KR101743359B1 - Novel Cellulophaga sp. bacterium and method for Biologically degrading pyrethroid with the same - Google Patents

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Abstract

본 발명은 신규한 셀룰로파가 미생물 및 그를 이용한 피레트로이드의 생물학적 분해 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 피레트로이드 계열 살충 성분에 대한 분해 활성을 갖는 셀룰로파가 속 DAU203 균주(KACC92091P), 이 균주를 피레트로이드 포함 시료에 접촉시키는 것을 포함하는 피레트로이드의 생물학적 분해 방법, 및 이 분해 매커니즘에 기초한 피레트로이드 오염 제거용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a novel cellulolytic microorganism and a biodegradation method of pyrethroid using the microorganism. More particularly, the present invention relates to a cellulolytic DAU203 strain (KACC92091P) having decomposition activity against a pyrethroid insecticidal component, A method for biological degradation of pyrethroid comprising contacting a strain with a sample containing pyrethroid, and a composition for removing pyrethroid decontamination based on the degradation mechanism.

Description

신규 셀룰로파가 속 미생물 및 그를 이용한 피레트로이드의 생물학적 분해 방법 {Novel Cellulophaga sp. bacterium and method for Biologically degrading pyrethroid with the same}Novel Cellulophaga sp. Microorganisms and biological degradation method of pyrethroid using same bacterium and method for Biologically degrading pyrethroid with the same}

본 발명은 신규 미생물을 이용한 피레트로이드(pyrethroid) 계열 살충 성분들에 대한 생물학적 분해 방법에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는 특정 균주 셀룰로파가 속(Cellulophaga sp.) 미생물로 사이퍼메트린(cypermethrin)을 효과적으로 분해하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a biodegradation method for pyrethroid insecticides using a novel microorganism, and more particularly, to a method for effectively decomposing cypermethrin as a microorganism of a specific strain Cellulophaga sp. To a method for disassembly.

피레트로이드는 제충국으로 만든 약제인데, 이 제충국은 국화과에 속하는 식물로서 살충 작용을 갖춘 품종은 흰꽃제충국(Chrysanthemum cinerariaefolium)·붉은꽃제충국(C. tamrutense) 등이 있다. 이 중에서 흰꽃제충국은 전 세계 각국에 널리 재배되고 있으며 가장 살충작용이 크다.The pyrethroid is a drug made by a bug bug, which is a plant belonging to the Asteraceae family. The insecticidal species include Chrysanthemum cinerariaefolium and C. tamrutense . Among these, white bugs are widely cultivated all over the world and have the most insecticidal action.

제충국은 살충제로서 오래 전부터 페르시아지방에서 살충분말(insect powder)이라는 명칭으로 사용되어 왔었으며, 이것이 19세기 초 유럽에 소개되어 우수한 살충제로서의 위치를 차지하게 되었다. 우리나라에는 1935년경부터 제주도를 비롯하여 영호남 일대에서 대대적으로 재배되었다. 제충국의 유효 성분은 1854년경부터 연구가 진행되어 1947년 La Forge 등에 의하여 과거에 유효 성분으로 알려졌던 피레트린 I, II 이외에 시네린 I, II가 있다는 것이 밝혀졌다.The insecticide has long been used as an insect powder in the Persian province and was introduced in Europe in the early nineteenth century and became an excellent insecticide. It has been cultivated widely in Korea since 1935, including Jeju Island and Yeongnam region. The active ingredient of the insecticide was studied in about 1854, and it was revealed that in 1947, La Forge et al. Had Cinerel I and II in addition to pyretrin I and II, which were known as active ingredients in the past.

천연 피레트로이드 계열은 직접 접촉 살충제로서 온혈동물인 사람과 가축에는 무해하지만, 곤충의 기문이나 피부를 통하여 체내에 들어가 침입 즉시 마비를 일으켜 죽게 하여 광범위하게 사용되고 있다. 이런 피레트로이드 계열 물질들은 체내에 흡수 되어 세포막에 존재하는 Na+ 통로에 강한 친화력을 나타내어 활동전위의 흥분기 동안 Na+이온의 막투과를 지속시켜 시냅스에서의 신호 전달을 마비시켜 독성작용을 나타내는 신경독의 일종이다.Natural pyrethroids are direct contact pesticides that are harmless to warm-blooded animals and livestock, but they are used extensively because they enter the body through insect glands and skin and cause paralysis immediately upon entry. These pyrethroids are absorbed into the body and exhibit a strong affinity to the Na + channel present in the cell membrane, thus sustaining membrane permeation of Na + ions during the action potential exciton and paralyzing the signaling in the synapse, It is a kind.

합성 피레트로이드는 크게 시안기(cyano group)가 없는 피르메트린(permethrin), 알레트린(allethrin), 페노트린(fenothrin)과 같은 타입 I군과 시안기(cyano group)를 가지고 있어 포유동물에게도 독성을 나타낼 수 있는 사이퍼메트린(cypermethrin), 텔타메트린(deltamethrin), 펜발레레이트(fenvalerate) 등과 같은 타입 II군으로 나뉜다.Synthetic pyrethroids have type I and cyano groups, such as permethrin, allethrin, and fenothrin, without cyano groups, And type II groups such as cypermethrin, deltamethrin, fenvalerate and the like which can exhibit toxicity.

국내외 연구진에 의하면 급성으로 다량을 흡입할 경우 혹은 지속적으로 미량에 노출될 경우 흔한 임상 증상으로 비정상적인 안면 감각, 피부 홍반, 구토, 구역, 복통, 전신 쇠약감등이 나타날 수 있으며, 신경계 증상으로는 혼돈, 흥분상태, 경련들이 나타날 수 있다고 보고하였다.According to researchers in Korea and abroad, acute inhalation of large amounts or continuous exposure to trace amounts of abnormal clinical symptoms such as abnormal facial sensation, skin rash, vomiting, nausea, abdominal pain, general weakness may appear, Excitement, and convulsions.

2010년, 1999년에서 2002년까지 5,046명의 미국인을 대상으로 조사한 소변 내에 존재하는 3-페녹시벤조산(3-PBA)과 같은 피레트로이드 계열 살충제 대사산물의 함량을 조사한 결과를 발표하였다. 연령대, 샘플 채취 시간, 인종별로 결과를 발표하였는데, 6-11세 아동들의 소변에 존재하는 3-PBA와 같은 대사산물의 함량이 다른 연령대 12-19세 청소년기 혹은 20-59세 성인의 소변에 존재하는 함량보다 월등히 많다는 결과를 보고하였다.(PBA), which is present in the urine of 5,046 Americans between the years of 2010 and 1999 and 2002. The results of this study are as follows: 1) The amount of pesticide-based insecticide metabolites such as 3-phenoxybenzoic acid (3-PBA) The results of age, sampling time, and race were reported. The metabolites, such as 3-PBA, present in the urine of 6-11-year-olds are present in the urine of adolescents aged 12-19 years or 20-59 years The results of this study are as follows.

