KR101705412B1 - Composition for preventing or treating immune disease comprising mesenchymal stem cell treated stat3 inhibitor - Google Patents

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Abstract

본 발명은 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포는 간엽줄기세포에서의 염증성 사이토카인 및 염증 유발인자의 발현과 생성을 효과적으로 억제할 수 있고, 병인조건 하에서 미분화 T 세포와 공조 배양할 경우, T 세포의 세포 독성 Th17 및 Th1 세포로의 분화를 억제하는 효과가 있으며, 비정상적으로 활성화된 면역세포의 기능을 억제하고 염증 반응을 제어하는 특성을 갖는 면역조절 T 세포(Treg)의 분화 및 활성을 증진시키는 효과가 우수한 특징이 있다. 따라서 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포는 각종 면역반응의 조절 이상으로 유발되는 자가면역질환, 염증성질환 및 이식거부질환과 같은 면역질환을 예방 또는 치료할 수 있는 세포치료제 조성물로 사용할 수 있는 효과가 있다.TECHNICAL FIELD The present invention relates to a cell therapy composition for preventing or treating immune diseases, which comprises mesenchymal stem cells treated with STAT3 inhibitor as an active ingredient. The STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells according to the present invention can effectively inhibit the expression and production of inflammatory cytokines and inflammatory factors in mesenchymal stem cells, and when co-cultured with undifferentiated T cells under pathological conditions, T cells Of the present invention has the effect of inhibiting the differentiation into cytotoxic Th17 and Th1 cells and enhancing the differentiation and activity of immunoregulatory T cells (Treg) having the property of suppressing the function of abnormally activated immune cells and controlling the inflammatory response The effect is excellent. Therefore, the mesenchymal stem cells treated with the STAT3 inhibitor can be used as a cell therapy composition composition capable of preventing or treating immune diseases such as autoimmune diseases, inflammatory diseases and graft rejection diseases caused by abnormal regulation of various immune responses.

Description

STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물{Composition for preventing or treating immune disease comprising mesenchymal stem cell treated stat3 inhibitor}BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a composition for preventing or treating immune diseases comprising mesenchymal stem cells treated with STAT3 inhibitor as an active ingredient,

본 발명은 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료를 위한 세포치료용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for cell therapy for the prevention or treatment of immune diseases, which comprises mesenchymal stem cells treated with a STAT3 inhibitor as an active ingredient.

전 세계적으로 면역과민반응으로 인한 질환이 증가하고 있지만, 이러한 질환들의 발생에 대한 근본적인 원인 규명이 충분히 이루어지지 않은 상태이다. 현재 과도한 면역반응에 의한 질환의 치료방법으로는 면역억제제를 단독 또는 병용 투여함으로써 상기 질환에 의해 야기되는 각종 증상을 완화 내지 감소시키는 것이다. Although diseases caused by immune hyperresponsiveness are increasing worldwide, fundamental causes for the occurrence of these diseases have not been sufficiently elucidated. Currently, as a method of treating diseases due to an excessive immune response, immunosuppressive agents are administered alone or in combination to alleviate or reduce various symptoms caused by the diseases.

면역억제제란 항원의 작용에 대하여 숙주가 항체를 만드는 능력(체액성 면역반응) 또는 세포성 면역반응을 일으키는 능력을 저하시키거나 차단하기 위해 사용되는 다양한 물질들을 말한다. 이러한 면역억제제는 장기이식분야 뿐만 아니라 루푸스, 류마티스 관절염 등과 같은 자가면역질환과, 아토피, 알러지 등의 피부과민 반응에도 유용하게 사용될 수 있다. 우수한 면역억제제는 면역반응의 불균형을 조절할 수 있어야 하고, 인체에 대한 안전성이 확보되어야 하며, 장기간 치료시에 질환의 재발 발생 빈도가 낮아야 한다.Immunosuppressants refer to various substances that are used to reduce or block the ability of a host to make antibodies (humoral immune response) or the ability to cause a cellular immune response to the action of an antigen. Such immunosuppressants can be used not only in organ transplantation fields but also in autoimmune diseases such as rheumatoid arthritis and rheumatoid arthritis, and skin hypersensitivity reactions such as atopy and allergy. Superior immunosuppressants should be able to control the imbalance of the immune response, ensure human safety, and have a low incidence of disease recurrence during long-term treatment.

현재 사용되고 있는 면역억제제로는 사이클로스포린 A와 FK506 등이 있는데, 이들은 복잡한 화학구조를 가진 천연물 유래의 화합물로서 원료 수급의 측면에서 고비용이 드는 문제점이 있어 비경제적이고, 장기투여로 인해 각종 부작용이 야기될 수 있다는 위험성을 내포하고 있다. 따라서 낮은 독성 및 면역관용 유도와 함께 경제적인 생산이 가능한 새로운 면역억제제의 개발이 절실히 요구되고 있는 실정이다. There are currently used immunosuppressants such as cyclosporin A and FK506. These compounds are derived from natural materials having complex chemical structures, which are uneconomical due to high costs in terms of raw material supply and demand, and various side effects may be caused due to long-term administration Which is a risk. Therefore, there is a desperate need to develop a new immunosuppressive agent which can induce low toxicity and induce immunity and economical production.

한편, 각종 병원체에 대한 생체 방어 시스템으로 면역계에서 중심적 역할을 담당하는 세포군의 하나로 T 세포가 있다. T 세포는 인체의 흉선에서 생성되며 일련의 분화 과정을 거치면서 고유의 특성을 지닌 T 세포로 분화하게 되는데, 분화를 완료한 T 세포는 그 기능에 따라 크게 1형 보조 세포(Th1)와 2형 보조 세포(Th2)로 구분된다. 이 중에서 Th1 세포의 주된 기능은 세포 매개성 면역에 관여하고, Th2 세포는 체액성 면역에 관여하며, 면역계에서 이러한 두 세포 집단은 서로 과 활성화되지 않도록 서로 견제를 통해 면역계의 균형을 유지하고 있다. On the other hand, there are T cells as one of the cell groups which plays a central role in the immune system as a bio-defense system for various pathogens. T cells are produced in the thymus of the human body, and undergo a series of differentiation processes, resulting in differentiation into T cells with inherent characteristics. The differentiated T cells are largely classified into type 1 (Th1) Auxiliary cells (Th2). Among these, Th1 cells are mainly involved in cell mediated immunity, Th2 cells are involved in humoral immunity, and in the immune system, these two cell populations maintain the balance of the immune system through mutual checks to prevent mutual activation with each other.

따라서 면역질환의 대부분은 이러한 두 가지 면역 세포간의 불균형에 기인하는 것으로 볼 수 있는데, 예를 들어 Th1 세포의 활성이 비정상적으로 증가하는 경우 자가면역질환이 발생할 수 있고, Th2 세포의 활성이 비정상적으로 증가하는 경우 과민반응에 의한 면역질환이 발생하는 것으로 알려져 있다. Therefore, most of the immune diseases are caused by the imbalance between these two immune cells. For example, when the activity of Th1 cells abnormally increases, autoimmune diseases may occur and the activity of Th2 cells abnormally increases It is known that immune diseases are caused by hypersensitivity reactions.

한편, Th1 세포의 분화에 대한 최근 연구 결과에 따르면, Th1 세포의 활성을 조절할 수 있는 새로운 그룹인 면역조절 T 세포(Treg)의 존재가 알려지면서 이를 이용한 면역질환의 치료에 대한 연구가 대두되고 있는데, Treg 세포는 비정상적으로 활성화된 면역세포의 기능을 억제하여 염증 반응을 제어하는 특성이 있어, Treg 세포의 활성을 증가시키는 작용을 통해 면역질환을 치료하고자 하는 연구들이 많이 진행되고 있다.On the other hand, recent studies on the differentiation of Th1 cells have revealed the existence of a new group of immunoregulatory T cells (Tregs) capable of regulating the activity of Th1 cells, , Treg cells have the property of suppressing the function of abnormally activated immune cells and controlling the inflammatory reaction. Therefore, many studies are being conducted to treat immune diseases through the action of increasing Treg cell activity.

또한, Treg 세포 이 외에 T 세포의 분화 과정에서 만들어지는 또 다른 그룹으로 Th17 세포가 있는데, Th17 세포는 미분화 T세포의 분화 과정에서 Treg 세포의 분화와 유사한 과정을 거치며 형성되는 것으로 알려져 있다. 즉, Treg 세포와 Th17 세포의 분화는 공통적으로 TGF-β의 존재 하에서 이루어지지만, Treg 세포의 경우 IL-6을 필요로 하지 않는 반면, Th17 세포의 경우에는 TGF-β와 함께 IL-6가 존재하는 상황에서 분화를 한다. 또한, 분화된 Th17 세포는 IL-17을 분비하는 것을 특징으로 한다. In addition, T17 cells are known to be formed through a process similar to the differentiation of Treg cells in the differentiation process of undifferentiated T cells. In other words, the differentiation of Treg cells and Th17 cells is commonly performed in the presence of TGF-β, whereas IL-6 is not required for Treg cells, while IL-6 is present along with TGF- To differentiate. In addition, differentiated Th17 cells are characterized by secretion of IL-17.

Th17 세포는 Treg 세포와는 달리 면역질환에서 보이는 염증반응의 최전방에서 관여하여 염증 반응의 신호를 최대화시켜 질병의 진행을 가속화시키는 것이 밝혀지고 있다. 그러므로 자가면역질환 중 Treg 세포에 의해 제어되지 않는 자가면역질환의 경우, Th17 세포 활성의 억제를 표적으로 한 자가면역질환의 치료제 개발이 크게 부각되고 있다.Th17 cells, unlike Treg cells, are involved in the forefront of the inflammatory response seen in immune diseases, thereby maximizing the signal of the inflammatory response and accelerating the progression of the disease. Therefore, in the case of autoimmune diseases that are not controlled by Treg cells among autoimmune diseases, the development of therapeutic agents for autoimmune diseases targeting the inhibition of Th17 cell activation has been greatly emphasized.

현재 사용되고 있는 면역질환치료제로는 T 세포에서의 신호변환 경로를 차단하는 면역 억제제가 가장 많이 사용되고 있는데, 이러한 면역억제제들은 독성, 감염, 임파종, 당뇨병, 진전(tremor), 두통, 설사, 고혈압, 오심, 신기능 장애 등의 부작용이 발생하는 문제점이 있다.Immunosuppressants that block the signal transduction pathway in T cells are the most commonly used therapeutic agents for immune diseases. Such immunosuppressants are toxic, infectious, lymphoid, diabetes, tremor, headache, diarrhea, hypertension, nausea , And a disorder of renal function.

또한, T 세포의 활성화를 억제하는 방법을 통해 면역질환을 치료하는 방법 이외에도 면역 세포로부터 분비되는 사이토카인의 양을 조절하는 치료법 및 면역 세포로부터 분비되는 사이토카인을 표적으로 하는 항체를 이용한 치료법이 개발 중에 있다. 그러나 이러한 방법은 실제적으로 임상실험을 거쳐 환자들에게 적용하기까지 많은 시간이 소요되어야 하고, 항체를 이용하는 방법은 항체 제작 과정에서 너무 많은 비용이 든다는 문제점이 있다. In addition to the method of treating immune diseases through the method of inhibiting the activation of T cells, a method of regulating the amount of cytokine secreted from the immune cells and a method of using the antibody targeting the cytokine secreted from the immune cells have been developed . However, this method has a problem in that it takes much time to actually apply to patients through clinical experiments, and that the method using antibody is too expensive in the process of antibody production.

따라서 부작용이 없고 저렴하면서도 치료 효과가 우수한 새로운 면역질환 치료제 및 치료방법의 개발이 시급하다.Therefore, it is urgent to develop a therapeutic agent and a treatment method for a new immune disease which has no side effects and is inexpensive and excellent in therapeutic effect.

대한민국특허 2014-0032925Korea Patent 2014-0032925

따라서 본 발명의 목적은 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a cell therapy composition composition for preventing or treating immunological diseases, which comprises mesenchymal stem cells treated with a STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) inhibitor as an active ingredient.

본 발명의 다른 목적은 시험관 내에서 간엽줄기세포에 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제를 처리하는 단계를 포함하는, 면역질환의 예방 및 치료 효능을 갖는 간엽줄기세포의 제조방법을 제공하는 것이다.It is another object of the present invention to provide a method for producing mesenchymal stem cells having an effect of preventing and treating immune diseases, comprising the step of treating STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) inhibitor to mesenchymal stem cells in vitro will be.

