KR101663625B1 - a resorbable chollagen membrane and a method of preparing the same - Google Patents

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Abstract

본 발명은 조직 수복용 흡수성 콜라겐 멤브레인 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명은 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)과 콜라겐을 포함하고, 상기 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)은 가교 결합된 구조를 가지는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 의하면, 인장강도와 신장률이 우수하고, 일정 시간 경과 후 스스로 분해되거나 치주조직에 흡수되는 흡수성 콜라겐 멤브레인을 얻을 수 있다. The present invention relates to an absorbable collagen membrane for tissue repair and a method of manufacturing the same. The present invention is characterized in that γ-PGA (poly-gamma-glutamic acid) and collagen are included, and the γ-PGA (poly-gamma-glutamic acid) do. INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to obtain an absorbable collagen membrane which is excellent in tensile strength and elongation, and which is decomposed by itself after a lapse of a predetermined time, or absorbed into periodontal tissue.

Description

흡수성 콜라겐 멤브레인 및 그 제조방법{a resorbable chollagen membrane and a method of preparing the same}Absorbable collagen membrane and a method of preparing the same,

본 발명은 흡수성 콜라겐 멤브레인 및 그의 제조방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 구강 내 치주조직 발치와(발치한 치주조직의 동공)에 부착하여 일정 시간 경과 후 스스로 분해되거나 치주조직에 흡수되는 조직 수복용 흡수성 콜라겐 멤브레인 및 그 제조방법에 관한 것이다.The present invention relates to an absorbable collagen membrane and a method for producing the same. More particularly, the present invention relates to an absorbable collagen membrane for tissue recovery, which is disassembled by itself after a predetermined period of time after being adhered to an extraction of periodontal tissue in the oral cavity (a cavity of an extracted periodontal tissue), and a manufacturing method thereof.

콜라겐은 인체의 조직과 장기를 구성하는 구조 단백질로 결체조직의 주성분이며, 글리신, 프롤린 등 약 18종의 아미노산으로 구성된 동물의 섬유성 단백질을 말한다. 인간의 경우 인체를 구성하고 있는 5,000 종류의 단백질 중 가장 많은 35%를 차지하고 있는 특수한 구조 단백질이다.Collagen is a structural protein that constitutes the tissues and organs of the human body. It is the main component of the connective tissue. It refers to an animal's fibrous protein composed of about 18 amino acids such as glycine and proline. In humans, it is a special structural protein that accounts for 35% of the 5,000 kinds of proteins that make up the human body.

특히, 피부, 뼈, 힘줄에 많이 존재하고 있으며 각종 아미노산이 폴리펩타이드 형태로 결합하여 세 가닥으로 꼬여 있는 형상으로 분자량은 대략 300,000 정도로 매우 크다.Especially, it exists in skin, bones, tendons, and various amino acids are bound to three strands by binding in the form of polypeptide, and its molecular weight is very high, about 300,000.

콜라겐의 종류로는 동물의 종류, 부위, type 별로 여러 종류가 있으며 각각의 특성도 다를 뿐만 아니라 구성된 단백질 등의 생체 분자나 성분도 다르다. 따라서 필요로 하는 인체 적합성 콜라겐을 사용하는 것이 바람직하다.There are many kinds of collagen in different kinds, regions, and types of animals, and not only their characteristics are different but also biomolecules and components such as proteins are different. Therefore, it is desirable to use the human collagen which is necessary.

생체재료로는 의료용과 마찬가지로 손상된 신경을 대체하기 위한 다공성 테플론 소재, 부러지거나 손상된 뼈를 대체하는 stainless steel, titanium, 연한 조직을 위한 키토산이나 콜라겐 등이 있다. 또한 추가적으로 천연고분자 물질들 또한 생체재료로 응용될 수 있으며 이에는 silk, keratin, collagen, gelatin 등이 대표적이다. Biomaterials include porous Teflon materials to replace damaged nerves as well as medical devices, stainless steel and titanium to replace broken or damaged bone, and chitosan or collagen for soft tissues. In addition, natural polymer materials can also be applied as biomaterials such as silk, keratin, collagen, and gelatin.

이러한 생체재료들은 여러 의료용 재료 개발 및 응용에서 사용되었으나 현재의 기술 및 제품으로의 세포 및 조직 재생을 위한 기능성 소재들의 연구는 충분히 되어 있지 않은 실정이다.Although such biomaterials have been used in the development and application of various medical materials, research on functional materials for cell and tissue regeneration into current technologies and products has not been conducted sufficiently.

그 이유는 의공학적으로 설계된 기존의 scaffold 및 생체재료들이 내구성, 생분해성, 생적합성, 기능성 등을 모두 유지하기에는 기술적으로 어려움이 있고 특히, 콜라겐의 종류와 특성에 따라서 생체 적합성이 다르기 때문이다.The reason for this is that technologically designed conventional scaffolds and biomaterials are technically difficult to maintain both durability, biodegradability, biocompatibility, and functionality, especially because of their biocompatibility depending on the type and nature of the collagen.

대한민국 등록특허 제10-0676285호(2007년1월30일)Korean Registered Patent No. 10-0676285 (January 30, 2007)

본 발명은 인장강도가 우수하고, 구강 내 치주조직 발치와(발치한 치주조직의 동공)에 부착하여 일정 시간 경과 후 스스로 분해되거나 치주조직에 흡수되는 흡수성 콜라겐 멤브레인 및 그 제조방법을 제공하고자 한다.The present invention provides an absorbable collagen membrane excellent in tensile strength, attached to an extracted periodontal tissue in an oral cavity (a cavity of an extracted periodontal tissue) and then decomposed by itself or absorbed into periodontal tissue, and a method for producing the same.

상기 과제를 해결하기 위한 본 발명의 일 측면은, γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)과 콜라겐을 포함하는 것을 특징으로 하는 흡수성 콜라겐 멤브레인일 수 있다.One aspect of the present invention for solving the above-mentioned problems is an absorbable collagen membrane comprising poly-gamma-glutamic acid (γ-PGA) and collagen.

상기 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)은 가교 결합 구조를 가질 수 있다.The? -PGA (Poly-gamma-Glutamic Acid) may have a crosslinking structure.

삭제delete

상기 γ-PGA 는 1 X γ-PGA 및 10 X γ-PGA 로 이루어진 그룹 중에서 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.The γ-PGA may include at least one selected from the group consisting of 1 × γ-PGA and 10 × γ-PGA.

