KR101746413B1

KR101746413B1 - Primer set for diagnosing Downy mildew, composition and kit comprising the same

Info

Publication number: KR101746413B1
Application number: KR1020160111314A
Authority: KR
Inventors: 이선영; 하인종; 문진성; 남진우; 최시림
Original assignee: 경상남도
Priority date: 2016-08-31
Filing date: 2016-08-31
Publication date: 2017-06-13

Abstract

본 발명은 양파 노균병 진단용 프라이머 세트, 이를 포함하는 진단용 조성물, 및 진단용 키트에 관한 것으로, 보다 상세하게는 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1, 서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2, 서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3, 서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및
서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트를 포함하는, 양파 노균병 진단용 프라이머 세트, 이를 포함하는 진단용 조성물, 및 진단용 키트에 관한 것이다.
본 발명의 양파 노균병 진단용 프라이머 세트, 이를 포함하는 진단용 조성물, 및 진단용 키트에 따르면, 노균병에서 하나의 밴드만 증폭되도록 프라이머를 제작하여 밴드의 유무에 따라 병원성 감염여부 판단이 가능해진 장점이 있으므로, 양파 노균병을 진단하는데 유용하게 사용될 수 있다.More particularly, the present invention relates to a primer set 1 represented by SEQ. ID. NO. 1 and 2, a primer set 2 represented by SEQ ID NO. 3 and 4, Primer set 3 represented by SEQ ID NO: 5 and 6, Primer set 4 represented by SEQ ID NO: 7 and 8, and
A primer set selected from the group consisting of primer set 5 represented by SEQ ID NOs: 9 and 10, a diagnostic composition comprising the onion primer set, and a diagnostic kit.
According to the present invention, the primer set for onion fungus diagnosis, the diagnostic composition including the onion fungus disease diagnosis kit, and the diagnostic kit according to the present invention have an advantage of making a primer so that only one band is amplified in the nociceptive disease, And can be useful for diagnosing nociceptive diseases.

Description

양파 노균병 진단용 프라이머 세트, 이를 포함하는 진단용 조성물, 및 진단용 키트{Primer set for diagnosing Downy mildew, composition and kit comprising the same}[0001] The present invention relates to a primer set for onion nosocomial diagnosis, a diagnostic composition comprising the primer set, and a kit for diagnosis,

본 발명은 양파 노균병 진단용 프라이머 세트, 이를 포함하는 진단용 조성물, 및 진단용 키트에 관한 것으로, 보다 구체적으로 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1, 서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2, 서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3, 서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및 서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트를 포함하는, 양파 노균병 진단용 프라이머 세트. 이를 포함하는 진단용 조성물, 및 진단용 키트에 관한 것이다.The present invention relates to a primer set for onion fungal disease diagnosis, a diagnostic composition comprising the same, and a diagnostic kit. More specifically, the present invention relates to a primer set 1 represented by SEQ ID No. 1 and 2, a primer set 2 represented by SEQ ID No. 3 and 4, Comprising at least one primer set selected from the group consisting of primer set 3 represented by SEQ ID NOS: 5 and 6, primer set 4 represented by SEQ ID NOS: 7 and 8, and primer set 5 represented by SEQ ID NOS: 9 and 10, Diagnostic primer set. A diagnostic composition comprising the same, and a diagnostic kit.

노균병은 조균류 노균병과의 사상균이 식물에 기생해서 일으키는 병으로서, 양파, 오이, 무, 시금치 등 많은 작물이 이 병에 걸린다. 병원균은 작물에 따라 그 형태가 다른데, 주로 잎에 발생한다. 잎맥에 연한 노란색 반점이 생기고, 습도가 높을 때에는 뒷면에 하얀색이나 회색의 곰팡이를 만든다. 노균병균은 순기생균으로 현재까지는 인공배양이 되지 않는다. 이 병을 막는 데에는 저항성 품종을 이용하거나 약제 살포를 한다. Nociceptus is a disease caused by pathogenic fungi of the fungus nociceptica on plants, and many crops such as onion, cucumber, radish, and spinach are affected. Pathogens vary in shape depending on the crop, mainly on the leaves. Light yellow spots appear on the veins, and white or gray fungi on the back when the humidity is high. Nutrient fungus is a pure organism and it is not cultured until now. Resistant varieties or medicines are used to prevent this disease.

특히, 노균병은 양파 재배의 경우에 있어서 가장 문제가 되고 있는 병으로 서, 활물기생(인공배양이 불가능하여 포장에서 자연 발생한 병징 관찰)의 곰팡이 병원균이 원인균이며, 주로 Peronospora destructor에 의해 발병이 되고 있다. 노균병은 연작하는 밭재배에서 더욱 문제가 되고 있고, 토양 중 난포자 형태로 월동하다 2월 이후 적정 온도와 습도에 도달하면 공기중으로 전염되어 전 포장에 퍼지게 된다. 포장에서 이병주가 발생하면 초기에 이병주를 솎아내어 병의 전염 확산을 막는데, 초기 엽에서 구분이 어려워 그 시기를 놓치게 되는 문제가 있다. 또한 채종지에서 노균병에 감염되는 경우 꽃대에까지 병징이 나타나 동화산물의 전류가 어려워져서 화구의 생장이 불량해지고 결과적으로 채종율이 현저히 떨어지게 된다.In particular, the nociceptive disease is the most problematic in onion cultivation, and is caused by fungal pathogens of the active pathogens (the artificial cultivation is impossible and naturally occurring in the packaging) and is mainly caused by the Peronospora destructor . Nodule disease is more problematic in cultivating field, and when it reaches the appropriate temperature and humidity after February, it spreads in the air and spreads to all the packaging. In case of bongbuju in packaging, it is possible to prevent the spread of the disease by removing the bongbuju in early stage. In addition, when the disease is infected with the nociceptive disease in the field, there is a symptom in the pedicel, and the current of the assimilated product becomes difficult, so that the growth of the crater becomes poor, resulting in a marked decrease in the seedling yield.

