KR101447019B1 - 식물 병원균 방제기술, 방제방법 및 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주 및 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 식물 병원균 방제기술, 방제방법 및 식물 병원균 방제용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로, 본 발명의 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주 및 이의 배양액이 잔디 병해를 유발하는 병원균인 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea)에 의해 유발되는 잿빛곰팡이병, 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum)에 의해 유발되는 고추 탄저병, 콜레토트리쿰 글레오스포로데스(Colletotrichum gleosprodes)에 의해 유발되는 단감탄저병, 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis)에 의해 유발되는 누른잎마름병, 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A)(Rhizoctonia solani AG-1(1A))에 의해 유발되는 갈색잎마름병, 스클레로티움 롤프시아이(Sclerotium rolfsii)에 의해 유발되는 흰비단병, 파이토프쏘라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)에 의해 유발되는 참다래역병을 포함하는 다양한 식물 병원균에 대해 우수한 항진균활성을 나타내므로, 친환경적인 식물 병원균 방제용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

식물 병원균 방제기술, 방제방법 및 조성물{Composition, method and application for anti plant pathogen}
본 발명은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주 및 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 식물 병원균 방제용 방제기술, 방제방법 및 식물 병원균 방제용 조성물에 관한 것이다.
환경 및 생태계 보전에 관한 국제적인 관심이 집중되면서 식물병의 방제를 위한 유기합성농약의 과다한 사용으로 토양오염, 환경 및 생태계의 파괴, 인축독성 등의 피해로 인한 문제점이 부각되고 있다. 특히 유기합성농약의 오남용으로 인한 농업생태계 오염에 대한 우려는 친환경 안전농산물에 대한 소비자의 관심이 증폭되고 있는 실정이다. 이에 유기합성농약으로 인한 부작용을 해결하기 위해 생태계에서 조절적 역할을 하는 미생물 및 이의 대사산물을 이용하여 식물 병원균과 길항작용을 하도록 하는 생물학적 방제법이 연구되고 있다. 이러한 천연식물보호제의 가장 큰 장점은 환경과 농업생태계에 미치는 영향을 최소화할 수 있으나, 천연식물보호제가 살아있는 생물체이기 때문에 상온에서의 보존기간이 짧은 문제점이 있다. 이에 천연식물보호제로 산업화된 미생물은 바실러스 속에 속하는 것이 대부분으로 이는 열과 건조 등의 환경 스트레스에 견딜 수 있는 내생포자를 형성하기 때문이다. 특히 바실러스균은 자연계에 많이 분포하며 복합 기능을 가지는 펩타이드 성 물질을 생산하는데 이는 농작물의 생육과 관련이 있는 식물의 생육촉진과 식물 병원균에 대항할 수 있는 항생기작 및 식물체 방어기작을 부여할 뿐만 아니라 근권 내 미생물의 정착을 돕는 것으로 알려져 있다.
천연식물보호제는 1970년 초반에 본격적인 연구가 진행되어 왔다. 주로 정부 기관연구소, 대학, 기업체에서 수행되어 왔으며 가장 성공적인 천연식물보호제로는 아그로박테리움 라디오박터(Agrobacterium radiobacter)를 이용하여 개발된 Galltro-A, Nogall/Diegall, Norbac84C 등의 제품이 등록되어 사용되고 있고, 2003년 미국 Agraquest사가 개발한 Serenade는 라이센스를 통하여 다국적농약기업인 BASF를 통하여 전세계 25개국에 판매중이다. 국내에서는 현재 약 30여 종의 천연식물보호제가 등록되어 사용되고 있다. 특히 살균제로는 약 17종이 알려져 있는데 이중 바실러스 속 계열이 13종에 이르고 있다.
이러한 식물병에 대한 생물학적 방제제로 많이 사용되고 있는 바실러스 속 균주는 인간에게 비병원성이고 내생포자를 가지고 있는 그람 양성 세균으로 배양이 용이한 특성을 가지고 있다. 뿐만 아니라 프로테아제(protease), 아밀라아제(amylase), 글루카나제(glucanase) 및 셀룰라아제(cellulase) 등의 각종 효소나 다양한 구조를 가진 항균활성물질 등을 생산하는 것으로 보고되어 있어, 산업적으로 중요한 세균으로 생물산업에서 숙주균으로 활발히 이용되고 있다.
한편, 바실러스 아밀로리퀴파시엔스(Bacillus amyloliquefaciens)를 이용한 식물 병원균 방제용 조성물로서, KB3 균주(대한민국 특허출원번호 제10-2011-0065439호), CS61 균주(대한민국 특허출원번호 제10-2011-0029387호), KB-MJK 601 균주(대한민국 특허출원번호 제10-2011-0014038호), IN937a 균주(대한민국 특허출원번호 제10-2010-0133116호), JBC36 균주(대한민국 특허등록 제1189104호), EML-BS2 균주(대한민국 특허출원번호 제10-2010-0065557호), CP1 균주(대한민국 특허출원번호 제10-2010-0040303호), GIB-01 균주(대한민국 특허출원번호 제10-2009-0037218호), CC175 균주(대한민국 특허등록 제838103호), A-7 균주(대한민국 특허등록 제868901호), LP03 균주(대한민국 특허등록 제807403호), KS-4 균주(대한민국 특허등록 제781472호), 케이티지비0202 균주(대한민국 특허등록 제535912호), LX9 균주(대한민국 특허등록 제472376호), KM112 균주(대한민국 특허등록 제4295586호) 등이 항진균활성을 나타내는 것이 개시되어 있다.
상기의 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 균주와 같이 식물 병원균에 대해 항진균 활성을 보이는 미생물 방제제는 많이 공개되어 있지만, 다양한 식물병을 효과적으로 방제할 수 있는 미생물 방제제개발은 미흡한 실정이므로 새로운 생물학적 미생물 방제제의 개발이 요구되고 있다.
또한, 종래의 연구에서는 병원균에 대한 항균작용을 주로 하는 미생물을 생물학적 방제에 이용되어 왔으나, 항균활성을 나타내는 물질의 활성 농도가 낮아 생물학적 방제효과가 떨어지는 등의 문제점이 유발되고 있다.
