KR101610970B1 - 갈보놀라이드 생합성에 관여하는 유전자 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 갈보놀라이드(galbonolide) 생합성에 관여하는 유전자, 상기 유전자의 발현벡터를 포함하는 갈보놀라이드 생합성 증진용 조성물, 상기 발현벡터를 형질도입하여 갈보놀라이드를 생산하는 방법 및 상기 발현벡터가 형질도입된 갈보놀라이드 생합성 균주에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 서열번호 1 내지 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자가 갈보놀라이드 생합성에 관여함을 밝혀냈으며, 상기 유전자를 발현하는 벡터를 사용해 항진균 물질인 갈보놀라이드를 다량 생산할 수 있다.
Description
본 발명은 갈보놀라이드(galbonolide) 생합성에 관여하는 유전자, 상기 유전자의 발현벡터를 포함하는 갈보놀라이드 생합성 증진용 조성물, 상기 발현벡터를 형질도입하여 갈보놀라이드를 생산하는 방법 및 상기 발현벡터가 형질도입된 갈보놀라이드 생합성 균주에 관한 것이다.
갈보놀라이드(galbonolide) A 및 B는 스트렙토마이세스 갈부스(Streptomyces
galbus) ssp. eurythermus Tu 2253에서 처음으로 분리되었으며, 잿빛곰팡이병균(Botrytis cinerea)에 대한 항균작용이 있음이 밝혀졌다. 또한, 갈보놀라이드 A 및 B는 마이크로모노스포라 나라시노엔시스(Micromonospora narashinoensis) 및 마이크로모노스포라 칼시아(Micromonospora chalcea)에서 각각 분리되었으며, 이들은 밀의 깜부기병 균인 줄기녹병균(wheat stem rust fungus Puccinia graminis)에 항균효과가 있음이 밝혀졌다.
갈보놀라이드 A는 효모균증(crptococcosis)을 유발하는 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus neoformans) 등을 포함하는 여러 종류의 곰팡이 병원균에 대한 강력한 항균제로 알려져 있으며, 이의 항진균 효과는 스핑고리피드(sphingolipid)의 합성을 방해함으로써 나타난다고 추측되어졌다.
한편, 갈보놀라이드와 같은 폴리케타이드계 화합물은 폴리케타이드 신테이즈(polyketide synthase, PKS)라고 하는 거대효소(megasynthase)에 의해 생합성 된다. 이러한 PKS 복합체는 아실코에이(acyl-CoA)의 반복적 축합(claisen condensation) 반응에 관여하는 여러 개의 모듈(한 번의 축합반응을 책임지는 촉매 도메인(catalytic domain)들의 묶음)로 구성되어 있고, 시작 모듈(loading module), 다수의 연장 모듈(multiple extender modules) 및 해리 모듈(releasing module)로 구성된 것이 전형적인 모습이다. 모듈을 구성하는 촉매 도메인들의 구성에 따라 폴리케타이드의 구조가 일대일로 대응하여 생합성된다. 상기 모듈 중 연장 모듈은 각 카르복실산의 축합반응에 직접 관여하는 아실트랜스퍼라제(acyl transferase, AT), 아실 캐리어 단백질(acyl carrier protein, ACP) 및 베타-케토아실 신테이즈(beta-ketoacyl synthase, KS) 도메인들과 축합반응의 결과 생성되는 베타-케토 그룹의 환원에 관여하는 케토리덕타제(keto reductase, KR), 디하이드라타제(dehydratase, DH) 및 에노일 리덕타제(enoyl reductase, ER) 도메인들로 구성되어 있다. 한 번의 모듈의 작용으로 아실 코에이 잔기가 첨가되는데 AT는 아실 잔기(acyl moiety)를 해당하는 ACP로 전달하여 아실-ACP를 생성하게 하고, KS는 앞의 모듈에 의해 첨가된 분자에 생성된 아실-ACP의 아실기를 클라이젠 축합(claisen condensation)을 통해 탄소-탄소 결합을 하도록 하여 점차 탄소 수를 증가시킨다. 즉, 이들 세트가 한 번 작용하면 하나의 아실 잔기가 첨가되어 골격 탄소사슬의 탄소수가 2개씩 증가될 수 있다.
PKS 촉매 도메인에서, 각 모듈(module) 내에 있는 아실트랜스퍼레이즈(acyltransferase, AT) 도메인은 말로닐-티오에스터 유도체(malonyl-thioester derivative)를 활성화시키고, 이를 아실 캐리어 단백질(acyl carrier protein, ACP) 계열 단백질의 도메인으로 옮긴다. 말로닐-티오에스터 유도체는 말로닐-코엔자임 A(malonyl-coenzyme A, malonyl-CoA), 메틸말로닐-CoA(methylmalonyl-CoA), 에틸말로닐-CoA(ethylmalonyl-CoA, 클로로에틸말로닐-CoA(chloroethylmalonyl-CoA), 메톡시말로닐-ACP(methoxymalonyl-ACP), 하이드록시말로닐-ACP(hydroxymalonyl-ACP) 및 아미노말로닐-ACP(aminomalonyl-ACP)를 포함한다(Hertweck, 2009). ACP 도메인에 부착된 말로닐-티오에스터 유도체는 탈탄소화 클라이젠 축합반응(decarboxylative Claisen condensation)을 통해 합성되고 있는 폴리케타이드 체인에 삽입되어진다. 이러한 탄소-탄소 결합형성반응은 ACP 도메인과 연관된 β-케토아실 신테이즈(β-ketoacyl synthase, KAS) 도메인에 의해 촉매된다. 갈보놀라이드 A 및 B의 화학적 구조를 바탕으로, 이들의 생합성도 PKS 시스템에 의해 이루어질 것이라고 예상되어졌다. 한편, fkbGHIJK로 구성된 메톡시말로닐-ACP 생합성 유전자는 FK520 생합성 유전자 클러스터에서 처음으로 보고되었다(Wu et al., 2000). 메톡시말로닐 ACP의 생합성 과정에서 fkbGHIJK 의 역할은 유전학 및 생화학적인 실험을 통해 밝혀지고 있으나(Kato et al., 2002; Chan et al., 2006; Dorrestein et al., 2006), 아직 정확한 생합성 과정 및 관여 유전자가 밝혀지지 않은 상태이다.
이에 본 발명자들은 항균작용을 하는 갈보놀라이드 A 및 B의 생합성에 관여하는 유전자들을 분리하기 위해 연구를 거듭하던 중, 스트렙토마이세스 갈부스(S. galbus)에서 PKS 유전자 클러스터와 함께 위치하지 않는 메톡시말로닐-ACP 생합성 유전자(galGHIJK)가 갈보놀라이드 A의 생합성에 관여함을 확인하였으며, 이 옆에 있는 KAS 도메인을 포함하는 유전자가 갈보놀라이드 A 및 B의 생합성 과정에 관여하는 것을 확인하고, 이의 염기서열을 분석함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 갈보놀라이드(galbonolide) 생합성에 필요한 단백질을 코딩하는 유전자를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 유전자의 발현벡터를 포함하는 갈보놀라이드 생합성 증진용 조성물 및 이를 이용한 갈보놀라이드의 생산방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 유전자의 발현벡터를 형질도입한 갈보놀라이드 생합성 균주를 제공하는 것이다.
본 발명은 갈보놀라이드(galbonolide) 생합성에 필요한 단백질을 코딩하는 유전자에 관한 것이다.
본 발명의 용어 "갈보놀라이드"는 폴리케타이드(polyketide)계 화합물로서, 진균(fungal)의 스핑고리피드(sphingolipid) 생합성을 억제함으로써 항진균 효과를 보이는 물질을 의미한다. 본 발명의 갈보놀라이드는 갈보놀라이드 A 및 B를 모두 포함한다. 갈보놀라이드 A 및 B의 화학구조는 화학식 1 및 2와 같다.
상기 갈보놀라이드 생합성에 필요한 단백질을 코딩하는 유전자는 서열번호 8, 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 것이 바람직하며, 서열번호 1 내지 5로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 메톡시말로닐-아실 캐리어 단백질(methoxymalonyl-acyl carrier) 생합성 유전자 또는 서열번호 6 및 7로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 유전자일 수 있다.
또한 본 발명은 상기 서열번호 1 내지 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자를 포함하고, 서열번호 11의 핵산서열을 가지는 갈보놀라이드의 생합성에 필요한 단백질을 코딩하는 유전자 클러스터에 관한 것이다.
상기 유전자는 갈보놀라이드를 생산하는 스트렙토마이세스 갈부스(streptomyces galbus, 기탁번호: KCCM 41354)로부터 분리된 유전자들이다.
서열번호 1 내지 5의 아미노산 서열을 가지는 단백질은 메톡시말로네이트 생합성 단백질(methoxymalonate biosynthetic protein)이다. 그 중 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 galG 유전자는 메틸트랜스퍼레이즈(methyltransferase)의 기능을, 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 galH 유전자는 아실트랜스퍼레이즈/포스파테이즈(acyltransferase/phophatase) 기능을, 서열번호 3으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 galI 유전자는 탈수소효소(degydrogenase)의 기능을, 서열번호 4로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 galJ 유전자는 아실-캐리어 단백질(acyl-carrier protein)의 기능을, 서열번호 5로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 galK 유전자는 탈수소효소(dehydrogenase) 기능을 가진다. 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 orf2 유전자는 모노옥시제나제(monooxygenase)의 기능을 가지며, 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 orf3 유전자 또는 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 orf4 유전자는 베타-케토아실 신테이즈(β-ketoacyl syntase)의 기능을 가지며, 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 orf5 유전자는 아실 트랜스퍼레이즈(acyl transferase)의 기능을 가진다.
본 발명의 구체적 실시예에서 메톡시말로닐-아실 캐리어 단백질(methoxymalonyl-acyl carrier) 생합성 유전자인 galGHIJK 와 서열번호 6 내지 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자인 orf1 내지 orf5는 서로 인접하여 위치하며, 이들 유전자는 예상과 달리 PKS(polyketide synthase) 유전자와 인접해 있지 않음을 확인하였다(실시예 1). 또한 galI 유전자를 파괴한 돌연변이형 플라스미드를 S. galbus 균주에 형질도입시켰을 때 갈보놀라이드 A가 생성되지 않았으며(실시예 2), orf4 유전자를 파괴한 돌연변이형 플라스미드를 S. galbus 균주에 형질도입시켰을 때 갈보놀라이드 A 및 B 모두 생성되지 않았음을 확인할 수 있었다(실시예 3). 따라서 본 발명의 서열번호 1 내지 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자는 갈보놀라이드 생합성에 관여하는 유전자이다.
또한, 본 발명은 상기 유전자들을 모두 포함하는 갈보놀라이드 생합성 유전자를 제공한다.
상기 갈보놀라이드 생합성 유전자는 서열번호 11로 기재되는 염기서열을 갖는 것이 바람직하다. 이는 도 1에 도시된 유전자 지도를 갖는 갈보놀라이드 생합성 유전자군의 염기서열을 제공함을 특징으로 한다.
본 발명에 따라 제공되는 유전자들은 다양한 숙주세포에 도입되어 갈보놀라이드를 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다. 상기 유전자들은 단독으로 사용될 수도 있으며, 2개 이상이 함께 사용될 수도 있다.
다른 양태로서, 본 발명은 상기 갈보놀라이드 생합성 유전자를 포함하는 재조합 벡터를 제공한다.
본 발명의 재조합 벡터는 서열번호 1 내지 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자들로 구성된 군으로부터 1 이상 선택되는 유전자를 기본 벡터에 삽입하여 제조한 것이다. 본 발명에서 사용될 수 있는 기본 벡터는 유전자의 클로닝 또는 발현에 일반적으로 사용되는 벡터라면 제한없이 사용될 수 있다. 또한, 벡터는 숙주세포에 따라 달라질 수 있다. 즉, 숙주세포로 대장균을 사용하는 경우에는 대장균의 복제기원을 가지고 있는 대장균용 벡터를 사용하는 것이 바람직하고, 효모를 사용하는 경우에는 효모의 복제기원을 가지고 있는 효모용 벡터를 사용하는 것이 바람직하다. 또한, 대장균과 효모의 복제기원을 둘 다 가지고 있는 셔틀 벡터(shuttle vector)를 사용할 수도 있다.
또 하나의 양태로서 본 발명은 갈보놀라이드 생합성에 관여하는 유전자의 발현벡터를 포함하는 갈보놀라이드 생합성 증진용 조성물에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 서열번호 8, 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자들로 구성된 군으로부터 선택되는 유전자의 발현벡터를 포함하는 갈보놀라이드 생합성 증진용 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물에는 서열번호 1 내지 5로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자들로 구성된 군으로부터 선택되는 메톡시말로닐-아실 캐리어 단백질(methoxymalonyl-acyl carrier) 생합성 유전자의 발현벡터가 추가로 포함될 수 있으며, 서열번호 6 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자들로 구성된 군으로부터 선택되는 유전자의 발현벡터를 추가로 포함될 수 있다.
본 발명에서 용어,“발현벡터”란 적당한 숙주세포에서 목적 단백질을 발현할 수 있는 재조합 벡터로서, 유전자 삽입물이 발현되도록 작동가능하게 연결된 필수적인 조절 요소를 포함하는 유전자 작제물로서, 이러한 유전자 작제물을 제조하기 위해 표준 재조합 DNA 기술을 이용할 수 있다. 본 발명에서 용어, "작동가능하게 연결된(operably linked)"은 일반적 기능을 수행하도록 핵산 발현 조절 서열과 목적하는 단백질을 코딩하는 핵산 서열이 기능적으로 연결(functional linkage)되어 있는 것을 말한다. 예를 들어 프로모터와 단백질을 코딩하는 핵산 서열이 작동가능하게 연결되어 코딩하는 핵산 서열의 발현에 영향을 미칠 수 있다. 재조합 벡터의 종류는 원핵세포의 각종 숙주세포에서 목적하는 유전자를 발현하고, 목적하는 단백질을 생산하는 기능을 하면 특별히 한정되지 않지만, 강력한 활성을 나타내는 프로모터와 강한 발현력을 보유하면서 자연 상태와 유사한 형태의 외래 단백질을 대량으로 생산할 수 있는 벡터가 바람직하다. 재조합 벡터는 적어도, 프로모터, 개시코돈, 목적하는 단백질을 암호화하는 유전자, 종결코돈 터미네이터를 포함하고 있는 것이 바람직하다. 그 외에 시그널 펩티드를 코딩하는 DNA, 오퍼레이터 서열, 목적하는 유전자의 5’측 및 3’측의 비해독영역, 선별 마커 영역, 또는 복제가능단위 등을 적절하게 포함할 수도 있다. 개시 코돈 및 종결코돈은 일반적으로 면역원성 목적 단백질을 코딩하는 핵산 서열의 일부로 간주될 수 있으며, 유전자 작제물이 도입되었을 때 반드시 작용을 나타내야 하며 코딩 서열과 인프레임(in frame)에 있어야 한다. 벡터의 프로모터는 구성적 또는 유도성일 수 있다.
또 하나의 양태로서 본 발명은 갈보놀라이드의 생산방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 상기 생산방법은 (a) 상기에서 설명한 갈보놀라이드 생합성 증진용 조성물을 갈보놀라이드 생합성 균주에 도입하여 형질전환시키는 단계; 및 (b) 상기 형질전환된 균주를 배양하여 그 배양액으로부터 갈보놀라이드를 회수하는 단계; 를 포함한다.
