KR101575170B1 - 테트라미졸을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 - Google Patents

테트라미졸을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR101575170B1
KR101575170B1 KR1020120120760A KR20120120760A KR101575170B1 KR 101575170 B1 KR101575170 B1 KR 101575170B1 KR 1020120120760 A KR1020120120760 A KR 1020120120760A KR 20120120760 A KR20120120760 A KR 20120120760A KR 101575170 B1 KR101575170 B1 KR 101575170B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
differentiation
pharmaceutically acceptable
acceptable salt
tetramisole
hydrochloride
Prior art date
Application number
KR1020120120760A
Other languages
English (en)
Other versions
KR20140054809A (ko
Inventor
박성섭
권기선
이광표
하종성
성혜영
이승민
Original Assignee
한국생명공학연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국생명공학연구원 filed Critical 한국생명공학연구원
Priority to KR1020120120760A priority Critical patent/KR101575170B1/ko
Publication of KR20140054809A publication Critical patent/KR20140054809A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101575170B1 publication Critical patent/KR101575170B1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4188—1,3-Diazoles condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. biotin, sorbinil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/03—Organic compounds
    • A23L29/045—Organic compounds containing nitrogen as heteroatom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/03—Organic compounds
    • A23L29/055—Organic compounds containing sulfur as heteroatom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/20—Elemental chlorine; Inorganic compounds releasing chlorine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Abstract

본 발명은 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근원세포(myoblast)의 분화 촉진용 조성물, 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포에 처리하는 단계를 포함하는 근원세포의 분화 촉진 방법, 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포에 처리하여 근원세포를 분화시키는 단계를 포함하는 분화된 근원세포의 제조방법, 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 테트라미졸은 근원세포의 분화를 촉진하여 근관을 형성할 수 있으므로 근육 약화를 방지할 뿐만 아니라, 효과적으로 근육 기능을 개선할 수 있다. 따라서 이를 포함하는 약학적 조성물은 근육 약화 관련 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

Description

테트라미졸을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for preventing or treating muscle weakness diseases comprising Tetramizole}
본 발명은 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근원세포(myoblast)의 분화 촉진용 조성물, 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포에 처리하는 단계를 포함하는 근원세포의 분화 촉진 방법, 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포에 처리하여 근원세포를 분화시키는 단계를 포함하는 분화된 근원세포의 제조방법, 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
근력의 약화는 노화와 함께 진행되는 근감소증(sarcopenia), 단백질 대사의 불균형이나 근육사용 감소에서 유발되는 근위축증(muscle atrophy), 기아, 소모성질환(암 등), 노화와 함께 진행되는 심위축증(acardiotrophy)등이 있다.
근감소증(sarcopenia)은 노화가 진행되는 동안 근육량(skletal muscle mass) 감소에 따른 근력의 저하를 일컫는다. 근감소증의 가장 큰 특징인 근육량의 감소뿐만이 아니라, 근섬유의 종류 변화도 관찰된다. 나이가 들어가면 타입 1과 타입 2가 비슷한 비율로 감소하는데 반해, 근감소증이 오면 타입 2의 근섬유 두께에는 큰 변화가 없지만 타입 1 근섬유 두께는 눈에 띄게 감소한다. 이러한 근감소증은 노인들 사이에서 일어나는 노쇠와 기능 장애를 유발한다고 보고되고 있다(Roubenoff R., Can. J. Appl . Physiol . 26, 78-89, 2001).
근감소증은 다양한 요인에 의해 유발되나, 각각의 요인들에 대한 연구는 아직 미진하다. 성장 호르몬의 감소 또는 신경학적 변화(neurological change), 생리활성(pysical activity)의 변화, 대사의 변화, 성호르몬의 양 또는 지방이나 카타볼릭 싸이토카인(catabolic cytokines)의 증가와 단백질의 합성과 분화의 균형 변화에 의해 유도된다(Roubenoff R. and Hughes V.A., J. Gerontol . A. Biol . Sci . Med. Sci . 55, M716-M724, 2000). 근감소증의 가장 큰 특징인 근육량 감소의 원인으로는 위성 세포의 활성 (satellite cell activation) 감소가 중요한 원인으로 손꼽힌다. 위성 세포란, 기저막(basement membrane)과 근섬유의 근(sarcolemma) 사이에 위치하고 있는 작은 단핵 세포이며, 이들은 부상 또는 운동과 같은 자극에 의해 활성화되어 근원세포(myoblast)로 증식하며, 분화가 진행되면 다른 세포와 융합되어 다핵의 근섬유를 형성한다. 따라서 위성 세포의 활성이 감소함에 따라 손상된 근육을 재생하는 능력이나 분화 신호에 대한 반응이 떨어지게 되고 그 결과 근육 형성이 저하된다.
근위축증(Muscle atrophy)은 영양결핍이나 장기간 근육을 사용하지 않은 경우에 유발되는데 정상적인 단백질의 합성과 분해의 균형이 붕괴되어 단백질이 분해됨으로서 나타나게 된다.
한편, 심위축증(acardiotrophy)은 기아, 소모성질환(암등), 노쇠했을 때 유발되는데 심근섬유는 마르고 가늘어 지고 핵은 농축되어 대소부동이 된다. 따라서 근속(muscle fascicle)도 용적이 줄고 심장 전체가 작아지며 심외막하의 지방조직은 뚜렷하게 감소하고 관상동맥은 굽어진다. 심근섬유의 핵 양단에 갈색의 색소로서 소모성 색소(리포푸스친)가 나타나고 지방조직의 감소와 함께 심장 전체가 갈색조를 나타낸다.
