KR101615186B1

KR101615186B1 - 결핵 백신의 면역효과 증강용 조성물 및 면역효과 증진 방법

Info

Publication number: KR101615186B1
Application number: KR1020140027341A
Authority: KR
Inventors: 신성재; 김종석; 김우식; 조상래
Original assignee: 연세대학교 산학협력단
Priority date: 2014-03-07
Filing date: 2014-03-07
Publication date: 2016-04-25
Also published as: KR20150105108A

Abstract

본 발명은 결핵 백신의 효율을 올려주기 위한 면역효과 증강용 조성물 및 결핵 면역화 전처리 방법에 관한 것으로, 본 발명에 의하는 경우 결핵 백신의 사용에 따른 면역효과를 증가시킬 수 있고, BCG를 포함하여 다양한 백신에 적용될 수 있어 제약 산업의 발전에 큰 영향을 미칠 수 있다.

Description

결핵 백신의 면역효과 증강용 조성물 및 면역효과 증진 방법{COMPOSITION FOR ENHANCING PROTECTIVE EFFICATY OF VACCINE AGAINST TUBERCULOSIS AND THE METHOD THEREOF}

본 발명은 결핵 백신의 효율을 올려주기 위한 면역효과 증강용 조성물 및 결핵 면역화 전처리 방법에 관한 것이다.

결핵은 마이코박테리움 튜버큘로시스(Mycobacerium tuberculosis)에 유발되며 결핵은 WHO에서 정한 3대 감염질환 중 특히 국내의 경제적 수준과 국가적 위상에 비하여 높은 발병율과 사망률을 나타내고 있다. 전 세계적으로 약 6천만명의 활동성 결핵환자가 있으며 매년 5천만 내지는 1억여명이 결핵에 감염되는 것으로 추정됨. 적어도 매년 900만명의 결핵신환자가 발병하며 150만 명 이상이 결핵으로 사망하다. 결핵 발병율 (incidence rate)은 인구 10만명 당 146명, 결핵사망율은 49명으로 단일 감염병중에서 가장 많은 사망원인을 차지하고 있어서 현재에도 세계적으로 심각한 보건 문제로 남아 있다. 최근에는 약제내성을 나타내는 난치결핵환자의 증가와 HIV 감염증가로 인해 발병 양상은 더욱 심각해지는 추세이다. 현재 HIV감염자의 약 50%인 1,500만 여명이 결핵균에 동시에 감염되어 있으며, 결핵균이 HIV 증식을 촉진하여 다른 기회 감염균보다 life expectancy를 2분의 1로 단축시켜, HIV감염자에게는 더욱 위협이 되고 있음. 또한 HIV 양성 결핵환자의 경우 결핵에 의한 사망률이 3배 이상 높고 치료 효과는 2배 정도 낮음이 보고되었다. 우리나라의 결핵균 감염률은 약 40%로 약 2천만명이 결핵균에 감염되었을 것으로 추정되고 있다. 이 가운데 약 10%인 200만 명은 일생에 한번은 결핵환자가 될 것으로 예상된다. 우리나라에서 전염병으로 사망하는 사람의 60%가량이 결핵으로 그 심각성을 유추할 수 있으며 따라서 21세기 국가보건 및 복지에 심각한 문제로 대두되고 있음. 특히, 우리나라의 결핵발생률 및 사망률은 1995년 이후 OECD 가입 국가 중 1위을 차지하고 있다.

현재, 결핵은 주로 마이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis)의 비독성 균주인 바실러스 칼메트-구에린(BCG: Bacillus Calmette-Guerin)의 생 세균을 이용하여 예방하고 있다. 그러나, BCG의 효능에 대한 끊임없는 논란이 야기 되고 있으며 나라, 지역, 인종에 따라서 효능에 큰 차이를 나타내고 있다. 또한 미국을 포함하여 몇몇 국가는 BCG의 효능 문제로 사용을 금지하고 있다. 현재까지 BCG를 대체할 보다 안전하고 효과가 우수한 새로운 예방 백신의 개발은 전무한 상태이다. 따라서 결핵을 예방할 수 있는 하나의 방법으로 현재 사용 중인 BCG 백신의 효능을 올려주는 방법이 가장 적합하다.