상기 갈보놀라이드 생합성 균주는 갈보놀라이드를 생산할 수 있는 모든 균주가 포함되며, 그 종류에 제한이 있는 것은 아니다. 예를 들어 상기 균주는 스트렙토마이세스 갈부스(Streptomyces galbus), 마이크로모노스포라 나라시노엔시스(Micromonospora narashinoensis) 및 마이크로모노스포라 칼시아(Micromonospora chalcea), Merck Research lab에서 사용한 Micromonospora sp. 균주(Micromonospora sp. MA ####로 지칭된 균주들) 등이 포함된다. 본 발명의 목적상 상기 균주는 스트렙토마이세스 갈부스가 바람직하다. 더욱 바람직하게는, KCCM41354 번호로 기탁된 스트렙토마이세스 갈부스가 사용될 수 있다.
상기 본 발명의 갈보놀라이드를 생산하기 위한 균주 배양은 통상의 미생물이 사용할 수 있는 영양원을 함유하는 배지에서 배양할 수 있다. 균주의 영양원으로는 당업계에서 통상적으로 사용되는 영양원을 제한 없이 사용할 수 있으며, 바람직하게는 종래 스트렙토마이세스 속 박테리아의 배양에 이용되고 있는 공지의 영양원을 사용할 수 있다. 예를 들어, 말로닉산(malonic acid), 에탄올, 메치오닌(methionine), 탄소원 및 질소원을 포함하는 배지에서 이루어지는 것이 바람직하다. 이때, 상기 탄소원은 전분, 포도당, 옥수수기름, 글리세롤, 말토스, 만노스 및 이노시톨로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것이 바람직하며, 전분, 포도당 및 옥수수기름인 것이 가장 바람직하다. 또한, 상기 질소원은 면실밀, 옥수수 침지액, 옥수수 침지분, 대두분, 펩톤 및 효모엑기스로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것이 바람직하며, 면실밀 및 옥수수침지액인 것이 가장 바람직하다.
또한 상기 배양은 생육가능한 배지에서 1차 배양하고 배양액으로부터 균체를 회수한 후, 다시 상기 균체에 유기용매를 첨가하여 4℃에서 하룻밤 동안 2차 배양하는 것이 바람직하다. 이 때 배양액에 갈보놀라이드의 생성을 유도하는 유도제(inducer)를 추가로 첨가할 수 있으며, 또한 갈보놀라이드의 기질을 추가로 첨가할 수 있다. 상기 배양액으로부터 갈보놀라이드를 용출하기 위한 유기용매로는 메탄올, 아세톤 또는 에틸에테르, 에틸아세테이트를 사용할 수 있다.
종균 배양액을 상기 배양 배지를 포함한 발효조에 식균하여 배양할 수 있다. 배양방법으로는 호기적 조건에서는 진탕배양 혹은 정치배양이 가능하다. 배양온도는 상기의 각 조건들에서 배양할 경우 조건에 따라 약간씩 상이하기는 하나, 보통 20-37℃에서 배양하는 것이 적당하다. 또한, 배양기간 역시 당업계에서 사용되는 공지의 기간 동안 배양할 수 있으며, 필요에 따라 기간이 조정될 수 있다. 또한, 배양액으로부터 갈보놀라이드의 회수는 HPLC(high performance liquid chromatography) 또는 TLC(thin-layer chromatography)를 이용하여 당업계에 공지된 방법에 따라 수행할 수 있다.
또 다른 양태로서, 본 발명은 상기 갈보놀라이드 생합성 유전자를 포함하는 발현 벡터에 의해 형질도입된 갈보놀라이드 생합성 균주를 제공한다.
상기 균주는 서열번호 1 내지 5로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 메톡시말로닐-아실 캐리어 단백질(methoxymalonyl-acyl carrier) 생합성 유전자, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 1 이상 유전자의 발현벡터를 형질도입한 갈보놀라이드 생합성 균주이다.
상기 갈보놀라이드 생합성 유전자를 포함하는 발현벡터에 의해 형질도입된 갈보놀라이드 생합성 균주는 생합성에 필요한 단백질의 발현 및 활성증가로 인해 항균작용을 하는 갈보놀라이드의 생합성이 증진될 수 있다.
본 발명에 의해서 갈보놀라이드를 생합성하는데 관여하는 유전자들과 유전자들의 위치가 밝혀짐에 따라, 이를 이용하여 갈보놀라이드의 생합성을 조절할 수 있게 되었다. 또한 생합성에 관여하는 유전자의 발현벡터를 균주에 도입하여 항진균 활성을 갖는 갈보놀라이드를 다량생산할 수 있다.
도 1은 스트렙토마이세스 갈부스(streptomyces galbus, GenBank accession no. GU300145)로부터 분리한 메톡시말로닐-ACP 생합성 유전자 및 옆에 위치하는 유전자들의 조직도를 보여주는 것이다.
도 2는 galGHIJK 유전자 옆에 존재하는 KAS-관련 유전자 도메인의 조직도를 나타낸 것이며, 이를 버콜데리아 멀티보란스(Burkholderia multivorans) ATCC 17161 염색체 1(GenBank accession no. CP000868)과의 상동성을 비교하여 나타낸 것이다. 도메인의 동일성은 NCBI의 BLAST-P내의 pairwise alignments를 사용하여 측정하였다. orf4와 Bmul_1953의 상동성은 32%였다. orf3는 KASⅢ(FabH) 유사 단백질로 예측되었으나, 촉매 잔기(Cys-His-Asn)가 없었다. KAS는 KASⅠ/Ⅱ(FabB)는 촉매 잔기가 Cys-His-His로 구성되어 있으며, FabB 및 FabH는 구조상 유의적인 상동성을 가지고 있지 않았다.
도 3은 S. galbus에서 galI의 파괴했을 때 항진균활성 변화를 관찰한 결과이다. (a)는 WT 및 SK-galI-5 염색체의 Kpnl-restriction 지도를 pD-galI과 함께 나타낸 것이다. galGHI의 유전적 조직은 WT의 3.2kb Kpnl 단편으로 나타냈다. (b)는 WT(1) 및 SK-galI-5(2)의 Kpnl-digested 염색체의 서던 혼성화 분석 결과를 나타낸 것이다. (c)는 크립토코커스 네오포르만스(cryptococcus neoformans)에 대한 항진균 효과를 TLC 분석으로 나타낸 것이다. (c)는 부유 추출물, (d)는 균사체 추출물이다. 또한 (e)는 부유 추출물의 TLC 분석, (f)는 균사체 추출물의 TLC분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 WT(a) 및 SK-galI-5(b) 배양 부유물의 에틸아세테이트 추출물의 HPLC-MS 크로마토그램 결과를 나타낸 것이다. 포지티브 이온화 모드(positive ionization mode)로 m/z 381(1) 및 m/z 365(3)의 EIC, 네거티브 이온화 모드(negative ionization mode)로 m/z 379(2) 및 m/z 363(4)를 나타낸 것이며, 갈보놀라이드 A 및 B의 분자이온 피크는 원으로 표시하였다. (c)는 7.0-8.0분(1) 및 8.0-9.0분(2)의 용출 분수는 실리카 겔 TLC 분리 후에 항진균 활성 분석으로 사용하였다.
도 5는 부유 추출물(A 및 B) 및 균사체 추출물(C 및 D)의 HPLC-MS 크로마토그램을 나타낸 것이다.
도 6은 orf4 유전자 파괴 및 이의 갈보놀라이드 생성에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
도 7은 크립토코커스 네오포르만스(cryptococcus neoformans)에 대한 항진균 효과를 TLC 분석으로 나타낸 것이다. A는 WT, dKS-6 및 dKS-7의 배양 부유 추출물의 항진균효과이며, B는 WT, dKS-6 및 dKS-7의 균사체 추출물의 효과를 나타낸 것이다.
도 2는 galGHIJK 유전자 옆에 존재하는 KAS-관련 유전자 도메인의 조직도를 나타낸 것이며, 이를 버콜데리아 멀티보란스(Burkholderia multivorans) ATCC 17161 염색체 1(GenBank accession no. CP000868)과의 상동성을 비교하여 나타낸 것이다. 도메인의 동일성은 NCBI의 BLAST-P내의 pairwise alignments를 사용하여 측정하였다. orf4와 Bmul_1953의 상동성은 32%였다. orf3는 KASⅢ(FabH) 유사 단백질로 예측되었으나, 촉매 잔기(Cys-His-Asn)가 없었다. KAS는 KASⅠ/Ⅱ(FabB)는 촉매 잔기가 Cys-His-His로 구성되어 있으며, FabB 및 FabH는 구조상 유의적인 상동성을 가지고 있지 않았다.
도 3은 S. galbus에서 galI의 파괴했을 때 항진균활성 변화를 관찰한 결과이다. (a)는 WT 및 SK-galI-5 염색체의 Kpnl-restriction 지도를 pD-galI과 함께 나타낸 것이다. galGHI의 유전적 조직은 WT의 3.2kb Kpnl 단편으로 나타냈다. (b)는 WT(1) 및 SK-galI-5(2)의 Kpnl-digested 염색체의 서던 혼성화 분석 결과를 나타낸 것이다. (c)는 크립토코커스 네오포르만스(cryptococcus neoformans)에 대한 항진균 효과를 TLC 분석으로 나타낸 것이다. (c)는 부유 추출물, (d)는 균사체 추출물이다. 또한 (e)는 부유 추출물의 TLC 분석, (f)는 균사체 추출물의 TLC분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 WT(a) 및 SK-galI-5(b) 배양 부유물의 에틸아세테이트 추출물의 HPLC-MS 크로마토그램 결과를 나타낸 것이다. 포지티브 이온화 모드(positive ionization mode)로 m/z 381(1) 및 m/z 365(3)의 EIC, 네거티브 이온화 모드(negative ionization mode)로 m/z 379(2) 및 m/z 363(4)를 나타낸 것이며, 갈보놀라이드 A 및 B의 분자이온 피크는 원으로 표시하였다. (c)는 7.0-8.0분(1) 및 8.0-9.0분(2)의 용출 분수는 실리카 겔 TLC 분리 후에 항진균 활성 분석으로 사용하였다.
도 5는 부유 추출물(A 및 B) 및 균사체 추출물(C 및 D)의 HPLC-MS 크로마토그램을 나타낸 것이다.
도 6은 orf4 유전자 파괴 및 이의 갈보놀라이드 생성에 미치는 영향을 나타낸 것이다.
도 7은 크립토코커스 네오포르만스(cryptococcus neoformans)에 대한 항진균 효과를 TLC 분석으로 나타낸 것이다. A는 WT, dKS-6 및 dKS-7의 배양 부유 추출물의 항진균효과이며, B는 WT, dKS-6 및 dKS-7의 균사체 추출물의 효과를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
참고예
1: 재료와 방법
박테리아 균주, 배지 및 유전적 절차
스트렙토마이세스 갈부스(Streptomyces galbus) KCCM 41354는 한국 미생물 보존 센터로부터 수득하였다. 대장균(Escherichia coli) DH5a는 일반적인 서브클로로닝에 대한 숙주로서 사용하였다. 전체 DNA 분리를 위해서, S. galbus 는 10mM MgCl2·6H2O 및 0.5% w/v 글라이신과 함께 트립틱 소이 액체배지(tryptic soy broth)에서 발육시켰다. 글루코스-효모 추출물-맥아 추출물(GYM) 한천은 S. galbus 종균 조제를 위해 사용하였다. Escherichia coli ET12567 (dam_, dcm_,hsdS_)/pUZ8002는 S. galbus로의 유전자간 접합 전이를 위한 비메틸화성 플라스미드 제공균주였다(Flett et al., 1997). 10mM MgCl2가 첨가된 GYM 한천은 접합 실험을 위해 사용하였다. 유전자 결손 실험을 포함한 유전적인 절차들은 표준 절차(Kieser et al., 2000)를 사용하여 수행하였다. 제조자에 의한 약술된 절차에 따라서 서던 혼성화(southern hybridization)를 Roche Diagnostics (Pleasanton, CA)로부터의 결실 키트와 디곡시제닌(digoxigenin) DNA 표지를 사용해 수행하였다.
클로닝 절차
S. galbus 염색체로부터 fkbI 상동체의 800-bp DNA 단편을 PCR과 5'-CAGGGCATGGCCGCSTGGACSGT-3' 및 5'-GATGATCTCCATSAGCTTSGCRTC-3'(Li et al., 2006)의 프라이머 세트를 사용하여 증폭하였으며, 이는 차후에 pGEM-T Easy 벡터로 (Promega, Madison, WI)로 클로닝되었다. 이 DNA 클론을 pHJK1001로 명명하였다. S. galbus KCCM 41354 게놈 DNA의 코스미드 라이브러리는 SuperCos I 및 Gigapack III Gold packaging 추출물 키트를 사용하여 제조자의 핸드북(Strata유전자, La Jolla, CA)에 따라서 구성하였다. 프로브로서 pHJK1001에서 800-bp 단편을 사용하여 S. galbus 게놈으로부터 3.2-kb KpnI DNA 단편을 분리하였고, 뉴클레오티드 서열 분석을 통해 메톡시말로닐-ACP 생합성 유전자(galGHI 및 절단된 galJ)의 존재를 확인하였다. The 3.2-kb KpnI DNA 단편은 그 후 프로브로서 코스미드 라이브러리 스크리닝에서 사용하였고, 결과적으로 양성의 클론 pHJK1011를 분리하였다. galI에 내부적인 800-bp 단편은 pHJK1001로부터 EcoRI 단편으로서 분리하여 pKC1139로 결찰시켜 pD-galI, galI-파괴 플라스미드를 제조하였다. 결합 플라스미드 pKC1139는 E. coli pUC 레플리콘, Streptomyces 온도-민감성 복제 기원, 및 아파라마이신 저항성 카세트(Bierman et al., 1992)를 포함한다. orf4에 내부적인 1370-bp EcoRV-BamHI 단편은 pKC1139의 같은 위치에 클로닝하여 orf4-파괴 플라스미드인 pSK1-dKS를 제조하였다.
갈보놀라이드의 추출, 항진균 활성 분석, 및 박층 크로마토그래피(TLC) 분리
S. galbus의 발효와 갈보놀라이드의 추출은 이전에 제공되는 절차를 일부분 변형하여 수행하였다(Fauth et al., 1986). 요약하면, 원심분리로 배양액으로부터 균사체를 수집하였고, 추출을 위해 최소 부피의 메탄올에 침강시켰다. 배양 부유물은 동일 부피의 에틸아세테이트로 추출하였다. 분석 미생물인 C. neoformans IFO 40092은, 일본의 치바, 치바 대학, Culture Collection of the Research Centre for Pathogenic Fungi & Microbial Toxicoses로부터 수득하였다. 크립토코커스 네오포르만스(Cryptococcus Neoformans)은 GYM 한천에서 유지시켰고, 회전 쉐이커에서 28℃의 온도의 Bennett 배지로 배양시켰다. Bennett 배지 배양(OD600nm, 2.0)은 0.01% 희석에서 GYM 반고형 한천(0.4% w/v 한천)에 첨가해주었고 분석 플레이트를 제조하기 위해 GYM 한천상에서 중첩시켰다. TLC 분석을 위해, 실리카 겔 60 F254 TLC-플레이트 (Merck, Darmstadt, Germany)를 에틸아세테이트와 벤젠(1:3) (Abe et al., 1985)으로 구성된 용매 시스템으로 현상하였고, 분석 플레이트 상에 거꾸로 위치시켰다. 분석 플레이트는 분석 미생물이 자라서 세포의 컨플루언트 론(confluent lawn)을 형성할 때까지 28℃에서 배양하였다.
