KR101411995B1 - 돼지 소모성 질병의 치료 또는 예방을 위한 젖소 초유 항체 조성물 - Google Patents

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Abstract

돼지 유행성설사병 항원, 돼지 전염성위장염 항원, 돼지 로타바이러스감염증 항원, 돼지 써코바이러스 감염증항원, 돼지 대장균증 항원 및 돼지 살모넬라증 항원을 젖소에 접종하여 얻어진 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 돼지 유행성설사병, 돼지 전염성위장염, 돼지 로타바이러스 감염증, 돼지 써코바이러스감염증, 돼지 대장균증 및 돼지 살모넬라증의 돼지 소모성 질병의 치료 또는 예방용 항체 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 항체 조성물은 돼지에서 빈번하게 발생하여 폐사 및 성장 지연을 유발하는 돼지 소모성 질병 감염을 치료 및/또는 예방할 수 있는 고역가의 항체 조성물이다.

Description

돼지 소모성 질병의 치료 또는 예방을 위한 젖소 초유 항체 조성물{Antibody composition of bovine colostrum for treating or preventing porcine wasting diseases}
본 발명은 돼지의 생산성을 저하시키는 소모성질병을 치료 또는 예방하기 위한 고면역된 젖소 초유 항체 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 여러 종류의 돼지 설사병 및 호흡기질병을 동시에 치료 또는 예방할 수 있는 항체 조성물에 관한 것이다.
돼지의 소모성질환의 발생으로 인해 양돈농가에 생산성 피해는 심각하다. 국내 양돈농가에서 소모성질환으로 인한 자돈의 폐사율이 18.5%에 달할 경우, 약 6,900억원의 손실이 발생하고, 폐사율이 32.5%에 달하면 1조 1,800억원의 피해가 발생하는 것으로 추정된다. 이러한 돼지 소모성질환을 막기 위해서는 우선적으로 양돈장에 주요 병원체의 유입을 차단하여야 하고, 돼지의 사육 환경 및 위생 관리를 철저히 해야 한다. 또한 돈군의 면역성을 증강시키기 위해 백신 접종이나 면역제제 투여도 하나의 관리 방법이다. 이외 질병에 감염된 돼지는 항생제 투여나 대증요법을 통해 직접적으로 치료를 행할 수도 있다. 면역제제는 과거에 면역혈청을 제작하여 사람이나 동물에 사용되어온 일종의 치료 및 예방용 제제로서 최근 국내에서는 산란계에 사람이나 동물의 병원체를 고도면역시켜 생산된 난황 내 존재하는 IgY 항체를 이용하여 주요 질병을 치료 및 예방하는 방법이 많이 개발되고 사용되고 있다. IgY 제제는 기존의 면역혈청제제보다 생산량이나 부작용이 적은 장점이 있고, 면역된 산란계로부터 손쉽게 연속적으로 IgY 항체를 얻을 수 있다는 장점이 있지만 별도의 산란계 사육시설이 필요하고 지속적인 항원 접종 및 관리가 필요한 단점이 있다. 이러한 단점을 극복하고 고역가의 항체제제를 생산하기 위해 적용될 수 있는 방법이 젖소를 대상으로 병원체를 고도면역시켜 생산된 초유를 이용한 면역제제를 제조하는 것이 하나의 방법이다. 젖소가 분만 후 몇일간 분비하는 초유(colostrum)는 단백질, 당, 지질, 비타민, 미네랄 등의 영양소를 함유하고 있을 뿐만 아니라 다양한 성장인자(growth factor)와 항미생물인자(anti-microbial factor)등의 생체 활성성분을 가지고 있다. 여러 가지 성장인자는 신생자우의 성장과 발달을 촉진시킨다. 항미생물인자로는 면역글로불린, 락토페린(lactoferrin) 및 라이소자임(lysozyme) 및 락토페록시다제(lactoperoxidase) 등이 있으며, 특히 어미로부터 섭취된 초유에는 생후 몇주간 병원체로부터 방어와 관련된 면역글로불린의 역할이 매우 중요하며, IgG, IgM, IgA의 농도가 정상적인 우유에 비해 약 100배의 농도가 포함되어 있다. 송아지에서 다발하는 질병, 특히 소화기 질병에 대한 치료를 목적으로 젖소에 여러 가지 병원체를 고도면역시켜 제작한 면역제제가 개발되고 일부 상용화되어 사용되고 있다.
그러나 국내에는 이러한 항체 역가가 높고, 치료 및 예방효과가 우수한 초유를 이용한 돼지용 초유면역제제는 개발되어 있지 않다. 돼지는 일반적으로 소보다 사육 밀도가 높고, 질병에 더욱 취약하기 때문에 많은 예방 백신이나 치료 제제를 사용하게 된다. 특히 모돈군의 질병에 대한 면역수준이 불균형하고, 초유 및 유즙이 불량하거나 정상적인 포유 기능이 저하될 경우 그 자돈은 이러한 질병에 감염될 가능성이 높다. 포유자돈 구간에서 적절한 면역 결핍에 의한 질병 감염은 자돈 폐사와 같은 직접적인 피해뿐만 아니라 성장이 정체되고 위축이 발생되면 농장의 생산성 저하를 초래하여 더 큰 경제적인 피해를 초래한다.
이러한 자돈구간에는 소화기질병, 호흡기질병 및 전신성 질병을 유발하는 다양한 바이러스 및 세균이 존재하며, 질병 발생도 단일 병원체에 의한 감염보다는 여러 가지 병원체가 복합적으로 감염되어 증상을 악화시킨다. 병원체에 대한 확고한 모돈의 면역물질을 자돈에 이행되기만 하면 질병에 대한 문제점은 해결될 수 있으나, 농장별, 돈군별로 이러한 균형적인 모돈 면역을 유지하기는 쉽지가 않다. 따라서 이러한 부족한 자돈의 질병에 대한 면역능을 증강시키기 위해서는 앞에서 설명한 여러 가지 면역제제가 필요하며, 특히 질병에 내과할수 있는 충분한 면역물질을 투여받는 것이 중요하다. 따라서 본 발명에서는 국내에서는 적용되고 있지 않는 젖소의 면역초유를 이용하여 부족한 돼지의 면역능을 강화하기 위한 제제의 개발이 주요한 목적이며, 이러한 제제의 적용을 통해 자돈에 상습적으로 감염되는 여러 가지 질병을 치료 및 예방함으로서 소모성질병으로부터의 피해를 최소화하고자 한다.