현재, 피레트로이드 계열 살충제는 마우스 혹은 랫트를 모델로 하여 저연령대에 노출 정도에 따라서 신경 발달 장애, 행동 장애, 주의력 결핍 및 과잉 행동 장애(ADHD)와 같은 각종 질병의 상관관계를 밝히기 위한 연구가 계속 진행되고 있다. 그리고 영유아기 혹은 아동기에 피레트로이드 계열 살충제에 노출된 정도와 신체 내에 축적된 정도를 계속 모니터링 하여 이들이 성인이 되고 노년이 되었을 때 겪게 되는 각종 질병과의 상호 관계를 밝히기 위한 장기 프로젝트들이 계속 진행 중이다. 따라서 피레트로이드 계열 살충성분들에 대한 생물학적 분해에 대한 요구가 앞으로 더 많아질 것으로 판단된다.Currently, pesticide-based insecticides have been studied as models of mice or rats to determine the correlation between various diseases such as neurodevelopmental disorders, behavioral disorders, attention deficit and hyperactivity disorder (ADHD) It is progressing. Long-term projects are continuing to monitor the extent of exposure to pyrethroid insecticides and their accumulation in infancy and childhood, and to identify the interrelationships they have with various diseases when they become adults and old. Therefore, the demand for biodegradation of pyrethroid insecticides will be increased in the future.

이에 본 발명자들은 셀룰로파가 속(Cellulophaga sp.) 균주가 피레트로이드 계열 살충제, 특히 사이퍼메트린에 대해 고효율로 분해함을 발견하고 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have found that a Cellulophaga sp. Strain is highly efficiently degraded against pyrethroid insecticides, particularly cypermethrin, and completed the present invention.

공개특허공보 제2011-0017376호 (2011. 2. 21)Published Patent Publication No. 2011-0017376 (Feb. 21, 2011)

본 발명은 해안가에서 분리하여 염분이 존재하는 환경에서도 피레트로이드 계열 살충 성분들을 생물학적으로 분해할 수 있는, 특히, 사이퍼메트린에 대한 분해 활성이 있는, 신규 미생물 균주를 제공하는 것을 목적으로 한다.It is an object of the present invention to provide a novel microorganism strain capable of biologically decomposing pyrethroid insecticidal components even in an environment in which salinity is present, separated from the shore, and having decomposition activity against cypermethrin.

본 발명은 상기 균주로 사이퍼메트린을 포함하는 피레트로이드 계열 살충 성분들을 생물학적으로 분해하는 방법을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.It is another object of the present invention to provide a method for biologically degrading pyrethroid insecticidal components including cypermethrin into the above-mentioned strain.

1. 피레트로이드 계열 살충 성분에 대한 분해 활성을 갖는 셀룰로파가 속 DAU203 균주(KACC92091P).1. Celluloidal DAU203 strain (KACC92091P) with degradative activity against pyrethroid insecticides.

2. 위 1에 있어서, 서열번호 1의 16S 리보솜 DNA 서열을 갖는 셀룰로파가 속 DAU203 균주.2. The cellulofa genus DAU203 strain having the 16S ribosomal DNA sequence of SEQ ID NO: 1 in the above 1.

3. 셀룰로파가 속 DAU203 균주(KACC92091P)를 피레트로이드 포함 시료에 접촉시키는 것을 포함하는 피레트로이드의 분해 방법.3. A method for degrading pyrethroid comprising contacting cellulosic DAU203 strain (KACC92091P) with a sample containing pyrethroid.

4. 위 3에 있어서, 피레트로이드는 사이퍼메트린, 사이플루트린, 델타메트린, 사이페노트린, 펜발레레이트 및 플루발리네이트로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 피레트로이드의 분해 방법.4. The method of claim 3, wherein the pyrethroid is selected from the group consisting of cypermethrin, cyfluthrin, deltamethrin, sipeponerin, fenvalerate, and fulvalinate.

5. 위 3에 있어서, 시료는 탄소원으로 설탕 또는 젖당을 포함하는, 피레트로이드의 분해 방법.5. The method of claim 3, wherein the sample comprises sugar or lactose as a carbon source.

6. 위 3에 있어서, 시료는 질소원으로 0.5% 내지 0.9%의 효모 추출물을 포함하는, 피레트로이드의 분해 방법.6. The method of claim 3, wherein the sample comprises 0.5% to 0.9% of yeast extract as a nitrogen source.

7. 위 3에 있어서, 시료는 초기 배지 pH가 5.5 내지 9.5이고 온도가 23℃ 내지 27℃인, 피레트로이드의 분해 방법.7. The method of claim 3, wherein the sample has an initial medium pH of 5.5 to 9.5 and a temperature of 23 to 27 占 폚.

8. 셀룰로파가 속 DAU203 균주(KACC92091P)를 포함하는 피레트로이드 오염 제거용 조성물.8. A composition for decontamination of pyrethroid comprising cellulosic DAU203 strain (KACC92091P).

9. 위 8에 있어서, 피레트로이드는 사이퍼메트린, 사이플루트린, 델타메트린, 사이페노트린, 펜발레레이트 및 플루발리네이트로 이루어진 군에서 선택되는 것인, 피레트로이드 오염 제거용 조성물.9. The composition of claim 8, wherein the pyrethroid is selected from the group consisting of cypermethrin, cyflutrin, deltamethrin, sipeponin, fenvalerate and fulvalinate.

10. 위 8에 있어서, 탄소원으로 설탕 또는 젖당을 포함하는, 피레트로이드 오염 제거용 조성물.10. The composition of claim 8, wherein the carbon source comprises sugar or lactose.

11. 위 8에 있어서, 질소원으로 0.5% 내지 0.9%의 효모 추출물을 포함하는, 피레트로이드 오염 제거용 조성물.11. The pyrethroid decontamination composition of claim 8 comprising 0.5% to 0.9% of yeast extract as a nitrogen source.

12. 위 8에 있어서, 초기 배지 pH가 5.5 내지 9.5이고 온도가 23℃ 내지 27℃인, 피레트로이드 오염 제거용 조성물.12. The composition of claim 8, wherein the initial medium pH is 5.5 to 9.5 and the temperature is 23 to 27 占 폚.

본 발명의 방법은 특정 균주를 이용하여 피레트로이드 살충 성분을 생물학적으로 분해함으로써 환경 정화 및 안전한 먹거리 생산을 통한 상업화 기술에 매우 유용하다.The method of the present invention is very useful for commercialization technology through environmental purification and safe food production by biodegrading the pyrethroid insecticidal component using a specific strain.

또한 본 발명은 해안가에서 분리한 신규한 Cellulophaga sp. DAU203 균주에 의해 피레트로이드 계열 살충 성분을 생물학적으로 분해하는 방법으로서 강과 바다 인접 지역에 간석지 환경정화에 유용하게 사용될 수 있다.The present invention also relates to a novel cellulophaga sp. DAU203 is a biodegradable method of pyrethroid insecticide. It can be used for purification of tidal environment in the vicinity of rivers and the sea.

도 1은 셀룰로파가 속 (Cellulophaga sp.) DAU203 균주의 16S 리보솜 DNA 서열을 이용하여 진화적 유연관계를 분석한 결과이다.
도 2는 셀룰로파가 속 (Cellulophaga sp.) DAU203 균주에 의한 피레트로이드 계열 살충성분의 생물학적 분해에 대한 탄소원에 종류에 따른 분해도를 관찰한 결과이다.
도 3는 셀룰로파가 속 (Cellulophaga sp.) DAU203 균주에 의한 피레트로이드 계열 살충성분의 생물학적 분해에 대한 질소원에 종류에 따른 분해도를 관찰한 결과이다.
도 4는 셀룰로파가 속 (Cellulophaga sp.) DAU203 균주에 의한 피레트로이드 계열 살충성분의 생물학적 분해에 대한 반응표면분석법을 통한, 온도, pH, 설탕 농도, 효모추출물 농도 및 분해율을 확인하여 분해 활성 최적화 조건을 나타낸 것이다.Figure 1 is a schematic representation of a cellulophaga sp.) DAU203 strain 16S ribosomal DNA sequence.
FIG. 2 is a graph showing the cellulophaga sp.) DAU203 strain of the present invention is the result of observing the degree of decomposition according to the type of carbon source for the biodegradation of pyrethroid insecticides.
FIG. 3 is a graph showing the cellulophaga sp.) DAU203 strain, and the degradation rate of the nitrogen source against the biodegradation of pyrethroid insecticides was examined.
FIG. 4 is a graph showing the cellulophaga pH, sugar concentration, yeast extract concentration and degradation rate of the pesticide-based insecticidal component by the DAU203 strain.