HPLC 분석
Agilent 1100 시리즈 LC 시스템(Santa Clara, CA)을 HPLC-MS 분석을 위해 사용하였다. A Bruker HCT 3000 이온 트랩 질량 분광계 (Billerica, MA)는 HPLC 컬럼과 결합하여 사용하였으며, 질량 스캔 범위는 m/z 100-500였다. 건조 온도는 350℃였으며, 분무기 가스는 40 p.s.i.였고, 건조 가스는 9 L min_ 1였다. 분리는 등용매용리에 의해서 쌍 C-18 컬럼 (150×3.0 mm, 5.0 mm; Phenomenex, Torrance, CA) 상에서 수행하였다. 컬럼 온도는 25℃로 유지하였다. 유속은 0.5mLmin_1로 유지하였다. 이동상은 물에서 메탄올과 25mM 아세트산암모늄(3 : 1)으로 구성하였다.
Varian HPLC ProStar 시스템(Lake Forest, CA)은 UV 검출을 이용한 HPLC 분석에 사용하였다. 분리는 Varian Pursuit XRs C-18 컬럼(250×4.6 mm, 5.0 mm) 상에서 수행하였고 230nm에서 모니터하였다. 유속은 0.75mLmin_1로 유지하였다. 이동상은 물에서 25Mm 아세트산 암모늄, pH 5.5(A)로 구성하였고, 메탄올(B)은 기울기(grandient) 용리를 이용해 이동시켰다: 30분 동안 100% A; 10분 동안 100% A에서 5% A; 그 후 10분 동안 5% A로 유지하였다.
실시예 1: 메톡시말로닐-ACP 생합성 유전자는 다모듈적 PKS 유전자와 무리를 이루지 않는 반면, S. galbus에서 KAS-연관 유전자와 함께 위치함을 확인
fkbI 상동체의 클로닝으로 S. galbus부터 메톡시말로닐-ACP 생합성 유전자를 포함하는, 코스미드 클론 pHJK1011을 분리하였다. pHJK1011의 완전한 뉴클레오티드 서열의 결정은 메톡시말로닐-ACP 생합성 유전자인, galGHIJK (도 1)의 완전한 세트의 존재를 확인하였다. 코스미드 클론 (41,591bp 삽입체)의 뉴클레오티드 서열(서열번호 11)은 수탁번호 GU300145로 GenBank 데이터베이스 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Genbank)에 기탁하였다. 이전의 보고들은 메톡시말로닐-ACP 생합성 유전자가 이와 연관된 PKS 유전자 클러스터를 클로닝하는데 사용될 수 있다고 보고되었을 뿐이다(Li et al., 2006; Zhao et al.,2006).
본 발명자들은 상기 클론된 42-kb 위치 (도 1 및 표 1) 내에는 어떠한 전형적인 다모듈적 PKS 유전자가 존재하지 않는다는 것을 밝혀내었다. 대신에, galGHIJK 유전자는 KAS-연관 단백질을 코딩하는 세 개의 유전자인 orf3, orf4, 및 orf5와 이웃하고 있었다. orf3의 산물은 KAS III (FabH-타입) 단백질과 상동이었으나, 촉매적인 시스테인 잔기를 가지고 있지 않았다. orf4 단백질은 완전한 KAS 도메인, 뒤이어 아미노말단이 절단된 KAS 도메인을 포함하였다. 또한, orf4는 β-케토아실-ACP 환원효소 도메인(들)을 포함하나, ACP 도메인은 가지고 있지 않았다. orf5는 ACP 도메인에서 보존되는, AT 도메인과 티올화 모티프를 포함하였다. orf4와 orf5는 버콜데리아 멀티보란스(Burkholderia multivorans)(도 2)를 포함하는 다양한 버콜레리아 균주에서 상동성을 가지나, 그들의 생물학적인 역할은 불명확하다.
본 발명에서 예측된 메톡시말로닐-ACP 생합성 유전자 및 이의 주위 ORF들의 예측되는 기능은 하기 표 1과 같다.
ORF | Size (aa) | Closest similarity to known proteins (Gene Bank Accession No, size in amino acid) |
Similarities in %, amino acid-size of overlap |
Function |
-6 | 188 | TetR family transcriptional regulator Streptomyces hygroscopicus ATCC 53653 (ZP_05517591.1, 186) |
55, 185 | Transcriptional regulator |
-5 | 268 | Shrot chain dehydronasae Ralstonia eutropha H16 (CAJ96572.1, 267) |
55, 263 | Dehydrogenase |
-4 | 353 | NADH:flavin oxidoreductase/NADH oxidase Streptomyces sviceus ATCC 29083 (ZP_05018453.1, 353) |
81, 352 | Oxidoreductase |
-3 | 305 | Alpha/beta hydrolase fold-3 domain protein Caulobacter sp. K31 (ABZ74245.1, 305) |
52, 279 | Hydrolase |
-2 | 355 | Helix-turn-helix DNA binding protein Streptomyces sp. Mg1 (ZP_05001021.1, 329) |
54, 318 | DNA binding protein |
-1 | 409 |
O-methyltransferase, family protein 2 Mycobacterium smegmatis str. MC2 155 (YP_889598.1, 345) |
45, 323 | O-methyltransferase |
galG | 220 | Methoxymalonate biosynthesis protein Streptomyces neyagawaensis (AAZ94403.1, 222) |
67, 220 | Methoxymalonate biosynthetic protein (Methyltransferase) |
galH | 384 | Methoxymalonate biosynthesis protein Streptomyces scabiei 87.22 (CBG75347.1, 385) |
69, 378 | Methoxymalonate biosynthetic protein (Acyltransferase/Phosphatase) |
galI | 369 | Methoxymalonate biosynthesis protein Streptomyces neyagawaensis (AAZ94394.1, 371) |
67, 367 | Methoxymalonate biosynthetic protein (Dehydrogenase) |
galJ | 100 | Methoxymalonate biosynthesis protein Streptomyces clavuligerus ATCC 27064 (ZP_05008786.1, 102) |
62, 81 | Methoxymalonate biosynthetic protein (Acyl-carrier protein) |
galK | 296 | Methoxymalonate biosynthesis protein Streptomyces scabiei 87.22 (CBG75344.1, 279) |
69, 281 | Methoxymalonate biosynthetic protein (Dehydrogenase) |
1 | 361 | Hypothetical protein containing a Rieske [2Fe-2S] domain Streptomyces griseus subsp. griseus NBRC 13350 (BAG17263.1, 362) |
44, 354 | Unknown |
2 | 490 | Cytochrome P450 183B1 Cyp183B1 Mycobacterium marinum M (YP_001848603.1, 462) |
49, 456 | Monooxygenase |
3 | 311 | Beta-ketoacyl synthase-like protein Mycobacterium ulcerans Agy99 (YP_025567.1, 328) |
33, 307 | Beta-ketoacyl synthase |
4 | 2048 | Putative multi-domain beta keto-acyl synthase Burkholderia multivorans ATCC 17616 (YP_00001945760.1, 2081) |
32, 1766 | Beta-ketoacyl synthase |
5 | 501 | Acyl transferase domain protein Stigmatella aurantiaca DW4/3-1 (EAU66418.1, 336) |
32, 235 | Acyl transferase |
6 | 505 | Oxidoreductase Streptomyces avermitilis MA-4680 (NP_822388.1, 417) |
72, 417 | Oxidoreductase |
7 | 279 | IclR family Transcriptional regulator Streptomyces flavogriseus ATCC 33331 (ZP_05803308.1, 279) |
80, 269 | Transcriptional regulator |
8 | 321 | Putative 5-dehydro-4-deoxyglucarate dehydratase 2 Streptomyces scabiei 87.22 (CBG73189.1, 346) |
80, 301 | Dehydratase |
9 | 445 | High-affinity gluconate transport protein Streptomyces viridochromogenes DSM 40736 (ZP_05534313.1, 445) |
91, 445 | Transport protein |
10 | 444 | Glucarate dehydratase Streptomyces viridochromogenes DSM 40736 (ZP_05534314.1, 445) |
91, 445 | Dehydratase |
11 | 358 | Putative DNA-binding regulator Streptomyces scabie 87.22 (CBG677401, 346) ` |
58, 336 | Transcription regulator |
12 | 190 | Putative sigma factor Streptomyces scabie 87.22 (CBG677401, 346) |
55, 184 | Transcription regulator |
13 | 287 | Lipoprotein Streptomyces pristinaespiralis ATCC 25486 (ZP_050121153.1, 272) |
63, 271 | Lipoprotein |
14 | 199 | Peptidase C60, Sortase A and B Streptomyces ghanaensis ATCC 14672 (ZP_04687625.1, 228) |
54, 198 | Peptidase |
15 | 150 | Hypothetical protein SghaA1_07181 Streptomyces ghanaensis ATCC 14672 (ZP_04684942.1, 176) |
39, 115 | Unknown |
16 | 315 | Putative fatty acid desaturase Streptomyces clavuligerus ATCC 27064, (ZP_05006083.1, 381) |
98, 315 | Fatty acid desaturase |
17 | 336 | Putative oxidoreductase Streptomyces viridochromogenes DSM 40736 (ZP_05529480.1, 336) |
92, 336 | Oxidoreductase |
18 | 379 | Conserved hypothetical protein Streptomyces scabiei 87.22 (ZP_05001028.1, 379) |
92, 378 | Unknown |
19* | 323 | Conserved hypothetical protein Paenibacillus sp. JDR-2 (ACT04581.1, 948) |
36, 306 | Unknown |
* incomplete ORF
실시예
2:
galI
-파괴 돌연변이에서
갈보놀라이드
A 생성의 손실
galI-파괴 돌연변이는 유전자 파괴 플라스미드 pD-galI을 이용해 만들었다. 돌연변이 SK-galI-5의 유전자형은 800-bp galI 단편을 프로브로서 사용하여 서던 분석으로 확인하였다(도 3a 및 b). 3.2-kb KpnI 단편은 야생형(WT) 염색체에 존재하였고 SK-galI-5 염색체에 부재하였다. SK-galI-5 시료의 레인에서, 약 4.6, 5.9, 및 7.4 kb 크기를 가진 세 개의 밴드가 관찰되었다. 4.6-kb 및 5.9-kb 단편은 galI 위치로 pD-galI의 융합에서 비롯되는 경향인(도 3b) 반면, 7.4-kb 밴드는 pD-galI 자체와 상응한다. 따라서 SK-galI-5에서 galI이 성공적으로 파괴되었음을 추론할 수 있다. SK-galI-5가 갈보놀라이드 A를 합성하지 못하지만, 갈보놀라이드 B를 생산하는 능력은 유지할 것이라는 것을 초기에 가정하였다. 이러한 경우에, SK-galI-5의 추출물은 야생형과 비교할 때, 낮은 수준의 항진균 활성을 나타낼 것이다. 왜냐하면, 갈보놀라이드 B는 C. neoformans에 대항하는 시험을 할 경우, 몇 백배 낮은 효과를 지니기 때문이다(Harris et al., 1998). 예상한 바와 같이, SK-galI-5의 부유 추출물은 야생형 수준과 비교할 때, 낮은 수준의 항진균 활성을 나타냈다(도 3c). 그러나, WT 및 SK-galI-5 양쪽의 균사체 추출물에서 비슷한 수준의 활성이 관찰되었다(도 3d). S. galbus가 여기서 사용된 조건하에서 배양할 경우, 갈보놀라이드 A 외에, 갈보놀라이드 항진균 기질을 축적할 수 있는 잠재력을 가지고 있는지 여부는 알려져 있지 않다. 이러한 질문에 대한 답하기 위해서, 실리카 겔-TLC 분리를 항진균 활성 분석과 함께 사용하였다. 사용된 TLC 조건과 함께, 갈보놀라이드 B에 대한 지연계수(Rf) 수치는 0.35으로 보고되었으나(Abe et al., 1985), 갈보놀라이드 A에 대해서는 어떠한 비교할만한 데이터도 없다. 강한 항진균 활성은 WT 추출물 내에서 약 0.25의 Rf 수치에서 용출하였으며, 활성 수준은 부유 추출물에서 유의미하게 더 높았다(도 3e 및 f). 이러한 활성은 갈보놀라이드 A로부터인 것으로 HPLC-MS 분석에 의해 차후에 확인되었다. TLC 플레이트는 더 나은 분리를 위해 세 배로 현상시켰다. SK-galI-5 추출물에서 갈보놀라이드 A의 활성은 눈에 띄게 부재하였다(도 3e 및 f). SK-galI-5뿐만 아니라, WT의 균사체 추출물은, 용출 조건 하에서 이동이 없었던 항진균 활성을 나타냈다(도 3f).
다음으로, 본 발명자들은 추출물로부터 갈보놀라이드 A와 B를 확인하기 위해서, HPLC-MS 분석을 사용하였다. m/z 381 (갈보놀라이드 A 에 대해 [M+H]+), m/z 365(갈보놀라이드 B에 대해 [M+H]+), m/z 379 (갈보놀라이드 A 에 대해 [M-H]-), 및 m/z 363 (갈보놀라이드 B 에 대해 [M-H]- for)의 추출된 이온 크로마토그램(EICs)은 WT의 부유 추출물 내에서, 각각 7.2분과 8.7분에서 갈보놀라이드 A와 B의 존재를 밝혔다(도 4a). 예상한 바와 같이, SK-galI-5는 갈보놀라이드 B를 생성하였으나, 갈보놀라이드 A는 생성하지 않았다(도 4b). 분리된 HPLC 실험에서, 용출 분획은 7.0-8.0분[분획 (fr.)1)] 및 8.0-9.0분(fr. 2)에서 수집하였고, 농축시켜서 TLC 분리 이후에 항진균 활성 시험으로 적용시켰다(도 4c). 항진균 시험은 WT 분획은 분획 1에서 더 높은 활성을 가지고, 약 0.25의 Rf 수치에서 높은 항진균 활성을 유지하였다. 이 활성은 명백하게 SK-galI-5 분획에서는 존재하지 않는다. SK-galI-5으로부터의 용출 분획은 약 0.35의 Rf 수치에 분획 2에서 낮은 활성을 가졌다. 이러한 활성은 재현 가능하게 관찰되기에는 너무 낮음에도 불구하고, Rf 수치는 갈보놀라이드 B (Abe et al., 1985)에 대해 공지된 수치와 비교할만 한 것이다. 종합적으로, 이러한 실험들은 SK-galI-5가 갈보놀라이드 B를 생성하지만, 갈보놀라이드 A를 합성하지 않는다는 것을 증명한다. 구배 용출을 이용하는 HPLC-MS 분석은 SK-galI-5가 갈보놀라이드 A를 생성하는 능력을 잃었음을 추가로 뒷받침한다(도 5).
실시예 3:
orf4
파괴체(disruptant)에서 갈보놀라이드 A 및 B의 생성이 심각하게 손상됨을 확인.
