KR101490762B1 - 오크라 다당체를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 오크라(Lagerstroemia indica) 다당체를 유효 성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 오크라 다당체는 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.001 ~ 30.0 중량%를 함유하는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 따르면, 오크라 다당체 추출물은 항산화 효과, MMP-1 생성 억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과가 탁월하며, 이를 함유하는 화장료는 보습 효과, 피부장벽기능 회복 효과, 피부 주름 개선 효과 및 사용감개선 효과가 우수하다.

Description

오크라 다당체를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising the polysaccharide of Hibiscus esculentus as active ingredient}

본 발명은 오크라 다당체를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부의 각질층(Stratum Corneum, SC)은 피부에서 가장 바깥에 존재하는 것으로, 외부 환경에 직접 접하고 있으며 인체에서 가장 큰 표면적을 가지고 있어 외부 환경에 대한 보호 장벽으로써 유해미생물, 물리적 손상, 자외선 등으로부터 우리 몸을 보호하는 역할을 수행한다. 뿐만 아니라 체온 및 수분 보유량 등을 조절하는 역할을 하므로 매우 중요하다. SC층은 세라마이드, 콜레스테롤 그리고 지방산 등의 지질 혼합체로 외부 이물질의 침투를 억제하고, 피부의 표면에서 증발되는 수분의 양, 즉 경표피 수분손실량(Tranaepideramal Water Loss; TEWL)을 막아주는 기능을 가지고 있다. 또한 건강한 사람의 각질세포에는 천연보습인자(Natural Moisture Factor, NMF)가 고농도로 존재하기 때문에 피부 표면의 장력을 낮추고 케라틴으로부터 수분의 반발력을 받아 보습에 직접적인 영향을 주어 피부가 건조되는 것을 억제한다. 임상적으로 건성피부는 피부의 표면이 건조하여 탄력이 떨어지며, 각질탈리(scaling)가 일어나기 쉽다. 경우에 따라서는 가려운 증상이 나타나기도 하고 피부의 갈라짐 현상이 일어나기도 한다.

일반적으로 보습제는 피부의 표면에 도포되어 건조한 피부의 다양한 증상을 완화, 방지하기 위한 수분공급, 유지 그리고 아토피와 같은 피부 건조함을 원인으로 발생하는 질병들의 증세에 대하여 호전시키는 역할을 한다. 그러나 종래의 보습제는 수분을 흡수하는 성질이 있는 휴멕턴트(humectant)나 수분 증발을 방지하는 폐쇄 보습제(Occlusive Moisturizer)를 사용하여 각질층에서의 수분 보유를 증가시키는 방식이 사용되었다. 상기의 보습제는 피부에 도포 시 끈적임이 심하거나 화장료의 유화 제형의 안정도를 유지하는 데 어려움이 있다는 단점이 있다.

그리하여 최근에는 다당체의 형태로 피부에 수분 보호막을 형성하여 친화력이 우수한 보습제가 많이 사용되고 있다. 현재까지 다당체의 보습력에 대한 천연물의 접근으로 히알루론산과 유근피 (대한민국 공개특허 10-2009-0098083), 표고버섯 (대한민국 공개특허 10-2012-0078327), 인삼 (대한민국 공개특허 10-2001-0088981), 치아 씨앗 (대한민국 공개특허 10-2010-0103351) 그리고 잎새버섯 (대한민국 공개특허 10-2013-030013) 등의 연구가 있었다.

사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리ㅇ화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화 (intrinsic aging)와 광노화 (photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병 상태, 환경 인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 자유라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다.

좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성 물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부 노화 현상이 생겨나는 것이다.

특히, 단백질의 산화는 피부의 결합 조직인 콜라겐 (collagen), 히아루론산 (hyaluronic acid), 엘라스틴 (elastin), 프로테오글리칸 (proteoglycan), 피브로넥틴 (fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증 반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역 기능 저하의 사태에 이르게 된다.

그러므로, 신체의 대사 과정 중 발생하는 자유라디칼이나 자외선 조사, 염증 반응에 의해 매개되어 발생하는 자유라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진 대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다.

