KR101724526B1 - 퀴노아 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물을 유효 성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물로써, 본 발명에 따르면 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물은 미백, 피부노화, 피부주름 개선에 우수한 효과가 있는 화장료 조성물을 제공할 수 있다.

Description

퀴노아 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic Composition Containing Fermentative Extract of Chenopodium quinoa Willd as Active Ingredient}

본 발명은 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백, 피부노화, 피부주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리·화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀 더 구체적으로는 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다.

사람의 피부색은 멜라닌, 헤모글로빈, 카로틴 등에 의해 결정되는데 이 중에서도 멜라닌이 가장 중요한 역할을 한다. 멜라닌은 사람의 피부색을 결정하는 것 이외에도 자외선 흡수 작용, 자유 라디칼 소거제(free radical scavenger) 등과 같은 피부 보호작용을 수행한다. 그러나, 자외선의 과다 노출, 대기 오염, 스트레스 등과 같은 외부의 환경 변화에 의하여 멜라닌이 과다하게 생성되면 피부 내에서 색소 침착 현상을 일으켜 피부의 흑화 또는 기미, 주근깨 등의 원인이 된다. 피부의 흑화는 내적 및 외적 요인에 대한 피부 세포의 반응에 의하여 발생 하는 것으로, 대표적인 요인은 자외선 노출로 인한 것이다. 즉, 피부가 자외선에 노출되면 타이로시나아제(Tyrosinase)가 활성화되는데, 상기 타이로시나아제가 피부조직에 존재하는 티로신에 작용하여 도파(DOPA) 및 도파퀴논을 생성시키는 산화 과정에 의하여, 피부 색소 세포인 멜라노사이트 내의 멜라노좀에서 멜라닌이라는 중합체가 합성되며, 이러한 멜라닌이 피부의 각질 형성 세포인 케라티노사이트로 전달되고 각질화 과정에 의해 피부 표면에 도달하여 자외선으로부터 피부를 보호하게 된다. 따라서, 멜라닌은 우리 인체에 없어서는 안 되는 자외선 방어제이며, 또한 단백질, 지질, 핵산 등과 같은 생체성분을 변형시키는 다양한 라디칼을 제거하는 효과적인 자유 라디칼 소거제의 역할을 담당하고 있다.

특히, 단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다. 그러므로, 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유 라디칼이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되어 발생하는 자유 라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

노화에는 자유 라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다. 그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 산소는 물과 더불어 우리가 살아가는데 없어서는 안 되는 물질이나, 그 산소가 일단 우리의 체내에 들어가면 여러 원인들에 의해 굉장히 활성이 강한 산소로 변하여 혈관 세포를 산화시킨다. 오늘날 질병의 원인의 약 90% 정도가 이 활성산소에 의한 것으로 규명되고 있다. 사람의 몸은 약 60조의 세포로 구성되어 있으며, 세포막은 임피질로 형성되어 있어 활성산소가 연결되기 쉽다. 산화반응이 발생하면 불포화 지방산은 과산화지질로 변화한다. 이 과산화지질이 유전자 DNA, RNA, 단백질, 세포막 및 세포 구조 등에 손상을 주어 암이 되거나 여러 성인병의 원인이 되며, 궁극적으로 노화의 원인이 된다. 바로 이러한 활성산소를 없애거나 중화시켜 세포가 산화하는 것을 막는 역할을 하는 물질을 항산화 물질이라고 한다. 일반적으로 피부 세포의 구성성분인 지질의 활성산소로 인해 과산화가 일어나면 세포막의 구조가 변형되어 세포 투과성, 유동성, 막 효소와 운반 단백질의 불활성화, 단백질 사슬의 절단, DNA, RNA 손상 등이 발생하여 피부세포가 노화가 일어난다고 알려져 있다. 이러한 이유 때문에 활성산소를 제거하려고 하는 노력이 지속되었으며, 이러한 결과로 인해 많은 황산화 물질이 개발되었다. 지금까지 항산화 작용을 갖는 것으로 알려진 물질로는, 아스코르브산(ascorbic acid), 베타카로틴(β-carotene), 디부틸히드록실톨루엔(BHT), 디엘-알파 토코페롤(DL-α-tocopherol) 등이 있다. 그러나, 이러한 물질들은 합성물질로 사용되기 때문에, 장기 사용시 또는 다량 사용하여 피부에 사용 시 피부 안전성의 문제를 일으키거나, 화장품에 제형에 함유시 안정성에 문제가 있어 그 사용에 있어 제한을 받고 있는 실정이다. 이에 많은 연구자들이 이러한 문제점들을 해결하고자 많은 노력을 하고 있다.

