KR101681597B1 - ANT2 siRNA를 함유하는 HER2 표적 항암제에 대한 내성 극복을 위한 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 ANT2 발현 조절을 통한 암세포의 세포사멸 유도 및 표적 항암제 내성 극복 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 ANT2 siRNA를 유효성분으로 함유하는 HER2/neu 표적 항암제 내성 저해 및 민감성 증진용 약학적 조성물, 그의 항암 치료 보조제로서의 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 표적 항암제와 병용 투여시에 암세포에 대한 선택성이 높으면서 항암활성을 증진시키는 효능을 가져 항암 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

ANT2 siRNA를 함유하는 HER2 표적 항암제에 대한 내성 극복을 위한 조성물{COMPOSITION FOR OVERCOMING RESISTANCE TO HER2 INHIBITOR COMPRISING ANT2 SIRNA}

본 발명은 표적 항암제의 내성 극복 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 ANT2 siRNA를 유효성분으로 함유하는 HER2 표적 항암제 내성 극복 조성물 및 이를 유효성분으로 함유하는 HER2 표적 항암제 내성 암의 치료용 조성물에 관한 것이다.

종양(tumor)은 비정상적인 세포의 과잉으로 인하여 발생하는 비정상적이고 비제어적이며 무질서한 세포증식의 산물로써, 이러한 종양이 파괴적인 증식성, 침윤 및 전이성을 가지게 되면 악성종양(malignant tumor)으로 분류된다. 분자생물학적인 관점에서 볼 때 유전자의 변이에 의하여 발생하는 유전적 질환(genetic disease)이라고 할 수 있다. 악성종양에서 신생혈관 생성과 당분해의 증가는 저산소 상태의 미세환경을 나타내며, 이는 종양의 침습성, 전이 환자의 예후와 관련이 있는 것으로 알려져 있다. 혈관에서 산소, 포도당, 기타 영양소 등은 제한된 범위 내에서 확산에 의하여 공급되기 때문에 성장하는 악성 종양의 조직에서 신생혈관이 형성되지 않으면 종양세포들은 저산소증에 빠지게 되고 저산소증에 빠진 세포는 산소의 저분압 상태를 감지하여 저산소증 조절 유전자들을 발현시키려는 신호체계를 활성화시켜 그 환경에 적응하려는 변이를 일으켜 악성종양으로 자라게 된다.

현재까지 악성종양인 암을 치료하는 방법으로 주로 3가지 치료법 즉, 방사선 치료, 외과적인 수술 및 화학요법을 이용하고 있으며, 이 중 한 가지 또는 이들의 조합을 통해 암을 치료하고 있다. 구체적으로, 방사선 치료는 급성염증성 질환, 양성 또는 악성 종양, 내분비기능장애 및 알레르기성 질환 등에 사용되며, 일반적으로 급속히 분열하는 세포로 구성된 악성종양에 효과적으로 사용되고 있다. 이러한 방사선 치료는 방사선의 치료에 따라 정상조직의 기능 약화 또는 상실, 치료 후 치료부위에 피부질환이 발생할 우려가 있으며, 특히 장기의 발육이 진행되는 소아의 경우 지능발달 지연 또는 골 발육 장애 등 심각한 부작용을 초래할 수 있다.

외과적 수술은 질병 조직을 대부분 제거하는 방법으로, 이러한 외과적 수술은 특정 부위, 예를 들면 유방, 결장 및 피부에 위치한 종양을 제거하는 데는 매우 효과적이지만, 척추와 같은 일부 부위에 있는 종양을 치료하거나 분산성 종양을 치료하기에는 부적절하다.

화학요법은 암세포의 복제 또는 대사를 교란시킴으로써 유방, 폐 및 정소의 암을 치료하는데 널리 이용되고 있는데, 이러한 방법에 있어서 가장 큰 단점은 암 치료에 이용되는 전신성 화학요법에 의하여 유도되는 부작용이다. 화학요법에 의한 부작용은 환자의 생명에 중요한 영향을 미치며 치료에 대한 환자의 불안감을 증가시킬 수 있다. 또한, 화학치료제와 관련된 부작용으로는 일반적으로 이러한 약물의 투여 시 주의해야 하는 용량 제한 독성(dose limiting toxicity, DLT)이다. 예를 들면, 점막염은 여러 항암제(항대사물질 세포독소제인 5-플루오로우라실, 메소트렉세이트 및 항종양 항생제인 독소루비신) 등에 대한 용량 제한 독성(DLT)이 있다. 이러한 화학 요법의 부작용 중 대부분은 심한 경우, 입원을 요하거나 통증을 치료하기 위하여 진통제를 필요로 하기도 한다. 이처럼, 화학치료제 및 방사선 치료에 의한 부작용들은 암 환자의 치료에 있어서 중요한 문제로 부각되고 있다.