종래 노균병을 진단하는 기술과 관련된 기술로서는, 한국공개특허 제2015-0121794호 (오이 노균병 저항성 개체 선별용 프라이머 세트 및 이를 이용한 선별방법)에 개시된 바와 같이 프라이머 세트를 이용한 오이 노균병 저항성 개체를 선별하는 방법을 들 수 있다. 그러나 상기 한국공개특허 제2015-0121794호의 프라이머 세트는 오이 노균병에 저항성 있는 개체를 선별하는 것으로, 양파 노균병을 조기 진단할 수 없다는 문제점을 갖는다.As a technique related to the technology for diagnosing a nociceptic disease, there is a method of screening a cucumber-resistant disease-resistant object using a primer set as disclosed in Korean Patent Laid-Open Publication No. 2015-0121794 (a primer set for selection of a cucumber bacterium resistant individual and a screening method using the same) . However, the primer set of Korean Patent Laid-Open Publication No. 2015-0121794 has a problem in that it can not diagnose onion nodule disease early because it selects individuals resistant to cucumber mildew disease.

최근 양파 노균병을 신속하게 진단할 필요성이 높아지고 있으나, 양파 노균병을 진단하는 방식은 현재까지는 감염 의심주에서 포자를 채취하여 현미경으로 검경하는 방식이고, 배양이 불가능하여 토양에서의 진단에 어려움이 발생하고 있다. 따라서 종래의 양파 노규병 진단법보다 정확하고 신속하게 진단할 수 있는 새로운 진단법이 요구되고 있는 실정이다.Recently, there is an increasing need to diagnose onion nociceptia rapidly. However, the method of diagnosing onion nociception is a method in which a spore is taken from a suspected infection state and is examined with a microscope. However, have. Therefore, there is a need for a new diagnostic method that can diagnose more accurately and quickly than the conventional onion dumpling diagnosis method.

본 발명자들은 상기와 같은 문제를 해결하고 양파 노규병 진단의 정확도 향상 및 소요시간 절감의 측면에서 우수한 새로운 양파 노균병 진단법에 관해 연구하던 중, 노균병에 감염된 양파 DNA에서만 특이적으로 증폭되는 프라이머 세트를 이용하여 양파 노균병을 조기 진단할 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.The inventors of the present invention have conducted studies on a novel onion fungus diagnosis method which is superior in terms of improving the accuracy of diagnosis of onion nodule disease and reducing the time required for the diagnosis of onion nodule disease and the use of a primer set which is specifically amplified only in onion DNA infected with nodule disease The onion nodule disease can be diagnosed early, and the present invention has been completed.

한국공개특허 제2015-0121794호 (2015. 10. 30)Korea Patent Publication No. 2015-0121794 (Oct. 30, 2015)

본 발명의 목적은 양파 노균병 진단용 프라이머 세트를 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a primer set for onion fungal disease diagnosis.

본 발명의 다른 목적은 양파 노균병 진단용 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a composition for onion nociceptive disease diagnosis.

본 발명의 또 다른 목적은 양파 노균병 진단용 키트를 제공하는 것이다.It is still another object of the present invention to provide a kit for onion nosocomial diagnosis.

본 발명의 또 다른 목적은 양파 노균병 진단을 위한 정보 제공 방법을 제공하는 것이다.Yet another object of the present invention is to provide a method for providing information for diagnosis of onion nodule disease.

상술한 바와 같은 목적을 달성하기 위한, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 양파 노균병 진단용 프라이머 세트는, 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1, 서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2, 서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3, 서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및 서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트를 포함할 수 있다.In order to achieve the above object, a primer set for onion fungal disease diagnosis according to a preferred embodiment of the present invention comprises a primer set 1 represented by SEQ ID NO: 1 and 2, a primer set 2 represented by SEQ ID NO: 3 and 4, A primer set 3 represented by SEQ. ID. NO. 5 and 6, a primer set 4 represented by SEQ ID NO. 7 and 8, and a primer set 5 represented by SEQ ID NO. 9 and 10.

일 실시예에 있어서, 상기 양파 노균병의 원인균은 Peronospora destructor인 것을 특징으로 할 수 있다.In one embodiment, the causative microorganism of onion fungi is Peronospora destructor.

또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 양파 노균병 진단용 조성물은, 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1, 서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2, 서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3, 서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및 서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트를 포함할 수 있다.The composition for onion nodule disease diagnosis according to the preferred embodiment of the present invention comprises a primer set 1 represented by SEQ ID NOs: 1 and 2, a primer set 2 represented by SEQ ID NOs: 3 and 4, a primer set represented by SEQ ID NOs: 5 and 6 3, a primer set 4 represented by SEQ. ID. NO. 7 and 8, and a primer set 5 represented by SEQ. ID. NO. 9 and 10.

또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 양파 노균병 진단용 키트는, 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1, 서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2, 서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3, 서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및 서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트를 포함할 수 있다.The Onion Nociceptive Diagnosis Kit according to a preferred embodiment of the present invention comprises a primer set 1 represented by SEQ ID NOs: 1 and 2, a primer set 2 represented by SEQ ID NOs: 3 and 4, a primer set represented by SEQ ID NOs: 5 and 6 3, a primer set 4 represented by SEQ. ID. NO. 7 and 8, and a primer set 5 represented by SEQ. ID. NO. 9 and 10.

또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 양파 노균병 진단을 위한 정보 제공 방법은, 대상 시료에서 DNA를 분리하는 단계; 상기 분리된 DNA를 주형으로 하고, 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1, 서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2, 서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3, 서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및 서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트를 이용하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및 상기 증폭 산물을 검출하는 단계를 포함할 수 있다.According to another aspect of the present invention, there is provided an information providing method for onion fungal disease diagnosis, comprising: separating DNA from a target sample; Using the separated DNA as a template, primers set 1 shown in SEQ ID NOs: 1 and 2, primer set 2 shown in SEQ ID NOs: 3 and 4, primer set 3 shown in SEQ ID NOs: 5 and 6, SEQ ID NOs: 7 and 8 Amplifying the target sequence using at least one primer set selected from the group consisting of primer set 4 represented by SEQ ID NO: 9 and primer set 5 represented by SEQ ID NO: 9 and 10; And detecting the amplification product.