노화에는 이러한 자유라디칼 뿐만 아니라 콜라겐 분해효소인 기질 금속 단백질 분해 효소 (Matrix Metalloproteinase; MMP)라는 효소도 관여한다. 즉, 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나, 노화가 진행되면서 콜라겐 합성이 감소하고, 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속 단백질 분해 효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한, 자외선 조사에 의해 이러한 분해 효소가 활성화되기도 한다.

그러므로, 세포 내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 이제까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다. 이에 세포내 자연노화와 광노화에 의해 그 발현이 유도되는 MMP 발현량 및 활성을 조절하고자 하였다.

이에, 본 발명자들은 이제까지 알려지지 않은 여러 천연물들에 있어서 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 오크라(Hibiscus esculentus)로부터 얻은 오크라 다당체 추출물이 피부 항산화 효과, MMP-1 생성 억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과가 매우 우수하여 화장품으로서의 효능을 기대할 수 있다는 것을 발견하게 되었다. 또한 이러한 오크라 다당체를 화장료에 유효성분으로 사용할 경우 발림성, 촉촉함, 끈적임 그리고 쿠션감 등과 같은 사용감이 상당히 우수할 뿐만 아니라, 보습 효과, 피부장벽기능 회복 효과, 피부 주름 개선 효과가 우수함을 발견함으로서 본 발명을 완성하게 되었다.

상기의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 오크라(Hibiscus esculentus 또는 Abelmoschus esculentus) 다당체를 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

바람직하게는, 상기 화장료 조성물은 항산화용인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 화장료 조성물은 보습용인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 화장료 조성물은 피부장벽기능 개선용인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 화장료 조성물은 피부주름 개선용인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 화장료 조성물은 피부노화방지용인 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 화장료 조성물은 사용감개선용인 것을 특징으로 한다.

또한, 바람직하게는, 상기 오크라 다당체는 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.001 ~ 30.0 중량%으로 함유되는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 오크라 다당체는 오크라의 다양한 기관으로부터 얻은 추출물로서, 이때 오크라는 오크라의 열매, 잎, 어린 가진, 줄기, 껍질 또는 뿌리인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 오크라 다당체는 항산화 효과(실험예 3), MMP-1 생성 억제 효과(실험예 4), 콜라겐 합성 증진 효과(실험예 5)가 탁월하며, 이를 함유하는 화장료는 보습 효과(실험예 6), 피부장벽기능 회복 효과(실험예 7), 피부 주름 개선 효과(실험예 8) 및 사용감개선 효과(실험예 9)가 우수하다.

상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 오크라 다당체를 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

오크라(Hibiscus esculentus 또는 Abelmoschus esculentus)는 아욱과(Malvaceae)에 속하는 식물로서 열대 및 아열대 지역에 걸쳐 재배되는 식물로서 섬유질이 많으며, 식물 내에 펙틴, 갈락탐, 아라반 등의 혼합물인 점액이 있어 자양강장에 도움이 되고 혈중 콜레스테롤을 낮추는 작용을 한다. 또한 비타민 C가 풍부하여 피로회복에 좋다고 알려져 있으며 예로부터 동양에서는 잎과 덜익은 열매를 고통을 덜어주는 찜질약으로 오랫동안 써왔다. 또한 오크라의 다당체는 식품 이외의 분야에서도 이용되어 왔다(Ndjouenkeu, Goycoolea, Morris, & Akingbala, 1996; Tanaka et al., 2002; Woolfe, Chaplin, & Otchere, 1997). 그러나 오크라의 다당체는 화장료의 보습용 및 피부노화 조성물로서 사용하려 하는 연구가 전무한 실정이다.

본 발명에서, 오크라 다당체는 오크라로 부터 추출한 적어도 하나 이상의 다당체(이하, 오크라 다당체) 또는 오크라의 다당체가 상당량으로 함유된 오크라 추출물(이하, 오크라 다당체 추출물)을 의미한다. 또한, 오크라 다당체 또는 오크라 다당체 추출물은 오크라의 다양한 기관 또는 부분(예를 들어, 열매, 잎, 뿌리, 줄기, 가지, 어린가지, 껍질 및 종자 등)으로부터 추출하여 얻은 것을 의미하는 것으로, 바람직하게는 열매, 잎, 어린가지, 줄기, 가지, 껍질 또는 뿌리로부터, 보다 바람직하게는 열매, 잎, 어린가지 또는 뿌리로부터, 보다 더 바람직하게는 열매 또는 어린가지로부터, 가장 바랍직하게는 과피를 제거한 성숙된 열매로부터 추출되는 것을 의미한다.

