KR101673226B1 - Cosmetic composition for improving skin wrinkle containing Chamaecyparis-obtusa-leaf extract - Google Patents
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Abstract
본 발명은 편백잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 한방 가공 기술인 포제를 활용하여 가공된 편백잎 추출물을 함유함으로써 SNARE 복합체의 형성을 저해하고 신경전달물질 방출을 저해하여 피부 주름을 개선하는 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 기존의 피부 주름 개선제들에 비해 제형 내 안정성이 뛰어나고, 종래의 주름 개선용 시술에 사용되어왔던 보톡스와 유사한 효과를 나타냄으로써 부작용 없이 피부의 주름을 크게 개선시킨다.More particularly, the present invention relates to a cosmetic composition containing an extract of Leaf Leaf Blade, and more particularly, to a cosmetic composition containing Leaf Leaf Extract, Thereby improving the skin wrinkles. The cosmetic composition of the present invention is superior to conventional skin wrinkle-reducing agents in stability in formulation and exhibits an effect similar to that of Botox, which has been used in conventional wrinkle-improving procedures, thereby greatly improving the wrinkles of the skin without side effects.
편백잎, 포제, SNARE 복합체, 주름 개선 Cotton Leaf, Foam, SNARE Complex, Wrinkle Improvement
Description
본 발명은 편백잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 한방 가공 기술인 포제를 활용하여 가공된 편백잎 추출물을 함유함으로써 SNARE 복합체의 형성을 저해하고 신경전달물질 방출을 저해하여 피부 주름을 개선하는 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 기존의 피부 주름 개선제들에 비해 제형내 안정성이 뛰어나고, 종래의 주름 개선용 시술에 사용되어왔던 보톡스와 유사한 효과를 나타냄으로써 부작용 없이 피부의 주름을 크게 개선시킨다.More particularly, the present invention relates to a cosmetic composition containing an extract of Leaf Leaf Blade, and more particularly, to a cosmetic composition containing Leaf Leaf Extract, Thereby improving the skin wrinkles. The cosmetic composition of the present invention is superior to conventional skin wrinkle-reducing agents in stability in formulation and exhibits an effect similar to that of Botox, which has been used in conventional wrinkle-improving procedures, thereby greatly improving the wrinkles of the skin without side effects.
신경전달물질의 배출 시에 신경전달물질을 담고 있는 시냅스 소포 (synaptic vesicle)는 시냅스전막 (presynaptic membrane)과 융합되어야 두 경계 간의 통로가 형성될 수 있다. 이 때 막융합의 근원적인 힘을 제공하는 단백질은 SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor)라고 불리는 3종의 단백질 복합체이다. 시냅스 소포와 시냅스전막 간의 막융합에 의해 신경전달물질 배출 통로가 열리게 되는데 표적막 (target membrane)에 부착되어 있는 t-SNARE 복합체와 소포 (vehicle)에 부착되어 있는 v-SNARE가 관여한다. t-SNARE는 신탁신 (Syntaxin) 1a라고 하는 단백질과 SNAP-25라고 하는 단백질 2종의 복합체이다. 이들 SNARE 단백질은 꽈배기처럼 꼬여 있다. 상기 막융합시에는 당 분야에 널리 공지되어 있는 지질 이중층 (lipid bilayer)의 재배열이 일어나게 된다. 생체막들은 서로 강하게 밀어내고 있으므로 이들 막은 자발적으로 융합되지 않고 외부에서 강한 힘이 주어져 막들간의 반발력을 극복하여야 하는데, 이때 막들간의 반발력을 이겨낼 정도의 강한 힘을 만들어 내는 것이 바로 SNARE 단백질이다. 즉, SNARE 복합체의 형성은 막간 반발력을 극복하는 힘의 원천이며, 신경전달물질의 배출을 포함하는 세포외 배출작용 (exocytosis)의 핵심 현상인 것이다. 한편, 근육의 이완과 수축을 조절하기 위하여 근육의 상층에서는 신경근육 접합부 (neuromuscular junction)가 있으며, 이 신경 말단 (nerve terminal)에는 시냅스 소포가 장전되어 있다. BoNT (Botulinum neurotoxin, 이하 보톡스로 약술함)은 신경전달물질 배출에 관여하는 핵심 단백질인 SNARE 단백질을 절단하는 프로테아제 (protease)이다. 보톡스는 SNARE 단백질을 절단함으로써 신경전달을 차단하고 결과적으로 보톡스가 침투된 근육세포가 마비되도록 한다. 보톡스가 SNARE 단백질을 비가역적으로 절단함으로써 신경의 전달을 차단하는 반면, 소위 "바르는 보톡스"는 SNARE 복합체의 형성을 저해함으로써 신경전달을 방해하는 일종의 "경쟁적 저해제"이다. 현재 바르 는 보톡스 제품의 주성분인 아르기렐린은 효과가 불확실하고, 합성 펩타이드의 특성상 가격적으로 불리하며, 소비자 친화적이지도 않다는 약점을 가지고 있다.Synaptic vesicles containing neurotransmitters at the time of neurotransmitter release must be fused with the presynaptic membrane to form a channel between the two interfaces. At this time, the protein that provides the fundamental force of membrane fusion is three protein complex called SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor). Membrane fusion between synaptic vesicles and synaptic membrane opens the neurotransmitter exit pathway, which involves the t-SNARE complex attached to the target membrane and v-SNARE attached to the vehicle. t-SNARE is a complex of two proteins called synaptaxin 1a and SNAP-25. These SNARE proteins are twisted like twine. Upon such membrane fusion, rearrangement of the lipid bilayer, which is well known in the art, occurs. Since the biomembranes are pushing strongly against each other, these