective amount of barfilomycin A as an active ingredient; And
A pharmaceutical kit for the prevention or treatment of malignant mesothelioma, comprising a pharmaceutically acceptable amount of cisplatin and a second component comprising resveratrol as an active ingredient.

제9항에 있어서, 상기 제1성분 및 제2성분이 순차 또는 동시로 투여되는, 약학적 키트.
10. The pharmaceutical kit according to claim 9, wherein the first component and the second component are administered sequentially or simultaneously.

제10항에 있어서, 상기 순차 투여가 제1성분의 투여 30분 내지 180분 전후로 제2성분을 투여하는 것인, 약학적 키트.11. The pharmaceutical kit according to claim 10, wherein said sequential administration administers the second component in about 30 minutes to about 180 minutes of administration of said first component.