상기 콜라겐은 돼지 유래 콜라겐을 포함할 수 있다.The collagen may include swine-derived collagen.

상기 콜라겐은 돼지 인대 유래 콜라겐을 포함할 수 있다.The collagen may include pig ligament-derived collagen.

본 발명의 다른 측면은, 콜라겐을 마련하는 단계; 상기 콜라겐에 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)을 혼합하는 단계; 및 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)을 가교시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 흡수성 콜라겐 멤브레인의 제조방법일 수 있다.According to another aspect of the present invention, Mixing the collagen with? -PGA (poly-gamma-glutamic acid); And γ-PGA (Poly-gamma-Glutamic Acid, polygamma glutamic acid). The present invention also provides a method for producing an absorbable collagen membrane.

상기 콜라겐으로는 돼지 유래 콜라겐을 사용할 수 있다.As the collagen, pig-derived collagen may be used.

삭제delete

상기 γ-PGA 로는 1 X γ-PGA 및 10 X γ-PGA 중 최소한 하나 이상을 사용할 수 있다.As the γ-PGA, at least one of 1 × γ-PGA and 10 × γ-PGA may be used.

상기 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)을 가교시키는 단계는, 비화학적 가교(non-chemical cross linking) 방법을 이용하고, 5~10%의 γ-PGA (Poly Glutamic Acid)를 1 배 또는 10 배로 희석하여 수행할 수 있다.The step of crosslinking the γ-PGA (Poly-Gamma-Glutamic Acid) may be carried out by using a non-chemical cross linking method and a 5 to 10% γ-PGA (Poly Glutamic Acid) May be diluted 1-fold or 10-fold.

본 발명에 의하면, 인장강도가 우수하고, 일정 시간 경과 후 스스로 분해되거나 치주조직에 흡수되는 흡수성 콜라겐 멤브레인을 구현할 수 있다.INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, it is possible to realize an absorbable collagen membrane having excellent tensile strength and being decomposed by itself after a certain period of time, or absorbed into periodontal tissue.

도 1은 본 발명의 일 측면에 따른 흡수성 콜라겐 멤브레인이 제조공정을 개략적으로 나타낸 모식도이다.
도 2는 본 발명의 일 측면에 따른 흡수성 콜라겐 멤브레인의 표면에 대한 주사전자현미경 사진이다.
도 3은 본 발명의 일 측면에 따른 흡수성 콜라겐 멤브레인에 대한 생체분해 결과를 나타낸 사진이다(a: 실험 전, b~h: 실험 후 20 초 간격).
도 4는 본 발명의 일 측면에 따른 흡수성 콜라겐 멤브레인에 인비보(in vivo) 시험 결과를 나타낸 사진이다.BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is a schematic view showing a manufacturing process of an absorbent collagen membrane according to one aspect of the present invention. FIG.
2 is a scanning electron micrograph of a surface of an absorbable collagen membrane according to an aspect of the present invention.
FIG. 3 is a photograph showing the result of biodegradation of an absorbable collagen membrane according to one aspect of the present invention (a: before experiment, b to h: 20 seconds after experiment).
4 is a photograph showing an in vivo test result on an absorbable collagen membrane according to one aspect of the present invention.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 측면들에 대하여 설명한다. 다만, 본 발명의 측면들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 이하 설명하는 실시 형태로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred aspects of the present invention will be described with reference to the accompanying drawings. However, aspects of the present invention may be modified into various other forms, and the scope of the present invention is not limited to the embodiments described below.

또한, 본 발명의 실시 형태는 당 업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위해서 제공되는 것이다. 따라서, 도면에서의 요소들의 형상 및 크기 등은 보다 명확한 설명을 위해 과장될 수 있으며, 도면상의 동일한 부호로 표시되는 요소는 동일한 요소이다.Furthermore, embodiments of the present invention are provided to more fully explain the present invention to those skilled in the art. Accordingly, the shapes and sizes of the elements in the drawings may be exaggerated for clarity of description, and the elements denoted by the same reference numerals in the drawings are the same elements.

본 발명은 구강 내 치주조직 발치와(발치한 치주조직의 동공)에 부착하여 일정 시간 경과 후 스스로 분해되거나 치주조직에 흡수되는 조직 수복용 흡수성 콜라겐 멤브레인 및 그 제조방법에 관한 것이다.TECHNICAL FIELD The present invention relates to an absorbable collagen membrane for tissue repair, which is disassembled by itself after a certain period of time, and is absorbed into periodontal tissues by attaching to an extracted periodontal tissue in an oral cavity (a cavity of an extracted periodontal tissue), and a method for producing the same.

본 발명의 일 측면은, γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)과 콜라겐을 포함하는 것을 특징으로 하는 흡수성 콜라겐 멤브레인일 수 있다.One aspect of the present invention may be an absorbable collagen membrane characterized by comprising gamma-PGA (Poly-gamma-Glutamic Acid) and collagen.

상기 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)은 가교 결합 구조를 가질 수 있다. γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)이 가교 결합된 구조를 가지는 경우 인장 강도 등의 기계적 특성이 우수한 멤브레인을 얻을 수 있다.The? -PGA (Poly-gamma-Glutamic Acid) may have a crosslinking structure. When a γ-PGA (poly-gamma-glutamic acid) has cross-linked structure, a membrane excellent in mechanical properties such as tensile strength can be obtained.

본 발명은 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)의 가교결합(cross linking) 현상을 이용하는 것을 특징으로 한다.The present invention is characterized by using cross-linking phenomenon of? -PGA (Poly-gamma-Glutamic Acid).

종래에는 화학적 가교결합(chemical cross linking)을 사용하였기 때문에 불가피하게 유기 용매를 사용할 수 밖에 없는데, 이러한 유기 용매를 제거하기 위한 공정이 복잡하고 혹시 이러한 유기 용매가 잔류하는 경우에는 여러 가지 문제점을 야기할 수도 있다는 단점이 있다.Conventionally, since chemical cross linking is used, it is inevitable to use an organic solvent. However, the process for removing such an organic solvent is complicated, and if such an organic solvent remains, there are various problems There is a disadvantage that it can be.