이에, 본 발명자들은 다양한 식물 병원균에 대한 우수한 항진균활성을 가지는 균주 및 물질을 개발하기 위해 노력한 결과, 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주 및 이의 배양산물이 잔디 병해를 유발하는 병원균인 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea)에 의해 유발되는 잿빛곰팡이병, 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum)에 의해 유발되는 고추 탄저병, 콜레토트리쿰 글레오스포로데스(Colletotrichum gleosprodes)에 의해 유발되는 단감탄저병, 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis)에 의해 유발되는 누른잎마름병, 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A)(Rhizoctonia solani AG-1(1A))에 의해 유발되는 갈색잎마름병, 스클레로티움 롤프시아이(Sclerotium rolfsii)에 의해 유발되는 흰비단병, 파이토프쏘라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)에 의해 유발되는 참다래역병을 포함하는 다양한 식물 병원균에 대해 우수한 항진균활성을 나타냄을 확인하고, 또한 특이적 감응물질 교환을 통해 병원균이 위축되거나 사멸하게 되는 기술과 방법을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주를 제공하는 것이다.
또한, 본 발명은 상기 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 식물 병원균 방제기술, 방제방법 및 식물 병원균 방제용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은 수탁번호 KCTC 12355BP로 기탁된 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주를 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 식물 병원균과의 상호반응에 의해 분비되는 감응물질을 유효성분으로 함유하는 식물 병원균 방제기술, 방제방법 및 식물 병원균 방제용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 식물 병원균과의 상호반응에 의해 분비되는 감응물질을 유효성분으로 함유하는 라이족토니아 솔라니 에이지-2-2(IV)에 의하여 유발되는 잔디 라이족토니아마름병(라지패치) 방제기술, 방제방법 및 잔디 라이족토니아마름병(라지패치) 방제용 조성물을 제공한다.
아울러, 본 발명은,
1) 수탁번호 KCTC 12355BP로 기탁된 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주를 액체 배지에서 배양하여 배양물을 제조하는 단계; 및
2) 상기 단계 1) 제조된 배양물을 건조 및 분말화하여 원제를 제조하는 단계를 포함하는 식물 병원균 방제용 조성물의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주 및 이의 배양액이 잔디 병해를 유발하는 병원균인 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea)에 의해 유발되는 잿빛곰팡이병, 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum)에 의해 유발되는 고추 탄저병, 콜레토트리쿰 글레오스포로데스(Colletotrichum gleosprodes)에 의해 유발되는 단감탄저병, 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis)에 의해 유발되는 누른잎마름병, 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A)(Rhizoctonia solani AG-1(1A))에 의해 유발되는 갈색잎마름병, 스클레로티움 롤프시아이(Sclerotium rolfsii)에 의해 유발되는 흰비단병, 파이토프쏘라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)에 의해 유발되는 참다래역병을 포함하는 다양한 식물 병원균에 대해 우수한 항진균활성을 나타내므로, 친환경적인 식물 병원균 방제기술, 방제방법 및 식물 병원균 방제용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 본 발명에 따른 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주의 16s rDNA의 염기서열을 나타낸 도이다.
도 2는 본 발명에 따른 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 ANI 분석을 통한 동정을 확인한 도이다.
도 3은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주 배양액 산 침전물의 HPLC 프로파일(profile)을 나타낸 도이다.
도 4는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 생성하는 항생물질을 확인하기 위하여 HPLC 분석을 수행한 도이다.
도 5a는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 생성하는 항생물질을 확인하기 위하여 LC-mass 분석을 수행한 도이다.
도 5b는 도 5a의 1 내지 3번 피크의 mass 값을 나타내는 도이다.
도 5c는 도 5a의 4 내지 6번 피크의 mass 값을 나타내는 도이다.
도 5d는 도 5a의 7 내지 9번 피크의 mass 값을 나타내는 도이다.
도 5e는 도 5a의 10 내지 12번 피크의 mass 값을 나타내는 도이다.
도 6은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주 추출물, 저지대추출물, 배양농축액 및 산 침전물의 라이족토니아 솔라니 AG2-2(Ⅳ)에 대한 대치배양을 나타낸 도이다.
도 7은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주 및 라이족토니아 솔라니 AG2-2(Ⅳ)의 대치배양에 의한 감응물질 형성 대를 나타낸 도이다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 수탁번호 KCTC 12355BP로 기탁된 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주를 제공한다.
상기 균주는 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea), 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum), 콜레토트리쿰 글레오스포로데스(Colletotrichum gleosprodes), 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis), 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A)[Rhizoctonia solani AG-1(1A)], 스클레로티움 롤프시아이(Sclerotium rolfsii) 및 파이토프쏘라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 식물 병원균에 대해 항균 활성을 가지는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 토양으로부터 분리한 미생물로부터 항균 활성이 우수한 균주를 선발한 다음, 염기서열을 확인하였고(서열번호 1 및 도 1 참조), NCBI GenBank 유전자 데이터베이스와의 상동성 검색을 수행하여 계통학적 위치를 확인하였다. 선발된 균주의 분자계통학적 분석 결과바실러스 속의 계통학적 그룹에 속하는 균주로서 바실러스 아밀로리퀴파시엔스로 나타나는 것을 확인하였다.
또한, 선발된 균주의 유전체 분석을 통해 바실러스 아밀로리퀴파시엔스라는 사실을 재확인하였고(도 2 참조), 유전체 주석화를 통해 surfactin, bacillomycin D-like antibiotics, fengycin, putative peptide, bacillibactin, bacilysin/anticapsin, macrolactin, bacillaene, difficidin 등의 생합성에 관여하는 유전체가 존재함을 확인하였다(표 1 참조).
또한, 상기 분리 및 선발된 균주는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004로 명명하고, 한국생명공학연구원 생명자원센터에 2013년 1월 18일자로 기탁하여 기탁번호 KCTC 12355BP를 부여받았다.
또한, 상기 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 생산하는 효소를 확인한 결과, 본 발명의 신규한 균주는 에스터라제(Esterase(C4)) 및 나프톨-에이에스-비아이-포스포하이드롤라제(Naphtol-AS-BI-phosphohydrolase)를 생산함을 확인하였다(표 2 참조). 또한, 상기 균주의 탄수화물 이용성 확인하여, 하기 [표 3]에 개시하였다(표 3 참조).