한국 공개특허 제2009-0092841호는 퀴노아 알곡 추출물의 다양한 피부 과학적 용도에 대하여 기술되어 있다.

본 발명자는 노화와 미백 효과를 동시에 가지는 천연 식물 성분들에 대한 다양한 피부 생리성을 검색한 결과, 천연 식물 추출물 중에서 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물이 DPPH 라디칼 소거효과, 티로시나아제(tyrosinase) 저해활성, 엘라스타제(Elastase) 저해활성, 콜라겐 합성 촉진 효과, MMP-1 생성 억제 효과를 보임으로써 효과적으로 미백, 피부노화, 피부주름를 개선할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기와 같은 목적은 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물에 의해 달성된다.

바람직하게는, 상기 퀴노아 발효 추출물은 효모균, 유산균, 바실러스속 균 및 이의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 균으로 28 내지 42℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 8을 유지하면서, 5 내지 10일간 발효시켜 얻은 것이다.

바람직하게는, 상기 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.0001 ~ 30.0%(w/w)로 함유되는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는 상기 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물은 DPPH 라디칼 소거효과, 티로시나아제(tyrosinase) 저해활성, 엘라스타제(Elastase) 저해활성, 콜라겐 합성 촉진 효과, MMP-1 생성 억제 효과를 나타내는 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함된 유효성분인 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd.) 발효 추출물은 DPPH 라디칼 소거효과, 티로시나아제(tyrosinase) 저해활성, 엘라스타제(Elastase) 저해활성, 콜라겐 합성 촉진 효과, MMP-1 생성 억제 효과가 우수함으로 미백, 피부노화, 피부주름 개선 효과가 우수하다.

본 발명은 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물을 유효 성분으로 포함하는 화장료 조성물로써, 본 발명에 사용된 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd.)는 명아주과에 속하며 Chenopodium속으로, 지구상에 대략 250여종이 존재하며 재배종인 Chenopodium quinoa 이외에도 대부분 잡초종으로 전세계에 분포되어 있다. 재배종인 퀴노아는 allotetraploid인 반면 다른 명아주종(Chenopodiumspecies)은 diploid, tetraploid, hexaploid 또는 octoploid를 보이고 있다. 퀴노아는 잉카제국 전 이미 오랫동안 남아메리카의 안데스(Andes)지역에서 적어도 5000년 동안 재배되었으며 콜롬비아시대 이전에 이 지역 주요작물은 옥수수, 감자 그리고 퀴노아였다. C3 작물인 퀴노아는 다른 작물들이 잘 자라지 못하는 해발 3000 m 이상의 고지대의 건조한 조건하에서도 잘 자란다고 한다. 퀴노아는 쌀보다 조금 작은 둥근 모양으로 조리가 쉽고 단백질 녹말 비타민 ·무기질이 풍부하여 영양면에서 우유에 버금가는 곡물로 인정되었다. 잉카제국의 '슈퍼곡물'로 불리던 퀴노아는 지난 수천년 동안 에콰도르 ·페루 ·볼리비아 등 안데스 지역의 중요 농산물이었으나 근세에 와서 겨우 일부 농가에서 자급자족으로 명맥만 유지해왔다. 그 후 영양학적 가치가 새로이 평가되면서 세계적인 식품회사와 남아메리카 민간단체들의 품종개량과 보급노력에 힘입어 1980년 이후 빠른 속도로 국제곡물시장에서 판매되고 있다.