membranes are not fused spontaneously, but strong forces are exerted from the outside to overcome the repulsive force between the membranes. At this time, the SNARE protein produces a strong force enough to overcome the repulsive force between the membranes. In other words, the formation of the SNARE complex is a source of power overcoming the interlaminar repulsive force and a key phenomenon of exocytosis including the release of neurotransmitters. On the other hand, there is a neuromuscular junction in the upper layer of the muscle to control muscle relaxation and contraction, and the nerve terminal is loaded with synaptic vesicles. BoNT (Botulinum neurotoxin, hereinafter referred to as Botox) is a protease that cleaves the SNARE protein, a key protein involved in neurotransmitter release. Botox cleaves the SNARE protein and blocks neurotransmission, resulting in paralysis of the muscle cells that have infiltrated Botox. While Botox blocks the transmission of nerves by irreversibly cleaving the SNARE protein, the so-called "Botox Bottle" is a sort of "competitive inhibitor" that interferes with neurotransmission by inhibiting the formation of the SNARE complex. Currently, ARGIRELINE, the main ingredient of BAROX Botox products, has the drawback that the effect is uncertain, the price of the synthetic peptide is disadvantageous, and it is not consumer friendly.
천연물 추출물을 사용하여 신경전달 억제를 개발하는 것은 펩타이드 소재에 비하여 월등히 저렴한 원료를 제공할 수 있고, 천연물 소재이므로 최종 제품 개발 시 소비자에게 친화적으로 접근 가능하므로 펩타이드 소재에 비해 산업적 응용이 수월한 형태라 사료된다.Development of inhibition of neurotransmission by using natural extracts can provide much less expensive raw materials than peptides and it is a natural material so it can be approached to consumers in the end product development easily. do.
한편, 포제법은 한방의 전통제약기술로서 합화(合和), 합약(合藥), 수치(修治), 포자(匍炙), 법제(法製) 및 수사(修事) 등으로 일컬어진다. 이는 한방이론에 근거하여 약재를 가공 처리함으로써 약재 본래의 성질을 변화시키는 제약기술(製藥技術)이라 할 수 있다.On the other hand, the swallowing method is referred to as the traditional medicine technique of the oriental medicine, such as the harmony, the medicine, the numerology, the spore, the law, and the examination. This is a pharmaceutical technology that changes the original properties of medicinal materials by processing the medicinal materials based on the oriental medicine theory.
포제는 약물의 형태가 바른 것을 선별하고 잡질을 제거하며 정제, 가열처리, 보조물을 이용한 가공 등이 포함된 용어이다. 포제는 경우에 따라서 보료(輔料)를 가하여 함께 포제하는데, 이러한 것은 의료의 요구에 부합되는 것이며, 변증에 따른 용약의 목적을 달성하기 위함이다. 약물의 포제에 사용하는 보료의 종류가 다양하기 때문에 각기 다른 성질과 작용이 있으며, 이로 인해 포제한 약물이 일으키는 작용도 각기 다르다. 현재 사용되는 보료의 종류는 비교적 많은 편인데, 크게 액체 보료와 고체 보료로 구분할 수 있다. 액체 보료는 술, 식초, 소금물, 꿀, 생강즙, 감초즙, 흑두즙, 식염수, 미감수, 마유(麻油), 젖, 동변 또는 석회수 등이 사용된다. 고체 보료로는 쌀, 밀기울, 백반, 두부, 흙, 합분(蛤粉) 또는 모래 등이 있다.Foamer is a term that includes selection of the correct form of the drug, elimination of fecal matter, and purification, heat treatment, and processing using ancillary substances. In the case of Foje, it is possible to apply the medicine together with the application, which is in line with the needs of the medical care and to achieve the purpose of the medicine according to the dialectic. Because of the variety of types of drugs used in the formulations of drugs, they have different properties and actions, and the actions caused by these drugs are different. There are relatively many kinds of currently used pills, and they can be classified into liquid pills and solid pills. Liquid ingredients include alcohol, vinegar, salt water, honey, ginger juice, licorice juice, black bean juice, saline, unmeasured, mayo oil, milk, Solid feeds include rice, wheat bran, alfalfa, tofu, soil, rice flour, or sand.
한약재를 포제하는 목적은 약물을 청결하게 하고, 저장을 용이하게 하며, 약 물의 독성과 부작용을 저하시키거나 제거하고, 약성을 변화시켜 약을 더욱 효과적으로 만들며, 약물의 치료 효과를 증강시키고, 약재의 나쁜 냄새와 맛을 없애 복용하기 좋게 하기 위함이다.The purpose of herbal medicines is to clean drugs, facilitate storage, reduce or eliminate the toxicity and side effects of medicines, change medicines to make medicines more effective, enhance the therapeutic effect of medicines, It is to get rid of bad smell and taste and to be good to take.