본 발명은 상기와 같은 기술적 과제를 해결하기 위하여, 돼지 소모성 질병들을 동시에 예방할 수 있는 효과적인 항체 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명은 동시 접종에 의해 유발될 수 있는 면역간섭이 없어 부작용이 적으면서 치료 및 예방효과가 뛰어난 항체 조성물을 제공하고자 한다.
또한 각종 화학적 및 물리적 과정에 의해서 영향을 덜 받을 수 있는 안정한 제제를 제공한다.
상기 기술적 과제를 해결하고자 본 발명은 돼지 소모 질병 치료 및/또는 예방용 항체 조성물을 제공한다. 더욱 바람직하게는 본 발명은 젖소 초유면역항체를 이용한 돼지 소모성 질병 치료 및/또는 예방용 항체 조성물을 제공하고자 한다.
항체 생산을 위한 많은 다른 방법들이 존재함에도 불구하고, 항체 생산 비용이 상대적으로 높아 생산 단가를 절감하면서 면역력을 증가시키기 위하여 본 발명의 발명자들은 가축의 젖에서 항체를 생산할 수 있는 방법에 대해 연구하던 중 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명은 돼지 전염성위장염바이러스(Transmissible gastroenteritis virus; TGEV)에 의한 돼지 전염성위장염, 돼지 유행성설사병바이러스(Porcine epidemic diarrhea virus; PEDV)에 의한 돼지 유행성설사병, 돼지 로타바이러스(Pocine rotavirus infection; PRV)에 의한 돼지 로타바이러스감염증, 돼지 써코바이러스 2형(Pocine circovirus type 2; PCV2)에 의한 돼지 써코바이러스감염증, 돼지 병원성대장균(Escherichia coli) 감염증, 살모넬라 속(Salmonella typhimurium)균의 감염에 의한 돼지 살모넬라증, 유행성폐렴균(Mycoplasma hyopneumoniae)에 의한 돼지 유행성폐렴, 헤모필루스 파라수이스균(Haemophilus parasuis)의 감염에 의한 글래서병(Glasser's disease), 파스튜렐라균(Pastuellar multocida)에 의한 돼지 파스튜렐라증, 및 스트렙토코쿠스 수이스균(Streptococcus suis)에 의한 돼지 연쇄상구균감염증으로 이루어진 돼지 소화기 및 호흡기질병을 치료 및/또는 예방하기 위하여, 상기 질병의 항원들을 젖소에 접종하여 생산된 초유면역 항체를 이용한 돼지 소모성 질병 예방용 항체 조성물을 제공한다.
본 명세서에서 사용된 “소모성 질병 또는 질환”이라는 용어는 설사병 등을 유발하는 소화기 질환, 호흡기 질환, 발열 등과 같은 체력의 소모를 유발할 수 있는 질환들을 포괄적으로 의미하는 넓은 개념으로 사용되었다.
본 발명의 실시예들에 따르면, 본 발명은 돼지 유행성설사병 항원, 돼지전염성위장염 항원, 돼지 로타바이러스감염증 항원, 돼지 써코바이러스감염증 항원, 돼지 대장균증 항원 및 돼지 살모넬라증 항원을 젖소에 접종하여 얻어진 항체를 포함하는 것을 특징으로 하는, 돼지 유행성설사병, 돼지전염성위장염, 돼지 로타바이러스감염증, 돼지 써코바이러스감염증, 돼지 대장균증 및 돼지 살모넬라증의 돼지 소모성질병의 치료 또는 예방용 항체 조성물을 제공한다.
또한 본 발명의 또 다른 실시예들에 따르면, 상기 조성물은 돼지 유행성폐렴 항원, 글래서병 항원, 돼지 파스튜렐라증 항원 및 돼지 연쇄구균감염증 항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 항원을 젖소에 접종하여 얻은 항체를 추가로 포함하며, 상기 돼지 소모성질병은 돼지 유행성폐렴, 글래서병, 돼지 파스튜렐라증 및 돼지 연쇄구균감염증으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 질병을 추가로 포함한다.
상기와 같은 질병들을 유발하는 항원을 생체 내에 투여하면 이러한 항원의 자극에 의해 혈청 내에 항체들이 생성되며, 이러한 항체가 특정항원과 접촉하였을 때 이러한 특정 항원에 대응하는 성질을 갖게 되는데, 이를 면역 항체라 한다.
이러한 면역 항체를 생산하는 항원들은 생체 내에 동시에 투여될 때 각각의 항원에 대응하는 항체 생산에 간섭을 하게되어 항체 생산이 방해되는 문제가 발생할 수 있다.
본 발명은 이러한 간섭작용없이, 다종 항체가 생산되며, 생산된 다종 항체가 항체 조성물 내에 안정적으로 존재하는 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 초유면역항체는 상기 돼지 소모성질병의 항원을 임신한 젖소에 주입하여 얻을 수 있다.
본 발명에서 용어, “주입”은 피하 주사 또는 근육내 주사의 방법으로 수행되며, 바람직하게는 근육내 주사를 이용할 수 있다.
또한, 본 발명에서 용어, "주사" 또는 "투여"는 투여대상의 연령, 성별, 체중 등에 따라 투여량이 달라 질 수 있고, 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서도 항체 조성물의 투여량이 달라질 수 있다.
본 발명에서 용어, “면역원” 또는 “항원성 물질”은 바이러스, 박테리아, 펩티드, 폴리펩티드, 상기 폴리펩티드를 발현하는 유산균, 단백질, 상기 단백질을 발현하는 유산균, 올리고뉴클레오티드, 폴리뉴클레오티드, 재조합 박테리아 및 재조합 바이러스로 구성된 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 할 수 있다. 구체적인 예를 들면, 상기 항원물질은 불활성화된 전체 또는 부분 세포 제제 형태, 또는 통상적인 단백질 정제, 유전 공학 기법 또는 화학 합성에 의해 수득되는 항원 분자 형태일 수 있다.