일 실시예에 있어서, 상기 표적 서열을 증폭하는 단계는, 사전 DNA 변성단계; 상기 선택된 프라이머 세트가 상보적인 DNA 염기서열에 결합하는 단계; 및 신장단계를 거쳐 수행되는 것을 특징으로 한다.In one embodiment, the step of amplifying the target sequence comprises: pre-DNA denaturation; Binding the selected set of primers to a complementary DNA base sequence; And an extension step.

본 발명의 양파 노균병 진단용 프라이머 세트, 이를 포함하는 진단용 조성물, 및 진단용 키트에 따르면, 종래 기술의 경우 식물시료(건전주, 이병주)와 노균병 시료에서 동일한 사이즈에서 증폭이 되어 감염여부를 확인하기 힘들고 균주마다 하나 또는 하나이상의 밴드가 증폭되어 사이즈를 확인해야 하는 불편함이 있었는데, 본 발명은 노균병에서 하나의 밴드만 증폭되도록 프라이머를 제작하여 밴드의 유무에 따라 병원성 감염여부 판단이 가능해진 장점이 있다. 따라서 본 발명의 양파 노균병 진단용 프라이머 세트, 이를 포함하는 진단용 조성물, 및 진단용 키트는 양파 노균병을 진단하는데 유용하게 사용될 수 있다.According to the primer set for onion fungal disease diagnosis of the present invention, the diagnostic composition comprising the same, and the diagnostic kit, it is difficult to confirm the infection by amplifying the same size of the plant samples (Gun, There is an inconvenience in that one or more bands are amplified to confirm the size. However, the present invention is advantageous in that a primer is amplified so that only one band is amplified in the nociceptive disease, and it is possible to judge whether or not a pathogenic infection is caused depending on the presence or absence of the band. Therefore, the primer set for onion fungus diagnosis of the present invention, the diagnostic composition containing the same, and the diagnostic kit can be usefully used for diagnosis of onion fungal disease.

또한, 본 발명에 따르면, 노균병에 특이적으로 증폭되도록 디자인되어 진단 및 검출에 사용될 수 있는 프라이머 세트를 이용하여 감염이 의심되는 식물시료에서 PCR 방법을 통해 조기에 노균병을 진단 및 검출할 수 있고, 진단 소요시간이 단축되며, 저비용으로 정확한 진단이 가능하고, 아울러 효율적 방제가 가능하다.In addition, according to the present invention, a primer set designed to be specifically amplified to a nociceptive disease and used for diagnosis and detection can be used to diagnose and detect nociceptive disease early in a PCR method in a plant sample suspected of infection, Diagnosis time is shortened, accurate diagnosis is possible at low cost, and efficient control is possible.

도 1은 노균병에서만 증폭되는 프라이머 세트로 PCR한 결과를 나타낸다.
도 2는 식물시료에서 노균병을 진단한 결과를 나타낸다.Fig. 1 shows the result of PCR with a primer set which is amplified only in the nociceptive disease.
Fig. 2 shows the result of diagnosis of nociceptive disease in a plant sample.

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시 예를 가질 수 있는바, 특정 실시 예들을 도면에 예시하고 상세한 설명에서 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS The present invention is capable of various modifications and various embodiments, and specific embodiments are illustrated in the drawings and will be described in detail in the detailed description. It is to be understood, however, that the invention is not to be limited to the specific embodiments, but includes all modifications, equivalents, and alternatives falling within the spirit and scope of the invention. DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

본 출원에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 출원에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.The terminology used in this application is used only to describe a specific embodiment and is not intended to limit the invention. The singular expressions include plural expressions unless the context clearly dictates otherwise. In the present application, the terms "comprises" or "having" and the like are used to specify that there is a feature, a number, a step, an operation, an element, a component or a combination thereof described in the specification, But do not preclude the presence or addition of one or more other features, integers, steps, operations, elements, components, or combinations thereof.

제1, 제2 등의 용어는 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 상기 구성요소들은 상기 용어들에 의해 한정되어서는 안 된다. 상기 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 사용된다.The terms first, second, etc. may be used to describe various components, but the components should not be limited by the terms. The terms are used only for the purpose of distinguishing one component from another.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 실시예를 보다 상세하게 설명하고자 한다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

본 발명의 바람직한 실시예에 따른 양파 노균병 진단용 프라이머 세트는, 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1, 서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2, 서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3, 서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및 서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트를 포함할 수 있다.A primer set 2 represented by SEQ. ID. NO. 1 and 2, a primer set 2 represented by SEQ ID NO. 3 and 4, a primer set 3 represented by SEQ ID NO. 5 and 6 , Primer set 4 represented by SEQ ID NO: 7 and 8, and primer set 5 represented by SEQ ID NO: 9 and 10.

본 발명에서 "프라이머 (primer)"는 짧은 자유 3발단 수산화기(free 3' htdroxyl group)를 가지는 핵산 서열로 상보적인 주형(template)과 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고 주형의 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 중합효소 또는 역전사 효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오사이드 트리포스페이트의 존재하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다. PCR 조건, 센스 및 안티센스 프라이머의 길이는 당업계에 공지된 것을 기초로 변형이 가능하다. 이러한 올리고 뉴클레오티드 프라이머를 당업계에 공지된 방법에 따라 당업자가 용이하게 제작하여 사용할 수 있다.A "primer" in the present invention is a nucleic acid sequence having a short free 3 'htdroxyl group and can form a base pair with a complementary template, Quot; refers to a short nucleic acid sequence that functions as a point. The primer can initiate DNA synthesis in the presence of reagents and four different nucleoside triphosphates for polymerization reactions (i. E., DNA polymerase or reverse transcriptase) at appropriate buffer solutions and temperatures. The PCR conditions, the lengths of the sense and antisense primers can be modified based on those known in the art. Such oligonucleotide primers can be easily prepared and used by those skilled in the art according to methods known in the art.