본 발명에서는 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)로는 1 X γ-PGA (순도 99% γ-PGA 5% 용액을 1배(1X) 희석한 용액) 및 10 X γ-PGA (순도 99% γ-PGA 5% 용액을 10배(10X) 희석한 용액) 중 최소한 하나 이상을 사용할 수 있다.In the present invention, 1 X gamma -PGA (a solution obtained by diluting 1X (1X) solution of a 5% solution of purity 99% gamma -PGA) and 10X gamma -PGA (polygamma glutamic acid) (A solution obtained by diluting a 10% (10X) solution of a 5% purity 99% γ-PGA solution).

PGA는 아미노산 글루타민산의 중합체로서, GA의 아미노 그룹과 GA 옆 사슬 끝 카르복실 그룹 사이에 펩티드 결합이 존재하는 형태이며, 박테리아 발효에 의하여 제조할 수 있다. γ-PGA 는 음식, 의약, 수 처리에 거쳐 광범위하게 사용될 수 있으며 암 치료의 약물전달시스템으로서 널리 사용되고 있다.PGA is a polymer of amino acid glutamic acid, in which a peptide bond exists between the amino group of GA and the chain terminal carboxyl group of the GA side, and can be produced by bacterial fermentation. γ-PGA can be widely used through food, medicine, water treatment, and is widely used as a drug delivery system for cancer treatment.

γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)을 사용하기 때문에 환경 친화적이고 생체적합성(bio compatibility) 도 향상된다는 장점이 있다.The use of γ-PGA (poly-gamma-glutamic acid) is environmentally friendly and bio compatibility is also improved.

콜라겐으로는 돼지 유래 콜라겐을 사용할 수 있다.As the collagen, pig derived collagen can be used.

돼지 유래 콜라겐이란 돼지의 표피 등의 조직으로부터 추출한 콜라겐을 의미한다. 돼지는 광우병 등의 우려로부터 안전하고 유전자 서열이 인간과 유사하여 다양한 대체 물질로 사용되고 있다. 돼지 유래 콜라겐 중 특히 돼지 인대에서 유래한 콜라겐을 사용하는 경우 인장강도 등의 기계적 특성이 더 우수할 수 있다.The term "collagen derived from pigs" means collagen extracted from tissues such as pig's skin. Pigs are safe from concerns such as mad cow disease, and their gene sequences are similar to humans and are being used as diverse substitutes. Among the collagen derived from pigs, in particular, when collagen derived from pig ligament is used, mechanical properties such as tensile strength can be more excellent.

흡수성이란 구강 내 치주조직 발치와(발치한 치주조직의 동공)에 부착하여 일정 시간 경과 후 스스로 분해되거나 치주조직에 흡수되는 성질을 의미한다.Absorbency refers to the property that it attaches to the extraction of periodontal tissue in the oral cavity (the cavity of the extracted periodontal tissue) and is decomposed by itself or absorbed into the periodontal tissue after a certain period of time.

도 1에는 본 발명에 따른 조직 수복용 흡수성 콜라겐 제조방법을 개략적으로 나타내었다.FIG. 1 schematically shows a method for preparing absorbable collagen for tissue repair according to the present invention.

도 1를 참조하면, 본 발명의 다른 측면은, 콜라겐을 마련하는 단계(S1), 콜라겐에 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)을 혼합하는 단계(S2) 및 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)을 가교시키는 단계(S3)를 포함하는 것을 특징으로 하는 흡수성 콜라겐 멤브레인의 제조방법일 수 있다.1, the method of the present invention includes a step (S1) of providing collagen, a step (S2) of mixing collagen with poly-gamma-glutamic acid (γ-PGA) And cross-linking (Poly-gamma-Glutamic Acid, polygamma glutamic acid) to the surface of the collagen membrane (S3).

본 발명은 여러 구조의 멤브레인을 비화학적 방법 및 가교결합(non-chemical & cross linking) 방법을 이용하여 제조하는 것을 특징으로 한다.The present invention is characterized in that membranes of various structures are prepared using non-chemical and cross-linking methods.

먼저, 콜라겐을 마련할 수 있다(S1). 콜라겐으로는 돼지 유래 콜라겐을 사용할 수 있다. 예를 들어, 돼지 유래 콜라겐을 제조하는 방법에 대하여 살펴 보면 개략적으로 다음과 같다.First, collagen can be prepared (S1). As the collagen, pig derived collagen can be used. For example, a method of producing pig derived collagen will be outlined as follows.

먼저, 냉동된 돼지 피부 조각을 아세톤(acetone)에 넣고 교반하여 지방질을 제거한다. 증류수로 세척하여 아세톤을 제거한다. 지방질이 제거된 피부 조각을 HCl 등의 산 수용액에 넣고 균질화시킨다. 이를 교반 및 원심분리하여 얻은 침전물을 HCl 등의 산 수용액에 넣는다. filter paper를 이용하여 감압 여과하여 상등액을 동결 건조하여 콜라겐 스폰지(Collagen sponge)를 얻을 수 있다.First, a piece of frozen pig skin is placed in acetone and stirred to remove the fat. Wash with distilled water to remove acetone. The lipid-removed skin pieces are homogenized in an aqueous acid solution such as HCl. The precipitate obtained by stirring and centrifuging is put into an acid aqueous solution such as HCl. Filter paper is used for filtration under reduced pressure, and the supernatant is lyophilized to obtain a collagen sponge.

돼지 유래 콜라겐은 돼지의 skin, tendon, tail 등을 가수분해하여 제조할 수 있으며, 특히 냄새와 색깔이 없고 인체와 유사한 구조의 type 1, 3 collagen으로 구성되어 있다.Porcine-derived collagen can be produced by hydrolyzing the skin, tendon, and tail of pigs. It is composed of type 1, 3 collagen, which has no odor and color and has similar structure to human body.

또한, 돼지 유래 콜라겐은 타 동물 (광우병 EBS 등)이나 인간 사체 (AIDS virus) 등의 병원성 전염원으로부터 안전하다. 돼지 유래 콜라겐은 pH는 7.0 이고, 분자량은 약 2000 정도이고, 인장강도와 신장률이 기존 소재보다 우수하다. 또한 돼지 유래 콜라겐의 총 단백질량은 99.9% 순도이고, 점도는 25mps 이상이고, 비중은 0.35~0.39 이다.In addition, pig-derived collagen is safe from pathogenic infectious agents such as other animals (mad cow disease EBS, etc.) or human body (AIDS virus). Pork-derived collagen has a pH of 7.0, a molecular weight of about 2000, and tensile strength and elongation are superior to those of conventional materials. The total protein content of the pig-derived collagen is 99.9% purity, the viscosity is 25 mps or more, and the specific gravity is 0.35 to 0.39.

