KR101742332B1 - 생체분자로 세포를 형질감염시키기 위한 조성물 - Google Patents

생체분자로 세포를 형질감염시키기 위한 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 식작용 세포로 각종 생체분자를 동시에 조절된 양으로 전달하기 위한 신규 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은, (1) 하기 생물학적 활성 성분 중 하나 이상: (a) 핵산 또는 이의 유도체; (b) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체; (c) 펩티드, 단백질, 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체; (d) 리포다당류 또는 이의 유도체; (e) 펩티도글리칸 또는 이의 유도체; (f) 탄수화물 또는 이의 유도체; (g) 지질 또는 이의 유도체; (h) 리포펩티드 또는 이의 유도체; (i) 금속 이온; (j) 티올; (k) 항생제 또는 이의 유도체; (l) 비타민 또는 이의 유도체; (m) 바이오플라보노이드 또는 이의 유도체; (n) 항산화제 또는 이의 유도체, (o) 면역 반응 조절자; (p) 항체; (q) 생물학적 활성 비금속; (r) 히스타민 또는 항히스타민; 및 (s) 키나제 억제제; 및 (2) 생물학적 활성 성분이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 하나 이상의 담체를 포함하는 생물학적 활성 조성물이다.

Description

생체분자로 세포를 형질감염시키기 위한 조성물{COMPOSITIONS FOR TRANSFECTION OF BIOMOLECULES INTO CELLS}
상호참조
본 PCT 출원은 "생체분자로 세포를 형질감염시키기 위한 조성물"이란 명칭으로 2009년 4월 20일자 출원된 Grandics 등의 미국 가출원 61/170,945호를 우선권 주장하며, 이 문헌은 본 명세서에 그 전문이 참고문헌으로 인용된다.
본 발명은 포유동물 세포로 생물학적 활성 분자를 도입(형질감염)시킬 수 있는 조성물을 제공한다. 핵산의 형질감염은 시약(예, DEAE-덱스트란, 인산칼슘, 리포펙틴, 바이러스 벡터), 전기천공, 유전자총 또는 현미주사와 같은 다양한 방법을 이용하는 분자 생물학의 잘 개발된 분야이다. 단백질 전달 방법은 또한 양이온성 지질, 리포솜 및 운반 펩티드를 포함한다. 탄수화물의 형질감염은 특정 금속의 제어 용량 도입과 더불어 잘 개발되어 있지 않다. 또한, 수지상 세포, 대식 세포 및 B 세포를 비롯한 식작용 세포와 같은 특정 세포 하위집합으로 다수의 생물학적 활성 성분(핵산 및 유도체, 리포펩티드, 리포다당류, 펩티도글리칸, 지질, 단백질 및 펩티드, 이온, 티올 화합물, 항생제, 비타민, 바이오플라보노이드, 항산화제 등)의 제어 용량 동시 전달을 가능하게 하는 형질감염 방법을 개발하는 것이 중요하다. 이들 분자는 물리화학적 특성이 매우 상이하여 생체내에서 비특이적으로 광범위 세포 유형을 표적으로 하는 현재의 전달 비히클 안으로 혼입되는 것이 방해될 수 있다. 따라서, 식작용 세포 안으로 가능한 광범위의 생체분자의 동시 형질감염에 대하여 시험관내 및 생체내 모두에서 기능하는 신규한 세포 전달계가 필요하다.
발명의 개요
본 발명에 따르면 다양한 생체분자를 식작용 세포 안으로 동시에 제어된 용량으로 전달하기 위한 신규한 조성물이 개시된다.
따라서, 본 발명의 한 측면은
(1) 이하의 생물학적 활성 성분
(a) 핵산 또는 이의 유도체;
(b) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체;
(c) 펩티드, 단백질 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체;
(d) 리포다당류 또는 이의 유도체;
(e) 펩티도글리칸 또는 이의 유도체;
(f) 탄수화물 또는 이의 유도체;
(g) 지질 또는 이의 유도체;
(h) 리포펩티드 또는 이의 유도체;
(i) 금속 이온;
(j) 티올;
(k) 항생제 또는 이의 유도체;
(l) 비타민 또는 이의 유도체;
(m) 바이오플라보노이드 또는 이의 유도체;
(n) 항산화제 또는 이의 유도체;
(o) 면역 반응 조절자;
(p) 항체;
(q) 생물학적으로 활성인 비금속;
(r) 히스타민 또는 항히스타민; 및
(s) 키나제 억제제
중 적어도 하나: 및
(2) 생물학적 활성 성분이 식작용 세포에 의하여 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 조성물을 식작용 세포에 전달하기에 효과적인 1 이상의 담체
를 포함하는 생물학적 활성 조성물이다.
상기 조성물에서, 분자는 혼합물로서 존재할 수 있다. 이와는 다르게, 분자는 화학적으로 함께 결합된다. 담체는 일반적으로 미립자이다. 바람직하게는, 미립자는 좁은 크기 분포 범위를 가진다. 미립자는 다공성 또는 비다공성일 수 있다. 일반적으로, 미립자는 직경이 약 10 μm 미만이고, 더 일반적으로, 미립자는 직경이 약 5 μm 미만이다. 일반적으로, 미립자는 셍체중합체로 이루어진다. 한 대안에서, 성분들은 미립자에 비공유적으로 부착된다. 다른 대안에서, 성분들은 미립자에 공유적으로 부착된다.
본 발명의 다른 측면은 세포 배양조직 또는 세포 하위집합 또는 식물, 동물 또는 인간 대상과 같은 다세포 유기체에서 생물학적 반응을 유도하는 방법으로서, 상기 방법은 미립자와 회합된 선택된 생물학적 활성 성분을 포함하는 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함하며, 상기 미립자는 병원균보다 작거나 동일한 크기 범위에 있다.
본 발명에 따르면, 조성물의 투여는 세포 배양조직에서 또는 숙주로의 점막 경로, 비경구 경로 또는 피부 경로를 통해 수행될 수 있다. 이와는 다르게 다른 투여 경로가 이용될 수 있다.
본 발명의 따른 양태는 급성 감염, 알러지, 천식, 자가면역 병태 및 암으로 이루어지는 군에서 선택되는 만성 염증 질환 또는 종양 전이의 영향을 연구하기 위한 방법으로서,
(1) 알러지, 천식, 자가면역 병태, 암 및 종양 전이로 이루어지는 군에서 선택되는 병태에 감수성인 동물 도델을 제공하는 단계;
(2) 상기 동물 모델에 본 발명에 따른 조성물을 투여하여 조성물의 투여로 인한 면역 반응을 통해 동물 모델에서 감염을 치료 또는 예방하는 단계로서, 상기 조성물에서 미립자는 병원체와 동일한 크기 범위에 있고 상기 조성물은 면역 활성 항원 또는 항원 에피토프를 포함하며 상기 면역 활성 항원 또는 항원 에피토프는 펩티드, 단백질, 재조합 펩티드 또는 멀티펩티드 또는 재조합 단백질인 단계,
(3) 알러지, 천식, 자가면역 병태, 암 및 종양 전이로 이루어지는 군에서 선택되는 병태에 대한 단계(2)에서 투여된 조성물의 효과를 측정하는 단계
를 포함한다.
바람직한 구체예의 설명
본 발명은 조성물 및 이러한 조성물을 특정 세포 군집에 표적화하고 동물 모델에서 면역 반응을 유도하는 방법을 개시한다.
상호 배타적 물리화학적 특성을 갖는 생물학적 활성 분자의 제어 용량 전달을 위한 제제 및 전달 비히클을 제조할 필요가 있다. 예컨대, 핵산 또는 리포다당류는 폴리아민 분자, 염기성 펩티드 및/또는 전이 금속(예, Zn 이온)의 존재하에 침전되므로, 이들을 다른 생물학적 활성 분자와 혼합 및 동시 투여가 불가능하나 특정 생리학적 반응(예, 방어 면역)을 유발시키기 위해 세포에의 제어 용량 투여가 필요하다. 양이온성 지질/리포솜 전달 비히클은 양이온성 분자의 전달에 효과적이지 않다. 우리는 리간드의 선택적 연속적 부착이 가능하므로 병원체 크기의 미립자가 매우 다른 물리화학적 특성의 생체분자(본 명세서에서 생물학적 활성 성분이라고도 함)의 전달을 위한 최적의 방법을 제공하는 것으로 추론하였다. 따라서, 다수의 식작용 세포로 생물학적 활성 분자의 표적 투약이 본 발명에 의해 실시될 수 있다.
우리는 천연 아가로스 또는 다른 생분해성 담체와 같은 다당류로 구성된 담체에 의하여 특정 세포로 생체 활성 분자를 표적화하는 것을 조사하였다. 아가로스는 천연 다당류, 포유동물 세포와 상용성이고 생분해가능한 D-갈락토스 중합체라는 장점이 있다. 비경구 투여된 아가로스 미립자는 약한 대식작용 세포 활성 용량 및 수산화알루미늄에 필적하는 보조약 특성을 나타내는 것으로 발견되었다(Gronlund H. et al., Carbohydrate-based particles: a new adjuvant for allergen-specific immunotherapy. Immunology, 2002; 107, 523-529).
최종 사용자의 관점에서, 조성물이 냉동 보관을 필요로 하지 않고 장기 저장 안정성을 갖는 것이 중요하다. 아가로스 입자는 이들 요건에 부합한다. 또한, 조성물의 투여가 가능한 간단한 것이 중요하다. 따라서, 점막 투여가능한 조성물은 비경구에 비하여 유리하다. 그러나, 점막 도포는 소화계의 이화 효과로 인하여 안정성 문제가 있었다.
우리는 다공성 아가로스 매트릭스에 커플링된 생체분자가 위장관 내부에서의 분해로부터 보호될 수 있다고 추론하였다. 또한, 아가로스 미립자(5 ㎛ 미만)의 크기는 입자가 파이어판[Peyer's patch(PP)]를 통과하기에 적당할 수 있다.
우리는 마이코플라즈마 항원공격 전에 본 발명 조성물을 동물에 투여할 경우 상당한 정도의 면역 보호가 마이코플라즈마 갈리셉티컴(Mycoplasma gallisepticum)의 감염 균주에 대하여 달성될 수 있음을 동물 모델계에서 정립하였다. 또한, 특징적인 병리학적 증상의 반전이 또한 미리 감염시킨 동물에서 관찰되어 이러한 미립자가 감염된 동물의 치료에 효과적임을 암시하였다. 이것은 다양한 미생물 균주의 보편적인 항생제 내성 때문에 중요하다. 또한, 항원을 포함한 미립자를 이용하여 문헌에 개시된 100 μg 이상과 대조적으로 본 발명에 의하여 보호 반응을 유도하는 데 동물당 매우 소량의 항원(1∼10 μg)이 필요한 것으로 발견되었다(Brayden, D. 2001 European Journal of Pharmaceutical Sciences 14:183-189). 이것은 면역 조절자 입자(들)가 동물의 소화관을 지나가는 동안 분해되지 않으며 효과적인 방식으로 표적 점막 면역 세포에 전달됨을 시사한다.