근감소증의 치료방법으로는 크게 3가지를 들 수가 있다. 첫 번째는 운동이다. 운동은 단기적으로 골격근의 단백질 합성 능력을 증가시키며, 노인들의 근육의 힘이나 운동성을 증가시킨다고 보고되고 있다. 그러나 장기적 치료방법에 부적절하다(Timothy J. Doherty, J. Appl . Physiol . 95, 1717-1727, 2003). 두 번째는 약물치료로서 테스토스테론(Testosterone) 또는 아나볼릭 스테로이드(anabolic steroid)의 사용이 가능하나 이는 여성에게는 남성화를 유도하며, 남성의 경우 prostate symptoms 등 부작용을 나타낸다. 다른 승인된 처방법으로 DHEA(dehydroepiandrosterone) 와 성장 호르몬이 있는데 SARMs(Selective Androgen Receptor Modulators)을 포함하는 부위에서 치료법으로 가능하다는 연구가 보고된 바 있다(D.D. Thompson, J. Musculoskelet Neuronal Interact 7, 344-345, 2007). 또한 식이요법이 치료법으로 알려져 있지만 영양평가에 의하면 영양실조나, 현대 식습관은 적당한 total body mass(총체질량)을 유지하기 위해 부적절하다.
최근에는 위성 세포를 분리하여 체외에서 분화시킨 후 체내에 도입시키는 줄기세포치료법(stem cell therapy)과 직접 체내의 위성 세포를 활성화하여 근육 분화(myogenesis)를 촉진시켜 근육을 유지하거나 강화시키는 방법이 근감소증과 같은 근력약화를 치료할 수 있는 방법으로 대두되고 있다 (Shihuan Kuang, and Michael A. Rudnicki, Trends in Molecular Medicine 14, 82-31, 2008).
따라서 근육의 근력약화 관련 질환을 치료하기 위해 근원세포의 분화를 촉진할 수 있는 물질의 개발이 필요하다.
이러한 배경하에, 본 발명자들은 근원세포의 분화를 촉진함으로써 근육량을 증가시키고, 근육기능을 효과적으로 회복시키는 근육의 근력 약화 관련 질환 치료제를 개발하기 위해 예의 노력한 결과, 테트라미졸 하이드로클로라이드를 포함하는 조성물이 근원세포의 분화를 촉진하여 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 하나의 목적은 근원세포(myoblast)의 분화 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 근원세포의 분화 촉진 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 분화된 근원세포의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근원세포(myoblast)의 분화 촉진용 조성물을 제공한다.
다른 양태로서, 본 발명은 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포(myoblast)에 처리하는 단계를 포함하는 근원세포의 분화 촉진 방법을 제공한다.
또 다른 양태로서, 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포에 처리하여 근원세포를 분화시키는 단계를 포함하는 분화된 근원세포의 제조방법을 제공한다.
또 다른 양태로서 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또 다른 양태로서 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다.
이하, 본 발명을 자세히 설명한다.
하나의 양태로서, 본 발명은 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근원세포(myoblast)의 분화 촉진용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용가능한 염"이란, 화합물이 투여되는 유기체에 심각한 자극을 유발하지 않고 화합물의 생물학적 활성과 물성들을 손상시키지 않는 화합물의 제형을 의미한다. 상기 약학적 염은, 약학적으로 허용되는 음이온을 함유하는 무독성 산부가염을 형성하는 산, 예를 들어, 염산, 황산, 질산, 인산, 브롬화수소산, 요드화수소산 등과 같은 무기산, 타타르산, 포름산, 시트르산, 아세트산, 트리클로로아세트산, 트리플로로아세트산, 글루콘산, 벤조산, 락트산, 푸마르산, 말레인산, 살리신산 등과 같은 유기 카본산, 메탄설폰산, 에탄술폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산 등과 같은 설폰산 등에 의해 형성된 산부가염이 포함된다. 예를 들어, 약학적으로 허용되는 카르복실산 염에는, 리튬, 나트륨,칼륨, 칼슘, 마그네슘 등에 의해 형성된 금속염 또는 알칼리 토금속 염, 라이신, 아르지닌, 구아니딘 등의 아미노산 염, 디시클로헥실아민, N-메틸-D-글루카민, 트리스(히드록시메틸) 메틸아민, 디에탄올아민, 콜린 및 트리에틸아민 등과 같은 유기염 등이 포함된다.
본 발명에서 상기 염은 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)일 수 있다.
본 발명에서 "테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)"는 IUPAC(International Union of Pure and Applied Chemistry)의 명칭이 6-phenyl-2,3,5,6-tetrahydroimidazo[2,1-b][1,3] thiazole hydrochloride이며, 화학식은 C11H13ClN2S이고 분자량이 240.76인 화합물이다. 일반적으로 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)는 대식세포(macrophage)의 주화성과 T 임파구(T-lymphocyte)의 기능을 향상시키는 것으로 잘 알려져 있으며, 구충제로 사용되고 있다.