반면에, 유전자 치료(gene therapy)는 DNA 재조합 방법을 이용하여 치료용 유전자를 환자의 세포 안으로 도입시켜서 유전자 결함을 교정하거나 세포에 새로운 기능을 추가하여 인체 세포의 유전적 변형으로 인한 각종 유전질환, 암, 심혈관질환, 감염성 질병 및 자가면역질환 등을 치료하거나 예방하는 방법이다. 구체적으로는, 치료유전자(therapeutic gene)를 체내의 원하는 장기로 전달함으로써 세포 내에서 치료용 또는 정상 단백질이 발현될 수 있도록 유도하여 상기 질병들을 치료하는 방법을 유전자 치료(gene therapy)라고 한다. 기존의 화학요법은 세포에 대한 무차별적 공격으로 정상세포 및 암세포가 모두 영향을 받는 문제가 있었으나, 이러한 유전자 치료는 일반적인 약물에 의한 치료법에 비하여 우수한 선택성을 가질 수 있으며 다른 치료법으로 조절하기 어려운 질병의 치료를 개선함으로써 오랜 기간 동안 적용할 수 있다. 특정 표적인자만을 선택적으로 억제하는 표적 치료를 통해 기존의 화학요법으로 인한 부작용을 최소화할 수 있다는 장점이 있다.

이러한 유전자 치료를 효과적으로 하기 위해서는 치료 유전자를 원하는 표적세포에 전달하여 높은 효율로 발현할 수 있도록 하는 유전자 전달기술이 필요하다. 유전자 전달체는 원하는 치료 유전자를 대상 세포에 도입하기 위해 필요한 매개체로서, 이상적인 유전자 전달체는 인체에 무해하고 대량 생산이 용이하며 효율적으로 유전자를 전달 및 지속적으로 유전자를 발현할 수 있어야 한다. 이러한 유전자 전달체 기술은 유전자 치료 기술의 핵심 요소로서, 현재 유전자 치료에 많이 이용되는 대표적 유전자 전달체로는 아데노바이러스(adenovirus), 아데노부속바이러스(adeno-associated virus, AAV), 레트로바이러스(retrovirus)와 같은 바이러스성 전달체와 리포좀 및 폴리에틸렌이민과 같은 비바이러스성 전달체가 있다.

유전자 치료의 전략 중 종양세포를 제어하는 전략으로는 종양억제 유전자를 이용하는 방법, 종양 선택적 살상 바이러스를 이용하는 방법, 자살 유전자를 이용하는 방법 및 면역조절 유전자를 도입하는 방법 등이 있다. 구체적으로 종양억제 유전자를 이용하는 방법은, 상당수의 암환자에서 유전자가 결핍 또는 변형되어 있는 p53과 같은 종양억제 유전자를 원형으로 인체에 전달하여 암을 치료하는 방법이며, 종양 선택적 살상바이러스를 이용하는 방법은, 암조직에서 변형되어 있는 종양억제 유전자의 활성을 이용하여 종양세포에서만 선택적으로 증식할 수 있는 바이러스 유전자 전달체를 인체에 도입하여 치료하는 방법으로서 두 가지 모두 종양세포를 직접적으로 사멸시키는 전략이다. 또한, 자살 유전자를 이용하는 방법 예를 들면, HSK-TK와 같은 감수성 유전자를 도입하여 종양세포의 자살을 유도하는 방법도 이와 같은 범주에 포함된다. 반면에, 면역 조절 유전자를 도입하는 방법은 항종양 면역반응을 증가시키는 인터루킨 12(IL-12), 인터루킨 4(IL-4), 인터루킨 7(IL-7), 감마 인터페론(γ-interferon) 및 종양괴사인자(tumor necrosis factor, TNF) 등의 유전자를 인체에 전달함으로써 T 세포를 매개로하여 종양을 인식하도록 유발하거나, 종양 유발 단백질을 차단함으로써 세포 자살을 유도하여 간접적으로 질병을 치료하는 전략이다.

최근 의료산업의 발전으로 인구의 평균연령이 상승하는 추세이나 암 발병에 의한 사망률은 여전히 높은 수준으로 이의 치료에 대한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 특히 여성의 경우 최근에는 저출산, 짧은 수유기간, 이른 초경, 늦은 폐경 등의 요인과 함께 생리적으로 왕성한 신체적 변화를 겪는 시기에 여성 호르몬의 자극을 받는 횟수의 급격한 증가로 인한 유선조직의 민감도 증가, 식생활의 서구화, 생활환경의 오염 등의 이유로 유방암 발생이 급격하게 증가하고 있어, 유방암이 자궁경부암을 추월하여 여성암 1위가 되었다. 이러한 유방암의 발생빈도 및 유방암으로 인한 사망률의 증가는 현재의 서구화 실태로 보아 앞으로도 상당기간 지속될 것으로 예상된다. 유방암은 암세포의 성장으로 인한 주변 조직의 침범 또는 림프절 전이 등의 증상을 초래하는 것이 보통이므로, 유방암으로 인한 사망률을 줄이기 위해서는 유방암을 효과적으로 조기에 치료하는 것이 매우 중요하다.