일반적으로 여러 종류의 항원을 체내에 주입할 경우 면역 간섭으로 인하여 항체 생성률이 현저히 감소되거나 적절한 항체의 생성이 원활히 이루어지지 않는 문제가 있다. 이를 해소하기 위하여 항원을 불활화하여 사용하나, 불활화된 항원이라고 해도 서로 다른 항원들이 지나치게 많을 경우 면역반응에서 경쟁현상이 일어나 면역이 부전되는 경우도 발생할 수 있다. 또한 항체가 생산되어 제제를 제조하더라도, 항체를 포함하는 제제에서 높은 항체 농도로 인해 응집이 일어나는 등의 안정성이 문제가 될 수 있다.
이에 본 발명은 이러한 문제점을 해소하고 많은 종류의 항원을 한번에 접종하여도 경쟁반응이 유발되지 않는 젖소 초유면역 항체를 연구하게 되었다.
본 발명은 10여 종의 돼지 소모성질병에 대한 항체를 한 번에 접종하여 효과적으로 상기 10여 종의 돼지 소모성질병을 모두 예방 또는 치료할 수 있으며, 안정적인 제제 형태를 가질 수 있다는 놀라운 사실에 기초한다.
특히, 본 발명은 각 병원체에 대한 최적의 항원을 생산하고 이를 이용하여 임신 젖소에 접종하여 고역가의 초유면역항체를 제작하여 농가에서 특히 문제가 되는 여러 종류의 돼지 소모성질병을 한번에 치료 및 예방할 수 있는 획기적인 기술이다.
구체적으로, 본 발명의 실시예들에 따르면 각 병원체에 대한 최적의 항원들을 임신한 젖소에 접종한 후 젖소의 초유를 제제화하여 어린 자돈에 투여함으로써 설사병, 호흡기 질병 등 돼지 소모성질병 등을 치료 및/또는 예방할 수 있다.
본 발명의 초유면역항체를 제조하기 위하여 사용된 돼지 질병 병원체의 사용균주는 하기 표 1에 나타난 바와 같다.
질병명 균주 접종 항원
돼지전염성위장염
(Transmissible gastroenteritis, TGE)		 백신주(평택주) 바이러스 농축항원
돼지유행성설사병
(Porcine epidemic diarrhea, PED)		 백신주(SM98) 바이러스 농축항원
돼지로타바이러스감염증
(Porcine rotavirus infection, RotaV)		 분리주(G4, G5, G9) 바이러스
농축항원
돼지써코바이러스감염증
(Porcine circovirus disease, PCV2)		 재조합 베큘로바이러스 재조합항원
돼지대장균증
(Escherichia coli infection, E. coli)		 표준주 및 분리주 균체항원
돼지살모넬라증
(Salmonella typhimurium infection, S. typhimurium)		 분리주 균체항원
돼지유행성폐렴
(Mycoplasma hyopneumoniae infection, M. hyopneumoniae)		 분리주 균체항원
글래서병
(Haemophilus parasuis infection, H. parasuis)		 분리주 균체항원
돼지파스튜렐라증
(Pasteurella mutocida infection, P. mutocida)		 분리주(A type) 균체항원
돼지연쇄구균감염증
(Streptococcus suis infection, S. suis)		 분리주 균체항원
상기 돼지 유행성 설사병의 항원은 백신주인 SM98주(strain)로부터 유래한다.
상기 돼지 로타바이러스 감염증의 항원은 분리주인 G4, G5 및 G9주로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 분리주로부터 유래하며, 바람직하게는 상기 항원은 G4, G5 및 G9주 모두에서 유래한다.
상기 돼지전염성위장염의 항원은 백신주인 평택주로부터 유래한다.
상기 백신주 및 분리주는 농축 후에 브로모에틸아마이드 하이드로브로마이드(2-Bromoethylamine hydrobromide)로 불활화되어 항원으로 제조될 수 있으며, 바람직하게는 농축된 병원체들 전체 중량 대비 0.1M BEI를 5 내지 15 중량%, 바람직하게는 7 내지 12 중량%, 가장 바람직하게는 10 중량% 이용하여 불활화할 수 있다.
상기 돼지 유해성설사병, 돼지 로타바이러스감염증 및 돼지 전염성위장염 항원의 백신주 및 분리주는 상기 각각의 병원체를 배양하여 농축후 불활화하였으며, 바람직하게는 원배양 분량의 1/3, 바람직하게는 1/5로 농축하여 사용할 수 있다.
상기 돼지 써코바이러스감염증의 항원은 돼지 써코바이러스 타입 2로부터 유래하며, 바람직하게 상기 돼지 써코바이러스감염증의 항원은 써코바이러스의 재조합 캡시드 단백질을 이용할 수 있다.
상기 재조합 캡시드 단백질은 상기 돼지 유해성설사병, 돼지 로타바이러스감염증 및 돼지 전염성위장염 항원과 마찬가지로 브로모에틸아마이드 하이드로브로마이드로 불활화되어 항원으로 제조될 수 있다.
상기 돼지 대장균증 항원은 K88, K99, 987P 및 F41로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 돼지 대장균 표준주 및 LT, ST 및 Hly로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 산생주를 배양하여 얻을 수 있으며, 바람직하게는 상기 대장균증 항원을 모두 포함하여 얻을 수 있다.
상기 돼지 파스튜렐라증 항원은 파스튜렐라 뮬토시다(Pasteurella multocida) 타입 A 로부터 유래한다.
상기 돼지 살모넬라증 항원, 유행성 폐렴 항원, 글래서병 항원 및 돼지 연쇄구균감염증 항원은 해당 기술분야의 일반적인 기술로 얻은 분리주를 이용할 수 있다.
상기 돼지 대장균증 항원, 돼지 살모넬라증 항원, 돼지 유행성 폐렴 항원, 글래서병 항원, 돼지 파스튜렐라증 항원, 및 돼지연쇄구균감염증 항원은 포르말린을 이용하여 불활화할 수 있으며, 바람직하게는 0.3% 포르말린을 이용할 수 있다.
상기 항원들은 초유 면역 항체 생산을 위한 접종용 항원으로 이용되며, 본 발명의 젖소 접종을 위한 접종용 항원은 수의학적으로 허용 가능한 담체와 함께 접종될 수 있다. 본 발명에서 용어, "수의학적으로 허용 가능한 담체"란 임의의 및 모든 용매, 부형제, 분산 매질, 코팅제, 항원보강제, 안정제, 희석제, 보존제, 항균제 및 항진균제, 등장성 작용제, 흡착지연제 등을 포함한다. 구체적으로 상기 접종용 항원은 비오스팀(Biostim).TM .의 이스콤(Iscoms), 수산화알루미늄 겔, 사포닌, DEAE-덱스트란(DEAE-dextran), 및 미글리올(miglyol) 등을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 수산화알루미늄 겔을 포함한다.