본 발명의 오크라 다당체는 압착법 또는 통상적으로 사용되는 용매추출방법으로 추출될 수 있다. 즉, 통상적인 온도와 압력의 조건 하에서, 통상적인 용매를 사용하여 추출될 수 있으며, 용매를 사용하지 아니하고, 일정한 압력 조건에서 일정한 크기의 필터로 걸러질 수도 있다. 통상적인 용매를 사용하는 추출법으로는 예컨대, (a) 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올(예를 들면, 메탄올, 에탄올, 프로판올 및 부탄올), 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 디에틸에테르, 에틸 아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄(메틸렌 클로라이드), 클로로포름, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 1종 이상의 추출 용매를 사용하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 메틸렌 클로라이드, 클로로포름 또는 물을 사용하여 얻어진 것이고, 가장 바람직하게는 50%(v/v) 메틸렌클로라이드를 사용하여 얻어진 것이다.

한편, 본 발명의 오크라 다당체 또는 다당체 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

본 발명의 오크라 다당체 또는 다당체 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 발명의 보다 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 오크라 다당체는 항산화 효과, MMP-1 생성 억제 효과, 콜라겐 합성 증진 효과, 보습 효과, 피부 장벽 기능회복 효과, 피부주름 개선 효과 및 사용감 개선 효과가 우수하며, 이러한 본 발명의 오크라 다당헤는 화장료 조성물로 제조될 때도 상기와 같은 피부 상태 개선 효과를 얻을 수 있다.

본 발명에 따르면, 상기 오크라 다당체는 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.001 ~ 30.0 중량% 함유되며, 더욱 바람직하게는, 상기 오크라 추출물은 화장료 조성물의 전체 중량에 대해서 0.01 ~ 30 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 또한, 상기 추출물의 함량이 0.001 중량% 미만인 경우에는 피부 개선 효과가 나타나지 않는다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효 성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션, 팩, 마사지크림 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 계면활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 제형 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비누이며, 상기 계면활성제 함유 클렌징 제형은 클렌징 폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비 함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

제조예 1: 오크라 다당체 추출물 제조

과피를 제거한 성숙한 오크라 열매 10.0g을 5배량의 메틸렌 클로라이드와 동량의 정제수를 가하여 30분간 교반 후 물층을 따로 분획하고 농축하여 오크라 다당체 파우더 약 1.03g을 얻었다.

제조예 2 오크라 다당체 추출물 제조

과피를 제거한 성숙한 오크라 열매 10.0 g을 잘게 파쇄한 후 정제수 5배량을 넣고 2,000 rpm에서 원심분리 하여 상등액을 따로 분획하고 농축하여 다당체 파우더 약 1.07g을 얻었다.

제조예 3: 오크라 다당체 추출물의 제조

과피를 제거한 성숙한 오크라 열매 10.0g을 파쇄한 후 400메쉬 필터로 싸서 파쇄한 오크라 열매를 넣고 일정한 압력을 손으로 가하여 짜서 오크라 다당체을 얻고 이후 농축하여 약 0.94g의 다당체를 얻었다.

제조예 4: 오크라 다당체 추출물의 제조

과피를 제거한 성숙한 오크라 열매 10.0g을 정제수를 60 ℃가열한 후, 이 온도에서 약 2~3분간 침지시킨 후, 필터하여 여액을 얻은 후 농축하여 약 1.23g을 얻었다.

제조예 5: 오크라 다당체 추출물의 제조

과피를 제거한 성숙한 오크라 열매 10.0g을 5배량의 클로로포름과 동량의 정제수를 가하여 30분간 교반 후 물층을 따로 분획하고 농축하여 오크라 다당체 파우더 약 1.12g을 얻었다.