본 발명에서 사용되는 "근원세포 분화"란 단핵인 근원세포(myoblast)가 융합을 통해 다핵의 근관(myotube)를 형성하는 과정이다. 상기 근관을 형성하는 분화 초기단계의 세포는 마이오신 D(MyoD)와 같은 근원성 전사인자(myogenic transcription factor)의 발현이 증가하며, 중기에는 마이오신 G(MyoG)가 증가한다. 분화가 거의 끝나는 후기에는 마이오신 중쇄(Myosin Heavy Chain)의 발현이 증가한다
본 발명의 근원세포 분화 촉진은 2 % 말 혈청이 포함된 DMEM 분화용 배양액에 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 테트라미졸 하이드로클로라이드가 처리된 배지를 사용할 수 있다. 바람직하게는 상기 분화배지에 0.1 내지 2μM 테트라미졸 하이드로클로라이드를 사용할 수 있으며 더욱 바람직하게는 0.1 내지 0.3μM 테트라미졸 하이드로클로라이드를 사용할 수 있다.
본 발명의 일실시예에서는 상기 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 테트라미졸 하이드로클로라이드를 0.0001, 0.001, 0.01, 0.1, 0.2, 1.0, 2.0 μM의 농도별로 체외 근원세포의 분화 배지에 처리한 결과, 0.2μM 농도에서 급격한 분화 촉진 효과를 확인할 수 있었다(도 3).
본 발명의 일실시예에서는 테트라미졸 하이드로클로라이드를 근원세포에 1μM의 농도로 처리한 후, In-cell ELISA를 이용하여 분화 촉진을 탐색한 결과, MYH 배수변화 값이 음성 대조군(DMSO)에 비해 높았고, 양성대조군(인슐린)과는 유사하여, 테트라미졸 하이드로클로라이드가 근원세포 분화를 촉진함을 확인하였다.(도 1 및 도 2)
따라서 본 발명의 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 테트라미졸 하이드로클로라이드는 근원세포의 분화촉진에 유용히 사용할 수 있다. 또한 상기 조성물에는 근원세포 분화 촉진에 방해되지 않는 한, 추가의 성분이 포함될 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포에 처리하는 단계를 포함하는 근원세포의 분화 촉진 방법을 제공한다.
테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 근원세포의 분화 촉진 방법은 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포에 처리하여 분화를 촉진하는 것을 특징으로 한다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포에 처리하여 근원세포를 분화시키는 단계를 포함하는 분화된 근원세포의 제조방법을 제공한다.
테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 염의 농도는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 상기 제조방법은 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포에 처리하여 근원세포를 분화시키는 단계를 포함하는 분화된 근원세포를 제조하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일실시예에서는 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 테트라미졸 하이드로클로라이드를 근원세포의 분화 배양액에 처리하여 3일 동안 분화시킨 후 위상차 현미경 및 면역세포화학염색법을 실시한 결과, 상기 근원세포가 분화된 많은 근관(myotube)을 확인하였으며 또한 단백질 MYH3의 발현이 매우 높게 나타남을 확인하였다(도 6 및 도 7). 또한 상기 분화촉진용 조성물을 근원세포에 처리한 후 웨스턴 블롯을 실시하여 MYH3 단백질의 양을 확인한 결과 분화촉진 약물로 보고된 인슐린의 발현량보다 매우 높게 발현됨을 확인하였다(도 8 및 도 9).
따라서, 본 발명은 근관을 형성할 수 있으며 MYH3 단백질을 발현하는 분화된, 근원세포를 체외에서 제조할 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 염의 농도는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명에서 사용된 용어 "근력 약화"란 한 개 또는 그 이상의 근육의 힘이 감소된 상태를 의미한다. 상기 근력 약화는 어느 한 근육이나, 몸의 한쪽, 상지나 하지 등에 국한될 수도 있고, 전신에 걸쳐 나타날 수도 있다. 또한 근피로나 근육통을 포함하는 주관적인 근력 약화 증상은 이학적 검진을 통해 객관적인 방법으로 정량화될 수 있다.
본 발명에서 근육의 근력 약화 관련 질환이란 근력약화로 인해 발생할 수 있는 모든 질환을 의미하며, 예를 들어 근감소증, 근위축증 또는 심위축증(acardiotrophia)을 들 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
따라서 본 발명의 조성물은 근감소증, 근위축증 또는 심위축증의 예방 또는 치료용으로 사용될 수 있다.
구체적으로 본 발명의 근감소증이란, 노화에 따른 점진적인 골격 근육량의 감소를 의미하는 것으로서, 직접적으로 근력의 저하를 유발하며 그 결과 각종신체기능의 감소 및 장애를 일으킬 수 있는 상태를 의미한다.
또한 근위축증은 사지의 근육이 거의 좌우대칭적으로 점점 위축되어 가는 것으로서, 척수에 있는 운동신경섬유 및 세포의 진행성 변성을 유발하여 근위축성 측삭경화증(Amyotrophic lateral sclerosis, ALS)과 척수성 진행성 근위축증(Spinal progressive muscular atrophy, SPMA)을 일으킬 수 있다.
