KR101573824B1

KR101573824B1 - 벼 흰잎마름병균의 Ｋ3ａ 레이스의 판별용 프라이머 및 이를 이용한 판별 방법

Info

Publication number: KR101573824B1
Application number: KR1020130130517A
Authority: KR
Inventors: 이병무; 송은성; 노태환; 조희정; 김송이
Original assignee: 대한민국
Priority date: 2013-10-30
Filing date: 2013-10-30
Publication date: 2015-12-03
Also published as: KR20150049677A

Abstract

본 발명은 벼의 벼흰잎마름병의 병원균인 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv. oryzae) K3a 레이스에 존재하는 특이 DNA 단편과 이의 검출을 위한 프라이머 및 이를 이용하여 벼 흰잎마름병원균의 K3a 레이스를 판별하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 프라이머는 벼 흰잎마름병원균의 K3a 레이스에 대해서만 증폭밴드를 형성할 수 있어, 종래의 방법들과 달리 신속, 정확하게 벼 흰잎마름병원균의 K3a 레이스를 특이적으로 판별할 수 있다.

Description

벼 흰잎마름병균의 Ｋ3ａ 레이스의 판별용 프라이머 및 이를 이용한 판별 방법{Primer for K3a Race Typing of Xanthomonas oryzae pv. oryzae and Method of K3a Race Typing of Xanthomonas oryzae pv. oryzae using the same}

본 발명은 벼의 병원균인 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv . oryzae) K3a 레이스에 존재하는 특이 DNA 단편과 이의 검출을 위한 프라이머 및 이를 이용하여 벼 흰잎마름병원균의 K3a 레이스를 판별하는 방법에 관한 것이다.

벼 흰잎마름병은 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv. oryzae)에 의해 발병하는 세균병으로 주로 잎에 발생되며, 피해양상은 광합성 부족에 의한 임실률 및 등숙률 저하에 의한 수량 감소 및 품질 저하를 가져온다. 벼 흰잎마름병은 우리나라는 물론 아시아, 아프리카, 라틴아메리카, 호주 등 대부분의 벼 재배지역에서 발생되고 있으며, 특히 동남아시아 지역에서 피해가 매우 심한 병으로 알려져 있다.

벼 흰잎마름병에 의한 피해는 그 병원균인 벼 흰잎마름병원균의 종류에 따라서 차이를 보일 수 있다. 따라서, 벼 흰잎마름병의 발생시 그 원인이 되는 병원균의 종류를 신속하게 판별하는 것이 이후의 방제 등의 대책 수립에 중요한 자료가 된다.

같은 식물 병원균 내에서의 분화형 또는 변종 중에서 기준 품종에 대한 기생성이 다른 것을 레이스(race)라고 하며, 레이스를 판별할 때에는 그들을 구분하는 기준품종을 선정할 필요가 있는데 이를 판별품종(differential variety)이라고 한다.

현재, 우리나라에서는 일본판별품종을 우리나라 판별품종(밀양 42호, 한강찰벼, 풍산벼, 청청벼, 밀양 23호)으로 대체하여 레이스를 검정하고 있으며 그 결과 5개의 레이스(K1, K2, K3, K4, K5)가 있음이 보고되었으며, 2005년 전국 레이스를 조사한 결과 K1(37%), K2(29%), K3(29%), K4(2%), K5(2%)로 나타났다.

하지만, 레이스의 판별은 병원균을 5개의 판별품종에 접종하여 나타나는 병징에 따라 감수성 또는 저항성으로 판정하여 구분하기 때문에 많은 시간과 노력이 소요되며 또한 형태적, 생리적, 생화학적인 특징이 나타나지 않기도 하여 발생 병원균의 신속한 판정이 어려운 실정이다.