실험예 1: 오크라 다당체의 당 함량 측정

오크라로부터 분리된 다당체의 추출물의 당 함량은 페놀-황산법으로 측정하였다. 0.1㎎/㎖의 농도로 오크라 다당체를 증류수에 용해시킨 용액 20㎕에 5% 페놀용액 30㎕와 진한 황산 0.2㎖를 가하고 진탕한 후, 60℃ 에서 20분간 반응시켜 490nm에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 표준품으로는 글루코오스를 사용하여 표준용량곡선을 작성하였다. 오크라 다당체의 당 함량은 각각 아래의 표 1과 같았다.

실험예 2: 오크라 다당체의 단백질 함량 측정

오크라로부터 분리된 다당체의 단백질 함량은 브래드포드법을 기본으로 제품화된 단백질 함량 측정키트(Protein Assay Kit, Bio-Rad사)를 사용하여 측정하였다. 소의 혈청 알부민을 표준품으로 하여 표준용량곡선을 작성하였으며 오크라 다당체의 단백질 함량은 아래의 표 1과 같았다.

추출물	당함량(%)	단백질 함량(%)
제조예 1	98.5	0.15
제조예 2	99.5	0.11
제조예 3	98.9	0.01
제조예 4	99.4	0.05
제조예 5	98.7	0.03

실험예 3: DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정

제조예 1 내지 5에서 수득한 오크라 다당체 추출물의 항산화 효과를 측정하기 위해 하기와 같이 DPPH법을 이용하여 항산화 효과(자유라디칼 소거율)를 측정하였다.

DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 자유라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 효과를 측정한다. 피검 물질(오크라 추출물)에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율(%)을 측정한다.

사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl 자유라디칼(Aldrich Chem. Co., MW=618.76) 0.1 mM 용액으로서 61.88 mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 한다.

측정방법으로서

① 96-웰 플레이트에 0.1 mM DPPH 용액 0.15 ml에 시료 용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.

② 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.

③ 시료 용액의 블랭크 (Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 So를 측정한다.

④ 공시험은 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bt를 측정한다.

⑤ 공시험의 블랭크(Blank)는 상기 0.1mM DPPH 용액 대신 메탄올을 사용하고 상기 시료 용액 대신 증류수를 사용하는 것을 제외하고는 상기 흡광도 St를 측정하는 때와 동일하게 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.

자유라디칼 소거율(%)의 결과는 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 결과는 하기의 표 2와 같다.

St : 시료의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도

So : 시료의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도

시료명	처리 농도 (ppm)	activity (%)
		제조예 1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5
오크라 추출물	300	94.82	93.21	93.22	93.11	93.21
	150	95.25	92.66	92.89	85.35	92.66
	75	92.30	89.36	93.55	61.33	89.36
	37.5	64.39	55.66	74.21	30.22	55.66
	18.75	33.38	33.77	60.21	18.74	33.77
Vit-C	300ppm	78.98

표 3의 결과에서 알 수 있듯이, DPPH에 의한 자유라디칼 소거실험에서 본 발명에 따른 오크라 추출물 및 오크라 다당체 추출물은 농도 의존적으로 항산화효과가 증가하는 것을 확인할 수 있었으며, 300ppm 농도에서 자유라디칼 소거율(항산화 효과)이 있는 것으로 알려진 물질인 비타민 C(Vit-C, 비교예로서 제시)의 항산화 효과보다 더욱 우수한 항산화 효과를 갖고 있음이 확인되었다.

실험예 4. MMP-1 생성 억제 효과

제조예 1 내지 5에서 수득한 오크라 다당체 추출물이 콜라겐 분해효소인 MMP-1 생성을 억제하는 효과를 측정하기 위하여 하기와 같이 실험을 실시하였다.

인간 정상 피부 세포인 섬유아세포 (한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1ㅧ 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 1,2 의 오크라 다당체 추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 오크라 다당체 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다.

배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 3에 따라 MMP-1 생성 억제율(%)을 계산하였으며, 그 결과를 표 3에 나타내었다.