생체 활성 분자는 미립자에 비공유적으로 또는 공유적으로 부착될 수 있다. 공유 부착 방법은 업계에 공지이며 예컨대 본 명세서에 참고문헌으로 인용된 문헌들[P. Tijssen, "Practice and Theory of Enzyme Immunoassays" (Elsevier, Amsterdam, 1985, pp. 283-289, in S. S. Wong, "Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking" (CRC Press, Boca Raton, Florida, 1993), in T. E. Creighton, ed., "Protein Function: A Practical Approach" (IRL Press, Oxford, 1989), and in G. T. Hermanson, "Bioconjugate Techniques" (Academic Press, San Diego, 1996)]에 개시된다. 일반적으로, 미립자가 아가로스와 같은 생분해성 천연 다당류인 경우, 생체 활성 분자는 생분해성 천연 다당류의 중합체쇄의 히드록실기에 부착된다. 일반적으로, 추후의 친핵 치환을 위한 양호한 이탈기를 갖는 중간 반응성 유도체를 형성하는 특정 화합물은 다당류의 히드록실 잔기를 활성화시킬 수 있다. 이들 활성화된 히드록실과 아민과 같은 친핵체(예컨대, 단백질 또는 펩티드에서 리신기)의 반응으로 생분해성 천연 다당류의 중합체쇄에 생체 분자를 가교결합시키는 안정한 공유 결합이 얻어진다. 적당한 시약은 카르보닐디이미다졸, 클로로포르메이트 유도체, 트레실 클로라이드, 토실 클로라이드, 브롬화시안, 디비닐술폰, 염화시안 및 비스-에폭시드를 포함한다. 이와는 다르게, 아가로스와 같은 탄수화물 중합체의 히드록실기는 클로로아세트산으로 변성되어 카르복실레이트 작용기를 생성할 수 있다. 다른 대안으로서, 아민 작용기는 다당류에서 생성될 수 있으며, 탄수화물 분자 또는 생성된 알데히드의 환원 말단은 짧은 사슬 길이(즉, 상기 쇄에서 일반적으로 약 6 탄소 원자 미만)의 디아민 화합물과 반응하여 추후 컨쥬게이팅 반응에 이용될 수 있는 짧은 알킬아민 스페이서를 생성할 수 있다. 히드라지드 기도 유사하게 비스-히드라지드 화합물을 이용하여 생성될 수 있다. 생성되는 작용기는 이후 다양한 반응을 이용하여 생체분자에 커플링될 수 있다. 예컨대, 카르복실기가 생성되는 경우, 이들은 혼합 무수물법, 디시클로헥실카르보디이미드를 사용하는 카르보디이미드법 또는 N-히드록시숙신이미드 에스테르법에 의해 단백질 또는 펩티드에 컨쥬게이팅될 수 있다. 지방족 아민은 카르보디이미드, 톨릴렌-2,4-디이소시아네이트 또는 말레이미드 화합물, 특히 말레이미드 유도체의 N-히드록시숙신이미드 에스테르를 포함하여 여러 방법에 의해 단백질 또는 펩티드에 컨쥬게이팅될 수 있다. 이러한 화합물의 예는 4-(N-말레이미도메틸)-시클로헥산-1-카르복실산이다. 다른 예는 m-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르이다. 사용될 수 있는 또 다른 시약은 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오) 프로피오네이트이다. 또한, 디메틸피멜이미데이트, 디메틸아디프이미데이트 또는 디메틸수베르이미데이트와 같은 이작용성 에스테르를 이용하여 아미노기 함유 분자를 단백질에 커플링시킬 수 있다. 고체 지지체에 펩티드, 단백질 및 탄수화물을 포함하는 화합물 및 다른 화합물을 공유 결합시키기 위한 다른 방법은 업계에 공지되어 있다. 비공유 결합 방법은 수소 결합, 소수성 결합, 금속 킬레이트 및 비공유 상호작용을 안정화시킬 수 있는 염 결합과 같은 다양한 비공유 상호작용에 따라 달라진다.
일반적으로, (또한 본 명세서에 생물학적 활성 성분으로서 개시된) 전달될 수 있는 생체분자는
(1) 핵산 또는 이의 유도체;
(2) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체;
(3) 펩티드, 단백질 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체;
(4) 리포다당류 또는 이의 유도체;
(5) 펩티도글리칸 또는 이의 유도체;
(6) 탄수화물 또는 이의 유도체;
(7) 지질 또는 이의 유도체;
(8) 리포펩티드 또는 이의 유도체;
(9) 금속 이온;
(10) 티올;
(11) 항생제 또는 이의 유도체;
(12) 비타민 또는 이의 유도체;
(13) 바이오플라보노이드 또는 이의 유도체;
(14) 항산화제 또는 이의 유도체;
(15) 면역 반응 조절자;
(16) 항체;
(17) 생물학적으로 활성인 비금속;
(18) 히스타민 또는 항히스타민; 및
(19) 키나제 억제제
중 적어도 하나이다.
본 명세서에서 사용될 때, 용어 "핵산"은 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태 및 코딩 또는 비코딩(예, "안티센스") 형태를 포함하는 데옥시리보뉴클레오티드 또는 리보뉴클레오티드 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드를 의미한다. 상기 용어는 천연 뉴클레오티드의 공지된 유사체를 함유하는 핵산을 포함한다. 상기 용어는 또한 변형된 또는 치환된 염기가 상보형 뉴클레오티드의 왓슨-크릭(Watson-Crick) 결합 또는 아연 손가락 단백질과 같은 특이적으로 결합하는 뉴클레오티드 서열의 결합을 방해하지 않는 한 변형된 또는 치환된 염기를 포함하는 핵산을 포함한다. 상기 용어는 또한 합성 주쇄를 갖는 핵산 유사 구조를 포함한다. 본 발명에 의하여 제공되는 DNA 주쇄 유사체는 포스포디에스테르, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트, 메틸포스포네이트, 포스포르아미데이트, 알킬 포스포트리에스테르, 술파메이트, 3'-티오아세탈, 메틸렌(메틸이미노), 3'-N-카르바메이트, 모르폴리노 카르바메이트 및 헵티드 핵산(PNA)을 포함하며, 문헌[Oligonucleotides and Analogues, a Practical Approach, edited by F. Eckstein, IRL Press at Oxford University Press (1991); Antisense Strategies, Annals of the New York Academy of Sciences, Volume 600, Eds. Baserga and Denhardt (NYAS 1992); Milligan (1993) J. Med. Chem. 36:1923-1937; Antisense Research and Applications (1993, CRC Press)]이 참조된다. PNA는 N-(2-아미노에틸) 글리신 단위와 같은 비이온성 주쇄를 함유한다. 포스포로티오에이트 결합은 예컨대 문헌(미국 특허 6,031,092호; 6,001,982호; 5,684,148호; 또한, WO 97/03211호, WO 96/39154호, Mata (1997) Toxicol. Appl. Pharmacol. 144:189-197 참조)에 개시된다. 상기 용어에 포함되는 다른 합성 주쇄는 메틸포스포네이트 결합 또는 교대 메틸포스포네이트 및 포스포디에스테르 결합(예컨대 미국 특허 5,962,674호; Strauss-Soukup(1997) Biochemistry 36:8692-8698 참조), 및 벤질포스포네이트 결합(예컨대 미국 특허 5,532,226호; Samstag (1996) Antisense Nucleic Acid Drug (Dev 6:153-156) 참조)을 포함한다.
본 명세서에서 사용될 때, 용어 "핵산"은 또한 DNA 및 RNA, 그리고 천연 발생 및 합성 형태의 DNA 및 RNA, 그리고 RNA-DNA 하이브리드를 포함한다. DNA에 관하여, 용어 "핵산"은 단일 가닥 및 이중 가닥 DNA, 그리고 부분 이중 가닥 DNA를 포함하며, 선형 및 원형 DNA 그리고 메신저 RNA(mRNA)의 역전사에 의하여 제조된 cDNA를 더 포함한다. RNA에 대하여, 용어 "핵산"은 리보솜 RNA(rRNA), 운반 RNA(tRNA) 및 메신저 RNA(mRNA)와 같은 RNA 형태, 및 특정 유전자의 발현을 방해하는 RNA 간섭 경로에서 활성인 단부에 2-뉴클레오티드 3' 오버행을 갖는 20∼25 뉴클레오티드 길이의 짧은 이중 가닥 RNA 분자인 짧은 간섭 RNA(siRNA) 및 소형 헤파린 RNA와 같은 RNA 분자를 포함한다. 본 발명에 포함될 수 있는 핵산 부류의 다른 예는 마이크로 RNA이다. 이들은 여러 조직에서의 세포 발달 및 분화에서 중추적인 역할을 하는 강력한 유전자 발현 조절자인 비코딩 올리고뉴클레오티드이다. 조절이상 마이크로 RNA 수준은 여러 질병과 관련된다. 본 발명에 포함될 수 있는 다른 유형의 핵산은 B-세포 및 수지상 세포의 세포내 구획에서 발현되는 Toll 유사 수용체(TLR) 3와 상호작용하는 것으로 공지된 면역자극제인 폴리 I:C (실시예 4)이다. 폴리 I.C는 일부 바이러스에 존재하고 TLR3의 "천연" 자극제인 이중 가닥 RNA와 구조적으로 유사하다. 따라서, 폴리 I:C는 이중 가닥 RNA의 합성 유사체인 것으로 고려될 수 있다. Toll 유사 수용체 7, 8 및 9는 모두 병원체 유래 핵산 또는 올리고뉴클레오티드의 감지에 관여한다.
많은 뉴클레오티드 및 뉴클레오시드는 생물학적으로 활성인 것으로 공지되어 있다. 예로는 아데노신 트리포스페이트(ATP), 구아노신 트리포스페이트(GTP) 및 사이클릭 AMP(cAMP)를 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. ATP 및 GTP는 에너지원이지만, cAMP는 많은 신호 전달 체계에서 신호전달 조절제 또는 2차 메신저로서 작용한다. 다른 생물학적으로 활성인 뉴클레오티드 및 뉴클레오시드가 당해 분야에 공지되어 있다.