본 발명의 다른 목적은 미분화 T 세포를 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포와 함께 공조 배양하는 단계를 포함하는, 미분화 T 세포의 Th1 세포 및 Th17 세포로의 분화 및 활성을 억제하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for the differentiation and differentiation of undifferentiated T cells into Th1 and Th17 cells, comprising co-culturing the undifferentiated T cells with the STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) Lt; RTI ID = 0.0 > activity. ≪ / RTI >

본 발명의 다른 목적은 미분화 T 세포를 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포와 함께 공조 배양하는 단계를 포함하는, 미분화 T 세포의 조절 T 세포(Regulatory T cell: Treg)로의 분화 및 활성을 촉진시키는 방법을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a method for regulating T cells (regulatory T cells: Tregs) comprising co-culturing undifferentiated T cells with mesenchymal stem cells treated with a STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) Lt; RTI ID = 0.0 > (I) < / RTI >

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a cell therapy composition composition for preventing or treating immune diseases, which comprises mesenchymal stem cells treated with STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) inhibitor as an active ingredient.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 STAT3 억제제는 STA-21(8-hydroxy-3-methyl-3,4-dihydrotetraphene-1,7,12(2H)-trione), AG-490((E)-2-Cyano-3-(3,4-dihydrophenyl)-N-(phenylmethyl)-2-propenamide), 아티프리모드(Atiprimod; 3-(8,8-dipropyl-3-azaspiro[4.5]decan-3-yl)-N,N- diethylpropan-1-amine), 오라노핀(Auranofin; 3,4,5-triacetyloxy-6- (acetyloxymethyl) oxane-2-thiolate; triethylphosphanium), 오로싸이오말레이트(Aurothiomalate; Sodium 2-(auriosulfanyl)-3-carboxypropanoate), BMS-354825(Dasatinib; N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinyl]-2-methyl-4-pyrimidinyl]amino]-5-thiazole carboxamide monohydrate), CADPE(3-(3,4-dihydroxy-phenyl)-acrylic acid 2-(3,4-dihydroxy-phenyl)-ethyl ester), 스타틱(Stattic; 6-nitro-1,1-dioxide-benzo[b]thiophene), 도베실레이트(Dobesilate; calcium 2,5-dihydroxybenzenesulfonate), 에탄올(Ethanol), NCX-4016(NO-Aspirin), 넬피나비어(Nelfinavir; (3S,4aS,8aS)-N-tert-butyl-2-[(2R,3R)-2-hydroxy-3-[(3-hydroxy-2-methylphenyl)formamido]-4-(phenylsulfanyl)butyl]-decahydroisoquinoline-3-carboxamide), PDP(phosphododecapeptide), PS-341(볼테조밉(Bortezomib); [(1R)-3-methyl-1-({(2S)-3-phenyl-2-[(pyrazin-2-ylcarbonyl)amino]propanoyl}amino)butyl]boronic acid), R115777(티피파르닙(tipifarnib); 6-[amino(4-chlorophenyl)(1-methyl-1H-imidazol-5-yl)methyl]-4-(3-chlorophenyl)-1-methylquinolin-2(1H)-one), S31-M2001(N-Hexyl-2-(1-naphthalenyl)-5-[[4-(phosphonooxy)phenyl]), 스타틴계 화합물, 소듐살리실레이트(Sodium Salicylate), 카페익산(Caffeic acid; 3-(3,4-Dihydroxyphenyl)-2-propenoic acid 3,4-Dihydroxy-cinnamic acid trans-Caffeate 3,4-Dihydroxy-trans-cinnamate)), 에모딘(Emodin; 1,8-Dihydroxy-3-(hydroxymethyl)-9,10-anthracenedione), 우르솔릭산(Ursolic acid; 3-beta-3-hydroxy-urs-12-ene-28-oic-acid), 레스베라트롤(Resveratrol; 3,5,4'-trihydroxy-trans-stilbene), 레티노익산(Retinoic acid; (2E,4E,6E,8E)-3,7-dimethyl-9-(2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)nona-2,4,6,8-tetraenoic acid), EGCG(Epigallocatechin gallate; [(2R,3R)-5,7-dihydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)chroman-3-yl] 3,4,5-trihydroxybenzoate), Sr11302((E,E,Z,E)-3-Methyl-7-(4-methylphenyl)-9-(2,6,6-trimethyl-1-cyclohexen-1-yl)-2,4,6,8-nonatetraenoic acid), 탄시논 IIA(Tanshinone IIA; 1,6,6-Trimethyl-6,7,8,9-tetrahydrophenanthro[1,2-b]furan-10,11-dione) 및 커큐민(curcumin; (1E,6E)-1,7-Bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,6-heptadiene-3,5-dione)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the STAT3 inhibitor is selected from the group consisting of STA-21 (8-hydroxy-3-methyl-3,4-dihydrotetraphene-1,7,12 3- (8,8-dipropyl-3-azaspiro [4.5] decan-3-yl) -2-cyano-3- -yl) -N, N-diethylpropan-1-amine, Auranofin, 3,4,5-triacetyloxy-6- (acetyloxymethyl) oxane- (2-chloro-6-methylphenyl) -2 - [[6- [4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazinyl] -2 (3,4-dihydroxy-phenyl) -ethyl ester, CAPE (3- (3,4-dihydroxy-phenyl) -acrylic acid 2- But are not limited to, stathic 6-nitro-1,1-dioxide-benzo [b] thiophene, calcium 2,5-dihydroxybenzenesulfonate, ethanol, NCX- (3S, 4aS, 8aS) -N-tert-butyl-2 - [(2R, 3R) -2-hydroxy- hydroxy-2-methylphenyl) formamido] -4- (phenylsulfanyl) butyl] decahydroisoquinoline-3-carboxamide), PDP (phosphododecapeptide), PS-341 (Bortezomib; 2-ylcarbonyl) amino] propanoyl} amino) butyl] boronic acid, R115777 (tipifarnib (R) (1H-imidazol-5-yl) methyl] -4- (3-chlorophenyl) -1-methylquinolin-2 (N-Hexyl-2- (1-naphthalenyl) -5 - [[4- (phosphonooxy) phenyl], statin compound, sodium salicylate, caffeic acid 3- 4-Dihydroxyphenyl) -2-propenoic acid 3,4-Dihydroxy-cinnamic acid trans-Caffeate 3,4-Dihydroxy-trans- cinnamate), Emodin (1,8-Dihydroxy- , 10-anthracenedione, 3-beta-3-hydroxy-urs-12-ene-28-oic acid, resveratrol, 3,5,4'-trihydroxy- Retinoic acid (2E, 4E, 6E, 8E) -3,7-dimethyl-9- (2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl) nona-2,4,6,8-tetraenoic acid ), EGCG (Epigallocatechin gallate; [(2R, 3R) -5,7-dihydroxy-2- (3,4,5-trihydroxyphenyl) chroman-3-yl] 3,4,5-trihydroxybenzoate), Sr11302 , E, Z, E) - 2-cyclohexen-1-yl) -2,4,6,8-nonatetraenoic acid, Tanshinone IIA (2-methyl- ; 1,6,6-Trimethyl-6,7,8,9-tetrahydrophenanthro [1,2-b] furan-10,11-dione and curcumin (1E, 6E) -hydroxy-3-methoxyphenyl) -1,6-heptadiene-3,5-dione).

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포는 염증유발인자 및 염증성 사이토카인의 생성이 억제되고, Th1 및 Th17 세포의 분화 및 활성이 감소되며, 조절 T 세포(Regulatory T cell: Treg)의 분화 및 활성은 증진되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells inhibit the production of inflammatory factors and inflammatory cytokines, decrease the differentiation and activity of Th1 and Th17 cells, and regulatory T cells cell: Treg) may be promoted.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 면역질환은 류마티스 관절염 (Rheumatoid Arthritis), 천식 (Asthma), 피부염 (Dermititis), 건선 (Psoriasis), 낭섬유증 (Cystic Fibrosis), 고형장기 이식 후기 및 만성 거부증 (Post transplantation late and chronic solid organ rejection), 다발성 경화증 (Multiple Sclerosis), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus), 쇼그렌 증후군(Sjogren syndrome), 하시모토 갑상선(Hashimoto thyroiditis), 다발성근염(polymyositis), 경피증(scleroderma), 아디슨병(Addison disease), 백반증(vitiligo), 악성빈혈(pernicious anemia), 사구체신염(glomerulonephritis) 및 폐섬유증(pulmonary fibrosis), 염증성장질환 (Inflammatory Bowel Dieseses), 자가면역성 당뇨 (Autoimmune Diabetes), 당뇨 망막증 (Diabetic retinopathy), 비염 (Rhinitis), 혀혈-재관류 손상 (Ischemia-reperfusion injury), 혈관성형술후 재협착 (Post-angioplasty restenosis), 만성 폐색성 심장 질환 (Chronic obstructive pulmonary diseases; COPD), 그레이브병 (Graves disease), 위장관 알러지 (Gastrointestinal allergies), 결막염 (Conjunctivitis), 죽상경화증 (Atherosclerosis), 관상동맥질환 (Coronary artery disease), 협심증 (Angina), 암 전이, 소동맥 질환, 이식편대숙주질환(graft-versus-host disease) 및 미토콘드리아 관련 증후군으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention the immunological disease is selected from the group consisting of rheumatoid arthritis, asthma, dermatitis, psoriasis, cystic fibrosis, late organ transplantation and chronic rejection Multiple sclerosis, systemic lupus erythematosus, Sjogren's syndrome, Hashimoto thyroiditis, polymyositis, scleroderma, scleroderma, scleroderma, scleroderma, Addison's disease, vitiligo, pernicious anemia, glomerulonephritis and pulmonary fibrosis, Inflammatory Bowel Dieses, Autoimmune Diabetes, Diabetic retinopathy, rhinitis, ischemia-reperfusion injury, post-angioplasty restenosis, chronic lung disease, The present invention relates to the use of a compound of formula (I) for the manufacture of a medicament for the treatment of chronic obstructive pulmonary diseases (COPD), Graves disease, Gastrointestinal allergies, Conjunctivitis, Atherosclerosis, Coronary artery disease, , Cancer metastasis, small artery disease, graft-versus-host disease, and mitochondrial related syndrome.

또한, 본 발명은 시험관 내에서 간엽줄기세포에 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제를 처리하는 단계를 포함하는, 면역질환의 예방 및 치료 효능을 갖는 간엽줄기세포의 제조방법을 제공한다. In addition, the present invention provides a method for preparing mesenchymal stem cells having an effect of preventing and treating immune diseases, comprising the step of treating STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) inhibitor in mesenchymal stem cells in vitro.

또한, 본 발명은 미분화 T 세포를 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포와 함께 공조 배양하는 단계를 포함하는, 미분화 T 세포의 Th1 세포 및 Th17 세포로의 분화 및 활성을 억제하는 방법을 제공한다.In addition, the present invention relates to a method for differentiating and differentiating undifferentiated T cells into Th1 and Th17 cells, comprising co-culturing the undifferentiated T cells with the STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) inhibitor-treated mesenchymal stem cells Of the present invention.

또한, 본 발명은 미분화 T 세포를 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포와 함께 공조 배양하는 단계를 포함하는, 미분화 T 세포의 조절 T 세포(Regulatory T cell: Treg)로의 분화 및 활성을 촉진시키는 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for regulating T cell regulatory T cells (Tregs) comprising co-culturing undifferentiated T cells together with STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) Lt; RTI ID = 0.0 > and / or < / RTI >

본 발명에 따른 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포는 간엽줄기세포에서의 염증성 사이토카인 및 염증 유발인자의 발현과 생성을 효과적으로 억제할 수 있고, 병인조건 하에서 미분화 T 세포와 공조 배양할 경우, T 세포의 세포 독성 Th17 및 Th1 세포로의 분화를 억제하는 효과가 있으며, 비정상적으로 활성화된 면역세포의 기능을 억제하고 염증 반응을 제어하는 특성을 갖는 면역조절 T 세포(Treg)의 분화 및 활성을 증진시키는 효과가 우수한 특징이 있다. 따라서 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포는 각종 면역반응의 조절 이상으로 유발되는 자가면역질환, 염증성질환 및 이식거부질환과 같은 면역질환을 예방 또는 치료할 수 있는 세포치료제 조성물로 사용할 수 있는 효과가 있다.The STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells according to the present invention can effectively inhibit the expression and production of inflammatory cytokines and inflammatory factors in mesenchymal stem cells, and when co-cultured with undifferentiated T cells under pathological conditions, T cells Of the present invention has the effect of inhibiting the differentiation into cytotoxic Th17 and Th1 cells and enhancing the differentiation and activity of immunoregulatory T cells (Treg) having the property of suppressing the function of abnormally activated immune cells and controlling the inflammatory response The effect is excellent. Therefore, the mesenchymal stem cells treated with the STAT3 inhibitor can be used as a cell therapy composition composition capable of preventing or treating immune diseases such as autoimmune diseases, inflammatory diseases and graft rejection diseases caused by abnormal regulation of various immune responses.

도 1은 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포 및 STAT3 억제제를 처리하지 않은 간엽줄기세포를 대상으로 STAT3의 발현 정도를 웨스턴 블럿으로 분석하였고, HMGB-1의 발현 정도, IL-6 및 IL-1 beta 발현 정도를 Real-time PCR로 mRNA레벨을 나타낸 것이다.
도 2는 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포와 STAT3 억제제가 처리되지 않은 간엽줄기세포를 대상으로 세포 내에서 IL-10, IDO, TGF-beta 및 HGF의 발현정도를 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포 및 STAT3 억제제를 처리하지 않은 간엽줄기세포를 대상으로 세포 표현형을 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포의 분화능 유지 따른 줄기세포 자체의 기능을 유지하는지 여부를 확인한 결과를 나타낸 것이다.
도 5a는 STAT3억제제가 처리된 지방유래 간엽줄기세포가 세포 이동 능력을 가지고 있어 병소부위로 이동이 가능한지 확인하기 위해, 간엽줄기세포의 이동과 관련된 인자인 CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR7, CCR9 및 CXCR4의 발현 정도를 실시간 PCR을 수행하여 분석한 결과이다.
도 5b는 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포의 세포 이동 정도를 확인한 결과이다.
도 6은 Th17 세포 분화 조건에서 배양한 T 세포를 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포 및 STAT3 억제제가 처리되지 않은 간엽줄기세포와 각각 공조 배양하여 간엽줄기세포에 의한 T 세포에서의 IL-17 발현 변화를 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 7은 Th17 세포 분화 조건에서 T 세포를 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포 및 STAT3 억제제가 처리되지 않은 간엽줄기세포와 각각 공조 배양하여 간엽줄기세포에 의한 미분화 T 세포의 Th1 및 Th17 세포분화 정도를 유세포분석기로 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 8은 Th17 세포 분화 조건에서 T 세포를 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포 및 STAT3 억제제가 처리되지 않은 간엽줄기세포와 각각 공조 배양하여 간엽줄기세포에 의한 미분화 T 세포의 Treg 세포분화 정도를 유세포분석기로 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 9는 Th17 세포 분화 조건에서 배양한 T 세포를 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포 및 STAT3 억제제가 처리되지 않은 간엽줄기세포와 각각 공조 배양하여 간엽줄기세포에 의한 T 세포에서의 IL-10 생성 정도를 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 10은 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포에 류마티스 관절염 치료 효과가 있는지 여부를 확인하기 위하여 관절염평가지수, IgG 및 염증성사이토카인 정도를 분석한 결과를 나타낸 것이다.
도 11은 STAT3억제제가 처리된 지방유래 간엽줄기세포의 루푸스 동물모델 세포에 미치는 면역조절능력을 확인한 결과이다. FIG. 1 shows Western blot analysis of the STAT3 expression level of STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells and STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells. The levels of HMGB-1 expression, IL-6 and IL-1 beta The degree of expression was measured by Real-time PCR.
FIG. 2 shows the results of analysis of expression levels of IL-10, IDO, TGF-beta and HGF in cells treated with STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells and STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells.
FIG. 3 shows cell phenotype analysis of STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells and STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells.
FIG. 4 shows the results of confirming whether or not the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells maintain the function of stem cells according to maintenance of the differentiation ability.
FIG. 5A is a graph showing the effect of STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells on CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR7, and CCR9, which are involved in mesenchymal stem cell migration, And the degree of expression of CXCR4 by real-time PCR.
FIG. 5B shows the results of confirming the cell migration of mesenchymal stem cells treated with the STAT3 inhibitor.
FIG. 6 shows changes in IL-17 expression in T cells induced by mesenchymal stem cells cultured in the presence of STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells and STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells, respectively, As shown in Fig.
FIG. 7 is a graph showing the degree of Th1 and Th17 cell differentiation of undifferentiated T cells by mesenchymal stem cells by co-culturing T cells with STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells and STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells under Th17 cell differentiation conditions, respectively And analyzed by flow cytometry.
FIG. 8 shows the degree of T cell differentiation of undifferentiated T cells by mesenchymal stem cells by co-culturing T cells with STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells and STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells under Th17 cell differentiation conditions, As shown in Fig.
FIG. 9 is a graph showing the degree of IL-10 production in T cells by mesenchymal stem cells cultured in the presence of STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells and STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells, respectively, As shown in Fig.
FIG. 10 shows the results of analyzing arthritis evaluation index, IgG and inflammatory cytokine level in order to confirm whether the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells have therapeutic effect on rheumatoid arthritis.
FIG. 11 shows the results of confirming the ability of the STAT3 inhibitor-treated adipose-derived mesenchymal stem cells to immunoregulate the animal model cells of lupus.