유전자 수준에서 생물종을 식별하는 방법으로 가장 광범위하게 사용되고 있는 방법은 핵산지문법(DNA fingerprinting)이다. 이 방법은 다시, 제한효소단편장다형(RFLP; Restriction Fragment Length Polymorphism) 분석법, 라이보좀 구성 핵산 염기서열의 차이를 이용한 방법, 특정 프라이머를 이용한 PCR(polymerase chain reaction) 진단법 등으로 구분된다.

PCR법은 10 내지 20 mer로 구성된 특정 DNA 단편(프라이머)을 세균의 게놈유전자(genomic DNA)에 접촉(annealing)한 후, 내열성 DNA 중합효소(Taq polymerase)를 첨가하고 합성반응을 반복적으로 행하게 되면, 프라이머가 결합된 영역이 급속히 증폭하게 되며, 그 PCR 증폭산물을 아가로스젤(agarose gel) 또는 아크릴아마이드젤(acrylamidegel)에 전기영동하고 에티디움브로마이드(ethidium bromide) 및 은염색(silver stain)으로 DNA를 염색한 후 나타나는 DNA 밴드의 유무 혹은 형태의 차이와 같은 세균종의 DNA 다형성을 검출 진단하는 방법이다

이에, 본 발명자들은 최근의 분자생물학적 기법의 발전에 의하여 유전자(DNA) 수준에서 생물종을 식별하는 방법을 이용하여 벼 흰잎마름병원균의 레이스를 판별하고자 하였으며 PCR 공정을 이용하여 벼의 벼 흰잎마름병원균의 레이스를 신속, 정확하게 판별하고자 하였다.

본 발명의 목적은 서열번호 1의 염기서열을 갖는 유전자를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 상기 유전자를 포함하는 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv. oryzae) K3a 레이스 판별용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 서열번호 2의 염기서열을 갖는 프라이머 및 서열번호 3의 염기서열을 갖는 프라이머로 이루어진 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머 세트를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv . oryzae)을 분리하여 DNA를 추출하는 단계; 상기 추출된 DNA를 상기 프라이머 세트를 이용하여 PCR 증폭하는 단계; PCR 증폭결과 벼 흰잎마름병원균( Xanthomonas oryzae pv . oryzae ) K3a 레이스의 특이 유전자(서열번호 1)의 전부 또는 일부가 증폭되었는지 여부를 확인하는 단계를 포함하는 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스의 판별방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 프라이머 세트를 포함하는 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스 판별용 PCR 키트를 제공하는 것이다.

본 발명은 상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1의 염기서열을 갖는 유전자를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 유전자를 포함하는 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv. oryzae) K3a 레이스 판별용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 서열번호 2의 염기서열을 갖는 프라이머 및 서열번호 3의 염기서열을 갖는 프라이머로 이루어진 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머 세트를 제공한다.

또한, 본 발명은 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv . oryzae)을 분리하여 DNA를 추출하는 단계; 상기 추출된 DNA를 상기 프라이머 세트를 이용하여 PCR 증폭하는 단계; PCR 증폭결과 벼 흰잎마름병원균( Xanthomonas oryzae pv . oryzae ) K3a 레이스의 특이 유전자(서열번호 1)의 전부 또는 일부가 증폭되었는지 여부를 확인하는 단계를 포함하는 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스의 판별방법을 제공한다.

아울러, 본 발명은 상기 프라이머 세트를 포함하는 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스 판별용 PCR 키트를 제공한다.

본 발명의 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머 세트를 이용하면 벼 흰잎마름병원균의 레이스 판별을 신속하고 정확하게 판단할 수 있으므로 조기에 대응이 가능하여 벼 품종별 병원성 검정에 따른 레이스 분류 방법에 소요되는 시간 및 경비를 획기적으로 절감할 수 있다.

