KR101747412B1 - A pharmaceutical composition comprising guggulsterone for preventing, improving or treating acute pancreatitis - Google Patents

Abstract

본 발명은 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 조성물은 몸무게에 대한 췌장중량 비율, 급성 췌장염으로 인한 췌장 및 폐 조직의 손상, 췌장의 호중구 침윤, 혈청 아밀라아제(amylase) 및 리파아제(lipase)의 활성 및 염증성 사이토카인의 분비를 억제함으로써, 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료 효능을 제공할 수 있다. The present invention relates to a composition for preventing, ameliorating or treating acute pancreatitis containing Google Stronton as an active ingredient.
The composition according to the present invention inhibits the pancreas weight ratio to weight, damage to the pancreas and lung tissue due to acute pancreatitis, neutrophil infiltration of the pancreas, activation of serum amylase and lipase, and secretion of inflammatory cytokines , Can provide the prevention, amelioration or therapeutic efficacy of acute pancreatitis.

Description

구글스테론을 유효성분으로 함유하는 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물{A PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING GUGGULSTERONE FOR PREVENTING, IMPROVING OR TREATING ACUTE PANCREATITIS}TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to a composition for preventing, ameliorating or treating acute pancreatitis containing Google Stellon as an active ingredient.

본 발명은 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for preventing, ameliorating or treating acute pancreatitis containing Google Stronton as an active ingredient.

본 발명에 따른 조성물은 몸무게에 대한 췌장중량 비율, 급성 췌장염으로 인한 췌장 및 폐 조직의 손상, 췌장의 호중구 침윤, 혈청 아밀라아제(amylase) 및 리파아제(lipase)의 활성 및 염증성 사이토카인의 분비를 억제함으로써, 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료 효능을 제공할 수 있다.
The composition according to the present invention inhibits the pancreas weight ratio to weight, damage to the pancreas and lung tissue due to acute pancreatitis, neutrophil infiltration of the pancreas, activation of serum amylase and lipase, and secretion of inflammatory cytokines , Can provide the prevention, amelioration or therapeutic efficacy of acute pancreatitis.

급성 췌장염은 췌장의 급성 염증성 병변으로 천자통(穿刺痛) 양상의 심한 상복부 통증 및 오심, 구토, 발열 등을 동반하는 질환으로서 일반적으로 약 80 % 정도의 가벼운 임상 증상을 보여 보존적인 치료만으로 합병증 없이 완전 치유되지만, 약 20 %에서 패혈증, 쇼크, 폐 손상 등 다발성 장기부전의 중증 합병증이 동반되어 췌장염과 연관된 사망률이 약 10~15 %로 보고되고 있다.
Acute pancreatitis is acute inflammatory lesion of the pancreas. It is associated with severe abdominal pain and nausea, vomiting and fever. It usually has about 80% mild clinical symptoms. , But the mortality associated with pancreatitis is reported to be about 10 to 15%, with severe complications of multiple organ failure including sepsis, shock, and lung injury in about 20%.

발병 원인으로는 음주, 담석, 고지혈증, 약물 등의 다양한 원인이 보고되고 있으며 특히 담도질환과 알코올이 약 70~80 %를 차지하는 것으로 알려져 있다.
The causes of the disease are alcohol, gallstones, hyperlipemia, and various causes such as drugs are reported, especially biliary disease and alcohol account for about 70 ~ 80%.

하지만 이 질환의 발병기전이 명확하지 않아 기본적인 치료만이 이루어지고 있는 실정이다. 가장 일반적인 치료방법으로 진통제, 항생제의 투여나 정맥 내 수액공급 등으로 시도되고 있으며, 심할 경우에는 수술을 통해 괴사 조직을 제거하는 방법을 시행하고 있다.However, the pathogenesis of this disease is unclear, so only basic treatment is being done. The most common treatment methods are analgesics, antibiotics, intravenous fluids, and in severe cases, necrotic tissue is removed through surgery.

그러나 시도되고 있는 치료방법에 비해 정확한 효과가 입증된 치료법이 밝혀져 있지 않다.However, there is no known treatment that has proven to be more accurate than the treatment that is being tried.

현재까지 급성 췌장염에 대하여 밝혀진 기전을 살펴보면, 어떤 트리거링 이벤트가 췌장 내에 있는 소화 전구효소들(digestive proenzymes)을 활성 상태로 변환시켜 소화 효소가 생성되면, 췌장의 선상 세포 괴사(necrosis), 막 파괴, 부종(edema) 및 장 출혈(intestinal hemorrhage) 등의 췌장 손상이 발생 된다.
To date, the mechanism of acute pancreatitis has been clarified. When a triggering event converts digestive proenzymes in the pancreas into an active state and produces digestive enzymes, the necrosis of the pancreas, membrane breakdown, Pancreatic damage such as edema and intestinal hemorrhage occurs.

또한 이 과정에서 염증 반응이 수반되는데, 투과성 백혈구들은 결국 국부적인 췌장 손상은 물론 전신 징후에까지 이르게 한다. 그리고 이 같은 염증 반응 과정에서는, 인터루킨-1β(interleukin-1β, IL-1β), 인터루킨-6(IL-6) 및 TNF-α(Tumor necrosis factor-α)와 같은 염증반응을 촉진하는 사이토카인(cytokines)이 주요한 역할을 하게 된다.
It also involves an inflammatory process, which causes permeable leukocytes to eventually lead to local pancreatic damage as well as systemic signs. In such an inflammatory process, a cytokine that promotes inflammatory responses such as interleukin-1β (IL-1β), interleukin-6 (IL-6) and TNF-α (Tumor necrosis factor- cytokines play a major role.

한편 본 발명자들은 구글스테론을 이용하여 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물을 개발하고자 하는바, 구글스테론에 대해 살펴보면 다음과 같다.
Meanwhile, the present inventors intend to develop a composition for preventing, ameliorating or treating acute pancreatitis using Google Stronton, and the Google Strontium will be described as follows.

구글스테론(guggulsterone, GS)은 몰약(Commiphora mukul, Commiphora molmol, Myrrh)에 포함된 식물 유래의 화학 성분이다. 구글스테론은 피토스테롤(Phytosterol)이라는 식물성 스테로이드 중 하나로서, 항산화, 항염증 및 항류마티스 관절염 작용을 하는 것으로 알려져 있다.
The guggulsterone (GS) is a plant-derived chemical component contained in myrrh (Commiphora mukul, Commiphora molmol, Myrrh). Google Steron is one of the botanical steroids known as Phytosterol and is known to have antioxidant, anti-inflammatory and anti-rheumatoid arthritis effects.