본 발명의 심위축증은 심장이 외부적이거나 내부적인 요인에 의해서 위축되어 가는 것으로서, 기아, 소모성질환, 노쇄했을 때 심근섬유가 마르고 가늘어져 지방조직의 감소를 유발하는 심장의 갈색위축 증세를 일으킬 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "예방"이란 상기 조성물의 투여에 의해 근육 약화 관련 질환을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "치료"란 상기 조성물의 투여에 의해 근육 약화 관련질환에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 투여를 위하여, 상기 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 테트라미졸 하이드로클로라이드 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 약학적 제형으로 제조될 수 있다.제형의 제조에 있어서, 활성 성분을 담체와 함께 혼합 또는 희석하거나, 용기 형태의 담체 내에 봉입시키는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 어떠한 제형으로도 적용가능하나, 비경구용으로 제조하는 것이 바람직하다. 비경구용 제형으로는 주사용, 도포용, 에어로졸 등의 스프레이 형일 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 약학적 조성물은 주사용 제형이다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.
주사형 제형으로 제제화하기 위해서는 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여용으로 제제할 수 있다.
본 발명의 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 조성물은 근력 약화 관련 질환이 발병한 개체 또는 발병 가능성이 있는 개체의 근력 강화가 필요한 부위에 직접 주입될 수 있다. 또는 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 조성물은 체외 근원세포에 적용하여 분화된 근원세포를 제조한 후, 분화된 근원세포를 근력 약화 관련 질환이 발병한 개체 또는 발병 가능성이 있는 개체의 근력 강화가 필요한 부위에 주입될 수 있다.
또한, 본 발명의 조성물에는 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 치료에 방해가 되지 않는 한, 추가 성분 예를 들어, 근력 약화 관련 질환의 치료제로 알려져 있는 물질들이 포함될 수 있다.
본 발명의 조성물에서 테트라미졸은 테트라미졸 하이드로클로라이드 형태로 포함될 수 있으며, 농도 0.1 내지 2μM 테트라미졸 또는 테트라미졸 하이드로클로라이드를 사용할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 0.3μM의 테트라미졸 또는 테트라미졸 하이드로클로라이드를 사용할 수 있다.
바람직하게 본 발명의 약학적 조성물은 근원세포의 분화를 촉진하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일실시예에서는 상기 약학적 조성물을 일차 근원세포 및 근세포주 C2Cl2에 처리하여 근원세포가 근관을 형성하고 양성대조군(인슐린)보다 MYH3 단백질의 발현량이 높게 발현됨을 확인하였다.(도 8 및 도 9)
이러한 결과를 통하여, 상기 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염인 테트라미졸 하이드로클로라이드의 근원세포 분화유도는 분화 촉진 물질로 알려진 인슐린보다 분화촉진효과가 높게 나타남으로써 상기 테트라미졸 또는 테트라미졸 하이드로클로라이드가 근원세포의 분화를 촉진하는데 효과적이며 근육 약화 관련 질환의 예방 치료에 유용할 수 있음을 알 수 있었다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 클로로크레졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 개체에 투여함으로써, 근육의 근력 약화 관련 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근육의 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물에 관한 것이다. 즉, 본 발명의 조성물은 근육 약화 관련 질환을 예방 또는 개선하기 위하여 근육 약화 관련 질환의 발병 단계 이전 또는 발병 후, 질환 치료를 위한 약제와 동시에 또는 별개로서 사용될 수 있다.
테트라미졸 또는 이의 식품으로 허용가능한 염 및 염의 농도는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 식품 조성물에서 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염인 테트라미졸 하이드로클로라이드의 농도는 0.1 내지 2μM을 사용할 수 있으며 더욱 바람직하게는 0.1 내지 0.3μM을 사용할 수 있다.
바람직하게, 본 발명의 조성물은 근감소증, 근위축증 또는 심위축증의 예방 또는 개선용으로 사용될 수 있다.
바람직하게, 상기 식품 조성물은 근원세포(Myoblasst)의 분화를 촉진하는 것을 특징으로 한다.
본 발명에서 사용되는 용어 '개선'이란 치료되는 상태와 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 적어도 감소시키는 모든 행위를 의미한다.
또한 본 발명의 식품 조성물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15중량% 이하, 바람직하게는 10중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함 한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 당업자의 선택에 의해 적절하게 결정될 수 있다.
상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등 을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율 또한 당업자에 의해 적절히 선택될 수 있다.
또 하나의 양태로서, 본 발명은 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 개체에 투여함으로써, 근육의 근력 약화 관련 질환을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 근원세포의 분화를 촉진하여 근관을 형성할 수 있으므로 근육 약화를 방지할 뿐만 아니라, 효과적으로 근육 기능을 개선할 수 있다. 따라서 이를 포함하는 약학적 조성물은 근육 약화 관련 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은, 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)의 일차 근원세포(myoblast)에서의 근세포 분화 촉진효과를 나타낸 그림이다.
도 2는, 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)의 근세포주 C2Cl2에서의 근세포 분화 촉진효과를 나타낸 그림이다.
도 3은, 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)의 농도별 근세포 분화촉진 효과를 나타낸 그림이다.
도 4는, 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)의 세포배양용 배지(GM)에서의 세포 독성을 나타낸 그림이다.
도 5는, 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)의 분화 배지(DM)에서의 세포 독성을 나타낸 그림이다.
도 6은, 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)의 근세포 분화 촉진 효과를 현미경으로 확인한 그림이다.
도 7은, 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)의 근세포 분화 촉진 효과를 면역세포화학법(Immunocytochemistry)으로 확인한 그림이다.