다음으로, 콜라겐에 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)을 혼합할 수 있다(S2).Next, the collagen can be mixed with? -PGA (Poly-gamma-Glutamic Acid) (S2).

γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)로는 γ-PGA (Polyglutamic acid)로는 1 X γ-PGA 및 10 X γ-PGA 중 최소한 하나 이상을 사용할 수 있다.As the γ-PGA (poly-gamma-glutamic acid), at least one of 1 × γ-PGA and 10 × γ-PGA may be used as γ-PGA (Polyglutamic acid).

구체적으로는 일정량의 콜라겐과 γ-PGA를 fibrication buffer (sodium chloride 20~30 중량부, sodium hydroxide 1~2 중량부, di-sodium hydrogen phosphate dihydrate 3~5 중량부)에 넣어 혼합하는 것이 바람직하다.Specifically, it is preferable to mix a certain amount of collagen and γ-PGA in a fibrin buffer (20-30 parts by weight of sodium chloride, 1-2 parts by weight of sodium hydroxide and 3-5 parts by weight of di-sodium hydrogen phosphate dihydrate).

그 혼합방법은 콜라겐과 γ-PGA는 각각 1.0~1.5% 혹은 1~10배의 저장용액 (stock solution)을 만들어서 fibrillation buffer에 혼합하여 사용할 수 있으며, 이때 온도는 4℃ 이하와 진공을 유지하여 24~36시간 degassing 상태로 만드는 것이 바람직하다.For the mixing method, 1.0 ~ 1.5% or 1 ~ 10 times of stock solutions of collagen and γ-PGA can be prepared and mixed in the fibrillation buffer. ~ 36 hours degassing.

다음으로, γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)을 가교시켜 흡수성 콜라겐 멤브레인을 제조할 수 있다(S3).Next, an absorbable collagen membrane can be prepared by crosslinking? -PGA (Poly-gamma-Glutamic Acid) (S3).

γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)을 가교하는 방법으로는 구체적으로 상기 S2 공정 후 cross linking solution (70~80% PBS(phosphate buffered saline, 인산완충식염수)와 20~30% 에탄올의 혼합용액)을 10~14일 간 37℃ 배양기에서 반응 처리하여 수행할 수 있다.Specific examples of the method for crosslinking γ-PGA (poly-gamma-glutamic acid) include a cross linking solution (70-80% PBS (phosphate buffered saline) and 20-30% Ethanol) for 10 to 14 days in a 37 ° C incubator.

이하 실시예 및 비교예를 통하여 본 발명에 대하여 보다 상세하게 설명한다. 하지만 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples and Comparative Examples. However, the present invention is not limited thereto.

1. 돼지 유래 콜라겐 준비1. Preparation of pig-derived collagen

냉동된 돼지 피부를 해동하여 2cm x 2cm의 사각형으로 잘라낸 후, 잘라낸 피부 조각을 아세톤(acetone)에 넣고 2시간씩 2회 교반하여 지방질을 제거하고, 증류수로 5회 세척하여 아세톤을 제거하였다.The frozen pork skin was thawed and cut into squares of 2 cm x 2 cm. The cut pieces of skin were put into acetone and the fat was removed by stirring twice for 2 hours, and the acetone was removed by washing with distilled water five times.

상기 지방질이 제거된 피부 조각을 3mM HCl (pH 2.7) 수용액에 3%가 되도록 넣고 균질화시킨 후, 4℃에서 1일 동안 교반하고, 4℃, 40,000 x g 조건에서 1 시간 동안 원심 분리하여 얻은 침전물을 3mM HCl에 넣었다.The lipid-removed skin pieces were homogenized in an aqueous solution of 3 mM HCl (pH 2.7) to a concentration of 3%, stirred at 4 ° C for 1 day, centrifuged at 40,000 xg for 1 hour at 4 ° C, 3 mM HCl.

상기 용액을 4℃에서 3일 동안 교반하고, 4℃, 27,000 g 조건에서 1 시간 동안 원심 분리한 후, 상등액을 filter paper를 이용하여 감압 여과하였다.The solution was stirred at 4 ° C for 3 days, centrifuged at 27 ° C for 1 hour at 4 ° C, and the supernatant was filtered through filter paper.

감압 여과하여 얻은 상등액을 -70℃에서 얼린 후, 4일 동안 동결 건조(freeze dry)하여 얻은 콜라겐 스폰지(Collagen sponge)를 -20℃에서 보관하였다.
The supernatant obtained by filtration under reduced pressure was frozen at -70 ° C, and a collagen sponge obtained by freeze-drying for 4 days was stored at -20 ° C.

2. 콜라겐 멤브레인 제조2. Manufacture of collagen membrane

먼저, 1 X γ-PGA (4℃), 10 X γ-PGA (4℃), 0.06 N 아세트산(Acetic acid), 1.5 부피% 의 콜라겐 수용액(Collagen stock solution) (4℃), 및 50 ㎖ 코니컬 튜브(conical tube) (4℃)를 준비하였다.First, a 1X gamma -PGA (4 DEG C), 10X gamma -PGA (4 DEG C), 0.06 N acetic acid, a 1.5 volume% collagen stock solution (4 DEG C) A conical tube (4 캜) was prepared.

다음으로, 마련하고자 하는 콜라겐 용액의 최종 부피(1000 ㎕) 및 농도(1.2 부피%)를 결정하였다.Next, the final volume (1000 μl) and the concentration (1.2% by volume) of the collagen solution to be prepared were determined.

다음으로, 50㎖ 코니컬 튜브(conical tube)(4℃)에 최종 부피의 10분의 1인 100㎕ 의 10 X γ-PGA (4℃)를 투입하여 1 X γ-PGA을 제조하였다.Next, 1 X γ-PGA was prepared by adding 100 μl of 10 × γ-PGA (4 ° C.), which is one-tenth of the final volume, to a conical tube (4 ° C.) in a 50 ml conical tube.

다음으로, 사용할 콜라겐의 부피는 다음과 같이 계산하였다.Next, the volume of collagen to be used was calculated as follows.