본 발명은 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물을 제공함에 그 특징이 있다.The present invention provides a cell therapy composition for preventing or treating immune diseases, which comprises mesenchymal stem cells treated with a STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) inhibitor as an active ingredient.

종래 면역질환 뿐만 아니라 암을 포함하여 다양한 질환의 치료제로서 세포치료제의 개발이 많이 진행되고 있으며 특히 줄기세포를 이용한 세포치료제 기술이 개발되고 있는데, 세포치료제는 종래 화합물 치료제에 비해 부작용이 적은 장점이 있으나 치료 효과가 낮은 문제점이 있다.Conventionally, cell therapy agents have been developed as therapeutic agents for a variety of diseases including cancer as well as immunological diseases. In particular, cell therapy agents using stem cells have been developed. Cell therapy agents have the advantages of less side effects than conventional therapeutic agents There is a problem in that the therapeutic effect is low.

이에 본 발명자들은 부작용이 적으면서도 치료 효과가 우수한 새로운 면역질환 치료를 위한 세포치료제를 개발하던 중, STAT3 억제제를 처리한 간엽줄기세포를 세포 치료제로 사용할 경우, 면역질환을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있음을 발견하였다.Therefore, the present inventors have developed a cell therapy agent for treating a new immune disease with a low side effect while having a therapeutic effect, and it is possible to effectively prevent and treat immune diseases when using a STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cell as a cell therapy agent Respectively.

한편, STATs (Signal Transducer and Transcriptions)는 STAT1, STAT2, STAT3, STAT4, STAT5A, STAT5B, STAT6의 일곱개의 subunit 형태를 가지는 전사인자이다. STATs은 N-터미널 도메인 (ND), 코일드-코일 도메인(CCD), DNA-바인딩 도메인 (DBD), 링커 도메인(LD), Src 호몰로지2(SH2) 및 전사활성 도메인 (TAD)이 포함된 여섯가지 별개의 구조적 도메인을 공유하며, 그 중에 STAT3는 활성화에 의해 인산화되는 C-말단에 critical tyrosine과 serine 잔기(Tyrosine 705, Serine 727 residues for STAT3)를 가지고 있다.On the other hand, STATs (Signal Transducers and Transcriptions) are transcription factors having seven subunit forms of STAT1, STAT2, STAT3, STAT4, STAT5A, STAT5B and STAT6. STATs are those that comprise the N-terminal domain (ND), the coiled-coil domain (CCD), the DNA-binding domain (DBD), the linker domain (LD), the Src homology 2 (SH2) It shares six distinct structural domains, among which STAT3 has critical tyrosine and serine residues (Tyrosine 705, Serine 727 residues for STAT3) at the C-terminus phosphorylated by activation.

특히 STAT3는 다양한 경로를 통해 지속적으로 활성화 되어 종양형성을 촉진하는 역할을 하며, 또한 STAT3는 다양한 사이토카인과 성장인자-인터페론, 표피의In particular, STAT3 is continuously activated through various pathways to promote tumorigenesis, and STAT3 also plays a role in various cytokines, growth factor-interferon, epidermal

성장인자, 혈소판 유래된 성장인자, 인터루킨5, 인터루킨6, 간세포 성장인자, leukemia inhibitory factor (LIF), 뼈 형성유전 단백질2, 호르몬 렙틴, Src와 Ras같은 발암 단백질에 대한 반응으로써 Tyrosine 705, Serine 727의 두 잔기에 인산화를 통하여 활성화된다. Serine 727 was detected as a response to carcinogenic proteins such as growth factors, platelet derived growth factors, interleukin 5, interleukin 6, hepatocyte growth factor, leukemia inhibitory factor (LIF), bone formation gene 2, hormone leptin, Src and Ras Is activated through phosphorylation at the two residues of < RTI ID = 0.0 >

이와 같은 STAT3는 인간 세포에서 여러 유전자의 전사에 관여하는 전사조절인자이며, 정상적인 경우, 외부로부터 사이토카인이나 성장 요소들에 의한 신호전달에 반응하여, 세포질에 존재하던 STAT3는 핵 안으로 이동하여 세포의 발달, 분화, 생장, 생존, 신생혈관합성 그리고 면역기능 등을 위한 유전자들을 조절한다, 그러나 STAT3가 비정상적일 경우 STAT3는 암의 발생에 중요한 기능을 한다. 많은 수의 악성종양, 동물모델 실험, 암 환자에서 활성화된 STAT3가 발견되었으며 STAT3에 의해서 암을 유발하고 발전시키는 여러 다양한 유전자의 발현을 조절한다. STAT3 is a transcriptional regulator involved in the transcription of several genes in human cells. In normal cases, STAT3, which is present in the cytoplasm in response to signal transduction by cytokines or growth factors from the outside, It regulates genes for development, differentiation, growth, survival, neovascularization, and immune function. However, when STAT3 is abnormal, STAT3 plays an important role in the development of cancer. A large number of malignant tumors, animal model experiments, activated STAT3 were found in cancer patients, and STAT3 controls the expression of various genes that induce and develop cancer.

나아가 STAT3는 종양 세포에 대항하는 면역 활성화에 필요한 중재자의 발현을 억제하는 것으로 알려져 있고, 또한, STAT3의 활성은 유전자발현 프로그램을 변경하면서 다양한 면역 세포에서 STAT3을 활성화시키는 인자들의 생산을 촉진함으로써 항암면역 반응을 억제하기도 한다.Furthermore, STAT3 is known to inhibit the expression of mediators necessary for immune activation against tumor cells. Moreover, STAT3 activity promotes the production of STAT3-activating factors in various immune cells by changing the gene expression program, The reaction is also inhibited.

한편, 면역계는 정상상태에서는 자가항원에 대한 특이적 면역반응을 제어하고 있으며, 외부항원에 대한 면역반응도 억제하고 있는 경우가 있는데, 예컨대 임산부의 태아에 대한 반응 및 만성감염상태에 있는 미생물에 대한 면역반응을 들 수 있다. 이러한 현상들은 항원 특이적 면역관용이 유도될 수 있는 기전으로 클론 제거(clonal deletion), 클론 무반응(anergy) 및 면역조절 T 세포(Treg)에 의한 능동적 통제에 의해 유도되는 것으로 알려져 있으며, 이식항원에 대한 면역관용이 우연히 획득된 일부 환자나 실험적으로 면역관용을 유도한 동물모델을 조사해 보면 위의 세 가지 기전 모두 이식면역관용에 관여한다는 사실이 확인되고 있고, 특히 최근에는 면역조절 T 림프구가 이식면역반응 뿐만 아니라 자가면역, 종양면역, 감염면역반응 등 생체의 거의 모든 면역반응을 통제하는데 관여하는 중요한 세포로 주목받고 있다.On the other hand, the immune system controls a specific immune response to an autoantigen in a normal state, and also suppresses an immune response to an external antigen. For example, immune response against a fetus of a pregnant woman and immunization against a microorganism in a chronic infection state Reaction. These phenomena are known to be induced by clonal deletion, clonal anergy, and active control by immunoregulatory T cells (Treg) as a mechanism by which antigen-specific immune tolerance can be induced, In addition, immunocompetent T lymphocytes have been shown to be involved in the transplantation of immune tolerance. In recent years, immune-regulatory T lymphocytes have been implicated in transplantation In addition to the immune response, it is attracting attention as an important cell involved in controlling almost all of the immune responses in the living body such as autoimmune, tumor immunity, and infectious immune response.

특히, 최근 그 존재가 밝혀진 면역조절 T 세포, 즉, 면역조절 T 림프구(Treg)는 크게 자연성(natural) Treg 와 적응성(adaptive) Treg 세포로 나눌 수 있으며, 자연성 Treg인 CD4+ CD25+ T 세포는 이 세포가 흉선에서 새로이 만들어질 때부터 면역억제기능을 부여받게 되며, 정상개체의 말초 CD4+ T 림프구 중 5 ~ 10%의 빈도로 존재한다. 아직까지 이 세포의 면역억제 기전은 정확히 파악되지 못하고 있지만, Foxp3라는 유전자의 발현 제어 인자가 이 세포의 분화와 활성에 중요한 역할을 수행한다는 사실이 최근에 밝혀졌다. 또한, 말초 자연성 T 세포는 특정 환경하에서 자가 또는 외부항원의 자극을 받으면 면역억제효과를 나타내는 세포로 분화될 수 있는데, 이를 적응성(adaptive) 또는 유도성(inducible) Treg로 부르며, IL-10을 분비하는 Tr1, TGF-β를 분비하는 Th3 및 CD8 Ts등이 여기에 해당한다.In particular, immunoregulatory T lymphocytes (Tregs), which have recently been discovered, can be divided into natural Treg and adaptive Treg cells, and CD4 + CD25 + T cells, which are natural Tregs, Is immunosuppressed from the time when it is newly produced in the thymus, and is present in a frequency of 5 to 10% of the peripheral CD4 + T lymphocytes of normal individuals. Although the immunosuppressive mechanism of this cell has not yet been elucidated yet, it has recently been shown that the expression control gene of Foxp3 plays an important role in the differentiation and activity of this cell. In addition, peripheral T cells can be differentiated into cells exhibiting an immunosuppressive effect upon being stimulated by a self or external antigen under a specific environment, which is called an adaptive or inducible Treg and secretes IL-10 Tr1 that secretes TGF-beta, Th3 and CD8 Ts that secrete TGF-beta, and the like.

또한, 앞서 종래기술에도 기술한 바와 같이, T 세포는 Treg 세포 이외에 분화 과정을 통해 Th17 세포로도 분화되는데, Th17 세포는 Treg 세포와 공통적으로 TGF-β의 존재 하에서 이루어지지만 Treg 세포의 경우 IL-6을 필요로 하지 않는 반면, Th17 세포의 경우에는 TGF-β와 함께 IL-6가 존재하는 상황에서 분화하고, IL-17을 분비하는 것을 특징으로 한다. In addition, as described in the prior art, T cells are differentiated into Th17 cells through differentiation in addition to T reg cells. Th17 cells are commonly produced in the presence of TGF- 6, whereas Th17 cells are differentiated in the presence of IL-6 together with TGF-beta and secrete IL-17.

그러나 Th17 세포는 염증 반응의 신호를 최대화시켜 질병의 진행을 가속화시키는 세포독성을 가지는 특성이 있다. 따라서 Th17 세포로의 분화 또는 활성의 억제는 면역질환을 치료할 수 있는 방법 중 하나이다.Th17 cells, however, have cytotoxic properties that maximize the signal of the inflammatory response and accelerate disease progression. Therefore, inhibition of differentiation or activity into Th17 cells is one of the methods for treating immune diseases.

한편, 본 발명자들은 종래 개발된 면역질환 치료제로서 보다 치료 효과가 우수한 세포치료제를 개발하였는데, STAT3의 발현 및 활성을 저해할 수 있는 억제제를 간엽줄기세포에 처리하여 배양한 간엽줄기세포가 면역질환을 매우 효과적으로 치료할 수 있음을 실험을 통해 확인할 수 있었는데, 본 발명의 일실시예에 따르면, STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포는 염증유발인자 및 염증성 사이토카인의 생성이 억제되고, Th1 및 Th17 세포의 분화 및 활성이 감소되며, 조절 T 세포(Regulatory T cell: Treg)의 분화 및 활성은 증진되는 것을 확인할 수 있었다. 따라서 본 발명은 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 유효성분으로 포함하는 면역질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물을 제공할 수 있다. Meanwhile, the present inventors have developed a cell therapy agent having superior therapeutic effect as a therapeutic agent for immunological disease that has been conventionally developed. When mesenchymal stem cells cultured by treatment with an inhibitor capable of inhibiting STAT3 expression and activity, The STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells were found to inhibit the production of inflammatory inducers and inflammatory cytokines and to inhibit Th1 and Th17 cell differentiation And activity were decreased, and the differentiation and activity of regulatory T cells (Treg) were enhanced. Accordingly, the present invention can provide a cell therapy composition for preventing or treating immune diseases, which comprises mesenchymal stem cells treated with STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) inhibitor as an active ingredient.