도 1은 AFLP-PCR 분석을 통한 벼 흰잎마름병균 K3a 특이적 밴드를 나타낸 도이다.
도 2는 PCR 분석을 통한 벼 흰잎마름병균 K3a 레이스를 특이적으로 검출한 결과를 나타낸 도이다.
도 3은 PCR 분석을 통한 벼 흰잎마름병균 K3a 레이스를 특이적으로 검출한 결과를 나타낸 도이다.
도 4는 벼 흰잎마름병균 접종 후 경과된 시간에 따른 검출 여부에 따른 밴드를 나타낸 도이다.
도 5는 벼 흰잎마름병균에 감염된 벼 잎의 다양한 지역으로부터 검출 여부를 확인한 도이다.
(A) 인위적 접종 5일 후의 벼 잎, (B) 감염된 벼 잎의 다양한 지역으로부터의 검출 여부

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명은 상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 서열번호 1의 염기서열을 갖는 유전자를 제공한다. 상기 서열번호 1의 유전자는 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv. oryzae) K3a 레이스 판별용 조성물에 포함되어 사용될 수 있다.

상기 서열번호 1의 염기서열을 갖는 유전자는 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv. oryzae) K3a 레이스 이외에서는 검출되지 않기 때문에, 이는 K3a 레이스의 판별을 위한 유전자 마커로 사용될 수 있다.

본 발명의 발명자들은 국내 우점으로 확인된 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스를 특이적으로 판별하기 위해 AFLP(amplified fragment length polymorphism)분석을 수행하고 벼 흰잎마름병원균 K3a에 특이적인 증폭산물 클로닝, 염기서열분석을 수행하였다. 이러한 연구 결과를 바탕으로 최종 1종의 상기 유전자 마커를 선정하였고, 이에 대한 특이적 프라이머를 개발하여 이를 이용한 PCR 분석을 통한 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스의 판별 방법을 개발함으로써 본 발명을 완성하였다.

상기 프라이머 세트는 서열번호 1의 염기서열에 기초하여 제작할 수 있으며, PCR을 용이하게 실시하기 위하여 통상적인 최적의 프라이머의 제조방법에 따라 컴퓨터 프로그램(Primer Designer V. 1.01, Scientific and educational software(IBM사))을 이용하여 제작할 수 있다. 바람직하게는 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머는 15 내지 25 mer를 포함하고, 프라이머 내의 G, C 함량이 50% 이상인 것이 적당하다.

본 발명의 PCR을 이용한 벼 흰잎마름병원균의 K3a 레이스 판별은 프라이머를 이용하여 이루어지며, PCR 조건은 통상의 조건이 바람직하고, 프라이머의 특성에 따라 적절히 조절하여 실시가능하다.

상기 프라이머 세트는 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스에 대해서만 약 1024 bp의 단일밴드를 형성(즉, 증폭)하며 다른 레이스에 대해서는 밴드를 전혀 형성하지 않는다. 또한, 벼 흰잎마름병균이 감염되고 2일 후부터 검출이 가능하고, 병징으로 터 병징이 없는 8 cm 까지 병원균의 존재 여부를 6시간 정도면 충분히 할 수 있기 때문에, DNA 수준에서 신속하고 정확히 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스를 판별할 수 있다.

본 발명의 구체적인 실시예 및 실험예에서는 특정 크기의 특정 프라이머 세트(서열번호 2 및 서열번호 3)를 사용하였으나, 상기 유전자(서열번호 1)의 전부 또는 일부를 특이적으로 증폭시킬 수 있는 어떤 크기와 서열의 프라이머 세트를 이용하더라도 역시 동일하게 벼흰잎마름병원균 K3a 레이스를 판별할 수 있음은 당업자에게 당연한 것이다.

상기 '유전자(서열번호 1)의 전부 또는 일부를 증폭시킬 수 있다'는 것은 상기 서열 전체만을 증폭시키거나, 상기 서열 일부만을 증폭시키거나, 상기 서열 전체를 포함하여 주변부까지 증폭시키거나, 상기 서열 일부를 포함하여 주변부까지 증폭시킬 수 있다는 것을 의미한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

< 실시예 1> 벼 흰잎마름병원균의 선발 및 K3a 증폭산물 분석

벼 흰잎마름병균(Xanthomonas oryzae pv . oryzae)의 K3a 레이스 특이적 유전자 마커 발굴 및 프라이머 개발하기 위하여 하기 표 1에 나타난 바와 같이 벼 흰잎마름병 균주를 각 레이스로부터 3개 혹은 7개의 균주를 선발하였다. 선발된 균주에 총 64개의 조합의 AFLP 프라이머를 이용하여 PCR 수행한 결과 K3a에서만 특이적으로 증폭된 산물을 확인할 수 있었다(도 1).