Figure 112014047989129-pat00001
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= (1000㎕ * 1.2 부피%) / 1.5 부피% = 800 ㎕= (1000 * * 1.2% by volume) / 1.5% by volume = 800 ㎕

다음으로, 10 X γ-PGA 에 다음과 같은 부피의 0.06 N 아세트산(4℃)를 투입하였다. 0.06 N 아세트산의 최종 농도는 4 부피% 이다.Next, 10 X? -PGA was charged with the following volume of 0.06 N acetic acid (4 ° C). The final concentration of 0.06 N acetic acid is 4 vol%.

다음으로, 10 X γ-PGA /0.06 N Acetic acid 에 다음과 같은 부피의 1 X γ-PGA (4℃)를 투입하였다.Next, 1 X γ-PGA (4 ° C.) of the following volume was added to 10 × γ-PGA / 0.06 N acetic acid.

(첨가할 1 X γ-PGA 의 부피) = (최종부피) - (콜라겐 부피) - (10 X γ-PGA 의 부피) - (0.06N 아세트산의 부피)(Volume of 1 X? -PGA to be added) = (final volume) - (collagen volume) - (volume of 10 X? -PGA) - (volume of 0.06 N acetic acid)

= 1000 ㎕ - 800 ㎕ - 100 ㎕ - 40 ㎕ = 60 ㎕= 1000 μl - 800 μl - 100 μl - 40 μl = 60 μl

다음으로, 튜브 내 각 용액을 혼합한 후 얼음 위에 놓아 두었다.Next, each solution in the tube was mixed and placed on ice.

다음으로, 계산된 양인 800 ㎕ 의 콜라겐을 투입하고 거품이 생기지 않도록 주의하면서 혼합하였다.Next, 800 [micro] l of the calculated amount of collagen was added and mixed with caution to avoid foaming.

다음으로, pH는 7.0으로 맞추었다.Next, the pH was adjusted to 7.0.

다음으로, 물 100 g 에 sodium chloride 25 g, sodium hydroxide 2 g, di-sodium hydrogen phosphate dihydrate 4 g을 넣어 fibrillation buffer 를 마련하고, 여기에 콜라겐과 γ-PGA 를 혼합하여 제조한 혼합 용액을 웰플레이트(well plate)에 넣고, 37℃ 인큐베이터 내에서 1시간 동안 유지하여 겔화시켰다.Next, 25 g of sodium chloride, 2 g of sodium hydroxide and 4 g of di-sodium hydrogenphosphate dihydrate were added to 100 g of water to prepare a fibrillation buffer, and a mixed solution prepared by mixing collagen and γ-PGA was added to a well plate and the mixture was kept in a 37 ° C. incubator for 1 hour to gel.

이때 온도는 4℃ 이하와 진공을 유지하여 1~2시간 degassing 상태로 유지하였다.At this time, the temperature was maintained at 4 ° C or lower and the degassing state was maintained for 1 to 2 hours.

콜라겐은 1.5% 의 저장 용액의 형태를 사용하였고, γ-PGA는 10배의 저장용액 (stock solution)의 형태를 사용하였다.Collagen was used in the form of a 1.5% stock solution, and γ-PGA was used in the form of a 10-fold stock solution.

다음으로, 상기 cross linking solution {70% PBS(phosphate buffered saline, 인산완충식염수)와 30%의 에탄올 혼합용액}을 14일 동안 37℃ 배양기에서 반응 처리하여 γ-PGA를 가교시킴으로써 콜라겐 멤브레인을 제조하였다.Next, a collagen membrane was prepared by cross-linking the above-mentioned cross linking solution (phosphate buffered saline (PBS) and 30% ethanol solution) for 14 days in a 37 ° C incubator to crosslink γ-PGA .

다음으로, 상기 가교된 콜라겐 멤브레인을 30mm ⅹ 40mm 의 크기로 절취하여 90 % 에탄올로 dehydration 한 후 CO2 critical point drying 후 포장 및 ETO 멸균을 진행하였다.
Next, the cross-linked collagen membrane was cut into a size of 30 mm x 40 mm, dehydrated with 90% ethanol, and packaged and ETO sterilized after CO 2 critical point drying.

<돼지 유래 콜라겐 멤브레인의 표면 미세 구조 관찰><Observation of surface microstructure of collagen membrane derived from porcine>

제조된 돼지 유래 콜라겐 멤브레인의 표면을 주사전자현미경을 이용하여 관찰하였으며, 그 결과를 도 2에 나타내었다(도 2a 는 거친 표면, 도 2b 는 부드러운 표면).The surface of the prepared porcine collagen membrane was observed using a scanning electron microscope. The results are shown in Fig. 2 (Fig. 2A is a rough surface and Fig. 2B is a smooth surface).

도 2를 참조하면, 기공의 크기가 1㎛ 이하로 관찰되었으며, 일면은 표면이 거칠게 관찰되었는데, 거친 표면에는 세포가 용이하게 부착될 수 있을 것임을 유추할 수 있다.
Referring to FIG. 2, the pore size was observed to be 1 μm or less, and the surface was roughly observed. On the rough surface, the cells could easily be attached.

<콜라겐 종류에 따른 멤브레인의 인장강도, 신장률, 두께><Tensile strength, elongation, and thickness of membrane according to collagen type>

400 mm×400 mm×5 mm 크기의 알루미늄 판과, 12.5~250 ㎛ 까지 조절이 가능한 YOSHIMITSU 사의 YBA-7 applicator 와 0.1~10 mm 까지 조절이 가능한 SHEEN 사의 applicator를 사용하여 멤브레인을 제조하였다.Membranes were fabricated using an aluminum plate of 400 mm × 400 mm × 5 mm and a YBA-7 applicator of YOSHIMITSU, which can be adjusted from 12.5 to 250 μm, and an applicator of SHEEN, which is adjustable from 0.1 to 10 mm.

인장강도 및 신장률은, 플라스틱 필름 및 시트의 인장 시험방법(KS M 3054)에 의해 만들어진 멤브레인 시료 5개에 대하여 20~25℃, 상대습도 50±5%의 조건에서, 200N 로드셀(load cell)이 장착된 UTM(Shimadzu, Japan)기를 사용하여 측정하였다.The tensile strength and elongation were measured with a 200 N load cell under the conditions of 20 to 25 ° C and 50 ± 5% relative humidity for five membrane samples made by the tensile test method (KS M 3054) of plastic film and sheet And measured using a UTM (Shimadzu, Japan) machine equipped.