유방암 세포는 세포 표면에 발현하는 상피 성장 인자 수용체(EGFR : Epidermal growth factor receptor)를 통해서 세포 내에 특정 신호전달 체계를 활성화시켜서 세포의 증식, 생존, 다른 조직으로의 이동과 침윤을 가능하게 한다고 알려져 있다. 특히, EGFR 가운데 HER2/neu(HER2)의 경우 유방암 환자의 30% 정도가 암 세포 표면에 과발현하고 있다고 보고되어 있는데 HER2/neu가 과발현되어 있는 경우 분화도가 좋지 않고 치료의 예후가 나쁘며, 호르몬수용체에 음성을 나타내어 호르몬 치료요법의 적용이 힘들며, 항암치료에 대한 강한 내성(multi-drug resistance)을 나타낸다고 알려져 있다. 암세포 표면의 HER2/neu의 발현은 HSP90(Heat shock protein 90) 단백질에 의해 유지되며, HSP90 단백질은 ATP가 결합할 때 그 기능을 수행할 수 있는 것이 알려져 있다. HER2/neu를 통해서 활성화되는 대표적인 신호전달체계로는 PI3K/Akt 신호전달체계가 알려져 있으며, 이 신호전달체계의 활성이 유방암 세포의 증식, 생존, 다른 조직으로의 이동과 침윤에 관여한다고 보고되어 있다. 따라서 HER2/neu의 발현을 낮추거나 HER2/neu를 통한 신호전달체계의 활성을 방해하는 방법을 이용해서 유방암을 치료하고자 하는 많은 시도들이 이루어지고 있다. 대표적으로는, 유방암 및 위암의 치료를 위한 표적 항암제로 트라스투주맙(trastuzumab) 단일클론항체 치료제가 알려져 있다. 트라스투주맙 단일클론항체는 암세포 표면의 HER2/neu에 결합하여 세포매개 세포독성(ADCC, Antibody-Dependent Cell-mediated Cytotoxicity)에 의한 면역체계 활성화를 통해 항암효과를 나타낸다. 이러한 치료제는 HER2 양성 암의 치료에 현저한 효과를 입증했지만, 최근 내성 문제가 부각되고 있다.

아데닌 뉴클레오티드 트랜스로케이터(ADP/ATP translocator, ANT)는 미토콘드리아 내막(inner membrane, IM)에 존재하는 효소로서 외막(outer membrane, OM)의 VDAC(voltage dependent anion channel)를 통하여 세포질로부터 미토콘드리아 내부로 ADP를 전달(import)하고 전자전달계(electron transfer chain system)를 거쳐 생성되는 ATP를 세포질로 방출(export)하는 기능을 수행하는 효소로 알려져 있다.

한국등록특허 제 10-0555211호 (2006.02.20)

암세포에 대한 선택성이 개선되어 정상세포에 대한 부작용이 저감된 표적 항암제가 개발되어 임상에서 활발히 이용되고 있으나, 이에 대한 1차 내성 및 획득 내성이 보고 되고 있다.

본 발명의 목적은 표적 항암제의 내성 극복 및 암세포에 대한 민감성 증진을 위한 약학적 조성물 및 이를 포함하는 효과적이고 부작용이 저감된 암 치료용 조성물을 제공하기 위한 것이다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 서열번호 1 및 23; 서열번호 2 및 24; 서열번호 3 및 25; 서열번호 4 및 26; 서열번호 5 및 27; 서열번호 6 및 28; 서열번호 7 및 29; 서열번호 8 및 30; 서열번호 9 및 31; 서열번호 10 및 32; 서열번호 11 및 33; 서열번호 12 및 34; 서열번호 13 및 35; 서열번호 14 및 36; 서열번호 15 및 37; 서열번호 16 및 38; 서열번호 17 및 39; 서열번호 18 및 40; 서열번호 19 및 41; 서열번호 20 및 42; 서열번호 21 및 43; 및, 서열번호 22 및 44로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 한 쌍의 ANT2(Adenine nucleotide translocator2) 특이적 siRNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 표적 항암제 내성 극복을 위한 약학적 조성물이 제공된다.

또한, 상기 표적 항암제는 HER2 표적 항암제일 수 있다.

또한, 상기 HER2 표적 항암제는 트라스투주맙(trastuzumab)일 수 있다.

본 발명의 다른 실시예에 따르면, 서열번호 1 및 23; 서열번호 2 및 24; 서열번호 3 및 25; 서열번호 4 및 26; 서열번호 5 및 27; 서열번호 6 및 28; 서열번호 7 및 29; 서열번호 8 및 30; 서열번호 9 및 31; 서열번호 10 및 32; 서열번호 11 및 33; 서열번호 12 및 34; 서열번호 13 및 35; 서열번호 14 및 36; 서열번호 15 및 37; 서열번호 16 및 38; 서열번호 17 및 39; 서열번호 18 및 40; 서열번호 19 및 41; 서열번호 20 및 42; 서열번호 21 및 43; 및, 서열번호 22 및 44로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 한 쌍의 ANT2(Adenine nucleotide translocator2) 특이적 siRNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 표적 항암제 내성 극복을 위한 암 치료 보조제가 제공된다.

또한, 상기 표적 항암제는 HER2 표적 항암제일 수 있다.

또한, 상기 HER2 표적 항암제는 트라스투주맙(trastuzumab)일 수 있다.

또한, 상기 암은 유방암을 포함할 수 있다.

본 발명의 또 다른 실시예에 따르면, ANT2(Adenine nucleotide translocator2) 특이적 siRNA; 및 HER2 표적 항암제를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 암 치료용 조성물이 제공된다.

또한, 상기 siRNA는 서열번호 1 및 23; 서열번호 2 및 24; 서열번호 3 및 25; 서열번호 4 및 26; 서열번호 5 및 27; 서열번호 6 및 28; 서열번호 7 및 29; 서열번호 8 및 30; 서열번호 9 및 31; 서열번호 10 및 32; 서열번호 11 및 33; 서열번호 12 및 34; 서열번호 13 및 35; 서열번호 14 및 36; 서열번호 15 및 37; 서열번호 16 및 38; 서열번호 17 및 39; 서열번호 18 및 40; 서열번호 19 및 41; 서열번호 20 및 42; 서열번호 21 및 43; 및, 서열번호 22 및 44로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 한 쌍일 수 있다.