본 발명은 피레트로이드 계열 살충 성분에 대한 분해 활성을 갖는 셀룰로파가 속 DAU203 균주(KACC92091P), 이 균주를 피레트로이드 포함 시료에 접촉시키는 것을 포함하는 피레트로이드의 생물학적 분해 방법, 및 이 분해 매커니즘에 기초한 피레트로이드 오염 제거용 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a biological degradation method of pyrethroid comprising contacting cellulosic DAU203 strain (KACC92091P) with a pyrethroid-containing insecticidal component, a pyrethroid-containing sample, Based compositions for removing pyrethroid decontamination.

이하 본 발명을 보다 구체적으로 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described more specifically.

본 발명은 피레트로이드 계열 살충 성분에 대한 분해 활성을 갖는 셀룰로파가 속 DAU203 균주(KACC92091P)를 제공한다.The present invention provides a cellulophaga DAU203 strain (KACC92091P) having a decomposing activity against pyrethroid insecticidal components.

셀룰로파가 속 DAU203 균주는 서열번호 1의 16S 리보솜 DNA 서열을 갖는다.The DAU203 strain of cellulase has the 16S ribosomal DNA sequence of SEQ ID NO: 1.

또한, 셀룰로파가 속 DAU203 균주는 카제인(casein), 카스아미노산(casamino acid), 우레아(urea), 펩톤(peptone), 효모추출물(yeast extract), 트립톤(tryptone), 질산 암모늄(ammonium nitrate), 탈지분유(skim milk)으로 구성된 군에서 선택되는 1 이상의 질소원에서 최적의 분해 활성을 나타낸다.In addition, the DAU203 strain of the cellulosic genus includes casein, casamino acid, urea, peptone, yeast extract, tryptone, ammonium nitrate ), Skim milk, and the like.

특히 0.5% 내지 0.9%의 효모 추출물을 첨가하였을 때, 더욱 바람직하게는 0.7% 내지 0.9%의 효모추출물을 첨가하였을 때 최적의 피레트로이드 계열 살충성분 특히 사이퍼메트린에 대해 최적 분해 활성을 가진다.Especially, when yeast extract of 0.5% to 0.9% is added, more preferably 0.7% to 0.9% of yeast extract is added, it has optimal decomposition activity against pyrethroid insecticide especially cypermethrin.

이처럼, 본 발명은 셀룰로파가(Cellulophaga sp.) 속 균주에 의해 피레트로이드 계열 살충 성분에 대해 고효율로 분해하는 것에 관한 모든 태양을 포함한다.As such, the present invention encompasses all aspects of highly efficient degradation of pyrethroid insecticides by Cellulophaga sp. Strains.

또한, 본 발명은 셀룰로파가(Cellulophaga sp.) 속 균주에 의한 피레트로이드 계열 살충성분에 대한 생물학적 분해 방법을 제공한다. 일 실시예로서, 셀룰로파가(Cellulophaga sp.) 속 균주를 피레트로이드 포함 시료에 접촉시키는 것을 포함하는 피레트로이드의 분해 방법일 수 있다.The present invention also provides a biological degradation method for a pyrethroid insecticidal component by a strain belonging to the genus Cellulophaga sp. In one embodiment, it may be a method of degrading pyrethroid comprising contacting a strain of the genus Cellulophaga sp. With a sample containing pyrethroid.

피레트로이드는 사이퍼메트린, 사이플루트린, 델타메트린, 사이페노트린, 펜발레레이트 및 플루발리네이트로 이루어진 군에서 선택되는 것일 수 있다.The pyrethroid may be selected from the group consisting of cypermethrin, cyfluthrin, deltamethrin, sipepotrin, fenvalerate, and fulvalinate.

시료는 탄소원으로 설탕 또는 젖당을 포함할 수 있다.The sample may contain sugar or lactose as a carbon source.

본 발명에 제공되는 것은 시료 중의 피레트로이드의 분해 방법이다. 본 명세서에 사용된 "시료"라는 용어는 피레트로이드를 함유하는 임의의 물질이다. 이 시료는 시료의 외부 표면, 시료의 내부 표면에 있거나, 시료 중에 들어간 사이퍼메트린 등의 피레트로이드를 함유할 수 있다. 시료에는 고체 시료 (예컨대, 토양, 자갈, 목재, 의류, 카펫 등), 반고체 시료 및 액체 시료 (예컨대, 호수, 시냇물 또는 강으로부터의 물, 제조 과정으로부터의 유출수, 하수구의 물 등), 살아 있는 유기체가 있지만, 이에 한정되는 것은 아니다.Provided in the present invention is a method for decomposing pyrethroid in a sample. The term "sample" as used herein is any material containing pyrethroid. This sample may be on the outer surface of the sample, on the inner surface of the sample, or may contain pyretroid such as cypermethrin in the sample. Samples may include solid samples (e.g., soil, gravel, wood, clothing, carpet, etc.), semi-solid and liquid samples (e.g., water from lakes, streams or rivers, effluents from manufacturing processes, But are not limited thereto.

시료는 사이퍼메트린 등의 피레트로이드의 존재에 대하여 시료를 시험함으로써 예컨대 사이퍼메트린 등의 피레트로이드을 함유하는 것으로 확인될 수 있다. 사이퍼메트린 등의 피레트로이드는 질량 분석기 및/또는 기체 크로마토그래피를 사용하여 검출할 수 있다. 이 기술 분야의 숙련자는 사이퍼메트린 등의 피레트로이드의 다수의 검출 방법이 사용 가능하며, 현재 알려져 있거나, 아직 발견되지 않은 이러한 모든 방법이 본 발명에 포함된다는 것을 잘 알고 있다.The sample can be identified to contain pyrethroids such as cypermethrin, for example, by testing the sample against the presence of pyrethroids such as cypermethrin. Pyrethroids such as cypermethrin can be detected using mass spectrometry and / or gas chromatography. Those skilled in the art are aware that a number of methods of detection of pyrethroids such as cypermethrin are available and that all such methods currently known or not yet discovered are included in the present invention.

마찬가지로, 시료 중의 피레트로이드의 분해 또는 제거의 정도는 본 발명의 명세서에 따라 처리한 후, 피레트로이드의 존재에 대하여 시료를 시험하고, 본 발명의 방법에 따라 처리하기 전의 동일한 시료 중의 피레트로이드 농도와 이 피레트로이드의 농도를 비교함으로써 모니터링할 수 있다.Likewise, the degree of decomposition or removal of the pyrethroid in the sample may be determined by examining the sample against the presence of pyrethroid after treatment according to the specification of the present invention and comparing the pyrethroid concentration in the same sample before treatment according to the method of the present invention This can be monitored by comparing the concentration of pyrethroid.