도 8은, 일차 근원세포(myoblast)에서의 마이오신 중쇄 3(MYH3) 발현량을 비교한 그림이다.
도 9는, 근세포주 C2Cl2에서의 마이오신 중쇄 3(MYH3) 발현량을 비교한 그림이다.
이하 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
실시예 1: 근원세포( myoblast ) 배양
실시예 1-1. 일차 근원세포 분리 및 배양
일차 근원세포를 분리하기 위하여 1 내지 5일 된 생쥐를 70 % 에탄올로 세척한 후 CO2를 사용하여 질식시켰다. 상기 실험쥐의 뒷다리 발목 윗부분과 무릎을 절단하여 1 X 인산완충용액(phate-buffered saline, PBS)에 담궈 멸균 상태의 핀셋으로 피부와 뼈를 제거하여 근육조직을 모았다. 모아진 근육조직을 1 X PBS로 3번 세척한 후 잘게 조각을 내었다. 상기 조각난 근육조직에 1 ml 콜라게나제(1.5 U/㎖), 1 ㎖ dispase (2.4 U/㎖), 5 ㎕ CaCl2(1 M)를 혼합한 효소용액을 첨가한 후 37 ℃에서 30 분 동안 반응시켰다. 효소반응시킨 근육조직을 나일론 그물(80 μM)을 사용하여 필터링하여 뼈 등을 걸러내고, 800 rpm에서 5 분 동안 원심분리하여 세포를 수확하였다. 상기 세포를 2 ml F10 배지(Invitrogen)에 다시 풀어 100 mm 일반 배양용기로 옮긴 것을 P1이라 하였으며, 1시간 간격으로 0.1 % 젤라틴이 코팅된 배양용기로 옮기는 과정을 P5까지 반복하였다. 상기 세포들은 7 ℃에서 5 % CO2가 포함된 배양기에서 배양하였으며, 2일에 한 번씩 새로운 F10 배지로 교체해 주었다. 세포를 계대할 때는 0.005 % 트립신을 사용하여 세포를 배양용기에서 분리시켰고, 근육세포로 분화를 유도할 때에는 5 % 말 혈청(horse serum)이 첨가된 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium, Invitrogen)을 사용하였다.
실시예 1-2. 근원세포 주 C2Cl2 배양
C2Cl2는 C3H종의 생쥐에서 얻은 근원세포주로서, 근세포 분화 연구에 널리 사용되고 있다.
정상적인 세포 배양용 배지(GM, growth media)는 10 % 어린 소혈청(fetal bovine serum)이 첨가된 DMEM을 사용하였으며, 분화용 배지(DM, differentiation media)는 2 % 말 혈청이 포함된 DMEM을 사용하였다.
실시예 2: 근원세포( myoblast ) 분화촉진 유도
실시예 2-1. In - Cell ELISA 를 이용한 분화 촉진 탐색
일차 근원세포(Primary myoblast) 및 근원세포주 C2Cl2 자체에서 발현되는 마이오신 중쇄 3(myosin heavy 3,MYH3)의 단백질 양을 비교하기 위하여 In-Cell ELISA 방법을 실시하였다.
0.1 % 젤라틴으로 코팅되어 있는 96-웰 플레이트에 웰 당 5 x 103 일차 근원세포를 배양하였고, 24 시간 후에 5 % 말 혈청이 첨가된 DMEM으로 바꿔 분화를 유도하였다. 24시간 마다 DMSO(5 %) 또는 처리 농도의 화합물(chemicals), 또는 인슐린이 포함된 DMSO(5 %)를 첨가한 새로운 배지로 교체하였다. 분화 후 3일째에 배지를 제거하고, 100 ㎕ 파라포름알데하이드(paraformaldehyde, 3.7 %)를 상온에서 15 분 처리하여 세포를 고정시켰다. 인산 완충 용액(PBS, 1 X)으로 세척을 한 후, 0.1 % 사포닌, 3 % tiriton X-100, 0.009 % sodium azide가 포함된 100 ul 인산 완충 용액 막 투과용액(permeabilization buffer)을 상온에서 15 분간 처리하여 세포막에 구멍을 뚫었다. 상기 세포를 다시 1 X PBS로 세척한 후, 0.1 % 알부민(bovine serum albumin)이 포함된 100 ㎕블로킹 버퍼(blocking buffer)로 상온에서 1 시간 처리하였다. 상기 세포를 1X PBS로 3번 세척한 후, 1:500으로 희석된 1차 항체 (SC-20641, Santa Cruz Biotechnology) 100 ㎕를 첨가하여 37 ℃에서 2 시간 반응시켰다. 반응 시킨 세포를 다시 1X PBS로 3번 세척한 후, 1:10,000으로 희석한 2차 항체 (Goat anti-Rabbit IgG-HRP) 100 ㎕를 첨가하여 37 ℃에서 1 시간 반응시켰다. 상기 세포를 1X PBS로 3번 세척한 후, 50 ㎕ TMB solution(Gen Depot #T3551)을 첨가하여 20분 동안 반응시켰고, 50 ㎕ 정지용액 (stop solution, Gen Depot #T3552)을 첨가하여 반응을 멈추게 하였다. 상기 세포의 MYH3 단백질 level를 분석하기 위하여 485 nm 파장에서 흡광도를 측정하여 결과를 분석하였다(도 1 및 도 2).