시료명	처리 농도 (ppm)	activity (%)
		제조예 1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5
오크라 추출물	300	97.25	89.37	90.69	92.94	90.31
	150	85.33	81.24	84.32	89.54	84.58
	75	75.23	64.38	62.98	48.44	67.44
	37.5	64.65	53.32	47.25	35.13	45.34
	18.75	55.17	25.23	23.45	25.75	35.22
TGF-β	200nM	75.3

상기 표 3의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 오크라 다당체 추출물은 농도 의존적으로 MMP-1의 생성을 억제(MMP-1 활성 억제)시키는 것을 확인할 수 있었다. MMP-1 생성 억제효과가 있는 것으로 알려진 물질인 TGF-β(200nM, 비교예로서 제시)의 효과보다 더욱 우수한 MMP-1 생성 억제 효과를 갖고 있음을 확인되었다.

실험예 5. 오크라 추출물의 콜라겐 합성 증진 효과

인간 정상 상피 세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 × 10⁶ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 제조예 1 내지 21에 의해 제조된 오크라 다당체 추출물을 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 오크라 다당체 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이에 의해 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 콜라겐 생합성 증가율(%)은 하기 수학식 3에 따라 계산하였으며, 그 결과를 표 4에 나타내었다.

시료명	처리 농도 (ppm)	activity (%)
		제조예 1	제조예 2	제조예 3	제조예 4	제조예 5
오크라 추출물	18.75	23.1	11.24	13.1	12.1	11.24
	37.5	43.3	31.12	33.89	33.4	21.12
	75	51.9	45.87	60.59	51.5	35.87
	150	84.1	58.50	85.64	82.2	38.50
	300	133.65	60.35	109.98	113.5	41.35
TGF-β	200nM	175.23

상기 표 4에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 제조예 1 내지 5에 의해 제조된 오크라 다당체 추출물의 콜라겐 생합성율이 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

제형예 1 내지 3:오크라 추출물을 함유하는 화장료 조성물의 제조

오크라 추출물을 포함하는 화장료는 제조예 1, 제조예 3 및 제조예 4의 오크라 다당체 추출물을 각각 포함하는 화장료(제형예 1, 2, 3)를 제조하였으며, 효능의 비교를 위해 오크라 다당체 추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1), 보습제로서 글리세린 및 솔비톨을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2), 추출물이나 보습제를 모두 포함하지 않는 화장료 조성물(비교제형예 3)을 하기 표 5에 나타내었다.

구분	성분	제형예 1	제형예 2	제형예3	비교제형예 1	비교제형예 2	비교제형예 3
A	오크라 추출물 (제조예 1)	5.0	-		-	-	-
	오크라 추출물 (제조예 3)	-	5.0		-	-	-
	오크라 추출물 (제조예 4)			5.0
	글리세린				5.0	5.0
	1,3부틸렌글리콜	-	-		5.0	-	-
	솔비톨	-	-		-	5.0	-
	EDTA-2Na	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02	0.02
	정제수	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100	to 100
B	세토스테아릴알코올	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
	마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	스쿠알	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	유동파라핀	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	트리옥타노인	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	토코페릴아세테이트	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	사이클로메치콘	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
C	향,방부제	적량	적량	적량	적량	적량	적량

실험예 6 : 오크라 다당체 추출물의 보습 효과

상기 제형예 1, 2, 3의 화장료 조성물에 대한 임상 보습 효과를 다음과 같이 측정하였다. 설문 조사를 통하여 피부가 건조하다고 느끼는 건강한 성인 남녀 125 명을 무작위로 25 명씩 5개 그룹 (A, B, C, D 및 E)으로 나눈 후, A, B, C 그룹에는 제형예 1,2,3의 화장료 조성물을, D 그룹에는 각각 오크라 다당체 추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1), 보습제로서 글리세린 및 솔비톨을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 2)의 화장료 조성물을 각각 1일 2회씩 8주간 안면에 도포하게 하였다. 보습 효과는 실사용 시험 시작 후부터 매 2주간, 그리고 종료 후의 개선 효과를 Corneometer CM 820 (Corage +Khazaka, Germany)를 이용하여 평가하였다. 실험 결과는 하기 표 6에 나타내었다.