KAS-연관 유전자(orf3 , 4, 및 5)가 galGHIJK와 이웃하여 위치한다는 것은 3개의 유전자가 갈보놀라이드의 생합성에 관여한다는 가능성을 제시한다. 따라서, orf4-파괴 돌연변이를 생성하였고, 결과적인 돌연변이의 유전자형은 1.4-kb EcoRV-BamHI 단편을 프로브로서 사용해 서던 분석을 통해서 확인하였다(도 6a 및 b). 3.1-kb PstI-NotI 단편은 WT 염색체 내에서 명백하였고, orf4-파괴 돌연변이(dKS-6 및 -7)의 두 개의 결과물 내에서 이는 2.8-및 1.7-kb 단편으로 대체되었다. dKS-6 및 -7에서 관찰된 1.4-kb 단편은 파괴 플라스미드인 pSK1-dKS로부터 비롯된 것일 것이다. 항진균 활성 시험은 dKS 균주가 갈보놀라이드 A의 미량을 생성한 반면, 미지의 항진균 화합물의 생성(TLC에서 이동하지 않은 것)은 약간 감소한 것을 나타냈다(도 7). 갈보놀라이드 A 생합성이 dKS 돌연변이 내에서 심하게 손상되었음은 확실하나, 미지의 화합물의 감소 여부가 orf4의 파괴와 연관이 있는지는 확실하지 않다. UV 검출을 포함하는 HPLC 분석은 돌연변이의 생성 수준이 갈보놀라이드 A와 B에 대하여 낮은 검출 수준이었음을 증명하였다(도 6c). 갈보놀라이드 A와 B는 WT 시료로부터 수집하였고, 그들의 실체는 항진균 활성 시험 및 질량 분석을 통해서 확증하였다. 고-분해능 질량 분석은 갈보놀라이드 A(C21H33O6, calcd 381.2277)와 갈보놀라이드 B (C21H32O5, calcd 364.2250)에 대하여 각각 381.2281 ([M+H]+에 대해 m/e, 화학적 이온화) 및 364.2254 (전자 충돌 이온화)를 산출하였다. 이러한 관찰은 orf4가 갈보놀라이드 생합성에 중요한 역할을 함을 의미한다.
<110> Myongji University Industry and Academia Cooperation Foundation
<120> Gene involved in the biosynthesis of galbonolide
<130> PA100705KR
<160> 11
<170> KopatentIn 1.71
<210> 1
<211> 220
<212> PRT
<213> Streptomyces galbus
<400> 1
Met Ala Asn Gln Ile Ala Ala Gly Pro Glu Leu Leu Gln Tyr Val Arg
1 5 10 15
Asp Phe Ser Leu Arg Glu Asp Asp Ile Leu Arg Asp Leu Arg Leu Leu
20 25 30
Thr Ser Gly Leu Pro Gly Gly Glu Ala Met Gln Val Thr Ala Glu Glu
35 40 45
Gly Gln Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ala Ala Thr Gly Val Thr Asp Val
50 55 60
Leu Glu Val Gly Thr Phe Thr Gly Tyr Ser Thr Leu Cys Met Ala Arg
65 70 75 80
Ala Leu Pro Pro Gln Gly Arg Leu Ile Thr Cys Asp Ile Ser Glu Arg
85 90 95
Trp Pro Glu Ile Gly Val Glu Tyr Trp Arg Arg Ala Gly Val Leu Glu
100 105 110
Arg Ile Glu Val Arg Ile Gly Glu Ala Ala Asp Thr Leu Glu Lys Met
115 120 125
Cys Ala Asp Gly Leu Ser Glu Ser Phe Gly Leu Val Phe Ile Asp Ala
130 135 140
Asp Lys Val Asn Tyr Pro Arg Tyr Tyr Glu Leu Ala Leu Arg Leu Val
145 150 155 160
Arg Pro Gly Gly Leu Leu Val Val Asp Asn Thr Leu Phe Phe Gly Arg
165 170 175
Val Ile Asp Pro Leu Ala Asp Asp Ala Asp Thr Ala Gly Val Arg Glu
180 185 190
Leu Asn Ala Ile Ile Arg Asp Asp Arg Arg Ile Asp Val Ser Met Leu
195 200 205
Pro Val Ala Asp Gly Ile Thr Leu Val Arg Arg Lys
210 215 220
<210> 2
<211> 384
<212> PRT
<213> Streptomyces galbus
<400> 2
Met Arg Gly Ala Ala Ala Thr Ala Thr Val Lys Cys Leu Val Trp Asp
1 5 10 15
Leu Asp Asn Thr Leu Trp Asn Gly Thr Leu Leu Glu Gly Asp Asp Val
20 25 30
Val Leu Ala Gln Gly Ile His Glu Val Ile Thr Arg Leu Asp Ala Arg
35 40 45
Gly Ile Leu Gln Ser Val Cys Ser Arg Asn Asp His Ala Val Ala Trp
50 55 60
Ala Arg Leu Glu Ala Leu Gly Val Ala Asp Tyr Phe Val Leu Pro Gln
65 70 75 80
Ile Gly Trp Gly Arg Lys Ser Asp Ala Val Arg Arg Ile Ala Glu Gly
85 90 95
Leu Asn Phe Ala Pro Arg Ala Val Ala Phe Ile Asp Asp Gln Pro Thr
100 105 110
Glu Arg Ala Glu Val Ala His Ser Leu Pro Asp Val Arg Cys Tyr Arg
115 120 125
Ala Glu Asp Ala Ala Leu Leu Pro Gly Leu Pro Glu Phe Ser Pro Gly
130 135 140
Thr Val Thr Val Asp Ala Arg Gln Arg Arg Ser Met Tyr Gln Ala Gly
145 150 155 160
Phe Arg Arg Thr Asp Glu Gln Ala Arg Phe Thr Gly Ser His Glu Asp
165 170 175
Phe Leu Arg Ser Leu Glu Met Val Leu Arg Ile Ala Arg Ala Thr Pro
180 185 190
Glu Glu Leu Ala Arg Ile Glu Glu Leu Thr Gln Arg Thr Ser Gln Met
195 200 205
Asn Ala Thr Gly Val His Tyr Pro Asp Ala Thr Leu Arg Ala Leu Leu
210 215 220
Ala Asp Pro Gly His Glu Val Leu Val Thr Thr Leu Thr Asp Arg Phe
225 230 235 240
Gly Pro His Gly Ala Val Gly Val Val Leu Leu Glu Lys His Pro Arg
245 250 255
Ala Trp His Leu Arg Leu Leu Ala Thr Ser Cys Arg Val Val Ala Phe
260 265 270
Gly Val Gly Thr Ile Leu Leu Asn Trp Leu Ala Asp Gln Ala Ala Arg
275 280 285
Ala Gly Val His Leu Leu Ala Asp Phe Arg Ala Thr Glu Arg Asn Arg
290 295 300
Met Met Glu Ile Ala Tyr Arg Phe Ala Gly Phe Gly Asp Gln Pro Cys
305 310 315 320
Ala Cys Arg Gly Leu Val Arg Glu Gly Ser Ala His Gly Ser Ser Gly
325 330 335
Glu Gly Gly Ser Glu Ala Gly Ala Glu Glu Ala Asn Ser Val Ala Ala
340 345 350
Glu Asp Val Gln Leu Leu His Leu Ala Pro Glu Arg Arg Gln Ala Pro
355 360 365
Thr Thr Leu Arg Leu Ile Ala Pro Asp Leu Thr Ser Gly Gly Pro Gly
370 375 380
<210> 3
<211> 369
<212> PRT
<213> Streptomyces galbus
<400> 3
Met Gly Asp Ala Val Ala Ala Ala Ala Ser Ala Val Thr Glu Leu Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Ala Ala Asp Trp Asp Arg Ala Gly Arg Leu Pro Glu Glu
20 25 30
Val Val Arg Glu Leu Gly Ala Ala Gly Gln Leu Ala Pro Gln Ile Pro
35 40 45
Ala Arg Tyr Gly Gly Ala Gly Trp Ser Ser Ala Asp Asn Gly Glu Phe
50 55 60
Thr Ala His Val Gly Thr Leu Cys Gly Ser Leu Arg Ser Val Met Thr
65 70 75 80
Ser Gln Gly Met Ala Ala Trp Thr Val Glu Arg Leu Gly Asp Pro Ala
85 90 95
Gln Ala Ala Glu Leu Leu Pro Arg Leu Ala Ser Gly Asp Thr Ala Ala
100 105 110
Val Ala Phe Ser Glu Pro Arg Ala Gly Ser Asp Leu Ser Ala Ile Ala
115 120 125
Thr Thr Val Thr Val Asp Gly Asp Thr Leu Val Leu Asp Gly Leu Lys
130 135 140
Thr Trp Val Thr Ala Ala Glu Gln Ala Asp Leu Leu Leu Val Val Ala
145 150 155 160
Arg Met Gly Ala Asp Gly Ala Val Val Val Val Pro Arg Asp Thr Pro
165 170 175
Gly Val Gln Val Arg Arg Val Gly Asp Pro Met Gly Phe Arg Ala Ala
180 185 190
Gly His Ala Asp Ile Leu Leu Asp Gly Val Arg Leu Pro Leu Ser Ser
195 200 205
Leu Leu Gly Gly Gly Arg Gln Pro Leu Ser Leu Leu Val Thr Thr Ala
210 215 220
Leu Ala Phe Gly Arg Leu Ser Val Ala Trp Gly Cys Val Gly Ile Leu
225 230 235 240
Arg Ala Cys Val Ala Ala Ala Val Gly His Ala Ala Ser Arg His Gln
245 250 255
Phe Gly Arg Pro Leu Gly Arg His Gln Leu Val Ala Arg His Leu Ala
260 265 270
Asp Leu Trp Thr Gly Glu Gln Ile Ala Thr Arg Ala Cys Glu His Ala
275 280 285
Ser Arg Cys Trp Asp Glu Asn Ala Ala Asp Leu Ser Ala Ala Ile Val
290 295 300
Leu Ala Lys Tyr Val Gly Ala Glu His Ala Ala Arg Gly Ala Ala Thr
305 310 315 320
Ala Val Gln Val Leu Ala Ser Ala Gly Ala Arg Asp Gly His Val Val
325 330 335
Ala Arg Ala Tyr Arg Asp Ala Lys Leu Thr Glu Ile Ile Glu Gly Thr
340 345 350
Asp Glu Val Cys Gln Leu Ile Leu Ala Asp His Val Leu Gly Ser Arg
355 360 365
Gly
<210> 4
<211> 100
<212> PRT
<213> Streptomyces galbus
<400> 4
Met Thr Met Pro Ser Asn Arg Ala Val Pro Glu Pro Leu Gly Asp Pro
1 5 10 15
Gly Asp Ile Glu Arg Glu Leu Leu Arg Phe Leu Glu Leu Arg Thr Gly
20 25 30
Lys Thr Trp Ser Ala Asp Met Asp Val Phe Gly Ser Gly Gly Leu Ser
35 40 45
Ser Leu Phe Ala Met Glu Leu Val Val His Leu Glu Arg Thr Tyr Gly
50 55 60
Ile Ala Val Arg Gly Ala Asp Leu Gln Met Asp Asn Phe Arg Thr Ala
65 70 75 80
Arg Arg Met Ala Ala Leu Val Gly Arg Leu Arg Arg Pro Ala Val Gly
85 90 95
Gly Ser His Gly
100
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<212> PRT
<213> Streptomyces galbus
<400> 5
Met Ala Ala Gln Arg Gly Thr Pro Gly Thr Gly Arg Arg Leu Ala Val
1 5 10 15
Leu Gly Ala Gly Val Met Gly Ser Gly Ile Ala Ala Leu Ala Ile Gly
20 25 30
His Gly Met Ala Val Ser Leu Val Asp Leu Asp Arg Arg Arg Leu Asp
35 40 45
Glu Ala Pro Gly Arg Ile Asp His Gln Leu Arg Thr Ala Arg Leu Met
50 55 60
Gly Ala Leu Pro Glu Glu Ala Val Pro Gly Ala Leu Val Thr Gly Arg
65 70 75 80
Ser Leu Ala Asp Leu Met Thr Asp Gly Pro Ala Phe Thr Ala Val Val
85 90 95
Glu Ala Val Thr Glu Asp Pro Asp Ala Lys Ala Lys Val Leu Ala Asp
100 105 110
Val Ser Ala Leu Ala Ala Pro Gly Thr Pro Ile Ile Ser Asn Thr Ser
115 120 125
Ala Ile Pro Ile Asp Glu Leu Ala Arg Ala Thr Ala Arg Pro Val Asp
130 135 140
Leu Val Gly Thr His Phe Met Asn Pro Pro Cys Leu Ile Arg Thr Val
145 150 155 160
Glu Val Ile Arg Gly Thr Gln Thr Ser Glu Ala Thr Leu Asp Ala Leu
165 170 175
Arg Ala Leu Leu Ala Ala Leu Gly Arg Glu Ser Val Val Val Asp Asp
180 185 190
Ala Pro Gly Phe Val Thr Ser Arg Ile Leu His Pro Met Ile Asn Asp
195 200 205
Ala Val Arg Val Val Ala Ala Gly Thr Ala Ser Ala Glu Ser Val Asp
210 215 220
Arg Leu Met Gln Gly Cys Leu Gly His Pro Thr Gly Pro Leu Arg Thr
225 230 235 240
Ala Asp Leu Ile Gly Leu Asp Asn Leu Val Asp Ser Leu Trp Val Leu
245 250 255
His Gly Arg Thr Gly Asp Glu Gly Cys Arg Pro Cys Asp Leu Leu Leu
260 265 270
Glu Met Val Arg Ala Gly His Leu Gly Arg Lys Ser Gly Arg Gly Phe
275 280 285
Tyr Glu Tyr Glu Gly Glu Trp Ala
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<212> PRT
<213> Streptomyces galbus
<400> 6
Met Lys His Leu Leu Asp Ser Arg Ala Ile Ser Leu His Gly Ala Glu
1 5 10 15
Pro Ala Asp Thr Leu His Ala Pro Ser Arg Pro Tyr Pro Asn Gly Trp
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Phe Cys Val Ala Phe Ser Asp Glu Leu Arg Ala Gly Ser Leu Thr Thr
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Arg Arg Leu Ala Gly Ala Glu Val Val Leu Tyr Arg Thr Ala Lys Gly
50 55 60
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Gly Val Gly Gly Ser Val Glu Gly Glu Asn Ile Val Cys Pro Phe His
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Arg Thr Phe Asp Ile Ala Gly His Pro Gln Asp Val Ile Glu Asn Ala
165 170 175
Phe Asp Trp Gly His Leu Pro Ala Leu His Gly Leu Glu Glu Val Asp
180 185 190
Ile Gly Gly Leu Pro Val Thr Gly Glu Pro Ile Ser Thr Val Thr Ala
195 200 205
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210 215 220
Thr Val Ile Gly Leu Ala Thr Ile Ala Ala Arg Thr Val Leu Pro Ala
225 230 235 240
Gly Ala Gly Asn Leu Tyr Val Met Leu His Ala Thr Pro Thr Gly Pro
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
Arg Leu Leu Ser Glu Val Leu Gln Arg Val Gly Ser Val Asp Thr Gly
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Leu Ala Lys Gly Asp Gly Pro Ile Gly Arg Tyr Arg Gln Trp Ala Gln
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<213> Streptomyces galbus
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Met Arg Phe Ser Met Thr Asp Thr Ser Ala Val Ser Ala Glu Ser Val
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Leu Arg Asp Pro Leu Ala Phe Ile Thr Ser Leu Ser Gly Tyr Arg Glu
35 40 45
Met Val Arg Val Arg Leu Gly Pro Ser Ser Ala Val Met Ile Cys Asp
50 55 60
Pro Asp Leu Thr Arg Gln Val Phe Leu Asn Asp Arg Thr Phe Asp Lys
65 70 75 80
Gly Gly Pro Ile Tyr Asp Arg Ile Arg Glu Val Ile Gly Asp Gly Leu
85 90 95
Ser Thr Cys Ala Tyr Pro Leu His Arg Arg Gln Arg Arg Leu Cys Gln
100 105 110
Pro Ser Phe His Pro Ala Arg Leu Ala Gly Tyr Gly Ala Val Phe Ala
115 120 125
Arg Ala Ala Glu Ala Lys Ala Gly Ser Trp Arg Asp Gly Asp Val Ile
130 135 140
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Thr Met Phe Ser Gly Ala Leu Pro Glu Glu Thr Met Arg Arg Ser Leu
165 170 175
Ala Asp Thr Ala Val Val Val Ser Ala Phe Phe Arg Arg Met Met Thr
180 185 190
Pro Ala Leu Leu Arg Arg Leu Pro Thr Arg Arg Lys Arg Arg Tyr Asp
195 200 205
Asp Ala Arg Thr Arg Leu Ser Ala Thr Ile Ala Glu Ile Ile Ala Glu