또한, 본 발명의 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 생성하는 항생물질을 분석하기 위하여, 상기 균주 배양액 산 침전물의 HPLC 분석 결과 retention time 37분 ~ 45분 사이에 다수의 peak가 검출되었고, 이들 peak의 retention time과 222, 275 nm에서 최대흡광도를 나타내는 UV spectrum으로부터 리포펩티드(lipopeptide)계 항생제인 펜기신 클러스터(fengycin cluster)로 확인하였다(도 3 및 도 4 참조).
또한, 상기 HPLC 분석에 의하여 리포펩티드 항생물질인 펜기신(fengycin)과 유사한 HPLC retention time(37분 ~ 45분)을 나타내는 영역을 LC-mass로 분석한 결과, 상기 균주 배양액은 바실러스(Bacillus)속의 항균활성물질로 알려진 이투린(iturin), 펜기신 그룹(fengycin group)을 함유하고 있는 것을 확인하였다(도 5 참조).
또한, 본 발명의 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 병원균 라이족토니아 솔라니 AG2-2(Ⅳ)에 대한 길항작용을 확인한 결과, 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 단독 액체배양시에는 항생물질을 외부로 분비하지 않고, 세포 내부에 잠재적으로 항생물질을 보유하고 있다가, 병원균의 자극을 받으면 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004의 delivery system 및 transport system에 관련된 유전자가 활성화되어 외부로 항생물질을 분비한다는 것을 확인하였다(도 6 참조).
또한, 본 발명의 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 식물 병원균에 대한 생육저지 효과를 확인한 결과, 상기 균주는 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea), 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum), 콜레토트리쿰 글레오스포로데스(Colletotrichum gleosprodes), 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis), 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A)[Rhizoctonia solani AG-1(1A)], 스클레로티움 롤프시아이(Sclerotium rolfsii) 또는 파이토프쏘라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)에 대해 유의적인 항진균 효과를 나타내는 것을 확인하였고, 특히, 잔디 병해를 유발하는 병원균인 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 누른잎마름병을 유발하는 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis) 및 고추 탄저병을 유발하는 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum)에 대해서는 현저한 항진균활성을 나타내는 것을 확인하였다(표 5 참조).
또한, 본 발명의 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)를 포함하는 식물 병원균에 대한 작용기작을 확인한 결과, 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주에 대해 감응환을 형성하고, 이는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)와 상호작용을 하여 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)에서 감응물질이 분비되어 병원균 자신의 생장을 억제하는 것을 확인하였다(도 7 참조).
따라서, 본 발명의 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주는 잔디 병해를 유발하는 병원균인 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea)에 의해 유발되는 잿빛곰팡이병, 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum)에 의해 유발되는 고추 탄저병, 콜레토트리쿰 글레오스포로데스(Colletotrichum gleosprodes)에 의해 유발되는 단감탄저병, 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis)에 의해 유발되는 누른잎마름병, 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A)(Rhizoctonia solani AG-1(1A))에 의해 유발되는 갈색잎마름병, 스클레로티움 롤프시아이(Sclerotium rolfsii)에 의해 유발되는 흰비단병, 파이토프쏘라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)에 의해 유발되는 참다래역병을 포함하는 다양한 식물 병원균에 대해 우수한 항진균활성을 나타내므로, 친환경적인 식물 병원균 방제용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주, 이의 배양액 또는 식물 병원균과의 상호반응에 의해 분비되는 감응물질을 유효성분으로 함유하는 식물 병원균 방제기술, 방제방법 및 식물 병원균 방제용 조성물을 제공한다.
상기 식물 병원균은 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea), 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum), 콜레토트리쿰 글레오스포로데스(Colletotrichum gleosprodes), 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis), 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A)[Rhizoctonia solani AG-1(1A)], 스클레로티움 롤프시아이(Sclerotium rolfsii) 및 파이토프쏘라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 감응물질은 상기 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 배지위에 식물 병원균을 배양한 후, 상기 균주 또는 이의 배양액과 상기 식물 병원균으로부터 상호반응에 의해 분비되는 감응물질을 메탄올을 이용하여 회수하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 본 발명의 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 식물 병원균에 대한 생육저지 효과를 확인한 결과, 상기 균주는 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea), 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum), 콜레토트리쿰 글레오스포로데스(Colletotrichum gleosprodes), 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis), 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A)[Rhizoctonia solani AG-1(1A)], 스클레로티움 롤프시아이(Sclerotium rolfsii) 또는 파이토프쏘라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)에 대해 유의적인 항진균 효과를 나타내는 것을 확인하였고, 특히, 잔디 병해를 유발하는 병원균인 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 누른잎마름병을 유발하는 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis) 및 고추 탄저병을 유발하는 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum)에 대해서는 현저한 항진균활성을 나타내는 것을 확인하였다(표 4 참조).
따라서, 본 발명의 균주 또는 이의 배양액은 다양한 식물 병원균에 대해 우수한 항진균활성을 나타내므로, 친환경적인 식물 병원균 방제기술, 방제방법 및 식물 병원균 방제용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 수탁번호 KCTC 12355BP로 기탁된 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주 및 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 라이족토니아 솔라니 에이지-2-2(IV)에 의하여 유발되는 잔디 라이족토니아마름병(라지패치) 방제기술, 방제방법 및 잔디 라이족토니아마름병(라지패치) 방제용 조성물을 제공한다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 본 발명의 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주를 이용하여, 액상 및 분상제제를 제조한 다음, 물에 200배 내지 1000배 희석하여 1 L/m2로 1회 토양 관주처리한 다음, 최종 약제 처리 한달 후 잔디 라이족토니아마름병(라지패치) 시험군의 피해면적율을 조사하여 방제효과를 확인한 결과, 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC 1004 균주 분상제제는 최대 90.1%의 높은 방제가를 나타내었으며 천연식물보호제로서의 실용성이 높을 것을 확인하였다(표 6 참조).
따라서, 본 발명의 균주 또는 이의 배양액은 라이족토니아 솔라니 에이지-2-2(IV)에 의하여 유발되는 잔디 라이족토니아마름병(라지패치) 대해 우수한 항진균활성을 나타내므로, 친환경적인 라이족토니아마름병(라지패치) 방제용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은,
1) 수탁번호 KCTC 12355BP로 기탁된 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주를 액체 배지에서 배양하여 배양물을 제조하는 단계; 및
2) 상기 단계 1) 제조된 배양물을 건조 및 분말화하여 원제를 제조하는 단계를 포함하는 식물 병원균 방제용 조성물의 제조방법을 제공한다.