또한, 상기 HER2 표적 항암제는 트라스투주맙(trastuzumab)일 수 있다.

또한, 상기 암은 유방암을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따른 조성물은 HER2/neu 표적 단일클론 항체 및 이와 유사한 표적 항암제에 대한 암세포의 내성을 극복할 수 있다.

또한, 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물은 HER2/neu 표적 단일클론 항체 및 이와 유사한 표적 항암제의 암 세포에 대한 민감성을 증대시킬 수 있다.

또한, 본 발명의 일 실시예에 따른 조성물은 ANT2 단백질의 발현을 저감시켜 효과적으로 암세포의 세포 사멸을 유도할 뿐만 아니라, 종래 표적 항암제와 병용 투여할 경우 암 치료 효과를 향상시킬 수 있다.

도 1은 본 발명의 ANT2 siRNA의 ANT2 발현 저감 효과를 유방암 세포에서 측정한 도이고,
도 2는 본 발명의 ANT2 siRNA의 유방암 세포에 대한 세포사멸 효과를 측정한 도이고,
도 3은 본 발명의 ANT2 siRNA 및 허셉틴의 병용사용시 유방암 세포에 대한 세포사멸 효과를 측정한 도이다.

본 발명은 ANT2(Adenine nucleotide translocator2) siRNA를 유효성분으로 함유하는 표적 항암제 내성 저해 및 민감성 증진용 약학적 조성물, 및 이를 유효성분으로 함유하는 암 치료용 조성물에 관한 것이다.

이하, 본 발명에 대해 보다 상세히 설명한다.

본 발명의 발명자들은 ANT2의 발현을 저감시키는 경우에 암세포의 생존에 필요한 에너지(ATP) 공급이 원활하지 않게 되고 HSP90이 제 기능을 수행하지 못하여 HER2/neu(HER2)의 발현이 저감되고 분해가 촉진될 것으로 예상하고 실험을 수행하였으며, ANT2에 특이적 결합하는 siRNA를 처리하였을 때 암세포에서 세포 사멸이 유도될 뿐 아니라 HER2/neu 단일클론항체에 대한 내성이 조절되고, HER2/neu 단일클론항체의 암세포에 대한 사멸 효과가 증대되는 것을 확인하여 본 발명을 안출한 것이다.

상기 ANT2는 포유동물 유래, 바람직하게는 사람 또는 사람과 동일한 계통의 ANT2 및 그의 돌연변이체일 수 있다. 사람과 같은 계통이라 함은 유전자 또는 mRNA가 사람의 ANT2 유전자 또는 mRNA와 80% 이상의 서열 유사성을 가진 다른 포유동물을 말하는 것으로, 구체적으로 사람, 영장류, 설치류 등을 포함할 수 있다.

본 발명에서 siRNA는 RNA interference (RNAi) 경로를 유발하는 작은 저해 RNA 이중가닥 (small inhibitory RNA duplexes)을 의미한다. 구체적으로, siRNA는 센스 RNA 가닥과 그에 상보적인 안티센스 가닥을 포함하며, 양가닥이 15 내지 30bp, 바람직하게는 19 내지 25bp를 포함하는 RNA 이중 가닥이다. siRNA는 이중가닥 영역을 포함하며 단일 가닥이 헤어핀(hairpin) 또는 stem-loop 구조를 형성하는 구조이거나, 2개의 분리된 가닥의 이중가닥일 수 있다. 센스 RNA 가닥은 표적 유전자의 mRNA 서열의 뉴클레오타이드 서열과 동일한 서열을 가지며, 센스 가닥과 이에 상보적인 안티센스 가닥이 서로 왓슨과 크릭의 상보적인 염기서열 결합에 의해서 이중 가닥을 이룬다. siRNA의 안티센스 가닥은 RISC(RNA-Induced Silencing Complex)에 포집되어 RISC가 안티센스 가닥과 상보적인 목표 mRNA를 확인한 후 절단 또는 번역(translational) 저해를 유도하게 한다. 상기 상보적의 의미는 폴리뉴클레오타이드의 양 가닥이 염기쌍을 형성할 수 있음을 의미한다.

본 발명에 따른 ANT2 siRNA는 상기 ANT2의 mRNA 또는 cDNA 내부의 연속하는 15 내지 25bp로 이루어진 영역을 표적으로 하며, 서열번호 1 내지 22 및 상기 서열에 상보적인 서열인 서열번호 23 내지 44로 이루어진 군에서 선택된 적어도 한쌍의 서열로 구성된 이중가닥 염기서열이다. 본 발명에서 제공하는 상기 ANT2 siRNA는 ANT2에 대한 서열 특이성이 매우 높아 표적 유전자의 전사체에 특이적으로 상보적 결합하여 RNA 간섭 효율성을 증가시키므로 ANT2의 발현 및 합성 억제 효율이 우수하다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, ANT2의 합성 또는 발현을 특이적으로 저해하는 siRNA를 포함하는 조성물이 제공된다. 본 발명의 다른 실시예에서, 상기 ANT2의 합성 또는 발현을 특이적으로 저해하는 siRNA를 포함하는 표적 항암 치료제의 내성 극복 및 민감성 증진용 암 치료 보조제가 제공된다. 본 발명의 또 다른 실시예에서, 상기 ANT2의 합성 또는 발현을 특이적으로 저해하는 siRNA 및 HER2/neu 표적 항암 치료제를 포함하는 암 치료용 조성물이 제공된다.