그러므로, 본 발명을 통해 수용액, 침출수, 유거수, 대수층, 지하수, 지표수, 우물물, 환경적 부지, 토양, 농업 또는 공업 시료, 및/또는 공업용 연못, 폐수 처리 시설, 모기 웅덩이가 있는 수원 (water source)을 비롯한 곳 중의 피레트로이드 농도를 해독, 오염 방지, 변화, 제거 또는 감소시키는 방법으로 활용될 수 있다.Therefore, the present invention can be applied to a water source with an aqueous solution, leachate, runoff, aquifer, groundwater, surface water, well water, environmental site, soil, agricultural or industrial sample, and / or industrial pond, wastewater treatment facility, To prevent, deter, alter, eliminate, or reduce the concentration of pyrethroid in, for example,

본 발명의 셀룰로파가(Cellulophaga sp.) 속 균주에 의한 피레트로이드 계열 살충성분에 대한 생물학적 분해 방법은 본 발명의 셀룰로파가(Cellulophaga sp.) 속 균주 DAU203를 포함하는 피레트로이드 오염 제거용 조성물을 사용함으로써 구현될 수 있다.The biological degradation method of the pesticide-based insecticidal component by the strain of the genus Cellulophaga sp. Of the present invention can be used for the decontamination of pyrethroid containing the cellulophaga sp. Strain DAU203 of the present invention ≪ / RTI > compositions.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 또한 본 명세서에는 바람직한 방법이나 시료가 기재되나, 이와 유사하거나 동등한 것들도 본 발명의 범주에 포함된다. 본 명세서에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.All technical terms used in the present invention are used in the sense that they are generally understood by those of ordinary skill in the relevant field of the present invention unless otherwise defined. Also, preferred methods or samples are described in this specification, but similar or equivalent ones are also included in the scope of the present invention. The contents of all publications referred to herein are incorporated herein by reference.

이하, 실시예에 의해 본 발명을 보다 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.

실시예Example 1.  One. 피레트로이드Pyrethroid 계열 살충 성분의 추출 방법 Extraction method of insecticides

본 발명은 일 관점에서 미생물을 활용하여 피레트로이드 계열 살충 성분을 분해하는 방법에 관한 것으로 배양액 중에서 피레트로이드 계열 살충성분을 추출하는 방법은 다음과 같다.The present invention relates to a method for decomposing pesticide-based insecticidal components using microorganisms from a viewpoint, and a method for extracting pesticide-based insecticidal components from a culture solution is as follows.

사이퍼메트린 (50mg/L)와 유화제로 Tween 80을 0.05%가 되게 최소 염 배지 50mL에 첨가한 후 멸균하였다. 배양용 시료 : petroleum ether : 아세톤 = 1:1:1 [vol:vol:vol]으로 혼합한 뒤 1시간 동안 초음파 욕조(ultrasonic bath)를 활용하여 층 분리를 하고 상등액을 모은 후 회전농축증발기(evaporator)를 이용하여 용액을 증발시켰다. 여기에 아세토니트릴 1mL로 녹인 후 20μm 필터로 여과한 후 분석용 샘플 시료를 완성하였다.Twenty 80% Tween 80 was added to 50 mL of the minimal salt medium to give a final concentration of 50 mg / L of cypermethrin and an emulsifier, followed by sterilization. The mixture was mixed with petroleum ether: acetone = 1: 1: 1 [vol: vol: vol], and the mixture was separated using an ultrasonic bath for 1 hour. The supernatant was collected, ) Was used to evaporate the solution. After dissolving in 1 mL of acetonitrile, the solution was filtered through a 20 μm filter, and a sample for analysis was completed.

표 1. 최소염배지(Mineral Salt Medium)의 조성Table 1. Composition of Mineral Salt Medium Mineral Salt Medium (MSM)Mineral Salt Medium (MSM) Na2HPO4 Na 2 HPO 4 66 g/Lg / L KH2PO4 KH 2 PO 4 33 g/Lg / L NH4ClNH 4 Cl 1One g/Lg / L NaClNaCl 0.50.5 g/Lg / L CaCl2 CaCl 2 0.0110.011 g/Lg / L MgSO4 MgSO 4 0.240.24 g/Lg / L

실시예Example 2. 고성능 액체 크로마토그래피를 활용한  2. Using high performance liquid chromatography 피레트로이드Pyrethroid 계열 살충성분 분석 Analysis of insecticidal components

본 발명에 이용된 피레트로이드 계열 살충 분석을 위한 기기는 Waters사에서 개발한 이원 HPLC 펌프(1525)를 이용하여 물 : 아세토니트릴 = 1 : 9의 비율로 분당 1 mL으로 샘플을 이동시켰다. 컬럼은 YMC사의 YMC-Triart C18 (5μm, 250×4.6mm)을 컬럼 오븐에서 35℃로 가열하며 사용하였다. 샘플 주입은 자동 샘플 주입기(2707)를 활용하였으며, 사이퍼메트린 sample들은 UV/Visible detector (2489)를 활용하여 235nm에서 측정하였다. 상기 표준 방벙을 이용하여 사이퍼메트린의 정량을 위한 표준곡선을 작성하였다. 표준곡선의 R2값이 0.999380으로 높은 신뢰성을 가지고 있음을 확인 할 수 있었다.A device for the pyrethroid-based insecticidal analysis used in the present invention was a sample transferred to 1 mL / min at a ratio of water: acetonitrile = 1: 9 using a binary HPLC pump (1525) developed by Waters. The column was used by heating YMC-Triart C18 (5 m, 250 x 4.6 mm) from YMC in a column oven to 35 < 0 > C. The sample injection utilized an automatic sample injector 2707, and the cypermethrin samples were measured at 235 nm utilizing a UV / Visible detector 2489. A standard curve for the determination of cypermethrin was prepared using the standard protocol. The R 2 value of the standard curve is 0.999380, which shows high reliability.

실시예Example 3. 16S  3. 16S rDNArDNA 서열을 활용한 분리 균주  Isolated strains using sequence DAU203의Of DAU203 동정 Sympathy

분리 균주 DAU203의 16s rDNA 서열들을 잘 알려진 대장균의 16S rDNA 염기서열을 바탕으로 제작한 프라이머를 활용하여 PCR을 통하여 얻었다. 이를 통해 얻어진 16S rDNA 염기서열을 GenBank의 기존에 보고된 정보들과 비교하여 유전학적 유연관계를 ClustalX program을 활용하여 phylogenetic tree로 나타내었다. Cellulophaga fucicola (AJ005973)와 98%(1451/1474)의 유사성을 나타내었으며, Cellulophaga lytica (D12666)와 97%(1223/1256), Cellulophaga lytica (M28058)와 99%(1448/1460)를 나타내었다. 이러한 분석들로 미루어 보아 분리균주 DAU203은 셀룰로파가 속(Cellulophaga sp.)에 속하는 것을 확인 할 수 있었다. 그래서 분리 균주를 Cellulophaga sp. DAU203 이라고 명명하였다.The 16s rDNA sequences of the isolate DAU203 were obtained by PCR using well-known primers based on 16S rDNA sequence of E. coli. The 16S rDNA sequence was compared with GenBank 's previously reported information and the phylogenetic relationship was represented by phylogenetic tree using ClustalX program. Cellulophaga fucicola (AJ005973) and 98% (1451/1474), respectively . Cellulophaga lytica (D12666) and 97% (1223/1256), Cellulophaga lytica (M28058) and 99% (1448/1460), respectively. Based on these analyzes, the isolated strain DAU203 was identified as Cellulophaga sp.). Thus, the isolated strain was Cellulophaga sp. DAU203 "

실시예Example 4.  4. 피레트로이드Pyrethroid 계열 살충 성분 특히 사이퍼메트린의 생물학적 분해에 대한 탄소원의 영향 Effect of Carbon Source on Biodegradation of Insecticides, Especially Cypermethrin