본 발명에서 사용할 수 있는 상기 STAT3 억제제로는 이에 제한되지는 않으나, STA-21(8-hydroxy-3-methyl-3,4-dihydrotetraphene-1,7,12(2H)-trione), AG-490((E)-2-Cyano-3-(3,4-dihydrophenyl)-N-(phenylmethyl)-2-propenamide), 아티프리모드(Atiprimod; 3-(8,8-dipropyl-3-azaspiro[4.5]decan-3-yl)-N,N- diethylpropan-1-amine), 오라노핀(Auranofin; 3,4,5-triacetyloxy-6- (acetyloxymethyl) oxane-2-thiolate; triethylphosphanium), 오로싸이오말레이트(Aurothiomalate; Sodium 2-(auriosulfanyl)-3-carboxypropanoate), BMS-354825(Dasatinib; N-(2-chloro-6-methylphenyl)-2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinyl]-2-methyl-4-pyrimidinyl]amino]-5-thiazole carboxamide monohydrate), CADPE(3-(3,4-dihydroxy-phenyl)-acrylic acid 2-(3,4-dihydroxy-phenyl)-ethyl ester), 스타틱(Stattic; 6-nitro-1,1-dioxide-benzo[b]thiophene), 도베실레이트(Dobesilate; calcium 2,5-dihydroxybenzenesulfonate), 에탄올(Ethanol), NCX-4016(NO-Aspirin), 넬피나비어(Nelfinavir; (3S,4aS,8aS)-N-tert-butyl-2-[(2R,3R)-2-hydroxy-3-[(3-hydroxy-2-methylphenyl)formamido]-4-(phenylsulfanyl)butyl]-decahydroisoquinoline-3-carboxamide), PDP(phosphododecapeptide), PS-341(볼테조밉(Bortezomib); [(1R)-3-methyl-1-({(2S)-3-phenyl-2-[(pyrazin-2-ylcarbonyl)amino]propanoyl}amino)butyl]boronic acid), R115777(티피파르닙(tipifarnib); 6-[amino(4-chlorophenyl)(1-methyl-1H-imidazol-5-yl)methyl]-4-(3-chlorophenyl)-1-methylquinolin-2(1H)-one), S31-M2001(N-Hexyl-2-(1-naphthalenyl)-5-[[4-(phosphonooxy)phenyl]), 스타틴계 화합물, 소듐살리실레이트(Sodium Salicylate), 카페익산(Caffeic acid; 3-(3,4-Dihydroxyphenyl)-2-propenoic acid 3,4-Dihydroxy-cinnamic acid trans-Caffeate 3,4-Dihydroxy-trans-cinnamate)), 에모딘(Emodin; 1,8-Dihydroxy-3-(hydroxymethyl)-9,10-anthracenedione), 우르솔릭산(Ursolic acid; 3-beta-3-hydroxy-urs-12-ene-28-oic-acid), 레스베라트롤(Resveratrol; 3,5,4'-trihydroxy-trans-stilbene), 레티노익산(Retinoic acid; (2E,4E,6E,8E)-3,7-dimethyl-9-(2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)nona-2,4,6,8-tetraenoic acid), EGCG(Epigallocatechin gallate; [(2R,3R)-5,7-dihydroxy-2-(3,4,5-trihydroxyphenyl)chroman-3-yl] 3,4,5-trihydroxybenzoate), Sr11302((E,E,Z,E)-3-Methyl-7-(4-methylphenyl)-9-(2,6,6-trimethyl-1-cyclohexen-1-yl)-2,4,6,8-nonatetraenoic acid), 탄시논 IIA(Tanshinone IIA; 1,6,6-Trimethyl-6,7,8,9-tetrahydrophenanthro[1,2-b]furan-10,11-dione) 및 커큐민(curcumin; (1E,6E)-1,7-Bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-1,6-heptadiene-3,5-dione)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것을 사용할 수 있다.STAT3 inhibitors that can be used in the present invention include, but are not limited to, STA-21 (8-hydroxy-3-methyl-3,4-dihydrotetraphene-1,7,12 (E) -2-Cyano-3- (3,4-dihydrophenyl) -N- (phenylmethyl) -2-propenamide, Atiprimod 3- (8,8-dipropyl-3-azaspiro [4.5 ] decan-3-yl) -N, N-diethylpropan-1-amine, Auranofin (3,4,5-acetyloxymethyl) oxane-2-thiolate, (2-chloro-6-methylphenyl) -2 - [[6- [4- (2-hydroxyethyl) -1- (3,4-dihydroxy-phenyl) -acrylic acid 2- (3,4-dihydroxy-phenyl) -methyl-4-pyrimidinyl amino] -5-thiazole carboxamide monohydrate), CADPE ester, stattic, 6-nitro-1,1-dioxide-benzo [b] thiophene, calcium 2,5-dihydroxybenzenesulfonate, ethanol, NCX- Aspirin, Nelfinavir ((3S, 4aS, 8aS) -N-tert -butyl-2 - [(2R, 3R) -2-hydroxy-3 - [(3- hydroxyphenyl) , PS-341 (Bortezomib; 2-ylcarbonyl) amino] propanoyl} amino) butyl] boronic acid, R115777 (tipifarnib (R) (1H-imidazol-5-yl) methyl] -4- (3-chlorophenyl) -1-methylquinolin-2 (N-Hexyl-2- (1-naphthalenyl) -5 - [[4- (phosphonooxy) phenyl], statin compound, sodium salicylate, caffeic acid 3- 4-Dihydroxyphenyl) -2-propenoic acid 3,4-Dihydroxy-cinnamic acid trans-Caffeate 3,4-Dihydroxy-trans- cinnamate), Emodin (1,8-Dihydroxy- , 10-anthracenedione, 3-beta-3-hydroxy-urs-12-ene-28-oic acid, resveratrol, 3,5,4'-trihydroxy- Retinoic acid (2E, 4E, 6E, 8E) -3,7-dimethyl-9- (2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl) nona-2,4,6,8-tetraenoic acid ), EGCG (Epigallocatechin gallate; [(2R, 3R) -5,7-dihydroxy-2- (3,4,5-trihydroxyphenyl) chroman-3-yl] 3,4,5-trihydroxybenzoate), Sr11302 , E, Z, E) - 2-cyclohexen-1-yl) -2,4,6,8-nonatetraenoic acid, Tanshinone IIA (2-methyl- ; 1,6,6-Trimethyl-6,7,8,9-tetrahydrophenanthro [1,2-b] furan-10,11-dione and curcumin (1E, 6E) -hydroxy-3-methoxyphenyl) -1,6-heptadiene-3,5-dione).

또한, 상기 STAT3 억제제는 1x105~1x107 세포수의 간엽줄기세포에 0.1uM~100uM의 농도로 처리하여 37℃의 온도에서 24~72시간 배양하여 면역질환 치료능이 우수한 간엽줄기세포를 수득할 수 있다. In addition, the STAT3 inhibitor can be obtained by treating mesenchymal stem cells at a concentration of 1 x 10 5 to 1 x 10 7 cells at a concentration of 0.1 uM to 100 uM and culturing the cells at 37 ° C for 24 to 72 hours to obtain mesenchymal stem cells excellent in the ability to treat immune diseases have.

또한, 상기에서 지칭하는 “스타틴계 화합물”은 실라스타틴 (cilastatin), 나이스타틴 (nystatin), 로바스타틴(lovastatin), 소마토스타틴 (somatostatin), 프라바스타틴 (pravastatin), 심바스타틴 (simvastatin), 플루바스타틴(fluvastatin), 아토바스타틴 (atorvastatin), 세르바스타틴 (cervastatin), 울리나스타틴 (ulinastatin) 및 로슈바스타틴(rosuvastatin)으로 이루어진 군 중에서 선택되는 것일 수 있다. The term " statin compounds " referred to above includes cilastatin, nystatin, lovastatin, somatostatin, pravastatin, simvastatin, fluvastatin, , Atorvastatin, cervastatin, ulinastatin, and rosuvastatin. ≪ RTI ID = 0.0 >

여기서 본 발명에서 사용된 "간엽줄기세포"는 골수(bone marrow), 혈액, 진피 및 골막에서 분리되는 줄기세포로서, 다양한 세포 예컨대 지방세포, 연골세포 및 뼈세포 등으로 분화할 수 있는 전능성(pluripotent) 또는 다능성(multipotent)세포를 의미한다. 상기 간엽줄기세포는 동물, 바람직하게는 포유동물, 보다 바람직하게는 인간의 간엽줄기세포일 수 있으며, 본 발명의 일실시예에 따르면 마우스의간엽줄기세포이다. 간엽줄기세포는 골수 등에 매우 적은 양으로 존재하지만, 이를 분리 및 배양하는 과정은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예컨대, 미국특허 제5,486,359호에 개시되어 있으며, 상기 특허 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다. 또한, 상기 간엽줄기세포는 공지된 방법에 따라 골수의 조혈모세포로부터 부착특성에 의해분리한 후 분화능력을 잃지 않은 상태에서 증식시켜 얻을 수 있다.As used herein, "mesenchymal stem cells" are stem cells isolated from bone marrow, blood, dermis and periosteum, and pluripotent stem cells capable of differentiating into various cells such as adipocytes, ) Or multipotent cells. The mesenchymal stem cell may be an animal, preferably a mammal, more preferably a mesenchymal stem cell of a human, and according to an embodiment of the present invention, it is a mesenchymal stem cell of a mouse. Mesenchymal stem cells are present in very small amounts in bone marrow, etc., but the process of isolating and culturing them is well known in the art and is disclosed, for example, in U.S. Patent No. 5,486,359, which is incorporated herein by reference . In addition, the mesenchymal stem cells can be obtained by separating the mesenchymal stem cells from the hematopoietic stem cells of bone marrow according to a known method, and then proliferating without losing their differentiation ability.

보다 구체적으로는, 인간 또는 마우스를 포함하는 포유동물, 바람직하게는, 인간의 간엽줄기세포 소스, 예컨대, 혈액 또는 골수로부터 간엽줄기세포를 분리한다. 상기 골수는 경골,대퇴골, 척수 또는 장골로부터 추출할 수 있다. 이어, 골수로부터 세포를 얻고, 이들 세포를 적합한 배지에서 배양한다. 배양과정에서 부유 세포를 제거하고 배양 플레이트에 부착된 세포들을 계대 배양하여, 최종적으로 구축된(established) 간엽줄기세포를 수득한다. 상기 과정에서 이용되는 배지로는, 줄기세포의 배양에 이용되는 일반적인 어떠한 배지도 이용할 수 있다. 바람직하게는, 혈청(예컨대, 우태아 혈청, 말 혈청 및 인간 혈청)이 함유된 배지이다. 본 발명에서 이용될 수 있는 배지는, 예를 들어, RPMI 시리즈, Eagles's MEM (Eagle's minimum essential medium, Eagle, H. Science 130:432(1959)), α-MEM (Stanner, C.P. et al., Nat. New Biol. 230:52(1971)), Iscove's MEM (Iscove, N. et al., J. Exp. Med. 147:923(1978)), 199 배지(Morgan et al., Proc. Soc. Exp. Bio. Med., 73:1(1950)), CMRL 1066, RPMI 1640 (Moore et al., J. Amer. Med. Assoc.More specifically, it isolates mesenchymal stem cells from a mammalian animal, preferably a human mesenchymal stem cell source, such as blood or bone marrow, including human or mouse. The bone marrow can be extracted from the tibia, femur, spinal cord or iliac bone. Cells are then obtained from the bone marrow, and these cells are cultured in a suitable medium. In the course of culturing, the floating cells are removed and the cells attached to the culture plate are subcultured to finally obtain established mesenchymal stem cells. As the medium used in the above process, any medium generally used for culturing stem cells can be used. Preferably, it is a medium containing serum (for example, fetal bovine serum, horse serum and human serum). Mediums which can be used in the present invention include, for example, RPMI series, Eagles ' s MEM (Eagle's minimum essential medium, Eagle, H. Science 130: Proc. Soc. Exp (1986)), 199 Iscove's MEM (Iscove, N. et al., J. Exp. Med. 73: 1 (1950)), CMRL 1066, RPMI 1640 (Moore et al., J. Amer. Med. Assoc.

199:519(1967)), F12 (Ham, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 53:288(1965)), F10 (Ham,R.G. Exp. Cell Res. 29:515(1963)), DMEM (Dulbecco's modifA ation of Eagle's medium, Dulbecco, R.et al., VirProcy 8:396(1959)), DMEM과 F12의 혼합물(Barnes, D. et al., Anal. Biochem. 102:255(1980)), Way-mo, h's MB752/1 (Waymo, h, C. J. Natl. Cancer Inst. 22:1003(1959)), McCoy's 5A (McCoy, T.A.,et al., Proc. Soc. Exp. Biol.Med. 100:115(1959)) 및 MCDB 시리즈(Ham, R.G. et al., In Vitro 14:11(1978))을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 배지에는, 다른 성분, 예를 들어, 항생제 또는 항진균제(예컨대, 페니실린, 스트렙토마이신) 및 글루타민 등이 포함될 수 있다. 배지 및 배양에 대한 일반적인 설명은 R. Ian Freshney, Culture of Animal Cells, Alan R. Liss, Inc., New York (1984)에 기재되어 있으며, 이 문헌은 본 명세서에 참조로서 삽입된다.USA), F10 (Ham, RG Exp. Cell Res. 29: 515 (1963)), F12 (Ham, Proc. Natl. Acad Sci. USA 53: 288 (1965)), Dulbecco's (Barnes, D. et al., Anal. Biochem. 102: 255 (1980)), Way (R) et al., VirProcy 8: 396 McCoy's 5A (McCoy, TA, et al., Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 100: 115 (1959)) and the MCDB series (Ham, RG et al., In Vitro 14:11 (1978)). The medium may include other components such as antibiotics or antifungal agents (e.g., penicillin, streptomycin) and glutamine. A general description of media and culture is provided in R. Ian Freshney, Culture of Animal Cells, Alan R. Liss, Inc., New York (1984), which is incorporated herein by reference.

또한, 간엽줄기세포의 확인은, 예컨대, 유세포 분석을 통하여 할 수 있다. 이러한 유세포 분석은, 간엽줄기세포의 특이한 표면 마커를 이용하여 실시된다. 예컨대, 간엽줄기세포는 CD44, CD29 및/또는 MHC 클래스 I에 대하여 양성 반응을 나타낸다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명에서 이용되는 간엽줄기세포는 표면 마커 CD44, CD29 및 MHC 클래스 I에 대하여 양성 반응을 나타내며, CD14, CD34, CD45, CD54, MHC 클래스 Ⅱ 및 CD11b에 대해서는 음성 반응을 나타낸다. 줄기세포와 표면 마커를 언급하면서 사용되는 용어양성 반응은 표면 마커에 대한 항체를 줄기세포에 처리하는 경우, 줄기세포의 표면 항원과 특이적으로 결합하는 양상을 의미한다. In addition, identification of mesenchymal stem cells can be performed, for example, through flow cytometry. Such flow cytometry analysis is carried out using a specific surface marker of mesenchymal stem cells. For example, mesenchymal stem cells are positive for CD44, CD29 and / or MHC class I. According to a preferred embodiment of the present invention, the mesenchymal stem cells used in the present invention are positive for the surface markers CD44, CD29 and MHC class I and negative for CD14, CD34, CD45, CD54, MHC class II and CD11b Lt; / RTI > A term used to refer to stem cells and surface markers refers to the way in which antibodies against surface markers are specifically bound to surface antigens of stem cells when treated with stem cells.