본 발명에 있어 약학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용 가능한 담체는 생리식염수, 폴리에틸렌글리콜, 에탄올, 식물성 오일, 링거액, 덱스트로스 용액, 글리세롤 및 이소프로필미리스테이트 등을 포함할 수 있으며, 이에 한정되지는 않는다.

본 발명의 조성물은 치료용 보조제 등 약제학적 제제로 제조될 수 있다. 본 발명의 약제학적 제제는 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체, 희석제 및 부형제로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수 있다. 상기 제제는 분산제 또는 안정화제를 더 포함할 수 있다.

필요에 따라, 상기 약제학적 제제는 약제학적으로 허용되는 담체를 더 포함할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 예를 들면, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

필요에 따라, 본 발명의 약제학적 제제는 상기 성분들 이외에 당업계에 공지된 첨가물을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 희석제, 가용화제, 결합제, 붕해제 및 보존제로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나를 더 포함할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 목적 조직에 도달할 수 있는 한 투여방법에는 제한이 없다. 예를 들면, 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 피부 도포, 직장 주입, 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.

본 발명의 조성물의 일일 투여량은 투여되는 질환 종류 및 중증도, 환자의 연령 및 성별, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정되며 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최대 효과를 얻을 수 있는 양으로, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 예를 들면, 약 0.0001 내지 100mg/kg, 바람직하게는 0.001 내지 10mg/kg일 수 있으며, 필요에 따라 상기 투여량을 수회에 나누어 일정시간 간격으로 투여할 수 있다.

본 발명의 조성물의 투여 대상 환자는 포유 동물, 바람직하게는 사람, 영장류, 설치류일 수 있다.

본 발명의 조성물을 적용할 수 있는 암은 폐암, 간암, 대장암, 췌장암, 위암, 유방암, 난소암, 신장암, 갑상선암, 식도암, 전립선암 등으로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나일 수 있으며, HER2/neu 발현에 관련된 암종인 것이 바람직하다. 예를 들면, 유방암 또는 위암일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명의 조성물을 적용할 수 있는 암은 HER2/neu 표적 항암제에 대한 내성을 가진 암종인 것이 바람직하다. 상기 표적 항암제로는 트라스투주맙, 보다 상세하게는 허셉틴(herceptin) 등이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 본 발명을 하기 실시예에 의거하여 좀 더 상세하게 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 첨부된 특허청구범위를 제한하는 것이 아니며, 본 발명의 범주 및 기술사상 범위 내에서 실시예에 대한 다양한 변경 및 수정이 가능함은 당업자에게 있어서 명백한 것이며, 이러한 변형 및 수정이 첨부된 특허청구범위에 속하는 것도 당연한 것이다.

실시예

<ANT2 siRNA의 제작>

ANT2 siRNA를 제작하기 위하여 우선 Genebank Accession No. NM_001152의 ANT2 mRNA 염기서열(SLC25A5)을 미국 국립생명공학정보센터(Nationanl Center for Biotechnology Information, NCBI, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)로부터 입수하였다. 이 염기서열을 siRNA 예측 프로그램(http://www.ambion.com/technical, resources/siRNA target finder)에 대입하여 적합한 ANT2 siRNA 후보 염기서열을 확보하였다. 후보 염기서열에 기초한 센스 및 안티센스 서열로 구성된 이중가닥 염기서열은 한국의 Bioneer사에 합성을 의뢰하여 제조하였으며, ANT2 mRNA의 감소 효과를 세포수준(in vitro)에서 확인하여 최종으로 ANT2의 발현을 저감시키는 서열번호 1 내지 22로 구성된 22개의 센스서열 및 그에 상보적인 서열번호 23 내지 44로 구성된 22개의 안티센스서열로 이루어진 22쌍의 ANT2 siRNA를 얻었다. 본 발명에 따른 ANT2 siRNA는 하기 표 1에 정리하였다.