각 시편은 너비 20mm, 길이 200mm, grip 거리 10mm 이다. 시험 결과를 산술 평균한 값을 [표 1]에 나타내었다.Each specimen has a width of 20 mm, a length of 200 mm, and a grip distance of 10 mm. Table 1 shows the arithmetic mean of the test results.

시편의 두께는 0.25㎛ 정밀도를 지닌 다이알 캘리퍼스(Mitutoyo, Japan)를 사용하여 필름의 상단부, 중간부, 하단부에서 취해진 시편을 각각 5번 이상 측정한 후 평균값으로 나타내었다.The thickness of the specimen was measured by using a dial caliper (Mitutoyo, Japan) with a precision of 0.25 μm, and the specimens taken from the top, middle, and bottom portions of the film were measured five times or more, respectively.

아래 [표 1]에서 type이라 함은 분리 정제한 콜라겐의 종류로 구조와 분자량, 사이즈가 서로 다른 콜라겐을 의미한다. 또한 실시예 1에서 돼지 표피 콜라겐 type I, III는 두 가지 type이 공존하는 콜라겐이다.In Table 1 below, "type" refers to collagen that is separated and purified, and refers to collagen having different structure, molecular weight and size. Also, in Example 1, porcine epidermal collagen types I and III are collagen in which two types coexist.

Figure 112014047989129-pat00002
Figure 112014047989129-pat00002

[표 1]을 참조하면, 실시예 1 내지 실시예 4의 경우 모두 치과재료에 적합한 인장강도를 가지는 것을 확인할 수 있다. 특히, 실시예 4의 멤브레인이 인장강도가 가장 우수한데, 돼지 표피 콜라겐 보다 돼지 인대 콜라겐을 사용하는 경우 인장강도가 더 우수함을 확인할 수 있다.Referring to Table 1, it can be confirmed that all of Examples 1 to 4 have tensile strength suitable for dental materials. Particularly, the membrane of Example 4 has the best tensile strength. However, it can be confirmed that the tensile strength is superior to that of porcine epidermal collagen when pig ligament collagen is used.

치과재료에서 가장 중요한 것은 인장강도이며 인장강도만 확보되면 신장률과 두께는 문제가 되지 않으며, 신장률 3.1 MPa 과 두께 40㎛ 정도면 충분하다.
The most important thing in dental materials is tensile strength. Elongation rate and thickness are not a problem when tensile strength is secured, and an elongation of 3.1 MPa and a thickness of 40 탆 are sufficient.

< γ-PGA의 점도에 따른 멤브레인의 인장강도, 신장률 및 두께><Tensile Strength, Elongation and Thickness of Membrane According to Viscosity of γ-PGA>

γ-PGA의 점도를 15, 400, 1500cp(centipoise)로 변화시키고 이를 이용하여 제조한 멤브레인에 대하여 인장강도, 신장률, 두께를 측정하여, 그 결과를 [표 2]에 나타내었다.
The viscosity of γ-PGA was changed to 15, 400 and 1500 cp (centipoise), and tensile strength, elongation and thickness of the membrane were measured. The results are shown in Table 2.

Figure 112014047989129-pat00003
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[표 2]를 참조하면, γ-PGA의 점도가 높을수록 콜라겐 멤브레인의 인장강도가 증가하지만, 신장률은 400cp 인 실시예 6의 멤브레인이 가장 큰 값을 나타내고 있다.Referring to Table 2, although the tensile strength of the collagen membrane is increased as the viscosity of γ-PGA is increased, the membrane of Example 6 having the elongation of 400 cp exhibits the greatest value.

또한, 인장강도와 신장률은 두께에 의하여도 많은 영향을 받지만 두께가 두꺼워질수록 인장강도와 신장률의 변화폭은 두께의 변화폭만큼 비례하지 않았다.In addition, tensile strength and elongation were affected by thickness. However, as the thickness increased, the variation of tensile strength and elongation was not proportional to the variation of thickness.

또한, 멤브레인 제조 중 15 cp, 400 cp의 경우 제조가 용이하였으나 1500 cp의 경우에는 높은 점도 때문에 두께 조절이 어렵고 건조과정 중에 투명도가 떨어지는 점을 확인할 수 있었다.Also, it was confirmed that the preparation of 15 cp and 400 cp was easy during the production of the membrane, but the viscosity was difficult to control due to the high viscosity at 1500 cp and the transparency decreased during the drying process.

또한, 1500 cp의 경우 멤브레인의 인장강도가 크지만, 400 cp 의 경우와 비교하여 별 차이가 없었으며, 신장률 측면에서는 400cp 의 경우 1500cp의 경우보다 오히려 더 큰 값을 나타내고 있다.In case of 1500 cp, the tensile strength of the membrane was larger than that of 400 cp. In terms of elongation, 400 cp showed a larger value than that of 1500 cp.

이러한 점으로부터, 콜라겐 멤브레인 제조시에 400cp를 갖는 γ-PGA를 이용하는 것이 효율적임을 확인할 수 있다.
From this point, it can be confirmed that it is efficient to use γ-PGA having 400 cp in the production of the collagen membrane.

< γ-PGA 의 함량에 따른 멤브레인의 인장강도 및 신장률><Tensile Strength and Elongation of Membrane According to γ-PGA Content>

γ-PGA 콜라겐 멤브레인의 제조에 사용된 콜라겐은 돼지 인대 콜라겐 (type I, 제조: 한국 한양대학교), γ-PGA는 점도 400cp를 이용하였다.The collagen used in the preparation of the γ-PGA collagen membrane was porcine ligament collagen (type I, manufactured by Hanyang University, Korea), and the viscosity of γ-PGA was 400 cp.

실험방법은 플라스틱 필름 및 시트의 인장 시험방법(KS M 3054)에 의해 인장강도와 신장률을 측정하였다. 각 시험시료에 따른 인장강도 및 신장률은 아래 [표 3]에 나타내었다.
The tensile strength and elongation were measured by tensile test method (KS M 3054) of plastic film and sheet. The tensile strength and elongation according to each test sample are shown in Table 3 below.