단백질로는 효소, 막 단백질, 분비 단백질, 수송 단백질, 수용체 단백질, 구조 단백질, 항체, 항체 단편, 및 다른 생물학적 활성 단백질이 포함된다. 본원에서 사용되는 "단백질"이란 용어는 단일 폴리펩티드 사슬을 포함하는 단백질 및 다수의 폴리펩티드 사슬을 포함하는 단백질 둘 다를 포함하며, 이것을 종종 "서브유닛"이라 칭하고, 단백질이 서브유닛을 포함할 때, 서브유닛은 공유 또는 비공유 상호작용에 의해 함께 연결될 수 있다. 본원에서 "단백질"이란 언급은 복수의 서브유닛 단백질의 개별 서브유닛에 대한 언급을 포함한다. 펩티드는 약 50개 미만의 길이의 아미노산의 폴리-α-아미노산 사슬이고; 폴리-α-아미노산의 더 긴 사슬은 일반적으로 단백질 또는 단백질의 서브유닛으로 분류된다. 많은 펩티드는 생물학적으로 활성이고; 예로는 티뮬린, 타키키닌 펩티드, 예컨대 P 물질 및 뉴로키닌 A 및 B, 혈관활성 장 펩티드, 엔케팔린 펩티드, 항균 염기성 펩티드, 안지오텐신, 프롤린 풍부 펩티드, 칼시토닌, 아밀린, 글루카곤, 및 세크레틴을 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 본 발명에 따른 조성물에 도입될 수 있는 생물학적 활성을 갖는 다른 펩티드로는 다염기성 펩티드, 예컨대 폴리리신 및 항균 염기성 펩티드뿐만 아니라 MHC 1 및 MHC 2 펩티드 항원결정부위 혼합물(G1/9+G2/4)(실시예 4) 또는 펩티드 B3(실시예 8-10)과 같은 펩티드 항원결정부위의 혼합물 및 펩티드 항원결정부위를 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 많은 다른 펩티드가 당해 분야에 공지되어 있다. 또한, 재조합 단백질, 재조합 펩티드, 및 멀티펩티드가 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 생물학적 활성 단백질 또는 펩티드의 범위 내에 있다. 추가로, VEGF의 인산화를 표적으로 하는 베바시주맙, Erb1의 인산화를 표적으로 하는 세툭시맙, Erb2의 인산화를 표적으로 하는 트라스투주맙, VEGF의 인산화를 표적으로 하는 라닙주맙, 및 EGFR의 인산화를 표적으로 하는 파니투무맙과 같은 단백질 키나제 억제제로서 작용하는 단일클론 항체가 본 발명에 따른 조성물에 포함될 수 있는 생물학적 활성 단백질의 범위 내에 있다. 또한, 세포 증식, 대사작용 및 혈관형성을 조절하는 조성물 내에 mTOR의 억제제가 포함될 수 있다. 단백질 mTOR(라파마이신의 포유동물 표적)은 또한 FK506 결합 단백질 12-라파마이신 연관 단백질 1(FRAP1)로서 공지되어 있다. 세포 성장, 세포 증식, 세포 운동성, 세포 생존, 단백질 합성 및 전사를 조절하는 것이 세린/트레오닌 단백질 키나제이다. mTOR의 억제제로는 라파마이신, FK506(타크롤리무스), 및 이들의 유사체 및 유도체를 들 수 있다.
리포글리칸으로도 알려진 리포다당류는 공유 결합에 의해 연결된 다당류와 지질로 이루어지는 큰 분자이다. 이것은 그람 음성 박테리아의 외막에 위치하여; 내독소로서 작용하고 강력한 면역 반응을 이끈다. 리포다당류는 (1) 다당류(O) 측쇄; (2) 코어 다당류(몇몇 종에서는 코어 올리고당류); 및 (3) 지질 A의 3 성분을 포함한다. 리포다당류는 특이적 구조를 제시하기 위해 수식될 수 있다.
펩티도글리칸은 세포벽을 형성하는 박테리아의 혈장 막의 외부에 망과 같은 층을 형성하는 당과 아미노산으로 이루어진 중합체이다. 당 성분은 β-(1,4) 결합 N-아세틸글루코사민 잔기 및 N-아세틸무람산 잔기가 교대하여 이루어진다. 3개 내지 5개의 아미노산의 펩티드 사슬이 N-아세틸무람산에 결합한다. 펩티드 사슬은 3차원 망과 같은 층을 형성하는 다른 가닥의 펩티드 사슬에 가교결합될 수 있다. 박테리아 세포벽 내의 펩티도글리칸 층은 2개의 교대하는 아미노 당의 선형 사슬, 즉 N-아세틸글루코사민(GIcNAc 또는 NAG) 및 N-아세틸무람산(MurNAc 또는 NAM)으로부터 형성된 결정 격자 구조이다. 교대하는 당은 β-(1,4)-글리코시드 결합에 의해 연결된다. 각각의 MurNAc는, 에스체리치아 콜라이(그람 음성)의 경우에, D-알라닌, D-글루탐산, 및 메소-디아미노피멜산 또는, 스타필로코커스 우레우스(그람 양성 박테리아)의 경우에, L-알라닌, D-글루타민, L-리신, 및 D-알라닌을 포함하는 짧은(4개 내지 5개 잔기의) 아미노산 사슬에 결합된다. L-아미노산을 제외하고 이들 아미노산들은 단백질 내에 있지 않고 대부분의 펩티다제에 의한 공격에 대한 보호를 돕는 것으로 생각된다. 트랜스펩티다제로서 알려진 효소에 의한 상이한 선형 아미노 당 사슬에서의 아미노산 사이의 가교결합은 강하고 견고한 3차원 구조를 생성시킨다. 특이적 아미노산 서열 및 분자 구조는 박테리아 종에 따라 변한다.
탄수화물로는 단당류, 올리고당류, 및 다당류를 들 수 있다. 다당류로는 이종다당류 및 단순다당류를 들 수 있고; 이것은 분지형 중합체 및 선형 중합체 둘 다를 포함한다. 많은 탄수화물은 면역 반응 및 신호 전달에 관여하는 다른 분자 및 수용체 중요한 성분이다.
지질로는 지방산, 트리아실글리콜, 글리세로포스포리피드, 예컨대 포스파티딘산, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜콜린, 포스파티딜이노시톨, 포스파티딜글리콜, 및 디포스파티딜글리콜, 세라마이드, 스핑고리피드, 예컨대 스핑고미엘린 및 세레브로시드, 및 스테롤, 예컨대 콜레스테롤을 들 수 있다. 지질은 세포막의 중요한 성분이고 세포막의 구조를 유지하고 용질에 대한 이의 투과성을 조절하는 데 중요한 역할을 한다. 지질은 또한 면역 반응을 유도하고 및 조절하는 데 참여한다.
리포펩티드는 펩티드에 공유 결합된 지질로 이루어지는 분자이다. 이것은 박테리아에 의해 발현되고 TLR1 및 다른 Toll 유사 수용체에 의해 특이적으로 결합된다. 예로는 서펙틴 및 답토마이신을 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 리포펩티드는 전문이 본원에 참조문헌으로 포함된 미국 특허 제6,911,525호(Hill et al.)에 기재되어 있다.
Zn2+, Cu2+, Fe2+, Fe3+ 및 Mn2+와 같은 금속 이온은 대개 보조인자로서 효소 반응에 관여한다. 추가로, 양으로 하전된 금속 이온은 아연 손가락 단백질의 일부로서 음으로 하전된 핵산에 결합할 수 있고, 양으로 하전된 금속 이온, 특히 Fe2+는 또한 미오글로빈 및 헤모글로빈과 같은 산소 수송 단백질의 일부이다.
티올은 생물학적 환원제이고, 산화된 시스테인 잔기를 이의 환원된 형태로 전환시키는 단백질에서 이황화 결합을 환원시키는 것과 같은 다수의 생물학적으로 중요한 산화환원 과정에 참여한다. 생물학적 활성 티올 분자의 예로는 글루타티온 및 N-아세틸시스테인을 들 수 있고, 둘 다 면역 반응에서 중요한 역할을 담당한다.
항생제는 통상적으로 바람직하지 않은 미생물을 사멸시키거나 이의 성장을 차단하는 박테리아 또는 진균으로부터 생성되거나 유도되는 분자이다. 많은 항생제가 당해 분야에 알려져 있고; 예를 들면, 항생제로는 오플록사신, 티아물린, 테트라사이클린, 에리쓰로마이신, 페니실린, 메티실린, 나프실린, 옥사실린, 클록사실린, 디클록사실린, 암피실린, 아목시실린, 바캄피실린, 카르베니실린, 티카르실린, 메즐로실린, 피페라실린, 세팔로스포린, 겐타마이신, 토브라마이신, 아미카신, 네틸마이신, 카나마이신, 네오마이신, 클라리쓰로마이신, 아지쓰로마이신, 클린다마이신, 스펙티노마이신, 반코마이신 및 리파마이신을 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 다른 항생제의 사용이 가능한다. 상기 항생제 및 다른 항생제의 구조 및 사용은 본원에 참조문헌으로 포함된 문헌[J. G. Hardman & L. G. Limbird, eds., Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics(9th ed., McGraw-Hill, New York, 1996), pp. 1073-1153]에 개시되어 있다. 또한, 특정한 단백질 또는 단백질의 유도체는 항박테리아 활성을 갖고 본원에 사용되는 "항생제"의 정의에 포함된다. 이것은 락토페린 및 락토페리신을 포함한다. 이의 항균 효과 이외에, 항생제는 또한 선천성 면역 반응 및 후천성 면역 반응 둘 다에 영향을 미친다.
비타민은 통상적으로 생화학 반응에서 조효소 또는 보조인자로서 작용한다. 비타민으로는 비타민 A(레티노이드), 비타민 B1(티아민), 비타민 B2(리보플라민), 비타민 B3(니아신 또는 니아신아미드), 비타민 B6(피리독살 포스페이트, 피리독사민), 비타민 B7(비오틴), 비타민 B9(엽산), 비타민 B12(시아노코발라민), 비타민 C(아스코르브산), 비타민 D(에르고칼시페롤 또는 콜레칼시페롤), 비타민 E(토코페롤 및 토코트리에놀), 및 비타민 K(필로퀴논 및 메나퀴논)를 들 수 있다. 비타민은 또한 면역 반응에 직접적으로 영향을 미칠 수 있다.
바이오플라노보이드는 생물학적 항산화제이고, 다른 기능 중에서, 자유 라디칼에 의해 생물 체계에서 야기되는 손상을 예방 또는 지연시킨다. 예를 들면, 바이오플라노보이드로는 쿼세틴, 쿼시트린, 켐페롤, 켐페롤 3-루티노시드, 3'-메톡시 켐페롤 3-루티노시드, 5,8,4'-트리하이드록실-6,7-디메톡시플라본, 카테친, 에피카테틴, 에피카테틴 갈레이트, 에피갈로카테틴 갈레이트, 헤스페리딘, 나린긴, 루틴, 빅세틴, 프로안트로시아니딘, 아피게닌, 미리세틴, 트리세틴, 쿼세틴, 나린긴, 켐페롤, 루테올린, 바이플라보닐, 실리빈, 실리디아닌, 및 실리크리스틴, 또는 이들 화합물들의 유도체 및 글리코시드를 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 바이오플라노보이드는 예를 들면 참조문헌으로 본원에 포함된 미국 특허 제6,576,271호(Nair et al.)에 기재되어 있다.