본 발명에서 "정방향(forward) 프라이머" 및 "역방향(reverse) 프라이머"는 유전자 증폭반응에 의해 증폭되는 유전자의 특정 부위의 3'-말단 및 5'-말단에 각각 결합하여 DNA 합성의 개시점으로 작용하는 프라이머를 의미한다.In the present invention, "forward primer" and "reverse primer" bind to 3'-terminal and 5'-terminal of a specific site of a gene amplified by gene amplification reaction, respectively, Quot; primer "

본 발명에서 용어 "중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction: PCR)" 은 중합효소를 이용하여 표적 핵산에 특이적으로 결합하는 프라이머 세트로부터 표적 핵산을 증폭하는 방법으로, 대표적인 핵산증폭기술(NAT) 중의 하나이다.The term "polymerase chain reaction (PCR) " in the present invention refers to a method of amplifying a target nucleic acid from a primer set that specifically binds to a target nucleic acid using a polymerase, It is one.

도 1은 노균병에서만 증폭되는 프라이머 세트로 PCR한 결과를 나타낸 것으로, 도 1을 참조하면, 본 발명에서 개발된 5개의 프라이머 세트(Fd1, Fd2, Fd3, Fd4, Fd5) 각각에 대해서 PCR한 결과, 도 1과 같이 노균병(Peronospora destructor)에서만 특이적으로 증폭됨을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 5개의 프라이머 세트(서열번호 1~10) 각각은 양파 유래 진균에서 증폭되지 않고 노균병에서만 특이적으로 증폭되는 것을 확인하여 노균병 검출에 사용할 수 있음을 확인하였다.FIG. 1 shows the result of PCR with a primer set amplified only in nociceptive disease. Referring to FIG. 1, PCR was performed on each of five primer sets (Fd1, Fd2, Fd3, Fd4, Fd5) As shown in Fig. 1, it was confirmed that it was specifically amplified only in Peronospora destructor . Therefore, it was confirmed that each of the five primer sets (SEQ ID NOS: 1 to 10) of the present invention was amplified specifically in the nontuberculous disease without being amplified in the onion-derived fungus, and thus it could be used for the detection of nociceptive disease.

도 2는 노균병 진단을 위해 5개의 프라이머 세트를 이용한 결과를 나타낸 것으로, 도 2에 나타난 바와 같이 노균병에 감염되지 않은 건전한 식물체에서는 증폭되는 밴드가 나타나지 않고, 노균병에 감염된 식물에서만 밴드가 증폭됨을 확인하였다. FIG. 2 shows the result of using five primer sets for diagnosis of nociceptive disease. As shown in FIG. 2, no band was amplified in healthy plants not infected with nociceptive virus, and the band was amplified only in plants infected with nociceptive virus .

종래 기술의 경우 식물시료(건전주, 이병주)와 노균병 시료에서 동일한 사이즈에서 증폭이 되어 감염여부를 확인하기 힘들었고 균주마다 하나 또는 하나 이상의 밴드가 증폭되어 사이즈를 확인해야 하는 불편함이 있었는데, 본 발명은 이러한 종래의 문제점을 해결한 것으로서, 노균병에서 하나의 밴드만 증폭되도록 프라이머를 제작하여 밴드의 유무에 따라 병원성 감염여부 판단이 가능해짐을 확인할 수 있었다.In the case of the prior art, it was difficult to confirm the infection in the same size in the plant samples (Gun-Jeonju, Lee, Byung-Ju) and the nociceptive samples, and it was inconvenient to confirm the size by amplifying one or more bands per strain. The present invention solves these problems, and it can be confirmed that a primer can be produced so that only one band is amplified in the nociceptive disease, and it is possible to judge whether or not a pathogenic infection is caused according to the presence or absence of a band.

또한, 본 발명의 바람직한 실시예에 따른 양파 노균병 진단용 조성물은, 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1, 서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2, 서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3, 서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및 서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5 로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트를 포함할 수 있다.The composition for onion nodule disease diagnosis according to the preferred embodiment of the present invention comprises a primer set 1 represented by SEQ ID NOs: 1 and 2, a primer set 2 represented by SEQ ID NOs: 3 and 4, a primer set represented by SEQ ID NOs: 5 and 6 3, a primer set 4 represented by SEQ. ID. NO. 7 and 8, and a primer set 5 represented by SEQ. ID. NO. 9 and 10.

상기 양파 노균병 진단용 키트는 선택적으로, 핵산 증폭에 필요한 시약, 예컨대, 완충액, DNA 중합효소(예컨대, Thermus aquaticus(Taq), Thermus thermophilus(Tth), Thermus filiformis, Thermis flavus, Thermococcus literalis 또는 Pyrococcus furiosus(Pfu)로부터 수득한 열 안정성 DNA 중합효소), DNA 중합 효소 조인자 및 dNTPs를 포함할 수 있다. 또한, 상기 키트는 상기한 시약 성분을 포함하는 다수의 별도 패키징 또는 컴파트먼트로 제작될 수 있다.The Onion Nociceptive Diagnosis Kits may optionally contain reagents necessary for nucleic acid amplification such as buffers, DNA polymerase (such as Thermus aquaticus (Taq), Thermus thermophilus (Tth), Thermus filiformis, Thermis flavus, Thermococcus litus or Pyrococcus furiosus ), DNA polymerase joins, and dNTPs. The kit may also be made from a number of separate packaging or compartments containing the reagent components described above.