최근 구글스테론에 관한 선행 연구들을 살펴보면, 구글스테론은 1972년 두 가지 형태의 분자구조 E-GS과 Z-GS으로 몰약(Commiphora mukul)에서 분리되었고, (Patil VD,1972) 지질저하 효과에 탁월한 구조적 특징이 있다고 알려졌다(Urizar NL et al. 2002; Wu J et al. 2002). Recently, Google Stronton was separated from the myrrh (Commiphora mukul) by two types of molecular structure E-GS and Z-GS in 1972 (Patil VD, 1972) (Urizar NL et al. 2002; Wu J et al. 2002).

구글스테론은 피토스테롤이라는 식물성 스테로이드로서 항염증 작용을 하며, 동맥의 혈전증을 억제한다고 알려져 있다(Gebhard C et al. 2009). 또한 lipopolysaccharide(LPS)로 유도한 대식세포 염증을 억제하였고, 심장 손상 억제, 암세포 억제 효과 등을 나타내었다(Kaul S and Kapoor N, 1989; Shishodia S and Aggarwal BB, 2004; Koo JH, 2012).
Google Steron is a phytosterol steroid called phytosterol that has anti-inflammatory properties and is known to inhibit arterial thrombosis (Gebhard C et al. 2009). In addition, it inhibited macrophage inflammation induced by lipopolysaccharide (LPS), inhibited cardiac damage, and inhibited cancer cells (Kaul S and Kapoor N, 1989; Shishodia S and Aggarwal BB 2004; Koo JH, 2012).

그러나 구글스테론의 급성 췌장염에 대한 효과를 검증할 수 있는 연구 및 보고가 되어 있지 않았다.
However, no studies and reports have been published to verify the effect of Google Stronton on acute pancreatitis.

이에 따라 본 발명자들은 세루레인(cerulein)으로 유도된 급성 췌장염에서의 염증, 부종, 조직 손상, 소화 효소 과분비로 인한 자가소화 등을 유발하는 과정에 있어 구글스테론(guggulsterone)이 미치는 효과를 규명하고, 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물을 안출하게 되었다.
Accordingly, the present inventors have investigated the effect of guggulsterone in the process of inducing inflammation, edema, tissue damage and auto-digestion due to digestive enzymes in cerulein-induced acute pancreatitis , And a composition for preventing, ameliorating or treating acute pancreatitis containing Google Stronton as an active ingredient.

한편, 구글스테론과 관련된 선행기술에 대해 살펴보면, 대한민국 등록특허공보 제10-0825501호에 무쿨(C. mukul)로부터 추출된 구굴스테론(guggulsterone)은 LPS 혹은 lL-1β에 의해 자극된 장 상피세포의 lkB 키나아제를 차단하여 NF-kB 활성화를 억제하여 염증 반응을 감소시킴으로써 장염 발생을 억제한다는 내용이 기재되어 있다.
On the other hand, in regard to the prior art related to Google Stronton, Korean Patent Registration No. 10-0825501 discloses guggulsterone extracted from C. mukul , which is an LPS or lL-1β-stimulated intestinal epithelium It has been disclosed that inhibition of NF-kB activation by blocking lkB kinase in cells inhibits enteritis by decreasing inflammatory response.

위 선행기술은 구글스테론이 염증성 사이토카인의 활성을 억제하여, 항염 효능을 갖는 것을 기재하고 있으나, 세루레인으로 유도한 급성 췌장염 동물모델을 이용하여 실험을 수행하지 않은바, 급성 췌장염에 대한 효능을 알 수 없는 문제점이 있다.
Although the above prior art describes that Google's sterone inhibits the activity of inflammatory cytokines and has anti-inflammatory activity, it has not been tested using an animal model of acute pancreatitis induced by cerulein, and the efficacy against acute pancreatitis There is a problem that it is not known.

본 발명은 위와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물을 제공하고자 한다.SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been made to solve the above-mentioned problems, and it is an object of the present invention to provide a composition for preventing, ameliorating or treating acute pancreatitis containing Google Stronton as an active ingredient.

또한 본 발명은 몸무게에 대한 췌장중량 비율, 급성 췌장염으로 인한 췌장 및 폐 조직의 손상, 췌장의 호중구 침윤, 혈청 아밀라아제(amylase) 및 리파아제(lipase)의 활성 및 염증성 사이토카인의 분비를 억제하는 효능을 갖는 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물을 제공하고자 한다.
The present invention also relates to a method of inhibiting the secretion of inflammatory cytokines and the activity of amylase and lipase in the pancreas, the infiltration of neutrophils in the pancreas, the secretion of inflammatory cytokines and the damage of pancreas and lung tissue due to acute pancreatitis, Or a composition for preventing, ameliorating or treating acute pancreatitis containing the active ingredient of Google Stronton.

본 발명은 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료를 위한 조성물을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.The present invention aims at solving the technical problem by providing a composition for preventing, ameliorating or treating acute pancreatitis containing Google Stronton as an active ingredient.

본 발명은 몸무게에 대한 췌장중량 비율, 급성 췌장염으로 인한 췌장 및 폐 조직의 손상, 췌장의 호중구 침윤, 혈청 아밀라아제(amylase) 및 리파아제(lipase)의 활성 및 염증성 사이토카인의 분비를 억제하여 급성 췌장염의 예방, 개선 또는 치료하는 조성물을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.The present invention relates to a method for inhibiting acute pancreatitis by inhibiting pancreatic weight ratio to weight, damage of pancreas and lung tissue due to acute pancreatitis, neutrophil infiltration of the pancreas, activation of serum amylase and lipase, and secretion of inflammatory cytokine Preventing, ameliorating, or treating a disease or condition.

본 발명은 약학적으로 허용가능한 첨가제 또는 식품학적으로 허용가능한 첨가제를 추가한 조성물을 제공함으로써 기술적 과제를 해결하고자 한다.
The present invention aims at solving the technical problem by providing a composition which is added with a pharmaceutically acceptable additive or a pharmaceutically acceptable additive.

약학적 조성물로 이용되기 위하여는 약제학적 분야에서의 공지의 방법에 의해 제조될 수 있으며, 그 자체 또는 약학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 등과 혼합하여 분말, 과립, 정제, 캡슐제 또는 주사제 등의 제형으로 제조되어 사용될 수 있다. 또한 이들은 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다.For use as a pharmaceutical composition, it may be prepared by a known method in the pharmaceutical field, and may be mixed with itself or a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, diluent or the like to prepare a powder, granule, tablet, And the like. They may also be administered orally or parenterally.

약학적 조성물의 유효 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 물활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질환의 중증 정도 등에 따라 적절히 선택될 수 있다.The effective dose of the pharmaceutical composition may be appropriately selected depending on the degree of absorption of the active ingredient in the body, the rate of water activation and excretion, the age, sex and condition of the patient, the severity of the disease to be treated,

약학적 조성물을 이용하여 환, 과립, 음료, 타블렛, 캅셀 등의 제형을 제조할 수 있으며, 이 경우에 각 제형을 제조하기 위하여 첨가제가 추가될 수 있음은 물론이다.
Pharmaceutical compositions may be used to prepare formulations such as pills, granules, beverages, tablets, capsules, etc., in which case additives may be added to make each formulation.