본 발명에 따른 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다. 알곡 상태의 퀴노아를 세척하여 건조한 후 다음 통상적인 미생물 배양액을 1 ~ 50g/L를 첨가하고 효모균, 유산균, 바실러스속 균 및 이의 혼합물로 이루어진 군에서 선택되는 미생물을 10,000~100,000 CFU/L의 양으로 첨가한다. 배양온도는 28 ~ 42℃의 통상적인 미생물 배양조건으로 배양할 수 있으며, 바람직하게는 30 ~ 37℃에서 배양할 수 있다. pH는 5 내지 8로 호기적 또는 통상 혐기(anaerobic)적인 조건으로 약 5 내지 10일간 배양한다. 이후 숙성 및 여과를 통해 얻을 수 있다.

발효공정에 사용되는 발효 균주로서는 락토바실러스(Lactobicillus sp.) 균주, 아스퍼질러스(Aspergillus sp.) 균주, 바실러스(Bicillus sp.) 균주 중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있다.

상기 락토바실러스 균주의 일예로 락토바실러스 아키도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 락토바실러스 부크네리(Lactobacillus buchneri), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 카세이 (아종) 아락토수스(Lactobacillus casei subsp. alactosus), 락토바실러스 카세이 (아종) 카세이(Lactobacillus caseisubsp. casei), 락토바실러스 카세이 (아종) 프세우도플란타룸(Lactobacillus casei subsp.pseudoplantarum), 락토바실러스 카세이 람노수스(Lactobacillus casei subsp. rhamnosus), 락토바실러스 카세이 톨레란스(Lactobacillus casei subsp. tolerans), 락토바실러스 카네나포르미스(Lactobacilluscatenaformis), 락토바실러스 켈로비오수스(Lactobacillus cellobiosus), 락토바실러스 콜리노이데스(Lactobacillus collinoides), 락토바실러스 콘푸수스(Lactobacillus confusus), 락토바실러스 코리니포르미스(Lactobacillus coryniformis), 락토바실러스 코리니포르미스 (아종) 코리니포르미스(Lactobacillus coryniformis subsp. coryniformis), 락토바실러스 코리니포르미스 (아종) 토르쿠엔스(Lactobacillus coryniformis subsp. torquens), 락토바실러스 리케니포르미스(Lactobacillus licheniformis), 락토바실러스크리스파투스(Lactobacillus crispatus), 락토바실러스 쿠르바투스(Lactobacillus curvatus), 락토바실러스 델브루엑끼이(Lactobacillus delbrueckii), 락토바실러스 페르멘툼(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 프룩티보란스(Lactobacillus fructivorans), 락토바실러스 프룩토수스(Lactobacillus fructosus), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 락토바실러스 레테르히오키이(Lactobacillus heterohiochii), 락토바실러스 힐가르디이(Lactobacillus hilgardii), 락토바실러스 호모히오키이(Lactobacillus homohiochii), 락토바실러스 옌세니이(Lactobacillus jensenii), 락토바실러스 락티스(Lactobacillus lactis), 락토바실러스 레이크만니이(Lactobacillus leichmannii), 락토바실러스 말리(Lactobacillus mali), 락토바실러스 말타로미쿠스(Lactobacillus maltaromicus), 락토바실러스 미누투스(Lactobacillus minutus), 락토바실러스 플란타룸(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 로고사이(Lactobacillus rogosae), 락토바실러스 루미니스(Lactobacillus ruminis), 락토바실러스 사케(Lactobacillus sake), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 살리바리우스 (아종) 살리키니우스(Lactobacillus salivariussubsp. salicinius), 락토바실러스 살리바리우스 (아종) 살리바라우스(Lactobacillus salivarius subsp.salivarius), 락토바실러스 트리코데스(Lactobacillus trichodes), 락토바실러스 비리데스켄스(Lactobacillus viridescens), 락토바실러스 비툴리누스(Lactobacillus vitulinus), 락토바실러스 크실로수스(Lactobacillus xylosus) 중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus)가 바람직하다.