상기 대상 시료에서 DNA를 분리하는 방법은 당업계에서 통상적으로 사용되는 페놀/클로로포름 추출법, SDS 추출법 (Tai et al., Plant Mol. Biol. Reporter, 8: 297-303, 1990), CTAB 분리법 (CetylTrimethyl Ammonium Bromide; Murray et al., Nuc. Res., 4321-4325, 1980) 또는 상업적으로 판매되는 DNA 추출 키트를 이용하여 수행할 수 있다.Methods for separating DNA from the target sample include phenol / chloroform extraction, SDS extraction (Tai et al., Plant Mol. Biol. Reporter, 8: 297-303, 1990), CTAB separation method (CetylTrimethyl Ammonium Bromide; Murray et al., Nuc. Res., 4321-4325, 1980) or commercially available DNA extraction kits.

상기 표적 서열을 증폭하는 단계는 당업계에서 통상적으로 사용되는 중합효소 연쇄반응(polymerase chain reaction; PCR), 리가아제 연쇄 반응(ligase chain reaction; LCR), Gap-LCR, 복구 연쇄반응(repair chain reaction), 전사-중재 증폭(transcription-mediated amplification; TMA), 자가 유지 염기서열 복제(self sustained sequence replication), 표적 폴리뉴클레오티드 염기서열의 선택적 증폭(selective amplification of target polynucleotide sequences), 컨센서스 서열 프라이밍 중합효소 연쇄 반응(consensus sequence primed polymerase chain reaction; CP-PCR), 임의적 프라이밍 중합효소 연쇄 반응 (arbitrarily primed polymerase chain reaction; AP-PCR), 핵산 염기서열 기반 증폭(nucleic acid sequence based amplification; NASBA), 가닥 치환 증폭(strand displacement amplification), 고리-중재 항온성 증폭(loop-mediated isothermal amplification; LAMP), 다중 중합효소연쇄반응(multiplex Polymerase chain reaction; multiplex PCR), 이중 중합효소연쇄반응(nested Polymerase chain reaction; nested-PCR), 단일 튜브 이중 중합효소연쇄반응(single tube nested Polymerase chain reaction; single tube nested-PCR), 역전사-중합효소연쇄반응(reverse transperase Polymerase chain reaction; RT-PCR), 역 중합효소연쇄반응(inverse Polymerase chain reaction; inverse PCR), 실시간 중합효소연쇄반응(realtime Polymerase chain reaction; RT-PCR), 및 실시간 중합효소연쇄반응 정량검사(Real-time Quantitative Polymerase chain reaction; RQ-PCR)등의 방법을 이용하여 수행되는 것이 바람직하나, 이에 한정되는 것은 아니다.The step of amplifying the target sequence may be performed using a polymerase chain reaction (PCR), a ligase chain reaction (LCR), a Gap-LCR, a repair chain reaction ), Transcription-mediated amplification (TMA), self-sustained sequence replication, selective amplification of target polynucleotide sequences, consensus sequence priming polymerase chain (PCR), random primed polymerase chain reaction (PCR), nucleic acid sequence based amplification (NASBA), strand displacement amplification strand displacement amplification, loop-mediated isothermal amplification (LAMP), multiple polymerase chain reaction (nested PCR), single-tube nested polymerase chain reaction (PCR), reverse-transcription-polymerase chain reaction (PCR) The reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR), inverse polymerase chain reaction (RT-PCR) inverse PCR, real-time polymerase chain reaction (RT-PCR), and real-time quantitative polymerase chain reaction (RQ-PCR) But is not limited thereto.

또한, 상기 증폭된 표적 서열은 검출 가능한 표지 물질로 표지될 수 있다. 상기 표지 물질은 형광, 인광 또는 방사성을 발하는 물질일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 예컨대, 상기 표지 물질은 Cy-5 또는 Cy-3일 수 있다. 표적 서열의 증폭시 프라이머의 5'-말단에 Cy-5 또는 Cy-3를 표지하여 PCR을 수행하면 표적 서열이 검출 가능한 형광 표지 물질로 표지될 수 있다. 또한, 방사성 물질을 이용한 표지는 PCR 수행시 32P 또는 35S 등과 같은 방사성 동위원소를 PCR 반응액에 첨가하면 증폭 산물이 합성되면서 방사성이 증폭 산물에 혼입되어 증폭 산물이 방사성으로 표지될 수 있다.In addition, the amplified target sequence may be labeled with a detectable labeling substance. The labeling substance may be a fluorescent, phosphorescent or radioactive substance but is not limited thereto. For example, the labeling substance may be Cy-5 or Cy-3. When the target sequence is amplified, PCR is carried out by labeling the 5'-end of the primer with Cy-5 or Cy-3, and the target sequence may be labeled with a detectable fluorescent labeling substance. When the radioactive isotope such as 32P or 35S is added to the PCR reaction solution, the amplification product is synthesized and the radioactivity is incorporated into the amplification product, so that the amplification product can be labeled as radioactive.

이상에서 상세하게 설명한 바에 의하면, 본 발명의 프라이머 5 세트를 이용하여 노균병에 감염된 양파 DNA에서만 특이적으로 증폭되는 동일한 사이즈의 PCR 산물을 확인하였다. 기존의 universal primer인 ITS1-4 쌍에서는 식물시료(건전주, 이병주)와 노균병 시료에서 동일한 사이즈에서 증폭이 되어 감염여부를 확인하기 힘들었고 기존의 결과는 ITS와 같은 universal primer의 경우 균주 마다 하나 또는 하나 이상의 밴드가 증폭되어 사이즈를 확인해야 하는 불편함이 있었다. 이러한 불편함을 해소한 본 발명은 노균병에서 하나의 밴드만 증폭되도록 프라이머를 제작하여 밴드의 유무에 따라 병원성 감염여부 판단이 가능해진 장점이 있다.As described in detail above, PCR products of the same size, which are specifically amplified only in onion DNA infected with nociceptive virus, were identified using the set of primers 5 of the present invention. In the case of universal primers such as ITS, one or one of each of the strains (ITS-1, ITS-1, ITS-1, ITS- There has been an inconvenience that the above-mentioned band has to be amplified to check the size. The present invention solves this inconvenience, and has a merit that a primer can be produced so that only one band is amplified in the nociceptive disease, and it is possible to judge whether or not a pathogenic infection is caused depending on the presence or absence of a band.