피부의 주름은 연령의 증가 및 스트레스 등의 내인적인 요인 또는 대기오염이나 자외선 조사와 같은 외부 환경적인 요인에 의해 발생하는 가장 두드러진 피부 노화의 외관상의 특징이다. 주름은 이마, 눈 주변, 양미간 및 입 주변 등의 안면이나 목, 목둘레, 팔꿈치, 겨드랑이, 손 및 발 등의 신체 각 부위에 생긴다. 대부분 30세 전후부터 눈에 띄기 시작해 나이가 들어감에 따라 그 수나 깊이 및 범위가 증가해간다. 이러한 주름 생성의 주된 원인은 피부 노화 과정에 의해 피부조직에 생긴 활성 산소종이 최종적으로 피부 진피 구성성분의 대부분을 차지하는 교원섬유와 탄력섬유에 가교를 형성시키고 이들 섬유의 생성 및 분해를 변화시켜 일어나는 것이라 할 수 있다. 피부 노화를 억제하기 위해 사용되는 비타민 E, 베타-카로틴, 비타민 C 및 글루타치온 (glutathione) 등의 항산화제나 라디칼 소거제와 비타민 A와 같은 진피 콜라겐 합성을 증진시키는 물질 등이 현재까지 피부 주름을 개선해주는 물질로 사용되어 왔다. 그러나 이러한 화장료 활성 성분들은 대부분 피부 자극이 강하거나 그 자체가 제형 내에서 불안정하여 변색, 변취 및 침전 등이 발생하고 원료 고유의 활성이 감소하는 단점이 있었다.Skin wrinkles are an apparent feature of the most prominent skin aging caused by an endogenous factor such as age and stress, or by external environmental factors such as air pollution or ultraviolet radiation. The wrinkles occur on the face, neck, neck, elbow, armpits, hands and feet of the body such as the forehead, the eyes, the eyes and the mouth. Most of them begin to become noticeable around 30 years old, and their number, depth and range increase with age. The major cause of wrinkles is the formation of crosslinks in collagen fibers and elastic fibers, which ultimately occupy the majority of skin dermis components, and changes in the production and degradation of these fibers. can do. Antioxidants such as vitamin E, beta-carotene, vitamin C and glutathione, radical scavengers and substances promoting dermal collagen synthesis such as vitamin A, which are used to control skin aging, Has been used as a material. However, most of these cosmetic active ingredients are strongly irritated by the skin or are unstable in the formulations themselves, resulting in discoloration, detachment and sedimentation, and the inherent activity of the raw material is reduced.
최근 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 다양하게 개발되고 있다. 이러한 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐 아니라 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발 가치가 한층 늘어나 고 있다.Recently, various cosmetic products using natural products have been developed to reduce skin irritation caused by various chemical substances and the like. These natural materials are not only less harmful to the skin, but also have increased value as a raw material for cosmetics as consumers' response has increased.
이에, 본 발명자들은 우수한 피부 주름 개선 효과를 갖는 천연 원료에 관하여 연구한 결과, 편백잎 추출물을 이용하여 화장료 조성물을 제조할 경우 피부 주름 개선 효과가 우수한 것을 발견하고 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the inventors of the present invention have studied about natural raw materials having an excellent skin wrinkle-reducing effect, and as a result, found that an excellent effect of improving skin wrinkles is obtained when a cosmetic composition is prepared using a leek leaf extract.
따라서, 본 발명의 목적은 편백잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a cosmetic composition for improving skin wrinkles containing an extract of Paeonia japonica as an active ingredient.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 편백잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.In order to attain the above object, the present invention provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles containing an albino leaf extract as an active ingredient.
본 발명에 의한 화장료 조성물은 편백잎 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 SNARE 복합체의 형성을 저해하고 신경전달물질 방출을 막아 피부 주름을 개선하는 효과가 우수할 뿐만 아니라, 천연 재료를 사용하여 피부에 부작용이 적고 피부 자극을 줄일 수 있다. 또한, 기존의 피부 주름 개선제들에 비해 제형 내 안정성이 뛰어나고, 종래의 주름 개선용 시술에 사용되어왔던 보톡스와 유사한 효과를 나타냄으로써 부작용이 없이 피부의 주름을 크게 개선시킨다.The cosmetic composition according to the present invention is excellent in the effect of inhibiting the formation of the SNARE complex and inhibiting the release of neurotransmitters and improving the wrinkles of the skin by containing the Leaf Leaf Extract as an active ingredient, Less skin irritation can be reduced. In addition, it has excellent stability in the formulation as compared with conventional skin wrinkle reducing agents, and exhibits an effect similar to that of Botox, which has been used in conventional wrinkle remover procedures, thereby significantly improving the wrinkles of the skin without side effects.
본 발명은 편백잎 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition for improving skin wrinkles containing an extract of Paeonia japonica as an active ingredient.