Figure 112014047989129-pat00004
Figure 112014047989129-pat00004

[표 3]을 참조하면, γ-PGA 의 함량이 증가함에 따라 멤브레인의 인장강도는 감소하는 경향을 보임을 확인할 수 있다.Referring to Table 3, it can be seen that the tensile strength of the membrane tends to decrease as the content of γ-PGA increases.

멤브레인의 신장률도, γ-PGA 의 함량이 증가함에 따라 감소하다가 γ-PGA 의 함량이 10 중량%인 경우부터 다시 증가하여 15 중량%에서 최대값을 나타낸 후 다시 감소하는 경향을 보임을 확인할 수 있다.The elongation percentage of the membrane also decreases with increasing γ-PGA content, and then increases again after 10% by weight of γ-PGA content, indicating a maximum value at 15% by weight, and then decreases again .

콜라겐에 γ-PGA를 10 내지 25 중량% 혼합한 경우 신장률 면에서 비교적 우수하고, 특히, 콜라겐에 γ-PGA를 15 부피% 혼합한 경우 콜라겐을 단독으로 사용한 경우보다도 신장률이 더 큼을 확인할 수 있다.
It is confirmed that when 10% to 25% by weight of γ-PGA is added to collagen, the elongation is relatively good. In particular, when 15% by volume of γ-PGA is added to collagen, the elongation is higher than that when collagen alone is used.

<멤브레인의 구강 내 생체분해>&Lt; Biodegradation in the oral cavity of the membrane &

상기 시료 10의 멤브레인(콜라겐 70 중량%, γ-PGA 30 중량%)에 대하여 구강 내에서의 분해를 살펴보기 위하여, 상기 시료 10의 멤브레인을 인공 타액에 침지시켰다.To examine decomposition in the oral cavity of the membrane of the sample 10 (70% by weight of collagen and 30% by weight of? -PGA), the membrane of the sample 10 was immersed in artificial saliva.

인공 타액으로는 수산화인산칼슘(calcium phosphate-tribasic, Sigma, USA)이 50% 포화된 0.1M lactic acid 와 Carbopol 0.2% (#907, BF Goodrich, USA)를 함유하고 pH 4.0으로 조정한 용액을 사용하였다.As the artificial saliva, calcium phosphate-tribasic (Sigma, USA) solution containing 0.1% lactic acid saturated with 50% and Carbopol 0.2% (# 907, BF Goodrich, USA) Respectively.

실험 전과 실험 시작 후 20초마다 멤브레인의 변화를 주사전자현미경(Scanning Electronic Microscope)으로 촬영하여 그 결과를 도 3 에 각각 나타내었다.Before and after the experiment, the change of the membrane was taken every 20 seconds by a scanning electron microscope, and the results are shown in FIG.

도 3a 는 실험 전 사진이고, 도 3b 내지 도 3h 는 실험 시작 후 20초 마다 순차적으로 나타낸 사진이다.3A is a photograph before the experiment, and FIGS. 3B through 3H are photographs sequentially displayed every 20 seconds after the start of the experiment.

도 3b 내지 도 3h 를 참조하면, 용해 전 멤브레인은 치밀한 조직을 가지고 있었으나, 40초가 경과하면서 기공이 형성되기 시작하였고, 그 이후 시간이 지남에 따라 조직이 서서히 분해되는 것을 확인할 수 있었다.
Referring to FIGS. 3B to 3H, it was confirmed that the membrane had a dense structure before the dissolution, but the pores started to form after 40 seconds elapsed, and the structure gradually decomposed with time.

<멤브레인의 생분해도><Biodegradability of Membrane>

시료 4, 7, 9 및 14 의 멤브레인에 대하여 호기성 퇴비화 조건에서 생분해도를 확인하기 위하여 KS M 3100-1:2003(퇴비-퇴비화 조건에서 플라스틱의 호기성 생분해도 및 붕괴도 측정 - 제1부: 적정에 의한 발생 이산화탄소의 정량법)을 적용하여 호기성 퇴비화 과정에서 발생하는 이산화탄소의 발생량을 측정하였다.To determine the degree of biodegradability under aerobic composting conditions for the membranes of Samples 4, 7, 9 and 14 KS M 3100-1: 2003 (Determination of aerobic biodegradability and disintegration of plastics under composting - composting conditions - Part 1: The amount of carbon dioxide generated in the aerobic composting process was measured by applying the method of determination of carbon dioxide generated by the aerobic composting process.

각 시험병에서 발생된 누적이산화탄소의 발생량 및 누적생분해도를 표 4에 나타내었다. 누적이산화탄소 발생량과 누적생분해도는 다음과 같이 계산하였다.
The amount of cumulative carbon dioxide generated in each test bottle and the cumulative biodegradability are shown in Table 4. Cumulative carbon dioxide production and cumulative biodegradability were calculated as follows.

(1) 누적이산화탄소 발생량(ThCO2) = MTOT × CTOT × (44/12)(1) Cumulative amount of generated carbon dioxide (ThCO 2 ) = M TOT × C TOT × (44/12)

여기서, MTOT 는 시험 시작 시 퇴비에 첨가된 시료 중 총 건조 고형분의 양(g), CTOT 는 시료의 총 건조 고형분에 포함된 유기탄소의 비율(g/g), 44 는 이산화탄소의 분자량, 12 는 탄소의 원자량이다.
Where M TOT is the amount of total dry solids (g) in the sample added to the compost at the start of the test, C TOT is the ratio (g / g) of the organic carbon contained in the total dry solids of the sample, 44 is the molecular weight of carbon dioxide, 12 is the atomic weight of carbon.

(2) 누적생분해도(DT) = {((CO2)T - (CO2)B)/ThCO2 } × 100.(2) Cumulative biodegradability (D T ) = {((CO 2 ) T - (CO 2 ) B ) / ThCO 2 } × 100.

여기서, (CO2)T 는 시료가 담긴 퇴비화 용기로부터 발생한 이산화탄소의 누적량(g), (CO2)B 는 접종원 용기로부터 발생하는 이산화탄소 누적량의 평균(g), ThCO2 는 용기 속 시료에 의해 발생하는 이론적 이산화탄소의 양(g)이다.
Here, (CO 2) T is a cumulative amount of carbon dioxide generated from the composting vessel the sample is contained (g), (CO 2) B is the mean (g) of carbon accumulation resulting from the inoculum vessels, ThCO 2 is generated by a container in the sample (G) of the theoretical carbon dioxide.