이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 실시예 및 실험예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 발명의 범위가 이들 실시예 및 실험예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described more specifically based on examples and experimental examples. It is to be understood that both the present invention and the following examples are for illustrative purposes only and that the scope of the invention is not limited by these examples and experimental examples in accordance with the spirit of the present invention. It will be obvious.

실시예Example 1: 시료 채취 및 DNA 추출 1: Sampling and DNA extraction

곰팡이 DNA를 추출하기 위하여 KACC(Korean Agricultural Culture Collection, 농업미생물은행)에서 분양받은 양파를 기주로 하는 진균과 감염된 양파잎에서 분리한 노균병 포자를 수집 및 채취하였다. Qiagen plant kit의 매뉴얼을 응용하여 상업용 판매되는 DNA 분리 키트를 이용하여 곰팡이 DNA를 추출하였다. 분리된 DNA는 20ng/ul 수준으로 희석하였다.In order to extract the fungal DNA, fungi based on onion from KACC (Korean Agricultural Culture Collection) and nosocomial spores isolated from infected onion leaves were collected and collected. The fungal DNA was extracted using a commercially available DNA isolation kit using the Qiagen plant kit manual. The isolated DNA was diluted to 20 ng / ul.

한편, 식물 시료의 DNA를 추출하기 위하여　노균병에 감염된 농가에서 수집한 이병주와 이병의심주의 식물 잎을 잘라 액체질소를 이용하여 분쇄하였다. 100mg을 덜어 1.5ml에 담고 Geneall사의 Exgene^TM Plant SV mini kit으로 추출하였다. 분리된 DNA는 20ng/ul 수준으로 희석하였다.On the other hand, in order to extract the DNA of the plant sample, the plant leaves collected from the farms infected with the nosocomial infections and the susceptible plants were cut and pulverized with liquid nitrogen. 100 mg was taken in 1.5 ml and extracted with Geneall's Exgene ^TM Plant SV mini kit. The isolated DNA was diluted to 20 ng / ul.

실시예Example 2: 2: 프라이머primer 세트 제작 Set production

노균병 진단용 프라이머는 양파에서 발병하는 곰팡이 병원균(Aspergillus niger[KACC 41018], Alternaria porri[KACC 42999], Botrytis alli[자체 수집], Penicillium italicum[KACC 44368], Sclerotium cepivorum[KACC 41234], Stemphylium vesicarium[KACC 44529])을 KACC로부터 분양받아 universal primer쌍(ITS, NS, LR, 5.8S 등)으로 PCR하여 증폭된 산물의 크기를 비교하여 유전자 클로닝 후 염기서열 분석을 통해 노균병에만 특이적으로 증폭되는 프라이머를 표 1에 나타난 바와 같이 재 디자인하였다.Downy mildew fungus that is endemic in the diagnostic primer onion pathogens (Aspergillus niger [KACC 41018], Alternaria porri [KACC 42999], Botrytis alli [self-collection], Penicillium italicum [KACC 44368], Sclerotium cepivorum [KACC 41234], Stemphylium vesicarium [KACC 44529]) to receive pre-sale from KACC the universal primer pair (ITS, NS, LR, 5.8S, and so on) as gene cloning and then sequencing the PCR to compare the size of the amplification product Primers that were specifically amplified only for mycobacteria were redesigned as shown in Table 1.

프라이머명Primer name 서열번호SEQ ID NO: 프라이머 서열 (5‘ → 3’)The primer sequence (5 '- > 3') 증폭크기(bp)Amplification Size (bp) Fd1
Fd1
서열번호1SEQ ID NO: 1 정방향Forward TTAGAGTTGCAATGACCTTAAATGGTTAGAGTTGCAATGACCTTAAATGG 　209
209
서열번호2SEQ ID NO: 2 역방향Reverse TGATGTGATTTACGGCAATGTATTATGATGTGATTTACGGCAATGTATTA Fd2
Fd2
서열번호3SEQ ID NO: 3 정방향Forward AGAGATGGTATGGGAGCAAATGAGAGATGGTATGGGAGCAAATG 231
231
서열번호4SEQ ID NO: 4 역방향Reverse ATAAACTCGGTCGTGAATACGCATAAACTCGGTCGTGAATACGC Fd3
Fd3
서열번호5SEQ ID NO: 5 정방향Forward GGACGGATCAAGTAGTCAGAAGATGGACGGATCAAGTAGTCAGAAGAT 595
595
서열번호6SEQ ID NO: 6 역방향Reverse TCGATGAAGAACGCAGCTTCCAGTCGATGAAGAACGCAGCTTCCAG Fd4
Fd4
서열번호7SEQ ID NO: 7 정방향Forward GTTGTAGACCTGGCAGTGACTTTGTTGTAGACCTGGCAGTGACTTT 251
251
서열번호8SEQ ID NO: 8 역방향Reverse TACACGGTCCAGCCGCTTCGTACACGGTCCAGCCGCTTCG Fd5
Fd5
서열번호9SEQ ID NO: 9 정방향Forward GAGCACTGGGCAGAAATCACGAGCACTGGGCAGAAATCAC 665
665
서열번호10SEQ ID NO: 10 역방향Reverse CGTTTTGTATGCAGCCCCGTCGTTTTGTATGCAGCCCCGT ctrlctrl 서열번호11SEQ ID NO: 11 정방향Forward AGTTCGAGCCTGATTATCCCAGTTCGAGCCTGATTATCCC 297
297
서열번호12SEQ ID NO: 12 역방향Reverse GCATGCCGCCAGCGTTCATCGCATGCCGCCAGCGTTCATC NS1
NS2NS1
NS2 서열번호13SEQ ID NO: 13 정방향Forward GTAGTCATATGCTTGTCTCGTAGTCATATGCTTGTCTC 570
570
서열번호14SEQ ID NO: 14 역방향Reverse GGCTGCTGGCACCAGACTTG CGGCTGCTGGCACCAGACTTG C