생물학적 항산화제는 단백질, 핵산, 탄수화물, 또는 지질을 산화시켜 세포 손상에 기여할 수 있는 생물학적 산화 반응을 억제하거나, 늦추거나, 지연시키거나, 예방하는 특성을 갖는다. 이러한 생물학적 항산화제는 통상적으로 과산화수소(H2O2), 차아염소산(HOCl), 및 자유 라디칼, 예컨대 하이드록실 라디칼(·OH) 및 슈퍼옥사이드 음이온(O2 -)과 같은 반응성 산소 종에 의해 야기되는 손상을 예방함으로써 작동한다. 이러한 생물학적 항산화제로는 상기 기재된 글루타티온과 같은 티올, 비타민, 예컨대 비타민 A, 비타민 C 및 비타민 E, 및 커쿠민, 요산, 리포산, 카로텐, 및 유비퀴놀(조효소 Q)을 들 수 있다. 다른 생물학적 항산화제가 당해 분야에 공지되어 있다.
면역 반응 조절자는 면역계를 활성화한다. 예로는 이미퀴모드를 들 수 있다. 이미퀴모드는 통상 세포 표면에서 병원체 인지에 관여하는 Toll 유사 수용체 7(TLR7)을 통해 면역 세포를 활성화한다. TLR-7을 통해 이미퀴모드에 의해 활성화된 세포는 사이토킨(주로 인터페론-α(IFN-α), 인터류킨-6(IL-6) 및 종양 괴사 인자-α(TNF-α))를 분비한다. 이미퀴모드가, 피부에 적용될 때, 랑게르한스 세포의 활성화를 발생시킬 수 있고, 이것이 후속적으로 후천성 면역계를 활성화하는 국소 림프절로 이동한다는 증가가 있다. 이미퀴모드에 의해 활성화되는 다른 세포 유형으로는 자연 살해 세포, 대식작용 세포 및 B 림프구를 들 수 있다. 새로운 연구는 아편 성장 인자 수용체(OGFr)의 수치를 증가시킴으로써 이미퀴모드의 항증식 효과가 발휘된다는 것을 보여준다. siRNA 기술에 의한 OGFr 기능의 차단은 이미퀴모드의 임의의 항증식 효과를 손실시킨다.
항체의 구조 및 활성은 당해 분야에 널리 공지되어 있다. 항체는 특이적으로 상보적인 비공유 상호작용을 통해 이의 대응하는 항원에 결합한다. 항체는 면역계가 외래라 인식하는 물질에 의한 항원 공격에 대한 면역 반응의 일부로서 모든 척추동물에서 만들어지는 면역글로불린이라 불리는 혈청 당단백질의 일반적인 클래스에 속한다. 천연 항체는 이황화 결합에 의해 함께 연결된 2개의 동일한 중쇄(H)(각각 분자량이 약 50 kDa), 및 2개의 동일한 경쇄(L)(각각 분자량이 약 25 kDa)로 이루어지는 Y형 단백질이다. 각각의 천연 항체는 가변 영역으로 지정된, 더 구체적으로 가변 영역 내 초가변 영역으로 지정된 중쇄 및 경쇄 둘 다의 특정한 일부분에 의해 형성되는 2개의 항원 결합 부위를 갖는다. 항체 분자에 대한 항원의 특이적 결합은 가변 영역과 구별되는 불변 영역으로 지정된 중쇄 및 경쇄의 일부분을 통해 다수의 생물학적 기능을 활성화한다. 이 생물학적 기능은 보체 활성화, 병원체의 옵소닌작용 및 다수의 세포 유형의 활성화를 포함한다.
이 항체의 제법은 당해 분야에 널리 공지되어 있고 본원에서 추가로 기재할 필요는 없다. 일반적으로, 본 발명에 따른 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, 또는 IgY와 같은 임의의 클래스의 항체일 수 있지만, IgG 항체가 통상적으로 바람직하다. 항체는 인간, 쥐과(마우스 또는 랫트), 당나귀, 양, 염소, 토끼, 낙타, 말 또는 닭을 비롯한 임의의 포유동물 또는 조류 기원의 항체일 수 있다. 몇몇 대안에서, 항체는 2중 특이적일 수 있다. 항체에 대한 임의의 유형의 분자의 공유 결합에 의해 항체를 수식할 수 있다. 예를 들면, 항체 유도체는 예에 제한됨이 없이 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지된 보호기/차단기에 의한 유도체화, 단백질 분해, 세포 리간드 또는 다른 단백질에의 결합, 또는 당해 분야에 공지된 다른 수식 등에 의해 수신된 항체를 포함한다. 하이브리도마의 사용, 재조합, 및 파지 디스플레이 기법, 또는 이들의 조합을 비롯한 당해 분야에 공지된 아주 다양한 기법을 이용하여 단일클론 항체를 제조할 수 있다. 예를 들면, 당해 분야에 공지되어 있고 예를 들면 문헌[Harlow et al., "Antibodies: A Laboratory Manual", (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988); Hammerling, et al., in: Monoclonal Antibodies and T-CeII Hybridomas 563-681(Elsevier, N.Y., 1981)]에 교시되어 있는 기법을 비롯한 하이브리도마 기법을 이용하여, 또는 당해 분야에 공지된 다른 표준 방법에 의해 단일클론 항체를 제조할 수 있다. 본원에서 사용되는 "단일클론 항체"란 용어는 하이브리도마 기술을 통해 제조되는 항체로 제한되지 않는다. "단일클론 항체"란 용어는 이것이 제조되는 방법이 아니라 임의의 진핵생물, 원핵생물, 또는 파지 클론을 비롯한 단일클론으로부터 유도된 항체를 의미한다. 예를 들면, 파지 디스플레이 또는 다른 기법에 의해 적합한 항체를 제조할 수 있다. 추가로, 그리고 예에 제한됨이 없이, 인간 면역글로불린 서열로부터 유도된 항체 라이브러리를 사용하는 파지 디스플레이 방법을 비롯한 다양한 기법에 의해 그리고 기능적 내생 면역글로불린을 발현할 수 없지만, 인간 면역글로불린 유전자를 발현할 수 있는 형질전환 마우스의 사용에 의해 인간 항체를 제조할 수 있다. 예를 들면, 인간 중쇄 및 경쇄 면역글로불린 유전자 복합체를 마우스 배아 줄기 세포로 무작위로 또는 상동성 재조합에 의해 도입할 수 있다. 이 항체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 발현에 의해 항체를 또한 제조할 수 있다. 추가로, 본 발명에 따른 항체를 정제를 수월하게 하는 펩티드 태크와 같은 마커 서열에 융합할 수 있고; 적합한 태그는 헥사히스티딘 태그이다. 당해 분야에 공지된 방법에 의해 진단 또는 치료 물질에 항체를 또한 접합할 수 있다. 이러한 접합체를 제조하는 기법은 당해 분야에 널리 공지되어 있다.
이 단일클론 항체 및 키메라 항체, 인간화 항체, 및 단쇄 항체를 제조하는 다른 방법이 당해 분야에 공지되어 있다. 몇몇 경우에, 인간 단일클론 항체가 조성물에 사용하기에 적합하고, 당해 분야에 공지된 다수의 방법, 예컨대 파지 디스플레이 기법 및 인간 항체를 제조하도록 유전적으로 조작된 마우스에 의해 제조할 수 있다.
본원에 기재된 바대로, 달리 구체적으로 제한되지 않는 한, "항체"란 용어는 본원에 기재된 모든 유형의 항체, 예컨대 천연 항체, 단일클론 항체, 유전 조작 항체, 단쇄 항체, 유도체화 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체(이들로 제한되지는 않음) 및 다른 유형의 항체를 포함한다.
생물학적 활성 비금속은 필수 미량원소이고 비정상 아미노산 셀레노시스테인 및 셀레노메티오닌의 성분인 셀레늄을 포함한다. 인간에서, 셀레늄은 항산화제 효소, 예컨대 동물 및 일부 식물에서 발견되는 글루타티온 퍼옥시다제 및 특정 형태의 티오레독신 리덕타제의 환원을 위한 보조인자로서 작용하는 미량 원소 영양소이다.
히스타민은 히스티딘의 탈카르복실화 생성물이다. 히스타민은 적어도 4개의 명확한 수용체, H1 수용체, H2 수용체, H3 수용체, 및 H4 수용체에 작용한다. 이것은 혈관 투과성을 증가시키고 그 효과 및 다른 효과를 통한 염증 반응의 매개제이다. 항히스타민은 알레르기를 비롯한 다양한 염증 증상을 치료하기 위해 널리 사용된다. 항히스타민으로는 독세핀 히드로클로라이드, 카르비녹사민 말레에이트, 클레마스틴 푸마레이트, 디펜히드라민 히드로클로라이드, 디멘히드리네이트, 피릴라민 시트레이트, 트리펠렌나민 히드로클로라이드, 트리펠렌나민 시트레이트, 클로르페니라민 말레에이트, 브롬페니라민 말레에이트, 하이드록시진 히드로클로라이드, 하이드록시진 파모에이트, 시클리진 히드로클로라이드, 시클리진 락테이트, 메클리진 히드로클로라이드, 프로메타진 히드로클로라이드, 시프로헵타딘 히드로클로라이드, 페닌다민 타르테이트, 아크리바스틴, 세티리진 히드로클로라이드, 아젤라스틴 히드로클로라이드, 레보카바스틴 히드로클로라이드, 로라티딘, 데스로라티딘, 에바스틴, 미졸라스틴, 및 펙소페나딘, 및 이들의 염, 용매화물, 유사체, 동질체, 생동배체, 가수분해 생성물, 대사물질, 전구체, 및 프로드럭을 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다.