또한, 본 발명의 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포는 미분화 T 세포가 염증성 사이토카인을 분비하는 Th17 세포로 분화되는 것을 억제 또는 감소시키는 작용, 또는 과도한 면역반응을 정상으로 조절할 수 있는 조절 T 세포의 활성 또는 증폭을 촉진 또는 증가시키는 작용을 가짐으로써 각종 면역반응의 조절 이상으로 유발되는 면역질환을 예방 또는 치료할 수 있는 특징이 있다. In addition, the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells of the present invention inhibit or reduce the differentiation of undifferentiated T cells into Th17 cells that secrete inflammatory cytokines, or regulatory T cells capable of regulating excessive immune responses Activity or amplification, thereby preventing or treating immune diseases caused by abnormalities in regulation of various immune responses.

본 발명에서 상기 활성이란 생체 내에서 조절 T 세포(Regulatory T cell: Treg), 즉, 자연성(natural) Treg 와 적응성(adaptive) Treg 세포를 모두 포함하는 Treg 세포가 가지는 모든 기작이 촉진 또는 증진되는 것을 말하며, 생체 내의 면역반응이 정상상태를 유지하도록 면역조절작용, 예컨대 면역억제반응이 촉진 또는 증진되는 것을 말한다. In the present invention, the above-mentioned activity means that all mechanisms of Treg cells including regulatory T cells (T reg), that is, natural Treg and adaptive Treg cells, are promoted or promoted in vivo Refers to promoting or enhancing an immunomodulatory action such as an immunosuppressive reaction so that the immune response in vivo maintains a normal state.

또한, 상기 증폭(expansion)이란 미분화 T 세포가 조절 T 세포로 분화 및 증식되는 것을 말하는 것으로서, '분화(differentiation)'는 세포가 분열 증식하여 성장하는 동안에 서로 구조나 기능이 특수화하는 현상, 즉 생물의 세포, 조직 등이 각각에게 주어진 일을 수행하기 위하여 형태나 기능이 변해가는 것을 말하며, '증식(proliferation)' 은 세포가 분열되어 동질의 것이 불어나는 것으로서 보통 다세포생물의 체내에서 세포수가 증가되어 가는 것을 말한다.The term 'expansion' refers to the differentiation and proliferation of undifferentiated T cells into regulatory T cells. The term 'differentiation' refers to a phenomenon in which the structure or function of the cells is specialized during growth, The term "proliferation" refers to the division of cells into homogeneous cells, which usually increase the number of cells in the body of multicellular organisms. It is said to go.

본 발명에서 상기 면역질환은 포유류 면역계의 구성성분들이 포유류의 병리상태를 야기하거나, 매개하거나 또는 기타 공헌하는 질환을 의미한다. 또한, 면역 반응의 자극 또는 중단이 그 질병의 진행에 보상적인 효과를 갖는 질환을 모두 포함할 수 있는데, 본 발명에서는 과민성 면역반응으로 인해 야기되는 질환들을 포함할 수 있다. 이러한 면역질환의 예로는 이에 제한되지는 않으나, 자가면역질환; 염증성질환; 및 세포, 조직 또는 기관의 이식거부(transplantation rejection)질환 등을 모두 포함할 수 있다.In the present invention, the immunological disease refers to a disease in which components of the mammalian immune system cause, mediate, or contribute to a pathological condition of a mammal. In addition, the stimulation or discontinuation of the immune response may include all diseases that have a compensatory effect on the progress of the disease, and the present invention may include diseases caused by an irritable immune response. Examples of such immune disorders include, but are not limited to, autoimmune diseases; Inflammatory disease; And transplantation rejection diseases of cells, tissues or organs, and the like.

바람직하게 상기 본 발명의 면역질환은 이에 제한되지는 않으나, 류마티스 관절염 (Rheumatoid Arthritis), 천식 (Asthma), 피부염 (Dermititis), 건선 (Psoriasis), 낭섬유증 (Cystic Fibrosis), 고형장기 이식 후기 및 만성 거부증 (Post transplantation late and chronic solid organ rejection), 다발성 경화증 (Multiple Sclerosis), 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus), 쇼그렌 증후군(Sjogren syndrome), 하시모토 갑상선(Hashimoto thyroiditis), 다발성근염(polymyositis), 경피증(scleroderma), 아디슨병(Addison disease), 백반증(vitiligo), 악성빈혈(pernicious anemia), 사구체신염(glomerulonephritis) 및 폐섬유증(pulmonary fibrosis), 염증성장질환 (Inflammatory Bowel Dieseses), 자가면역성 당뇨 (Autoimmune Diabetes), 당뇨 망막증 (Diabetic retinopathy), 비염 (Rhinitis), 혀혈-재관류 손상 (Ischemia-reperfusion injury), 혈관성형술후 재협착 (Post-angioplasty restenosis), 만성 폐색성 심장 질환 (Chronic obstructive pulmonary diseases; COPD), 그레이브병 (Graves disease), 위장관 알러지 (Gastrointestinal allergies), 결막염 (Conjunctivitis), 죽상경화증 (Atherosclerosis), 관상동맥질환 (Coronary artery disease), 협심증 (Angina), 암 전이, 소동맥 질환, 이식편대숙주질환(graft-versus-host disease) 및 미토콘드리아 관련 증후군을 포함할 수 있다. Preferably, the immunological diseases of the present invention include, but are not limited to, rheumatoid arthritis, asthma, dermatitis, psoriasis, cystic fibrosis, solid organ transplantation, It is known that post-transplantation late and chronic solid organ rejection, multiple sclerosis, systemic lupus erythematosus, Sjogren's syndrome, Hashimoto thyroiditis, polymyositis, scleroderma inflammatory diseases such as scleroderma, Addison disease, vitiligo, pernicious anemia, glomerulonephritis and pulmonary fibrosis, Inflammatory Bowel Dieses, autoimmune Diabetes, diabetic retinopathy, rhinitis, ischemia-reperfusion injury, post-angioplasty (post-angioplasty) estradiol, estenosis, chronic obstructive pulmonary diseases (COPD), Graves disease, gastrointestinal allergies, conjunctivitis, atherosclerosis, coronary artery disease, Angina, cancer metastasis, small artery disease, graft-versus-host disease, and mitochondrial related syndrome.

한편, 모든 정상 개체에 있어서 가장 중요한 특성 중의 하나는 자기(self)를 구성하고 있는 항원물질에 대해서는 해롭게 반응하지 않는 반면, 비자기(non-self) 항원들에 대해서는 이를 인식하고 반응하여 제거할 수 있는 능력을 가지고 있다. 이처럼 자기항원에 대한 생체의 무반응을 면역학적 무반응성(immunologic unresponsiveness) 또는 관용(tolerance)이라고 한다.On the other hand, one of the most important characteristics of all normal individuals is that they do not react harmlessly to the antigenic substances constituting the self, while they recognize and react to non-self antigens I have the ability. Such a non-response of a living body to a self-antigen is called immunologic unresponsiveness or tolerance.

그러나 이러한 자기관용을 유도하거나 계속 유지하는데 있어서 문제가 생기게 되면 자기항원에 대하여 면역반응이 일어나게 되고, 이로 인하여 자신의 조직을 공격하는 현상이 발생하는데 이러한 과정에 의해 발생되는 질환을 자가면역질환이라고 한다.However, when problems arise in inducing or maintaining such self-tolerance, an immune response to self-antigen occurs, thereby attacking the tissue of self. The disease caused by this process is called autoimmune disease .

또한, 염증성 질환이란 염증유발인자 또는 방사선조사 등 유해한 자극으로 인해 인체 면역체계를 과도하게 항진시켜 대식세포와 같은 면역세포에서 분비되는 TNF-α(tumor necrosis factor-α), IL-1(interleukin-1), IL-6, 프로스타글란딘(prostagladin), 루코트리엔(luecotriene) 또는 산화질소(nitric oxide, NO)와 같은 염증유발물질(염증성 사이토카인)에 의해 유발되는 질환을 말한다.In addition, inflammatory diseases include TNF-α, IL-1 (interleukin-1), IL-1 (interleukin-1 and IL-2) secreted from immune cells such as macrophages by overexpression of the human immune system due to harmful stimuli, Inflammatory substances such as inflammatory cytokines such as IL-1, IL-6, prostagladin, luecotriene or nitric oxide (NO).

한편, 성공적인 장기 이식을 위해서는 이식할 세포 및 장기에 대한 수혜자의 면역 거부반응을 극복해야 한다. 이식면역거부반응의 주요 매개체는 T 세포로서, 이식편(graft)에 발현되어져 있는 주조직적합성분자(major histocompatibility complex, MHC)를 T 세포 수용체(T cell receptor)가 인지함으로써 면역반응이 유도되어 이식거부반응이 발생되게 된다. 따라서 이러한 이식면역거부반응을 감소시키기 위해 면역억제제들이 사용되고 있는데 이러한 면역억제제들의 공통된 목적은 이식편에 대한 T 세포-매개 면역반응을 억제하는 것이며, 최근에는 조절 T 세포를 이용하여 면역반응을 억제함으로써 이식거부질환을 치료하려는 방법이 시도되고 있다.On the other hand, in order to successfully transplant the organ, the recipient's immune rejection response to the transplanted cells and organs must be overcome. The main mediator of transplantation immune rejection is T cell, which is expressed in the graft. Major histocompatibility complex (MHC) is recognized by T cell receptor (T cell receptor) A reaction occurs. Immunosuppressive agents have been used to reduce these transplant immune rejection responses. A common goal of these immunosuppressive agents is to inhibit T cell-mediated immune responses to grafts. Recently, regulatory T cells have been used to suppress immune responses, Methods to treat refractory diseases have been attempted.

그러므로 본 발명에 따른 상기 조성물은 면역질환을 예방 또는 치료할 수 있는 약학적 조성물, 바람직하게는 세포치료용 조성물로 사용될 수 있다.Therefore, the composition according to the present invention can be used as a pharmaceutical composition capable of preventing or treating an immunological disease, preferably as a composition for treating a cell.

상기 치료란, 달리 언급되지 않는 한, 상기 용어가 적용되는 질환 또는 질병, 또는 상기 질환 또는 질병의 하나 이상의 증상을 역전시키거나, 완화시키거나, 그 진행을 억제하거나, 또는 예방하는 것을 의미하며, 본원에서 사용된 상기 치료란 용어는치료하는이 상기와 같이 정의될 때 치료하는 행위를 말한다. 따라서 포유동물에 있어서 면역질환의 치료또는 치료요법은 하기의 하나 이상을 포함할 수 있다:The term treatment refers to reversing, alleviating, inhibiting, or preventing the disease or disorder to which the term applies, or one or more symptoms of the disease or disorder, unless otherwise stated, As used herein, the term " treatment " refers to an act of treating when the treatment is defined as above. The therapeutic or therapeutic treatment of an immune disorder in a mammal therefore may include one or more of the following:

(1) 면역질환의 성장을 저해함, 즉, 그 발달을 저지시킴,(1) inhibiting the growth of the immune system, i.e., inhibiting its development,

(2) 면역질환의 확산을 예방함, 즉, 전이를 예방함,(2) preventing the spread of immune diseases, i.e., preventing metastasis,

(3) 면역질환을 경감시킴.(3) Reducing immune diseases.

(4) 면역질환의 재발을 예방함, 및(4) preventing the recurrence of immune disorders, and

(5) 면역질환의 증상을 완화함(palliating)(5) palliating symptoms of immune disorders

본 발명에 따른 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 약학적으로 유효한 양의 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기에서 약학적으로 유효한 양이란 면역질환의 증상을 예방, 개선 및 치료하기에 충분한 양을 말한다.The composition for the prevention or treatment of an immunological disease according to the present invention may comprise a mesenchymal stem cell treated with a STAT3 inhibitor in a pharmaceutically effective amount, alone or in combination with one or more pharmaceutically acceptable carriers, excipients or diluents. A pharmaceutically effective amount as used herein refers to an amount sufficient to prevent, ameliorate, and treat symptoms of an immune disease.

또한, 상기에서 약학적으로 허용되는이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 조성물을 말한다. 상기 담체, 부형제 및 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 또한, 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다. Also, the pharmaceutically acceptable hereinabove refers to a composition that is physiologically acceptable and does not normally cause an allergic reaction such as gastrointestinal disorder, dizziness, or the like when administered to a human. Examples of the carrier, excipient and diluent include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, Polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. Further, it may further include a filler, an anticoagulant, a lubricant, a wetting agent, a flavoring agent, an emulsifying agent and an antiseptic agent.

또한, 본 발명의 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다. In addition, the compositions of the present invention may be formulated using methods known in the art so as to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to the mammal. The formulations may be in the form of powders, granules, tablets, emulsions, syrups, aerosols, soft or hard gelatine capsules, sterile injectable solutions, sterile powders.

또한, 본 발명에 따른 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있으며, 활성 성분의 투여량은 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 환자의 중증도 등의 여러 인자에 따라 적절히 선택될 수 있고, 본 발명에 따른 면역질환의 예방 또는 치료용 조성물은 면역질환의 증상을 예방, 개선 또는 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있으며 바람직하게는 비경구로 투여할 수 있다. 비경구로 투여되는 경우 본 발명의 약제학적 조성물은 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입 및 복강 주입 등으로 투여할 수 있다. In addition, the composition for preventing or treating immunological diseases according to the present invention may be administered through various routes including oral, transdermal, subcutaneous, intravenous, or muscular, and the dose of the active ingredient may be appropriately determined depending on the route of administration, The composition of the present invention can be appropriately selected according to various factors such as body weight and the severity of the patient and the composition for preventing or treating immune diseases according to the present invention can be used in combination with known compounds having the effect of preventing, And preferably parenterally. When administered parenterally, the pharmaceutical composition of the present invention can be administered by intravenous injection, subcutaneous injection, muscle injection, and intraperitoneal injection.

본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여방식, 수용자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약제학적 조성물의 투여량은 바람직하게는 1일 당 1 x 103 - 1 x 1012 세포/kg 이다.The appropriate dosage of the pharmaceutical composition of the present invention may vary depending on such factors as the formulation method, administration method, age, body weight, sex, pathological condition, food, administration time, route of administration, excretion rate, . The dosage of the pharmaceutical composition of the present invention is preferably 1 x 10 3 - 1 x 10 12 cells / kg per day.