과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1)는 Ly-6G와 Ly-6C가 합쳐진 형태로 존재 하며, 주로 골수성세포(myeloid cell)의 분화에 관련된 역할을 한다. Ly-6C는 단핵구, 큰포식세포, 혈관내피세포의 분화에 관여하며 인터페론 감마(interferon gamma)에 의해 조절된다. 특히, Ly-6C는 골수유래세포(bone-marrow cells), 단핵구, 큰포식세포, 호중구, 혈관내피세포, 및 특정 T 세포 등 다양한 세포에서 발현된다.

이에, 본 발명자는 BCG를 백신을 접종하였을 때, 높은 수준의 Gr-1을 발현하는 호중구(Neutrophils)를 포함하여 Gr-1을 발현하는 세포를 제거 시킴으로서 BCG 백신의 결핵 예방 효능을 높이는 방법을 개발하고자 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 BCG 백신에 Gr-1을 발현하는 호중구를 포함하여 Gr-1을 발현하는 세포를 제거하는 면역학적 개입(intervention)을 함으로써 결핵 예방용 BCG 백신의 효능을 높이는 방법을 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해서, 본 발명에서는 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제를 포함하는, 결핵 백신의 면역효과 증강용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명에서는 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제를 포함하는, 결핵 면역화 전처리용 조성물을 제공한다.

또한 본 발명에서는 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 결핵 면역화 전처리 방법을 제공한다.

또한 본 발명에서는 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제를 개체에 투여하는 단계; 및 마이코박테리움 보비스 BCG(Mycobacterium bovis BCG) 백신균주를 포함하는 백신용 조성물을 상기 개체에 투여하는 단계;를 포함하는 결핵 예방 효과 향상 방법을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은, 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제를 포함하는, 결핵 백신의 면역효과 증강용 조성물에 관한 것이다.

또한 본 발명은 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제를 포함하는, 결핵 면역화 전처리용 조성물에 관한 것이다.

상기 결핵 백신의 면역효과 증강용 조성물은 결핵의 예방을 위한 백신 조성물의 백신 효과를 높이기 위해서 사용되는 보조제(ajuvant) 일 수 있다. 본 발명의 면역효과 증강용 조성물을 이용하는 경우, 결핵예방을 위한 BCG 균주의 접종에 의한 면역효과를 향상시킬 수 있음을 확인하였다.

상기 결핵 예방 백신은 바람직하게는 BCG 균주의 접종에 의한 BCG 백신 일 수 있다.

상기 과립구 수용체(Gr-1)는 Ly-6G와 Ly-6C가 합쳐진 형태로 존재 하며, 골수성세포(myeloid cell)의 분화에 관련된 역할을 한다.

상기 Gr-1의 발현 세포의 제거제는 상기 Gr-1을 발현하는 세포를 제거할 수 있는 것은 모두 포함하는 것으로, 세포에서 Gr-1의 발현을 억제하는 억제제 일 수 있다. 바람직하게는 과립구 수용체 중 Ly-6G의 발현을 억제하는 억제제 또는 Ly-6G을 발현하는 세포를 제거하는 제거제 일 수 있다. 상기 Ly-6G는 일종의 GPI-anchored 단백질로, 이러한 Ly-6G는 호중구 뿐만 아니라, 호산구(eosinophils), 분화중인 단핵구(differentiation monocyte) 또는 혈장모양의 수지상 세포 (plasmacytoid dendritic cells) 등에도 발현하므로, 과립구 수용체 중 Ly-6G를 단일클론항체로 억제할 경우 Ly-6C를 억제하는 억제제 항체 보다 선택적으로 호중구를 억제할 수 있다.

상기 억제제 또는 제거제는 바람직하게는 항-Gr-1(클론 RB6-8C5) 항체, 항-Ly-6G(클론 1A8) 항체 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 일 수 있다.

상기 Gr-1 발현세포 제거제는 항-Gr-1(클론 RB6-8C5) 항체를 가장 바람직하게 사용할 수 있고, 상기 항체를 사용하는 경우 더욱 특이적으로 Gr-1을 발현하는 호중구를 제거할 수 있어, 결핵예방 조성물의 효과를 더욱 증진시킬 수 있다.