상기 실험 결과, DMSO(음성 대조군)와 비교해 보았을 때, 1 μM 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)의 분화촉진 효과는 0.6 μg/㎖ 인슐린(양성 대조군)을 처리하였을 때와 유사하였으며 MYH 배수변화(fold change)값이 1.222 (n=6)임을 확인하였다(도 1).
또한, 상기 방법으로 테트라미졸 하이드로클로라이드(0.2 μM)에 의한 생쥐 근세포주인 C2Cl2의 분화 촉진 정도를 측정하여 본 결과 DMSO(음성 대조군) 대비로 0.6 μg/㎖ 인슐린(양성 대조군)에 의한 증가와 유사한 MYH 배수변화(fold change)값이 1.633(n=5)임을 확인하였다(도 2).
이러한 In-Cell ELISA 분석 결과를 통하여 테트라미졸 하이드로클로라이드는 약물 운반체인 DMSO보다 MYH 배수변화(fold change)값이 높아 분화를 촉진하고 있었으며 그 촉진 정도는 이미 보고된 약물인 인슐린과 유사함을 확인할 수 있었다.
실시예 2-2. 테트라미졸 하이드로클로라이드를 이용한 분화 유도
테트라미졸 하이드로클로라이드을 일차 근원세포에 0.0001, 0.001, 0.01, 0.1, 0.2, 1.0 , 2.0 μM의 농도로 처리한 후 MYH3의 양을 측정한 결과(n=3) 테트라미졸 하이드로클로라이드는 0.2 μM 농도에서 급격한 분화촉진 증가효과를 보였으며 2 μM까지 증가하고 있음을 확인할 수 있었다(도 3).
실시예 3: 테트라미졸 하이드로클로라이드의 근원세포( myoblast ) 독성 효과
인슐린과 테트라미졸 하이드로클로라이드에 대한 세포독성을 측정하기 위해 세포 사멸 시 분비되는 효소인 LDH(lactate dehydrogenase)를 측정하는 Cytotox 96 Non-Radioactive Cytotoxicity Assay(Promega) 키트를 사용하였다.
세포 배양용 배지(GM)를 사용하여 96-well 플레이트에 well 당 5 x 103 개의 일차 근원세포를 배양하였고, 24 시간 후 세포 배양용 배지 및 분화용 배지(DM)에서 인슐린 및 테트라미졸 하이드로클로라이드를 농도별로 처리하였다. 각각의 시료 50 ㎕의 배지를 96-웰 flat bottom plate로 옮겨준 후 50 ㎕ 기질용액(reconstituted substrate mix)를 첨가하여 상온에서 30분간 반응시켰다. 완전한 세포사멸을 위한 대조군으로 50 μM H2O2를 처리하였다. 반응 30 분 후 50 ㎕ 정지용액(stop solution) 을 상기 세포에 첨가한 후 490 nm에서 흡광도를 측정하여 라이시스 버퍼(lysis buffer)에 의한 세포사멸시에 나타나는 LDH 값에 대한 비율로 표시하였다(도 4 및 도 5).
실시예 3-1. 세포 배양용 배지( GM )에서의 세포 독성
일차 근원세포의 배양용 배지(GM)에서 측정된 테트라미졸 하이드로클로라이드의 농도별 세포 독성은 농도에 따라 미약하게 증가하고 인슐린의 독성에 비해 약간 높았지만 2.0 μM로 처리한 경우에도 완전한 세포사멸에 이르는 라이시스 버퍼(lysis buffer)를 처리한 값에 비해 9.1 % 밖에 되지 않아 세포 독성이 매우 미미함을 확인하였다. 대조군인 H2O2는 95 % 정도의 세포사멸을 나타내었다(도 4).
실시예 3-2. 세포 분화용 배지( DM )에서의 세포 독성
일차 근원세포의 분화 배지(DM)에서 측정된 테트라미졸 하이드로클로라이드의 농도별 세포 독성은 농도에 따라 별 차이가 없고 인슐린에 비하여도 높지 않았다. 2.0 μM로 처리한 경우에도 완전한 세포사멸에 이르는 라이시스 버퍼(lysis buffer)를 처리한 값에 비해 4.0 % 이내로 근세포 분화에 따른 독성이 매우 미미함을 확인하였다(도 5).
실시예 4: 테트라미졸 하이드로클로라이드의 근원세포( myoblast ) 분화 촉진 확인
실시예 4-1. 위상차현미경( Phase contrast microscopy )
테트라미졸 하이드로클로라이드(0.2 μM)에 의한 근원세포에서 다량의 근관(myotube) 형성을 확인하기 위하여 0.1 % 젤라틴이 코팅된 덮개 유리에 C2Cl2 세포를 Vehicle인 DMSO와 테트라미졸 하이드로클로라이드를 각각 처리하면서 3일 동안 분화시킨 후 위상차 현미경으로 관찰하였다.
이와 같은 실험결과 대조군인 DMSO에 비해 테트라미졸 하이드로클로라이드(0.2 μM)를 처리하였을 때 근관(myotube)이 많이 형성되는 것으로 보아 분화 촉진 효과를 확인할 수 있었다(X100)(도 6).