실시예Example 3: 유전자 증폭( 3: gene amplification PCRPCR ))

PCR에 쓰일 반응액은 template DNA는 식물시료 20ng/ul로 하고, 10 x PCR buffer 2.5ul, 2.5mM dNTP 2ul, 10pmole primer쌍 0.5ul, Taq polymerase(rTaq, Takara) 1U을 넣고 총부피 25ul가 되도록 하였다.For the reaction solution to be used for the PCR, template DNA should be 20 ng / ul, 2.5 μl of 10 x PCR buffer, 2 μl of 2.5 mM dNTP, 0.5 μl of 10 pmole primer pair and 1 U of Taq polymerase (rTaq, Takara) Respectively.

반응조건은 DNA 변성단계(denaturation step), 프라이머가 상보적인 염기서열을 가진 DNA에 결합하는 단계(annealing step), 프라이머 결합 후 DNA가 신장하는 단계(elongation step)을 35회 반복하여 증폭시킨다. 상기 반응에 요구되는 온도와 시간은 실험 수행자가 적합한 조건을 선택할 수 있으며 이 실험에서는 95에서 5분간 pre-denaturation step를 거친 후, 95에서 30초간 변성단계(denaturation step), 54~68에서 30초간 프라이머가 DNA에 결합하는 단계(annealing step), 72에서 45초간 신장과정(elongation step)을 35회 반복하고 마지막 72에서 10분간 추가 신장단계를 거쳤다.The reaction conditions are amplification by repeating 35 cycles of DNA denaturation step, annealing step of primer to DNA having complementary base sequence, and elongation step of DNA binding after primer binding. The temperature and time required for the reaction can be selected according to the conditions of the experiment. In this experiment, after pre-denaturation step at 95 for 5 minutes, denaturation step for 95 to 30 seconds, 54 to 68 for 30 seconds The annealing step of the primer to the DNA (annealing step), the elongation step of 72 to 45 seconds was repeated 35 times, and the final extension step of 72 minutes was carried out for 10 minutes.

실시예Example 4: 전기영동 확인 4: Confirm electrophoresis

PCR 증폭산물을 확인하기 위해 1.2% 아가로즈 젤을 safe view classic(발색용)를 넣어 전기영동하여 UV transilluminator에서 확인하였다.To confirm PCR amplification products, 1.2% agarose gel was electrophoresed in a safe view classic (for color development) and confirmed in a UV transilluminator.

(1) 노균병에서만 증폭되는 프라이머 세트로 PCR한 결과 (1) PCR was performed using a primer set that was amplified only in N. pollen

노균병 진단을 위해 대조군으로 곰팡이 유전자에서 증폭되는 NS1, NS2 프라이머 1쌍으로 PCR한 결과, 도 1과 같이 양파에서 수집된 곰팡이 병원균 7종(Aspergillus niger, Alternaria porri, Botrytis alli, Penicillium italicum, Sclerotium cepivorum, Stemphylium vesicarium , Peronospora destructor)에서 모두 증폭됨을 확인하였다. 다음으로, 본 발명에서 개발된 프라이머 5쌍으로(Fd1, Fd2, Fd3, Fd4, Fd5) PCR한 결과, 도 1과 같이 노균병(Peronospora destructor)에서만 특이적으로 증폭됨을 확인하였다.As a control, one pair of NS1 and NS2 primers amplified in the fungal gene were used for the diagnosis of nociceptive virus. As a result, seven kinds of fungal pathogens ( Aspergillus niger , Alternaria porri , Botrytis alli , Penicillium italicum , Sclerotium cepivorum , Stemphylium vesicarium , Peronospora destructor ). Next, PCR was performed with 5 pairs of primers (Fd1, Fd2, Fd3, Fd4, and Fd5) developed in the present invention. As a result, it was confirmed that PCR was specifically amplified only in Peronospora destructor as shown in FIG.

따라서, 본 발명의 프라이머 5 세트(서열번호 1~10)는 양파 유래 진균에서 증폭되지 않고 노균병에서만 특이적으로 증폭되는 것을 확인하여 노균병 검출에 사용될 수 있다.Therefore, the primer set 5 of the present invention (SEQ ID NOS: 1 to 10) can be used for the detection of infectious disease by confirming that it is not amplified in the onion-derived fungus but specifically amplified only in the infectious disease.

(2) 식물시료에서 노균병 진단(2) Diagnosis of nosocomial diseases in plant samples

노균병 진단을 위해 5개의 프라이머 세트를 이용한 결과, 도2와 같이 감염되지 않은 건전한 식물체에서는 증폭되는 밴드가 나타나지 않고, 감염된 식물에서만 밴드가 증폭됨을 확인하였다. As a result of using five primer sets for the diagnosis of nociceptive virus, it was confirmed that the amplified bands were not observed in the healthy infected plants as shown in Fig. 2, and the bands were amplified only in the infected plants.

한편, 상기에서는 본 발명을 특정의 바람직한 실시예에 관련하여 도시하고 설명하였지만, 이하의 특허청구범위에 의해 마련되는 본 발명의 기술적 특징이나 분야를 이탈하지 않는 한도 내에서 본 발명이 다양하게 개조 및 변화될 수 있다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 명백한 것이다.While the present invention has been particularly shown and described with reference to preferred embodiments thereof, it is to be understood that the invention is not limited to the disclosed embodiments, but, on the contrary, It will be apparent to those skilled in the art that changes may be made.