이하, 본 발명을 자세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명의 편백(Chamaecyparis obtusa)은 측백나무과 상록교목으로서, 높이는 50m, 지름 2m에 달하며, 노송나무라고도 한다. 가지가 수평으로 퍼져 원뿔모양의 수관(俊冠)을 형성하고, 나무껍질은 적갈색이며 세로로 갈라져서 벗겨진다. 곧게 자라 목재의 용도가 매우 넓으며, 주로 건축재, 토목재, 배 또는 조각재 등에 사용되고 있다.Chamaecyparis obtusa of the present invention is a haploid tree and evergreen tree with a height of 50 m and a diameter of 2 m and is also called hinoki. Branches spread horizontally to form conical horns, and the bark is reddish brown and ripped off vertically. It grows straight and its use is very broad and is mainly used for timber, timber, ship or sculpture.
따라서, 본 발명에 의한 편백잎 추출물을 함유하는 피부 외용제 조성물은 항노화, 피부 주름 개선, 피부 탄력 개선, 피부 미백, 피부 보습, 아토피 등의 피부 건조 질환의 예방 및 개선, 항염증, 피부 재생 등의 피부 트러블 예방 또는 개선 용도로 매우 유용하다.Therefore, the composition for external application for skin containing the granular leaf extract according to the present invention is useful as an anti-aging, skin wrinkle, skin elasticity improvement, skin whitening, skin moisturizing, prevention and improvement of skin dryness diseases such as atopy, Which is very useful for preventing or improving skin trouble.
본 발명에 의한 편백잎 추출물은 SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor) 복합체의 형성을 저해하고 신경전달물질 방출을 저해하여 피부 주름을 개선하는 효과가 우수하다. 이는 종래에 피부 주름 개선용 시술에 사용되어왔던 보톡스와 유사한 효과를 나타냄으로써 부작용이 없이 피부의 주름을 크게 개선시킬 수 있다.The leek leaf extract according to the present invention has an excellent effect of inhibiting the formation of SNARE (soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor attachment protein receptor) complex and inhibiting the release of neurotransmitters and improving skin wrinkles. This shows a similar effect to Botox that has been used in the prior art for the treatment of skin wrinkles, thereby greatly improving the wrinkles of the skin without side effects.
본 발명에 의한 편백잎 추출물은 편백잎을 용매로 추출하기 전 포제 처리될 수 있다. 건조한 편백잎을 삶거나, 찌거나, 불에 볶거나, 불에 굽는 공정 또는 이 들이 혼합된 공정 등을 통해 편백잎을 포제 처리한다. 보다 상세하게는, 삶는 경우 60~100℃, 30분~2시간/ 찌는 경우 120~150℃, 3~6시간/ 볶는 경우 100~180℃, 10분~1시간/ 굽는 경우 80~100℃, 10분~1시간에서 용이하게 선정된다. 상기 처리 온도 및 처리 시간을 벗어나면 포제 처리의 효과가 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다. The Leaf Leaf Extract according to the present invention can be subjected to a fog treatment before extracting the Leaf Leaf with a solvent. Fleshing the soft white leaves through processes such as boiling, steaming, roasting, roasting, or mixing them with dry white leaves. More specifically, in case of boiling, it is preferable to boil at 60 to 100 ° C for 30 minutes to 2 hours at 120 to 150 ° C for 3 to 6 hours at steaming, at 100 to 180 ° C for 10 minutes to 1 hour at 80 to 100 ° C for roasting, It is easily selected from 10 minutes to 1 hour. If the treatment temperature and the treatment time are exceeded, the effect of the fogging treatment may be deteriorated or the composition may be changed.
또한, 보료를 가하여 함께 포제할 수 있으며, 본 발명에 사용 가능한 보료로는 술, 식초, 소금물, 꿀, 생강즙, 감초즙, 흑두즙, 식염수, 미감수, 마유(麻油), 젖, 동변, 석회수, 쌀, 밀기울, 백반, 두부, 흙, 합분(蛤粉) 또는 모래 등이 있다.The present invention can also be used as a feedstock for use in the present invention. Examples of the feedstuffs that can be used in the present invention include sake, vinegar, salt water, honey, ginger juice, licorice juice, black bean juice, saline, Rice, wheat bran, alfalfa, tofu, soil, mulberry or sand.
본 발명의 편백잎의 추출과정은 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 수행될 수 있다. 예를 들면, 포제 처리된 편백잎에 물 또는 유기용매를 넣고, 환류 추출하여 침적시킨 후 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 편백잎 추출물을 얻을 수 있다.The process of extracting the cotton bladder of the present invention can be carried out by a conventional method known in the art. For example, water or an organic solvent is added to a flax-treated soft white leaf, and the mixture is subjected to reflux extraction, followed by filtration, filtration and centrifugation to separate the residue and the filtrate, and the separated filtrate is concentrated under reduced pressure to obtain an albino leaf extract have.
본 발명에 사용 가능한 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름 또는 이들 유기용매와 물의 혼합용매에서 선택될 수 있으며, 바람직하게는 80% 에탄올을 사용한다. 이때, 추출 온도는 10~80℃가 바람직하며, 추출 시간은 6~24시간이 바람직하다. 상기 추출 온도 및 추출 시간을 벗어나면 추출 효율이 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다.The organic solvent usable in the present invention may be selected from ethanol, methanol, butanol, ether, ethyl acetate, chloroform or a mixed solvent of these organic solvents and water, preferably 80% ethanol. At this time, the extraction temperature is preferably 10 to 80 ° C, and the extraction time is preferably 6 to 24 hours. If the extraction temperature and the extraction time are exceeded, the extraction efficiency may be deteriorated or the component may be changed.