실시예 4-2. 면역세포화학염색법( Immunocytochemistry )
0.1 % 젤라틴이 코팅된 덮개 유리에서 C2Cl2 세포를 3일 동안 분화시켰다. 세포를 1 X PBS로 세척한 후, 3.7 % 파라포름알데하이드(paraformaldehyde)로 상온에서 15분간 고정 시킨 후, 1X PBS로 3번 세척한 후, 투과용 버퍼(permeabilization buffer)를 넣고 상온에서 15분간 반응시켰다. 다시 1X PBS로 3번 세척한 후 1% BSA가 들어있는 PBST(blocking uffer, 0.5 % Tween 20이 포함된 PBS)로 30 분간 반응시켜 불특정한 항체 결합을 억제하였다. 1차 항체 (SC-20641, Santa Cruz Biotechnology)를 블로킹 버퍼(blocking buffer)에 1:500로 희석하여 첨가한 후, 상온에서 1 시간 동안 반응시켰다. 1X PBS로 3번 세척한 후 블로킹 버퍼(blocking buffer)에 1:5000로 희석한 2차 항체(Goat anti-Rabbit IgG-HRP)를 첨가하여 상온에서 1시간 동안 반응 시킨 후, 1X PBS로 3번 세척하였다. 덮개 유리를 슬라이드 유리에 올리고 형광 현미경으로 사진을 찍어 결과를 분석하였다.
본 발명에서는 DMSO(음성 대조군)와 테트라미졸 하이드로클로라이드를 각각 처리하면서 C2Cl2 세포주의 분화를 유도 시킨 후 3일째 되는 날 근세포 분화 정도를 비교하기 위해 MYH3에 대한 항체로 염색하여 단백질 발현을 확인한 결과, DMSO에 비해 테트라미졸 하이드로클로라이드(0.2 μM)을 처리하였을 때 MYH3의 발현이 매우 높음을 확인할 수 있었다(도 7).
실시예 4-3. 웨스턴 블랏( Western blot )
배양용 배지에 세포를 분주하여 24 시간 배양한 후 분화 배지에 각각 DMSO, 0.6 μg/㎖ 인슐린 및 0.2 μM 테트라미졸 하이드로클로라이드를 매일 처리하면서 분화를 유도하였다. 분화 유도 3일째에 세포를 수획하여 1200 rpm에서 3분간 원심분리하였다. 상기세포에 100 ul 라이시스 버퍼(Lysis buffer)를 첨가한 후 초음파 분해(sonication) 시키고, 3000 rpm에서 10 분간 원심분리하여 수용성 단백질을 얻었고, 4 X 샘플버퍼(sample buffer)를 첨가하여 끓는 물에서 5분간 반응시켰다. 10 μg 단백질을 12 % SDS-PAGE 겔에 로딩하여 전개한 후 와트맨 멤브레인(Watman membrane)으로 옮겼다. 상기 멤브레인을 5 % skim milk로 1 시간 동안 상온에서 블로킹해주고, TTBS (0.03% Tween 20, Tris 2.42 g, NaCl 9 g, pH 7.4 1 L)로 5 분씩 5번 세척하였다. 5 % skim milk가 포함된 TTBS에 1차 항체를 1:500으로 희석하여 첨가한 후 상온에서 2시간 반응시킨 후, 다시 TTBS로 5분씩 5번 세척하였다. 다시 5 % 탈지유(skim milk)가 포함된 TTBS에 2차 항체를 1:5000으로 희석하여 첨가한 후 상온에서 2시간 반응시키고 TTBS로 5 분씩 5 번 세척한 후 ECL(Enhanced Chemiluminescent solution, Pierce)을 첨가하였다. 상기 멤브레인을 X-ray 필름에 노출시켜 마이오신(myosin) 단백질의 양을 확인하였다.
실시예 4-3-1. 일차 근원세포
음성 대조군(vehicle) DMSO, 양성 대조군 인슐린 (0.6 μg/ml), 테트라미졸 하이드로클로라이드(0.2 μM)를 처리하면서 일차 근원세포의 근세포 분화를 유도하였다. 분화를 유도한 후 1일과 3일째에 세포를 수거하여 SDS-PAGE로 전개하고 나일론 막으로 옮긴 후 웨스턴 블랏 분석을 수행하였다.
상기 실험결과, 동량의 단백질에 포함된 MYH3 단백질의 양이 매우 증가하였음을 확인하였다. 또한 대조군인 DMSO처리에 의한 발현은 미미하였고, 테트라미졸 하이드로클로라이드에 의한 MYH3의 발현은 분화촉진 약물로 보고된 인슐린의 발현 증가보다 많았음을 확인하였다(도 8).
이러한 실험결과를 통하여 동량의 단백질에서 차지하는 마이오신(myosin) 단백질의 양이 테트라미졸 하이드로클로라이드에 의해 급격하게 증가함을 보여주는 것으로 테트라미졸 하이드로클로라이드에 의한 근세포 분화촉진 효과가 매우 높음을 알 수 있었다.