<110> KYONGSANGNAM-DO <120> Primer set for diagnosing Downy mildew, composition and kit comprising the same <130> P160304PP <160> 14 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 ttagagttgc aatgacctta aatgg 25 <210> 2 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 tgatgtgatt tacggcaatg tatta 25 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 agagatggta tgggagcaaa tg 22 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 ataaactcgg tcgtgaatac gc 22 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 ggacggatca agtagtcaga agat 24 <210> 6 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 tcgatgaaga acgcagcttc cag 23 <210> 7 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 7 gttgtagacc tggcagtgac ttt 23 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 8 tacacggtcc agccgcttcg 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 9 gagcactggg cagaaatcac 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 10 cgttttgtat gcagccccgt 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 11 agttcgagcc tgattatccc 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 12 gcatgccgcc agcgttcatc 20 <210> 13 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 13 gtagtcatat gcttgtctc 19 <210> 14 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 14 ggctgctggc accagacttg c 21 <110> KYONGSANGNAM-DO <120> Primer set for diagnosing Downy mildew, composition and kit comprising the same <130> P160304PP <160> 14 <170> KoPatentin 3.0 <210> 1 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 1 ttagagttgc aatgacctta aatgg 25 <210> 2 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 2 tgatgtgatt tacggcaatg tatta 25 <210> 3 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 3 agagatggta tgggagcaaa tg 22 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 4 ataaactcgg tcgtgaatac gc 22 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 5 ggacggatca agtagtcaga agat 24 <210> 6 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 6 tcgatgaaga acgcagcttc cag 23 <210> 7 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 7 gttgtagacc tggcagtgac ttt 23 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 8 tacacggtcc agccgcttcg 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 9 gagcactggg cagaaatcac 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 10 cgttttgtat gcagccccgt 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 11 agttcgagcc tgattatccc 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 12 gcatgccgcc agcgttcatc 20 <210> 13 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 13 gtagtcatat gcttgtctc 19 <210> 14 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> primer <400> 14 ggctgctggc accagacttg c 21

Claims

서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1,
서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2,
서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3,
서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및
서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트;
를 포함하는 양파 노균병 진단용 프라이머 세트.
Primer set 1 represented by SEQ ID NOS: 1 and 2,
Primer set 2 represented by SEQ ID NOS: 3 and 4,
Primer set 3 represented by SEQ ID NOS: 5 and 6,
Primer set 4 represented by SEQ ID NOs: 7 and 8
At least one primer set selected from the group consisting of primer set 5 represented by SEQ ID NOs: 9 and 10;
A primer set for onion fungus diagnosis.

제1항에 있어서,
상기 양파 노균병의 원인균은 Peronospora destructor인 것을 특징으로 하는 양파 노균병 진단용 프라이머 세트.
The method according to claim 1,
A primer set for onion fungal disease diagnosis, wherein the causative microorganism of onion fungus is Peronospora destructor.

서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1,
서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2,
서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3,
서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및
서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트;
를 포함하는 양파 노균병 진단용 조성물.
Primer set 1 represented by SEQ ID NOS: 1 and 2,
Primer set 2 represented by SEQ ID NOS: 3 and 4,
Primer set 3 represented by SEQ ID NOS: 5 and 6,
Primer set 4 represented by SEQ ID NOs: 7 and 8
At least one primer set selected from the group consisting of primer set 5 represented by SEQ ID NOs: 9 and 10;
Wherein the onion nodule disease diagnostic composition comprises:

제3항에 있어서,
상기 양파 노균병의 원인균은 Peronospora destructor인 것을 특징으로 하는 양파 노균병 진단용 조성물.
The method of claim 3,
Wherein the onion fungus is a peronospora destructor.

서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1,
서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2,
서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3,
서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및
서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트;
를 포함하는 양파 노균병 진단용 키트.
Primer set 1 represented by SEQ ID NOS: 1 and 2,
Primer set 2 represented by SEQ ID NOS: 3 and 4,
Primer set 3 represented by SEQ ID NOS: 5 and 6,
Primer set 4 represented by SEQ ID NOs: 7 and 8
At least one primer set selected from the group consisting of primer set 5 represented by SEQ ID NOs: 9 and 10;
And an onion nodule disease diagnostic kit.

대상 시료에서 DNA를 분리하는 단계;
상기 분리된 DNA를 주형으로 하고, 서열번호 1 및 2로 표시되는 프라이머 세트 1, 서열번호 3 및 4로 표시되는 프라이머 세트 2, 서열번호 5 및 6으로 표시되는 프라이머 세트 3, 서열번호 7 및 8로 표시되는 프라이머 세트 4 및 서열번호 9 및 10으로 표시되는 프라이머 세트 5로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 프라이머 세트를 이용하여 표적 서열을 증폭하는 단계; 및
상기 증폭 산물을 검출하는 단계를 포함하는 양파 노균병 진단을 위한 정보 제공 방법.
Separating the DNA from the target sample;
Using the separated DNA as a template, primers set 1 shown in SEQ ID NOs: 1 and 2, primer set 2 shown in SEQ ID NOs: 3 and 4, primer set 3 shown in SEQ ID NOs: 5 and 6, SEQ ID NOs: 7 and 8 Amplifying the target sequence using at least one primer set selected from the group consisting of primer set 4 represented by SEQ ID NO: 9 and primer set 5 represented by SEQ ID NO: 9 and 10; And
And detecting the amplified product.

제6항에 있어서, 상기 표적 서열을 증폭하는 단계는 사전 DNA 변성단계; 상기 선택된 프라이머 세트가 상보적인 DNA 염기서열에 결합하는 단계; 및 신장단계;를 거쳐 수행되는 것을 특징으로 하는, 양파 노균병 진단을 위한 정보 제공 방법.
7. The method of claim 6, wherein amplifying the target sequence comprises pre-DNA denaturation; Binding the selected set of primers to a complementary DNA base sequence; And an elongation step of performing an elongation step on the onion nodule.