siRNA 표시	센스서열		안티센스서열
	서열번호	상세염기서열(5'→3')	서열번호	상세염기서열(5'→3')
ANT2 siRNA #1	1	GCAAUACAAAGGCAUUAUAUU	23	UAUAAUGCCUUUGUAUUGCUU
ANT2 siRNA #2	2	CCAAUGUCAUCAGAUACUUUU	24	AAGUAUCUGAUGACAUUGGUU
ANT2 siRNA #3	3	UUAACUUCGCUUCAAAGAUU	25	UCUUUGAAGGCGAAGUUAAUU
ANT2 siRNA #4	4	UAACUUCGCCUUCAAGAUUU	26	AUCUUUGAAGGCGAAGUUAUU
ANT2 siRNA #5	5	CCUUCAAAGAUAAAUACAAUU	27	UUGUAUUUAUCUUUGAAGGUU
ANT2 siRNA #6	6	CUGGUUAAGAUCUACAAAUUU	28	AUUUUGUAGAUCUUAACCAGUU
ANT2 siRNA #7	7	GGUUAAGAUCUACAAAUCUUU	29	AGAUUUUGUAGAUCUUAACCUU
ANT2 siRNA #8	8	CCUACUUCGGUAUCUAUGAUU	30	UCAUAGAUACCGAAGUAGGUU
ANT2 siRNA #9	9	GUUGACUUCCUAUCCAUUUUU	31	AAAUGGAUAGGAAGUCAACUU
ANT2 siRNA #10	10	GUCUUGUAUGAUGAAAUCAUU	32	UGAUUUCAUCAUACAAGACUU
ANT2 siRNA #11	11	GAUGAAAUCAAGAAGUACAUU	33	UGUACUUCUUGAUUUCAUCUU
ANT2 siRNA #12	12	AAAUCAAGAAGUACACAUAUU	34	UAUGUGUACUUCUUGAUUUUU
ANT2 siRNA #13	13	CAAGAAGUACACAUAAGUUUU	35	AACUUAUGUGUACUUCUUGUU
ANT2 siRNA #14	14	GAAGUACACAUAAGUUAUUUU	36	AAUAACUUAUGUGUACUUCUU
ANT2 siRNA #15	15	ACACAUAAGUUAUUUCCUAUU	37	UAGGAAAUAACUUAUGUGUUU
ANT2 siRNA #16	16	CAUGUUGUAUUAUAUAACAUU	38	UGUUAUAUAAUACAACAUGUU
ANT2 siRNA #17	17	GUUGUAUUAUAUAACAUAUUU	39	AUAUGUUAUAUAAUACAACUU
ANT2 siRNA #18	18	GUAUUAUAUAACAUAUCUUUU	40	AAGAUAUGUUAUAUAAUACUU
ANT2 siRNA #19	19	GAAGCAAUAAUAUUCAUCUUU	41	AGAUGAAUAUUAUUGCUUCUU
ANT2 siRNA #20	20	CUCUUAAAGCCAUUUCCAUUU	42	AUGGAAAUGGCUUUAAGAGUU
ANT2 siRNA #21	21	CCUGAUAAAUAACAAAUUUUU	43	AAAUUUGUUAUUUAUCAGGUU
ANT2 siRNA #22	22	GCUACAUUCGAAUAAAUACUU	44	GUAUUUAUUCGAAUGUAGCUU

<ANT2 siRNA의 ANT2 발현 저하 효과 확인>

상기 22쌍의 ANT2 siRNA의 세포수준에서의 ANT2 mRNA의 발현 저하 효과는 ANT2 siRNA를 인간 유방암 세포주인 MDA-MB-231에 도입하고 24시간 후 total RNA로 qRT-PCR을 수행하여 ANT2의 발현양상을 측정하여 확인하였다.

MDA-MB-231 세포주는 10% FBS 및 1% 항생제가 첨가된 DMEM배지를 이용하였으며 37℃, 5% CO₂ 환경 조건 하에 배양한 것을 이용하였다. 항생제로는 100ug/ml 농도의 페니실린 및 100ug/ml 농도의 스트렙토마이신을 첨가하였다.

ANT2 siRNA의 MDA-MB-231세포주 내 도입은 비바이러스성 전달체인 Lipofectamine^TM2000(Invitrogen)을 이용하였다. 유방암 세포주인 MDA-MB-231을 6wells-plate에 웰당 5x10⁵cells(60～70% confluency)로 준비한 뒤, 24시간 후에 ANT2 siRNA # 1내지 #22 샘플별로 ANT2 siRNA 100nM, Lipofectamine^TM2000 6ul를 잘 섞어 10분간 보관 후 준비된 세포주에 골고루 뿌려주었다. 이 때 Lipofectamine^TM2000 복합체 형성과 세포로의 도입을 최대화하기 위해, 세포 배양액으로서 10% FBS와 항생제가 포함된 complete DMEM 배지가 아닌 최소 성장배지인 opti-MEM를 사용하여 37℃, 5% CO₂ 환경 조건 하에 24시간 배양하였다. 음성 대조군으로는 ANT2 발현을 차단하지 못하고 또한 세포내 특정 mRNA의 발현에 영향을 끼치지 않는 스크램블(scrambled) siRNA(Ambion사)를 처리하였다.

24시간 배양후 ANT2 siRNA 또는 스크램블 siRNA가 도입된 세포주에 Trizol(Invitrogen)을 처리하여 total RNAs를 분리하고 RT-qPCR kit(Promega)을 이용하여 실시간 역전사 중합효소 증폭법(RT-qPCR; real-time reverse transcription-polymerase chain reaction)을 실시하였다. 이후, 역전사 반응으로부터 얻어진 cDNA를 주형으로 하여 ANT2의 프라이머와 SYBR mixture를 이용하여 중합효소 증폭법을 수행하였다(35cycle; 94℃ 1분, 55℃ 1분, 72℃, 2분). 독립적인 실험을 3회 반복하여 평균값을 계산하고 동일한 양의 RNA가 사용되었음을 확인하기 위해서 house keeping 유전자인 GAPDH의 발현 양으로 결과값을 보정하였다. ANT2 프라이머는 서열번호 45 및 46의 염기서열로 이루어진 것을 이용하고 GAPDH 프라이머는 서열번호 47 및 48의 염기서열로 이루어진 것을 이용하였다. 그 결과는 도 1에 도시하였다. 도 1에서 ANT2 유전자 발현의 상대적인 변화량(ANT2 Reduction(%))은 하기 공식에 따라 계산하였으며, 데이터는 fold upregulation/downregulation을 나타낸다.

[수학식 1] fold change = 2-ΔΔCt,

(여기서, ΔΔCt = (Ct of gene of interest, treated -Ct of HK gene, treated) - (Ct of gene of interest, control -Ct of HK gene, control)이고,

Ct는 threshold cycle number이고,

HK house-keeping gene이다.)