상기에서 용매를 이용하여 추출물을 얻은 이후 당업계에 알려진 통상적인 방법으로 상온에서 냉침, 가열 및 여과하여 액상물을 얻을 수 있으며, 또는 추가로 용매를 증발, 분무 건조 또는 동결 건조할 수 있다.After obtaining the extract using a solvent, the extract can be obtained by cooling, heating and filtering at room temperature by a conventional method known in the art, or the solvent can be further evaporated, spray dried or freeze-dried.
본 발명에 의한 화장료 조성물은 편백잎 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001~30중량%의 양으로 함유한다. 이는 그 함량이 0.0001중량% 미만이면 피부 주름 개선 효과를 얻을 수 없고, 30중량% 초과이면 함량 증가에 비해 그 효과의 증가가 크지 않기 때문이다.The cosmetic composition according to the present invention contains an albino leaf extract in an amount of 0.0001 to 30% by weight based on the total weight of the composition. If the content is less than 0.0001% by weight, the effect of improving wrinkles of the skin can not be obtained. If the content is more than 30% by weight, the increase of the effect is not so large.
본 발명에 의한 화장료 조성물은 유연 화장수, 수렴 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 팩, 파운데이션, 립스틱 또는 파우더 파운데이션 등으로 제형화될 수 있으나, 이에만 한정되는 것은 아니다.The cosmetic composition according to the present invention may be formulated into a flexible lotion, a convergent lotion, a nutritional lotion, a nutritional cream, a massage cream, an essence, a pack, a foundation, a lipstick or a powder foundation.
각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기 추출물 이외에 다른 성분들은 기타 화장료의 제형 또는 사용 목적에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.In the cosmetic composition of each formulation, the ingredients other than the above-mentioned extract may be mixed and selected without difficulty by the person skilled in the art according to the formulation or use purpose of other cosmetic ingredients.
이하, 실시예 및 시험예를 들어 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 이들 실시예 및 시험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 예로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples and test examples. However, these examples and test examples are only intended to facilitate understanding of the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.
[실시예 1] 편백잎 생품(生品) 추출물의 제조 [Example 1] Preparation of extracts of raw white algae
건조한 편백잎 1 kg에 80% 에탄올 수용액 5 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 편백잎 추출물 285 g을 얻었다. Five kilograms of 80% ethanol aqueous solution was added to 1 kg of dried soft white leaves, refluxed three times, and then immersed at 15 DEG C for 1 day. Thereafter, the residue and the filtrate were separated by filtration through a filter cloth and centrifugation, and the separated filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain 285 g of an albino leaf extract.
[실시예 2] 편백잎 청초(淸炒) 추출물의 제조[Example 2] Preparation of an extract of Cheilwon Leaves
건조한 편백잎 1kg을 초제 용기에 넣은 다음 150℃ 에서 30분 동안 볶은 후 그늘에 말렸다. 80% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣은 후, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 편백잎 청초 추출물 250g을 얻었다.One kilogram of the dried cottonseed leaves were placed in a suppository container, roasted at 150 ° C for 30 minutes, and then dried in the shade. After adding 5 L of an aqueous 80% ethanol solution, the mixture was refluxed three times and then immersed at 15 DEG C for 1 day. Thereafter, the residue and the filtrate were separated by filtration through a filter cloth and centrifugation, and the separated filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain 250 g of a leishmania leaf extract.
[실시예 3] 편백잎 주증(酒蒸) 추출물의 제조 [Example 3] Preparation of extracts of Suwei liquorice
건조한 편백잎 1kg을 황주 300㎖(서늘한 음지에서 전통 옹기를 사용하여 숙성시키며 편백잎의 건조 중량에 대하여 20~30% 비율로 사용함)에 축축해지도록 1시간 동안 담가 두고 이것을 찜기에 담아 100~150℃를 유지시키면서4시간 동안 찐 다음 그늘에 말렸다. 80% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 편백잎 주증 추출물 260g을 얻었다.1kg of dried white leaves are soaked in 300ml of sulfur (1 ~ 30% of the dry weight of untransformed leaves), soaked for 1 hour in a steamer and aged at 100-150 Gt; C < / RTI > for 4 hours and then dried in the shade. After adding 5 L of 80% aqueous ethanol solution, the mixture was refluxed three times, and then immersed at 15 DEG C for 1 day. Thereafter, the residue and the filtrate were separated by filtration through a filter cloth and centrifugation, and the separated filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain 260 g of an elongated flower leaf extract.