상기 접종용 항원은 추가로 면역증강제를 이용할 수 있으며, 상기 면역증강제는 ISA 25, ISA 51 및 SWE(스쿠알렌-베이스 수중유 어멀젼(squalene-based oil-in-water emulsion))을 포함할 수 있으며, 바람직하게는 ISA 25를 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 상기 접종용 항원은 젖소가 분만하기 2개월 전에 접종된다.
본 발명의 실시예에 따르면, 상기 항원이 접종된 젖소에서 분비되는 초유는 상기 돼지전염성위장염, 돼지 유행성설사병, 돼지 로타바이러스감염증, 돼지 써코바이러스감염증, 돼지 대장균증, 돼지 살모넬라증, 돼지 유행성폐렴, 글래서병, 돼지 파스튜렐라증, 및 돼지 연쇄구균감염증으로 이루어진 돼지 소모성 질병에 대한 항체가 포함된다.
상기 항체들이 포함된 젖소의 초유는 건조하여 분말화할 수 있으며, 바람직하게는 스프레이건조될 수 있다.
본 발명에 따르면, 본 발명의 초유면역항체를 포함하는 조성물은 높은 항체 농도에도 불구하고 상기 다양한 종류의 항체들간에 응집을 피하고 항체의 활성을 보존할 수 있다는 점을 발견하게 되었다. 본 발명의 조성물은 상기 젖소 초유로부터 분리된 항체 이외에, 상기 항체들의 응집을 방지하고, 조성물의 안정성을 향상시키기 위하여 부형제를 추가로 포함할 수 있다.
상기 부형제는 파락토올리고당, 포도당, 글라이신, KCl, 아스코르브산(Ascorbic acid), 중조 및 소비톨(Sobitol)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 젖소초유면역 항체 조성물을 제조하기 위한 방법을 제공한다.
구체적으로, 본 발명은 돼지 유행성설사병 항원, 돼지 전염성위장염 항원, 돼지 로타바이러스감염증 항원, 돼지 써코바이러스감염증 항원, 돼지 대장균증 항원, 돼지 살모넬라증 항원, 돼지 유행성 폐렴 항원, 글래서병 항원, 돼지 파스튜렐라증 항원 및 돼지 연쇄구균 감염증 항원으로 이루어진 돼지 소모성질병의 균주 중에서 선택된 어느 하나 이상을 배양하는 단계;
상기 균주를 불활화하여 불활화 혼합 항원을 제작하는 단계;
상기 불활화된 항원 및 부형제를 혼합하여 초유면역항체 생산을 위한 접종용 항원을 제조하는 단계;
상기 접종용 항원을 젖소에 접종하는 단계; 및
초유 수집 단계를 포함하는, 젖소 초유면역항체를 제조하는 방법을 제공한다.
추가의 실시예에서, 본 발명은 상기 단계에서 만들어진 면역 항체를 포함하는 젖소 초유를 스프레이 건조하여 건조 초유를 제조하는 단계; 및 상기 건조 초유 및 매질을 혼합하여 액상의 초유면역항체 조성물을 제조하는 단계를 더 포함할 수 있다.
상기 액상의 초유 면역 조성물에 포함되는 매질은 물, 즉, 살균수, 주사용 정균수 (bacteriostatic water for injection, BWFI)가 사용될 수 있다.
상기 균주를 불활화하여 불활화 균체 항원을 제작하는 단계와 관련하여, 본 명세서에서 사용된 불화화된다는 의미는 약독화 또는 사독화와 같은 넓은 의미로 사용되었다. 구체적으로, 약독화란 살아있는 병원체의 독성을 인공적으로 약하게 한 것을 의미하며, 사독화는 병원체의 독성을 없앤 것을 의미한다.
상기 혼합 항원을 제작하는 단계에서는, 통상의 불활화된 바이러스 또는 항원의 혼합 방법을 적용할 수 있으며, 2000 rpm 이하, 바람직하게는 1500 rpm 이하, 더욱 바람직하게는 1000 rpm으로 회전하는 혼합기(shaking machine)에 30시간 동안 회전과 진동을 동반한 방법에 의하여 혼합하여 제조할 수 있다.
본 발명에 따른 항체 조성물의 함량은 의학기술분야 및 수의학 기술분야의 당업자들이 투여 대상 개체의 연령, 성별, 체중, 종족 및 상태와 같은 인자 및 투여 경로를 고려하여 결정할 수 있다. 상기 항체 조성물은 단독으로 투여하거나 또는 다른 면역학적 항원 또는 백신 조성물 또는 치료제 조성물과 함께 투여하거나 후속투여를 할 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 조성물의 적절한 투여량은 예를 들어 이용될 상기 돼지 소모성질병에 대한 특정 항원, 숙주, 투여 양식, 및 치료될 상태의 성질 및 중증도에 따라 달라진다. 예방적 사용에 있어서의 투약 빈도는 보통 하루에 1회 내지 3회 투여하며, 더욱 일반적으로는 보통 1일 2회 투여할 수 있고, 하루에 한번, 이틀에 한번, 또는 일주일에 한번씩 투여할 수 있다.
본 발명의 조성물은 일련의 치료에 걸쳐 또는 한 번 돼지에 투여되는 것이 적합하며, 진단 이후부터는 임의의 시점에 돼지에게 투여될 수 있고, 본 제제는 이전에 본원에 기술한 바와 같이 상태를 치료하는 데 유용한 다른 약물 또는 요법과 함께 또는 단일 치료제로서 투여될 수 있다.
본 발명의 항체 제제는 바람직하게는 경구투여된다.
본 발명에 따른 항체 제제는 돼지에서 빈번하게 발생하여 폐사 및 성장 지연을 유발하는 돼지 소모성질병 감염을 치료 및/또는 예방할 수 있다.
더욱이 본 발명은 돼지 소모성 질병들을 동시에 예방할 수 있어 양돈 농가의 경비 절감, 생산성 향상 등에 크게 기여할 수 있다.
특히, 본 발명의 항체 제제는 접종된 항원들간에 면역간섭을 유발하지 않고 안정적으로 여러 종류의 항체를 생산할 수 있어 효과적으로 돼지 소모성 질병들을 예방할 수 있다.