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Arg Arg Ala Asp Pro Ala Asp His Ala Asp Leu Leu Ser Thr Leu Ile
225 230 235 240
Ala Ala Val Asp Glu Glu Ser Glu Asp Gly Arg Arg Gln Leu Asn Asp
245 250 255
Ala Glu Leu Ala Asp Glu Ala Leu Thr Phe Phe Leu Gly Gly Met Glu
260 265 270
Thr Thr Ala Ile Thr Leu Ala Trp Ala Leu His Leu Leu Ser Thr His
275 280 285
Pro Asp Val Gln Arg Arg Leu Lys Ala Glu Thr Asp Arg Val Leu Glu
290 295 300
Gly Gly Lys Leu Asp Pro Ala Arg Leu Pro Ser Leu Gly Leu Ala Ser
305 310 315 320
Arg Val Val Thr Glu Thr Leu Arg Leu Tyr Pro Pro Ala Trp Met Met
325 330 335
Thr Arg Val Val Arg Glu Asp Ala Glu Leu Gly Gly Val Arg Phe Lys
340 345 350
Gly Gly Ser Thr Ile Val Leu Ser Pro Tyr Leu Leu His Arg Arg Pro
355 360 365
Asp Leu Tyr Glu Glu Pro Asp Arg Phe Asp Pro Asp Arg Trp Leu His
370 375 380
Ala Gln Pro Asp Arg Ala Thr Tyr Ile Pro Phe Gly Ala Gly Ala Arg
385 390 395 400
Lys Cys Ile Gly Asp Gln Phe Ala Leu Asn Glu Ala Ile Leu Ala Leu
405 410 415
Thr Ala Ile Val Ala Arg Trp Glu Leu His Pro Val Gly Asp Arg Pro
420 425 430
Phe Leu Pro Lys Val Glu Thr Ser Leu Ser Ser Arg Gly Leu Arg Leu
435 440 445
Arg Leu Thr Glu Arg Arg Ser Ala Asp Ala Asp Gly Ala Glu His Gly
450 455 460
Ala Ala Ala Pro Leu Ser Ala Ser Gly Arg Pro Ser Thr Gln Pro Gly
465 470 475 480
Val Ala Ala Cys Pro Val Lys His Gly Glu
485 490
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<400> 8
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1 5 10 15
Ala Ala Val Ser Thr Asp Ser Ser Pro Ser Gln Met Ala Ala Arg Ala
20 25 30
Gly Leu Lys Ala Leu Arg His Ala Asp Val Thr Gly Ala Asp Leu Ser
35 40 45
Leu Leu Val His Ala Asn Phe Gln Asp Glu Asp His Tyr Ala Pro Ser
50 55 60
Ala Tyr Leu Leu Arg Val Leu Gly Gly Pro Asp Thr Asn Ala Ile Glu
65 70 75 80
Leu Gly Ala Ala Ser Asp Gly Gly Gly Ala Ala Leu Val Thr Ala Ala
85 90 95
Glu His Leu Thr Ala Arg Pro Ala Ser Lys Ala Ala Leu Val Thr Ala
100 105 110
Gly Val Arg Phe Arg Pro Glu Arg Trp Gly His Val Ala Glu Met Gly
115 120 125
His Leu Ala Gly Asp Ala Gly Ala Ala Ala Val Leu Thr Arg Gly Thr
130 135 140
Gly Phe Ala Arg Leu Met Ala Thr Ala Gln Ala Ala Gln Pro Gln Leu
145 150 155 160
Glu Val Leu Thr Arg Ala Arg Thr Ala Ala Asp Gly Ser Gly Arg Pro
165 170 175
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180 185 190
Gln Ser Thr Arg Arg Cys Val Glu Thr Val Leu Asp Glu Thr Gly Val
195 200 205
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210 215 220
Val Leu Asp Leu Leu Leu Gly Gly Ala Pro Leu Gly Leu Arg Ala Ala
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Asp Thr Ser Trp Thr Phe Gly Arg His Leu Gly His Val Gly Pro Cys
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Asp Val Leu Leu Ala Leu Asp Arg Glu Phe Arg Ser Gly Thr Leu Arg
260 265 270
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275 280 285
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<400> 9
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1 5 10 15
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20 25 30
Gly His Ser Cys Glu Phe Ile Arg Ala Ser Val Ala Lys Thr Ser Glu
35 40 45
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50 55 60
Ile Leu Ile Asn Asn Ala Ala Gly Gly Ala Phe Leu Pro Leu Phe Asp
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Gly Ala Ser Ile Leu Cys Leu Ser Ser Val Gly Ala His Gln Pro Val
115 120 125
Pro Gly Tyr Gly Pro Gly Gly Val Thr Lys Ala Ala Leu Glu Ser Leu
130 135 140
Val Arg Tyr Leu Ala Leu Glu Leu Val Gly Arg Gly Ile Arg Val Asn
145 150 155 160
Thr Val Leu Leu Gly Ser Val Ala Ser Glu Ile Val Val Asn Leu Asp
165 170 175
Gly Pro Ala Ala Arg Gly Gly Pro Ala Ala Ala Asp Glu Leu Leu Asn
180 185 190
Arg Thr Leu Ser Thr Pro Glu Ala Ala Arg Leu Ile Val His Phe Leu
195 200 205
His Glu Asp Ala Gly Phe Ile Thr Gly Gln Thr Leu Val Ala Asp Gly
210 215 220
Gly Ile Ser Ile Gly Gly Met Arg Gly Leu Arg Leu His Ser Arg Leu
225 230 235 240
Ala Asp Gln Val Ser Lys Pro Ala Arg Arg Pro Val Ala Ser Pro Pro
245 250 255
Ala Pro Ser Pro Pro Val Pro Thr Ala Pro Val Pro Thr Ala Pro Val
260 265 270
Ala Gly Leu Pro Ala Pro Gly Arg Pro Gln Pro Ala Arg Pro Ala Pro
275 280 285
Pro Ser Thr Ser Ser Ala Pro Ser Ala Ser Ala Ser Ser Ala Ser Ala
290 295 300
Pro Ser Gly Ser Ala His Val Ser Pro Pro Ala Pro Pro Thr Val Ala
305 310 315 320
Ala Pro Ala Val Ala Gln Ala Pro Asp Arg Ser Ala Ala Ala Glu Ala
325 330 335
Asp Pro Gly Ala Val Ala Val Val Gly Leu Gly Leu Ala Leu Pro Gly
340 345 350
Ala Asn Asn Ala Ala Glu Phe Trp Asp Arg Leu Arg Glu Gly Val Leu
355 360 365
Leu Ser Ser Glu Pro Ser Ala Phe Asp Leu Lys His Phe Trp Ala Pro
370 375 380
Thr Arg Glu Glu Thr Asp Ala Phe Tyr Val Arg Glu Ala Gly Tyr Leu
385 390 395 400
His Asp Phe Val Pro Asp Pro Ala Ser Val Ala Glu Pro Asp Gly Asn
405 410 415
Val Gly His Pro Gly Trp Pro Arg Thr Thr Arg Trp Leu Arg His Cys
420 425 430
Ala Val Gln Ala Leu Ala Gly Val Arg Arg Arg Pro Thr Asp Arg Trp
435 440 445
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450 455 460
Gly Val Val Leu Gly Asp Glu Tyr Arg Arg Met Val Arg Glu Ala Leu
465 470 475 480
Pro Asp Asp Pro Asp Gly Asp Trp Leu Ala Glu Leu Ala Asp His Ala
485 490 495
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Leu Asp Ala Ala Val Lys Ala Leu Arg Glu Gly Ser Cys Asp Ile Ala
545 550 555 560
Leu Ala Gly Gly Thr Ser Val Ile Glu Pro Ile Gly Phe Thr Leu Phe
565 570 575
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580 585 590
Arg Ala Ala Asp Gly Thr Leu Ile Gly Glu Gly Ala Val Ala Leu Val
595 600 605
Leu Lys Pro Tyr Ala Arg Ala Val Ala Asp Gly Asp Arg Val Leu Gly
610 615 620
Val Ile Arg Gly Thr Gly Leu Ala Ala Asp Gly Arg Gly Lys Gly Ile
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His Ala Pro Ala Thr Arg Gly Gln Glu Leu Ala Ile Asp Arg Ala Trp
645 650 655
Ala Asp Ala Gly Val Glu Ala Gly Asp Val Asp Trp Ile Val Ala His
660 665 670
Gly Thr Gly Thr Pro Val Gly Asp Glu Ile Glu Leu Arg Ser Leu Leu
675 680 685
Ser Arg Leu Gly Pro Arg Glu Arg Ala Cys Leu Leu Thr Ser Asn Lys
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Gln Val Phe Gly His Thr Gly Val Leu Ala Gly Leu Val Ser Val Ala
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His Ala Leu Val Ala Leu Glu Arg Gly Ala Val Pro Gly Gln Pro Val
725 730 735
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Pro Val Gly Asp Ala Pro Trp Pro Ala Asp Gly Ala Arg Pro Arg Val
755 760 765
Val Gly Val Ser Ser Phe Gly Leu Gly Gly Ala Asp Ala His Val Val
770 775 780
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785 790 795 800
Asp Val Arg Asp Asp Arg Glu Asp Leu Val Val Val Gly Trp Asn Thr
805 810 815
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820 825 830
Asp Gly Pro Leu Pro Glu Pro Gly Phe Gly Leu Pro Tyr Pro Leu Pro
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Ser Pro Arg Asp Val Arg Ile Pro Pro Leu Thr Met Arg His Met Asp
850 855 860
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Leu Gly Glu Pro Gly Thr Ser Leu Arg Pro Asp Thr Ala Ile Val Val
885 890 895
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Gln Ala Arg Leu Leu Lys Glu Tyr Leu Ala Lys Gly Met Ala Glu Ala
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Glu Gly Val Ile Pro Gly Asp Leu Asn Glu Asp Asp Phe Thr Gly Ala
945 950 955 960
Val Ser Cys Ile Leu Ser Gly Arg Ala Ala Asn Tyr Tyr Asp Phe Arg
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Gly Leu Gly Ser Ser Val Tyr Ser Gln Arg Asp Ser Ala His Thr Ala
980 985 990
Val Asp Leu Ala Leu Arg Gln Leu Arg His Arg Ala Cys Asp Leu Ala
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1345 1350 1355 1360
Ser Val Arg Ala Glu Val Pro Gln Cys Gly Gly Val Thr Leu Ile Ser
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1540 1545 1550
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1765 1770 1775
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1810 1815 1820
Pro Pro Arg Thr Val Ala Val Glu Ala Arg Val Val Arg Arg Glu Gly
1825 1830 1835 1840
Ala Arg Ala Glu Val Ala Val Arg Ile Thr Ala His Arg Ile Gly Lys
1845 1850 1855
Asn Gly Lys Val Leu Arg Phe Asn Asp Leu Leu Cys Glu Thr Arg Val
1860 1865 1870
Leu Leu Ala Asp Arg Phe Pro Ala Leu Thr Gly Pro Pro Asp Phe Ser
1875 1880 1885
Ala His Glu Pro Glu Pro Asp Phe Ala Met Pro Val Tyr Ser Pro Asp
1890 1895 1900
Pro Pro Ile Ser Leu Thr Gly Pro Phe Ala Gly Thr Gly Asp Tyr Ala
1905 1910 1915 1920
Arg Gly Pro Asp Gly Asn Ser Ala Arg Phe Arg Leu Asp His Asp Thr
1925 1930 1935
Trp Gly Pro Ala Leu Ala Gly Met Thr Val Pro Ala Ile Leu Leu Asp
1940 1945 1950
Ala Met Val His Leu Leu Leu Leu Pro Pro Arg Gly Asp Val Pro Pro
1955 1960 1965
Arg Val Gly Pro Met Ala Gly Leu Asp Glu Val Asp Leu Gly Gly Pro
1970 1975 1980
Gly Asp Asp Cys Arg Leu Ser Ala Leu His Pro Thr Ile Arg Leu His
1985 1990 1995 2000
Cys Asp Phe Ala Thr Gly Glu Leu Thr Ala Val Ala Gly Asp Gly Gln
2005 2010 2015
Val Leu Ala Arg Val Ser Gly Val Ser Ala Tyr Ala Leu Asp His Ser
2020 2025 2030
Gly Glu Leu Val Arg Pro Arg Gly Asp Ala Pro Arg Pro Val Arg Ser
2035 2040 2045
<210> 10
<211> 501
<212> PRT
<213> Streptomyces galbus
<400> 10
Met Ala Ala Pro Arg Gly Gly Leu Leu Arg Asp Leu His Arg Arg Tyr
1 5 10 15
Glu Thr Val Arg Asp Ala Leu Ser Arg Ile Asp Lys Ala Ala Glu Gly
20 25 30
Leu Gly Leu Pro Asp Ile Ser Ser Arg Leu Ile Glu Gly Asn Gly Thr
35 40 45
Ser Asp Gln Arg Gly Pro Glu Val Gln Tyr Leu Glu Ile Phe Ala Val
50 55 60
Ser Leu Ala Thr His Gln Met Leu Ile Ala Glu Gly Val Glu Pro Ile
65 70 75 80
Ala Ile Val Gly Gln Ser Ile Gly Glu Leu Trp Ala Leu Ala Ala Ala
85 90 95
Gly His Leu Ser Val Glu Asp Ala Ala Arg Leu Ala Val Ala Arg Ser
100 105 110
Gln Ala Leu Thr Arg His Ser Trp Lys Gly Lys Met Leu Ala Val Gly
115 120 125
Val Asp Gly Arg Arg Ala Glu Ser Leu Ala Gly Leu Ile Asp His Pro
130 135 140
Asp Leu Val Leu Ala Cys Glu Asn Ala Pro Arg Gln Ser Val Ile Ser
145 150 155 160
Gly Pro Glu Glu Leu Ile Arg His Val Glu Arg Val Ala Asp Thr Leu
165 170 175
Gly Trp Pro Ser Leu Pro Leu Asp Val Pro His Pro Thr His Thr Pro
180 185 190
Ala Met Ala Gly Ala Ala Arg Glu Leu Arg Ala Thr Ala Pro Arg Val
195 200 205
Ala Tyr Gly Ser Gly Arg Trp Arg Val Arg Ser Pro Trp Leu Gly Arg
210 215 220
Asp Val Ala Asp Asp Asp Pro Val Asp Leu Val Ala Gly Ala Leu Thr
225 230 235 240
Ala Arg Val Ala Met Leu His Thr Val Arg Glu Leu His Ala Ala Gly
245 250 255
Ala Asp Ala Phe Val Glu Cys Gly Glu Trp Pro Val Val Thr Lys Phe
260 265 270
Val Glu Ser Ser Ile Pro Gly Val Arg Cys Val Val Pro Leu Ser Asp
275 280 285
Ser Asp Pro Val Gly Ala Val Arg Ala Leu Ala Glu Asp Ser Thr Ala
290 295 300
Ile Gly Ala Phe Arg Ser Arg Leu Pro Ala Arg Pro Ser Glu Arg Leu