또한, 본 발명은 시험관 내에서 간엽줄기세포에 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제를 처리하는 단계를 포함하는, 면역질환의 예방 및 치료 효능을 갖는 간엽줄기세포의 제조방법을 제공할 수 있으며, 또한, 미분화 T 세포를 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포와 함께 공조 배양하는 단계를 포함하는, 미분화 T 세포의 Th1 세포 및 Th17 세포로의 분화 및 활성을 억제하는 방법을 제공할 수 있다.The present invention also provides a method for producing mesenchymal stem cells having an effect of preventing and treating immune diseases, comprising the step of treating STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) inhibitor in mesenchymal stem cells in vitro And further comprising the step of co-culturing undifferentiated T cells with STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) -treated mesenchymal stem cells to differentiate and activate Th1 cells and Th17 cells of undifferentiated T cells Can be provided.

나아가 본 발명은 미분화 T 세포를 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포와 함께 공조 배양하는 단계를 포함하는, 미분화 T 세포의 조절 T 세포(Regulatory T cell: Treg)로의 분화 및 활성을 촉진시키는 방법을 제공할 수 있다. Further, the present invention relates to a method for regulating T cells (regulatory T cells: Treg) comprising the step of co-culturing undifferentiated T cells with mesenchymal stem cells treated with a STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) Lt; RTI ID = 0.0 > and / or < / RTI >

본 발명에 따른 상기 시험관(in vitro)내에서 미분화 T 세포의 Th17 세포로의 분화를 감소 또는 억제하는 방법, 및 조절 T 세포를 활성화시키는 방법의 바람직한 방법은, 상기 T 세포를 배양하는 배지에 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 첨가하여 함께 배양할 수 있고, 또는 상기 T 세포를 배양하는 배지에 STAT3 억제제 및 간엽줄기세포를 함께 처리하여 배양할 수 있다.
A preferred method of reducing or inhibiting the differentiation of undifferentiated T cells into Th17 cells and activating regulatory T cells in vitro in accordance with the present invention comprises administering STAT3 The mesenchymal stem cells treated with the inhibitor may be added and cultured together, or the STAT3 inhibitor and the mesenchymal stem cells may be treated together in the culture medium for culturing the T cells.

이하 본 발명을 실시예에 의하여 더욱 상세하게 설명한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 국한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It will be apparent to those skilled in the art that these embodiments are merely illustrative of the present invention and that the scope of the present invention is not limited to these embodiments.

<< 실시예Example 1> 1>

STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated MSCMSC 에서 in STAT3STAT3 활성 억제와 동시에 염증과  At the same time, 종양인자Tumor factor 억제 효과 분석 Analysis of inhibition effect

본 발명자들은 STAT3 억제제가 처리된 MSC에서 STAT3 활성 억제와 동시에 염증과 종양인자 억제 효과가 있는지 여부를 확인하기 위하여 하기와 같이 실험을 진행하였다. The present inventors conducted experiments as follows to confirm whether STAT3 inhibitory effect and STAT3 inhibitor-treated MSC inhibit inflammation and tumor factor suppression simultaneously.

먼저, 지방 흡입수술로 얻어진 지방 조직이나, 외과적 수술 후에 얻어진 지방 조직을 10％ 페니실린-스트렙토마이신을 포함한 PBS로 10회 이상 세척하여 혈액과 이물질을 제거한 후, 조직을 0.2-0.3 g이 되도록 잘게 절단하였다. 0.2％ 콜라게나아제(Roche, Sandhofer Strasse, Mannheim, Germany) 용액에 넣어서 37℃의 수욕, 100rpm에서 1시간 동안 반응시켰다. 100 ㎛ 메쉬를 이용하여 콜라게나아제에 의해서 분해된 용액층과 분해 되지 않은 조각을 분리한 후, 분리된 콜라게나아제 용액에 동량의 PBS를 첨가하였다. 이어, 4℃, 1200 rpm에서 5분간 원심분리하여 상층액인 지질과 지방층을 제거하고, 콜라게나아제 상층액을 제거하였다. 가라앉은 MSC로부터 남은 콜라게나아제 용액을 제거하기 위해서 MSCGM[mesenchymal stem cell growth media: MSC 기본 배지 (Cambrex, Walkersville, MD, 미국), 간엽세포 성장보조물 (Cambrex, Walkersville, MD, 미국), 4 mM L-글루타민 및 페니실린(0.025 unit/500 ㎖)/스트렙토마이신(0.025 mg/500 ㎖)]를 넣어 다시 4℃, 1200 rpm에서 5분간 원심분리 하였다. MSCGM은 우태아혈청을 포함하는 DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium)에 기초한 배지이다. 이어, 상층액을 제거하고, 얻어진 MSC는 배양접시에 접종하여 MSCGM로 37℃, 5％ CO2 항온기에서 배양하였다. 이틀에 한번 씩 배양액을 교체하면서 배양하였다.First, the fat tissue obtained by liposuction surgery or the fat tissue obtained after surgical operation was washed with PBS containing 10% penicillin-streptomycin more than 10 times to remove blood and foreign substances, and the tissue was finely chopped to 0.2-0.3 g . 0.2% collagenase (Roche, Sandhofer Strasse, Mannheim, Germany), and reacted at 100 rpm for 1 hour in a water bath at 37 ° C. After separating the undegraded fragments from the solution layer decomposed by collagenase using a 100 μm mesh, the same amount of PBS was added to the separated collagenase solution. Then, the mixture was centrifuged at 4 ° C and 1200 rpm for 5 minutes to remove the lipids and fat layers, and the collagenase supernatant was removed. (Cambrex, Walkersville, MD, USA), mesenchymal cell growth aids (Cambrex, Walkersville, MD, USA), 4 mM &lt; RTI ID = 0.0 &gt; L-glutamine and penicillin (0.025 unit / 500 ml) / streptomycin (0.025 mg / 500 ml)] and centrifuged at 4 ° C and 1200 rpm for 5 minutes. MSCGM is a medium based on DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) containing fetal bovine serum. The supernatant was then removed and MSCs obtained were inoculated on a culture dish and cultured in MSCGM at 37 DEG C in a 5% CO2 incubator. The cultures were incubated while changing the culture medium once every two days.

상기와 같이 분리 및 배양한 간엽줄기세포를 대상으로 STAT3 억제제인 STA-21를 처리한 다음, 간엽줄기세포내 STAT3 발현양을 분석하였다. 구체적으로, 지방유래 간엽줄기세포에는 2x105세포수를 기준으로 5uM 및 10uM의 STA-21 약물을 각각 1mM씩 처리하여 37℃의 온도 조건 하에서 배양하여 STAT3억제제를 처리된 간엽줄기세포를 제조하였다. 이때, 대조군으로는 STAT3억제제를 처리되지 않은 간엽줄기세포를 사용하였으며, STAT3억제제를 처리된 간엽줄기세포에서 STAT3양을 웨스턴블롯(western blot)으로 분석하였다.In the mesenchymal stem cells isolated and cultured as described above, the amount of STAT3 expression in the mesenchymal stem cells was analyzed after treating the STAT3 inhibitor STA-21. Specifically, adipocyte-derived mesenchymal stem cells were treated with 1 mM each of 5 uM and 10 uM of STA-21 drug based on 2 × 10 5 cell numbers, and cultured under temperature conditions of 37 ° C. to prepare STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells. At this time, as the control group, the mesenchymal stem cells not treated with the STAT3 inhibitor were used and the amount of STAT3 in the STAT3 inhibitor treated mesenchymal stem cells was analyzed by western blotting.

그 결과, STAT3억제제를 처리하여 제조된 간엽줄기 세포 특이적으로 STAT3의 활성이 억제되었음을 알 수 있었다(도 1A 참조).As a result, the activity of STAT3 was specifically inhibited in mesenchymal stem cells prepared by treating the STAT3 inhibitor (see FIG. 1A).

또한, STAT3억제제를 처리하여 제조된 간엽줄기세포에서 염증인자 및 종양인자 유전자의 발현 정도를 real time PCR 방법을 사용하여 분석한 결과, 지방조직 유래의 간엽줄기세포에 STAT3억제제를 처리한 경우, STAT3억제제를 처리하지 않은 군에 비해 HMGB-1,IL-6,IL-1beta의 발현정도가 2배에서 10배정도 의미있게 감소되었음을 알 수 있었다. In addition, the expression of inflammatory and tumor factor genes in the mesenchymal stem cells prepared by treatment with STAT3 inhibitor was analyzed by using real time PCR. As a result, STAT3 inhibitor treatment of adipose tissue-derived mesenchymal stem cells resulted in STAT3 The expression level of HMGB-1, IL-6 and IL-1beta was significantly reduced by 2 to 10 times as compared with the control group.

STAT3 억제제인 STA-21(10uM)을 3일간 처리한 후 세포 용해물(lysate)를 얻어 세포 내 STAT3활성이 억제되었는지 확인하기 위해 웨스턴 블로팅을 시행한 결과, MSC내 STAT3활성이 감소됨을 알 수 있었으며, 이러한 세포내 염증이나 및 종양인자를 realtime PCR로 확인하였다. After 3 days of STA-21 (10 μM) inhibition of the STAT3 inhibitor, cell lysate was obtained and Western blotting was performed to confirm that STAT3 activity was inhibited. As a result, STAT3 activity in the MSC was decreased These intracellular inflammation and tumor factors were confirmed by realtime PCR.

그 결과, STAT3 억제제 농도의존적으로 이들 인자의 발현이 감소됨을 알 수 있었다(도 1B 및 C 참조).
As a result, it was found that the expression of these factors was decreased depending on the STAT3 inhibitor concentration (see FIGS. 1B and C).

프라이머 서열Primer sequence 프라이머primer 서열order IL-1beta 정방향 프라이머IL-1beta forward primer TTT GGG TCT TCC CAG AAC CTTT GGG TCT TCC CAG AAC C IL-1beta 역방향 프라이머IL-1beta reverse primer TCG TTA TCC CAT GTG TCG AA TCG TTA TCC CAT GTG TCG AA IL-6 정방향 프라이머IL-6 forward primer AAT TCG GTA CAT CCT CGA CGGAAT TCG GTA CAT CCT CGA CGG IL-6 역방향 프라이머IL-6 reverse primer GGT TGT TTT CTG CCA GTG CC GGT TGT TTT CTG CCA GTG CC HMGB-1 정방향 프라이머HMGB-1 forward primer GAT CCC AAT GCA CCC AAG AGGAT CCC AAT GCA CCC AAG AG HMGB-1 역방향 프라이머HMGB-1 reverse primer TTC GCA ACA TCA CCA ATG A TTC GCA ACA TCA CCA ATGA

따라서 이러한 결과를 토대로 본 발명자들은 STAT3 억제제를 간엽줄기세포에 처리하여 STAT3가 억제된 간엽줄기세포를 면역질환 치료를 위한 세포치료제로 활용할 수 있다는 것을 알 수 있었다.
Based on these results, the present inventors have found that treating STAT3 inhibitor with mesenchymal stem cells allows STAT3-inhibited mesenchymal stem cells to be used as a cell therapy agent for the treatment of immune diseases.

<< 실시예Example 2> 2>

STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated MSCMSC 에 의한 On by ILIL -10, -10, IDOIDO , , TGFTGF -- betabeta 및  And HGFHGF 의 of 발현정도Degree of expression 분석 analysis

본 발명자들은 STAT3 억제제가 처리된 간엽 줄기세포(MSC)의 면역질환 치료 효능을 조사하기 위해, 먼저 말초혈액으로부터 간엽줄기세포를 분리 및 배양하였는데, 즉, 정상인으로부터 혈액을 50cc 채취한 후 PBMC를 분리하여 20% FBS가 포함된 a-MEM 배지에서 5일간 배양 후 배양액 위에 뜬 세포들은 제거하였다. 이후 3일 간격으로 배지를 교체하였고, 세포증식 정도에 따라 세포를 배양 플레이트에서 떼어 다시 배양하였고 이러한 재배양은 3회 수행하여(passage 3) 말초 혈액으로부터 간엽줄기세포를 수득하였다. 또한, 수득한 세포가 간엽줄기세포인지를 확인하기 위해 세포 표지자를 확인하였는데, 그 결과, CD105+CD29+CD44 양성이며, CD34,CD45,HLA-DR 음성임을 확인함으로써 분리한 세포가 간엽줄기세포임을 확인하였다. In order to investigate the therapeutic effect of STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells (MSC) on immune diseases, we firstly isolated and cultured mesenchymal stem cells from peripheral blood. That is, after collecting 50 cc of blood from normal persons, PBMCs were isolated After 5 days of incubation in a-MEM medium containing 20% FBS, the cells on the medium were removed. Subsequently, the medium was replaced at 3-day intervals. The cells were removed from the culture plate according to the degree of cell proliferation and re-cultured. The cultivation was performed three times (passage 3) to obtain mesenchymal stem cells from peripheral blood. In order to confirm whether the obtained cells were mesenchymal stem cells, cell markers were confirmed. As a result, it was confirmed that CD105 + CD29 + CD44-positive, CD34, CD45 and HLA-DR negative cells were mesenchymal stem cells Respectively.

이후 분리한 간엽줄기세포를 대상으로 STAT3 억제제인 AG-490 및 sta-21 을 1x105 세포수의 간엽줄기세포를 기준으로 5uM, 10uM의 양으로 처리하였다. The STAT3 inhibitors AG-490 and sta-21 were treated with 5 uM and 10 uM of mesenchymal stem cells at a concentration of 1 × 10 5 cells.

이후 STAT3 억제제를 처리하여 배양한 간엽줄기세포와 STAT3 억제제를 처리하지 않은 간엽줄기세포를 대상으로 면역조절능과 관련된 유전자인 IL-10, IDO, TGF-beta 및 HGF의 발현정도를 분석하였다. 이 4가지 유전자의 발현정도 분석은 세포내에서 발현되는 mRNA의 양을 실시간 PCR을 수행하여 분석하였고, 각 유전자의 발현 정도를 분석하기 위해 PCR에 사용된 프라이머 서열은 다음과 같다.
We then analyzed the expression levels of IL-10, IDO, TGF-beta, and HGF, which are genes related to immunomodulating ability, in mesenchymal stem cells treated with STAT3 inhibitor and mesenchymal stem cells not treated with STAT3 inhibitor. Analysis of the expression levels of these four genes was performed by real-time PCR analysis of the amount of mRNA expressed in the cells. The primer sequences used in the PCR for analyzing the expression levels of the respective genes are as follows.