식품 조성물로 이용되는 경우에는, 식품학적으로 허용되는 첨가제를 이용하여 건강기능식품으로 제조하여 제공한다.When used as a food composition, it is prepared and provided as a health functional food using pharmaceutically acceptable additives.

건강기능식품의 경우, 기능성 음료, 건강보조식품, 차, 과자류 등과 같이 다양한 형태로 제공될 수 있다. In the case of health functional foods, it can be provided in various forms such as functional beverages, health supplements, tea, confectionery, and the like.

의약외품 조성물로 이용하는 경우에는, 각 의약외품의 용도에 맞게 본 발명에 따른 조성물을 적용하여 제공할 수 있다.
When the composition is used as a quasi-drug composition, the composition according to the present invention can be applied according to the use of each quasi-drug.

본 발명에 따른 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 조성물은, 몸무게에 대한 췌장중량 비율을 억제하는 효과를 보유하고 있다. The composition containing Google Stronton according to the present invention as an active ingredient has an effect of suppressing the weight ratio of pancreas to body weight.

본 발명에 따른 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 조성물은, 급성 췌장염으로 인한 췌장 및 폐 조직의 손상을 억제하는 효과를 보유하고 있다. The composition containing Google Stronton according to the present invention as an effective ingredient has an effect of inhibiting damage of pancreas and lung tissue due to acute pancreatitis.

본 발명에 따른 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 조성물은, 췌장의 호중구 침윤을 억제하는 효과를 보유하고 있다. The composition containing Google Stronton according to the present invention as an active ingredient has an effect of inhibiting neutrophil infiltration of the pancreas.

본 발명에 따른 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 조성물은, 혈청 아밀라아제(amylase) 및 리파아제(lipase)의 활성을 억제하는 효과를 보유하고 있다. The composition containing Google Stronton according to the present invention as an active ingredient has an effect of inhibiting the activity of serum amylase and lipase.

본 발명에 따른 구글스테론을 유효성분으로 함유하는 조성물은, 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-1β 및 IL-6)의 분비를 억제하는 효과를 보유하고 있다.
The composition containing Google Stronton according to the present invention as an active ingredient has an effect of suppressing the secretion of inflammatory cytokines (TNF-a, IL-1 beta and IL-6).

도 1은 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 췌장 중량/체중 비율을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 췌장 조직을 관찰한 결과를 나타낸 사진이다(×400).
도 3은 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 폐 조직을 관찰한 결과를 나타낸 사진이다(×400).
도 4는 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 췌장조직(A) 및 폐 조직(B)에서의 MPO 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 췌장에서의 아밀라아제(A) 및 리파아제(B)의 활성도를 나타낸 그래프이다.
도 6은 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 췌장 내의 TNF-α, IL-1β, IL-6의 발현(B) 및 이들의 mRNA 발현(A) 측정 결과를 나타낸 그래프이다.FIG. 1 is a graph showing the results of measuring pancreatic weight / body weight ratio of an experimental animal treated with Google Stronton and causing acute pancreatitis.
FIG. 2 is a photograph (× 400) showing the result of observing pancreatic tissues of experimental animals treated with Google Stronton and caused acute pancreatitis.
FIG. 3 is a photograph (× 400) showing a result of observing the lung tissue of an experimental animal that treated with Google Stronton and caused acute pancreatitis.
4 is a graph showing MPO analysis results in pancreatic tissues (A) and lung tissues (B) of experimental animals treated with Google Stronton and caused acute pancreatitis.
FIG. 5 is a graph showing the activity of amylase (A) and lipase (B) in the pancreas of experimental animals treated with *** sterone and induced acute pancreatitis.
FIG. 6 is a graph showing the expression (B) and the mRNA expression (A) of TNF-α, IL-1β and IL-6 in the pancreas of experimental animals treated with Google Strontium and caused acute pancreatitis.

본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 안 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.
The terms and words used in the present specification and claims should not be construed as limited to ordinary or dictionary terms and the inventor may properly define the concept of the term in order to best describe its invention It should be construed as meaning and concept consistent with the technical idea of the present invention.

따라서 본 명세서에 기재된 실험예와 참고예는 본 발명의 가장 바람직한 일실시예에 불과한 뿐이고 본 발명의 기술적 사상을 모두 대변하는 것은 아니므로, 본 출원시점에 있어서 이들을 대체할 수 있는 다양한 균등물과 변형예들이 있을 수 있음을 이해하여야 한다.
Therefore, the experimental examples and the reference examples described in the present specification are merely the most preferred embodiments of the present invention and are not intended to represent all of the technical ideas of the present invention. Therefore, various equivalents and variations Examples should be understood.

실험예Experimental Example 1. 췌장 중량/체중 비율 측정 1. Measure pancreas weight / weight ratio

1-1. 실험 준비1-1. Preparation for experiment

여기에서 이후 실험예의 실험 준비가 아래와 동일한 방법으로 수행되었음을 미리 밝혀둔다.
Hereinafter, it will be clarified that the preparation of the experiment in the following experimental example was carried out in the same manner as described below.

1) 실험 동물1) Experimental animals

본 실험에 사용한 C57BL/6 마우스(체중 15~20 g, 암컷)는 오리엔트 바이오(성남, 경기도, 대한민국)에서 구입하였다.C57BL / 6 mice (weighing 15-20 g, female) used in this experiment were purchased from Orient Bio (Sungnam, Kyonggi-do, Korea).

실험 동물은 원광대학교 한의과대학 동물 사육실에서 일정한 조건(온도 21±2℃, 습도 50~60%, 명암 12시간 주기)하에서 일반 고형사료(오리엔탈 바이오, 성남)와 물을 충분히 공급하면서 환경 적응을 위해 일주일 동안 적응시킨 후 실험하였다.
Experimental animals were fed with general solid feed (Oriental Bio, Seongnam) and water under environmental condition (temperature 21 ± 2 ℃, humidity 50 ~ 60% After one week of adaptation, the experiment was performed.

1-2. 실험 과정1-2. Experimental course

1) 급성 췌장염 유발1) Acute pancreatitis induction

① 췌장염을 유발시키기 위해 마우스를 16시간 동안 금식시킨 후 구글스테론 10, 25, 50 mg/kg을 복강 주사하였다. 대조군은 구글스테론 대신 DMSO를 복강 주사하였다.In order to induce pancreatitis, the mice were fasted for 16 hours and then intraperitoneally injected with gooser sterone 10, 25, 50 mg / kg. The control group was intraperitoneally injected with DMSO instead of *** sterone.