상기 단계 1)의 배지는 덱스트로스(dextrose) 0.1 내지 10.0 중량부 및 펩톤(peptone) 0.1 내지 10.0 중량부를 포함하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
상기 단계 1)의 배양은 25 내지 35℃ 및 pH 5.5 내지 8.5에서 배양하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명에 의한 조성물은 통상적인 방법으로 식물 병원균 방제용으로 제형화할 수 있으며 건조분말 형태 또는 액상 형태로 제조할 수 있다.
구체적으로, 본 발명에 의한 조성물은 액상 생물농약 형태로 제조될 수 있으며, 이에 증량제를 첨가하여 가루분말의 형태로 이용하거나 이를 제형화하여 과립화시킬 수도 있다. 그러나 그 제형에 특별히 한정되지는 않는다.
또한, 상기 조성물은 증량제를 추가적으로 포함할 수 있으며, 증량제는 미생물과 같은 유효성분 조성에서 적절한 비율로 함유될 수 있도록 전체 생물농약 조성물의 양을 조절하는 역할을 한다. 본 발명에서 사용될 수 있는 증량제로는 소듐알기네이트, 젤라틴화 전분, 옥수수 전분, 대두박, 밀기울, 입상섬유질, 유안, 규조토, 제올라이트, 벤토나이트, 탈크, 카올린, 파이로필라이트, 화이트카본, 당류 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 식물 병원균과의 상호반응에 의해 분비되는 감응물질을 유효한 양으로 식물 또는 재배 토양에 처리하는 단계를 포함하는 식물 병원균 방제방법을 제공한다.
상기 조성물을 이용한 방제방법은 통상 일반적으로 행하고 있는 방법, 즉 살포(예를 들면 분무, 미스팅, 아토마이징, 분말 살포, 과립 살포, 수면시용, 상시용 등), 토양시용(예를 들면 혼입, 관주 등), 표면사용(예를 들면 도포, 도말법, 피복 등), 침지, 훈연 시용 등에 의해 행할 수 있다. 그 사용량은, 피해상황, 적용방법, 적용장소 등에 따라 적절히 결정할 수 있다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 본 발명의 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주를 이용하여, 액상 및 분상제제를 제조한 다음, 물에 200배 내지 1000배 희석하여 1 L/m2로 1회 토양 관주처리한 다음, 최종 약제 처리 한달 후 잔디 라이족토니아마름병(라지패치) 시험군의 피해면적율을 조사하여 방제효과를 확인한 결과, 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC 1004 균주 분상제제는 최대 90.1%의 높은 방제가를 나타내었으며 천연식물보호제로서의 실용성이 높을 것을 확인하였다(표 6 참조).
따라서, 본 발명의 방제방법은 다양한 식물 병원균에 대하여, 친환경적인 식물 병원균 방제방법으로 유용하게 사용할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004( Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주의 분리 및 동정
토양으로부터 분리한 미생물로부터 항균 활성이 우수한 균주를 선발하였다.
상기 균주의 동정을 위하여 창원대학교에 의뢰하여 16s rDNA 염기서열 분석을 하였다. 그 결과, 도 1(서열번호 1)의 염기서열을 확인하였고, NCBI GenBank 유전자 데이터베이스와의 상동성 검색을 수행하여 계통학적 위치를 확인하였다. 선발된 균주의 분자계통학적 분석 결과, 본 발명의 균주는 바실러스 속의 계통학적 그룹에 속하는 균주로서 바실러스 아밀로리퀴파시엔스로 나타나는 것을 확인하였다.
상기 분리 및 선발된 균주는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004로 명명하고 한국생명공학연구원 생명자원센터에 2013년 1월 18일자로 기탁하여 기탁번호 KCTC 12355BP를 부여받았다.
< 실시예 2> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 유전체 해독 및 분석
한국생명공학원에 의뢰하여 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 유전체 해독 및 분석을 진행하였다.
구체적으로, 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주를 Illumina 사의 Hiseq2000을 이용하여 2×100 paired end 시퀀싱을 통해 약 500bp의 단편 서열을 얻어 30,257,430개의 서열(3.06Gb)을 읽을 수 있었으며 CLC Genomics Workbench Ver. 5.5를 통해 트리밍(trimming)한 후 평균 길이 93.9bp의 총 2.48Gb를 읽을 수 있었다. 신규 어셈블리(De novo assembly) 과정 및 참조서열에 대한 매핑(reference meapping)을 통해 총 9,939,052bp의 서열을 밝혔다. 이때 참조서열로는 Bacillus amyloliquefaciens FZB42(3,918,589bp)를 이용하여 매핑하였다.
신규 어셈블리로 만들어진 scaffold 구조에 paired read를 다시 정렬(align)하여 gap 영역을 자동으로 채웠다. Gap을 부분적으로 채운 서열은 RAST server(http://rast.nmprd.org)에 제출하여 자동 유전체 주석화를 실시하였다. 두 균주 사이에 공통된 유전자의 average nucleotide identity(ANI)가 균주 간의 유전적 연관성을 측정하기 위한 유용한 수단으로 사용될 수 있는데 이 방법은 간단하고 모든 종에 적용될 수 있으며 종 아래 수준에서의 균주 구별도 가능하다. 95~96% ANI는 현재 종을 정의하는 기준으로 쓰이는 전통적인 60~70% DNA-DNA hybridization에 해당된다. JSpecies프로그램을 이용하여 ANI 분석을 한 결과 type species인 Bacillus amyloliquefaciens subsp. amyloliquefaciens ATCC 23350T = DSM 7T와 93.8%의 ANI를 나타내었고, 특히 Bacillus amyloliquefaciens FZB42와 97.6%의 ANI를 나타내었다(도 2). 따라서 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004는 Bacillus amyloliquefaciens 로 동정되었다.
또한, 유전체 주석화를 위해 RAST(Rapid Annotation Using Subsystem Technology) 서버를 이용하였다. 본 서버는 세균 및 고세균 유전체의 완전 자동 주석화 서비스이다. Subsystem이란 대사 경로나 단백질 복합체 혹은 단백질의 클래스를 구성하는 functional role의 집합체로 전문 주석자(Expert annotator)에 의해 여러 유전체로부터 curation한 후 이로부터 단백질 패밀리인 FIGfam을 구성하며, 이는 자동 주석화를 가능하게 하는 근간이 된다. 이때 주석화된 유전체 정보는 SEED framework에서 유지되고 있다. SEED란 Project to Annotation 1000 Genomes를 완수하기 위해 만들어진 주석화 환경(annotation environment)이다.