키나제 억제제는 단백질의 세린, 티로신, 트레오닌, 또는, 몇몇 경우에, 히스티딘 잔기의 인산화를 억제한다. 키나제 억제제는 소분자 키나제 억제제를 포함한다. 이러한 소분자 키나제 억제제의 예로는 EGFR 및 Her2/neu를 억제하고 N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노3-7-[[(3S)-테트라히드로-3-푸라닐]옥시]-6-퀴나졸리닐]-4(디메틸아미노)-2-부텐아미드의 화학 구조를 갖는 BIBW 2992, 티로신 키나제 효소를 억제하고 4-[(4-메틸피페라진-1-일)메틸]-N-[4-메틸-3-[(4-피리딘-3-일피리미딘-2-일)아미노]페닐]벤즈아미드의 화학 구조를 갖는 이마티닙(Gleevec), EGFR의 티로신 키나제 도메인을 억제하고 N-(3-클로로-4-플루오로-페닐)-7-메톡시-6-(3-모르폴린-4-일프로폭시)퀴나졸린-4-아민의 화학 구조를 갖는 게피니팁, VEGF를 억제하는 페갑타닙, 몇몇 단백질 키나제를 억제하고 4-[4-[[4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐]카바모일아미노]펜옥시]-N-메틸-피리딘-2-카복스아미드의 화학 구조를 갖는 소라페닙, 또한 몇몇 단백질 키나제를 억제하고 N-(2-클로로-6-메틸페닐)-2-[[6-[4-(2-하이드록시에틸)- 1-피페라지닐]-2-메틸-4-피리미디닐]아미노]-5-티아졸카복스아미드 1수화물의 화학 구조를 갖는 다사티닙, 몇몇 수용체 단백질 키나제를 억제하고 N-[2-(디에틸아미노)에틸]-5-[(Z)-(5-플루오로-1,2-디히드로-2-옥소-3H-인돌-3-일리딘)메틸]-2,4-디메틸-1H-피롤-3-카복스아미드의 화학 구조를 갖는 수니티닙, EGFR 티로신 키나제를 억제하고 N-(3-에티닐페닐)-6,7-비스(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4-아민의 화학 구조를 갖는 엘로티닙, 티로신 키나제 억제제이고 4-메틸-N-[3-(4-메틸-1H-이미다졸-1-일)-5-(트리플루오로메틸)페닐]-3-[(4-피리딘-3-일피리미딘-2-일)아미노]벤즈아미드의 화학 구조를 갖는 닐로티닙, 및 암유전자 EGFR 및 Her2/neu와 관련된 티로신 키나제 활성을 억제하고 N-[3-클로로-4-[(3-플루오로페닐)메톡시]페닐]-6-[5-[(2-메틸설포닐에틸아미노)메틸]-2-푸릴]퀴나졸린-4-아민의 화학 구조를 갖는 라파티닙을 들 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 라파마이신, FK506(타크롤리무스), 및 이들의 유사체 및 유도체를 비롯한 mTOR 억제제(이것으로 제한되지는 않음)와 같은 더 다른 소분자 키나제 억제제가 당해 분야에 공지되어 있다.
따라서, 본 발명에 따른 조성물은 임의의 적절한 조합으로 상기 기술된 1 이상의 생물학적 활성 성분을 포함할 수 있다. 본 발명에 따라 조성물에 도입될 수 있는 조합의 예는, (1) 핵산 또는 이의 유도체와 펩티드, 단백질, 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체; (2) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체와 펩티드, 단백질, 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체; (3) 탄수화물 또는 이의 유도체와 지질 또는 이의 유도체; (4) 탄수화물 또는 이의 유도체와 리포펩티드 또는 이의 유도체; (5) 핵산 또는 이의 유도체와 금속 이온; (6) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체와 금속 이온; (7) 펩티드, 단백질, 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체와 금속 이온; (8) 핵산 또는 이의 유도체와 티올; (9) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체와 티올; (10) 펩티드, 단백질, 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체와 티올; (11) 핵산 또는 이의 유도체와 항생제 또는 이의 유도체; (12) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체와 항생제 또는 이의 유도체; (13) 펩티드, 단백질, 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체와 항생제 또는 이의 유도체; (14) 핵산 또는 이의 유도체와 비타민 또는 이의 유도체; (15) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체와 비타민 또는 이의 유도체; (16) 펩티드, 단백질, 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체와 비타민 또는 이의 유도체; (17) 핵산 또는 이의 유도체와 바이오플라보노이드 또는 이의 유도체; (18) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체와 바이오플라보노이드 또는 이의 유도체; (19) 펩티드, 단백질, 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체와 바이오플라보노이드 또는 이의 유도체; (20) 핵산 또는 이의 유도체와 항산화제 또는 이의 유도체, (21) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체와 항산화제 또는 이의 유도체; 또는 (22) 펩티드, 단백질, 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체와 항산화제 또는 이의 유도체를 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 다른 조합도 가능하며, 예컨대 조성물은 3, 4, 5, 6, 또는 최대 16종의 생물학적 활성 성분을 포함한다. 복수개의 생물학적 활성 성분을 포함하는 다양한 조합물을 아래의 실시예 6-10에 기술한다. 정확한 성분 조합에 따라, 복수개의 성분들이 단일 반응으로 담체에 부가될 수 있으며; 다르게는, 복수 회차의 반응을 이용하여, 각 반응 회차에 단일 성분 또는 복수개의 성분을 부가할 수 있다. 복수 회차의 반응으로 또는 단일 회차 반응으로 부가되는 복수 성분들에 있어, 이들 조합의 예는 이하 실시예 6-10에 기술한다. 실시예 6에서, 생물학적 활성 성분은 오플록사신, 커큐민, 루틴, G1/9 펩티드(CKRNIFKSY)(서열번호 1), G2/4 펩티드(CQiDKNKPKYYILDMFPYPSG)(서열번호 2), 및 B3 펩티드(CKPKDMVDNYPSTWRERRRKKR)(서열번호 3)이다. 처음 3가지 성분(오플록사신, 커큐민, 및 루틴)을 1회차 반응에서 부가한다. 마지막 3가지 성분(G1/9 펩티드, G2/4 펩티드, 및 B3 펩티드)을 2회차 반응에서 부가한다. 실시예 7에서, 생물학적 활성 성분은 레티노산, 루틴, 루틴, G 1/9 펩티드, G2/4 펩티드, 및 B3 펩티드이다. 처음 2가지 성분(레티노산 및 루틴)을 1회차 반응에서 부가한다. 마지막 3가지 성분(G 1/9 펩티드, G2/4 펩티드, 및 B3 펩티드)을 2회차 반응에서 부가한다. 실시예 8에서, 생물학적 활성 성분은 IPS(리포다당류), PG(펩티도글리칸), DNA, 이미퀴모드, G1/9 펩티드, G2/4 펩티드, B3 펩티드, 노보바이오신, 글루타티온, 및 티아물린이다. 처음 4가지 성분(LPS, PG, DNA, 및 이미퀴모드)을 1회차 반응에서 부가한다. 그 다음 3가지 성분(G 1/9 펩티드, G2/4 펩티드, 및 B3 펩티드)을 2회차 반응에서 부가한다. 마지막 3가지 성분(노보바이오신, 글루타티온, 및 티아물린)을 3회차 반응에서 부가한다. 실시예 9에서, 생물학적 활성 성분은 LPS(리포다당류), PG(펩티도글리칸), DNA, 이미퀴모드, G1/9 펩티드, G2/4 펩티드, B3 펩티드, 레티노산, 및 티아물린이다. 처음 4가지 성분(LPS, PG, DNA, 및 이미퀴모드)을 1회차 반응에서 부가한다. 그 다음 3가지 성분(G 1/9 펩티드, G2/4 펩티드, 및 B3 펩티드)을 2회차 반응에서 부가한다. 마지막 2가지 성분(레티노산 및 티아물린)을 3회차 반응에서 부가한다. 실시예 10에서, 생물학적 활성 성분은 LPS(리포다당류), PG(펩티도글리칸), DNA, 이미퀴모드, G1/9 펩티드, G2/4 펩티드, B3 펩티드, 락토페리신, 및 티물린이다. 처음 4가지 성분(LPS, PG, DNA, 및 이미퀴모드)을 1회차 반응에서 부가한다. 그 다음 3가지 성분(G 1/9 펩티드, G2/4 펩티드, 및 B3 펩티드)을 2회차 반응에서 부가한다. 마지막 2가지 성분(락토페리신 및 티물린)을 3회차 반응에서 부가한다. 일부 경우에서, 복수개의 성분을 단일 회차 반응으로 부가할 경우, 정해진 순차적 순서로 성분들을 부가하는 것이 바람직할 수 있다. 예를 들어, G1/9 펩티드, G2/4 펩티드, 및 B3 펩티드가 단일 회차 반응으로 부가될 때, 이들을 순서(먼저 G 1/9 펩티드, 그 다음으로 G2/4 펩티드, 마지막으로B3 펩티드)대로 부가하는 것이 바람직하다.
따라서, 대체로, 본 발명에 따른 생물학적 활성 조성물은
(1) 하기 생물학적 활성 성분 (a)-(s) 중 1 이상:
(a) 핵산 또는 이의 유도체;
(b) 뉴클레오시드, 뉴클레오티드, 또는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 유도체;
(c) 펩티드, 단백질, 또는 펩티드 또는 단백질의 유도체;
(d) 리포다당류 또는 이의 유도체;
(e) 펩티도글리칸 또는 이의 유도체;
(f) 탄수화물 또는 이의 유도체;
(g) 지질 또는 이의 유도체;
(h) 리포펩티드 또는 이의 유도체;
(i) 금속 이온;
(j) 티올;
(k) 항생제 또는 이의 유도체;
(l) 비타민 또는 이의 유도체;
(m) 바이오플라보노이드 또는 이의 유도체;
(n) 항산화제 또는 이의 유도체;
(o) 면역 반응 조절자;
(p) 항체;
(q) 생물학적 활성 비금속;
(r) 히스타민 또는 항히스타민; 및
(s) 키나제 억제제; 및
(2) 생물학적 활성 성분이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성이 영향을 미치도록 식작용 세포에 조성물을 전달하는데 유효한 1 이상의 담체
를 포함한다.
일 별법에서, 조성물은 면역 활성 항원 또는 항원 에피토프를 포함할 수 있다. 면역 활성 항원 또는 항원 에피토프는 펩티드, 단백질, 재조합 펩티드 또는 멀티-펩티드, 또는 재조합 단백질일 수 있지만 이에 제한되는 것이 아니다. 조성물이 면역 활성 항원 에피토프를 포함할 경우, 이 조성물은 생체 내에서 방어 면역 반응을 유도할 수 있다.
다른 별법에서, 조성물은 이중 가닥 RNA, siRNA, 프리-miRNA, miRNA, 폴리 U 또는 GU-풍부 뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다.
조성물에서, 분자는 혼합물로서 존재할 수 있다. 다르게, 분자는 화학적으로 함께 연결될 수 있고; 이러한 별법에서 1 이상의 생물학적 활성 성분이 담체에 연결된다. 담체는 대체로 미립자이다. 바람직하게, 미립자는 크기 분포도 범위가 협소하다. 미립자는 다공성이거나 또는 비다공성일 수 있다. 전형적으로, 미립자는 직경이 약 10 ㎛ 보다 작고; 보다 전형적으로, 미립자는 직경이 약 5 ㎛ 보다 작다. 대체로 미립자는 생체중합체로 제조된다. 일 별법에서, 성분은 미립자에 비공유적으로 부착된다. 다른 별법에서, 성분은 미립자에 공유적으로 부착된다. 대체로, 미립자는 병원체와 동일한 크기 범위이다. 미립자가 병원체와 동일한 크기 범위일 경우, 조성물은 면역 활성 항원 항원 에피토프 또는 면역 조절제 또는 조절제들을 포함할 수 있고, 면역 활성 항원 또는 항원 에피토프는 펩티드, 단백질, 재조합 펩티드 또는 멀티-펩티드, 재조합 단백질, 지질, 탄수화물, 또는 이들의 조합일 수 있다. 이 조성물은 면역 활성 항원 또는 항원 에피토프와 면역 조절제 또는 조절제들 둘 모두를 포함할 수 있다.