상기 Gr-1 발현 세포는 과립구 수용체를 발현하는 세포를 의미하는 것으로, 바람직하게는 호중구(Neutrophils 호산구 (eosinophils), 분화중인 단핵구(monocyte), 혈장모양의 수지상세포(plasmacytoid dendritic cells) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 일 수 있다.

BCG를 피하 백신 접종 하였을 경우 호중구가 가장 빠르게 반응하며 림프절(draining lymph nodes)로 이동시키는 역할과 호중구(Neutrophils)는 세포표면에 높은 수준의 Gr-1을 발현하고 있음을 확인 하고, 감염 초기 육아종 형성에서 적어도 큰포식세포와 T cell의 활성화에는 부정적인 역할을 함으로써 결핵균의 사멸을 억제하는 것을 확인하여, BCG 백신 접종 시에 일시적으로 호중구(Neutrophils)를 생체 내에서 제거하는 방법을 통해 결핵 예방을 위한 BCG의 백신의 면역효과를 향상 시킬 수 있다. 구체적으로 가장 빠르게 반응하는 면역세포인 호중구(Neutrophils)를 포함하여 Gr-1을 발현하는 세포를 제거함으로써 BCG의 생존율을 높이고 호중구(Neutrophils) 등에 의한 큰포식세포의 불활성화와 T 세포의 기억화 억제를 막을 수 있어, 백신 접종에 의한 예방효과를 향상시킬 수 있다.

상기 결핵 면역화 전처리용 조성물이란, 결핵 예방용 조성물을 개체에 투여하기 전에, 먼저 투여하는 전처리용 조성물을 의미하는 것으로, 상기 전처리용 조성물을 사용하는 경우 결핵 예방을 위한 BCG의 백신의 면역효과를 향상 시킬 수 있다.

상기 결핵 백신의 면역효과 증강용 조성물 또는 결핵 면역화 전처리용 조성물은 상기 유효성분인 Gr-1 발현 세포의 제거제를 단독으로 포함하거나 상기 면역효과 증강 또는 면역화 전처리에 효과가 있는 물질을 유효성분으로 더욱 포함할 수 있고, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 추가성분 즉, 약제학적으로 허용되거나 영양학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다.

보다 상세하게는 상기 유효성분 외에 추가로 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다. 또한, 상기 담체, 부형제 또는 희석제는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자이리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아키시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀루로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1이상 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다. 상기 성분들은 상기 유효성분 즉, Gr-1 발현 세포 제거제에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.

상기 조성물 총 중량에 대하여 상기 유효성분, 구체적으로 상기 Gr-1 발현세포 제거제를 0.001 중량% 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 99 중량%, 더욱 바람직하게는 1중량% 내지 50 중량% 포함할 수 있다. 또한, 상기 추가성분의 함량은 바람직하게는 상기 면역효과 증강용 조성물 또는 결핵 면역화 전처리용 조성물 각각의 총 중량에 대하여 0.1 중량% 내지 20 중량% 범위에서 추가할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

또한, 상기 조성물을 약제화하는 경우, 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 더욱 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구 모두 사용 할 수 있다.

본 발명에 따른 조성물의 투여량은, 투여방법, 복용자의 연령, 성별 및 체중, 및 질환의 중증도 등을 고려하여 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 일 예로, 본 발명의 면역증강용 조성물 또는 결핵 전처리용 조성물은 상기 유효성분을 기준으로 할 때, 0.0001 mg/kg 내지 1000 mg/kg으로, 보다 효과적이기 위해서는 0.01 mg/kg 내지 100 mg/kg, 더더욱 효과적으로는 30 mg/kg 내지 50 mg/kg으로 투여할 수 있다.

또한 본 발명은 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제를 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 결핵 면역화 전처리 방법에 관한 것이다.

또한 본 발명은 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제를 개체에 투여하는 단계; 및 마이코박테리움 보비스 BCG(Mycobacterium bovis BCG) 백신균주를 포함하는 백신용 조성물을 상기 개체에 투여하는 단계;를 포함하는 결핵 예방 효과 향상 방법에 관한 것이다.