305 310 315 320
Leu Pro Ser Ala Arg Val Ser Ala Pro Glu Pro Asp Gly Pro Ala Ser
325 330 335
Pro Leu Thr Val Ala Val Thr Val Ala Glu Ala Pro Thr Pro Ala Thr
340 345 350
Ala Val Ala Thr Pro Ala Pro Leu Glu Ser Tyr Ala Glu Pro Thr Ala
355 360 365
Ala Ala Thr Ala Ala Thr Thr Ala Ala Ala Thr Ala Ala Val Ala Ser
370 375 380
Ile Ala Pro Ser Pro Thr Val Thr Ser Val Ala Gln Ala Ala Thr Ala
385 390 395 400
Thr Pro Val Ala Pro Pro Ala Ala Val Ala Pro Pro Ser Ala Gly Leu
405 410 415
Asp Tyr Glu Thr Val Leu Thr Glu Leu Arg Thr Leu Tyr Gly Asp Phe
420 425 430
Leu Gly Tyr Pro Pro Asp Leu Leu Gly Glu Asp Asp Gly Leu Glu Ser
435 440 445
Glu Leu Gly Val Glu Ser Leu Lys Gln Val Thr Leu Leu Gly Arg Val
450 455 460
Ser Asp Arg Tyr Asp Leu Pro Asp Leu Arg Ser Asn Ser Ser Leu Leu
465 470 475 480
Thr Val Gly Thr Leu Arg Arg Ile Ala Glu Ser Val Val Gln Gly Arg
485 490 495
Ala Glu Ala Ala Gly
500
<210> 11
<211> 41591
<212> DNA
<213> Streptomyces galbus
<400> 11
tcgaccgagt agggcgctgg atcggcgttc ttgagcgccg cctcgacttc gaacgcgccc 60
ttggaccctg gtgtggccga tgctcccgtc ttcgacgtgg atgcgggagc cttcccggca 120
tctccggcgc cacaaccggc aagcaggacg gcggccgcga ttccggccgt cacggtggcc 180
aagtggggca tggcggggga cctcctcagc gtggttcaca gaccgctgag tctgtcatgg 240
gcacagccgc gagccctcca ccccttctca cggcgccacc atcccttgct cgcccgcggt 300
gtccagcaat ccaggtcatg acccgggcgc cgcagtgagg gccttgtggg tcgactccag 360
gatcttctcc gacagttctg tgcccgccgt ggcccgtgcg agcaggatcg cgccgaccag 420
agtggccacg acgggaaggc cgtcggcggc gtcggtggcc atccacgcgg cgaattcctc 480
gactccggtc gcgtacgttg cgcgcacctc ctcagccagg ggctcgcgag ccatgtcccc 540
tgcgaatccc gcggtggggc aaccggtgcc gggctggtct cggtgctcgg ccgacaggta 600
gaaatcgagc agggcgccgc gcgcggtgtc gtgatcgccg tgggccgtgt cgaacgactc 660
caggagcagg tcgaggtccc cgaaagcggc atgggccgcc tcggccacca gcgcctcctt 720
ggacgagaac tgcttgtaga agccgccggt ggtcagcccg atggacttca tcagatcggc 780
aacgctgatg ccgttcacgc cgcgctcccg gaagagctgg gaggctgcgg cgaccgcgcg 840
cctgcggttc tcgagcgcct gagcctgcga aacgcgactc atcagtcacc tgcccacgtt 900
agatagtaaa tcgcatctat catatgcgaa gcgccgggca ggcggctgcg gcgccctctc 960
tctgggctct ttctctcggt ccatgcgcgg ccggccgagg cgggcccgcg cttattccga 1020
ggggtcgggg ggatctggag ccgggtcgag ggcggctcac gcggcgcacg gcgagtgtgc 1080
ggcgtgcggg tctccgccgg cgtgccgttc gccgtcccgc gcaatcgtcg cgagggcggc 1140
gatgcccgca atcgtccacg gcgaccatac gccggaaggg atctcccttc gcgcgcaccg 1200
gatcgggggc acctgatcga ctgtcgacgc cgtagtcccg tatgcgcgtc gaggtgctcc 1260
agccgcggac ggtgactgac ggcatcgggg ccgttgactg gcacgcttta gataactaac 1320
gtaatctaaa gcgaggtcga tggttccggc ccgctactca ttccgcgaga ccagaaatga 1380
gatccacctc catgaccacg cagaacaaga ccgcggtcgt caccggcgcg tccgccgggc 1440
tgggtgccgc ttacgcgcag cggctcgcag accggggcta cgacctggtg ctggtggccc 1500
ggaacaccgc gcggctggaa acgctggcgg cggacatccg cagccgtacg ggccgctcgg 1560
tggacgtcgt gaccgccgac ctcaccgacg cggcgcagat ctccgtggtc gaggagcgtc 1620
tgcggaccga cgagagcatc gaggtgctga tcaacaacgc cggcgggtcg ctgttcaccc 1680
cgctggcgac ctccgacgcc gcggacgccg aggcattgat caacctcaac gtgacctcgc 1740
tgaccaggct gaccatcgcg gtcctgccgg gcctgacagc ccgggggcac ggcaccgtgg 1800
tgaatgtgtc ctcggcgctt gctctcaaca tcctgcccgt cagtgccgtc tacagcggca 1860
ccaagagtta cgtgctgacc ttcactcagg cgctgcagca ggagctcgcc gagagccccg 1920
tcgtggtgca ggccgtgctg ccgggggccg tccgcacgga gttctgggac ggctccggcc 1980
tcgatctcgc ggcgtttccc gacgagtgga tcatgagcgc ggacgacgct gtggacgcgg 2040
cactcgccgg gctcgacgcg ggggagcccg tcaccatccc gtcactgcct cagatcagtg 2100
actgggaagc gttcgagaag gcccgtcaga cgctcgtccc gaacctgtcg cagcgggtcc 2160
cggctgatcg ttaccgcggc tgaacaccgc tcagactcgg gtgcggaagt cctgattgac 2220
cccgtgccaa cggcacgcgc gacggcggcg gtcatgtgcg ccccatgccc gaccacaccg 2280
tcgattaccc ctccacgcag tccggtgccg cctcggtgca gtcaccggtc cccttcggcc 2340
ccaccggtcc catccgaccc accggtccca tccgacccac cggtcgcata gagcccgccg 2400
gtcccatccg gccggtccgc gcgtaggtgc ccgccgcggg gctgcctgcc accccccccc 2460
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tcgccgggga gatctccctg ccgcaccgcc tggcgatggc ccccctgacg cggaaccggt 2580
ccacaccgga cggcgtgccg accgagctga acgccgagta ctacgcccag cgcgcctcgc 2640
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cgccaggcat ctacaccgat gagcacatcg ccggctggcg caaggtcacc gacgccgtgc 2760
acaaggccga cggacgcatc gtcatccagc tcatgcacgc cggacggatg tcccaccccg 2820
acaacacccc ccaccaccgg cagccggtgg ccccctccgc cgtccggccg gcgggcgaga 2880
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acggcgtcga gatccacggg gccaacggct acctggtgca ccagttcctg gccaccaaca 3060
ccaaccagcg caccgaccag tacggcggct ccgtcgacaa ccgcatccgt ttcgccgtcg 3120
aggtcgccac cgccgtggcc gacgagatcg gcgccggccg caccggtatc cggatctctc 3180
ccgggaaccc cttcaacgac atcgtggaga gcgacaccca cgagctgtac ccggcactcg 3240
tgagcgccct cgccccgctc gacctcgcct acctgcacat cgcccacggc ggcgacgacg 3300
aacttctgca caccctgcgc aaggtgtggc cgaccgccct cgtcctcaac cgggccggca 3360
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gcaccatggc gctcgccaac cccgacctgg tcgagcgcgt acgcgccggc gcaccgctga 3480
acactcccga ccccgccacc ttctacggcg gcgacgcaac cggctacacc gactacccca 3540
ccctcactgc ctgacaaacg ccggcgacac cggtcctggc gggccggtat gcccggatgg 3600
ccccatggag gtacacgtgt ctgagcacac tgcagttgaa ctgagcccgg aagcgatcca 3660
gttcgcggaa tggttggccg agggggcgaa gcccccgtcc gagctggatg cggcgcgcat 3720
ccagggggag caggtccatc tcgcggcccg ggagccggaa ggcgtcacct atcgggaggt 3780
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cctgctgcac agtcacgccg gcggctccgt tctggcgtcg gcacacgctg accggaagct 3900
cgcaggccat atcgccaagg ccgcaggggc ccccgtcctg gtcctggact tccggcgggc 3960
gccggaacac aagtacccgg ctcaggtgga cgacgtggag gcggccttca actggctgct 4020
ctccgaaggg tatgagccgg ggaacatcat cacgatcggc cactcgatcg gcgggttcct 4080
cgccgtcgcc gtggcgcttc gcctccgcga caagaagcaa ccgctgcccg gtgccatcgt 4140
gtcgatctcc ccgtggtgcg acctcgagat cgccaacgag accatcgcgt ccaacgccgg 4200
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cacgggcatc gagttcacgg acaccaggat caatctgaac cgtgcggacc tgagcggtct 4320
ccccccgacc ctcgtgtcct ggggaacgta cgaggtgctg gccggcgagg acgaggagtt 4380
cgccgcccgc gtcaaggacg ccggcatcga caccacgacc gtggtggtct ccggaggcca 4440
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ggcaggtagg cggaccggat gcccagctcc cagtcatggg ccagagaagc gagcgcggtc 4800
agtgttgatg gcctccaccg gcagcagact ccgggggcgg ggtcggtgcc ggccatcgat 4860
ctcaccctgg accggctcag ctccgttcgg cgtcaggggc tgtcggccga cgaccggggg 4920
cggtgccgct gcccgtgggg cggggtccgg gcaccgtgct cctcgaccgg acgaactggc 4980
tgggcgtttg gccgtaccgc ttcttgaagg cacgcacgaa gtgactgctg tcggcgaatc 5040
gccagcgggc ggcgagttcc gagatgctcg gtcggccaag cggtgacgcg agctcaaggc 5100
gtgcttgctc cagccgcctg cgccggatgt acgcgctcac cgactcctcg gccgcggcga 5160
acgcccggtg cagcgtcctg acggagacgt tgagttcgcg ggccagggcc gagggcgaga 5220
gctcaggatc tgtgaggcgg ctgtccacga tgcccttcgc cgcttcggcc agcgcggggg 5280
ccagccaggg ctcgtggtcg tcgaatccct gcgtcagcac gcccttggtc agttcgatca 5340
gagagttgcg ggcggcttgt agaccggcgg gcgtgaggtc gttcaggctc gcatccacca 5400
acccggcgta gcccatgagc agacgtactt cggtcgagtc ggccggtccg acgacaggcc 5460
ggtcgccgat cagcggcctg agctgtgcgg cgggcaggat cagcaccttc gccgtcgtgc 5520
gcggctccat ctcgaaccgc accggcggac cgttgtgccg cgcgatgaac tgcccggccg 5580
ggacggcgaa ctcaccgcgc tcgcgcggtc ggacgaagcg ccactcgccg cgccgcacca 5640
catgcacgag gacccggtcg tcgaggtggt gaccggcgcc ccgggtgccg ccggccaacg 5700
actcaccttg caggtccgcg atcaccgcgt cgtgcatctt ggaggcgcgg acggtgaccc 5760
ggaagtcacc ggaaccgagc ggttcgaggg gtggcagggg gagcgcctct ccgacctgtc 5820
cctcccactc gcgtcggaag acgtcgaagc cgtcccgcgc ggtgctcggg gcggtgacgt 5880
ccacgaagaa attcctgccc ggcccgccgg atctcggtgc ggtgcttcct gtgttgctca 5940
tggccgacgc cccaactcga caacggatcg caggacttac gcggcccgct tcacctttca 6000
ccttgccaca ccgcccttgg cactgacgtt ccatcggagt ggcgccgcag tacaagcgtg 6060
cgccgcaacg atctccctaa ggtgagcggt ggagcctgaa ccgcagagca cggggcggcg 6120
tcggaagccg aagccgacgc ggcgctactc cggcgtcgtg ccgctcaagg agccgccgcg 6180
tcgcctgaca ccggacctcc cgcccctcgt cccccacggg ctccgaccca tcctgaatcc 6240
tgagaggtta ctggctgtca tgactgacac gaccgacact acgcgtggca tcgaagtcga 6300
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cgcccagatc ctgcgggccc tggccgccct gcgcatagcc gatcatctcg ccgacggacc 6420
cctgacggcc gaggagttgg ccgagcgcga gggcagccat ccgcaggcca cgtaccggct 6480
gatgcgcgcg gccgcgtcct cgggcctgct gagctacgaa gggcgccgtc gcttcgccct 6540
caccgggcga gggcggctgc tgcgttcagg tgtgcccggc tccctgcgct cactggtact 6600
gacccagacg ggacacgcgc actggcaggc ctgggcccac ttccccgaag cggtgcggca 6660
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ggagaacgct gacgaggccg cgctcttcgc tcaggcgatg ggagacctgt ccggcctggt 6780
gacgcggggc gccgtgagcg cggtctccac cgtcggtgta tccaccgtgg tcgacgtcgg 6840
cggttcgaac ggtgacttcg tcctggcgct gatggaggcc gacccccagc tgagcggaca 6900
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gtccgaccgc ttccacgcgg tcgccggcga cttcttcgcc gaggtccctc cggcggacct 7020
ctacctcctg aagacgatcc tgcacgactg ggacgacacc cagtgcgccg tgatccttcg 7080
gaactgccgt tcagccgtga acgagggggg acgagtcctg gtcgtcgaga cggtcatcgg 7140
tgagatcggt gagcccgact tcgccacccg ggccgacatg accatgctcg ccatgacaaa 7200
cggcatggaa cgcgatctgg acgagttcga cgccctcttc gcggcctcgg gatggcgccg 7260
ctcgcggacg tatcccgtgg gtggcggata cttcggcatg gagctcctgg ccgtctgacg 7320
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acggccgggt cggccgtcga cgcggaactc gtcggtagcc ggtacctcac tgcggccgag 7440
cgtgcgaaaa tgcgctgttg tatttcacct gacgctcttc tagcctgtta ttcatggcga 7500
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acgtgctgga ggtcggtacg ttcaccggat acagcacgct ctgtatggcg cgtgccctac 7740
cgccgcaggg gcgactgatc acatgtgaca tcagtgagcg gtggcccgag atcggtgtcg 7800
agtactggcg gcgcgccggt gttcttgagc gaatcgaagt gcgtatcggc gaggcggcgg 7860
acacattgga gaaaatgtgc gccgacggat tgtccgaaag cttcggtctt gttttcatcg 7920
acgccgacaa ggtgaattat ccgcgctatt acgaactggc attgcggctg gtccggcccg 7980
gcgggctgct ggtggtggac aacacgctct tcttcggccg ggtcatcgac ccgctcgccg 8040
acgacgcgga caccgccggg gtacgtgagc tgaacgcgat catccgggac gaccgacgga 8100
tcgatgtctc catgctcccg gtggccgacg gcatcaccct ggtccgccgg aagtgagatc 8160
gggagcgatc agccggagcg tcgtgggcgc ctggcgccgc tcgggggcga ggtgcagcag 8220
ttggacgtcc tcggcggcga cggagttcgc ttcttcggct ccggcctcgc tcccgccctc 8280
gcccgagctc ccgtgggccg agccctcgcg gaccaggccc cggcaggcgc agggctggtc 8340
tccgaacccg gcgaaacggt aggcgatctc catcatgcga ttgcgctcgg tggcccggaa 8400
gtcggccagc aggtggacac cggcccgcgc cgcctggtcg gccagccagt tcaggaggat 8460
ggtgccgacg ccgaacgcca ccacacggca cgaggtggcg agcagcctga gatgccaggc 8520
ccgtgggtgc ttctccagca gcaccacgcc cacggcgccg tgcggtccga aacggtcggt 8580