② 1시간 후 세루레인 50 ug/kg을 1시간 단위로 6번 복강 주사하였다. 정상군은 생리식염수만 복강 주사하였다.② After 1 hour, Serulain 50 ug / kg was injected 6 times per hour. Normal group received intraperitoneal injection of saline only.

③ 세루레인을 마지막으로 주사한 지 6시간 후에 마우스의 복강을 개복하여 혈액을 채취하고 췌장 및 폐를 적출하였다.
③ After 6 hours of the last injection of cerulein, the abdominal cavity of the mouse was opened, blood was collected, and the pancreas and lung were removed.

여기에서, 세루레인으로 유도한 급성 췌장염 모델은 인간의 급성 췌장염에서 볼 수 있는 병리 조직학적 소견에 대한 재현성이 뛰어나고 경제적이어서, 췌장염의 세포 병리 현상 및 소화효소의 자가 활성화 과정을 연구하는데 적합한 모델로 알려져 있다. Here, the serine-induced acute pancreatitis model is highly reproducible and economical for the histopathological findings of acute pancreatitis in humans, and is a suitable model for studying the cytopathology of pancreatitis and the self-activation process of digestive enzymes It is known.

또한 세루레인을 1시간 간격으로 6번 투여하는 이유는, 세루레인이 콜레시스토키닌 아날로그(cholecystokinin analogue)로서 췌장의 수용체(receptor)를 통해 염증을 발생시키는 기전에 근거하고, 또한 세루레인의 반감기가 굉장히 짧기 때문이다.
The reason for administering serurein 6 times per hour is that the serurein is a cholecystokinin analogue, which is based on the mechanism of inflammation through the pancreas receptor, and also that the half-life of serurein is very short Because.

또한 복강 내 주사를 통하여 약물을 주입하는 이유는, 경구 투여의 경우 위 및 소장에서 흡수된 약물이 문맥을 통하여 간으로 가서 일단 대사 (First-Pass Metabolism)되므로 그만큼 약물작용이 약하게 되고 흡수가 일정치 않기 때문이다.The reason for injecting the drug through the intraperitoneal injection is that the drug absorbed from the stomach and small intestine goes to the liver through the portal in the case of oral administration and the drug is firstly metabolized (First-Pass Metabolism) It is not.

즉 간에서의 대사로 인한 생체이용률을 감안할 때, 경구투여는 보다 많은 용량을 사용하여야 하며, 작용 출현 시간이 늦어진다.
Considering the bioavailability due to metabolism in the liver, oral dosing should use more dose and delay the onset of action.

반면 복강 내 주사는 복막의 흡수 면적이 넓어 약물을 주사하면 흡수가 빠르고 작용이 빨리 나타난다. Intraperitoneal injection, on the other hand, has a wide absorbed area of the peritoneal membrane, so that when the drug is injected, the absorption is rapid and the action appears quickly.

또한 주사한 양이 모두 흡수되기 때문에 경구 투여 때보다 약리 작용의 정확성이 있고 주사된 약물은 내피 세포의 fenestration(pore)을 통해서 자유롭게 혈관 속으로 들어갈 수 있다. 즉 복강 내 주사는 반응 발현의 신속도와 용량의 정확성을 확보하기 위하여 선택되었다.
In addition, since the injected amount is absorbed, the pharmacokinetics are more accurate than that of oral administration, and the injected drug can freely enter the blood vessel through the fenestration (pore) of endothelial cells. In other words, intraperitoneal injection was chosen to ensure rapidity and dose accuracy of response expression.

2) 췌장 중량/체중 비율 측정2) Measurement of pancreas weight / weight ratio

세루레인을 최초로 투여한 지 11시간 후에 췌장을 적출한 뒤, P.W/B.W(Pancreatic weight/Body weight, 췌장 중량/체중) 계산식을 통하여 체중에 대한 췌장의 중량 비율을 측정하였다.
The pancreas was weighed 11 hours after the first administration of cerulein and then the weight ratio of pancreas to body weight was determined by calculating PW / BW (pancreatic weight / body weight).

3) 통계 분석3) Statistical analysis

실험 결과는 3회 이상 실시하여 그 평균값을 기초로 Mean ± SE로 나타내었다. Experimental results were expressed more than 3 times and expressed as Mean ± SE based on the mean value.

실험결과에 대한 통계처리는 SPSS 분석프로그램의 one way ANOVA에 준하였고, Duncan method로 사후검증을 하였다. p- value가 0.05 미만일 경우 유의한 것으로 판정하였다.Statistical analysis of the experimental results was based on the one - way ANOVA of the SPSS analysis program and post - test with the Duncan method. A p- value of less than 0.05 was considered significant.

이후 실험예에서 실시한 통계 분석은 위와 같은 방법으로 수행되었음을 밝혀둔다.
It should be noted that the statistical analysis carried out in the following experimental examples was carried out in the same manner as above.

1-3. 췌장 중량/체중 비율 측정 결과1-3. Pancreas weight / weight ratio measurement result

급성 췌장염 발병시 췌장은 염증으로 인해 부종이 발생하여 췌장의 중량이 증가하는 한편, 체중은 감소하게 된다. 따라서 췌장 중량과 체중의 비율은 췌장염 발병 검진시 중요한 판단 지표가 된다. In the case of acute pancreatitis, the pancreas swells due to inflammation, resulting in an increase in the weight of the pancreas and a decrease in body weight. Thus, the ratio of pancreatic weight to body weight is an important indicator for the diagnosis of pancreatitis.

본 실험예에서는 구글스테론을 1시간 전 처리한 후, 세루레인을 처리하여 급성 췌장염을 유도한 뒤 췌장 중량에 대한 체중 비율 변화를 측정하였다.
In this experimental example, after treatment of *** sterone for 1 hour, serulin was treated to induce acute pancreatitis and the change in body weight ratio to pancreatic weight was measured.

도 1은 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 췌장 중량/체중 비율을 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.
FIG. 1 is a graph showing the results of measuring pancreatic weight / body weight ratio of an experimental animal treated with Google Stronton and causing acute pancreatitis.

정상군에 비하여 세루레인을 처리한 대조군 및 실험군(구글스테론 10, 25, 50 mg/kg 처리군)에서 P.W/B.W 비율의 변화가 증가한 것을 확인하였다. The change in P.W / B.W ratio was found to be increased in the control group and in the experimental group (gooser sterone 10, 25, and 50 mg / kg treated group) compared to the normal group.

또한 구글스테론 처리군은 대조군에 비하여, P.W/B.W의 비율이 감소함을 확인할 수 있으며, 이를 통해 구글스테론이 급성 췌장염으로 인한 췌장의 부종을 감소시키는 것을 알 수 있다.
Also, it can be seen that the ratio of PW / BW is decreased in the Google sterone treated group compared with the control group, and it is confirmed that Google sterone reduces pancreatic edema due to acute pancreatitis.