또한, 기존 항체제제보다 더욱 우수한 고역가의 항체를 얻을 수 있다.
도 1은 본 발명의 젖소 접종용 항원의 구성성분 및 균주를 나타낸 그림이다.
도 2는 본 발명에서 돼지 질병 병원체 항원(10종)을 반복접종한 젖소와 미접종한 젖소의 초유를 이용하여 각 질병별 항체 역가를 측정한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 3은 돼지의 설사병과 호흡기질병이 심한 농장의 돼지에 초유면역항체제제를 투약한 후 그 효과를 조사한 결과를 보여주는 그래프이다.
도 4는 Western blot으로 돼지써코바이러스 재조합 캡시드 단백질을 확인한 결과이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예 등을 들어 상세하게 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명에 따른 실시예들은 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예들에 한정되는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본 발명의 실시예들은 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
본 발명의 돼지 소모성질병 예방을 위한 항체 제제는 하기와 같은 젖소 접종용 항원을 임신한 젖소에 접종한 후 얻은 초유를 이용하여 제조하였다.
상기 돼지 설사병 3종 바이러스(TGEV, PEDV, RotaV)는 대표 백신주나 야외주 바이러스는 적합 세포주에서 배양하여 농축 후 불활화하였다.
상기 E. coli, S. typhimurium, M. hyopneumoniae, H. parasuis, P. mutocida, S. suis 등의 세균은 배양 후 불활화하여 원심 농축하였으며, 바이러스 배양이 힘든 PCV2의 경우 그 주요 면역 단백질(capsid 단백질)을 베큐로바이러스 발현 시스템을 이용하여 발현 후 그 배양액과 세포를 파쇄한 후 불활화하여 사용하였다.
상기 항원들은 적정 농도로 혼합 및 희석하고 부형제인 수산화알루미늄 겔과 면역증강제(oil adjuvant, ISA25)를 섞어 유제화하여 임신 젖소에 분만 2개월 전부터 3주 간격으로 3회 접종하여 고도면역시켰다.
면역된 젖소로부터 분만 30시간이내의 초유를 수거하고, 분말건조화한 후 부형제와 혼합하여 최종 초유면역항체제제를 제조하였으며, 각 병원체별 정제 항원을 이용한 효소면역측정법(ELISA)과 응집반응으로 초유에 함유되어 있는 면역항체의 역가를 측정하였다.
상기 면역항체는 상기 질병 원인 항원들에 대한 각각의 항체가인 P(가검혈청)/N(음성혈청) 값이 3.5 이상인 것으로 나타나 높은 항체 역가를 가지고 있는 것을 알 수 있었다.
초유면역항체제제의 효능을 평가하기 위하여 소화기 및 호흡기질병이 심각한 4개의 양돈장을 대상으로 돼지 연령 및 사육단계별로 적절한 용량 및 용법으로 감염 돼지에 투여하거나 사전 예방용으로 급여하여 돼지의 생존율 및 증상 발현율 등을 조사하였다. 자돈에서 바이러스 및 세균 복합감염으로 심한 설사 증상을 보이는 돼지에 본 제제를 투약한 결과, 생존율 상승 및 설사 임상증상 완화 효과를 확인하였으며, 육성기에 세균성 설사병에서도 증상의 억제 효과를 관찰할 수 있었고, 자돈 구간에 호흡기증상이 심한 농장에 적용하였을때도 증상이 감소되는 효과를 확인하였다.
<실시예 1> 주요 질병 원인체 배양
1. 돼지전염성위장염(TGE) 바이러스 배양
돼지고환(Swine testes, ST) 세포를 5% 소태아혈청(Fetal bovine Serum, FBS)과 항생제가 첨가된 α-Minimum Essential Medium(MEM)으로 배양하고, 세포 밀도가 약 70~80% monolayer된 상태에서 PBS로 3회 세척한 후, TGE 바이러스 백신주(평택주(KVCC-VR0000190))를 1 MOI(접종 바이러스양/세포수)로 접종하였다. 접종 세포용기를 37℃에서 60분간 천천히 흔들어 주면서 바이러스를 흡착시킨 후, 접종액을 버리고, 트립신(10ug/ml)과 항생제가 첨가된 α-MEM를 채워주었다. 접종 바이러스에 의한 세포변성효과(CPE)가 약 80% 정도 보일 때 -70℃와 실온에서 3회 동결 융해한 후, 원심분리하여 회수된 배양 상청액을 -70℃에 보관하였다.
2. 돼지유행성설사병(PED) 바이러스 배양
아프리카 원숭이신장(Vero) 세포를 5% FBS와 항생제가 첨가된 D-MEM으로 배양하고, 세포 밀도가 약 70~80% monolayer된 상태에서 PBS로 3회 세척한 후, PED 바이러스 백신주(SM98주(KVCC-VR1300037))를 1 MOI로 접종하였다. 접종 세포용기를 37℃에서 60분간 천천히 흔들어 주면서 바이러스를 흡착시킨 후, 접종액을 버리고, 트립신(10ug/ml)과 항생제가 첨가된 D-MEM를 채워주었다. 접종 바이러스에 의한 세포변성효과(CPE)가 약 80% 정도 보일 때 -70℃와 실온에서 3회 동결 융해한 후, 원심분리하여 회수된 배양 상청액을 -70℃에 보관하였다.
3. 돼지로타바이러스( RotaV ) 배양
돼지에서 RotaV를 분리하기 위해 리서스원숭이신장(TF104) 세포를 roll tube에서 5% FBS와 항생제가 첨가된 α-MEM으로 세포 밀도가 약 70~80% monolayer된 상태까지 배양하였다. 항생제가 첨가된 무혈청 α-MEM에 돼지의 장 및 분변을 넣고 10% 유제, 부유액을 만든 다음, 원심분리하여 그 상청액을 0.45um 필터로 여과한 후, typsin(10ug/ml)을 첨가하여 37℃에서 60분간 정치시켜 접종액을 만들었다. PBS로 3회 세척한 세포에 접종액을 넣고 37℃에서 60분간 천천히 흔들어 주면서 바이러스를 흡착시킨 후, 접종액을 버리고, PBS로 1회 세척하였다. 트립신(2.5ug/ml)과 항생제가 첨가된 α-MEM를 채워준 후, 세포변성효과(CPE)가 관찰된 것을 계대접종하고, 형광항체검사로 RotaV의 유무를 확인하였다. 확인된 RotaV는 바이러스 당단백질을 코딩하는 VP7 유전자를 이용한 G typing을 실시한 후, 최종 확인된 RotaV는 plaque assay를 통해 순수 분리하여 -70℃에 보관하였다. 본 발명에서는 국내 양돈장에서 가장 많이 발생되고 있는 G4, G5 및 G9 RotaV 3종을 분리하였으며, 상기 방법에 따라 대량 배양하여 보관하였다.