바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004와 가장 유사한 종인 Bacillus amyloliquefaciens FZB42를 참조서열로 하여 항생물질 생합성 유전자군을 조사하였다.
그 결과, 표 1에서 나타나는 바와 같이 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004는 surfactin, bacillomycin D 유사 항생물질, fengycin, putative peptide, bacillibactin, bacilysin/anticapsin, macrolactin, bacillaene, difficidin 등의 생합성에 관여하는 유전체를 가지고 있음을 확인하였다(표 1).
바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 및 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 FZB42 균주의 항생물질 생합성 유전자군 비교
항생물질 생합성 유전자군 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 바실러스 아밀로리퀴파시엔스
FZB42
Surfactin ○ ○
Bacillomycin D Bacillomycin D like gene cluster ○
Fengycin ○ ○
Putative peptide ○ ○
Bacillibactin ○ ○
Bacilysin/anticapsin ○ ○
Macrolactin ○ ○
Bacillaene ○ ○
Difficidin ○ ○
< 실시예 3> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 생화학적 특성 확인
<3-1> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 생산하는 효소 확인
상기 <실시예 1>에서 분리 및 동정한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 생산하는 효소를 확인하였다.
구체적으로, API ZYM kit(BioMeriux, Lyon, 프랑스)를 이용하여 19 효소에 대하여 생산성을 확인하였으며, 색의 변화 정도에 따라 0~5까지의 값으로 표시하였고, 음성반응(-)은 0, 중간 반응 값인 3 이상이면 양성(+)으로 판정하였다.
그 결과, 표 2에 나타낸 바와 같이, 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주는 에스터라제(Esterase(C4)) 및 나프톨-에이에스-비아이-포스포하이드롤라제(Naphtol-AS-BI-phosphohydrolase)를 생산함을 확인하였다(표 2).
Figure 112013015678476-pat00001
<3-2> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 탄수화물 이용성 확인
바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 탄수화물 이용성을 확인하기 위하여, API 50 CHB kit를 이용하여 49가지의 탄수화물의 산화, 발효 및 동화를 확인하였다. 결과확인은 배지에 포함되어 있는 페놀레드(phenol red) 지시약에 의해 산이 생성되었을 경우 노란색으로 나타나면 양성으로, 반응이 없으면 음성(빨강)으로 판단하였으며, 그리고, 에스쿨린(Esculin) 시험 빨강색에서 검은색으로 색이 변하면 양성으로 판단하였으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다(표 3).
Figure 112013015678476-pat00002
< 실시예 4> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 식물 병원균에 대한 항균물질 분석
바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 생성하는 항생물질을 분석하기 위하여 천연물분석전문기업인 엔피켐(NPChem)에 배양액 산 침전물의 HPLC 및 LC-MS 분석을 의뢰하였다.
구체적으로, 분석시료는 배양액 약 2L에 염산을 가하여 pH 2로 조정한 후 실온에서 5시간 방치하고 배양액을 10,000 rpm에서 30분간 원심분리하여 상등액을 버린 후, 침전물에 메탈올을 가하여 용해시켰다. 용해되지 않은 침전물은 다시 원심분리하여 제거하고 메탄올에 용해되는 부분만을 취하여 감압 농축하였다. 농축된 시료는 메탄올 300 ㎕에 용해시켜 분석시료로 사용하였다.
HPLC는 하기 [표 4]에 기재한 gradient 용매제를 이용하여 수행하였으며, 용매A는 5% 아세토니트릴(acetonitrile)/0.04% TFA를, 용매 B는 아세토니트릴을 이용하여 수행하였다. Column은 ODS column을 사용하였으며, 유속은 분당 1 ml 이었다.
Time(min) 용매 A(%)
(5% ACN/0.04% TFA)		 용매 B(%) Flow rate
(ml/min)
0.0 90 10 1
80.0 0 100 1
85.0 90 10 1
90.0 90 10 1
그 결과, 도 3 및 도 4에 나타낸 바와 같이, HPLC 분석 결과 retention time 37분 ~ 45분 사이에 다수의 peak가 검출되었고, 이들 peak의 retention time과 222, 275 nm에서 최대흡광도를 나타내는 UV spectrum으로부터 리포펩티드(lipopeptide)계 항생제인 펜기신 클러스터(fengycin cluster)로 확인하였다(도 3 및 도 4).
또한, 상기 HPLC 분석에 의하여 리포펩티드 항생물질인 펜기신(fengycin)과 유사한 HPLC retention time(37분 ~ 45분)을 나타내는 영역을 LC-mass로 분석하였다.
그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 12개의 TIC 피크가 검출되었다. 또한, 각각의 분자량을 보면 1번 화합물은 [M+H]+가 m/z 1538.8, [M+Na]+가 m/z 1560.8에서 관찰되어 분자량이 1538이었으며, 2번 화합물은 혼합물로 주화합물은 [M+H]+가 m/z 1552.8, [M+Na]+가 m/z 1575.8에서 관찰되어 분자량이 1552인 화합물과 [M+H]+가 m/z 1566.8, [M+Na]+가 m/z 1588.8에서 관찰되어 분자량이 1566인 화합물의 혼합물이었다. 3번 화합물은 [M+H]+가 m/z 1523.8, [M+Na]+가 m/z 1545.8에서 관찰되어 분자량이 1523이었으며, 4번 화합물은 [M+H]+가 m/z 1538.8, [M+Na]+가 m/z 1560.8에서 관찰되어 분자량이 1538이었다. 5번 화합물은 혼합물로 주화합물은 [M+H]+가 m/z 1506.8, [M+Na]+가 m/z 1528.7에서 관찰되어 분자량이 1506인 화합물과 [M+H]+가 m/z 1552.8, [M+Na]+가 m/z 1574.8에서 관찰되어 분자량이 1552인 화합물의 혼합물이었다. 6번 화합물은 [M+H]+가 m/z 1566.9, [M+Na]+가 m/z 1588.8에서 관찰되어 분자량이 1566이었고, 7번 화합물은 혼합물로 주화합물은 [M+H]+가 m/z 1520.8, [M+Na]+가 m/z 1542.8에서 관찰되어 분자량이 1520인 화합물과 [M+H]+가 m/z 1522.8, [M+Na]+가 m/z 1544.8에서 관찰되어 분자량이 1522인 화합물의 혼합물이었다. 8번 화합물은 [M+H]+가 m/z 1534.8, [M+Na]+가 m/z 1556.8에서 관찰되어 분자량이 1534이었으며, 9번 화합물은 혼합물로 주화합물은 [M+H]+가 m/z 1504.8, [M+Na]+가 m/z 1526에서 관찰되어 분자량이 1504인 화합물, [M+H]+가 m/z 1534.8, [M+Na]+가 m/z 1556.8에서 관찰되어 분자량이 1534인 화합물, [M+H]+가 m/z 1550.8, [M+Na]+가 m/z 1572.8에서 관찰되어 분자량이 1550인 화합물의 혼합물이었다. 10번 화합물은 [M+H]+가 m/z 1518.8, [M+Na]+가 m/z 1540.8에서 관찰되어 분자량이 1518이었으며, 11번 화합물은 혼합물로 주화합물은 [M+H]+가 m/z 1096.7, [M+Na]+가 m/z 1118.4에서 관찰되어 분자량이 1096인 화합물과 [M+H]+가 m/z 1562.9, [M+Na]+가 m/z 1584.8에서 관찰되어 분자량이 1562인 화합물의 혼합물이었다. 12번 화합물은 [M+H]+가 m/z 1068.6, [M+Na]+가 m/z 1090에서 관찰되어 분자량이 1068이었다.