실험예Experimental Example 2. 췌장 조직의 손상 및 염증 관찰 2. Pancreatic tissue damage and inflammation

2-1. 실험 과정2-1. Experimental course

실험 동물에서 급성 췌장염 유발은 실험예 1과 동일한 과정으로 실행하였다.
The acute pancreatitis induction in the experimental animals was carried out in the same manner as in Experimental Example 1.

1) 조직학적 관찰 및 분석1) Histological observation and analysis

① 췌장 조직을 적출하고 10% 포르말린 용액을 사용하여 고정시켰다.① Pancreatic tissue was excised and fixed with 10% formalin solution.

② 일반적인 조직 표본 제작 방법으로 헤마톡시린(Hematoxylin)과 에오신(Eosin) 염색을 시행하였다.Hematoxylin and eosin were stained with a typical tissue specimen preparation method.

③ 카메라 부착 광학현미경(올림푸스 BX 51, 일본)으로 관찰한 후 사진을 촬영하였다.
③ A photograph was taken after observing with an optical microscope with a camera (Olympus BX 51, Japan).

2-2. 췌장 조직의 손상 및 염증 관찰 결과2-2. Results of pancreatic tissue damage and inflammation

급성 췌장염 발병시 췌장에는 부종 및 염증이 발생하므로 췌장의 부종 및 염증의 발생 정도가 급성 췌장염을 진단하는 지표가 될 수 있다. The incidence of edema and inflammation of the pancreas may be an indicator for the diagnosis of acute pancreatitis, because edema and inflammation occur in the pancreas at the onset of acute pancreatitis.

조직학적 분석 시, 조직 사이의 간격 증가의 여부를 척도로 하여 부종의 정도를 파악할 수 있고, 조직 사이의 염증성 세포들의 침윤으로 염증의 정도를 파악할 수 있다.
In histologic analysis, the degree of edema can be grasped by measuring the interval between tissues, and the degree of inflammation can be determined by infiltration of inflammatory cells between tissues.

도 2는 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 췌장 조직을 관찰한 결과를 나타낸 사진이다(×400).
FIG. 2 is a photograph (× 400) showing the result of observing pancreatic tissues of experimental animals treated with Google Stronton and caused acute pancreatitis.

분석 결과, 정상군에서는 췌장의 전형적인 조직구조를 나타냈다. 그러나 세루레인을 투여한 군에서는 염증성 세포들의 침윤과 부종으로 인한 조직 사이의 간격이 증가함이 관찰되었다.
As a result of analysis, typical tissue structure of pancreas was shown in normal group. However, in the group treated with cerulain, the space between the tissues due to infiltration of inflammatory cells and swelling was observed to increase.

구글스테론 처리군에서는 대조군에 비해 부종 및 염증성 세포들이 모이는 정도가 억제되었음을 발견할 수 있으며, 농도의존적으로 억제 효과가 커지는 것을 확인할 수 있다.
In the case of the Google sterone treatment group, it is found that the degree of swelling and inflammatory cell aggregation is suppressed compared to the control group, and the inhibitory effect is increased in a concentration-dependent manner.

실험예Experimental Example 3. 폐 조직의 손상 및 염증 관찰 3. Observation of lung tissue damage and inflammation

3-1. 실험 과정3-1. Experimental course

실험 동물에서 급성 췌장염 유발은 실험예 1과 동일한 과정으로 실행하였다.
The acute pancreatitis induction in the experimental animals was carried out in the same manner as in Experimental Example 1.

1) 조직학적 관찰 및 분석1) Histological observation and analysis

① 폐 조직을 적출하고 10% 포르말린 용액을 사용하여 고정시켰다.① lung tissue was removed and fixed with 10% formalin solution.

② 일반적인 조직 표본 제작 방법으로 헤마톡시린(Hematoxylin)과 에오신(Eosin) 염색을 시행하였다.Hematoxylin and eosin were stained with a typical tissue specimen preparation method.

③ 카메라 부착 광학현미경(올림푸스 BX 51, 일본)으로 관찰한 후 사진을 촬영하였다.
③ A photograph was taken after observing with an optical microscope with a camera (Olympus BX 51, Japan).

3-2. 폐 조직의 손상 및 염증 관찰 결과3-2. Observation of damage and inflammation of lung tissue

췌장염이 진행되면 폐와 같은 다른 장기를 공격하여 호흡 부전과 같은 합병증을 야기한다. 따라서 폐 조직의 부종 및 염증의 발생 정도도 급성 췌장염을 진단하는 지표가 될 수 있다.
When pancreatitis progresses, it attacks other organs such as the lungs, causing complications such as respiratory failure. Therefore, the degree of edema and inflammation of the lung tissue may be an indicator for the diagnosis of acute pancreatitis.

도 3은 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 폐 조직을 관찰한 결과를 나타낸 사진이다(×400).
FIG. 3 is a photograph (× 400) showing a result of observing the lung tissue of an experimental animal that treated with Google Stronton and caused acute pancreatitis.

분석 결과, 정상군에서는 폐의 전형적인 조직 구조를 나타냈다. 그러나 세루레인을 투여하여 급성 췌장염을 유도한 군에서는 염증성 세포들의 침윤과 부종이 증가함을 관찰하였다.
In the normal group, the typical tissue structure of the lung was shown. However, it was observed that infiltration and swelling of inflammatory cells were increased in serine - induced acute pancreatitis induced group.

구글스테론을 전 처리한 군에서는 대조군에 비해 부종 및 염증이 감소한 것을 확인하였으며, 구글스테론이 농도의존적으로 급성 췌장염으로 인한 폐 조직의 손상을 억제하는 효과를 보유함을 확인하였다.
It was confirmed that edema and inflammation were decreased in the pretreatment group of Google Stronton, and that Google Stronton had the effect of inhibiting lung tissue damage due to acute pancreatitis in a concentration dependent manner.

실험예Experimental Example 4. 췌장 조직 및 폐 조직의 호중구 침윤 정도 측정 4. Measurement of neutrophil infiltration of pancreatic tissue and lung tissue

4-1. 실험 과정4-1. Experimental course

실험 동물에서 급성 췌장염 유발은 실험예 1과 동일한 과정으로 실행하였다.
The acute pancreatitis induction in the experimental animals was carried out in the same manner as in Experimental Example 1.

1) MPO 분석1) MPO analysis

췌장 조직 및 폐 조직의 MPO(myeloperoxidase, 미엘로퍼옥시다아제) 활성도를 측정하여 호중구 침윤 (neutrophil infiltration)을 검사하였다.
MPO (myeloperoxidase) activity of pancreatic tissue and lung tissue was measured to examine neutrophil infiltration.