실시예 4-3-2. 근원세포 주 C2Cl2
음성 대조군(vehicle) DMSO, 양성 대조군 인슐린 (0.6 μg/㎖), 테트라미졸 하이드로클로라이드(0.2 μM)를 처리하면서 C2Cl2 세포주의 근세포 분화를 유도하기 위하여 웨스턴 블랏을 실시하였다. 상기 세포를 분화유도한 후 3 일째에 세포를 수거하여 SDS-PAGE로 전개하고 나일론 막으로 옮긴 후 웨스턴 블랏 분석을 수행한 결과 동량의 단백질에 포함된 MYH3 단백질의 양이 매우 증가하였음을 확인하였다. 테트라미졸 하이드로클로라이드에 의한 MYH3의 발현은 인슐린의 발현보다 낮았으나 대조군인 DMSO처리에 의한 미미한 발현에 비해서는 매우 많았다(도 9).
이러한 결과를 통하여, 동량의 단백질에서 차지하는 마이오신(myosin) 단백질의 양이 테트라미졸 하이드로클로라이드에 의해 급격하게 증가한 것을 보여주는 것으로 일차 근원세포에서와 같이 세포주 C2Cl2에서도 테트라미졸 하이드로클로라이드에 의한 근세포 분화촉진 효과가 매우 높음을 알 수 있었다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시 예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (14)

  1. 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근원세포(myoblast)의 분화 촉진용 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 염은 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)인 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 농도는 0.1 내지 2 μM 인 것인 조성물.
  4. 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포(myoblast)에 처리하는 단계를 포함하는 근원세포의 분화 촉진 방법.
  5. 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 체외 근원세포(myoblast)에 처리하여 근원세포를 분화시키는 단계를 포함하는 분화된 근원세포의 제조방법.
  6. 테트라미졸(Tetramizole) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근감소증, 근위축증 또는 심위축증의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  7. 삭제
  8. 제 6항에 있어서, 상기 염은 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)인 약학적 조성물.
  9. 제 6항에 있어서, 상기 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 농도는 0.1 내지 2 μM 인 것인 약학적 조성물.
  10. 제 6항에 있어서, 상기 약학적 조성물은 근원세포(Myoblasst)의 분화를 촉진하는 것을 특징으로 하는 약학적 조성물.
  11. 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 근감소증, 근위축증 또는 심위축증의 예방 또는 개선용 식품 조성물.
  12. 삭제
  13. 제 11항에 있어서, 상기 테트라미졸 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 농도는 0.1 내지 2 μM 인 것인 식품 조성물.
  14. 제 11항에 있어서, 상기 염은 테트라미졸 하이드로클로라이드(Tetramizole HCl)인 식품 조성물.
KR1020120120760A 2012-10-29 2012-10-29 테트라미졸을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 KR101575170B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120120760A KR101575170B1 (ko) 2012-10-29 2012-10-29 테트라미졸을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020120120760A KR101575170B1 (ko) 2012-10-29 2012-10-29 테트라미졸을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20140054809A KR20140054809A (ko) 2014-05-09
KR101575170B1 true KR101575170B1 (ko) 2015-12-07

Family

ID=50886584

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020120120760A KR101575170B1 (ko) 2012-10-29 2012-10-29 테트라미졸을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101575170B1 (ko)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008156654A2 (en) 2007-06-15 2008-12-24 Massachusetts Institute Of Technology Cytoskeleton modulators for treating metabolic disorders

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008156654A2 (en) 2007-06-15 2008-12-24 Massachusetts Institute Of Technology Cytoskeleton modulators for treating metabolic disorders

Also Published As

Publication number Publication date
KR20140054809A (ko) 2014-05-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101666659B1 (ko) 부틸 피리디늄 또는 이의 유도체를 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101800632B1 (ko) 엔테로코커스 패칼리스, 이의 배양액 또는 이의 사균체를 유효성분으로 함유하는 근육감퇴, 약화 및 근위축 예방, 개선 또는 치료용 약학 조성물, 식품 조성물 및 식품첨가제
KR101793138B1 (ko) 알로이리트산 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101636946B1 (ko) 오로트산을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102054597B1 (ko) 패 추출물을 이용한 운동수행능력 개선용 조성물
KR20200022789A (ko) 디옥시콜산 (Deoxycholic acid) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101810651B1 (ko) 소브레롤을 포함하는 근력 약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR101728808B1 (ko) 아세카이니드 또는 이의 유도체를 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20180119790A (ko) 마우스 배아 줄기세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 발기부전 예방 또는 치료용 조성물
US11185553B2 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating ischemic-reperfusion injury comprising bile acids
KR101767603B1 (ko) 베타카리오필렌알코올 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101626097B1 (ko) 나파졸린을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101575170B1 (ko) 테트라미졸을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101535261B1 (ko) 클로로크레졸을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101604350B1 (ko) 클로로티아지드를 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101584581B1 (ko) 아버멕틴 A1a를 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101620482B1 (ko) 프로티렐린을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101586345B1 (ko) 에스트라디올 벤조에이트(Estradiol benzoate) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102304966B1 (ko) 톨페남산 (Tolfenamic acid) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101586336B1 (ko) 에스트로피페이트(Estropipate) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20200022766A (ko) 레지퀴모드 (resiquimod) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20210110277A (ko) 니트렌디핀 (Nitrendipine) 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101835227B1 (ko) 서목태 추출물을 포함하는 안질환 예방 또는 치료용 조성물
KR101474260B1 (ko) 도부타민 염산염을 유효성분으로 함유하는 근원세포 분화 촉진용 약학조성물
KR101658972B1 (ko) 플록사신 계열의 화합물을 포함하는 근력약화 관련 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20191101

Year of fee payment: 5