상기 아스퍼질러스 균주의 일예로 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae), 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger), 아스퍼질러스 우사미(Aspergillus usami) 중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있으며 보다 바람직하게는 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae)가 바람직하다.

상기 바실러스 균주의 일예로 바실러스 아키도칼다리우스(Bacillus acidocaldarius), 바실러스 알칼로필루스(Bacillus alcalophilus), 바실러스 알베이(Bacillus alvei), 바실러스 안트라키스(Bacillus anthracis), 바실러스 바디우스(Bacillus badius), 바실러스 브레비스(Bacillus brevis), 바실러스 케레우스(Bacillus cereus),바실러스 키르쿨란스(Bacillus circulans), 바실러스 코아굴란스(Bacillus coagulans), 바실러스 파스티디오수스(Bacillus fastidiosus), 바실러스 피르무스(Bacillus firmus), 바실러스 글로비스포루스(Bacillus globisporus), 바실러스 글로비스포루스 (아종) 글로비스포루스(Bacillus globisporus subsp. globisporus), 바실러스 글로비스포루스 (아종) 마리누스(Bacillus globisporus subsp. marinus), 바실러스 인솔리투스(Bacillus insolitus), 바실러스 라르와이(Bacillus larvae), 바실러스 라테로스포루스(Bacillus laterosporus), 바실러스 렌티모르부스(Bacillus lentimorbus), 바실러스 렌투스(Bacillus lentus), 바실러스릭케니포르미스(Bacillus licheniformis), 바실러스 마케란스(Bacillus macerans), 바실러스 막쿠아리엔시스(Bacillus macquariensis), 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium), 바실러스 미코이데스(Bacillusmycoides), 바실러스 판토텐티쿠스(Bacillus pantothenticus), 바실러스 파스테우리이(Bacillus pasteurii),바실러스 플리믹크사(Bacillus polymyxa), 바실러스 포필리아이(Bacillus popilliae), 바실러스 푸밀루스(Bacillus pumilus), 바실러스 스파이리쿠스(Bacillus sphaericus), 바실러스 스테아로테르모필루스(Bacillus stearothermophilus), 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis), 바실러스 투린기엔시스(Bacillus thuringiensis) 중에서 선택된 어느 하나 이상을 사용할 수 있으며 바람직하게는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)가 바람직하다.

본 발명에 따르면, 상기 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.0001 ~ 30.0 중량% 함유될 수 있으며, 더욱 바람직하게는, 상기 퀴노아(Chenopodium quinoa Willd .) 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.001 ~ 10 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 퀴노아 발효추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만인 경우에는 피부개선 효과가 나타나지 않으며, 30.0 중량% 를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 대한 피부 개선 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.

발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다. 본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의지방산 에스테르가 있다. 본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다. 본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다. 본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

한편, 본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 이용하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 이용하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다. 본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.

본 발명의 화장료 추출물은 우수한 주름개선 효과, 미백효과, 항노화 효과를 갖는다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다.

이하, 하기의 실시예와 실험예들을 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 권리 범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.

제조예 1. 퀴노아 ( Chenopodium quinoa Willd . ) 발효 추출물 제조

세척 후 음건한 퀴노아 알곡(500g)을 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물(2.5L 70% EtOH)을 50 ℃ 이하에서 감압농축하여 발효 미생물이 잘 배양되도록 하기 위하여 수분 함량을 물을 첨가함으로써 50%로 조절하여 발효 원료를 수득하였다. 이어 수득한 발효 원료를 121℃에서 15분간 멸균하였다.

발효균주의 배양은 LB 배지(Difco, USA)를 사용하였고, 상기 배지에 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)를 3중량% 접종시킨 후 37℃에서 pH 7.5로 호기적 조건에서 10일간 배양시켰다. 그런 다음 배양액을 0.25μM의 여과지를 이용하여 여과한 후 이 여액을 4℃에서 10일간 저온 숙성시킨 이후 0.25μM 여과지를 이용하여 최종 여과 하였다. 이렇게 제조한 발효액을 "퀴노아 발효 추출물"이라 통칭하며 이하 실험예에 사용된 퀴노아 발효 추출물은 최종농도가 1g/100㎖가 되게 유지하여 사용하였다.