분리균주 DAU203에 의한 사이퍼메트린 분해를 위한 최적의 탄소원을 선별하기 위하여 동일 조건에 오직 탄소원의 종류만을 변화시켜 사이퍼메트린 분해에 미치는 영향을 분석하였다. MSM 배지(10mL)에 사이퍼메트린 (50mg/mL)과 Tween 80 (0.05%)를 첨가하여 각각의 탄소원을 2%가 되게 추가로 첨가하여 30℃, 180 rpm에서 5일 동안 배양하였다. 사용한 탄소원은 맥아당(maltose), 갈락토스(galactose), 포도당(glucose), 설탕(sucrose), 젖당(lactose), 카르복시메틸셀룰로스(CMC), 수용성 전분(soluble starch), 키틴(chitin)을 후보 탄소원으로 사용하였다. 표준 추출법과 분석방법으로 측정한 결과, 설탕(sucrose)와 젖당(lactose)를 이용하였을 때 대략 65%와 62% 정도의 실험한 탄소원들 중에서 가장 높은 사이퍼메트린 분해 활성을 확인 할 수 있었다. 설탕은 젖당에 비해서 저렴하고 쉽게 얻을 수 있어 산업적으로 이용하기 유용한 탄소원이므로 설탕을 앞으로의 실험에서 사용하기로 하였다.In order to select the optimum carbon source for the decomposition of cypermethrin by the isolate strain DAU203, only the type of carbon source was changed under the same conditions to analyze the effect on the decomposition of cypermethrin. Cypermethrin (50 mg / mL) and Tween 80 (0.05%) were added to the MSM medium (10 mL), and 2% of each carbon source was further added thereto and cultured at 30 ° C and 180 rpm for 5 days. The carbon source used was maltose, galactose, glucose, sucrose, lactose, carboxymethylcellulose (CMC), soluble starch, and chitin as candidate carbon sources Respectively. As a result of the standard extraction and analysis, sucrose and lactose showed the highest cypermethrin decomposition activity among the tested carbon sources of about 65% and 62%, respectively. Since sugar is cheaper and easier to obtain than lactose, it is an industrially useful carbon source, so sugar is to be used in future experiments.

표 2. 탄소원의 종류가 피레트로이드 계열 살충 성분, 특히 사이퍼메트린의 생물학적 분해에 끼치는 영향Table 2. Effects of carbon sources on biodegradation of pyrethroid insecticides, especially cypermethrin 탄소원Carbon source 분해량Decomposition amount 표준편차Standard Deviation MaltoseMaltose 35.389 35.389 0.740640.74064 GalactoseGalactose 34.053 34.053 1.667911.66791 GlucoseGlucose 51.961 51.961 7.376537.37653 SucroseSucrose 65.504 65.504 2.962362.96236 LactoseLactose 62.536 62.536 1.498451.49845 CMCCMC 45.950 45.950 6.359966.35996 Soluble StarchSoluble Starch 32.088 32.088 1.784321.78432 Colloidal ChitinColloidal Chitin 27.336 27.336 1.381351.38135

실시예Example 5.  5. 피레트로이드Pyrethroid 계열 살충 성분 특히 사이퍼메트린의 생물학적 분해에 대한 탄소원들 중 설탕 농도의 영향 Effect of sugar concentration in carbon sources on the biodegradation of insecticides, especially cypermethrin

사이퍼메트린 분해를 위해 선별한 탄소원인 설탕의 적정 농도를 선별하기 위하여 동일 조건에 오직 설탕의 농도를 변화시켜 사이퍼메트린 분해에 미치는 영향을 분석하였다. MSM 배지(10mL)에 사이퍼메트린 (50mg/mL)과 Tween 80 (0.05%)를 첨가하여 설탕을 각각 0.5%, 2%, 3.5%, 5%가 되게 추가로 첨가하여 30℃, 180 rpm에서 5일 동안 배양하였다. 표준 추출법과 분석방법으로 측정한 결과, 2% 농도의 설탕을 첨가하였을 때 분리균주 DAU203이 상대적으로 높은 사이퍼메트린 분해활성을 나타내는 것을 확인 할 수 있었다.    In order to select the optimum concentration of sugar, which is the carbon source selected for the decomposition of cypermethrin, the effects of only varying sugar concentration on the decomposition of cypermethrin were analyzed under the same conditions. (50 mg / mL) and Tween 80 (0.05%) were added to MSM medium (10 mL) to further add 0.5%, 2%, 3.5% and 5% Lt; / RTI > As a result of the standard extraction method and the analytical method, it was confirmed that when the 2% concentration of sugar was added, the isolated strain DAU203 showed relatively high cypermethrin decomposition activity.

표 3. 탄소원들 중 설탕의 농도가 피레트로이드 계열 살충 성분, 특히 사이퍼메트린의 생물학적 분해에 끼치는 영향Table 3. Effect of sugar concentration in carbon sources on biodegradation of pyrethroid insecticides, especially cypermethrin 설탕 농도Sugar concentration 분해량Decomposition amount 표준편차Standard Deviation 0.5%0.5% 61.430 61.430 3.107243.10724 2%2% 63.642 63.642 3.480443.48044 3.5%3.5% 62.590 62.590 2.298222.29822 5%5% 60.416 60.416 3.141213.14121

실시예Example 6.  6. 피레트로이드Pyrethroid 계열 살충 성분 특히 사이퍼메트린의 생물학적 분해에 대한 질소원의 영향  Effect of nitrogen source on biological degradation of insecticides, especially cypermethrin

사이퍼메트린 분해를 위한 최적의 질소원을 선별하기 위하여 동일 조건에 오직 질소원의 종류만을 변화시켜 사이퍼메트린 분해에 미치는 영향을 분석하였다. MSM 배지(10mL)에 사이퍼메트린 (50mg/mL)과 Tween 80 (0.05%)를 첨가하여 각각의 질소원을 2%가 되게 추가로 첨가하여 30℃, 180 rpm에서 5일 동안 배양하였다. 사용한 질소원의 종류로는 카제인(casein), 카스아미노산(casamino acid), 우레아(urea), ??톤(peptone), 효모추출물(yeast extract), 트립톤(tryptone), 질산암모늄(ammonium nitrate), 탈지분유(skim milk)들을 후보 질소원으로 사용하였다. 표준 추출법과 분석방법으로 측정한 결과, 효모추출물을 사용하였을 때 후보 질소원들 중에서 상대적으로 높은 분해율을 나타내는 것을 확인할 수 있었다.In order to select the optimum nitrogen source for the decomposition of cypermethrin, only the kind of nitrogen source was changed to the same condition and the effect on the decomposition of cypermethrin was analyzed. Cypermethrin (50 mg / mL) and Tween 80 (0.05%) were added to MSM medium (10 mL), and each of the nitrogen sources was further added to 2%, followed by incubation at 30 DEG C and 180 rpm for 5 days. Examples of the nitrogen source used include casein, casamino acid, urea, peptone, yeast extract, tryptone, ammonium nitrate, Skim milk was used as a candidate nitrogen source. As a result of the standard extraction method and the analytical method, it was confirmed that the yeast extract showed a relatively high decomposition rate among the candidate nitrogen sources.