오크라 다당체 추출물의 피부 보습 효과

구분	사용전	사용 2주 후	사용 4주 후
제형예 1	23.5	38.6	45.7
제형예 3	23.2	36.4	39.6
제형예 4	23.2	37.8	45.4
비교제형예 1	24.5	35.9	40.8
비교제형예 2	22.8	36.5	39.9
비교제형예 3	22.8	22.8	22.8

상기 표 6의 결과에서도 알 수 있듯이, 일반 다른 보습제를 함유한 화장료(비교제형예 1,2,3)와 비교하여도 본 발명의 오크라 다당체 추출물 함유한 화장료(제형예 1, 2, 3)의 보습효과가 우수함을 확인할 수 있었다.

실험예 7: 피부 장벽기능 회복 효과

본 발명의 오크라 다당체 추출물을 함유하는 화장료의 피부 장벽기능 회복 효과를 알아보기 위하여 다음과 같이 실험을 실시하였다. 실험은 사람의 상박에 Taping stripping Method를 이용하여 피부의 장벽을 손상시킨 후, 표피 수분 손실량(TEWL,transdermal water loss)을 servomed사(스웨덴) evaporimeter EP1으로 측정하여 4.0g/㎡/h에 도달하면, 상기 제조예1, 3, 4에서 제조한 본 발명의 오크라 다당체 추출물을 함유하는 제형예 1 내지 3 및 비교제형예 1 내지 3을 각각을 5㎠ 면적에 도포한 후, 표피 수분 손실량을 1시간, 2시간, 4시간, 8시간 경과 후에 측정하여 감소되는 정도를 평가함으로써 장벽기능이 회복되는 정도를 평가하였다. 이때, 공지의 지질혼합물(ceramide :cholesterol : fatty acid의 2:1:1 혼합물)을 양성 대조군으로 사용하였다. 결과는 초기 손상된 장벽 상태에서의 표피 수분 손실량을 기준(100%)으로 하여 시간에 따른 변화를 비교하여 하기 표 7에 나타내었다.

시 료	0시간	1시간	2시간	4시간	8시간
제형예 1	85	61	39	23	23
제형예 2	85	63	35	21	21
제형예 3	85	66	36	23	22
비교제형예 1	85	70	60	50	41
비교제형예 2	85	75	63	52	43
비교제형예 3	85	75	67	55	25

상기 표 7의 결과에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 오크라 다당체 추출물을 함유하는 화장료인 제형예 1 내지 3의 경우, 비교제형예 1 내지 3에 비하여 피부 장벽기능 회복 효과가 매우 우수함을 확인할 수 있었다.

실험예 8. 피부 주름 개선효과

본 발명의 오크라 다당체 추출물을 함유하는 화장료의 피부 주름 개선효과에 대한 임상실험을 실시하였다. 임상시험은 각 화장료의 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다.

즉, 임상실험은 제조예 1의 오크라 다당체 추출물을 함유하고 있는 제형예 1과 오크라 다당체 추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3부틸렌글리콜을 포함하는 비교제형예 1의 화장료 조성물을 사람을 대상으로 화장료의 사용으로 인한 피부 주름 개선 효과를 확인 및 비교 평가하였다.

실험자 (20세 - 35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 제형예 2를, 얼굴 왼쪽 부위에는 비교제형예 1을 각각 1일 2회씩 연속 2개월간 도포하였다.

60명의 여성을 대상으로 실험군을 각각 20명씩 오크라 다당체 추출물 대신에 보습제로서 글리세린 및 1,3-부틸렌글리콜을 포함하는 화장료 조성물(비교제형예 1) 처리군, 오크라 다당체 추출물을 아데노신 3%(v/v)로 대체한 크림(비교제형예 4) 처리군, 오크라 다당체 추출물을 포함하는 제형예 2의 실험군의 세 그룹으로 나누고, 얼굴 양쪽면을 사용하여 6주 후의 주름 개선 효과를 육안으로 평가하여 주름 개선 정도를 확인하였다.