도 1을 참고하면, 본 발명의 22쌍 ANT2 siRNA는 암세포에서 ANT2 mRNA의 발현을 높은 수준으로 억제하는 것을 확인할 수 있다.

<암세포에 대한 ANT2 siRNA의 세포사멸 효과 확인>

본 발명의 22쌍 ANT2 siRNA의 암세포에 대한 세포사멸 효과는 인간 유방암 세포주인 MDA-MB-231을 대상으로 확인하였다. 96 wells에 웰당 5x10⁴로 MDA-MB-231 세포를 시딩하고, 상기 세포주에 ANT2 siRNA # 1 내지 #22 샘플별로 ANT2 siRNA를 도입하여 48시간 배양한 후 CCK-8 assay를 이용하여 세포 사멸 수준을 분석하였다. 음성 대조군으로는 스크램블 siRNA(Ambion사)를 도입한 것을 이용하였다. 사포 사멸도는 음성 대조군에서의 세포 생존률을 100으로 하여 ANT2 siRNA를 처리한 실험군의 상대적인 생존률을 계산하여 측정하였다. 샘플별로 독립적인 실험을 3회 반복하여 평균값을 계산하고 그 결과를 도 2에 도시하였다.

도 2를 참고하면, 본 발명의 22쌍 ANT2 siRNA는 암세포에서 높은 수준의 세포사멸을 유도하는 것을 확인할 수 있다.

<표적 항암제에 내성을 갖는 암세포에 대한 ANT2 siRNA의 세포사멸 효과 및 표적 항암제와 병용시 암세포의 세포사멸 증진효과 확인>

유방암의 치료에 사용되는 표적 항암제 중 HER2/neu를 표적으로 하는 허셉틴(herceptin)에 대한 치료 반응성이 매우 낮은 세포주인 인간 유방암 세포주 Jimt-1을 대상으로 본 발명의 ANT2 siRNA의 세포사멸 효과, 표적 항암제의 내성극복 효과 및 표적 항암제와 병용시의 세포사멸 증진효과를 확인하였다.

인간 유방암 세포주 Jimt-1의 배양은 MDA-MB-231과 동일한 배지에서 동일한 환경조건으로 배양하였다. Jimt-1로의 ANT2 siRNA의 도입은 상기 기술한 MDA-MB-231세포주를 대상으로 한 실험과 동일하게 Lipofectamine^TM2000(Invitrogen)을 이용하여 수행하였다. 표적 항암제 내성 암세포주에 대한 ANT2 siRNA의 세포사멸 효과 확인을 위한 샘플은 ANT2 siRNA 100nM만을 도입하여 48시간 배양하고, Jimt-2의 허셉틴 내성 확인은 허셉틴 100ug/ml만을 처리하여 48시간 배양하였다. ANT2 siRNA 및 허셉틴 병용시의 사포사멸 증진 효과 확인을 위한 샘플은 ANT2 siRNA 100nM 도입하여 24시간 배앙한 후 허셉틴 100ug/ml을 처리하고 24시간 추가 배양하였다. 음성 대조군으로 스크램블 siRNA(Ambion사)를 도입한 것을 이용하였다. 사포 사멸도는 음성 대조군에서의 세포 생존률을 100으로 하여 각 실험군의 상대적인 생존률을 계산하여 측정하였다. 샘플별로 독립적인 실험을 3회 반복하여 평균값을 계산하고 그 결과를 도 3에 도시하였다.

도 3을 참고하면, HER2/neu 표적 항암제에 내성을 가진 암세포에 대하여 ANT2 siRNA가 높은 사멸 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있다. 또한, ANT2 siRNA 및 HER2/neu 표적 항암제를 병용 처리할 경우 ANT2 siRNA를 단독으로 처리한 실험군에 비교하여 암세포의 세포 사멸 효과가 유의적으로 뚜렷하게 증가하였다. 상기 결과를 참고하면, HER2/neu 단일클론항체에 대한 내성을 갖는 암세포에서 ANT2 siRNA를 이용하여 ANT2의 발현을 저감시키는 경우에 HER2/neu 단백질의 발현저감 및 이로 인한 세포 내 신호전달을 약화시켜, 결과적으로 HER2/neu 단일클론항체에 의한 세포내 신호 전달 체계의 약화 효과를 극대화시킴으로써, ANT2 siRNA를 HER2/neu 단일클론항체와 병용하는 경우 암세포의 HER2/neu 단일클론항체에 대한 내성을 극복하고 민감성을 증대시킬 수 있는 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있다. 또한, ANT2 siRNA로 유도되는 HER2/neu 발현저감은 트라스투주맙으로 유도되는 HER2/neu 발현저감과 상이한 기전으로, ANT2 siRNA 및 트라스투주맙을 병용하는 암의 치료는 기전상 이점을 가져 시너지 효과를 보이므로 암 치료에 보다 효과적이다.