국내 양돈장의 돼지로타바이러스 검색 및 특성
G type 농장수 분리주 상동성(%)
nucleotide amino acid
G2 2 5 81.3 ~ 85.5 86.1 ~ 89.8
G3 1 2 - -
G4 7 18 83.2 ~ 95.6 89.0 ~ 96.8
G5 11 29 82.5 ~ 99.8 89.0 ~ 100
G9 6 16 92.5 ~ 99.7 94.3 ~ 99.6
G11 1 6 - -
4. 돼지써코바이러스 ( PCV2 ) 재조합 바이러스 제작 및 배양
PCV2는 분리 및 증식 배양이 어렵기 때문에 주요 방어항체 산생 단백질인 capsid 단백질을 baculovirus 발현 시스템을 이용하여 제작하였다. 즉 야외분리주의 유전자중 capsid 단백질을 coding하는 ORF2 유전자를 클로닝하여 baculovirus transfer vector인 pFastBacHT(Invitrogen)에 삽입한 후 baculovirus DNA가 들어있는 Bacmid(DH 10BAc) E. coli에 형질전환하고, 이러한 재조합 baculovirus DNA를 곤충세포(Sf9)에 transfection하였다. 이후 재조합 baculovirus를 plaque assay를 통해 순수 정제한 후 세포 배양하여 발현 유무를 ELISA와 western blot으로 확인한 결과, 도 4와 같이 약 28kDa의 재조합 capsid 단백질을 확인하였다. 최종 확인된 재조합 baculovirus는 10 MOI로 Sf9 세포에 접종하고 3일후 그 감염 세포를 수거하여 -70℃와 실온에서 3회 동결 융해한 후, 초음파 파쇄후 -20℃에 보관하였다.
5. 돼지대장균( E. coli ) 배양
돼지에서 문제되는 병원성 E. coli를 배양하기 위해 섬모형에 따라 표준주 4종(K88, K99, 987P 및 F41) 및 톡신 산생형에 따라 LT, ST, Hly 산생주를 배양하였다. 상기 균주를 면양혈액배지에 접종하여, 37℃에서 20시간 배양한 후 전형적인 단일 집략을 BHI(Brain heart infusion) 액체배지에 초대 배양을 하였다. 본배양은 BHI 액체배지에 초대 배양액을 2% 접종하여 37℃에서 100rpm으로 20시간 진탕배양한 후 0.3% 포르말린을 첨가하여 균체를 불활화하고 원심분리하여 균체를 수집하였다.
6. 돼지살모넬라( S. typhimurium ) 배양
돼지에서 분리된 S. typhimurium을 배양하기 위해 면양혈액배지에 접종하여, 37℃에서 20시간 배양한 후 전형적인 단일 집락을 BHI(Brain heart infusion) 액체배지에 초대 배양을 하였다. 본배양은 BHI 액체배지에 초대 배양액을 2% 접종하여 37℃에서 100rpm으로 20시간 진탕배양한 후 0.3% 포르말린을 첨가하여 균체를 불활화하고 원심분리하여 균체를 수집하였다.
7. 돼지유행성폐렴균 ( M. hyopneuminiae ) 배양
돼지 유행성폐렴에 감염된 돼지의 폐에서 분리한 M. hyopneuminiae균을 yeast extract(0.05%), Lactalbumin hydrolysate(0.0125%), BHI broth(0.5%), 10X HBSS (0.3%), 0.2% Phenol(0.137%)가 첨가된 Mycoplasma broth에 5-7일간 배양한 후 0.3% 포르말린을 첨가하여 불활화 시킨뒤 7,000rpm에서 50분간 원심한 균체를 PBS를 이용하여 수집하였다.
8. 돼지파스튜렐라 ( P. mutocida ) 배양
돼지에서 분리된 P. mutocida(A type)을 배양하기 위해 면양혈액배지에 접종하여, 37℃에서 20시간 배양한 후 전형적인 단일 집락을 BHI(Brain heart infusion) 액체배지에 초대 배양을 하였다. 본배양은 BHI 액체배지에 초대 배양액을 2% 접종하여 37℃에서 200rpm으로 20시간 진탕배양한 후 0.3% 포르말린을 첨가하여 균체를 불활화하고 원심분리하여 균체를 수집하였다.
9. 글래서병균 ( H. parasuis ) 배양
돼지에서 분리된 H. parasuis를 배양하기 위해 β-NAD(40ug/ml)가 첨가된 면양혈액배지에 접종하여, 37℃에서 20시간 배양한 후 전형적인 단일 집락을 β-NAD(40ug/ml)가 첨가된 BHI(Brain heart infusion) 액체배지에 초대 배양을 하였다. 본배양은 β-NAD(40ug/ml)가 첨가된 BHI 액체배지에 초대 배양액을 2% 접종하여 37℃에서 100rpm으로 20시간 진탕배양한 후 0.3% 포르말린을 첨가하여 균체를 불활화하고 원심분리하여 균체를 수집하였다.
10. 돼지연쇄구균 ( S. suis ) 배양
돼지에서 분리된 S. suis를 배양하기 위해 면양혈액배지에 접종하여, 37℃에서 20시간 배양한 후 전형적인 단일 집략을 BHI(Brain heart infusion) 액체배지에 초대 배양을 하였다. 본 배양은 BHI 액체배지에 초대 배양액을 2% 접종하여 37℃에서 200rpm으로 20시간 진탕배양한 후 0.3% 포르말린을 첨가하여 균체를 불활화하고 원심분리하여 균체를 수집하였다.