번호	균주 이름	레이스	번호	균주 이름	레이스
1	KACC10331	K1	12	KACC10877	K2
2	KACC10380	K1	13	KACC10882	K2
3	KACC10861	K1	14	HB01001	K3a
4	KACC10862	K1	15	HB01002	K3a
5	KACC10878	K1	16	HB01003	K3a
6	KACC10879	K1	17	HB01005	K3a
7	KACC10880	K1	18	HB01009	K3a
8	KACC10382	K2	19	KACC10859	K1
9	KACC10383	K2	20	HB04037	K5
10	KACC10873	K2	21	HB04044	K5
11	KACC10876	K2	22	HB04054	K5

< 실시예 2> 벼 흰잎마름병원균 의 K3a 레이스 판별용 마커 분석

벼 흰잎마름병원균의 K3a 레이스 판별을 위한 PCR 분석용 특이 프라이머 제작을 위해 AFLP (amplified fragment length polymorphism) 분석을 통하여 특이 증폭 단편을 클로닝 하였다. 이는 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스 판별용 유전자 마커이며 이의 크기는 1024 bp인 것으로 확인하였고, 서열을 서열번호 1에 나타내었다.

< 실시예 3> 벼 흰잎마름병원균 의 K3a 레이스 판별을 위한 특이적 프라이머 제작

상기 실시예 2에서 분석한 서열번호 1의 벼 흰잎마름병원균의 K3a 레이스 판별용 마커의 염기서열을 바탕으로 PCR을 위한 특이적 프라이머 1쌍을 제작하였고, 하기 표 2에 나타내었다.

이름	서열(5'- 3')	크기(bp)
K3a 정방향 프라이머(서열번호 2)	TCTGATTCGCAACGCTTTTGAGGAC	1024
K3a 역방향 프라이머(서열번호 3)	CTTCCTAATCAATAGTCACCTTGAA	1024

< 실험예 1> 벼 흰잎마름병원균의 K3a 레이스 특이적 검출 분석

상기 실시예 3에서 제작한 프라이머를 이용하여 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스 특이적 검출 분석하기 위하여 국내에서 광범위하게 수집된 벼 흰잎마름병균을 이용하여 PCR을 수행하였다.

구체적으로, PCR 증폭반응은 MyCycler 써머사이클러(thermalcycler) (BioRad, USA)를 사용하여 실시하였으며, 반응은 프로-핫 스타트(Pro-Hot Start) PCR 마스터 믹스(Master Mix, TNT Research, Korea)에 5 pmole의 서열번호 2의 K3a 정방향 프라이머 및 서열번호 3의 K3a 역방향 프라이머에 하기 표 3에 기재된 균주를 각각 gDNA 1 ㎕를 첨가하여 총량이 20 ㎕가 되게 하여 수행하였다. PCR 반응은 96℃에서 15초, 65℃에서 15초 및 72℃에서 30초로 25회 반응하였다.

그 결과, 벼 흰잎마름병원균의 K3a 레이스만 특이적으로 증폭(1024 bp)되는 것을 확인할 수 있었다(도 2).

< 실험예 2> 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머 분석

상기 실시예 3에서 제작한 프라이머의 특이성을 분석하기 위하여 K3a 레이스 13개 균주와 Xathomonas 속 15개 균주 및 Pseudomonas 속 3개 균주를 검출(detection) PCR을 수행하였다.