상기 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제를 개체에 투여하는 경우, 결핵 예방을 위한 BCG의 백신의 면역효과를 향상 시킬 수 있는 효과가 있다.

상기 발명은 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제를 개체에 투여하는 단계는 결핵 예방용 조성물을 투여하기 전에 수행하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 결핵 예방용 조성물의 투여 전에 1일과 상기 결핵 예방용 조성물 투여 후 1일에 각각 수행하여 2회 투여할 수 있다. 상기와 같이 Gr-1 발현 세포의 제거제를 투여하는 경우 결핵 예방용 조성물의 면역효과를 향상시키는 효과가 있다.

상기 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제의 투여량 투여되는 개체의 몸무게 및 투여방법에 따라서 조절될 수 있고, 일 예로 마우스에 투여하는 경우 마우스 한 마리당 200-250 ㎍/mouse로 투여될 수 있다.

상기 개체는 인간을 포함한 포유동물을 모두 포함하는 것이고, 바람직하게는 인간을 제외한 포유동물일 수 있다.

상기 과립구 수용체(graulocyte receptor, Gr-1) 발현 세포의 제거제는 호흡기를 통한 투여 또는 복강 내 주사를 통하여 투여할 수 있고, 바람직하게는 정맥 내 주사하는 방법으로 수행할 수 있다. 상기 제거제를 정맥 내 주사하는 경우 복강 내 주사 용량의 반 정도를 투여하여도 효과적으로 Gr-1을 발현하는 세포를 제거할 수 있어, 더욱 효과적이다.

본 발명은 결핵 백신의 면역효과 증강용 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 의하는 경우 결핵 백신의 사용에 따른 면역효과를 증가시킬 수 있고, BCG를 포함하여 다양한 백신에 적용될 수 있어 제약 산업의 발전에 큰 영향을 미칠 수 있다.

도1은 예방 접종과 감염 실험에 대한 과정을 간략하게 나타낸 모식도이다.
도 2는 결핵균 Erdman(Mycobacterium tuberculosis Erdman) 균주를 호흡기를 통하여 공격 접종 후, 감염 8주 째 폐 조직에서 살아있는 결핵균의 숫자를 카운팅하여 백신의 효능을 비교 평가한 결과를 나타내는 도이다. 그래프의 세로축은 폐의 결핵균의 수(CFU/Lung)를 나타내고, 그래프의 가로축은 각각 공격접종만 한 실험군(infection), BCG로 예방접종 한 실험군(BCG), BCG와 GR-1 포함하는 조성물로 처리한 후 공격접종 한 실험군(BCG+GR-1), BCG와 isotype 항체를 포함하는 조성물로 처리한 후 공격접종 한 실험군(BCG+isotype Ab)을 나타낸다.
도 3은 결핵균 Erdman(Mycobacterium tuberculosis Erdman) 균주를 호흡기를 통하여 공격 접종 후, 감염 8주 째 비장 조직에서 살아있는 결핵균의 숫자를 카운팅하여 백신의 효능을 비교 평가한 결과이다. 그래프의 세로축은 비장의 결핵균의 수(CFU/Lung)를 나타내고, 그래프의 가로축은 각각 공격접종만 한 실험군(infection), BCG로 예방접종 한 실험군(BCG), BCG와 GR-1 포함하는 조성물로 처리한 후 공격접종 한 실험군(BCG+GR-1), BCG와 isotype 항체를 포함하는 조성물로 처리한 후 공격접종 한 실험군(BCG+isotype Ab)을 나타낸다.
도 4는 결핵균 Erdman(Mycobacterium tuberculosis Erdman) 균주로 호흡기 감염 시키고 8주째, 폐 조직의 조직병리학적 분석 결과를 나타낸 것이다. 막대바는 1.0 mm를 의미하고, 배율은 20배에서 관찰한 것이다.

이하, 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다.

[실시예 1] 마우스 준비, 결핵균 및 BCG 배양, 면역화 및 예방백신의 효능 평가

1-1. 마우스

마우스 생후 5 내지 6주된 특이적 병원체가 없는 암컷 C57BL/6 마우스를 Japan SLC사(Shijuoka, Japan)로부터 구입하여, 연세대학교 의학 연구 센터 내의 BL-3 바이오해저드 애닐멀 룸의 제한 공간에서 사육하였다. 마우스에게는 멸균된 판매용 마우스 먹이와 물을 임의적으로 제공하였다.