< 실시예 2> 초유면역항체 생산용 접종 항원 제조
TGEV, PEDV, RotaV 등의 바이러스 항원(107 TCID50/ml 이상)은 Pellicon filter(5K)를 이용하여 원배양 분량의 1/5로 농축한 후, 0.1M BEI(Bromoethylamide hydrobromide)을 농축 분량의 10% 첨가하여 바이러스를 불활화하였다. 또한 baculovirus 발현 시스템을 이용하여 제작된 PCV2 capsid 단백질(세포 초음파 파쇄 상청액)도 동일한 방법으로 불활화하고, Spectrophotometer(410nm)를 이용한 OD치가 0.5가 되도록 희석 부유하였다. E. coli , S. typhimurum , M. hyopneuminiae , H. parasuis, P. mutocida , S. suis 등의 불활화 균체 항원은 Spectrophotometer(410nm)를 이용한 OD치가 1.0이 되도록 부유하였다. 상기 각각의 항원을 혼합하고 균일한 현탁액을 만든 후, 수산화알루미늄 겔과 면역증강제(oil adjuvant, ISA25)를 전체 현탁액의 10%와 5%가 되게 첨가하여 균질기에서 1,000rpm에서 30분간 유제하였다.
< 실시예 3> 초유면역항체 생산용 항원 접종
상기 2에서 제작된 젖소 초유면역항체 생산용 항원을 분만 2개월전부터 3주간격 3회 1두당 2ml 둔부 근육에 접종하였다. 대조군 초유 생산을 위해 항원대신 PBS를 동일한 방법으로 접종하였다.
< 실시예 4> 초유 수집 및 면역항체 생산
상기 3의 초유면역항체 생산용 항원을 접종한 분만 젖소로부터 30시간이내의 초유를 멸균된 용기에 수거한 후, spray 건조하여 사용하였다. 수집된 초유는 Spray dryer(전문건조업체 이용)를 이용하여 분말건조화하였고, 포유자돈용은 면역초유건조분말에 파락토올리고당(2%), 포도당(5%), 글라이신(1%), KCl(0.37%), Ascorbic acid(0.1%), 중조(1%), Sobitol(0.2%)등의 부형제를 첨가하여 분말로 제조하였다. 사용시 건조제제를 물과 함께 혼합, 희석하여 포유자돈에 구강 투여용 제제로 제조하였으며, 이유자돈용과 육성돈은 포유자돈과 동일하게 제조하여 체중에 따라 투여량을 조정하였다.
< 실시예 5> 수집 초유면역항체의 역가 측정
상기 예 4에서 생산된 초유(대조군 포함)를 이용하여 각 병원체에 대한 면역항체 역가를 측정하였다. E. coli와 S. typhimurium은 균체항원을 이용한 응집반응과 효소면역측정법(ELISA)을 실시하였고, 그 외 병원체는 ELISA를 실시하였다. ELISA 항원은 각각의 바이러스 배양액을 25,000rpm에서 3시간 원심분리하고, 그 virus pellet을 PBS로 부유하여 한번 더 초원심후 초음파 처리하였으며, 각각의 세균은 배양후 균체를 초음파처리하여 OMP를 정제한 후 사용하였다. TGE, PED, RV, PCVD 바이러스에 대한 ELISA 항원 코팅 농도는 200ng/ml로 조정하였고, 그 외 세균성 병원체는 300ng/ml로 코팅하였다. 응집반응 항원농도는 Spectrophotometer를 이용하여 410nm의 파장에서 OD치가 1.5가 되게 조정한후 응집용 항원으로 사용하였다. Spray 건조한 초유 분말 1g을 증류수 10ml로 희석하고 초음파처리한 후 원심분리한 상청액을 각 코팅된 플레이트에 10배 2진 단계 희석하여 분주하고, 1시간 반응 후 세척하였으며, peroxidase가 부착된 Anti-bovine IgG를 20ng/ml 농도로 첨가하였다. 1시간 반응후 세척하고, TMB 기질을 분주하여 약 20분후 정지액을 넣은 후 450nm에서 흡광도를 측정하였다. 음성시료의 OD 값보다 2배 이상의 OD 값을 보이는 희석배수를 역산하여 각 시료의 양성/음성 값(P/N value)을 산출하였다.
하기 표 4는 본 발명에서 병원체 항원을 접종한 젖소와 미접종 젖소의 초유에 대한 각 질병에 대한 항체 역가를 측정한 결과이다. 바이러스 질병 4종에 대한 역가 측정 결과, 미접종우의 초유는 10배였으며, TGE, PED 바이러스에 대한 초유 항체역가는 5,120배에서 10,240배였고, RV 바이러스는 10,240배, PCV2는 2,560배에서 5,120배로 조사되었다. E. coli 표준주와 야외분리주에 대한 ELISA 역가는 20배의 미접종우에 비해 5,120배에서 10,240배로 측정되었고, 응집반응 역가는 20배의 미접종우에 비해 640배에서 2,560배로 조사되었다. S. typhimurium는 ELISA 역가가 5,120배에서 10,240배, 응집반응 역가가 320배에서 1,280배로 측정되었다. 그 외 세균성 질병 4종에 대하여는 접종우 항체 역가가 5,120에서 10,240배로 조사되었다.
항원 접종 젖소와 미접종 젖소의 초유 항체 역가
질병명 항체 역가
미접종우 초유 접종우 초유1 접종우 초유2 접종우 초유3
ELISA 응집 ELISA 응집 ELISA 응집 ELISA 응집
TGE 10 5,120 10,240 10,240
PED 10 5,120 10,240 10,240
RotaV 10 10,240 10,240 10,240
PCV2 10 2,560 5,120 2,560
E. coli (표준주) 20 20 5,120 640 10,240 1,280 10,240 640
E. coli (분리주) 20 20 5,120 640 10,240 2,560 10,240 640
S. typhimurium 10 10 5,120 320 10,240 1,280 10,240 640
M. hyopneuminiae 10 5,120 10,240 5,120
H. parasuis 10 5,120 5,120 5,120
P. multocida 10 5,120 10,240 5,120
S. suis 40 5,120 10,240 5,120
< 실시예 5> 초유면역항체제제를 이용한 효능시험
1. 초유면역항체제제를 이용한 자돈의 설사병 치료 및 예방 효과(A 농장)
모돈 650두 규모의 포유자돈의 설사로 인해 폐사가 심한 일관사육농장을 대상으로 초유면역항체제제를 투여후 효능을 평가하였다. 이 농장의 사육 포유자돈의 설사분변 및 부검후 조직 검사 결과, PEDV가 상재화되어 있고, RotaV와 병원성 E. coli가 복합감염되어 있었다. 먼저 1일령 신생자돈에 대한 초유면역항체제제의 설사병 억제 효과 확인을 위해 분만사별로 투여군에는 1일령 자돈에 1일 2회씩 2ml의 초유제제를 2일간 직접 구강투여하였으며, 비투여군에서는 초유제제대신 생리식염수를 동일한 방법으로 투여하고 1주일간 자돈의 생존두수를 조사하였다. 하기 표 5와 같이 총 576두의 투여군에서는 1주일후 543두가 생존하여 생존율이 94.1%로 확인되었고, 총 492두의 비투여군에서는 86두가 생존하여 생존율이 17.5%로 조사되었다. 따라서 신생자돈구간에 PEDV, RotaV 및 병원성 E. coli가 복합감염되어 있는 농장에 초유제제 투여 시험결과 1주일간 자돈생존율 약 76% 향상되는 결과를 보임에 따라 본 제제가 신생 자돈의 설사병 치료 및 예방에 효과가 아주 있는 것으로 분석되었다.