표 4. 질소원의 종류가 피레트로이드 계열 살충 성분, 특히 사이퍼메트린의 생물학적 분해에 끼치는 영향Table 4. Effect of nitrogen sources on biodegradation of pyrethroid insecticides, especially cypermethrin 질소원Nitrogen source 분해량Decomposition amount 표준편차Standard Deviation CaseinCasein 36.927 36.927 1.579751.57975 Casamino acidCasamino acid 22.125 22.125 1.093731.09373 UreaUrea 31.366 31.366 1.479241.47924 PeptonePeptone 30.537 30.537 2.982472.98247 Yeast extractYeast extract 53.149 53.149 2.399512.39951 TryptoneTryptone 28.221 28.221 0.184450.18445 Ammonium nitrateAmmonium nitrate 14.525 14.525 2.817762.81776 Skim milkSkim milk 19.679 19.679 2.684622.68462

실시예Example 7.  7. 피레트로이드Pyrethroid 계열 살충 성분 특히 사이퍼메트린의 생물학적 분해에 대한 질소원들 중 효모추출물 농도의 영향 Effect of Yeast Extract Concentration in Nitrogen Source on Biodegradation of Insecticides, Especially Cypermethrin

사이퍼메트린 분해를 위해 선별한 질소원인 효모 추출물의 적정 농도를 선별하기 위하여 동일 조건에 오직 효모 추출물의 농도만을 변화시켜 사이퍼메트린 분해에 미치는 영향을 분석하였다. 최소염배지 배지(10mL)에 사이퍼메트린 (50mg/mL)과 Tween 80 (0.05%)를 첨가하여 효모 추출물을 각각 0.1%, 0.5%, 0.9%, 1.3%가 되게 추가로 첨가하여 30℃, 180 rpm에서 5일 동안 배양하였다. 표준 추출법과 분석방법으로 측정한 결과, 0.1%와 같은 저농도로 효모 추출물가 존재할 때보다는 0.5%이상의 yeast extract가 존재하는 상황에서 분리균주 DAU203이 사이퍼메트린을 보다 효율적으로 분해하는 경향을 확인할 수 있었다.In order to select the proper concentration of yeast extract, which was selected for the decomposition of cypermethrin, only the concentration of yeast extract was changed under the same conditions to analyze the effect on the decomposition of cypermethrin. Cytomethrin (50 mg / mL) and Tween 80 (0.05%) were added to the minimal salt medium (10 mL) to further add yeast extract to 0.1%, 0.5%, 0.9%, and 1.3% rpm for 5 days. As a result of the standard extraction method and the analytical method, it was confirmed that the isolate DAU203 tended to decompose cypermethrin more efficiently in the presence of yeast extract of more than 0.5% when yeast extract was present at a low concentration such as 0.1%.

표 5. 질소원들 중 효모 추출물의 농도가 피레트로이드 계열 살충 성분, 특히 사이퍼메트린의 생물학적 분해에 끼치는 영향Table 5. Effect of Yeast Extract Concentrations of Nitrogen Source on Biodegradation of Pyrethroid Insecticides, Especially Cypermethrin yeast extract 농도yeast extract concentration 분해량Decomposition amount 표준편차Standard Deviation 0.1%0.1% 46.903 46.903 4.223274.22327 0.5%0.5% 65.752 65.752 1.628521.62852 0.9%0.9% 69.121 69.121 1.661561.66156 1.3%1.3% 63.910 63.910 1.434181.43418

실시예Example 8. 반응표면분석법을 활용한  8. Using reactive surface analysis 3 가지3 things 인자( factor( 탄소원Carbon source , 질소원, 온도, pH, NaCl)의 상호작용에 의한 , Nitrogen source, temperature, pH, NaCl) 분리균주Isolated strain DAU203의Of DAU203 사이퍼메트린 분해 최적화 Optimization of Cypermethrin Decomposition

분리균주 DAU203의 사이퍼메트린 분해 최적화를 위하여 5 가지의 인자들을 선정하였다. 3 가지 인자로는 탄소원인 설탕, 질소원인 효모추출물, 초기배지 pH, 배양 온도, NaCl을 이용 하였다. 설탕은 0~2.0%, 효모추출물은 0.1~0.9%, 초기배지 pH는 5.5~9.5, 배양 온도는 23~37℃, NaCl은 0~3%의 범위를 이용하였다. Box-Behnken법에 의해서 다양한 조건을 가지는 42가지의 샘플들을 설계 하였으며, 각 샘플들은 3반복 수행하였다. 표준 추출법과 분석방법으로 측정한 결과를 ANOVA 분석법을 활용하여 다음의 최적화 모델결과를 얻을 수 있었다.Five factors were selected to optimize the degradation of cypermethrin in the isolate DAU203. Three factors were used: carbon source sugar, nitrogen source yeast extract, initial medium pH, incubation temperature, and NaCl. The range of 0 ~ 2.0% sugar, 0.1 ~ 0.9% yeast extract, 5.5 ~ 9.5 initial culture pH, 23 ~ 37 ℃ incubation temperature and 0 ~ 3% NaCl were used. The Box-Behnken method was used to design 42 samples with various conditions, and each sample was subjected to three iterations. The following optimization model results were obtained by using the standard extraction method and the analytical method using the ANOVA method.

분해량 Y = 34.92 + 4.83*A 1.66*B + 12.69*C 6.48*D +0.14*E - 5.75*AB 22.35*AC 0.004146*AD + 5.65*AE 1.24*BC + 0.81*BD 0.61*BE + 3.33*CD 0.50*CE 15.37*DE + 0.55*A2 + 0.15*B2 + 6.17*C2 4.52*D2 + 22.73*E2 The decomposition amount Y = 34.92 + 4.83 * A 1.66 * B + 12.69 * C 6.48 * D + 0.14 * E- 5.75 * AB 22.35 * AC 0.004146 * AD + 5.65 * AE 1.24 * BC + 0.81 * BD 0.61 * BE + 3.33 * CD 0.50 * CE 15.37 * DE + 0.55 * A 2 + 0.15 * B 2 + 6.17 * C 2 4.52 * D 2 + 22.73 * E 2

전체 실험 모델의 R2 값은 0.8743을 나타내었다. 위의 실험 모델을 바탕으로 포도당 3.0%, 초기배지 pH 7.94, 온도 35.17℃에서 최대 86%의 분해 활성을 나타 낼 것을 예상하였다. The R 2 value of the whole experimental model was 0.8743. Based on the above experimental model, it was expected that the maximum decomposition activity would be 86% at 3.0% glucose, pH 7.94, and 35.17 ℃.

상기 수행된 42개의 실험의 디자인 및 결과들을 표 6에 도시하였다.The design and results of the 42 experiments performed above are shown in Table 6.