상기 제조예는 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 퀴노아 발효 추출물의 제조에 사용되는 균주의 권리 범위가 이들에 의해 제한되는 것은 아니다.

비교제조예 1. 퀴노아 ( Chenopodium quinoa Willd . ) 추출물 제조

세척 후 음건한 퀴노아 알곡(500g)을 70%(V/V) 에탄올 수용액으로 5시간씩 3회 환류 추출하고 냉침한 후, 와트만(Whatman) #4 여과지로 여과하였다. 여과된 추출물을 50 ℃ 이하에서 감압농축하여 최종농도가 1g/100㎖이 되게 유지하여 사용하였다.

실험예 1. 티로시나아제( tyrosinase ) 저해활성 측정

상기 제조예 1 및 비교제조예 1의 티로시나아제 저해활성을 측정하기 위해 실험실 조건에서 티로시나아제 저해활성을 측정하였다. 기질로는 인산 나트륨 완충액 (pH 6.8)에 용해한 1.5 mmol/ℓ의 티로신 (시그마사, 미합중국) 40 ㎕를 사용하였다. 제조예 1 및 비교제조예 1을 각각 0.05 M 인산나트륨 완충용액 (pH 6.8)으로 희석하여 농도(0.5%, 1.0%)별로 시료액을 제조하였다. 티로신 40 ㎕에 상기 농도별 시료액 240 ㎕을 각각 첨가하고, 상기 용액에 티로시나아제 (시그마사, 1500 U/㎖) 20 ㎕을 첨가한 후 37℃에서 15분 동안 반응시킨 다음, 490 nm에서 흡광도를 측정하였다. 하기 수학식 1에 의하여 티로시나아제의 활성 저해율를 계산하여 표 1과 같이 나타내었다.

시료명	처리농도(ppm)	티로시나아제 활성 저해율 (%)
비교제조예 1	500	16.195
제조예 1		45.881

표 1에서 기재된 바와 같이 본 발명에 따른 제조예 1의 티로시나아제 활성 저해율이 우수한 것을 알 수 있다.

실험예 2. DPPH 라디칼 소거 활성 측정

상기의 제조예 1 및 비교제조예 1의 항산화 효과를 측정하기 위해 실험실 조건에서 DPPH법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다.

DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 프리라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl 프리라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.2mM 용액으로서 메탄올에 용해하여 100ml로 한다.

측정방법으로서, 96-웰 플레이트에 0.2mM DPPH 용액 0.15ml과 시료용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다. 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다. 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다. 시료용액의 블랭크(Blank)는 0.2mM DPPH 용액 대신에 메탄올을 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

결과는 수학식 2에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 2에 나타내었다.

St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

시료명	처리농도(ppm)	소거능(%)
비교제조예 1	1000	61.251
제조예 1		80.931
비교제조예 1	500	40.812
제조예 1		63.715
비교제조예 1	100	9.453
제조예 1		49.643

표 2에 기재된 바와 같이 본 발명에 따른 제조예 1의 자유라디칼 소거율이 우수한 것을 알 수 있다.