[실시예 4] 편백잎 염자(鹽炙) 추출물의 제조[Example 4] Preparation of an extract of white currant leaf (salt)
건조한 편백잎 1kg을 소금물 200㎖(서늘한 음지에서 전통 옹기를 사용하여 숙성시키며 소금물의 농도는 8~10%이고 편백잎 건조 중량에 대하여 20~30% 비율로 사용함)에 잘 혼합시킨 후 밀폐시켜 완전히 흡수되도록 1시간 동안 방치하고, 소금물이 완전히 흡수된 편백잎을 150℃의 초제 용기에 넣은 다음 30분 동안 볶은 후 그늘에 말렸다. 80% 에탄올 수용액 5ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 다음, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 편백잎 염자 추출물 295g을 얻었다.One kilogram of dried flattened leaves is mixed well with 200 ml of brine (aged using a conventional onion in a cool shade, concentration of salt water is 8 to 10% and used at a rate of 20 to 30% with respect to the dry weight of the leaved leaf) The mixture was allowed to stand for 1 hour to be absorbed, and the whitened leaves, which had been completely absorbed with salt water, were put in a container of 150 ° C, roasted for 30 minutes, and then dried in the shade. After adding 5 L of 80% aqueous ethanol solution, the mixture was refluxed three times, and then immersed at 15 DEG C for 1 day. Thereafter, the residue and the filtrate were separated by filtration through a filter cloth and centrifugation, and the separated filtrate was concentrated under reduced pressure to obtain 295 g of a cotton leaf blade extract.
[시험예 1] 막융합 저해 효과[Test Example 1] Effect of membrane fusion inhibition
상기 실시예 1~4에서 수득한 편백잎 추출물에 대한 막융합 저해 효과를 시험하였다. SNARE 단백질들을 생산하기 위해 생물학 기법으로 형질전환된 대장균 (E. coli Codon (+) RIL, Novagen)으로부터 각각 SNAP25 (NMO11428), 신탁신 1a (AF217197) 및 VAMP2 (NMO12663)라 불리는 SNARE 단백질들을 정제하였다. 우선 형광물질이 표지된 미세한 피막입자인 라이포좀 (liposome)을 만들기 위해 팔미토일 올레오일 포스파티딜콜린 (Palmitoyloleoyl phosphatidylcholine; POPC)(62mol%), 디올레오일 포스파티딜세린 (Dioleoyl phosphatidylserine; DOPS)(35mol%), 1-올레오일-2-[N-(7-니트로-2,1,3-벤족사디아졸-4-일)아미노]카프로일 포스파티딜세린(1-oleoyl-2-[N-(7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl)amino]caproyl phosphatidylserine; NBD-PS)(1.5mol%) 및 형광물질인 로다민(Rhodamin-PE, 1.5mol%)을 혼합하여 10Mm 라이포좀 (v-vesicle)을 만들었고, 형광물질이 표지되지 않은 라이포좀을 만들기 위해 DOPS와 POPC를 몰농도가 35:65가 되도록 혼합하여 50Mm 라이포좀 (t-vesicle)을 만들었다. 정제된 SNAP25와 신탁신 1a로 구성된 복합체를 만들기 위해 몰농도가 1:1이 되도록 혼합하여 실온에서 1시간 반응시킨 후 형광물질이 표지되지 않은 라이포좀과 몰비율이 100:1이 되도록 혼합하였고, VAMP2는 형광물질이 들어있는 라이포좀과 몰비율이 50:1로 결합시켰다. 그리고 나서 상기 두 종류의 라이포좀은 10kDa 투석막을 이용하여 4℃ 에서 24시간 동안 교반하면서 투석 과정을 거친 후 3:7 (v-vesicle:t-vesicle)의 비율로 섞은 뒤, SNAP-25, 신탁신 1a 및 VAMP-2를 포함하는 상기 혼합물에 대조군인 메탄올과 본 발명의 실시예 1~4의 편백잎 추출물을 각각 40㎍/㎖ 농도로 가하였다. 이어서, 형광 강도 측정 기기 (모델명: SpectraMax M2, 제조사: Molecular Device)를 이용하여 형광 강도를 측정하고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.The membrane fusion inhibitory effect on the albino leaf extracts obtained in Examples 1 to 4 was tested. SNARE proteins called SNAP25 (NMO11428), Trust ShinA1 (AF217197) and VAMP2 (NMO12663) were purified from E. coli Codon (+) RIL, Novagen transformed by biotechnology to produce SNARE proteins . First, a mixture of palmitoyloleoyl phosphatidylcholine (POPC) (62 mol%), Dioleoyl phosphatidylserine (DOPS) (35 mol%) to make a liposome which is a microscopic coat particle with fluorescent substance labeling, 1-oleoyl-2- [N- (7-nitro-2,1,3-benzoxadiazol-4-yl) amino] caproylphosphatidylserine (1.5mol%) and Rhodamin-PE (1.5mol%), which is a fluorescent substance, were mixed to prepare a 10mM lysozyme (v -vesicle), and to make a liposome without a fluorescent substance, DOPS and POPC were mixed at a molar concentration of 35:65 to form a 50-mM liposome (t-vesicle). The mixture was mixed at a molar concentration of 1: 1 and reacted at room temperature for 1 hour to prepare a complex composed of purified SNAP25 and authentic Shin-1a. The mixture was mixed so that the molar ratio of the liposome with the fluorescent substance was 100: 1, VAMP2 was conjugated to a liposome containing a fluorescent substance in a molar ratio of 50: 1. Then, the two types of liposomes were dialyzed at a temperature of 4 ° C for 24 hours using a 10 kDa dialysis membrane and then mixed at a ratio of 3: 7 (v-vesicle: t-vesicle) Methanol in the control group and the albino leaf extracts of Examples 1 to 4 of the present invention were added to the above mixture containing ne 1a and VAMP-2 at a concentration of 40 μg / ml, respectively. Then, the fluorescence intensity was measured using a fluorescence intensity measuring instrument (Model: SpectraMax M2, manufacturer: Molecular Device). The results are shown in Fig.