표 6. 반응표면분석법을 활용한 3 가지 인자(탄소원, 질소원, 온도, pH, NaCl)의 상호작용에 의한 분리균주 DAU203의 사이퍼메트린 분해 최적화Table 6. Optimization of cypermethrin degradation of isolated strain DAU203 by interaction of three factors (carbon source, nitrogen source, temperature, pH, NaCl) using reaction surface methodology RunRun Yeast Extract(Yeast Extract ( %% )) Sucrose(Sucrose ( %% )) Temp.(℃)Temp. (占 폚) pHpH NaCl(NaCl ( %% )) 분해량Decomposition amount 1One 0.10.1 1One 3737 7.57.5 1.51.5 58.32258.322 22 1.01.0 1One 3737 7.57.5 00 77.18577.185 33 1.01.0 1One 3737 7.57.5 3.03.0 71.02271.022 44 1.91.9 1One 3030 5.55.5 1.51.5 31.39131.391 55 1.01.0 1One 3030 7.57.5 1.51.5 38.32738.327 66 1.01.0 22 3030 9.59.5 1.51.5 21.08721.087 77 1.01.0 1One 3737 9.59.5 1.51.5 45.29145.291 88 0.10.1 1One 3030 7.57.5 3.03.0 41.30341.303 99 1.01.0 00 3030 9.59.5 1.51.5 31.95831.958 1010 1.01.0 22 3030 5.55.5 1.51.5 31.20331.203 1111 1.91.9 1One 3030 9.59.5 1.51.5 26.63126.631 1212 1.01.0 1One 2323 9.59.5 1.51.5 13.00713.007 1313 1.01.0 1One 3030 5.55.5 00 37.52337.523 1414 1.01.0 00 3030 7.57.5 3.03.0 62.87562.875 1515 0.10.1 22 3030 7.57.5 1.51.5 45.76945.769 1616 1.01.0 22 3030 7.57.5 00 51.751.7 1717 0.10.1 00 3030 7.57.5 1.51.5 32.50232.502 1818 1.91.9 00 3030 7.57.5 1.51.5 36.28336.283 1919 1.01.0 1One 2323 7.57.5 00 55.9355.93 2020 0.10.1 1One 3030 9.59.5 1.51.5 27.85227.852 2121 1.01.0 00 2323 7.57.5 1.51.5 18.75518.755 2222 1.91.9 1One 2323 7.57.5 1.51.5 64.15364.153 2323 1.01.0 1One 3030 9.59.5 00 53.73553.735 2424 1.01.0 1One 3030 7.57.5 1.51.5 35.73135.731 2525 1.01.0 22 3737 7.57.5 1.51.5 60.50360.503 2626 0.10.1 1One 3030 7.57.5 00 59.60859.608 2727 1.01.0 1One 3030 7.57.5 1.51.5 30.45930.459 2828 1.01.0 1One 2323 5.55.5 1.51.5 40.43740.437 2929 1.01.0 1One 3030 5.55.5 3.03.0 76.33276.332 3030 0.10.1 1One 2323 7.57.5 1.51.5 -3.735-3.735 3131 1.01.0 00 3030 5.55.5 1.51.5 45.31845.318 3232 1.91.9 1One 3030 7.57.5 00 72.772.7 3333 1.01.0 1One 3030 7.57.5 1.51.5 3535 3434 1.01.0 00 3737 7.57.5 1.51.5 59.50859.508 3535 1.91.9 1One 3030 7.57.5 3.03.0 76.99376.993 3636 1.01.0 1One 3030 7.57.5 1.51.5 3535 3737 1.01.0 22 2323 7.57.5 1.51.5 24.71124.711 3838 1.01.0 00 3030 7.57.5 00 56.46556.465 3939 1.91.9 22 3030 7.57.5 1.51.5 26.53126.531 4040 1.01.0 1One 3737 5.55.5 1.51.5 59.41159.411 4141 1.01.0 1One 3030 9.59.5 3.03.0 31.04831.048 4242 1.01.0 1One 3030 7.57.5 1.51.5 3535

이어서, 변량 분석의 관점에 적합한 (ANOVA) 이차 다항식 모델의 결과를 표 7에 나타내었다.Next, the results of the (ANOVA) quadratic polynomial model suitable for the aspect of the variance analysis are shown in Table 7.

표 7. 변량 분석의 관점에 적합한 (ANOVA) 이차 다항식 모델의 결과Table 7. Results of the (ANOVA) quadratic polynomial model fit for the perspective of variance analysis SourceSource D.FD.F .. S.SS.S .. M.SM.S. .. FF -value-value PP -value-value ModelModel 2020 12466.6212466.62 623.33623.33 7.307.30 <0.0001<0.0001 A-Yeast extractA-Yeast extract 1One 295.96295.96 295.96295.96 3.473.47 0.07660.0766 B-SucroseB-Sucrose 1One 38.7038.70 38.7038.70 0.450.45 0.50810.5081 C-TemperatureC-Temperature 1One 2022.522022.52 2022.522022.52 23.7023.70 <0.0001<0.0001 D-pHD-pH 1One 595.05595.05 595.05595.05 6.976.97 0.01530.0153 E-NaClE-NaCl 1One 0.220.22 0.220.22 0.0025990.002599 0.95980.9598 ABAB 1One 132.47132.47 132.47132.47 1.551.55 0.22660.2266 ACAC 1One 1346.871346.87 1326.871326.87 15.5515.55 0.00070.0007 ADAD 1One 0.000045550.00004555 0.00045550.0004555 0.00000053370.0000005337 0.99940.9994 AEAE 1One 127.67127.67 127.67127.67 1.501.50 0.23490.2349 BCBC 1One 6.156.15 6.156.15 0.0720.072 0.79090.7909 BDBD 1One 2.632.63 2.632.63 0.0310.031 0.86230.8623 BEBE 1One 0.970.97 0.970.97 0.0110.011 0.91620.9162 CDCD 1One 44.2944.29 44.2944.29 0.520.52 0.47930.4793 CECE 1One 0.650.65 0.650.65 0.0076690.007669 0.93100.9310 DEDE 1One 945.44945.44 945.44945.44 11.0811.08 0.00320.0032 AA 22 1One 2.292.29 2.292.29 0.0270.027 0.87140.8714 BB 22 1One 0.180.18 0.180.18 0.0020720.002072 0.96410.9641 CC 22 1One 289.51289.51 289.51289.51 3.393.39 0.07970.0797 DD 22 1One 161.29161.29 161.29161.29 1.891.89 0.18370.1837 EE 22 1One 3732.673732.67 3732.673732.67 43.7343.73 <0.0001<0.0001 Lack of FitLack of Fit 1616 1760.261760.26 110.02110.02 17.0917.09 0.00270.0027 Pure ErrorPure Error 55 32.1932.19 6.446.44 -- -- TotalTotal 4141 14259.0714259.07 -- -- --

이러한 결과들은 본 발명의 신규한 미생물 Cellulophaga sp. DAU203 균주가 피레트로이드 계열 살충 성분들, 특히 사이퍼메트린에 대한 생물학적 분해에 대한 유력한 후보군 임을 보여주며, 피레트로이드 계열 살충 성분들, 특히 사이퍼메트린에 대한 생물학적 분해가 매우 효과적임을 보여준다.These results indicate that the novel microorganism Cellulophaga sp. DAU203 strain is a strong candidate for biodegradation of pyrethroid insecticides, especially cypermethrin, and shows that biodegradation of pyrethroid insecticides, especially cypermethrin, is very effective.

그러므로 본 발명은 해안가에서 분리한 신규한 Cellulophaga sp. DAU203 균주에 의해 피레트로이드 계열 살충 성분을 생물학적으로 분해하는 방법으로서 강과 바다 인접지역에 간석지 환경정화에 유용하게 사용될 수 있을 것이다.Therefore, the present invention relates to a novel cellulophaga sp. DAU203 is a biodegradable method of pyrethroid insecticide. It can be useful for the purification of tidal environment in the vicinity of rivers and the sea.

농업생명공학연구원Agricultural Biotechnology Research Institute KACC92091KACC92091 2015091020150910