실험예 3. 엘라스타제 ( Elastase ) 저해활성 측정

엘라스타제(Elastase)는 진피 내 피부탄력을 유지시키는데 중요한 기질인 엘라스틴을 분해하는 효소이다. 또한 엘라스타제는 다른 중요한 기질단백질인 콜라겐을 분해할 수 있는 비특이적 가수분해 효소이다. 따라서 엘라스타제 저해제는 피부주름을 개선하는 작용을 나타내며, 우리솔산(ursolic acid) 등이 엘라스타제 저해제로서 이용되고 있다. 엘라스타제는 동물 결합조직의 불용성 탄성 섬유 단백질인 엘라스틴을 분해시켜 피부의 진피조직의 그물망 구조 결합을 끊어줌으로서 주름생성의 주원인인 효소로 알려져 있다. 피부의 진피 조직 속에는 콜라겐과 피부의 탄력성에 관련된 엘라스틴이 그물망 구조를 형성하고 있는데, 이러한 그물망 구조가 깨어지면서 즉 엘라스틴이 엘라스타제에 의해 분해되어 피부가 처지고 주름이 생기므로 내인성 피부노화가 발생한다. 그러므로 피부노화의 주원인 중의 하나인 엘라스틴 분해효소인 엘라스타제의 활성을 저하시킴으로서 피부노화를 억제할 수 있다.기질로서 N-succinyl-(L-Ala)3-p-nitroanilide, S4760, Sigma)를 사용하여 37℃에서 20분간 기질로부터 생성되는 p-nitroanilide의 생성량을 445nm에서 측정하였다. 즉, 각 시험용액을 일정 농도가 되도록 조제하여 500μL씩 시험관에 취하고, 2mM tris-HCl buffer(pH 8.6)에 녹인 porcine pancreas elastase(E1250, Sigma)2.5U/mL)용액 500μL을 가한 후 기질로 50mM tris-HCl buffer(pH8.6)에 녹인 N-succinyl-(L-Ala)3- p-nitroanilide(500μg/mL)을 첨가하여 20분간 반응시켜 측정하였다. Elastase 저해활성은 시료용액의 첨가구와 무첨가구의 흡광도 감소율로 하기 수학식 3에 따라 계산하여 표 3에 결과를 나타내었다.

시료명	처리농도(ppm)	엘라스타제 저해 활성(%)
비교제조예 1	100	5.129
제조예 1		20.229
비교제조예 1	500	17.815
제조예 1		46.713
비교제조예 1	1000	33.782
제조예 1		68.192

실험예 4. ELISA kit를 이용한 콜라겐(collagen) 생합성 측정 결과

인간 섬유아세포(Human Skin Fibroblast)를 37℃, 5% CO2 배양기에서 일정한 습도를 유지하는 세포 배양기 내에서 10% FBS, Penicillin(50U/ml), Streptomycin(50/ml)를 함유하는 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Gibco, USA)으로 배양하여, 1× 10⁵개/ml로 24 well plate에 500㎕씩 분주한 다음 24시간 배양하였다. 섬유아세포에서 콜라겔 타입 I(collagen type I) 의 정량은 'Procollagen Type I c-peptide EIAkit(TaKaRa, japan)'를 이용하여 효소면역분석법 (immunosorbent assay, ELISA)으로 실시하였는데, 분석을 위해 48시간 동안 배양한 상기의 세포 배양 상등액을 조심스럽게 수집하였다. 먼저 'Procollagen Type I cpeptide와 결합하는 항체 (antibody)가 코팅된 스트립(strip)에 48시간 배양된 배양 상등액을 각각 100 ul씩 첨가하고 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거한 다음, 여기에 블라킹 버퍼(Blocking buffer) 100 ul씩 넣고, 다시 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거하고, 'Procollagen Type I c-peptide'와 결합하는 또 다른 항체에 POD가 콘쥬게이트(conjugate)된 용액(Antiobody-POD conjugate solution) 100 ul씩 넣고 37℃에서 2시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 워싱 버퍼(washing buffer)를 이용하여 3회 세척하여 미반응 물질을 제거하고, 동량의 기질 (substrate) 용액 넣고, 30분간 반응시킨 다음 정지용액(stop solution, 1N H2SO4)을 넣고 실험을 종료하였다. 실험이 종료된 스트립(strip)을 450 nm에서 흡광도를 측정하여 콜라겐 표준품과 비교하여 새로 합성된 콜라겐 양을 PICP 양으로 측정하였으며 그 결과를 표 4에 나타내었다.