gagcgtggtc accagcacct cgtggcccgg gtcggcgagc agggcgcgca gtgtcgcgtc 8640
cgggtagtgc accccggtcg cgttcatctg gctggtgcgc tgggtcagtt cctcgatccg 8700
cgccagctcc tccggcgtgg cgcgcgcgat gcgcagcacc atctccagcg accgcaggaa 8760
gtcctcgtgc gagccggtga accgcgcctg ttcgtccgtg cgccggaatc cggcctggta 8820
catggagcgg cgctgtcgcg cgtcgacggt cacggtcccg gggctgaact cgggcaggcc 8880
gggcaggagc gcggcgtcct cggcccggta gcagcgcacg tccgggaggc tgtgggccac 8940
ctcggcccgc tcggtcggct ggtcgtcgat gaaggcgacg gcgcggggag cgaagttcag 9000
gccttcggcg atccggcgta ccgcgtccga cttgcgcccc cagccgatct gcggaaggac 9060
gaagtagtcg gcgacgccca gcgcctccag ccgcgcccag gcgacggcgt ggtcgttgcg 9120
gctgcacacc gactggagga tgcctcgcgc gtccaggcgg gtgatcacct cgtggatccc 9180
ttgggccagg acgacgtcgt cgccttccag caacgtgccg ttccagagcg tgttgtcgag 9240
gtcccagacc aggcacttca cggtcgcggt cgccgccgcc cccctcacgc tcatccccgg 9300
ctcccgagca catggtcggc caggatcagc tggcacacct cgtcggtgcc ctcgatgatc 9360
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tgctcgcagg cccgggtggc gatctgctcg ccggtccaca gatcggccag atgccgggcg 9600
acgagctgat gccgccccag cggccggccg aactggtgcc gggacgcggc gtggccgacg 9660
gccgccgcga cgcaggcccg caggattccg acgcaccccc aggcgacgga gagccgcccg 9720
aaggccaggg cggtcgtcac cagcagggac agcggttgcc gcccgccgcc cagcaggctg 9780
ctcaggggca gccgcacccc gtcgagcagg atgtccgcgt gcccggccgc cctgaagccc 9840
atcggatcgc ccacccgccg cacctggacc ccgggggtgt ccctcggcac cacgaccacg 9900
gcgccgtccg cgcccatccg cgcgacgacc aggaggagat cggcctgctc ggcggcagtc 9960
acccacgtct tgaggccgtc gagcacgagg gtgtcgccgt cgacggtgac ggtggtcgcg 10020
atggccgaca ggtcgctgcc cgcccgcggt tcactgaagg ccacggccgc cgtgtcgccc 10080
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gcggcgacgg cgtcacccat gggagccgcc cacggccggt cgccggagcc ggccgaccag 10440
cgcggccatc ctccgcgcgg tccggaagtt gtccatctgg agatccgcgc ctcgcacggc 10500
gatgccgtac gtccgctcca gatgcaccac cagctccatg gcgaagagcg acgacagccc 10560
gccggagccg aagacgtcca tgtcggccga ccaggttttc ccggtacgca gttcgaggaa 10620
ccgcagcagt tccctctcga tgtcgccggg gtcgcccagg ggctccggta ccgcgcggtt 10680
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ccgaggtgcc ccgcccgcac catctccagc agcaggtcgc aggggcggca gccttcgtcg 10800
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gcggtgcgca acggacccgt cggatgcccc aggcacccct gcatgagccg gtcgaccgac 10920
tcggcgctcg cggtgcccgc cgccaccacc ctcaccgcgt cgttgatcat cgggtgcagg 10980
atccggctgg tgacgaagcc gggcgcgtca tcgaccacga cggactcccg gccgagcgcc 11040
gcgagcagcg cccgcagcgc gtccagcgtg gcctcgctcg tctgggtgcc ccggatgacc 11100
tcgaccgtcc gtatcagaca gggcggattc atgaagtggg tgccgaccag atccaccgga 11160
cgggccgtgg cccgggccag ctcatcgatg gggatcgccg acgtgttcga gatgatcggg 11220
gtgcccggcg cggccagcgc ggacacgtcc gccagaacct tcgccttggc gtcggggtcc 11280
tcggtgacgg cctcgacgac cgccgtgaac gccgggccgt cggtcatcag gtcggcgagt 11340
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tcgaccaacg acaccgccat cccgtgcccg atcgccagcg cggcgatgcc cgaccccatc 11520
actcccgctc cgagcacggc caatcgccgc ccggtgccgg gcgtacccct ctgcgctgcc 11580
atatcctccc tcttccggtg ctggaccccg acgcctgtgc tcactcctcc gagcggctcg 11640
cctcggagcg ctcgggccga ggcgggacca ggtcgcccgt gggttccgtg tagaactgct 11700
gcgcccactg ccggtaccgg ccgatcggac cgtcgccctt ggcgagccgg ggacgcgcga 11760
cgtgttcctg gtggtgccac atcagcaggt ccgcgccggt gtcgacgctg cccacccgtt 11820
gcaggacctc gctgagcagc cgggccaggg gcgtgaccgc cgggcggccc agccagtccg 11880
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ggccggtcgg ggtcgcgtgg agcatcacgt agaggttccc cgcgcccgcg ggcaggaccg 12000
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gcatcatcgt gttgcgcgcg gtcgcggtga ccgtgctgat cggttccccg gtcaccggca 12120
ggcccccgat gtcgacctcc tcgagaccgt gcagggccgg cagatgcccc cagtcgaacg 12180
cgttctcgat gacatcctgt gggtggccgg cgatgtcgaa cgtgcgatga ctgaacggtt 12240
ggcggtcgtc catcgggaag agcgggacgt cccactgcgg gggcatcccc agggcgtgcg 12300
accacacata gaccgagccg ttggcctcgc acaccgggta ctgcgtcagc gacgccttcg 12360
gcggctgctg gtcgtaaccc gtgcgcacac aggtaccgga cgggtcgaac gcgaaccggt 12420
ggaaggggca gacgatgttc tcgccctcga ccgatccacc gacgccgagg tgcgctccga 12480
ggtgcgggca ctggggcctg accgcccgca gcacgccctt ggccgtccgg tagaggacga 12540
cctcggcgcc cgcgagccgt cgggtggtga gggatccggc ccgcagctcg tcgctgaagg 12600
ccacacagaa ccagccgttc gggtaagggc gcgagggagc gtgcagggtg tcggccggct 12660
ccgcaccgtg caggctgatc gccctggagt cgagcagatg cttcaccagg ggcttcaggt 12720
gaggtctcat gggctcactc cccgtgcttc accgggcagg cggcgacgcc cggctgtgtg 12780
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gcggacctcc gctcggtgag ccgcaggcgc agcccccgtg aactcaggct ggtctccacc 12900
ttcggcagga acggccggtc acccaccgga tgcagctccc agcgggcgac gatggcggtc 12960
agcgccaaga tggcctcgtt gagggcgaac tggtccccga tgcacttgcg ggcaccggcg 13020
ccgaacggga tgtaggtggc ccggtcgggc tgggcgtgga gccagcggtc cgggtcgaac 13080
cggtcgggct cctcgtagag gtcgggcctg cggtgcagca ggtaggggct gagcacgatg 13140
gtgctgccgc ccttgaaccg cacacccccc agttcggcgt cctcccgcac gacgcgggtc 13200
atcatccagg ccggcgggta caaccgcagc gtctcggtca cgacccggga ggccaggccg 13260
agcgagggaa gacgcgcggg gtcgagcttc ccgccctcca gaacccggtc ggtctcggcc 13320
ttcagccgcc gctggacgtc cggatgcgtg gagagcaggt ggagcgccca ggccagggtg 13380
atggccgtgg tctccatgcc accgaggaag aacgtgaggg cctcgtcggc gagttcggcg 13440
tcgttcagct gccgtcggcc gtcctcgctc tcctcgtcga ccgccgcgat cagtgtggag 13500
agcaggtcgg cgtggtcggc cgggtcggcc cgccgctcgg cgatgatctc cgcgatggtg 13560
gcggacagcc gggtgcgggc gtcgtcgtaa cgccgcttcc gccgggtcgg cagccgccgc 13620
agcagggccg gcgtcatcat ccggcggaag aacgcgctga cgacgaccgc ggtgtccgcc 13680
agggaccgcc gcatggtctc ctccggcagc gcgccgctga acatcgtctc catggtggcc 13740
cgcgtggtga gcgtcatcat ctcctgggtg acgtcgatga cgtcgccgtc acgccaggag 13800
cccgctttgg cctcggccgc ccgcgcgaac accgcgccgt acccggcgag ccgggccggg 13860
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aggccgtcgc cgatcacctc gcggatccgg tcgtagatcg ggccgccctt gtcgaaggtc 13980
cggtcgttga ggaacacctg ccgggtcagg tcgggatcgc agatcatcac ggcggaactc 14040
ggaccgagcc ggacgcgaac catctcgcgg tacccggaca gcgacgtgat gaacgccagc 14100
ggatcacgca gcagaggcaa cgcgtgaccc agcagcggcc acgcccgcgg agcgagcgga 14160
accgactcgg cggagaccgc actcgtgtct gtcatggaaa acctcacttc ttcgtcgagc 14220
ggccggccgg ccccccggtg gcgggatcgc gggtgatctc cagcagcgcg gtggtccagc 14280
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ggaactcccg gtcgagggcc agcagcacgt cgcacggtcc gacgtgaccg aggtgccggc 14400
cgaaggtcca gctggtgtcg gcggcgcgca ggcccagggg cgcaccgccg agcagcaggt 14460
ccagcacctc cgccccgatg gcgatgggca ccacgcgcgc gatgccctcc ggccgtacgc 14520
cggtctcgtc gaggacggtc tccacacagc ggcgcgtgga ctgccgcagc gcgtcgacgt 14580
gcggcatcag tccggtctcc tggacgagca gcggccggcc gctgccgtcg gccgccgtcc 14640
gggcccgggt cagcacctcc agctgtggct gagcggcctg cgcggtcgcc atcagccgcg 14700
cgaagcccgt gccccgggtg aggacagcgg cggcaccggc gtcaccggcc aggtgtccca 14760
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cgtcgctggc ggcgcccagc tcgatcgcgt tggtgtccgg gcctccgagc acccgcagca 14940
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tgtcacgaac ggaccggtcg tggcgcgtcg ccgcggggcc ggacgagttc tccgctgtgg 15300
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acccgcggcg gaacgtcacc gcgcggcggc agcagcaaca ggtgcaccat cgcgtccagc 15540
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gcgctcgcgt acgcgaggta ctcgttgacg gcgcagtagt cgatgtcgcc gggtgcgggg 16560
gcgagcgtcg ccagggtgct gaagttgcac cagatccggg gcatgcgtcc ggccagggcc 16620
cgcttcaggt tgcggtagcc ggtcgccttg gtggcccgca cggcccggaa gtccgggagg 16680
gtcttggcgt gcagcgcacg tgagcgcagg tcgaggacgg tgttgatgag caggtcgatc 16740
cgtccgtgcc ggtcgaggat ctcgccgagg acggcggtgg tgccttcggc gtcgaggacg 16800
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cggcgcacct ccaggcgtgc ctgggccttc tcgtaggcga cgcgtaactc gcgcagggag 16920
gcgtcgggac gccgtcggcg ttcggcggcg atgaactcgg tctgcggtgg cagcggggcg 16980
tcgctctccg gcagcggggt gcggccgatg acgtagacat ggggccggtc ggtgccgagg 17040
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gcgccggagg gcagcgggac gccgtcggcc ggggacacgg ggtcgtcggc cacggccagg 17160
gcgaaccagt cgtccccgcg gcaggccagc gtgtgcgtcg gcacccggac ggcgcccgcc 17220
cgtgcgaact ggtccagggc ggtcgccaca tccgccgcgt cgctgatcag ggtcaccccg 17280
ccgcactgcg gcacctcggc gcgtacggag cggacgagtc cggtgaacag cccactcagc 17340
gggggtggca gatcgtccgg cagctctccg agcagcagta cgccgagcga gccgccggaa 17400
cgcagcgcgg gcagcgccgc ctgcagcgtg gtgaacgcga ggtcctggag gtcctccgcc 17460
cgggcggcct cggcctcccc gtacgcgtcg tcgtcgacgg gcagccggca caggacccgg 17520
atgtgccgcg ggacgaacgg caggccgctc agcgcgccgg gcgcttcctc gggcgggaca 17580
tgggcggtcc ccgcgactcc gggtcgcggt gaccagacgg cggtgtccgg gccggtgacc 17640
gcctcggcga gttccggcgc gtcggtgatg acgacggtgc ccggcgggat cgacggcacg 17700
gccgactccg tgggcggccg gtcggtcggc acgagccgga aggtctgacg gcggccggtg 17760
aagtcctcgg tccgttccgt gccggccggt cccgacccgg cctgctcgga ctcggtgcgg 17820
tccggcccgg gacggtccga cccggcaggt tcggggttgg tgtgcgccga gtcggtgtgc 17880
ccggagccgt cggctactgt gcccgcgcgt tctgggtggt cgcgtaccgc gtcggcccac 17940
tgcgggccgg tgagctcggc ctggttcccc gtctcccccc ggtccgctcc gggagcgtcc 18000
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gcggtgtccg tcctggtcac gacggcttcg agaaccgtca gcagggcgtc cagggacaga 18120
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atcagggcga ggtcgcaggc ccggtgccgg agttggcgca gtgccagatc gacggctgtg 18420
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ccggtgcccc ggatgacacc gagcacccgg tcgccgtccg ccacggcccg cgcgtacggc 19560
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ttgaccgccg cgtccagggc gaacagccca ctggcacagg ccgcgtcgag agtcaggtgc 19800
tgtgtgtcgc cggggatcag cccgcgcaac gcgttgcgga cgacggacgc gggcaggtat 19860
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gccagccagt cgccgtccgg gtcgtcgggg agcgcctcgc gcaccatgcg ccggtactca 19980
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tcggtctcct cgcgggtcgg agcccagaag tgcttcaggt cgaaggcgga cggttcgctg 20280
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ccaccgatgc tgatgccgcc gtcggcgacg agggtctgcc cggtgatgaa accggcgtcc 20760
tcgtggagga agtgcacgat caacctggcc gcctccggcg tcgagagggt gcggttcaat 20820
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tcgctggcga cggagcccaa cagcacggtg ttgacccgga tgccccggcc gaccagttcc 20940
agggccagat agcggaccag tgactccagg gcggccttgg tgacaccacc ggggccgtag 21000
cccgggaccg gctgatgtgc cccgacgctc gacaggcaga ggatgctcgc gccctcccgt 21060
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ccgcgtgcag ttcgcggacc gtgtgcagca tggcgacgcg ggccgtgagc gcgccggcca 22260
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gggatctgct ggcggccggt gtcggggtac gggtgctgga ggccggtgac gaggtcggcg 24060