<110> Dong-A University Research Foundation for Industry-Academy Cooperation <120> Novel Cellulophaga sp. bacterium and method for Biologically degrading pyrethroid with the same <130> 15P09011 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1515 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Cellulophaga sp. <400> 1 gagtttgatc ctggctcagg atgaacgcta gcggcaggct taacacatgc aagtcgaggg 60 gtaacagagg agcttgctct tgctgacgac cggcgcacgg gtgcgtaacg cgtatacaat 120 ctgccttaca ctaagggata gcccagagaa atttggatta acaccttata gtttattttt 180 atggcatcat ttaaataata aagtttacgg tgtaagatga gtatgcgtcc cattagtttg 240 ttggtaaggt aacggcttac caagactacg atgggtaggg gccctgagag ggggatcccc 300 cacactggta ctgagacacg gaccagactc ctacgggagg cagcagtgag gaatattgga 360 caatggaggg gactctgatc cagccatgcc gcgtgcagga agacggtcct atggattgta 420 aactgctttt atacaggaag aataaggact acgtgtagtc tggtgacggt actgtaagaa 480 taaggaccgg ctaactccgt gccagcagcc gcggtaatac ggagggtccg agcgttatcc 540 ggaattattg ggtttaaagg gtccgtaggc gggctgttaa gtcaggggtg aaagtttgca 600 gctcaactgt agaattgcct ttgatactga tggtcttgaa ttattgtgaa gtggttagaa 660 tatgtagtgt agcggtgaaa tgcatagata ttacatagaa taccgattgc gaaggcagat 720 cactaacaat tgattgacgc tgatggacga aagcgtgggt agcgaacagg attagatacc 780 ctggtagtcc acgccgtaaa cgatggatac tagctgtttg gatttcgatc tgagcggcca 840 agcgaaagtg ataagtatcc cacctgggga gtacgttcgc aagaatgaaa ctcaaaggaa 900 ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgatgata cgcgaggaac 960 cttaccaggg cttaaatgta gattgacagg tttagagata gactttcctt cgggcaattt 1020 acaaggtgct gcatggttgt cgtcagctcg tgccgtgagg tgtcaggtta agtcctataa 1080 cgagcgcaac ccctgttgtt agttaccagc acattatggt ggggactcta gcaagactgc 1140 cggtgcaaac cgtgaggaag gtggggatga cgtcaaatca tcacggccct tacgtcctgg 1200 gccacacacg tgctacaatg gtaggtacag agagcagcca cttagcgata aggagcgaat 1260 ctataaaacc tatcacagtt cggatcggag tctgcaactc gactccgtga agctggaatc 1320 gctagtaatc ggatatcagc catgatccgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg 1380 cccgtcaagc catggaagct gggggtacct gaagttcgtc accgcaagga gcgacctagg 1440 gtaaaactgg taactagggc taagtcgtaa caaggtagcc gtaccggaag gtgcggctgg 1500 atcacctcct ttcta 1515 <110> Dong-A University Research Foundation for Industry-Academy Cooperation <120> Novel Cellulophaga sp. bacterium and method for Biologically          degrading pyrethroid with the same <130> 15P09011 <160> 1 <170> KoPatentin 3.0 <210> 1 <211> 1515 <212> DNA <213> Unknown <220> <223> Cellulophaga sp. <400> 1 gagtttgatc ctggctcagg atgaacgcta gcggcaggct taacacatgc aagtcgaggg 60 gtaacagagg agcttgctct tgctgacgac cggcgcacgg gtgcgtaacg cgtatacaat 120 ctgccttaca ctaagggata gcccagagaa atttggatta acaccttata gtttattttt 180 atggcatcat ttaaataata aagtttacgg tgtaagatga gtatgcgtcc cattagtttg 240 ttggtaaggt aacggcttac caagactacg atgggtaggg gccctgagag ggggatcccc 300 cacactggta ctgagacacg gaccagactc ctacgggagg cagcagtgag gaatattgga 360 caatggaggg gactctgatc cagccatgcc gcgtgcagga agacggtcct atggattgta 420 aactgctttt atacaggaag aataaggact acgtgtagtc tggtgacggt actgtaagaa 480 taaggaccgg ctaactccgt gccagcagcc gcggtaatac ggagggtccg agcgttatcc 540 ggaattattg ggtttaaagg gtccgtaggc gggctgttaa gtcaggggtg aaagtttgca 600 gctcaactgt agaattgcct ttgatactga tggtcttgaa ttattgtgaa gtggttagaa 660 tatgtagtgt agcggtgaaa tgcatagata ttacatagaa taccgattgc gaaggcagat 720 cactaacaat tgattgacgc tgatggacga aagcgtgggt agcgaacagg attagatacc 780 ctggtagtcc acgccgtaaa cgatggatac tagctgtttg gatttcgatc tgagcggcca 840 agcgaaagtg ataagtatcc cacctgggga gtacgttcgc aagaatgaaa ctcaaaggaa 900 ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgatgata cgcgaggaac 960 cttaccaggg cttaaatgta gattgacagg tttagagata gactttcctt cgggcaattt 1020 acaaggtgct gcatggttgt cgtcagctcg tgccgtgagg tgtcaggtta agtcctataa 1080 cgagcgcaac ccctgttgtt agttaccagc acattatggt ggggactcta gcaagactgc 1140 cggtgcaaac cgtgaggaag gtggggatga cgtcaaatca tcacggccct tacgtcctgg 1200 gccacacacg tgctacaatg gtaggtacag agagcagcca cttagcgata aggagcgaat 1260 ctataaaacc tatcacagtt cggatcggag tctgcaactc gactccgtga agctggaatc 1320 gctagtaatc ggatatcagc catgatccgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg 1380 cccgtcaagc catggaagct gggggtacct gaagttcgtc accgcaagga gcgacctagg 1440 gtaaaactgg taactagggc taagtcgtaa caaggtagcc gtaccggaag gtgcggctgg 1500 atcacctcct ttcta 1515

Claims (12)

사이퍼메트린에 대한 분해 활성을 갖는 셀룰로파가 속 DAU203 균주(KACC92091P).
A cellulofa genus DAU203 strain (KACC92091P) having a degradative activity against cypermethrin.
청구항 1에 있어서, 서열번호 1의 16S 리보솜 DNA 서열을 갖는 셀룰로파가 속 DAU203 균주.
The cellulosic DAU203 strain according to claim 1, which has the 16S ribosomal DNA sequence of SEQ ID NO: 1.
셀룰로파가 속 DAU203 균주(KACC92091P)를 사이퍼메트린 포함 시료에 접촉시키는 것을 포함하는 사이퍼메트린의 분해 방법.
A method for degrading cypermethrin comprising contacting cellulosic DAU203 strain (KACC92091P) with a sample containing cypermethrin.
삭제delete 청구항 3에 있어서, 상기 시료는 탄소원으로 설탕 또는 젖당을 포함하는, 사이퍼메트린의 분해 방법.
4. The method of claim 3, wherein the sample comprises sugar or lactose as a carbon source.
청구항 3에 있어서, 상기 시료는 질소원으로 0.5% 내지 0.9%의 효모 추출물을 포함하는, 사이퍼메트린의 분해 방법.
4. The method of claim 3, wherein the sample comprises 0.5% to 0.9% yeast extract as a nitrogen source.
청구항 3에 있어서, 상기 시료는 초기 배지 pH가 5.5 내지 9.5이고 온도가 23℃ 내지 27℃인, 사이퍼메트린의 분해 방법.
The method according to claim 3, wherein the sample has an initial medium pH of 5.5 to 9.5 and a temperature of 23 to 27 ° C.
셀룰로파가 속 DAU203 균주(KACC92091P)를 포함하는 사이퍼메트린 오염 제거용 조성물.
A composition for decongesting cypermethrin comprising cellulosic DAU203 strain (KACC92091P).
삭제delete 청구항 8에 있어서, 탄소원으로 설탕 또는 젖당을 포함하는, 사이퍼메트린 오염 제거용 조성물.
The composition according to claim 8, wherein the carbon source comprises sugar or lactose.
청구항 8에 있어서, 질소원으로 0.5% 내지 0.9%의 효모 추출물을 포함하는, 사이퍼메트린 오염 제거용 조성물.
9. The composition according to claim 8, wherein the composition comprises 0.5% to 0.9% yeast extract as a nitrogen source.
청구항 8에 있어서, 초기 배지 pH가 5.5 내지 9.5이고 온도가 23℃ 내지 27℃인, 사이퍼메트린 오염 제거용 조성물.The composition according to claim 8, wherein the initial medium pH is 5.5 to 9.5 and the temperature is 23 to 27 ° C.
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