① pH 6.0의 50 mM 포스페이트 버퍼(phosphate buffer)와 0.5% HTAB(hexadecyl trimethyl ammonium bromide, 헥사데실 트리메틸 암모늄 브로마이드)용액에 조직을 담가 0℃에서 45초간 분쇄한 후 10,000 rpm, 4℃에서 20분간 원심분리 하였다. ① Tissue was immersed in 50 mM phosphate buffer (pH 6.0) and 0.5% HTAB (hexadecyl trimethyl ammonium bromide) solution at 0 ° C for 45 seconds and centrifuged at 10,000 rpm and 4 ° C for 20 minutes. Respectively.

② 96 웰 플레이트(well plate)에 원심분리한 조직의 상청액, 0.5% HTAB, 0.68 mg/ml O-디아니시딘(O-dianisidine), 0.003% 하이드로즌 퍼옥사이드(hydrogen peroxide)를 각 50 ml씩 넣은 후 리더(reader)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다.
(2) Centrifuge the tissue supernatant, 0.5% HTAB, 0.68 mg / ml O-dianisidine and 0.003% hydrogen peroxide in a 96-well plate in 50 ml increments The absorbance was measured at 450 nm using a reader.

4-2. 췌장조직 및 폐 조직의 호중구 침윤 정도 측정 결과4-2. Results of neutrophil infiltration measurement of pancreatic tissue and lung tissue

호중구는 순환하는 백혈구의 50~70%를 차지하며 염증시에 제일 먼저 도착을 하는 혈구이다. 이러한 호중구의 침윤은 염증의 지표로서 사용할 수 있으며 조직의 MPO 활성을 측정하여 검사할 수 있다.
Neutrophils account for 50% to 70% of circulating white blood cells and are the first blood cells to arrive at the time of inflammation. This infiltration of neutrophils can be used as an indicator of inflammation and can be measured by measuring the tissue MPO activity.

도 4는 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 췌장조직(A) 및 폐 조직(B)에서 MPO 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
4 is a graph showing MPO analysis results in pancreatic tissues (A) and lung tissues (B) of experimental animals treated with *** sterone and induced acute pancreatitis.

췌장 및 폐 조직에서 정상군에 비하여 세루레인을 처리한 대조군 및 실험군에서 호중구 침윤이 통계적으로 유의성있게 증가하였다.In the pancreas and lung tissue, neutrophil infiltration was significantly increased in the control and experimental groups treated with cerulain compared to the normal group.

반면 췌장 및 폐 조직 모두에서 대조군에 비하여 구글스테론을 처리한 실험군에서 호중구 침윤이 농도의존적으로 감소하는 것을 확인하였다.
On the other hand, neutrophil infiltration was decreased in the pancreatic and pulmonary tissues in a dose-dependent manner in the experimental group treated with goosene steril compared with the control group.

즉 구글스테론은 췌장 및 폐 조직에서 급성 췌장염으로 인한 호중구 침윤을 억제하는 효능을 보유함을 알 수 있다.
In other words, Google Stronton has the ability to inhibit neutrophil infiltration due to acute pancreatitis in pancreatic and lung tissues.

실험예Experimental Example 5. 혈청 내  5. Serum 아밀라아제Amylase 및 리파아제 활성 측정  And lipase activity measurement

5-1. 실험 과정5-1. Experimental course

실험 동물에서 급성 췌장염 유발은 실험예 1과 동일한 과정으로 실행하였다.
The acute pancreatitis induction in the experimental animals was carried out in the same manner as in Experimental Example 1.

1) 혈청 내 아밀라아제 및 리파아제의 활성 측정1) Measurement of activity of amylase and lipase in serum

① 세루레인을 마지막으로 주사한 지 6시간 후에 마우스를 마취시켰다. The mouse was anesthetized 6 hours after the last injection of Serraine.

② 시린지(Syringe)를 이용하여 마우스의 심장에서 혈액을 채취했으며 혈액은 3,000 rpm, 4 ℃에서 20분간 원심 분리하여 혈청만 분리하였다.② Blood was collected from the heart of mice using a syringe. Blood was centrifuged at 3,000 rpm at 4 ° C for 20 minutes to separate the serum.

③ 아밀라아제(amylase) 및 리파아제(lipase)를 분리된 혈청에서 정량하였다. 혈청 아밀라아제의 측정은 ADIVA 1650 시스템(BAYER, USA)으로 하였고, 혈청 리파아제의 측정은 코바스-미라 시스템(Roshs, USA)으로 하였다.
Amylase and lipase were quantified in separate serum. Serum amylase was measured by ADIVA 1650 system (BAYER, USA), and serum lipase was measured by Kovas-Mira system (Roshs, USA).

5-2. 혈청 내 5-2. Serum 아밀라아제Amylase 및 리파아제 활성 측정 결과 And lipase activity measurement results

급성 췌장염이 발생하면 검사실 소견상으로 혈청 아밀라아제(amylase) 또는 리파아제(lipase)가 정상치의 3개 이상 증가한다고 보고되어 있다. 이는 임상에서의 실제적인 초기 진단에 있어 아주 중요한 지표로서 두 가지 검사를 동시에 시행할 경우에 민감도와 특이도를 더욱 높일 수 있으므로 본 발명에서는 두 가지를 병행 측정하였다.
When acute pancreatitis occurs, serum amylase or lipase has been reported to increase by more than 3 normal in laboratory findings. This is a very important indicator for the practical initial diagnosis in clinical practice. In case of simultaneous two tests, sensitivity and specificity can be increased.

도 5는 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 췌장에서의 아밀라아제(A) 및 리파아제(B)의 활성도를 나타낸 그래프이다.
FIG. 5 is a graph showing the activity of amylase (A) and lipase (B) in the pancreas of experimental animals treated with *** sterone and induced acute pancreatitis.

분석 결과, 정상군에 비해 세루레인을 투여한 군에서 아밀라아제 및 리파아제의 활성이 유의성 있게 증가하였다.As a result of the analysis, the activity of amylase and lipase was significantly increased in the serulin-treated group compared to the normal group.

반면, 구글스테론을 전 처리한 군에서는 아밀라아제 및 리파아제의 활성이 억제되었으며, 특히 리파아제의 경우 농도의존적으로 억제 효능을 나타내었다.
On the other hand, the activity of amylase and lipase was inhibited in the group treated with Google Strontone, and the inhibitory effect of lipase was especially inhibited in a dose dependent manner.

즉 급성 췌장염의 진단에 지표로 사용되는 혈청 아밀라아제와 리파아제의 활성이 감소되는 것을 통해, 구글스테론의 급성 췌장염에 대한 효능을 알 수 있다.
That is, the activity of serum amylase and lipase, which are used as indicators for the diagnosis of acute pancreatitis, is reduced and the effect of Google Stronton on acute pancreatitis can be shown.

실험예Experimental Example 6. 췌장 내 염증성 사이토카인의 발현 측정 6. Expression of Inflammatory Cytokines in the Pancreas

6-1. 실험 과정6-1. Experimental course

실험 동물에서 급성 췌장염 유발은 실험예 1과 동일한 과정으로 실행하였다.
The acute pancreatitis induction in the experimental animals was carried out in the same manner as in Experimental Example 1.