상기와 같은 분자량을 바탕으로 데이타베이스(database) 및 문헌검색을 수행한 결과, 상기 화합물이 펜기신(fengycin)과 유사한 HPLC retention time을 나타내지만 펜기신보다는 분자량이 다소 큰 화합물임을 알 수 있었다. 또한, 11번 및 12번 화합물의 경우 이투린(iturin) 계열의 화합물과 유사한 분자량을 나타내었다.
따라서, 상기 화합물은 바실러스(Bacillus)속의 항균활성물질로 알려진 이투린(iturin), 펜기신 그룹(fengycin group)으로 확인하였다(도 5).
< 실시예 5> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 식물 병원균에 대한 항균물질 활성화 확인
바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 병원균 라이족토니아 솔라니 AG2-2(Ⅳ)에 대한 길항작용을 확인하기 위하여, 살균한 감자한천(1/5 희석) 배지에 라이족토니아 솔라니 AG2-2(Ⅳ)를 올리고 사방에 24시간 동안 배양한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주 배양액을 10 ㎕씩 접종하여 30℃에서 5일간 대치배양한 후, 두 균주 사이에서 생성된 저지환 부위를 잘라 분리하여 메탄올로 추출하였고 추출한 물질을 농축기로 농축한 후 CZ라 명명하였다.
또한, LB 배지에서 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주를 30℃, 120 rpm으로 3일간 진탕배양하여 1차 접종원으로 한 후, 이를 30L LB 배지에 접종한 후 30℃, 120 rpm으로 3일간 진탕배양하여 초고속원심분리기로 균체와 배양액을 분리하여 상등액을 모은 후 이를 1/10로 농축하여 30L로 명명하였다.
또한, 남은 균체는 에탄올을 이용하여 추출한 후 이를 균체라 명명하였다.
아울러, 30L 배양 상등액에 염산을 이용하여 산 침전시킨 후 추출한 물질을 산 침전으로 명명하였다. 그런 다음, 감자한천배지(1/5 희석) 배지에 라이족토니아 솔라니 AG2-2(Ⅳ) 병원균과 CZ, 30L, 균체 및 산 침전을 각각 대치한 후 30℃에서 3일간 배양하였다.
그 결과, 도 6에 나타낸 바와 같이, CZ와 균체 추출물에서는 병원균에 대하여 길항력을 나타내었으나, 배양농축액(30L)과 산 침전물은 병원균에 대하여 길항력을 나타내지 않는 것을 확인하였다(도 6). 이는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 단독 액체배양시에는 항생물질을 외부로 분비하지 않고, 세포 내부에 잠재적으로 항생물질을 보유하고 있다가, 병원균의 자극을 받으면 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004의 delivery system 및 transport system에 관련된 유전자가 활성화되어 외부로 항생물질을 분비한다는 것을 확인하였다.
< 실시예 6> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 식물 병원균에 대한 항균활성 확인
상기 <실시예 1>에서 분리 동정한 기탁번호 KCTC 12355BP로 기탁된 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 식물 병원균에 대한 생육저지 효과를 확인하기 위하여, 살균한 감자 한천배지 위에 다양한 식물 병원균과 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004를 배양하였다. 이때, 식물 병원균은 감자 한천배지에서 계대 배양된 개체군을 직경 5 mm크기로 원형절편한 것을 사용하였고, LB 배지에서 28℃, 24시간 배양된 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004를 직경 5 mm의 페이퍼디스크에 20 ㎕ 분주하여 대치배양을 실시하였다. 그런 다음, 각종 병원균의 생육이 잘되는 온도인 28℃에서 10일간 배양한 후, 저지대(Inhibition zone)의 직경을 측정하였다.
상기 식물 병원균으로는 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea), 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum), 콜레토트리쿰 글레오스포로데스(Colletotrichum gleosprodes), 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis), 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A)[Rhizoctonia solani AG-1(1A)], 스클레로티움 롤프시아이(Sclerotium rolfsii) 및 파이토프쏘라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)를 사용하였다.
그 결과, 하기 [표 5]에 나타낸 바와 같이, 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주는 상기 식물 병원균 모두에 대해 유의적인 항진균 효과를 나타내는 것을 확인하였고, 특히, 잔디 병해를 유발하는 병원균인 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 누른잎마름병을 유발하는 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis) 및 고추 탄저병을 유발하는 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum)에 대해서는 현저한 항진균활성을 나타내는 것을 확인하였다(표 5).
바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 항진균 스펙트럼
식물 병원균 항진균 활성
Botrytis cinerea KACC40574 ++++
Botrytis cinerea KACC43521 +++
Colletotrichum acutatum +++++
Sclerotium rolfsii ++
Rhizoctonia cerealis +++++
Rhizoctonia solani AG-1(1A) ++++
Rhizoctonia solani AG-2-2(IV) +++++
Colletotrichum gleosprodes ++++
Phytophthora drechsleri ++
+ : 0 < X 10;
++ : 10 < X 20;
+++ : 20 < X 30;
++++ : 30 < X 40; 및
+++++ : 40 < X.