시료명	처리농도(ppm)	콜라겐 합성율(%)
비교제조예 1	100	15.151
제조예 1		22.846
비교제조예 1	500	21.921
제조예 1		40.593
비교제조예 1	1000	29.935
제조예 1		71.241

실험예 5. MMP -1 생성 억제 효과

상기 제조예 1 및 비교제조예 1이 콜라겐 분해효소인 MM P-1 생성을 억제하는 효과가 있는지의 여부를 측정하였다. 인간 정상 피부 세포인 섬유아세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에각 웰당 1× 10⁶세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1 및 비교제조예 1을 최종 농도 100 ㎍/㎖로 첨가한 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MM P-1 분석 킷트(Amersham,미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MM P-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 4에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 5에 나타내었다.

시료명	처리농도(ppm)	MMP-1 생성 저해율 (%)
비교제조예 1	100	10.188
제조예 1		25.321
비교제조예 1	500	16.126
제조예 1		47.125
비교제조예 1	1000	24.357
제조예 1		61.926

처방예 1. 크림

제조예 1 및 비교제조예 1을 함유한 화장료 중 크림의 처방예는 다음 표 6과 같다.

성분			함량 (단위 :중량%)
비교예 1	비교예 2	제형예 1
- 모노스테아린산글리세린 세테아릴알콜 스테아린산 밀납 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 경화식물유 스쿠알란 광물유 트리옥타노인 디메치콘 소듐마그네슘실리케이트 글리세린 베타인 트리에타올아민 소듐히아루로네이트 방부제, 향, 색소 증류수	비교제조예 1 모노스테아린산글리세린 세테아릴알콜 스테아린산 밀납 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 경화식물유 스쿠알란 광물유 트리옥타노인 디메치콘 소듐마그네슘실리케이트 글리세린 베타인 트리에타올아민 소듐히아루로네이트 방부제, 향, 색소 증류수	제조예 1 모노스테아린산글리세린 세테아릴알콜 스테아린산 밀납 폴리솔베이트 60 솔비탄스테아레이트 경화식물유 스쿠알란 광물유 트리옥타노인 디메치콘 소듐마그네슘실리케이트 글리세린 베타인 트리에타올아민 소듐히아루로네이트 방부제, 향, 색소 증류수	2.0 2.0 2.2 1.5 1.0 1.5 0.6 1.0 3.0 5.0 5.0 1.0 0.1 5.0 3.0 1.0 4.0 미량 잔량

실험예 1. 주름 개선 효과 평가

비교예 1 및 2와 제형예 1의 크림을 사용해 주름 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 30명의 30-40세 여성을 무작위로 2개 군으로 나누어 비교예 1 및 2와 제형예 1의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 크림 적당량을 눈가를 중심으로 2개월간 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 주름 개선 효과를 육안 관찰을 통하여 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 7에 나타낸 바와 같다.

	주름 개선 효과 우수	주름 개선 효과 약간	주름 개선 효과 없음
비교예 1	3	5	22
비교예 2	3	8	17
제형예 1	15	8	7

실시예 2. 미백 효과 평가

비교예 1 및 2와 제형예 1의 크림을 사용해 본 발명의 화장료의 미백효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 30 내지 40세 여성 20명을 패널테스트를 실시하였다. 각군의 패널에 상기 비교예 1 및 2와 제형예 1의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 적당량을 팔의 상박에 2개월간 연속적으로 바르게 하였다. 이에 앞서 각 피검자는 자외선 조사기를 이용하여 피부의 색소침착을 야기시켰다. 미백효과는 상박에서의 피부미백 개선 효과를 육안으로 피부색을 관찰하여 평가한 후 그 결과를 표 8에 나타내었다.

	미백 효과 우수	미백 효과 약간	미백 효과 없음
비교예 1	0	3	17
비교예 2	3	8	9
제형예 1	10	5	5

Claims (9)

1. 퀴노아를 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로 발효시킨 퀴노아 발효 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백용 화장료 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 퀴노아 발효 추출물은 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)로 28 내지 42℃의 온도 조건 하에서 pH 5 내지 8을 유지하면서, 5 내지 10일간 발효시켜 얻은 것인, 피부 미백용 화장료 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 퀴노아 발효 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0. 0001 내지 30.0 중량% 함유되는, 피부 미백용 화장료 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는, 피부 미백용 화장료 조성물.
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