ggcggatgcg ttcggaccgg gtcgaggggt tcgtggtgga ccgcgggttc caggtggtca 24120
acacgtcgta cccacagctc cggcgccgcg tcacactgaa ggacctgaaa ctgcggccct 24180
tcacccccgg cgtcctcatc cagggcccct cgggccggct ccgcttcagc gaccccaccc 24240
gccggccccg tacgttgccc gacctgctgc cgggccgtct cgccgggcct cgtgacctgg 24300
ccgccctcgg cctgttgtcc gcccgcgaca tgctctcgtc cccccgtcgg ctgaaacggc 24360
tcgcggacac caccacccgc accgcgctcg cggacgccgg gttctccgag agcttcgtcg 24420
aaggcttctt ccgccccttc ctgtcgggag tcttcctgga ggacgacctg gagacctcag 24480
cccggatgtt ccacctggtg tggcggagca tgctgcgcgg caccctgtgc ctgcccgccg 24540
agggcgtcgg agcggttccc cgggccctcg cggccgccct gccccagggt gccgtgcggc 24600
tggagagccc cgtggcgggg ctcacggacg acggggtgct gacggccgag ggtcgggaga 24660
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aggtcgccct tcccggctac cggaccgtga cgacgtacta ccacgtcact tcgcgttccc 24780
cgctcgggga gccgaccctg ctcgtggaca cccggcgccg gttcctgaac acctgtgtcc 24840
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tcggccgagg ggaggaggac ggggagcccc gggaggcggg ggagcggcgc atccgggagg 24960
ccctcggcga ggcgtacggc accgggacgg gcgactggag cctgctgacc gtccgccgca 25020
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cgtcgtcccg tcggggtggg caatcgctgg gagccgatgt cgtcggggtg ggcggtcgtc 25260
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cgccgccctg gtactgcccc actacctggt cagcgccccg caggacggcc tcgtggagca 26760
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cgatcgcgtt cacactggtc agggtcacgg gggcaccgct gctgtgggtc ggtctgccga 27900
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cgccgagttc cgtcgcgcca ccggcctgcc caccgcgacc aacatgatcg ccaccgactg 29760
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cctcgtcgcg gatcgcgtcc agctcgcggc cgagctcctc gatctgctcc gcggtcaggt 37140
gggcggtggg gtcgatggcg gtcaaggtgc tcctaccgtt cgatgtcaca ggggcccgcc 37200
gcggcggaca cgcaggtctg gatgaggacg cccggctcgg cctcggtgat ctcgccggtg 37260
cgcaggtcgc ggacggcgcc cgccttgagc ggcgtgacgc agccgaagca gatgcccatg 37320
cggcacccgg acggcatgag cacgccggcc tcctcgccga catccagcaa cggcgtggcg 37380
ccgtccgcgt cgacggtctt gccggtggtg ctgaacgtga cctcgccacc gtcgccgacg 37440
gcgacgacgc tggggcggaa gcgctcggtg tgcagacgct ctcggacgcc gtgctcggtc 37500
cagtgctcct cggcggcgtc gagcaggccc gtgggcccgc aggcccaggt ctctcgctcg 37560
gcccagtcgg gcacgagttc gtcgagacgg gagatgtcga gcatgccgtg cgtgtcggtg 37620
tgcagctcgg tgagacgcag cttcttgtcc gcgaccaggc cgtgcagatc gtcgcggaag 37680
atcacgtctt gcgggcgtgg cgcggagtgg accatgacga cgtcgtcgaa ctcggtgtcg 37740
cgcagcatgc ccatcacagg cgtgatgccg ctgcccgctg tcagatagag caccttggcg 37800
ggcttggcct ccggcagcac gaagtcaccg gtcgcctggt cgagctggat cagcgtgccc 37860
ggtttcgccc tgcggaccag gtggttgctg accttgccgt ccgggatcgc cttcacggtg 37920
atcgagacgc ggccgtcctg gcggtctgtc ggtgaggtga gcgagtaggc gcgccacagg 37980
cgcaccccgt cgacgtcgac cccgatccgc acgtactgac cggctgtgtg gccgcgccag 38040
ccccgtcccg gcctgatcac gatggtcgcg gcgtcacgtg tctcggggtg cacggcctcg 38100
atacgacccc gcaggtcggc gcccgcacgc agcgggctga ccaggtcgag gtagtccgac 38160
ggcagcagcg gcgtcgtgac catctccagc attttccacg ccctgctgcg gagggctgca 38220
ctcgtcatga gtccagcttg atgcgccgca gggcgtaaag tcctgtccgc aggacgtgaa 38280
tctgatcggc tgaattgttc acagggaaca aaatatgagc catgtaatcc ggagggccac 38340
cgaactggcc ctggatgaga cgacggtcgc cgcgctccgg gccgcgctga gaaccaccgc 38400
cgacgaggtc gtccaggcga tcatcgacga ggtccctcct tacgccaacg ccctgtcggg 38460
ccgcatgggc ggcaccatcc gacgagccgt ccgcaccgcc ctgggcaact acctggacgt 38520
ggcgagcggg aacgccacgg gcggcgacgc cggtgacgcg gcttacgagc tgggccgcgg 38580
cgaggtgcgc gacggccgtt cgatggacgc cctgctcagc gcctaccgcg tcggcgcccg 38640
cgtggcctgg cgatgcctgg ccgcgggcgc cgtacccgca ggtctgcccg ccgccgaggt 38700
cgccaagttc gccgagctga ccttcgccta catcgacgag ctctccgccg cgagcgccgc 38760
gggccacgcc gacgaactgg ccgcccgggg ccgggtgcat gagcgtcacc tggaacaact 38820
ggtccgggac ctcctcgccg gcgcgagccc ggacgtgctg caggcatctg tccaacgggc 38880
agggtggcag cctccggtct cgctgaccgc ggtcctgctg cccgccgccc aggcccggcc 38940
tgcctaccgg gtgctcgacc cgagcaccct cgtcctcgac gatctgccgg actcctcggg 39000
cgtgctgctc gtccccgatg ccgaccgacc acatctcttg cgccagctgg ccgaccgcac 39060
cgccgtggtc ggcccggccc ggccatggac tcgtgcgtcc gcctcgtacg cacgagccgt 39120
gcgcgcgcgt tcactctcct gcgacattcg cgacaccgag gagcacctgc ccgagctggt 39180
actgagcgcc gacggggacg cactcgcgga cctgcgcgcc cgagccctcg caccgctgcg 39240
gaccctgcct gtcgcgaccg cgcggcggct ggaggagacc ttgcgggcgt ggctgctgca 39300
ccaggggagg cgggacgagg tggcggcggc gttgttcgtc catccccaga ccgtccggta 39360
ccggatgtcg cagctgcggg agctgtttcc cgacctcggg tcgccgcacc gggtccttga 39420
actgacgctg gcggtcggtc ttcgggacag ctgacacgtt cttcagacct tctgcggctc 39480
gccgcgggcc aggagtccct gccctcatgc ccctacggcc ggaagatcac ccgacccggc 39540
ggttgcccgc cgttccccgc cacatgaggc attcgaggag catcacccca gctgatgtgg 39600
gccgtgcgga cccgccgtgg ggggactcgt cgtcctctcg aagccagacg acggcaggcg 39660
cgacacctgg cgtgcgcgcc tgccgcattg cggcctttca gtcccgcggt gcgacgcgga 39720
tacggttccc gtcaggatcg gctgcgagga aggtcagccc gaaccccgcg tcgtgaggct 39780
cgcgcacgat cgtgacgccc ttggactgcc actgcttgaa gatcgcgttg agctcgtcgg 39840
gaccaccgtc gatggccagg cagacctcac tggtacgcgg gacgtccggt gacagatgct 39900
cgaactggcc agaccacaga ccgaggtcag cgcccggccc gaggtcgaag gtgatgtatc 39960
ccggagtctc gaacgagggg ctcatgtcga ggaggtcgct cgtgggagcg cacctgcatt 40020
gcgggtctgc actgcgtgtc ttcactgcgc tcatcgcgca ggccgacgcc cgaagaggac 40080
ctcgattggg ccgtctcggt tgattccacc ctcgtgggcg ctcaccagca cgctgccgga 40140
gctcacggcc tcgatcacat tggccgcagc acgagcggga acgccgcagg gcgatcggga 40200
tcgtccagaa cggcggcttc ctggcgtgcg gtcattccga tggagacgga gtcgtcccat 40260
ggccatccgc gagaacttgc ccgaagctcg tgtcaggagc gagtcttccg atgggcgagg 40320
aaagcgaaga ccgccagaag cgctccgcct gctgctgcga tcactccgag cacaatgggc 40380
acagtgtcgc ccgtgactgc tcccgcgagg cacgcacata tgccgccgat gatcgcaatc 40440
acggaaaagg ttcgcactcc cctgatcgca tccctcatgg acgcgtccct ccctcgcaac 40500
cagcgctcct tccgaatccg caggaaaatg ttgggtcgtt gagcctgaca gtgcacgagg 40560
acgccgcagc cggacgtggg ccgtcgcggc gtccgccgtg aggggtggtg acgcctgcct 40620
accggaccgg tgtgtccggc agcccccacg gctcctccgg cacgggatcg gggttgtagg 40680
agtggtggta gctctccggc ggcgcgaggt aggtgacggg cagcccgccg gtgtcgatga 40740
cgatctggtc cacggcgatc gcgggatcga ccatgaagag ccgtaggacg tgttcgccgg 40800
gttcggtgac ggtcacggtg gtggtcagtt tctcgatgcc gtcctcgacg ttgcgggccc 40860
aggcgtcgcc gcggttgccc gtggcgacgg cctgtcccgc caggacggcg acaggctggt 40920
cgtcgagggc cagggcgacc cggcgacggc cgcgttcgtc gagggagggg agcctgaagg 40980
cagtgacccg gaagtccccg gtgccggcga aacggacccg gtagcgcaac tccggtgccc 41040
gagtggtgag ttcgtcggtg atcggcgccg ccgtcgaagg caccgcctcc atggcggccg 41100
tacggcggcc gagcccgcgt accgtccgcc agcgggcccc gccgcgcgcc acccggtggt 41160
cgtagtgcgc ggcgtccatc gagacatacc catgggcctc gacgaagccg cgcgcccgcc 41220
ggcgcgcccg cctcccgtcg ttgagcaccc gtaggggtac ggcgaggctg ttgcctgcac 41280
cggtgacggt caccgtggct tcgtgtgcgc ccttgggcac ccgctcccag tcgatctcca 41340
cggacacccg ggtctgttcg gtcatcgtgc cgccggaggt gctcagccgt acccacgggt 41400
ggcttgcctc ggcagcccag tccaggggca gaaagccggt gttgaacacg tcgacgaagc 41460
gtcggtcacg ggtgtaggag gagaaggaca gaggccgtcc ggtgccggtc tcgttgccct 41520
cggccgccac gcccagaccc gaggtctcct tccgggcgac cctggtgacg ctcggacgtc 41580
ctggcgcctt g 41591
Claims (15)
- 갈보놀라이드(galbonolide) 생합성에 필요한 단백질인 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자.
- 제1항에 있어서, 상기 서열번호 9로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자는 베타-케토아실 신테이즈(β-ketoacyl synthase)를 코딩하는 것을 특징으로 하는 유전자.
- 제 1항의 유전자를 포함하고, 서열번호 11의 핵산서열을 가지는 갈보놀라이드의 생합성에 필요한 단백질을 코딩하는 유전자 클러스터.
- 제1항의 유전자의 발현벡터를 포함하는 갈보놀라이드(galbonolide) 생합성 증진용 조성물.
- 제4항에 있어서, 서열번호 1 내지 5로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 메톡시말로닐-아실 캐리어 단백질(methoxymalonyl-acyl carrier) 생합성 유전자의 발현벡터가 추가로 포함되는 것을 특징으로 하는 생합성 증진용 조성물.
- 제4항에 있어서, 서열번호 6 및 서열번호 7로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 유전자의 발현벡터를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 생합성 증진용 조성물.
- (a) 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항의 조성물을 갈보놀라이드 생합성 균주에 도입시켜 형질전환시키는 단계; 및
(b) 상기 형질전환된 균주를 배양하여 그 배양액으로부터 갈보놀라이드를 회수하는 단계; 를 포함하는 갈보놀라이드의 생산방법.
- 제7항에 있어서, 상기 균주는 스트렙토마이세스 갈부스(streptomyces galbus), 마이크로모노스포라 나라시노엔시스(Micromonospora narashinoensis) 및 마이크로모노스포라 칼시아(Micromonospora chalcea)로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 생산방법.
- 제7항에 있어서, 상기 갈보놀라이드는 갈보놀라이드 A 및 B를 포함하는 것을 특징으로 하는 생산방법.
- 서열번호 1 내지 5로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 메톡시말로닐-아실 캐리어 단백질(methoxymalonyl-acyl carrier) 생합성 유전자, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9 및 서열번호 10 로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자로 구성된 군으로부터 선택되는 1이상 유전자의 발현벡터에 의해 형질도입된 갈보놀라이드 생합성 균주.
- 제10항에 있어서, 상기 균주는 스트렙토마이세스 갈부스(streptomyces galbus), 마이크로모노스포라 나라시노엔시스(Micromonospora narashinoensis) 및 마이크로모노스포라 칼시아(Micromonospora chalcea)로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 갈보놀라이드 생합성 균주.
- 갈보놀라이드(galbonolide) 생합성에 필요한 단백질인 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자.
- 제12항에 있어서, 상기 서열번호 8로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자는 베타-케토아실 신테이즈(β-ketoacyl synthase)를 코딩하는 것을 특징으로 하는 유전자.
- 갈보놀라이드(galbonolide) 생합성에 필요한 단백질인 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자.
- 제14항에 있어서, 상기 서열번호 10으로 표시되는 아미노산 서열을 코딩하는 유전자는 아실 트랜스퍼레이즈(acyl transferase)를 코딩하는 것을 특징으로 하는 유전자.
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KR1020100112950A KR101610970B1 (ko) | 2010-11-12 | 2010-11-12 | 갈보놀라이드 생합성에 관여하는 유전자 |
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KR (1) | KR101610970B1 (ko) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2009130520A1 (en) | 2008-04-25 | 2009-10-29 | Novalis Ltd. | Method for the annotation of natural product gene-clusters and for the generation of novel biologically active chemical entities from dna sequences in silico |
-
2010
- 2010-11-12 KR KR1020100112950A patent/KR101610970B1/ko not_active IP Right Cessation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2009130520A1 (en) | 2008-04-25 | 2009-10-29 | Novalis Ltd. | Method for the annotation of natural product gene-clusters and for the generation of novel biologically active chemical entities from dna sequences in silico |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
Clinical Microbiology and Infection, (2003. 1.) Vol. 9, No. 1, pp. 15-32. |
Journal of Molecular Catalyst B: Enzymatic II (2001) pp. 237-242. |
Also Published As
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KR20120051490A (ko) | 2012-05-22 |
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