Figure 112014047989129-pat00005
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비교예 3은 소 인대 콜라겐 (type I, 제조사-Devro사, 호주)를 사용한 흡수성 멤브레인 제품을 사용한 경우이다. 이산화탄소 발생량은 퇴비화 용기 내의 미생물에 의한 고분자 물질의 생분해도의 척도가 되는데, 이산화탄소 발생량과 생분해율이 작은 것이 우수한 것이다.Comparative Example 3 is a case where an absorbent membrane product using a small ligament collagen (type I, manufacturer: Devro Co., Australia) was used. The amount of carbon dioxide generated is a measure of the degree of biodegradation of the polymer substance by the microorganisms in the composting vessel, and it is excellent that the amount of generated carbon dioxide and the biodegradation rate are small.

[표 4]를 참조하면 실시예 10(시료 4)의 생분해도가 가장 낮고, 실시예 20(시료 14)의 생분해도가 가장 높은 것으로 나타났다.
Referring to Table 4, the biodegradability of Example 10 (Sample 4) was the lowest and that of Example 20 (Sample 14) was the highest.

<인 비보(in vivo) 테스트>&Lt; In Vivo Test >

쥐의 등에 실시예 13의 멤브레인을 이식한 후 3개월, 6개월 후에 관찰하였으며, 그 결과를 도 4에 나타내었다(a: 이식 직후, b: 이식 후 3개월 후, c: 이식 후 6개월 후).The results are shown in FIG. 4 (a: Immediately after the implantation, b: 3 months after the implantation, c: 6 months after the implantation, and 3 months and 6 months after the implantation of the membrane of Example 13) ).

도 4를 참조하면, 3개월이 경과된 후에는 이식한 멤브레인이 주변 조직에 흡수되어 그 형태를 유지하지 못하고 작아진 상태였으며, 6개월 경과 후에는 거의 전부 흡수된 것을 확인할 수 있었다.
Referring to FIG. 4, after 3 months, the transplanted membrane was absorbed into the surrounding tissues and could not maintain its shape, and was small. After 6 months, almost all of the membrane was absorbed.

본 발명은 상술한 실시 형태 및 첨부된 도면에 의해 한정되는 것이 아니며, 첨부된 청구범위에 의해 한정하고자 한다. 따라서, 청구범위에 기재된 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 당 기술분야의 통상의 지식을 가진 자에 의해 다양한 형태의 치환, 변형 및 변경이 가능할 것이며, 이 또한 본 발명의 범위에 속한다고 할 것이다.The present invention is not limited by the above-described embodiments and the accompanying drawings, but is intended to be limited only by the appended claims. It will be apparent to those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. something to do.

Claims (11)

γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)과 콜라겐을 포함하며,
상기 γ-PGA와 상기 콜라겐은, 상기 γ-PGA와 상기 콜라겐을, 물 100 중량부에 대하여 sodium chloride 20~30 중량부, sodium hydroxide 1~2 중량부, di-sodium hydrogen phosphate dihydrate 3~5 중량부를 갖는 fibrillation buffer에 혼합하여, 유기용매 및 합성화합물을 사용하지 않고 미리 설정된 온도에서 상기 γ-PGA와 상기 콜라겐을 가교 결합시킨 가교 구조를 가지는 것을 특징으로 하는 흡수성 콜라겐 멤브레인.gamma-PGA (Poly-gamma-Glutamic Acid) and collagen,
The γ-PGA and the collagen may be prepared by mixing 20 to 30 parts by weight of sodium chloride, 1 to 2 parts by weight of sodium hydroxide, 3 to 5 parts by weight of di-sodium hydrogen phosphate dihydrate And a cross-linking structure in which the? -PGA and the collagen are cross-linked at a preset temperature without using an organic solvent and a synthetic compound. 삭제delete 삭제delete 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 콜라겐은 돼지 유래 콜라겐을 포함하는 것을 특징으로 하는 흡수성 콜라겐 멤브레인.The method according to claim 1,
Wherein said collagen comprises swine-derived collagen. 제1항에 있어서,
상기 콜라겐은 돼지 인대 유래 콜라겐을 포함하는 것을 특징으로 하는 흡수성 콜라겐 멤브레인.The method according to claim 1,
Wherein said collagen comprises a porcine ligament-derived collagen. 인간의 콜라겐을 제외한 콜라겐을 마련하는 단계;
상기 콜라겐에 γ-PGA(Poly-gamma-Glutamic Acid, 폴리감마글루탐산)을 혼합하는 단계; 및
상기 γ-PGA와 상기 콜라겐을 가교시키는 단계를 포함하며,
상기 콜라겐에 γ-PGA을 혼합하는 단계는, 상기 γ-PGA와 상기 콜라겐을, 물 100 중량부에 대하여 sodium chloride 20~30 중량부, sodium hydroxide 1~2 중량부, di-sodium hydrogen phosphate dihydrate 3~5 중량부를 갖는 fibrillation buffer에 혼합하는 단계를 포함하며,
상기 γ-PGA와 상기 콜라겐을 가교시키는 단계는, 유기용매 및 합성화합물을 사용하지 않고 미리 설정된 온도에서 가교하는 비화학적 가교(non-chemical cross linking) 방법을 이용하는 것을 특징으로 하는 흡수성 콜라겐 멤브레인의 제조방법.Preparing collagen excluding human collagen;
Mixing the collagen with? -PGA (poly-gamma-glutamic acid); And
Crosslinking the? -PGA and the collagen,
The step of mixing? -PGA with the? -PGA is carried out by mixing 20 to 30 parts by weight of sodium chloride, 1 to 2 parts by weight of sodium hydroxide, 1 to 2 parts by weight of di-sodium hydrogen phosphate dihydrate 3 To 5 parts by weight of a fibrillation buffer,
Wherein the step of crosslinking the? -PGA and the collagen comprises using a non-chemical cross linking method of crosslinking at a preset temperature without using an organic solvent and a synthetic compound. Way. 제7항에 있어서,
상기 콜라겐으로는 돼지 유래 콜라겐을 사용하는 것을 특징으로 하는 흡수성 콜라겐 멤브레인의 제조방법.8. The method of claim 7,
And a collagen derived from pigs is used as the collagen. 삭제delete 삭제delete 삭제delete
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