< 실시예 7> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 라이족토니아 솔라니 AG -2-2(IV)를 포함하는 식물 병원균에 대한 작용기작 확인 및 감응물질 회수법 정립
바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)를 포함하는 식물 병원균에 대한 작용기작을 확인하기 위하여, 1.5% 감자한천배지(1/5배 희석) 300 ml에 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균액을 3 ml 접종하여 균액배지를 만든 후, 페트리접시에 분주하여 굳으면 8번 코르크볼로 천공하였다. 그런 다음, 구멍에 1.5% 한천을 채우고 굳힌 후 직경 5 mm로 원형절편된 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV) 병원균을 올리고 24시간 후에 육안으로 관찰하였다.
그 결과, 도 7에 기재된 바와 같이 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주에 대해 감응환을 형성하는 것을 확인하였다. 또한, 감응물질 분비대 부위를 잘라 분리하여 메탄올로 추출하였고 추출한 물질을 농축기로 농축한 후 이를 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)와 대치배양하였다. 그 결과 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)는 감응물질에 대해 저지대를 형성하였다(도 6 및 도 7). 이는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주가 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)와 상호작용을 하여 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)에서 감응물질이 분비되어 병원균 자신의 생장을 억제하는 것을 확인하였고, 상기 물질 회수방법을 정립하였다.
< 실시예 8> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주의 제형화
본 발명의 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주를 이용하는 식물 병원균 방제제는 다음과 같이 액상 및 분상제제로 제조하였다.
구체적으로 덱스트로스(dextrose) 1%(w/w), 펩톤(peptone) 1%(w/w)를 포함하는 액체 배지에 균주를 접종한 후 28℃, pH 7.0으로 조절하여 3일간 진탕배양한 후 배양액을 원제로 하여 액상 및 분상제제를 제조하였다.
상기 액상제제는 상기 액상원제에 솔빈산칼륨 등의 안정제를 0.1~0.5% 첨가하여 제조하였고, 분상제제는 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 균주 원제 5.0~50.0%(w/w)와 제오실 등의 증량제 50.0~95.5%(w/w)를 혼합한 후 스프레이 드라이를 거친 후 분상 제형으로 제조하였다.
< 실시예 9> 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 의 식물 병원균 방제효과
경남 사천에서 잔디(품종:한국잔디)를 대상으로 잔디 라이족토니아마름병(라지패치) 발생 초기에 상기 <실시예 5>에서 제조된 본 발명의 분상제제를 물에 200배 내지 1000배 희석하여 1 L/m2로 1회 토양 관주처리하였다(2011년 5월25일). 최종 약제 처리 한달 후 잔디 라이족토니아마름병(라지패치) 시험군의 피해면적율을 조사하여 방제효과를 평가하였다.
그 결과, 하기 [표 6]에 나타낸 바와 같이 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC 1004 균주 분상제제는 최대 90.1%의 높은 방제가를 나타내었으며 천연식물보호제로서의 실용성이 높을 것을 확인하였다(표 6).
바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004 분상제제의 잔디 라이족토니아마름병(라지패치) 방제효과
시험약제 처리방법 피해면적율(%) 방제가(%)
200배 희석
발병초 1회 토양관주처리		 3.18 90.1
500배 희석 3.51 89.1
1000배 희석 5.14 84.0
무처리 32.12 -
본 발명의 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주 또는 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 식물 병원균 방제용 조성물은 다양한 식물 병원균에 대해 우수한 항진균활성을 나타냄으로써 친환경적인 식물 병원균 방제용 조성물개발에 유용하게 이용될 수 있다. 따라서 합성화학농약으로 인한 생태계 파괴 및 인축 독성 문제를 해소할 수 있다.
한국생명공학연구원 KCTC12355BP 20130118
<110> Korea Bio Chemical Co., Ltd. <120> Composition, method and application for anti plant pathogen <130> 13p-01-33 <160> 1 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 708 <212> DNA <213> Bacillus amyloliquefaciens KBC1004 <400> 1 gtgcctaata catgcaagtc gagcggacag atgggagctt gctccctgat gttagcggcg 60 gacgggtgag taacacgtgg gtaacctgcc tgtaagactg ggataactcc gggaaaccgg 120 ggctaatacc ggatggttgt ntgaaccgca tggttcagac ataaaaggtg gcttcggcta 180 ccacttacag atggacccgc ggcgcattag ctagttggtg aggtaacggc tcaccaaggc 240 gacgatgcgt agccgacctg agagggtgat cggccacact gggactgaga cacggcccag 300 actcctacgg gaggcagcag tagggaatct tccgcaatgg acgaaagtct gacggagcaa 360 cgccgcgtga gtgatgaagg ttttcggatc gtaaagctct gttgttaggg aagaacaagt 420 gccgttcaaa tagggcggca ccttgacggt acctaaccag aaagccacgg ctaactacgt 480 gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca agcgttgtcc ggaattattg ggcgtaaagg 540 gctcgcaggc ggtttcttaa gtctgatgtg aaagcccccg gctcaaccgg ggaggggtca 600 ttgggaaact ggggaacttg agtgcagaag aggagagtgg aattccacgt gttaccggtg 660 aaatgcgtaa aaatgtggan gaaccccagt ggcgaangcg actctctg 708

Claims (5)

  1. 수탁번호 KCTC 12355BP로 기탁된 신규한 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 KBC1004(Bacillus amyloliquefaciens KBC1004) 균주.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 균주는 라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV)[Rhizoctonia solani AG-2-2(IV)], 보트라이티스 시네레아(Botrytis cinerea), 콜레토트리쿰 아큐타툼(Colletotrichum acutatum), 콜레토트리쿰 글레오스포로데스(Colletotrichum gleosprodes), 라이족토니아 세레알리스(Rhizoctonia cerealis), 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A)[Rhizoctonia solani AG-1(1A)], 스클레로티움 롤프시아이(Sclerotium rolfsii) 및 파이토프쏘라 드레크슬레리(Phytophthora drechsleri)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 식물 병원균에 대해 항균 활성을 가지는 것을 특징으로 하는 균주.