1) 췌장 내 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-1β, IL-6)의 mRNA 발현 측정1) Measurement of mRNA expression of inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6) in the pancreas

① 췌장 조직에 TriZol 1 ml를 주입하여 분쇄하고, 클로로포름(chloroform) 200 ul를 처리하고 볼텍싱(vortexing)하였다.(1) Triple 1 ml of TriZol was injected into the pancreatic tissue, followed by pulverization, and 200 μl of chloroform was treated and vortexed.

② 볼텍싱한 췌장 조직을 12,000 rpm, 4 ℃에서 15분 동안 원심분리한 후 상층액을 분리하여, -20 ℃에 보관된 이소프로판올(isopropanol) 500 ul을 처리하고 상온에서 30분 동안 정치하였다. ② The vascularized pancreatic tissue was centrifuged at 12,000 rpm at 4 ° C for 15 minutes. The supernatant was separated, treated with 500 μl of isopropanol stored at -20 ° C, and allowed to stand at room temperature for 30 minutes.

③ 정치한 췌장 조직을 12,000 rpm, 4 ℃에서 10분 동안 원심 분리하여 용액을 버리고 80% 에탄올 1 ml을 넣은 후 7,500 rpm 4 ℃에서, 5분 동안 원심 분리하였다. ③ The pancreatic tissue was centrifuged at 12,000 rpm for 10 minutes at 4 ° C. The solution was discarded, and 1 ml of 80% ethanol was added. The mixture was centrifuged at 7,500 rpm at 4 ° C for 5 minutes.

④ 에탄올을 버리고, DEPC 트리티드 워터에 녹인 후 플루오로미터(fluorometer)를 이용하여 정량하였다. 동량의 mRNA를 cDNA로 합성하였다. ④ Ethanol was discarded and dissolved in DEPC tridied water, and then quantified using a fluorometer. The same amount of mRNA was synthesized with cDNA.

⑤ cDNA를 가지고 탁맨(Taqman) 방식으로 염증성 활성 물질을 측정하였다. 실험에 사용된 각 프라이머(primer)와 프로브(probe)는 다음과 같다.
⑤ The inflammatory active substance was measured by cDNA using Taqman method. Each primer and probe used in the experiment is as follows.

for mouse TNF-α {forward, 5' TCT CTT CAA GGG ACA AGG CTG 3'; reverse, 5' ATA GCA AAT CGG CTG ACG GT 3'; 프로브(probe), 5' CCC GAC TAC GTG CTC CTC ACC CA 3'}, for mouse TNF-α {forward, 5 'TCT CTT CAA GGG ACA AGG CTG 3'; reverse, 5 'ATA GCA AAT CGG CTG ACG GT 3'; Probe, 5 'CCC GAC TAC GTG CTC CTC ACCCA 3'},

for mouse IL-1β {forward, 5' TTG ACG GAC CCC AAA AGA T 3'; reverse, 5' GAA GCT GGA TGC TCT CAT CTG 3'; 유니버설 프로브(universal probe), M15131.1 로쉐 어플라이드 사이언스(Roche applied science)}, for mouse IL-1? {forward, 5 'TTG ACG GAC CCC AAA AGA T 3'; reverse, 5 'GAA GCT GGA TGC TCT CAT CTG 3'; Universal probe, M15131.1 Roche applied science}, < RTI ID = 0.0 >

for mouse IL-6 {forward, 5' TTC ATT CTC TTT GCT CTT GAA TTA GA 3'; reverse, 5' GTC TGA CCT TTA GCT TCA AAT CCT 3'; 유니버설 프로브(universal probe), M20572.1 로쉐 어플라이드 사이언스(Roche applied science)}.
for mouse IL-6 {forward, 5 'TTC ATT CTC TTT GCT CTT GAA TTA GA 3'; reverse, 5 'GTC TGA CCT TTA GCT TCA AAT CCT 3'; Universal probe, M20572.1 Roche applied science}.

2) 췌장 내 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-1β, IL-6)의 발현 측정2) Expression of inflammatory cytokines (TNF-α, IL-1β, IL-6) in the pancreas

ELISA(Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay, 엔자임-링크드 이뮤노솔번트 어세이)는 효소면역분석법의 총칭이며, 효소를 표식자로 한 항원항체반응을 이용하여 항원량 또는 항체량을 측정하는 방법이다. 급성 췌장염을 진단하는 방법으로 이용된다.
ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) is a generic term for enzyme immunoassay, and is a method for measuring the amount of antigen or antibody using an antigen-antibody reaction using an enzyme as a marker. It is used as a diagnostic method for acute pancreatitis.

① 안티-마우스 TNF-α, IL-6 및 IL-1β 단클론 항체(1.0 ㎍/mL)를 4℃에서 오버나이트(overnight) 배양한 후 pH 7.4의 PBS(phosphate-buffered saline)를 주입하였다. (1) Anti-mouse TNF-α, IL-6 and IL-1β monoclonal antibody (1.0 μg / mL) were incubated overnight at 4 ° C. and then PBS (phosphate-buffered saline) of pH 7.4 was injected.

② 96 웰 플레이트(well plate)에 인큐베이트된 안티-마우스(anti-mouse) TNF-α, IL-6 및 IL-1β 단클론 항체를 100 uL씩 분배하였다. (2) 100 uL of anti-mouse TNF-α, IL-6 and IL-1β monoclonal antibodies incubated in a 96 well plate were dispensed.

③ 100uL씩 분배한 TNF-α, IL-6 및 IL-1β 단클론 항체가 담긴 플레이트를 0.05% 트윈(Tween)-20이 들어간 PBS와 10% FBS(fetal bovine serum)가 들어간 PBS로 2시간 동안 세척하였다. ③ Plates containing TNF-α, IL-6 and IL-1β monoclonal antibodies distributed in 100 μl portions were washed with PBS containing 0.05% Tween-20 and PBS containing 10% FBS (fetal bovine serum) for 2 hours Respectively.

④ 추가 세척 후, 단클론 항체 TNF-α, IL-6 및 IL-1β, 혈청 및 세포 상청액을 플레이트에 추가하고 3시간 동안 상온에서 배양하였다. After additional washing, monoclonal antibodies TNF-α, IL-6 and IL-1β, serum and cell supernatant were added to the plate and incubated at room temperature for 3 hours.

⑤ 배양 후, 플레이트를 세척하여 바이오티닐레이트(biotinylate)된 단클론 항체 TNF-α, IL-6 및 IL-1β 0.2 ㎍/mL 항체를 주입하였다. After incubation, the plates were washed and biotinylated monoclonal antibodies TNF-α, IL-6 and IL-1β 0.2 μg / mL antibody were injected.