1-2. 결핵균 및 BCG 배양

마이코박테리움 튜베르쿨로시스 Erdman(M. tuberculosis Erdman) 균주와 마이코박테리움 보비스 BCG str. Pastuer 1173P2(M. bovis BCG str. Pastuer 1173P2)는 각각 7H9-OADC 브로스(broth)에서 15일간 배양하였다. 배양된 균주들을 수집한 후, 6mm 글래스 비드로 부드럽게 볼텍싱하면서 파쇄하였다. 응집물이 가라앉은 다음 상청액을 수거하였고, 각각 나누어 -70 ℃에 보관하였다. 해동 후, 살아있는 박테리아를 Middlebrook 7H11 아가(Difco, Detroit, MI, USA)에서 단계적 희석 평판 배양하여 카운팅하였다. 마우스에 Erdman 균주를 접종하기 위해, 박테리아 현탁액을 음파조(sonic bath)에서 가볍게 음파처리하고, pH 7.2의 인산완충식염수(phosphate buffered saline, PBS)로 희석시켜서 원하는 수의 박테리아로 조절하여 사용하였다.

1-3. 랫트 항-단클론 Ly-6G 항체 및 control isotype 항체 확보

호중구(호중구(Neutrophils))은 일반적으로 혈액, 조직에서 다른 세포에 비하여 높은 수준의 Gr-1을 발현하고 있다. 호중구(Neutrophils)를 포함하여 Gr-1을 발현하는 세포를 제거(depletion)하기 위해서 랫트 항-단클론 Ly-6G(Rat anti-monoclonal Ly-6G, Clone RB6-8C5) 항체와 대조군 항체인 랫트(Rat) IgG2b 아이소타입 항체를 BioXcell(Vwst Lebanon, NH, USA)사에서 구입하여 사용하였다.

실험 전, 마우스에 항-단클론 Ly-6G 항체를 복강 내로 200-250 ㎍/mouse로 1회 또는 하루 뒤 한번 더 총 2회 투여하고, 조직과 혈액 내 호중구를 살펴본 결과, 조직과 혈액 내에서 호중구(Neutrophils)가 제거(depletion) 되는 것을 확인할 수 있다.

1-4. 통계분석

통계적 유의성은 표준 one-way ANOVA를 실시한 후, Tukey＇s multiple comparison test 또는 Dunnett＇s multiple comparison test를 이용하여 분석하였다. 통계 프로그램은 GraphPad Prism version 5.00(GraphPad Software, San Diego, CA)을 이용하였다. p 값이 0.05 미만일 때, 통계적으로 유의성이 있다고 인정하였다.

[실시예 2] 면역화

본 발명에서는 총 4 그룹을 대상으로 실험하였다. 각 그룹은 6-8마리의 마우스를 포함하였다. 1번 그룹은 감염(도전 접종)만 시킨 실험군, 2번 그룹은 BCG로만 면역한 실험군, 3번 그룹은 BCG 면역화 하루 전, 후에 각각 250 ㎍의 항-단클론 Ly-6G 항체를 복강 내로 투여한 실험군, 4번 그룹은 BCG 면역화 하루 전, 후에 각각 250 ㎍의 대조 아이소타입(control isotype) 항체를 복강 내로 투여한 실험군 이다.

상기 항체는 제조사의 지침서에 따라서 멸균 PBS에 녹인 후, -80℃에서 보관하여 사용하였다. 면역화 실험군(2, 3 및 4 그룹)은, BCG Pasteur 1173P2(2 × 10⁵ CFU/mouse) 균주를 피하로 투여하였다(도 1).