  3. 제 1항의 균주, 이의 배양액 또는 식물 병원균과의 상호반응에 의해 분비되는 감응물질을 유효성분으로 함유하고,
    상기 감응물질은 제1항의 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 배지 위에 식물 병원균을 배양하고 감응환을 분리한 후, 메탄올을 이용하여 추출한 물질인,
    라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV), 보트라이티스 시네레아, 콜레토트리쿰 아큐타툼, 콜레토트리쿰 글레오스포로데스, 라이족토니아 세레알리스, 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A), 스클레로티움 롤프시아이 및 파이토프쏘라 드레크슬레리로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 식물 병원균 방제용 조성물.
  4. 삭제
  5. 제 1항의 균주, 이의 배양액 또는 식물 병원균과의 상호반응에 의해 분비되는 감응물질을 유효한 양으로 식물 또는 재배 토양에 처리하는 단계를 포함하고,
    상기 감응물질은 제1항의 균주 또는 이의 배양액을 포함하는 배지 위에 식물 병원균을 배양하고 감응환을 분리한 후, 메탄올을 이용하여 추출한 물질인,
    라이족토니아 솔라니 AG-2-2(IV), 보트라이티스 시네레아, 콜레토트리쿰 아큐타툼, 콜레토트리쿰 글레오스포로데스, 라이족토니아 세레알리스, 라이족토니아 솔라니 AG-1(1A), 스클레로티움 롤프시아이 및 파이토프쏘라 드레크슬레리로 구성된 군으부터 선택되는 어느 하나 이상의 식물 병원균 방제 방법.
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101936471B1 (ko) 2016-10-28 2019-01-11 (주)한국바이오케미칼 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 kbc1109 및 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 식물 병해충 방제용 조성물

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112017014057A2 (pt) * 2014-12-29 2018-01-16 Fmc Corp composições de bacillus amiloliquefaciens rti472 e métodos de uso para beneficiar o crescimento de plantas e tratar doenças de plantas
JP6758296B2 (ja) 2014-12-29 2020-09-23 エフ エム シー コーポレーションＦｍｃ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 植物の成長に利益をもたらす及び植物病害を治療するための微生物組成物
CN107058160B (zh) * 2016-12-29 2019-06-21 山东农业大学 一株花生根际解淀粉芽孢杆菌及其应用
CN107629985B (zh) * 2017-11-01 2020-09-04 广州市林业和园林科学研究院 一株对植物病原真菌具拮抗作用的植物内生细菌
PE20211401A1 (es) 2018-09-28 2021-08-02 Fmc Corp Composiciones que contienen bacillus amyloliquefaciens fcc1256 y metodos para controlar patogenos de las plantas
CN111875684B (zh) * 2019-04-15 2021-12-07 中国农业科学院作物科学研究所 抗病耐热相关蛋白TaRHP1及其相关生物材料与培育抗病耐热植物的方法
KR102177885B1 (ko) * 2019-08-09 2020-11-12 경상대학교산학협력단 참다래 궤양병균에 대해 항균 활성을 가지는 스트렙토마이세스 레이스모크로모제네스 균주 및 이의 용도
WO2024046948A1 (en) * 2022-08-30 2024-03-07 Chr. Hansen A/S Bacillus strain and variants thereof for inhibition of plant diseases
WO2024046980A1 (en) * 2022-08-30 2024-03-07 Chr. Hansen A/S Bacillus strain, variants thereof, fermentation products and compositions thereof for inhibition of plant diseases

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20020051803A (ko) * 2000-12-23 2002-06-29 조정일 길항미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 조104 및 이균주가 생산하는 항균물질
KR20050060624A (ko) * 2003-12-17 2005-06-22 주식회사 케이티앤지 신규한 미생물 바실러스 아밀로리쿼페이션스케이티지비0202 및 이를 이용한 식물병원균의 방제방법
US20100143316A1 (en) * 2008-12-05 2010-06-10 Taiwan Agricultural Chemicals And Toxic Substances Research Institute, Novel strain of bacillus amyloliquefaciens and its use
KR20120094647A (ko) * 2011-02-17 2012-08-27 고려바이오주식회사 식물병원성 진균에 대해 항진균 활성을 갖는 바실러스 아밀로리퀘페이션스 ｋｂ－ｍｊｋ 601 균주 및 이를 이용한 식물병원성 진균 방제용 미생물 제제

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030068303A1 (en) * 2001-05-11 2003-04-10 Selvig Thomas A. Biologic-chemical fungicide compositions and methods of use
KR100838103B1 (ko) * 2007-06-29 2008-06-16 대한민국 신규한 바실러스 아밀로리퀴페션스 씨씨178 및 이를 이용한 잿빛곰팡이병 방제
MX2012011859A (es) * 2010-04-14 2013-02-07 Bayer Ip Gmbh Combinaciones de compuestos activos.
ES2569242T3 (es) * 2010-05-04 2016-05-09 Novozymes Biologicals, Inc. Cepa de Bacillus amyloliquefaciens
KR101189104B1 (ko) * 2010-09-20 2012-10-10 전북대학교 산학협력단 신규한 바실러스 아밀로리퀴에파션스 ｊｂｃ36 균주 및 이를 유효성분으로 포함하는 식물 병원균 방제용 조성물
JP5829216B2 (ja) * 2010-11-10 2015-12-09 クミアイ化学工業株式会社 微生物農薬組成物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20020051803A (ko) * 2000-12-23 2002-06-29 조정일 길항미생물 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 조104 및 이균주가 생산하는 항균물질
KR20050060624A (ko) * 2003-12-17 2005-06-22 주식회사 케이티앤지 신규한 미생물 바실러스 아밀로리쿼페이션스케이티지비0202 및 이를 이용한 식물병원균의 방제방법
US20100143316A1 (en) * 2008-12-05 2010-06-10 Taiwan Agricultural Chemicals And Toxic Substances Research Institute, Novel strain of bacillus amyloliquefaciens and its use
KR20120094647A (ko) * 2011-02-17 2012-08-27 고려바이오주식회사 식물병원성 진균에 대해 항진균 활성을 갖는 바실러스 아밀로리퀘페이션스 ｋｂ－ｍｊｋ 601 균주 및 이를 이용한 식물병원성 진균 방제용 미생물 제제

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101936471B1 (ko) 2016-10-28 2019-01-11 (주)한국바이오케미칼 바실러스 아밀로리퀴파시엔스 kbc1109 및 이의 배양액을 유효성분으로 함유하는 식물 병해충 방제용 조성물

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