도 1에서 형광 강도는 SNARE 단백질간의 막 융합 현상을 의미하기 때문에, 형광 강도가 낮다는 것은 막융합 저해 효과가 우수함을 나타낸다. 검은색 원형은 대조군 반응 (control reaction)이 진행되는 경로를 나타낸다. 도 1에서 알 수 있듯이, 편백잎 추출물은 대조군에 비해 형광 강도가 낮아 SNARE 단백질간의 막 융합 현상을 저해하는 효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 특히 편백잎 주증 추출물(실시예 3)은 다른 실험군보다 막융합 저해 효과가 우수하였다.In FIG. 1, since the fluorescence intensity means a membrane fusion phenomenon between SNARE proteins, a low fluorescence intensity indicates that the membrane fusion inhibitory effect is excellent. The black circle represents the path of the control reaction. As can be seen from FIG. 1, it was confirmed that the albite leaf extract had an effect of inhibiting the membrane fusion phenomenon between the SNARE proteins because the fluorescence intensity was lower than that of the control group. In particular, The fusion inhibition effect was excellent.
대조군의 형광 강도를 기준으로 설정하고 각각 편백잎 추출물에서의 상대적인 막 융합 저해율(%)을 계산하였다. 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.The fluorescence intensity of the control group was set as a reference, and relative inhibition rates of membrane fusion (%) were calculated in each of the leek leaf extracts. The results are shown in Table 1 below.
상기 표 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, 편백잎 추출물로 처리한 군은 편백잎 추출물을 포함하지 않는 대조군보다 막융합 저해 효과가 우수하였으며, 실시예 3의 편백잎 주증 추출물은 다른 편백잎 추출물들에 비해 막융합 저해 효과가 월등히 우수한 것을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 발명의 편백잎 추출물은 SNARE 단백질간의 막융합 현상을 효과적으로 저해함으로써 우수한 피부 주름 개선 효과를 나타낼 수 있다.As can be seen from the above Table 1, the group treated with the Leaf Leaf Extract showed better membrane fusion inhibitory effect than the control group not containing Leaf Leaf Extract. The Leaf Leaf Leaf Extract of Example 3 was superior to the other Leaf Leaf Extracts It was confirmed that the membrane fusion inhibition effect was remarkably excellent. Therefore, the leek leaf extract of the present invention effectively inhibits the membrane fusion phenomenon between SNARE proteins, thereby exhibiting an excellent skin wrinkle-reducing effect.
[시험예 2] PC12 세포에서의 신경전달물질 방출 저해 효과[Test Example 2] Inhibitory effect of neurotransmitter on PC12 cells
PC12 세포는 콜라겐 코팅한 플레이트(60mm dish)에 10% 태아 송아지 혈청과 5% 태아 소 혈청, 항생물질이 들어간 Ham's F12K 배지에서 배양하였다. 계대배양은 배지를 흡입한 후 PBS 2 ㎖을 넣고 피펫팅하여 세포를 디시(dish) 벽으로부터 분리하여 1,000 x g 에서 5분간 원심분리하여 세포를 모은 후, 새로운 배지를 넣어 피펫팅하여 세포 펠렛을 분산하여 새로운 배양 플레이트에 넣고 37℃, 5%의 CO2 가스가 공급되는 배양기내에서 배양하였다. 실험에 사용된 [3H]-노르아드레날린은 Amersham사에서 구입하여 사용하였다. PC12 세포의 플레이트에서 배지를 흡입한 후 PBS를 넣고 세포를 플레이트 벽으로부터 떼어낸 후 세포수를 헤마사이토미터로 측정하여 2x105cell/㎖의 농도로 새로운 배지에 분산하여 접종하였다. 24시간 후 노르아드레날린 검정 완충액 ([3H]-NA, 1.5μCi/㎖)을 첨가한 후 탄산가스 배양기에서 90분간 도입하였다. 반응 후 완충액을 제거한 후 PBS로 3회 세정한 후 새로운 배지에 본 발명의 실시예 1~4의 편백잎 추출물 10㎍/㎖ 농도로 넣고 30분간 반응시켰다. 양성대조군으로 베라파밀을 사용하고 상기 편백잎 추출물과 동일한 방법으로 처리하였다. 배지를 제거한 후 고농도의 K+ 완충액을 넣은 후 12분간 탄산가스 배양기에서 배양한 후 상등액을 회수하여 [3H]- 노르아드레날린의 방출을 저해하는지를 신틸레이션 카운터(scintillation counter)로 측정하였다. 상기의 방법으로 편백잎 추출물이 PC12 세포내에서 도파민 유도체인 노르아드레날린의 방출을 저해하는지를 확인하였으며, 고농도의 K+ 완충액을 기준으로 각 실험군의 노르아드레날린의 비율(%)을 계산하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다. PC12 cells were cultured in collagen coated plates (60 mm dish) in Ham's F12K media containing 10% fetal calf serum, 5% fetal bovine serum and antibiotics. After submerging the medium, 2 ml of PBS was added to the culture medium, and the cells were separated from the dish wall by pipetting, and the cells were collected by centrifugation at 1,000 xg for 5 minutes. The cells were then pipetted to disperse the cell pellet , And the cells were placed in a new culture plate and cultured in an incubator in which 5% CO 2 gas was supplied at 37 ° C. The [ 3 H] -noreadrenaline used in the experiment was purchased from Amersham. After the cells