피부 주름 개선 효과는 제품 사용 전과 3개월간 사용 후의 각 피검자의 주름 개선 효과를 숙련된 의사의 육안 관찰 및 기기측정(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)을 통하여 평가하였으며, 이 평가를 토대한 주름 개선 효과 결과는 하기의 표 8에 나타내었다

주름 개선 효과 (육안 평가 및 기기평가)

	주름 개선 효과			유효율(%)
	우수	약간	없음
제형예 1 (제조예 1의 오크라 다당체 추출물)	24	4	2	85.0
비교제형예 1 (보습제)	3	4	23	25.0
비교제형예 4 (아데노신)	17	7	7	80.0

상기 표 8의 결과에서도 알 수 있듯이, 본 발명의 오크라 다당체 추출물을 함유한 제형예 1의 화장료 조성물은 보습제를 함유하는 비교제형예 1에 비하여 약 3.4배 높은 주름개선 효과를 보여주었다.

또한, 오크라 다당체 추출물 대신 주름 개선 효과가 있는 것으로 알려진 아데노신을 함유하는 비교 제형예 4의 화장료와 유사한 결과가 나타나, 오크라 다당체 추출물의 우수한 주름 개선 효과를 나타냄을 알 수 있었다. 또한 본 발명의 오크라 다당체 추출물을 함유하는 화장료를 피부에 도포한 대부분의 피검자들에게서 피부 자극을 관찰할 수 없었다.

실험예 9. 사용감개선 효과 평가

사용감 개선 효과 평가는 다음과 같이 실시하였다. 20명의 30-40세 여성을 무작위로 2개군으로 나누어 제형예 1과 비교제형예 1의 크림을 매일 아침 저녁 2회씩 세안 후 화장료 적당량을 눈가를 중심으로 연속적으로 바르게 하였다. 각 피검자의 사용감을 사용자 설문을 통하여 평가하였다. 실험 결과는 하기의 표 9에 나타낸 바와 같다. 본 발명의 화장료의 사용감 개선 효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가 하였다. 제형예 1과 비교제형예 1의 영양크림을 피부에 사용후 사용감 개선효과를 평가하였다.

사용감 개선 효과(설문평가)

시료	발림성	끈적임	쿠션감	유연감	밀착성
제형예 1	9.6	1.8	9.5	9.6	9.9
비교제형예 1	5.5	5.2	6.4	6.7	7.1

각각의 평가 항목을 10점 만점으로 하여 평가를 하였으며 표 10과 같은 결과를 얻었다. 상기 표 10의 결과에 따르면, 오크라 다당체 추출물을 함유한 본 발명의 크림은 화장품에 보습제와 사용감개선제로 통상적으로 광범위하게 사용하는 1,3-부틸렌글라이콜과 글리세린으로 사용되는 비교제형예1과 비교하여 발림성, 쿠션감, 유연감, 밀착성이 우수하여 화장품 사용감이 월등히 우수함을 보였으며, 끈적임이 매우 적은 것을 확인 할 수 있었다. 따라서 본 발명의 오크라 다당체 추출물은 화장품의 사용감개선제로써 매우 뛰어난 효과를 갖는 것을 확인 할 수 있었다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (7)

1. 삭제
2. 과피를 제거한 성숙한 오크라(Hibiscus esculentus) 열매에서 추출된 오크라 다당체를 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물.
3. 과피를 제거한 성숙한 오크라(Hibiscus esculentus) 열매에서 추출된 오크라 다당체를 유효성분으로 함유하는 피부장벽 개선용인 것인 화장료 조성물.
4. 삭제
5. 과피를 제거한 성숙한 오크라(Hibiscus esculentus) 열매에서 추출된 오크라 다당체를 유효성분으로 함유하는 사용감 개선용 화장료 조성물.
6. 제2항, 제3항 및 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 오크라 다당체는 상기 화장료 조성물의 전체 중량에 대하여 0.001 ~ 30.0 중량% 함유되는 것인 화장료 조성물.
7. 제2항, 제3항 및 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 오크라 다당체는 물, 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 글리세린, 아세톤, 에틸 아세테이트, 클로로포름, 부틸 아세테이트, 디에틸에테르, 디클로로메탄, 헥산 및 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 추출용매를 이용한 용매 추출법으로 제조된 것인 화장료 조성물.