일 별법에서, 1 이상의 생물학적 활성 성분은 담체에 가역적으로 결합된다. 1 이상의 생물학적 활성 성분은 이황화결합을 통해 담체에 가역적으로 결합될 수 있다. 다르게, 1 이상의 생물학적 활성 성분은 고정된 금속 킬레이트를 포함하는 결합부를 통해 담체에 가역적으로 결합될 수 있다. 고정된 금속 킬레이트는 아연, 구리, 철, 또는 다름 금속의 킬레이트를 포함할 수 있다. 다른 별법에서, 가역적 결합은 이온성 또는 소수성 결합일 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 세포 배양물, 세포 서브세트, 또는 다세포 유기체 예컨대 식물, 동물, 또는 인간 피험체에서 생물학적 반응을 유도하는 방법이고, 이 방법은 미립자와 회합시킨 선별된 생물학적 활성 성분을 포함하는 조성물의 양을 투여하는 단계를 포함하고, 상기 미립자는 병원체보다 작거나 또는 동일한 크기 범위이다. 투여량은 세포 배양물, 세포 서브세트, 또는 다세포 유기체 피험체에서 면역 반응을 유도하기에 충분하다. 이 방법이 세포 서브세트에서 생물학적 반응을 유도하는 방법일 경우, 조성물은 세포 배양물에 투여될 수 있다.
본 발명에 따라서, 조성물의 투여는 세포 배양물에서 또는 점막 경로, 비경구 경로, 또는 피부 경로를 통해 다세포 숙주, 예컨대 식물, 동물, 또는 인간에서 수행될 수 있다. 다른 투여 경로가 달리 이용될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물의 독성 및 효능은 예를 들어 LD50(개체군의 50%에 치명적인 용량) 및 ED50(개체군의 50%에서 치료적으로 유효한 용량)를 결정하기 위해, 세포 배양물 또는 실험 동물에서의 표준 약학 절차를 통해 확인할 수 있다. 독성 및 치료 효과 간 용량 비율은 치료 지수이고 LD50/ED50 비율로서 나타낼 수 있다. 큰 치료 지수를 나타내는 조성물이 바람직하다. 이들 세포 배양 분석 및 동물 실험에서 얻은 데이타는 인간 또는 다른 동물에서 사용하기 위한 용량 범위를 공식화하는데 이용될 수 있다. 이러한 조성물의 용량은 바람직하게 독성이 없거나 또는 거의 없는 E50을 포함하는 순환 농도 범위 내이다. 용량은 적용되는 제형 및 이용되는 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 다양할 수 있다.
본 발명의 다른 측면은 (i) 알러지, 천식, 및 자가면역 병태로 이루어진 군에서 선택되는 만성 염증성 질환; 및 (ii) 암 및 종양 전이로 이루어진 군에서 선택되는 악성 병태로 이루어진 군에서 선택되는 병태의 병인에 대한 급성 감염증의 영향을 연구하는 방법이고, 이 방법은 하기 (1)-(3)의 단계를 포함한다:
(1) (i) 알러지, 천식, 및 자가면역 병태로 이루어진 군에서 선택되는 만성 염증성 질환; 및 (ii) 암 및 종양 전이로 이루어진 군에서 선택되는 악성 병태로 이루어진 군에서 선택된 병태에 감수성인 동물 모델을 제공하는 단계;
(2) 조성물의 투여로 일어난 면역 반응을 통해 동물 모델에서 감염증을 치료 또는 예방하기 위해 동물 모델에 본 발명에 따른 조성물을 투여하는 단계로서, 상기 조성물에서, 미립자는 병원체와 동일한 크기 범위이고, 조성물은 면역 활성 항원 또는 항원 에피토프를 포함하며, 상기 면역 활성 항원 또는 항원 에피토프는 펩티드, 단백질, 재조합 펩티드 또는 멀티-펩티드, 또는 재조합 단백질인 단계; 및
(3) (i) 알러지, 천식, 및 자가면역 병태로 이루어진 군에서 선택되는 만성 염증성 질환; 및 (ii) 암 및 종양 전이로 이루어진 군에서 선택되는 악성 병태로 이루어진 군에서 선택되는 병태에 대한 단계 (2)에서 투여된 조성물의 효과를 결정하는 단계.
본 발명을 이하 실시예를 예로 들어 설명한다. 이들 실시예는 단지 예시 목적만으로 포함되며, 본 발명을 한정하려는 의도는 없다.
실시예 1
미립자의 선택
1∼10 ㎛ 범위의 아가로스 미립자는 Sterogene Bioseparations, Inc.(Carlsbad, CA)에서 제조된 것이고, Saturn DigiSizer 5200(Micromeritis Instrument Corp)을 이용해 테스트하였다. 그 결과 입자 분포는 75%가 5 ㎛ 이하이고, 24%는 5-10 ㎛이며 1%는 10 ㎛ 이상인 것으로 확인되었다.
실시예 2
활성화된 아가로스 미립자
입자는 2가지 다른 방법으로 활성화시켰다. 활성화 방법은 티올-이황화 리간드 교환 화학법을 이용해 Sterogene Bioseparations, Inc.(Carlsbad, CA)에서 수행하였다. 리간드의 가역적 공유 결합을 제공하는, 이러한 결합 화학법에서, 미립자는 고밀도의 티올 기로 작용화되었다. 펩티드 및 다른 생분자는 2-티오피리딜 모이어티 또는 에폭시드 기로 작용화되었다. 2-티오피리딜 작용화된 펩티드는 강력한 세포내 환원성 환경으로 인해 세포내 내재화 후 미립자로부터 방출될 수 있다. 이러한 화학법의 다른 장점은 리간드를 고도로 효과적이고 재현가능하게 고정화시킨다는 것이다.
다른 고정화 방법은 고정화 금속 킬레이션(IMAC) 화학법으로 수행하였다. 아가로스 미립자는 표준 방법에 따라 Zn2+ 이온으로 작용화되었다. 선택된 펩티드와 다른 생물학적 활성 화합물은 고정화된 Zn2+ 이온을 쉽게 킬레이팅할 수 있는 킬레이트화 모이어티(예를 들어, 리신, 시스테인, 트립토판, 복소환 고리 구조, 아미드 결합, 황 함유 잔기 등)를 함유한다.
실시예 3
병원체의 항원성 단백질의 생물정보학 분석으로 또한 고항원성 역가의 펩티드 에피토프를 동정할 수 있다. 이러한 분석은 M. 갈리셉티컴(gallisepticum) MGA 단백질에 대해 수행하였다. 항원성 영역은 선형 항원성 모티프에 대해 더욱 분석하였다.
실시예 4
티올 작용화 미립자 상의 MG 펩티드 면역 조절제의 제조 면역 조절성 조성물의 제조: 2.5 ㎖의 티올 작용화 미립자(Sterogene Bioseparations, Inc., Carlsbad, CA)에, 에폭시화 50 ㎍ LPS, 50 ㎍ 펩티도글리칸(PG), 및 250 ㎍ 이.콜라이(E. coli) DNA의 혼합물을 부가하였다. 4시간 교반 후, 슬러리를 원심분리하고 LAL수로 1회 세척하였다. 다음으로, 125 ㎍의 티올화된 폴리-I:C를 부가하고 4시간 동안 계속 커플링하였다. 후속하여, 원심분리하고, 3회 LAL수로 세척하고, 0.125 mg의 2-cys-티오피리딜 B3 펩티드를 부가한 후 4시간 동안 계속 커플링하였다. 이어서, 혼합물을 1회 LAL수로 세척하고 0.125 mg의 N-말단 2-cys-티오피리딜 모이어티를 함유하는 단일 MHC I 및 MHC Il 펩티드 에피토프 혼합물(G1/9+G2/4)을 부가하여 4시간 동안 계속 커플링하였다(이들 펩티드는 티올 입자에 커플링하기 위한 N-말단 2-티오피리딜 반응성 기를 함유함). 커플링 효율은 상등액에서 OD343를 통해 측정하였다. LAL수로 세척 후, 입자를 동량의 LAL수에 재현탁하였다.
다른 커플링 반응에서, Zn-킬레이팅 미립자를 다음과 같이 동일한 펩티드 및 작동제 농도로 사용하였다: 2 ㎖ Zn-킬레이팅 미립자(Sterogene Bioseparations, Inc., Carlsbad, CA)에, 40 ㎍의 LPS, 40 ㎍ 의PG, 100㎍의 폴리-I:C 및 200 ㎍의 DNA의 혼합물을 부가하고 3시간 동안 조심스럽게 흔들어주었다. 이 혼합물을 원심분리하고, 2회 6 ㎖의 LAL수로 세척하였다. 후속하여, 60 ㎍의 G1/9, 60 ㎍의 G2/4 및 60 ㎍의 B3 펩티드를 이 순서대로 부가하고(최종 부피 2 ㎖로), 각각의 부가 후 조심스럽게 수동 혼합하였다. 12시간 동안 조심스럽게 흔들어준 후, 이 현탁물을 원심분리하고 3회 6 ㎖의 LAL수로 세척하였다. 입자를 동량의 LAL수에 재현탁하였다.
실시예 5
다른 생물학적 활성 분자의 고정화
본 발명자들은 이하의 추가 작동제를 Zn-킬레이팅 미립자에 고정시켰다: 세포내 산화환원 전위를 개선시키기 위한 키나제 억제제 예컨대 커큐민 및 루틴, 락토페린, 락토페리신, 글루타티온 및 N-아세틸시스테인, 티물린, 항생제 (예를 들어, 오플록사신 및 티아물린), 셀레늄, 이미퀴모드, 다염기성 펩티드 예컨대 폴리-리신, 항미생물성 염기성 펩티드, 프롤린-풍부 펩티드, 항산화제 및 비타민.
실시예 6
2 ml의 Zn 킬레이팅 미립자에, 먼저 0.5 mg의 오플록사신, 0.5 mg의 커큐민 및 0.5 mg의 루틴을 첨가하고, 1시간 동안 약하게 진탕시켰다. 원심분리하여 상청액을 모아 6 ml의 LAL수로 1회 세척하여 풀링하였다. 1회 더 세척하여 세척물은 버렸다. 그 후, 20 ㎍의 G1/9, 20 ㎍의 G2/4 및 20 ㎍ B3 펩티드를 이 순서대로(용량 2 ml) 매회 첨가 후 약하게 수동 혼합하면서 첨가하였다. 1시간의 약한 진탕 후, 원심분리하여 상청액을 모았다. 6 ml의 LAL수로 1회 세척하여 상청액과 함께 풀링하였다. 각각 2회 더 세척을 반복하였다. 동량의 LAL수에 재현탁시킨 후 동량의 2개의 바이알로 분리하였다. 상청액 및 1차 세척 혼합물로부터의 커플링 효율을 측정하였다.