프라이머 서열Primer sequence 프라이머primer 서열order IDO 정방향 프라이머IDO forward primer TTT GGG TCT TCC CAG AAC CTTT GGG TCT TCC CAG AAC C IDO 역방향 프라이머IDO reverse primer GCG CTG TTG GAA ATA GCT TCGCG CTG TTG GAA ATA GCT TC IL-10 정방향 프라이머IL-10 forward primer CCA AGC CTT GTC TGA GAT GACCA AGC CTT GTC TGA GAT GA IL-10 역방향 프라이머IL-10 reverse primer TGA GGG TCT TCA GGT TCT CCTGA GGG TCT TCA GGT TCT CC TGF-beta 정방향 프라이머TGF-beta forward primer TGC GGC AGC TGT ACA TTG ATGC GGC AGC TGT ACA TTGE TGF-beta 역방향 프라이머TGF-beta reverse primer TGG TTG TAC AGG GCC AGG ATGG TTG TAC AGG GCC AGGA HGF 정방향 프라이머HGF forward primer CCA CCA TAA TCC CCC TCA CACCA CCA TAA TCC CCC TCACE HGF 역방향 프라이머HGF reverse primer GGC TGG GGC TAC ACT GGA TTGGC TGG GGC TAC ACT GGA TT

분석 결과, 도 2에 기재된 바와 같이, AG-490 및 sta-21와 같은 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포는 STAT3 억제제를 처리하지 않은 간엽줄기세포에 비해 IL-10의 발현이 최대 20배 정도 증가한 것으로 나타났고, IDO의 발현도 최대 2배, TGF-beta의 발현은 최대 7배, HGF의 발현은 최대 10배정도 증가한 것으로 나타났다.As shown in FIG. 2, the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells such as AG-490 and sta-21 showed up to 20-fold increase in IL-10 expression compared to mesenchymal stem cells not treated with STAT3 inhibitor , IDO expression was up to 2-fold, TGF-beta expression was up to 7-fold, and HGF expression was up to 10-fold.

<< 실시예Example 3> 3>

STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated 간엽줄기세포의Mesenchymal 표현형 분석 Phenotypic analysis

본 발명자들은 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포가 억제제를 처리하지 않은 간엽줄기세포와 세포의 표현형에 있어서 변화가 있는지 확인하기 위해 표현형 분석을 수행하였는데, 즉, STAT3 억제제가 첨가된 배양액과 상기 억제제를 첨가하지 않은 배양액에서 각각 배양한 세포를 뜯어서 간엽줄기세포의 표현형과 관련된 현광이 라벨된 항체를 이용하여 FACS 분석을 수행하였다. 이때 간엽줄기세포의 양성표지자로 CD105, CD29 및 CD44를 사용하였고, 음성 표지자로 CD45, HLA-DR를 사용하였다.The present inventors carried out phenotypic analysis to confirm whether the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells have a change in the phenotype of mesenchymal stem cells and cells in which the inhibitor has not been treated. Namely, the STAT3 inhibitor-added culture medium and the inhibitor FACS analysis was performed using the antibody labeled with a glare associated with the phenotype of mesenchymal stem cells by culturing the cells cultured in the culture medium without addition. At this time, CD105, CD29 and CD44 were used as positive markers of mesenchymal stem cells, and CD45 and HLA-DR were used as negative markers.

분석결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포와 억제제가 처리되지 않은 간엽줄기세포 모두 유사한 세포 표현형을 나타낸 것으로 분석되었다. 따라서 STAT3 억제제를 처리한다고 하여 간엽줄기세포 자체의 세포 표현형에는 변화를 유발시키지 않으면서 간엽줄기세포의 면역조절능을 증진시킬 수 있다는 것을 알 수 있었다.
As a result of the analysis, it was analyzed that the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells and the non-inhibitory mesenchymal stem cells exhibited similar cell phenotypes. Therefore, it could be shown that treatment with STAT3 inhibitor can enhance the immunoregulatory ability of mesenchymal stem cells without causing changes in the cell phenotype of mesenchymal stem cell itself.

<< 실시예Example 4> 4>

STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated 간엽줄기세포의Mesenchymal 줄기세포 기능 유지 여부 확인 Check whether stem cell function is maintained

본 발명자들은 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포가 줄기세포 자체의 기능을 유지하는지 여부를 알아보기 위하여 각기 다른 조성의 분화 유도 배양액을 이용하여 지방세포, 골세포, 연골세포로 분화능 테스트를 시행하였다. In order to examine whether the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells maintain the function of the stem cells themselves, the present inventors conducted a differentiation test on adipocytes, osteocytes and chondrocytes using differentiation induction media of different compositions.

지방세포, 골세포, 연골세포 각각의 분화배양액은 중간엽줄기세포 분화 키트를 사용하였으며(R&D, #sc006), 24웰 플레이트에 세포를 각각 1x104으로 깔아준 후 키트내 전용 배양액을 넣고 3-4일마다 배지를 교환하여 2-3주간 배양하였다. 그런 다음 각각의 detection Ab, DAPI로 염색한 후, 형광현미경으로 관찰하였다. (R & D, # sc006), the cells were plated on a 24-well plate at a density of 1 × 10 4 cells / ml, followed by the addition of a culture medium to the kit. The medium was changed every 4 days and cultured for 2-3 weeks. Then, each detection Ab was stained with DAPI, and then observed with a fluorescence microscope.

그 결과, 도 4와 같이 STAT3억제에 따른 중간엽줄기세포 분화능에는 차이를 보이지 않음을 알 수 있었다. 따라서, STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포가 줄기세포 자체의 기능을 잃지 않고 유지함을 확인할 수 있었다.
As a result, as shown in FIG. 4, there was no difference in the pluripotency of mesenchymal stem cells due to STAT3 inhibition. Therefore, it was confirmed that the STAT3 inhibitor treated mesenchymal stem cells did not lose the function of the stem cells themselves.

<< 실시예Example 5> 5>

STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated 간엽줄기세포의Mesenchymal 사이토카인 수용체 발현 정도 분석 Analysis of cytokine receptor expression level

본 발명자들은 STAT3억제제가 처리된 지방유래 간엽줄기세포가 세포 이동 능력을 가지고 있어 병소부위로 이동이 가능한지 확인하기 위해, 간엽줄기세포의 이동과 관련된 인자인 CCR1, CCR2, CCR3, CCR4, CCR7, CCR9 및 CXCR4의 발현 정도를 실시간 PCR을 수행하여 분석하였다.In order to examine whether the STAT3 inhibitor-treated adipose-derived mesenchymal stem cells have cell migration ability and are able to migrate to the lesion site, the present inventors investigated whether STAT3 inhibitory mesenchymal stem cells And CXCR4 were analyzed by real time PCR.

분석 결과, 도 5a에 나타낸 바와 같이, STAT3억제제를 처리하지 않은 군에 비 해 STAT3억제제가 처리한 간엽줄기세포에서는 CCR2(약 3배), CCR3(약 3배), CCR4(약 3배), CCR7(약 5배), CCR9(약 4배)의 발현이 확연히 증가되어 있는 것으로 나타났다.As shown in FIG. 5A, CCR2 (about 3-fold), CCR3 (about 3-fold), CCR4 (about 3-fold) and STAT3 CCR7 (about 5-fold) and CCR9 (about 4-fold).

또한, 본 발명자들은 사이토카인 발현 증가에 따른 이동(migration) 능력이 증가되는지 여부를 확인하기 위하여, ct-3422 제품(pore size 8 micro M, polycarbonate)을 사용하여 상부 체임버(upper chamber) 위에 MSC 1x104/100ul Serum Free-DMEM을 넣어주고 하부 체임버(lower chamber)에는 SDF-1 10ng/ml포함된 serum free media 300ul넣고 하루동안 배양한 뒤, 다음날 이동한 세포의 수를 세었다. In order to confirm whether the migration ability of the cytokine increases with the increase of the expression level, the present inventors used a ct-3422 product (pore size 8 micro M, polycarbonate) 4 / 100ul Serum Free-DMEM was added to the lower chamber and 300ul of serum free media containing 10ng / ml of SDF-1 was added to the lower chamber.

그 결과, STAT3억제제를 처리하지 않은 대조군과 비교하였을 때 STAT3억제제를 처리한 간엽줄기세포에서 월등하게 이동된 세포가 증가하였음을 알 수 있었다(도 5B 참조).
As a result, it was found that the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells significantly increased the number of cells migrated when compared to the control group not treated with the STAT3 inhibitor (see FIG. 5B).

<< 실시예Example 6> 6>

Th17Th17 조건에서 T 세포와의 공조배양에 의한  By co-culturing with T cells under conditions STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated MSCMSC 의 of 면역조절능Immune regulation ability 분석 analysis

본 발명자들은 염증 유발 및 질병 유발 조건인 Th17 조건 하에서, T 세포와 본 발명의 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 공조 배양할 경우에도 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포가 우수한 면역 조절능을 가지고 있어 면역질환을 위한 세포 치료제로 사용될 수 있는지 조사하기 위해 다음과 같은 실험을 수행하였다.The present inventors have found that the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells have excellent immunoregulatory ability even when the T cells and the STAT3 inhibitor treated mesenchymal stem cells are co-cultured under the condition of inducing inflammation and disease, Th17 The following experiment was conducted to investigate whether it could be used as a cell therapy agent for immune diseases.

먼저, DBA1/J 정상 마우스군으로부터 CD4 T 세포를 분리하였고, 분리된 세포에 CD3 0.5ug/ml, CD28 1ug/ml, IL-6 20ng/ml, TGF-b 2ng/ml, IFNr mAb, IL-4 mAb를 처리하여 Th17 세포로의 분화 조건으로 세포를 배양하였다. 이후 Th17 분화 조건에서 배양된 T 세포를 상기 실시예 1에서 사용한 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포와 공조 배양하였고, 공조 배양된 간엽줄기세포를 대상으로 IL-17 및 IL-10의 생성정도를 ELISA를 사용하여 분석하였으며, Th1 및 Th17 세포분화 정도와 Treg 세포 분화 정도를 유세포분석기를 통하여 분석하였는데, 유세포기를 이용한 분석은 anti-CD4-percp(h1, Th17 조사용) 및 anti-CD4-percp 와 anti-CD25-APC(Treg 조사용)를 세포에 처리하고 4℃에서 30분간 반응시킨 다음, 세포를 permeabilization 한 다음, anti-IL-17-PE, anti-IFNr-FITC 및 Ab anti-Foxp3-PE 형광 Ab로 각각 반응시킨 후, 유세포 분석기로 분석하였다. 또한, 대조군으로는 STAT3 억제제를 처리하지 않은 간엽줄기세포를 사용하였다.
First, CD4 T cells were isolated from DBA1 / J normal mouse group. CD4 T cells were isolated from the DBA1 / J normal mouse group. 4 mAb, and the cells were cultured under conditions of differentiation into Th17 cells. Then, T cells cultured under the condition of Th17 differentiation were co-cultured with the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells used in Example 1. The degree of production of IL-17 and IL-10 in the co-cultured mesenchymal stem cells was measured by ELISA , And anti-CD4-percp (h1, Th17) and anti-CD4-percp were used to analyze the degree of Th1 and Th17 cell differentiation and Treg cell differentiation using flow cytometry. anti-IL-17-PE, anti-IFNr-FITC and Ab anti-Foxp3-PE (anti-CD25-APC) were incubated at 4 ° C for 30 min. Fluorescent Ab, and analyzed by flow cytometry. As a control group, mesenchymal stem cells without STAT3 inhibitor were used.

분석 결과, 도 6 및 도 9에 나타낸 바와 같이 염증 유발 및 질병 유발 조건인 Th17 세포분화 조건 하에서도 STAT3 억제제를 처리한 간엽줄기세포를 T 세포와 공조 배양한 경우, T 세포에서 염증성 사이토카인인 IL-17의 생성양은 대조군에 비해 현저하게 감소된 것으로 나타났고, 면역조절능을 갖는 사이토카인인 IL-10의 생성은 증가한 것으로 나타났다.As shown in FIG. 6 and FIG. 9, when the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells were co-cultured with T cells under conditions of inflammation induction and disease inducing conditions, Th17 cell differentiation condition, the inflammatory cytokine IL -17 was significantly reduced compared to the control group, and the production of IL-10, an immunocompetent cytokine, was increased.

또한, Th1 및 Th17 세포분화 정도는 STAT3 억제제를 처리한 간엽줄기세포에 의해 Th1 및 Th17 세포분화가 억제되는 것으로 나타났고, 억제 정도는 STAT3 억제제를 처리하지 않은 간엽줄기세포에 비해 더욱 효과적으로 억제되는 것으로 나타났으며, 반면 면역조절능을 갖는 Treg 세포는 STAT3 억제제를 처리한 간엽줄기세포에 의해 더욱 분화가 증가된 것으로 나타났으며, STAT3 억제제를 처리하지 않은 간엽줄기세포에 비해 Treg 세포는 더욱 증가된 것으로 나타났다(도 7 및 도 8 참조).
In addition, the level of Th1 and Th17 cell differentiation was inhibited by STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells, and Th1 and Th17 cell differentiation was inhibited more effectively than STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells In contrast, Treg cells with immunoregulatory ability were further differentiated by STAT3 inhibitor treated mesenchymal stem cells, and Treg cells were more increased than STAT3 inhibitor treated mesenchymal stem cells (See FIGS. 7 and 8).

<< 실시예Example 7> 7>

STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated 간엽줄기세포의Mesenchymal 류마티스Rheumatism 관절염 치료 효과 분석 Analysis of treatment effect of arthritis

<7-1><7-1> STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated 간엽줄기세포의Mesenchymal 관절염 지수 평가 Arthritis index evaluation

본 발명자들은 STAT3억제제가 처리된 간엽줄기세포의 자가항원활성유도를 통한 류마티스관절염 동물모델에서 류마티스 관절염 치료 효과가 있는지를 알아보기 위하여 하기와 같이 실험하였다. The inventors of the present invention conducted the following experiment to determine whether treatment of rheumatoid arthritis has an effect on the animal model of rheumatoid arthritis through induction of autoantigen activity of STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells.