[실시예 3] 면역효과 확인

3.1. 결핵균의 공기감염 및 장기 내 잔류 박테리아수의 카운팅

결핵균 감염에 대한 예방 효과가 있는 혼합 백신으로 면역화 된 마우스에서 박테리아 수의 감소를 조사하였다. 상기 상술한 바와 같이 마우스를 면역화 시킨 후, 6주째에 병원성이 높은 결핵균 Erdman 균주를 Glas-Col inhalation device(Terre Haute, IN) 감염 장치에 마우스당 200-250개의 결핵균이 들어가도록 흡입시켜 감염시켰다. 감염 후, 8주째, 각 그룹의 마우스에서 폐 조직을 적출하고 박테리아의 수를 확인하였다. 비장 조직에 대해서도 동일한 방법으로 박테리아의 수를 확인하였다.

구체적으로, 폐 및 비장 각각의 조직에서 살아있는 박테리아 수를 Middlebrook 7H11 아가상에서 전체 기관 균질현탁액을 5배씩 순차적으로 희석하여 플레이팅하는 방법으로 확인하였다. 37 ℃에서 3-4주간 배양한 후 콜로니를 카운팅하였고, 결과는 전체 폐 조직 당 평균 log10 CFU±표준편차로 계산하여, 도 2 및 도 3에 나타내었다.

도 2에 나타낸 바와 같이, 면역과 함께 항-단클론Ly-6G 항체를 복강 내로 200-250 ㎍/mouse로 총 2회 투여한 제 3 그룹(BCG + Gr-1)은 BCG 면역화 한 제2 그룹(BCG)에 비하여 폐 조직에서 살아 있는 결핵균의 수가 현저하게 감소되었다(p < 0.001).

또한, 도 3에 나타낸 바와 같이, 비장 조직에서도 폐 조직과 유사하게 항-단클론 Ly-6G 항체를 복강 내로 200-250 ㎍/mouse로 총 2회 투여한 제 3 그룹(BCG + Gr-1)은 BCG 면역화 한 제2 그룹(BCG)에 비하여 결핵균이 적게 존재하는 것을 확인 하였다(p < 0.005).

따라서 BCG 백신 접종하기 전에, Gr-1을 발현하는 호중구(Neutrophils) 등의 면역세포를 제거하면 BCG 백신의 결핵 방어효능을 월등히 향상시킬 수 있음을 확인하였다.

3-2. 조직병리학적 분석

결핵균 Erdman 균주를 Glas-Col inhalation device(Terre Haute, IN) 감염 장치를 이용하여 결핵균의 일반적 감염루트인 호흡기로 마우스 한 마리당 200-250개의 결핵균이 들어가도록 감염 시키고, 8주째에 감염된 마우스의 폐 조직을 10% 중화 포르말린(neutral-buffered formalin)에 보존시킨 후, 파라핀 블록(paraffin block)에 고정시켰다. 고정된 조직을 4-5mm의 두께로 섹션을 만들고 헤마톡시린과 에오신(hematoxylin and eosin, H&E)으로 염색하였다. 상기 염색결과를 도 4에 나타내었다.

도 4에 나타낸 바와 같이, BCG 면역과 함께 항-단클론 Ly-6G 항체를 복강 내로 200-250 ㎍/mouse로 총 2회 투여하여 호중구(Neutrophils)를 제거한 제 3 그룹은 제 1 그룹(감염 대조군)과 BCG 면역화 한 제 2 그룹에 비하여 면역세포의 유입과 염증이 나타나는 병변이 적어 결핵의 방어에 효과적인 것을 확인할 수 있었다.

Claims

항-Ly-6G 항체를 포함하는, 결핵 백신의 면역효과 증강용 조성물.
삭제
제1항에 있어서,
상기 항-Ly-6G 항체는 호중구(Neutrophils), 호산구(eosinophils), 분화중인 단핵구, 혈장모양의 수지상세포(plasmacytoid dendritic cells) 및 이들의 조합으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 과립구 수용체 발현 세포를 제거하는 것인, 결핵 백신의 면역효과 증강용 조성물.
항-Ly-6G 항체를 포함하는, 결핵 면역화 전처리용 조성물.
항-Ly-6G 항체를 포함하는 결핵 백신 보조제(ajuvant).
항-Ly-6G 항체를 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계; 및
결핵 백신을 상기 인간을 제외한 개체에 투여하는 단계;를 포함하는 결핵 백신의 면역효과 증진 방법.