실시예 7
2 ml의 Zn 킬레이팅 미립자에, 먼저 0.5 mg의 레티노산 및 0.5 mg의 루틴을 첨가하고, 1시간 동안 약하게 진탕시켰다. 원심분리하여 상청액을 모아 6 ml의 LAL수로 1회 세척하여 풀링하였다. 1회 더 세척하여 세척물은 버렸다. 그 후, 20 ㎍의 G1/9, 20 ㎍의 G2/4 및 20 ㎍ B3 펩티드를 이 순서대로(용량 2 ml) 매회 첨가 후 약하게 수동 혼합하면서 첨가하였다. 1시간의 약한 진탕 후, 원심분리하여 상청액을 모았다. 6 ml의 LAL수로 1회 세척하여 상청액과 함께 풀링하였다. 각각 2회 더 세척을 반복하였다. 동량의 LAL수에 재현탁시킨 후 동량의 2개의 바이알로 분리하였다. 상청액 및 1차 세척 혼합물로부터의 커플링 효율을 측정하였다.
실시예 8
2 ml의 Zn 킬레이팅 미립자에, 40 ㎍의 LPS, 40 ㎍의 PG, 200 ㎍의 DNA 및 10 ㎍의 이미퀴모드의 혼합물을 첨가하고, 1시간 동안 약하게 진탕시켰다. 그 후, 20 ㎍의 G1/9, 20 ㎍의 G2/4 및 20 ㎍ B3 펩티드를 이 순서대로(용량 2 ml) 매회 첨가 후 약하게 수동 혼합하면서 첨가하였다. 1시간의 약한 진탕 후, 원심분리하여 상청액을 모았다. 6 ml의 LAL수로 1회 세척하여 상청액과 함께 풀링하였다. 그 후, 0.5 mg의 노보바이오신, 0.5 mg의 글루타티온 및 0.5 mg의 티아물린을 첨가하였다. 3시간의 약한 진탕 후, 원심분리하여 상청액을 모았다. 각각 2회 더 세척을 반복하였다. 동량의 LAL수에 재현탁시킨 후 동량의 2개의 바이알로 분리하였다. 상청액 및 1차 세척 혼합물로부터의 커플링 효율을 측정하였다.
실시예 9
2 ml의 Zn 킬레이팅 미립자에, 40 ㎍의 LPS, 40 ㎍의 PG, 200 ㎍의 DNA 및 10 ㎍의 이미퀴모드의 혼합물을 첨가하고, 1시간 동안 약하게 진탕시켰다. 그 후, 20 ㎍의 G1/9, 20 ㎍의 G2/4 및 20 ㎍ B3 펩티드를 이 순서대로(용량 2 ml) 매회 첨가 후 약하게 수동 혼합하면서 첨가하였다. 1시간의 약한 진탕 후, 원심분리하여 상청액을 모았다. 6 ml의 LAL수로 1회 세척하여 상청액과 함께 풀링하였다. 그 후, 0.5 mg의 레티노산 및 0.5 mg의 티아물린을 첨가하였다. 3시간의 약한 진탕 후, 원심분리하여 상청액을 모았다. 6 ml의 LAL수로 1회 세척하여 상청액과 함께 풀링하였다. 각각 2회 더 세척을 반복하였다. 동량의 LAL수에 재현탁시킨 후 동량의 2개의 바이알로 분리하였다. 상청액 및 1차 세척 혼합물로부터의 커플링 효율을 측정하였다.
실시예 10
2 ml의 Zn 킬레이팅 미립자에, 40 ㎍의 LPS, 40 ㎍의 PG, 200 ㎍의 DNA 및 10 ㎍의 이미퀴모드의 혼합물을 첨가하고, 1시간 동안 약하게 진탕시켰다. 그 후, 20 ㎍의 G1/9, 20 ㎍의 G2/4 및 20 ㎍ B3 펩티드를 이 순서대로(용량 2 ml) 매회 첨가 후 약하게 수동 혼합하면서 첨가하였다. 1시간의 약한 진탕 후, 원심분리하여 상청액을 모았다. 6 ml의 LAL수로 1회 세척하여 상청액과 함께 풀링하였다. 그 후, 50 ㎍ 락토페리신 및 50 ㎍의 티물린을 첨가하였다. 3시간의 약한 진탕 후, 원심분리하여 상청액을 모았다. 6 ml의 LAL수로 1회 세척하여 상청액과 함께 풀링하였다. 각각 2회 더 세척을 반복하였다. 동량의 LAL수에 재현탁시킨 후 동량의 2개의 바이알로 분리하였다. 상청액 및 1차 세척 혼합물로부터의 커플링 효율을 측정하였다.
실시예 11
동물 연구
3일령의 병아리에게 면역 조절용 조성물을 경구 투여하였다(ELISA에 의해 M. 갈리셉티컴(M. gallisepticum)(MG) 및 M. 시노비아(M. synoviae)(MS) 모체 항체가 검출되지 않았으므로 MG 및 MS가 없음). 각 그룹은 10마리의 닭으로 이루어졌다. 닭의 개별 체중을 기록하였다. 닭을 각 그룹 내의 그 평균 체중이 통계적 차이가 없도록 할당하였다. 처리법과 기록된 체중에 따라 적절한 형태로 색깔이 있는 번호가 기입된 윙택으로 각각의 닭을 표식하였다. 실험 14일째, 닭을 M. 갈리셉티컴 Rlow 균주로 항원공격하였다. 이 연구는 28일째 종료하였다.
이 그룹은 다음과 같이 세팅하였다: G1 및 G2는 음성 대조군 및 양성 대조군이었다. G1 = 비항원공격 및 비처리, G2 = 항원공격 및 비처리. G3 = 티올계 작용기화 미립자를 경구 투여하여 처리하고(0.2 ml/닭) 항원공격함. G4 = Zn 킬레이트계 작용기화 미립자를 경구 투여하여 처리하고(0.2 ml/닭) 항원공격함.
시간계획
-1일째: 그룹 G1∼G4를 세팅함. 실험닭이 모체 항체에 대해 음성인지를 확인하고 M. 갈리셉티컴 및 M. 시노비아의 존재를 확인하기 위한, ELISA 분석, PCR 및 M. 갈리셉티컴 및 M. 시노비아의 배양을 위해 10마리의 닭을 희생시킴.
0일째: 0.2 ml의 미립자 조성물을 사용함으로써 항원공격 전에 G3∼G4의 경구 백신접종을 실시함.
14일째: 그룹 G2∼G4의 항원공격. 역가 약 8.0 log10 CFU/ml의 M. 갈리셉티컴의 독성 R 균주의 새로운 배양액을 사용하여 동물들을 항원공격하였다. 이 새로운 배양액 10 ml를 분무 기법을 이용하여 이들 그룹 각각에 투여하였다. 요약하면, 닭을 격리실에 배치하였다. 그 후, 새로운 M. 갈리셉티컴 R 균주 배양물(107개 입자/ml)을 격리실에 분무하여 닭을 20분 동안 노출시켰다.
14일 및 28일째: 닭에 대해 채혈을 실시하여 혈청을 얻어, 혈청 평판 응집 반응(serum plate agglutination: SPA) 검사 및 블로킹 ELISA를 이용하여 MG 특이적 항체를 검사하였다.
28일째: G1∼G4. 특정 장기, 기관, 기낭 및 폐로부터 M. 갈리셉티컴(MG)의 분리하기 위해 안락사, 검시 및 평판배양을 실시함. 기관 및 폐의 조직학적 검사도 수행하였다.
안락사 및 병리학적 검사
실험 연구 종료 시점인 28일째, 모든 그룹들을 안락사시켰다. 각각의 닭을 검시하여 MG와 관련된 전체 병변에 대해 점수를 매겼다. 기관 내, 좌측 및 우측 흉부 기낭 및 복막의 삼출물의 존재를 기록하였다. 병변은 하기 방식에 따라 점수를 매겼다: 기관 내: 0 = 삼출물 없음, 1 = 약간의 발적과 소량의 삼출물, 2 = 점막의 발적, 삼출물. 좌측 및 우측 기낭: 0 = 병변 없음, 1 = 장액성 삼출물, 2 = 작은 피브린 단편과 함께 장액성 삼출물, 3 = 장액성 피브린성 삼출물, 기낭벽이 약간 두꺼워짐, 4 = 피브린성 삼출물이 많음, 기낭벽이 매우 두꺼워짐. 복막: 0 = 삼출물 없음, 1 = 장액성 삼출물, 2 = 작은 피브린 단편이 있는 장액성 삼출물, 3 = 장액성 피브린성 삼출물.
MG 재분리
검시 중에, 기관, 흉부 기낭, 간, 폐, 비장, 신장 및 심장을 면봉을 사용하여 무균 샘플링하였다. 그 후, 면봉으로부터 얻은 물질을 마이코플라즈마 아가(MA)에 도말하여 37℃, 5% CO2 인큐베이터에서 인큐베이트하였다. 2일, 4일 및 7일째, 그 후에는 최대 3주 동안 1주일 간격으로 마이코플라즈마가 있는지 평판을 관찰하였다. M. 갈리셉티컴 및 M. 시노비아를 확인하기 위해, PCR로 양성 콜로니를 검사하였다.
검시
MG 항원공격 후, 기낭 및 복막에 유의적인 병리학적 병변이 확인되었다. 그러나, 효능제와 함께 면역 활성 펩티드를 함유하는 입자로 처리된 그룹에서는 대조군(G2) 비처리 항원공격 그룹에 비해 병변 점수의 유의적인 감소가 기록되었다(G3, G4, p<0.001).
마이코플라즈마의 재분리
마이코플라즈마는 비처리 감염 대조군 닭의 내부 장기로부터 종종 재분리할 수 있다. 비처리 대조군(G2) 그룹에 비해 작용기화된 미립자로 처리된 그룹(G3, G4)에서 (호흡 기관 및 내부 장기로부터) 마이코플라즈마의 완전한 제거가 관찰되었다. 실험 그룹의 기도(기관, 폐, 기낭) 및 다른 내부 장기(간, 비장, 신장 및 심장)로부터의 마이코플라즈마 재분리율을 비교할 때 유사한 결과가 얻어졌다.
결과는 하기 표 1에 기재하였다.