구체적으로, PCR 증폭반응은 MyCycler 써머사이클러(thermalcycler) (BioRad, USA)를 사용하여 실시하였으며, 반응은 프로-핫 스타트(Pro-Hot Start) PCR 마스터 믹스(Master Mix, TNT Research, Korea)에 5 pmole의 서열번호 2의 K3a 정방향 프라이머 및 서열번호 3의 K3a 역방향 프라이머에 하기 표 4에 기재된 K3a 레이스 13개 균주와 Xathomonas 속 15개 균주 및 Pseudomonas 속 3개 균주를 각각 gDNA 1 ㎕를 첨가하여 총량이 20 ㎕가 되게 하여 수행하였다. PCR 반응은 96℃에서 15초, 65℃에서 15초 및 72℃에서 30초로 25회 반응하였다.

그 결과, 벼 흰잎마름병원균의 K3a 레이스만 특이적으로 검출 및 판별되는 것을 확인하였으며 이를 통해 벼 흰잎마름병균 K3a 레이스에서만 특이적으로 검출 및 판별되는 것을 재확인하였다(도 3).

< 실험예 3> 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머의 민감성 분석

<3-1> 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머의 검출 민감성 분석

상기 실시예 3에서 제작한 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머를 이용하여 현장에서의 병 발생 예찰 활용시 사용 가능성을 확인하기 위해 검출 민감도를 분석하였다.

구체적으로, 벼 흰잎마름병균의 K3a를 이병성 벼 품종 IR24에 접종한 후 접종 0일부터 매일 접종부위를 수집하였다. 그런 다음, 인위적으로 접종하여 감염시킨 벼 잎(1cm)을 증류수 200 ㎕에 20분 동안 침지 시킨 후 침지액을 PCR 반응에 바로 사용하였다. PCR 반응은 MyCycler 써머사이클러(thermalcycler, BioRad, USA)를 사용하여 실시하였으며, 반응은 프로-핫 스타트(Pro-Hot Start) PCR 마스터 믹스(Master Mix, TNT Research, Korea)에 5 pmole의 서열번호 2의 K3a 정방향 프라이머 및 서열번호 3의 K3a 역방향 프라이머 1 ㎕와 침지액 18 ㎕를 첨가하여 총량이 20 ㎕가 되게 하여 수행하였다. PCR 반응은 96℃에서 15초, 65℃에서 15초 및 72℃에서 30초로 25회 반응하였다.

그 결과, 벼 흰잎마름병균 접종 후 0이 내지 1일에는 검출이 불가능하였으나 2일 된 잎에서 검출이 가능한 것을 확인하였다. 이를 통해 실제적으로 현장에서 적용할 시 균 분리 및 DNA 추출과 같은 추가적인 과정 없이 신속한 분석이 가능함을 확인하였다(도 4).

<3-2> 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머의 병징 민감성 분석

상기 실시예 3에서 제작한 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머를 이용하여 현장에서의 병 발생 예찰 활용시 사용 가능성을 확인하기 위해 병징 민감도를 분석하였다.

구체적으로, 벼 흰잎마름병균의 K3a를 이병성 벼 품종 IR24에 접종한 후 5일이 경과한 벼 잎의 병징 부위로부터 1cm 내지 8 cm까지 각각 1cm의 시료를 취하여 증류수 200 ㎕에 20분 동안 침지 시킨 후 침지액을 PCR 반응에 바로 사용하였다. PCR 반응은 MyCycler 써머사이클러(thermalcycler, BioRad, USA)를 사용하여 실시하였으며, 반응은 프로-핫 스타트(Pro-Hot Start) PCR 마스터 믹스(Master Mix, TNT Research, Korea)에 5 pmole의 서열번호 2의 K3a 정방향 프라이머 및 서열번호 3의 K3a 역방향 프라이머 1 ㎕와 침지액 18 ㎕를 첨가하여 총량이 20 ㎕가 되게 하여 수행하였다. PCR 반응은 96℃에서 15초, 65℃에서 15초 및 72℃에서 30초로 25회 반응하였다.