⑥ 주입된 단클론 항체 TNF-α, IL-6 및 IL-1β를 1시간 동안 상온에서 배양하였다.⑥ Injected monoclonal antibodies TNF-α, IL-6 and IL-1β were incubated at room temperature for 1 hour.

⑦ 플레이트를 세척하고, TMB 기질을 추가한 후 재세척하기 전에 아비딘-퍼옥시다제(Avidin-peroxidase)를 더하여 30분간 상온에서 배양하였다. ⑦ The plate was washed, Avidin-peroxidase was added before the TMB substrate was added, and the plate was incubated at room temperature for 30 minutes.

⑧ 자동 마이크로플레이트(microplate) ELISA reader를 사용하여 450 nm에서 색의 변화를 측정하였다. 표준 곡선은 재조합 IL-1β 및 TNF-α의 연속 희석을 이용함으로써 각 분석 플레이트에서 수득하였다.
(8) The color change was measured at 450 nm using an automatic microplate ELISA reader. Standard curves were obtained on each assay plate using serial dilutions of recombinant IL-1 [beta] and TNF- [alpha].

6-2. 췌장 내 염증성 사이토카인의 발현 측정 결과6-2. Expression of Inflammatory Cytokines in the Pancreas

급성 췌장염에서 염증 세포의 활성화 기전에는 TNF-α, IL-1β, IL-6가 대표적으로 관여하는 것으로 알려져 있다. 이러한 전염증성 사이토카인(cytokine)들은 조직에서 염증을 매개하는데, 선상 세포의 괴사를 유발하고 국부적인 췌장 손상을 심화시킨다고 보고되어 있다.
In acute pancreatitis, TNF-α, IL-1β and IL-6 are known to be involved in the activation of inflammatory cells. These proinflammatory cytokines mediate inflammation in tissues, causing necrosis of linear cells and deepening local pancreatic damage.

도 6은 구글스테론을 처리하고 급성 췌장염을 유발시킨 실험동물의 췌장 내의 TNF-α, IL-1β, IL-6의 발현(B) 및 이들의 mRNA 발현(A) 측정 결과를 나타낸 그래프이다.
FIG. 6 is a graph showing the expression (B) and the mRNA expression (A) of TNF-α, IL-1β and IL-6 in the pancreas of experimental animals treated with Google Strontium and caused acute pancreatitis.

먼저, 염증성 사이토카인의 mRNA 발현을 살펴보면, 다음과 같다. First, mRNA expression of inflammatory cytokines will be described as follows.

TNF-α의 mRNA 발현은 대조군 및 실험군인 구글스테론 10, 25, 50 mg/kg 처리군에서 정상군인 DMSO 처리군에 비하여 모두 증가하였다. 또한 구글스테론 10, 25, 50 mg/kg 처리군은 대조군에 비해 TNF-α의 mRNA 발현이 감소하는 것을 확인하였다.
TNF-α mRNA expression was increased in the control and experimental groups, 10, 25 and 50 mg / kg, respectively, compared with the control group, DMSO. In addition, TNF-α mRNA expression was decreased in the 10, 25, and 50 mg / kg groups treated with Google Strontone compared to the control group.

IL-1β의 mRNA 발현은 대조군 및 실험군인 구글스테론 10, 25, 50 mg/kg 처리군에서 정상군인 DMSO 처리군에 비하여 모두 유의성 있게 증가하였다. 또한 IL-1β의 mRNA 발현은 구글스테론 10, 25, 50 mg/kg 처리군에서 모두 감소한 것을 볼 수 있다.
IL-1β mRNA expression was significantly increased in the control and experimental groups, 10, 25 and 50 mg / kg, respectively, compared to the control group and DMSO treated group. In addition, IL-1β mRNA expression was decreased in the 10, 25, and 50 mg / kg groups treated with Google Strontium.

IL-6의 mRNA 발현은 대조군 및 실험군인 구글스테론 10, 25, 50 mg/kg 처리군에서 정상군인 DMSO 처리군에 비하여 모두 유의성있게 증가하였다. 또한 IL-6의 mRNA 발현은 구글스테론 10, 25, 50 mg/kg에서 모두 대조군에 비해 감소하였다.
IL-6 mRNA expression was significantly increased in the control and experimental groups, 10, 25 and 50 mg / kg, respectively, compared to the control group, DMSO. In addition, mRNA expression of IL-6 was decreased at 10, 25 and 50 mg / kg of goat sterone compared with the control group.

염증성 사이토카인의 발현량 측정 결과, 대조군은 정상군의 발현과 비교하여 TNF-α의 발현이 약 4.5배, IL-6의 발현이 약 4.5배, IL-1β의 발현이 약 3배 가량 증가하였다.
The expression levels of inflammatory cytokines were increased by 4.5 times in the TNF-α, 4.5 times in the IL-6, and 3 times in the IL-1β compared with the normal group .

구글스테론 투여군의 TNF-α, IL-6 및 IL-1β 발현은 대조군과 비교하여 유의성 있게 감소하여, 정상군과 유사한 정도를 보였다.
The expression of TNF-α, IL-6 and IL-1β in the GS-treated group was significantly lower than that of the control group and was similar to that of the normal group.

즉, 구글스테론 10, 25, 50 mg/kg 투여군에서 급성 췌장염 저해 효과를 관찰할 수 있다.In other words, it is possible to observe acute pancreatitis inhibitory effect at 10, 25, and 50 mg / kg group administered with Google Steron.

Claims (4)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 구글스테론(guggulsterone)을 유효성분으로 함유하는 조성물로서,
상기 구글스테론의 1회 투여 용량은 급성 췌장염을 유발시킨 마우스 복강 투여시 10~50 mg/kg이고,
상기 조성물은, 급성 췌장염으로 인한 몸무게에 대한 췌장중량 비율 증가, 급성 췌장염으로 인한 췌장 및 폐 조직의 손상, 급성 췌장염으로 인한 췌장의 호중구 침윤, 급성 췌장염으로 인한 혈청 아밀라아제(amylase) 및 리파아제(lipase)의 활성, 및 급성 췌장염으로 인한 췌장 내 염증성 사이토카인 TNF-α, IL-1β, IL-6의 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는, 급성 췌장염의 예방 또는 개선을 위한 건강기능식품 조성물.As a composition containing guggulsterone as an active ingredient,
The single dose of Google Stronton was 10 to 50 mg / kg when administered intraperitoneally to mice that induced acute pancreatitis,
The composition can be used for the treatment of acute pancreatitis, including increased pancreatic weight ratio to weight due to acute pancreatitis, damage of pancreas and lung tissue due to acute pancreatitis, neutropenia of pancreas due to acute pancreatitis, amylase and lipase due to acute pancreatitis, , And the activity of the inflammatory cytokines TNF-α, IL-1β, and IL-6 in the pancreas due to acute pancreatitis is inhibited.

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