Figure 112011091911906-pct00001
혈청학적 결과
실험 종료 시 그룹 간의 혈청학적 반응은 상이하였다. 비처리 항원공격 그룹(G2)의 반응은 낮았다. 동시에, 펩티드 에피토프 및 효능제와 함께 입자로 처리한 그룹(G3, G4)에서 유의적으로 강한 반응이 관찰되었다(p<0.05).
고찰
M. 갈리셉티컴은 기낭 및 복막에 유의적인 염증을 유발할 수 있으며, 이것에는 기관, 기낭 및 폐의 콜로니화가 동반된다. 마이코플라즈마는 내부 장기로부터도 종종 검출될 수 있다. 본 발명자들은 상이한 효능제 면역조절 분자와 함께 고정화된 항원성 에피토프 펩티드 또는 다른 항원들을 갖는 미생물 크기 범위(< 5 ㎛)의 미립자로 이루어진 새로운 유형의 "병원체 모방" 면역 활성 조성물을 개발하였다.
본 발명자들의 결과는, 선택된 면역 조절 화합물로 코팅된 입자에 항원성 분자를 첨가할 경우, 마이코플라즈마 특이적 혈청 반응이 증강된다는 것을 보여주었다. 장기의 콜로니화는 무의미한 수준까지 감소되었고 병리학적 병변의 점수도 낮았다. 이러한 효과는 항원공격 전에 미립자를 점막에 투여하였을 때 더 많이 관찰되었다.
조성물 투여 후 항원공격 전에, 조성물의 안전성을 평가하기 위해 처리된 닭들을 매일 관찰하였다. 닭들은 임상적으로 건강한 것으로 확인되었고, 부작용을 보이지 않았다. 연구 기간 중에 검시된 닭들은 염증의 징후나 장기 크기/체중에 있어서의 변화를 나타내지 않았다. 조성물은 안전한 것으로 생각된다. 이들 조성물은 예방 이외에도 임상적으로 확립된 감염을 치료하는 데 사용될 수 있다. 이것은 감염, 알레르기, 자가면역 및 암과 같은 만성 염증 상태들 간에 존재하는 연관성 때문에 의미가 있다.
본 발명의 이점
본 발명은 복수의 생물학적 활성 분자를 제어된 용량으로 식작용 세포로 도입하기 위한 개선된 조성물 및 방법을 제공한다. 이들 조성물은 안정하고, 원하는 생물학적 효과를 유발할 수 있도록 넓은 범위의 농도로 제조될 수 있다. 상기 생물학적 효과 중 한 예가 면역 반응이다. 이 조성물은 다양한 경로를 통한 시험관내 투여 및 생체내 투여 둘 다에 적합하다. 이들의 구조는 생체내에서의 이펙터 분자의 조기 분해 또는 방출을 방지한다. 입자들은 점막과의 상호작용을 개선시킬 수 있고 흡수를 촉진할 수 있는 고유의 점막 부착 특성을 갖는다.
본 발명에 따른 조성물은 세포, 특히 식작용 세포에 생물학적 활성 성분을 전달하여 식작용 세포와의 상호작용을 통해 다른 세포 유형의 기능에 영향을 주기 위한 산업적 적용성을 갖는다.
본원에서 예시적으로 설명된 본 발명은 본원에서 구체적으로 개시되지 않은 임의의 구성요소(들), 제한(들) 없이도 적절하게 실시될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 용어 "포함하는", "비롯한", "함유하는" 등은 제한없이 포괄적으로 해석될 수 있다. 또한, 본원에서 사용된 용어 및 표현은 설명을 위해 사용된 것이고 제한적인 것이 아니며, 이러한 용어 및 표현의 사용이 앞으로 제시 및 기재될 임의의 균등물 또는 이것의 임의의 일부분을 배제하려는 의도도 아니며, 청구된 발명의 범위 내에서 다양한 변경이 가능한 것으로 인정되어야 한다. 따라서, 본 발명이 바람직한 구체예 및 선택적인 특징에 의해 구체적으로 개시되었지만, 본원에 개시된 변경 및 수정은 당업자가 강구할 수 있는 것이며, 그러한 변경 및 수정은 본원에 개시된 발명의 범위 내에 있는 것으로 간주되는 것으로 이해되어야 한다. 본원에서는 본 발명을 광범위하고 포괄적으로 기재하였다. 포괄적 개시내용의 범위 내에 속하는 더 좁은 종 및 아속의 그룹핑 각각이 또한 본 발명의 일부를 형성한다. 이것은, 배제된 요소가 구체적으로 그 안에 존재하는지 여부에 관계없이, 그 속으로부터 임의의 주제를 배제하는 단서 또는 배제한정을 갖는 각각의 발명의 포괄적 설명을 포함한다.
또한, 본 발명의 특징 또는 양태를 마쿠쉬 그룹의 형식으로 기재하는 경우, 당업자는 본 발명이 그에 따라 마쿠쉬 그룹의 임의의 개개의 구성원 또는 구성원의 서브그룹에 의해 기재된다는 것을 알 것이다. 또한, 상기 설명이 예시적인 것이며 한정적인 것이 아님을 이해해야 한다. 상기 설명을 참조할 경우 당업자에게는 다수의 구체예가 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 범위는 상기 설명을 참조하여 결정되는 것이 아니라, 청구범위의 기초가 되는 전체 균등 범위와 함께 첨부된 청구범위를 참조하여 결정되어야 한다. 특허 공보를 비롯한 모든 간행물과 참고문헌의 개시내용은 본원에서 참고로 포함한다.

Claims (73)

  1. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 하기의 생물학적 활성 성분:
    (i) 리포펩티드;
    (ii) 항생제;
    (iii) 비타민;
    (iv) 바이오플라보노이드;
    (v) 항산화제;
    (vi) 면역 반응 조절자;
    (vii) 히스타민 또는 항히스타민; 및
    (viii) 키나제 억제제
    중 하나 이상; 및
    (b) 생물학적 활성 성분이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법(IMAC)을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 리포펩티드를 포함하는 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 항생제를 포함하는 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 비타민을 포함하는 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 바이오플라보노이드를 포함하는 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 항산화제를 포함하는 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 면역 반응 조절자를 포함하는 조성물.
  8. 제1항에 있어서, 히스타민 또는 항히스타민을 포함하는 조성물.
  9. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 핵산인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 펩티드 또는 단백질인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 핵산 및 펩티드 또는 단백질이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  10. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 펩티드 또는 단백질인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 및 펩티드 또는 단백질이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  11. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 탄수화물인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 지질인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 탄수화물 및 지질이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  12. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 탄수화물인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 리포펩티드인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 탄수화물 및 리포펩티드가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  13. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 핵산인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 항생제인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 핵산 및 항생제가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  14. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 항생제인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 및 항생제가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  15. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 펩티드 또는 단백질인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 항생제인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 펩티드 또는 단백질 및 항생제가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  16. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 핵산인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 비타민인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 핵산 및 비타민이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  17. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 비타민인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 및 비타민이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  18. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 펩티드 또는 단백질인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 비타민인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 펩티드 또는 단백질 및 비타민이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  19. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 핵산인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 바이오플라보노이드인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 핵산 및 바이오플라보노이드가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  20. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 바이오플라보노이드인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 및 바이오플라보노이드가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  21. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 펩티드 또는 단백질인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 바이오플라보노이드인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 펩티드 또는 단백질 및 바이오플라보노이드가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  22. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 핵산인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 항산화제인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 핵산 및 항산화제가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  23. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 항산화제인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 및 항산화제가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  24. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 펩티드 또는 단백질인 제1 생물학적 활성 성분;
    (b) 항산화제인 제2 생물학적 활성 성분; 및
    (c) 펩티드 또는 단백질 및 항산화제가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 제1 및 제2 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  25. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 오플록사신, 커큐민, 루틴, G1/9 펩티드(서열번호 1), G2/4 펩티드(서열번호 2), 및 B3 펩티드(서열번호 3)인 생물학적 활성 성분; 및
    (b) 오플록사신, 커큐민, 루틴, G1/9 펩티드(서열번호 1), G2/4 펩티드(서열번호 2), 및 B3 펩티드(서열번호 3)가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  26. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) 레티노산, 루틴, G1/9 펩티드(서열번호 1), G2/4 펩티드(서열번호 2), 및 B3 펩티드(서열번호 3)인 생물학적 활성 성분; 및
    (b) 레티노산, 루틴, G1/9 펩티드(서열번호 1), G2/4 펩티드(서열번호 2), 및 B3 펩티드(서열번호 3)가 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  27. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) LPS(리포다당류), PG(펩티도글리칸), DNA, 이미퀴모드, G1/9 펩티드(서열번호 1), G2/4 펩티드(서열번호 2), B3 펩티드(서열번호 3), 노보바이오신, 글루타티온, 및 티아물린인 생물학적 활성 성분; 및
    (b) LPS, PG, DNA, 이미퀴모드, G1/9 펩티드(서열번호 1), G2/4 펩티드(서열번호 2), B3 펩티드(서열번호 3), 노보바이오신, 글루타티온, 및 티아물린이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  28. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) LPS(리포다당류), PG(펩티도글리칸), DNA, 이미퀴모드, G1/9 펩티드(서열번호 1), G2/4 펩티드(서열번호 2), B3 펩티드(서열번호 3), 레티노산, 및 티아물린인 생물학적 활성 성분; 및
    (b) LPS, PG, DNA, 이미퀴모드, G1/9 펩티드(서열번호 1), G2/4 펩티드(서열번호 2), B3 펩티드(서열번호 3), 레티노산, 및 티아물린이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  29. 생물학적 활성 조성물로서,
    (a) LPS(리포다당류), PG(펩티도글리칸), DNA, 이미퀴모드, G1/9 펩티드(서열번호 1), G2/4 펩티드(서열번호 2), B3 펩티드(서열번호 3), 락토페리신, 및 티물린인 생물학적 활성 성분; 및
    (b) LPS, PG, DNA, 이미퀴모드, G1/9 펩티드(서열번호 1), G2/4 펩티드(서열번호 2), B3 펩티드(서열번호 3), 락토페리신, 및 티물린이 식작용 세포에 의해 흡수되어 그 생물학적 활성에 영향을 주도록 식작용 세포에 상기 조성물을 전달하는데 효과적인 생체중합체 담체
    를 포함하고, 상기 생체중합체 담체는 1 내지 10㎛의 범위 내인 아가로스 미립자이며, 상기 생물학적 활성 성분은 생체중합체 담체에 티올-이황화 리간드 교환 화학법 또는 고정화 금속 킬레이션 화학법을 이용한 가역적 공유 결합에 의해 결합되는 것인 조성물.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 미립자는 다공성인 조성물.
  31. 제1항 내지 제29항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 미립자는 비다공성인 조성물.
  32. 제1항 내지 제29항 중 어느 하나의 항에 있어서, 상기 미립자는 직경이 5 ㎛ 미만인 조성물.
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