<110> Bioinfra Inc. <120> COMPOSITION FOR OVERCOMING RESISTANCE TO HER2 INHIBITOR COMPRISING ANT2 SIRNA <150> KR 14/006035 <151> 2014-01-17 <160> 48 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 1 gcaauacaaa ggcauuauau u 21 <210> 2 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 2 ccaaugucau cagauacuuu u 21 <210> 3 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 3 uuaacuucgc uucaaagauu 20 <210> 4 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 4 uaacuucgcc uucaagauuu 20 <210> 5 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 5 ccuucaaaga uaaauacaau u 21 <210> 6 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 6 cugguuaaga ucuacaaauu u 21 <210> 7 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 7 gguuaagauc uacaaaucuu u 21 <210> 8 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 8 ccuacuucgg uaucuaugau u 21 <210> 9 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 9 guugacuucc uauccauuuu u 21 <210> 10 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 10 gucuuguaug augaaaucau u 21 <210> 11 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 11 gaugaaauca agaaguacau u 21 <210> 12 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 12 aaaucaagaa guacacauau u 21 <210> 13 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 13 caagaaguac acauaaguuu u 21 <210> 14 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 14 gaaguacaca uaaguuauuu u 21 <210> 15 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 15 acacauaagu uauuuccuau u 21 <210> 16 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 16 cauguuguau uauauaacau u 21 <210> 17 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 17 guuguauuau auaacauauu u 21 <210> 18 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 18 guauuauaua acauaucuuu u 21 <210> 19 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 19 gaagcaauaa uauucaucuu u 21 <210> 20 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 20 cucuuaaagc cauuuccauu u 21 <210> 21 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 21 ccugauaaau aacaaauuuu u 21 <210> 22 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Sense sequence of ANT2 siRNA <400> 22 gcuacauucg aauaaauacu u 21 <210> 23 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 23 uauaaugccu uuguauugcu u 21 <210> 24 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 24 aaguaucuga ugacauuggu u 21 <210> 25 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 25 ucuuugaagg cgaaguuaau u 21 <210> 26 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 26 aucuuugaag gcgaaguuau u 21 <210> 27 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 27 uuguauuuau cuuugaaggu u 21 <210> 28 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 28 auuuuguaga ucuuaaccag uu 22 <210> 29 <211> 22 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 29 agauuuugua gaucuuaacc uu 22 <210> 30 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 30 ucauagauac cgaaguaggu u 21 <210> 31 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 31 aaauggauag gaagucaacu u 21 <210> 32 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 32 ugauuucauc auacaagacu u 21 <210> 33 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 33 uguacuucuu gauuucaucu u 21 <210> 34 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 34 uauguguacu ucuugauuuu u 21 <210> 35 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 35 aacuuaugug uacuucuugu u 21 <210> 36 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 36 aauaacuuau guguacuucu u 21 <210> 37 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 37 uaggaaauaa cuuauguguu u 21 <210> 38 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 38 uguuauauaa uacaacaugu u 21 <210> 39 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 39 auauguuaua uaauacaacu u 21 <210> 40 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 40 aagauauguu auauaauacu u 21 <210> 41 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 41 agaugaauau uauugcuucu u 21 <210> 42 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 42 auggaaaugg cuuuaagagu u 21 <210> 43 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 43 aaauuuguua uuuaucaggu u 21 <210> 44 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Anti-sense sequence of ANT2 siRNA <400> 44 guauuuauuc gaauguagcu u 21 <210> 45 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for ANT2 <400> 45 ccgcagcgcc gtagtcaaa 19 <210> 46 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for ANT2 <400> 46 agtctgtcaa gaatgctcaa 20 <210> 47 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for GAPDH <400> 47 accacagtcc atgccatcac 20 <210> 48 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for GAPDH <400> 48 tccaccaccc tgttgctgt 19

Claims (11)

1. 서열번호 1 및 23; 서열번호 2 및 24; 서열번호 3 및 25; 서열번호 4 및 26; 서열번호 5 및 27; 서열번호 6 및 28; 서열번호 7 및 29; 서열번호 8 및 30; 서열번호 9 및 31; 서열번호 10 및 32; 서열번호 11 및 33; 서열번호 12 및 34; 서열번호 13 및 35; 서열번호 14 및 36; 서열번호 15 및 37; 서열번호 16 및 38; 서열번호 17 및 39; 서열번호 18 및 40; 서열번호 19 및 41; 서열번호 20 및 42; 서열번호 21 및 43; 및, 서열번호 22 및 44로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 한 쌍의 ANT2(Adenine nucleotide translocator2) 특이적 siRNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 표적 항암제 내성 극복을 위한 약학적 조성물에 있어서,
   상기 표적 항암제는 트라스투주맙이고,
   상기 조성물을 적용할 수 있는 암은 HER2/neu가 과발현되는 암종인 것을 특징으로 하는 표적 항암제 내성 극복을 위한 약학적 조성물.
   
2. 삭제
3. 삭제
4. 서열번호 1 및 23; 서열번호 2 및 24; 서열번호 3 및 25; 서열번호 4 및 26; 서열번호 5 및 27; 서열번호 6 및 28; 서열번호 7 및 29; 서열번호 8 및 30; 서열번호 9 및 31; 서열번호 10 및 32; 서열번호 11 및 33; 서열번호 12 및 34; 서열번호 13 및 35; 서열번호 14 및 36; 서열번호 15 및 37; 서열번호 16 및 38; 서열번호 17 및 39; 서열번호 18 및 40; 서열번호 19 및 41; 서열번호 20 및 42; 서열번호 21 및 43; 및, 서열번호 22 및 44로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 한 쌍의 ANT2(Adenine nucleotide translocator2) 특이적 siRNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 표적 항암제 내성 극복을 위한 유방암 치료 보조제에 있어서,
   상기 표적 항암제는 트라스투주맙이고,
   상기 조성물을 적용할 수 있는 암은 HER2/neu가 과발현되는 암종인 것을 특징으로 하는 표적 항암제 내성 극복을 위한 유방암 치료 보조제.
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