were inhaled from the plate of PC12 cells, PBS was added and the cells were detached from the plate wall. The cell counts were measured with a hematometer and the cells were inoculated into a fresh medium at a concentration of 2 x 10 cells / ml. After 24 hours of the addition of noradrenaline assay buffer ([3 H] -NA, 1.5 μ Ci / ㎖) was introduced for 90 minutes at a carbon dioxide gas incubator. After the reaction, the buffer solution was removed, and the plate was washed three times with PBS. Then, the cells were transferred to a fresh medium at a concentration of 10 μg / ml of the albino leaf extract of Examples 1 to 4 of the present invention and reacted for 30 minutes. Verapamil was used as a positive control and treated in the same manner as the leek leaf extract. After the medium was removed, a high concentration of K + buffer was added. After incubation in a carbon dioxide gas incubator for 12 minutes, the supernatant was recovered to measure the release of [ 3 H] -nonadrenaline by a scintillation counter. It was confirmed by the above method that the Leaf Leaf Extract inhibits the release of the dopamine derivative, noradrenaline, in PC12 cells, and the ratio (%) of noradrenaline in each experimental group was calculated based on the high concentration of K + buffer. The results are shown in Fig.
도 2에서 알 수 있듯이, 실험에 사용된 편백잎 염자 추출물을 제외하고 나머지 편백잎 추출물은 신경전달물질의 방출을 효과적으로 억제하였으며, 실시예 3의 편백잎 주증 추출물은 신경전달물질의 방출 저해 효과가 상대적으로 높은 것으로 나타났다. 따라서, 본 발명의 편백잎 추출물은 신경전달물질의 방출을 저해시킴으로써 우수한 피부 주름 개선 효과를 나타낼 수 있다.As can be seen from FIG. 2, the remaining Leaf Leaf Extract effectively suppressed the release of neurotransmitter, except for the Leaf Leaf Extract, which was used in the experiment. The Leaf Leaf Extract of Example 3, Respectively. Therefore, the untreated Leaf Leaf Extract of the present invention can exhibit excellent skin wrinkle-reducing effect by inhibiting the release of neurotransmitter.
이하에서는 본 발명에 따른 조성물의 제형예를 설명하고자 하나, 이에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, formulation examples of the composition according to the present invention will be described, but the present invention is not limited thereto.
[제형예 1] 영양화장수[Formulation Example 1] Nutritional lotion
편백잎 주증(酒蒸) 추출물을 함유하는 영양 화장수를 하기 표 2에 기재된 조성으로 제조하였다.The nutritional lotion containing the extract of Fagus crenata was prepared with the composition shown in Table 2 below.
[제형예 2] 유연화장수 [Formulation Example 2] Flexible longevity
편백잎 주증(酒蒸) 추출물을 함유하는 유연 화장수를 하기 표 3에 기재된 조성으로 제조하였다.The softened lotion containing the extract of Sophora japonica was prepared with the composition shown in Table 3 below.
[제형예 3] 영양크림 [Formulation Example 3] Nourishing cream
편백잎 주증(酒蒸) 추출물을 함유하는 영양크림을 하기 표 4에 기재된 조성으로 제조하였다.Nutritive creams containing an extract of Fagus crenata were prepared according to the compositions shown in Table 4 below.
[제형예 4] 마사지크림 [Formulation Example 4] Massage cream
편백잎 주증(酒蒸) 추출물을 함유하는 마사지크림을 하기 표 5에 기재된 조성으로 제조하였다. A massage cream containing an extract of Sophora japonica was prepared with the compositions shown in Table 5 below.
[제형예 5] 팩 [Formulation Example 5] Pack
편백잎 주증(酒蒸) 추출물을 함유하는 팩을 하기 표 6에 기재된 조성으로 제조하였다. A pack containing the lobster extract was prepared in the composition shown in Table 6 below.
도 1은 본 발명에 따른 편백잎 추출물에 의한 막융합 현상의 저해 효과를 나타내는 그래프이다.FIG. 1 is a graph showing the inhibitory effect of the membrane fusion phenomenon by the leek leaf extract according to the present invention.
도 2는 본 발명에 따른 편백잎 추출물에 의한 PC12 세포에서의 신경전달물질 방출 저해 효과를 나타내는 그래프이다.FIG. 2 is a graph showing the inhibitory effect of neurotransmitter release on PC12 cells by the Leaf Leaf Extract according to the present invention.
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