먼저, DBA/1J마우스에 type II collagen(CII)과 CFA(adjuvant) 1:1 로 혼합하여 마우스당 100ug의 CII를 tail base에 50ul 용량으로 주사하였다 2주후, CII와 IFA 1:1로 혼합액을 100ug/50ul로 2차로 주입하는 방법으로 관절염 동물을 제작하였다.First, DBA / 1J mouse was mixed with 1: 1 type II collagen (CII) and CFA (adjuvant), and 100 ug of CII per mouse was injected into the tail base in a volume of 50 ul. After 2 weeks, a mixture of CII and IFA 1: Arugrate animals were prepared by injecting second injection at 100 ug / 50ul.

관절염 유도마우스 1주일 후 1주일에 1회 총3회 정맥내 1x106의 복강 내 아무것도 처리되지 않은 간엽줄기세포 또는 STAT3억제제가 처리된 간엽줄기세포를 각각 주입하였으며, 각 군은 5마리씩을 대상으로 진행하였고 관절염 평가를 진행하였다. 첫 번째 접종을 시작점으로 하여 3주 후부터 실험의 내용을 알고 있지 않은 관찰자 세 명이 일주일에 두 번씩 관절 염증의 위중도를 평가하여 61일까지 관찰하였다. 이 때 관절염 평가는 마리당 2차 접종 때 CII/CFA 를 투여한 다리를 제외한 나머지 세 다리에서 아래의 척도에 따라 매긴 점수를 합하여 3 으로 나눈 평균치를 얻고, 다시 각 동물 모델에서 3명의 관찰자가 얻은 수치를 합산하여 나눈 평균치를 사용하였다. 관절염 평가에 따른 점수와 기준은 다음과 같다.One week after the arthritis-inducing mouse, the mice were injected intravenously with 1 × 10 6 non-treated mesenchymal stem cells or STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells three times intravenously, and each group received 5 mice And progressed to arthritis evaluation. From three weeks after the first inoculation, three observers who did not know the contents of the experiment were evaluated for severity of joint inflammation twice a week for up to 61 days. At this time, the arthritis evaluation was obtained by dividing the scores of the three scales except for the legs administered with CII / CFA at the second inoculation by 3 according to the following scale, and again, the average value obtained by the three observers Were used as the average value. The scores and criteria for arthritis evaluation are as follows.

-평가 기준-   -Evaluation standard-

0점: 부종이나 종창이 없다.   0 point: No edema or swelling.

1점: 발 또는 발목관절에 국한된 경한 부종과 발적   1 point: mild swelling and redness limited to the foot or ankle joint

2점: 발목관절에서 족근골(metatarsal)에 걸친 경한 부종과 발적   2 points: Mild swelling and redness from ankle joint to metatarsal

3점: 발목관절에서 족근골에 걸친 중등도의 부종과 발적   3 points: Moderate edema and redness from ankle joint to foot

4점: 발목에서 다리 전체에 걸쳐 부종과 발적이 있는 경우   4 points: with edema and redness across the entire ankle

투여한 후 관절염 평가를 진행하였다.
After the administration, arthritis evaluation was carried out.

그 결과, 간엽줄기세포를 주입한 마우스 군에 비해 STAT3억제제가 처리된 간엽줄기세포를 주입한 마우스 군의 경우, 관절염이 더욱 의미있게 억제됨을 알 수 있었다(도 10 참조).
As a result, arthritis was more significantly inhibited in the mouse group injected with the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells than in the mouse group injected with mesenchymal stem cells (see FIG. 10).

<7-2><7-2> STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated 간엽줄기세포의Mesenchymal 항체 조절 효과 분석 Analysis of antibody modulating effect

또한, STAT3억제제가 처리된 간엽줄기세포에 항체를 조절할 수 있는 효과가 있는지 알아보기 위하여 하기와 같이 실험하였다. In order to examine whether the STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells can control the antibody, the following experiment was conducted.

먼저, IgG항체를 상온에서 2시간 동안 96-웰 마이크로필터 플레이트(well microtitier plate)에 도포한 다음 희석해 둔 혈청 샘플을 well당 50㎕씩 넣고 실온에서 1시간 반응 시켰다. 반응이 끝나면 0.05% Tween 20(Amresco)이 포함된 TBS(pH 8.0)용액으로 3번씩 세척 후, IgG항체를 1시간동안 반응시키고, 위의 용액으로 세척한 후 TMB +H2O2 system(KPL, Gaithersburg, MD)으로 발색하였다. 이는 450nm에서 흡광도로 읽었으며, 항체 측정 결과는 흡광도 자체로 표시하였다.First, the IgG antibody was applied to a 96-well microtitier plate at room temperature for 2 hours, and then diluted serum samples were added to each well in an amount of 50 μl per well, followed by reaction at room temperature for 1 hour. After completion of the reaction, the cells were washed three times with TBS (pH 8.0) containing 0.05% Tween 20 (Amresco), and the IgG antibody was reacted for 1 hour. The cells were washed with the above solution and then washed with TMB + H 2 O 2 system , Gaithersburg, Md.). This was read as absorbance at 450 nm, and the result of the antibody measurement was expressed as the absorbance itself.

그 결과, 단순히 간엽줄기세포를 주입한 마우스 군에 비해 간엽줄기세포와 STAT3억제제가 함께 처리된 마우스군의 경우 IgG 항체 분비가 현저히 감소하였음을 알 수 있었다(도 10 참조).
As a result, it was found that the IgG antibody secretion was remarkably decreased in mouse group treated with mesenchymal stem cells and STAT3 inhibitor, compared with mice injected with mesenchymal stem cells alone (see FIG. 10).

<7-3><7-3> STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated 간엽줄기세포의Mesenchymal 염증성사이토카인Inflammatory cytokine 분비  secretion 조절능Control ability 효과 분석 Effect analysis

또한, STAT3억제제가 처리된 간엽줄기세포에 염증 조절 효과가 있는지 여부를 알아보기 위하여 염증성 사이토카인인 IL-17 및 TNF-a의 생성정도를 분석하였는데, LPS(10mg/ml)를 3일간 자극하는 조건에 STAT3억제제가 처리된 간엽줄기세포를 함께 투여하여 비장세포를 자극하였다.In addition, we examined the production of IL-17 and TNF-a, which are inflammatory cytokines, in order to investigate whether inflammatory regulatory effects of STAT3 inhibitor-treated mesenchymal stem cells were observed. LPS (10 mg / ml) The conditions were stimulated with STAT3 inhibitor treated mesenchymal stem cells.

배양된 상층액을 모아 mouse TNF-a, sandwich ELISA를 이용하여 IL-17 및TNF-a 발현 정도를 확인하였는데, 구체적으로 먼저, 96웰 플레이트(well plate)에 단클론성 anti-TNF-a 2μg/mL으로 4℃에서 밤새 반응시켰으며, 반응 후 차단용액(1% BSA/PBST)으로 비 특이적 결합을 차단시켰다. IL-17 recombinant 및 TNF-a recombinant를 각각 1/2씩 연속 희석하여 스탠다드(standard)로 사용하였고, 세포배양 상층 액을 넣고 실온에서 2시간 반응시켰다. 그리고 나서 바이오티닐(biotinylated) anti-TNF-a를 2시간 동안 실온 반응 시키고 4회 세척 후 ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate를 희석하여 첨가하고 실온에서 2시간 반응시켰으며, 이후 PNPP/DEA 용액을 넣고 발색하였고, 발색 후 405 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다.The cultured supernatant was collected and the degree of IL-17 and TNF-a expression was confirmed using mouse TNF-a and sandwich ELISA. Specifically, monoclonal anti-TNF-a was added to a 96-well plate at 2 μg / mL at 4 ° C overnight, and blocked non-specific binding with blocking solution (1% BSA / PBST). The IL-17 and TNF-a recombinants were serially diluted in duplicate and used as a standard. Cell culture supernatants were added and reacted at room temperature for 2 hours. Then, biotinylated anti-TNF-a was reacted at room temperature for 2 hours, washed 4 times, diluted with ExtraAvidin-Alkaline Phosphatase conjugate, reacted at room temperature for 2 hours, and then developed with PNPP / DEA solution , And the absorbance was measured at a wavelength of 405 nm after color development.

그 결과, 단순히 간엽줄기세포를 주입한 마우스 군에 비해 간엽줄기세포와 STAT3억제제가 함께 처리된 마우스군의 경우 염증성 사이토카인인 IL-17 및 TNF-a의 생성이 더 유의적으로 억제되었음을 알 수 있었다(도 10 참조).
As a result, the production of IL-17 and TNF-a, which are inflammatory cytokines, was significantly inhibited in mice treated with mesenchymal stem cells and STAT3 inhibitor, compared to mice injected with mesenchymal stem cells alone (See Fig. 10).

<< 실시예Example 8> 8>

병인 T림프구와의 공조배양에 의한 By co-culturing with T lymphocytes STAT3STAT3 억제제가 처리된  When the inhibitor is treated MSCMSC 의 of 면역조절능Immune regulation ability 분석 analysis

본 발명자들은 STAT3억제제가 처리된 지방유래 간엽줄기세포의 루푸스 동물모델 세포에 미치는 면역조절능력을 확인하기 위하여 하기와 같이 실험을 하였다. The present inventors conducted the following experiments to confirm immunoregulatory ability of STAT3 inhibitor-treated adipose-derived mesenchymal stem cells on lupus animal model cells.

먼저, 루푸스 동물모델인 Roquin마우스로부터 세포를 분리하여 간엽줄기세포와 1:10의 비율로 3일간 공조배양한 뒤 면역조절 T 세포(Foxp3+Treg)의 활성을 유세포분석법을 통해 분석하였다. 유세포기를 이용한 분석은 anti-CD4-percp(h1, Th17 조사용) 및 anti-CD4-percp 와 anti-CD25-APC(Treg 조사용)를 세포에 처리하고 4℃에서 30분간 반응시킨 다음, 세포를 permeabilization 한 다음, anti-Foxp3-PE 형광 Ab로 각각 반응시킨 후, 유세포 분석기로 분석하였다. First, cells were isolated from Roquin mouse, an animal model of lupus, and cultured for 3 days at a ratio of 1:10 with mesenchymal stem cells. The activity of immunoregulatory T cells (Foxp3 + Treg) was analyzed by flow cytometry. The cells were treated with anti-CD4-percp (h1, Th17) and anti-CD4-percp and anti-CD25-APC (using Treg) And reacted with anti-Foxp3-PE fluorescence Ab, respectively, and analyzed by flow cytometry.

그 결과, 도11에서 나타낸바와 같이 STAT3억제제를 처리하지 않은 군에 비해 처리한 군의 경우, 면역조절 T 세포의 활성이 더욱 증가됨을 알 수 있었다.
As a result, as shown in FIG. 11, the activity of immunoregulatory T cells was further increased in the treated group than in the group not treated with the STAT3 inhibitor.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.

Claims (10)

STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 유효성분으로 포함하는, 면역질환의 예방 또는 치료용 세포치료제 조성물에 있어서, 상기 STAT3 억제제는 STA-21(8-hydroxy-3-methyl-3,4-dihydrotetraphene-1,7,12(2H)-trione) 또는 AG-490((E)-2-Cyano-3-(3,4-dihydrophenyl)-N-(phenylmethyl)-2-propenamide)이고, 상기 면역질환은 류마티스 관절염 (Rheumatoid Arthritis) 또는 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus)인 것을 특징으로 하는 조성물.Wherein said STAT3 inhibitor is selected from the group consisting of STA-21 (8-hydroxy-3 &lt; RTI ID = 0.0 &gt; 2-cyano-3- (3,4-dihydrophenyl) -N- (phenylmethyl) -2 -propenamide, and wherein said immune disease is rheumatoid arthritis or systemic lupus erythematosus. 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 STAT3 억제제가 처리된 간엽줄기세포는 염증유발인자 및 염증성 사이토카인의 생성이 억제되고, Th1 및 Th17 세포의 분화 및 활성이 감소되며, 조절 T 세포(Regulatory T cell: Treg)의 분화 및 활성은 증진되는 것을 특징으로 하는 조성물.The method according to claim 1,
The STAT3 inhibitor treated mesenchymal stem cells inhibit the production of inflammatory and inflammatory cytokines, differentiation and activity of Th1 and Th17 cells, and differentiation and activity of regulatory T cells (Treg) &Lt; / RTI &gt; 삭제delete 시험관 내에서 간엽줄기세포에 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제를 처리하는 단계를 포함하는, 면역질환의 예방 및 치료 효능을 갖는 간엽줄기세포의 제조방법에 있어서, 상기 STAT3 억제제는 STA-21(8-hydroxy-3-methyl-3,4-dihydrotetraphene-1,7,12(2H)-trione) 또는 AG-490((E)-2-Cyano-3-(3,4-dihydrophenyl)-N-(phenylmethyl)-2-propenamide)이고, 상기 면역질환은 류마티스 관절염 (Rheumatoid Arthritis) 또는 전신성 홍반성 루푸스(systemic lupus erythematosus)인 것을 특징으로 하는 제조방법.A method of producing mesenchymal stem cells having an effect of preventing and treating immune diseases, comprising the step of treating a mesenchymal stem cell with an inhibitor of STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) in vitro, wherein the STAT3 inhibitor is STA- (E) -2-Cyano-3- (3,4-dihydrophenyl) -1,2,3,4-tetrahydro- (Phenylmethyl) -2-propenamide), and the immune disease is rheumatoid arthritis or systemic lupus erythematosus. 삭제delete 제1항에 있어서,
미분화 T 세포를 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 포함하는 조성물과 함께 공조 배양하여, 미분화 T 세포의 Th1 세포 및 Th17 세포로의 분화 및 활성을 억제하는 것을 특징으로 하는 조성물.The method according to claim 1,
Characterized in that the undifferentiated T cells are co-cultured with a composition comprising STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) inhibitor-treated mesenchymal stem cells to inhibit the differentiation and activity of undifferentiated T cells into Th1 and Th17 cells . 삭제delete 제1항에 있어서,
미분화 T 세포를 STAT3(Signal transducer and activator of transcription 3) 억제제가 처리된 간엽줄기세포를 포함하는 조성물과 함께 공조 배양하여, 미분화 T 세포의 조절 T 세포(Regulatory T cell: Treg)로의 분화 및 활성을 촉진하는 것을 특징으로 하는 조성물.The method according to claim 1,
Undifferentiated T cells were co-cultured with a composition containing STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3) inhibitor-treated mesenchymal stem cells to differentiate and activate regulatory T cells (regulatory T cells) of undifferentiated T cells &Lt; / RTI &gt; 삭제delete
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