그 결과, 병징으로부터 병징이 없는 8cm 까지 병원균이 존재함을 확인할 수 있었다(도 5.) 이를 통하여 실제 벼 재배 지역에서 육안으로 확인이 불가능한 벼 흰잎마름병원균의 존재를 확인할 수 있다.

K1, K2, K3, K4, K5 : 국내 벼흰잎마름병원균의 레이스

<110> REPUBLIC OF KOREA <120> Primer for K3a Race Typing of Xanthomonas oryzae pv. oryzae and Method of K3a Race Typing of Xanthomonas oryzae pv. oryzae using the same <130> P130793 <160> 3 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 1024 <212> DNA <213> Xanthomonas oryzae pv. oryzae K3a <400> 1 tctgattcgc aacgcttttg aggacctcct cggagaagac ttcgaggggc gttttgaatc 60 caagtatctt gcgcggacga ttgtagagcc gctgctcgat ccatcgcagg tgcgcatcgg 120 tgatggtgct gaaatcggtc tgtcgtggca agtattggcg tgtcaatccg ttggcattct 180 cgttgctgcc gcgctgccat gggcagtacg gatctgcgaa atagaaatcg ctctgcaggc 240 aggcggcaat gagccgatga tcagcgaact ccttgccgtt gtcggcggtg agggtgtgaa 300 ctgcatggcg caggccgccc agtcgctgga caatggcgtt gcgcacgttc tcggcggtgc 360 cgtcgggcga gtaagccagc agatgcaggc gactgcggcg ttcggtcatg ctgaccacca 420 cgccatttcc gtgcgaggcc ctgatggtct ccagctccca gtcgccgata cggcttcgct 480 gctcaaccac actggggcgc tgtgtccagc tgcgccgatg cgtcagctgc ccgcggccat 540 cgcgcacgcc acgccgacgg cgcttgcggc ggcgtttgcg tagatgcatg aacaactgac 600 caccgcgctt ctgatcggcg tcgatgtgcc gatagatcca tgcgtgactg gccaagccgg 660 tgcgaccggc gatctgttcg ggactgacgt cctccctcag caggacctcg atctggcgga 720 tacgctcggc gtcgatgcgt ggacgccggc tggcctgcgt gcgccgatgg gcgctgatgc 780 gctgcgcgtg atcgggctgg taccgcgcag cgtgctgatt gcggcgcagc tcacgactga 840 tcgtgctggg cgcacgcgcc aatacatcgg cgatggcgcg catcgacatc ccggtttcat 900 ataaagcacg cagacgctga ggtttcccca catttcttcc tgcgagatca agcacttggt 960 gggccatgcg gtggaagaag gtgcgcgcat ggggcacgct tcaaggtgac tattgattag 1020 gaag 1024 <210> 2 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> K3a-Forward primer <400> 2 tctgattcgc aacgcttttg aggac 25 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> K3a-Reverse primer <400> 3 cttcctaatc aatagtcacc ttgaa 25

Claims

삭제
서열번호 1의 염기서열로 이루어지는 유전자를 포함하는 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv. oryzae) K3a 레이스 판별용 조성물.
서열번호 2의 염기서열을 갖는 프라이머 및 서열번호 3의 염기서열을 갖는 프라이머로 이루어진 벼 흰잎마름병원균 K3a 판별용 프라이머 세트.
벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv. oryzae)을 분리하여 DNA를 추출하는 단계;
상기 추출된 DNA를 제 3 항에 의한 프라이머 세트를 이용하여 PCR 증폭하는 단계;
PCR 증폭결과 벼 흰잎마름병원균(Xanthomonas oryzae pv. oryzae) K3a 레이스의 특이 유전자(서열번호 1)의 전부 또는 일부가 증폭되었는지 여부를 확인하는 단계를 포함하는 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스의 판별방법.
제 3 항에 의한 프라이머 세트를 포함하는 벼 흰잎마름병원균 K3a 레이스 판별용 PCR 키트.