돼지유행성설사병, 돼지로타바이러스 및 병원성 대장균 복합감염 농장의 신생자돈(1일령)에 대한 초유면역항체제제 투여후 생존율
구분 두수 1주령 생존두수 생존율(%)
투여군1 ) 576 542 94.1
비투여군2 ) 492 86 17.5
1) 초유제제 2ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
2) 식염수 2ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
또한 동일 농장의 1주령 돼지에 대하여 1두당 평균 20ml씩 섭취될 수 있도록 초유제제를 액상으로 제조하여 1일 1회씩 2일간 공급하고 이유시(21 ~ 28일령)까지 생존율을 조사하였다. 하기 표 6과 같이 총 986두의 투여군에서는 이유시 846두가 생존하여 생존율이 88.8%로 확인되었고, 총 855두의 비투여군에서는 312두가 생존하여 생존율이 36.5%로 조사되었다. 따라서 포유자돈구간에 PEDV, RotaV 및 병원성 E. coli가 복합감염되어 있는 농장에 초유제제 투여 시험결과 이유시 자돈생존율 약 52% 향상되는 결과를 보임에 따라 본 제제가 포유 자돈의 설사병 치료 및 예방에 효과가 매우 뛰어난 것으로 분석되었다.
돼지유행성설사병, 돼지로타바이러스 및 병원성 대장균 복합감염농장의 포유자돈(1주령)에 대한 초유면역항체제제 투여후 생존율
구분 두수 이유시 생존두수 생존율(%)
투여군1 ) 986 876 88.8
비투여군2 ) 855 312 36.5
1) 초유제제 20ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
2) 식염수 20ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
2. 초유면역항체제제를 이용한 자돈의 설사병 치료 및 예방 효과(B 농장)
모돈 350두 규모의 포유 및 이유자돈의 설사로 인해 포유자돈 폐사와 이유자돈의 성장 정체로 피해를 보는 일관사육농장을 대상으로 초유면역항체제제를 투여후 효능을 평가하였다. 이 농장의 사육 자돈의 설사분변 및 부검후 조직 검사 결과, RotaV와 병원성 E. coli가 복합감염되어 있었다. 먼저 10일령 포유자돈에 대하여 초유면역항체제제를 1두당 평균 20ml씩 섭취될 수 있도록 초유제제를 액상으로 제조하여 1일 1회씩 2일간 공급하고 이유시(24일령)까지 생존율을 조사하였다. 하기 표 7과 같이 총 416두의 투여군에서는 이유시 382두가 생존하여 생존율이 91.8%로 확인되었고, 총 345두의 비투여군에서는 196두가 생존하여 생존율이 56.8%로 조사되었다. 따라서 포유자돈구간에 RotaV와 병원성 E. coli가 복합감염되어 있는 농장에 초유제제 투여 시험결과 이유시 자돈생존율 약 35% 향상되는 결과를 보임에 따라 본 제제가 포유 자돈의 설사병 치료 및 예방에 효과가 아주 있는 것으로 분석되었다.
돼지로타바이러스와 병원성 대장균 복합감염농장의 포유자돈(10일령)에 대한 초유면역항체제제 투여후 생존율
구분 두수 이유시 생존두수 생존율(%)
투여군1 ) 416 382 91.8
비투여군2 ) 345 196 56.8
1) 초유제제 20ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
2) 식염수 20ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
또한 동일 농장의 4주령 돼지에 대하여 1두당 평균 30ml씩 섭취될 수 있도록 초유제제를 액상으로 제조하여 1일 1회씩 2일간 공급하고 투여 10일후 설사증상 발현 유무를 조사하였다. 표 6과 같이 총 315두의 투여군에서는 설사증상을 보이는 개체가 19두로 증상발현율이 6%로 확인되었고, 총 230두의 비투여군에서는 189두가 계속적으로 설사증상을 보여 증상발현율이 82.2%로 조사되었다. 따라서 이유자돈구간에 RotaV와 병원성 E. coli가 복합감염되어 있는 농장에 초유제제 투여 시험결과 설사증상이 약 76.2% 완화되는 결과를 보임에 따라 본 제제가 이유 자돈의 설사병 치료 및 예방에 효과가 아주 있는 것으로 분석되었다.
돼지로타바이러스와 병원성 대장균 복합감염농장의 이유자돈(4주령)에 대한 초유면역항체제제 투여후 임상증상 발현율
구분 두수 설사 발현두수3 ) 발현율(%)
투여군1 ) 315 19 6.0
비투여군2 ) 230 189 82.2
1) 초유제제 20ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
2) 식염수 20ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
3) 투여 10일후 설사증상을 보이는 개체 두수
3. 초유면역항체제제를 이용한 육성돈의 설사병 치료 및 예방 효과(C 농장)
육성돈에서 병원성 E. coli 와 S. typhimurium 감염에 의한 설사로 문제되는 일관사육농장을 대상으로 초유면역항체제제를 투여후 효능을 평가하였다. 즉, 10주령 육성돈에 대하여 초유면역항체제제를 1두당 평균 40ml씩 섭취될 수 있도록 초유제제를 액상으로 제조하여 1일 1회씩 2일간 공급하고 투여 10일후 설사증상 발현 유무를 조사하였다. 하기 표 9와 같이 총 180두의 투여군에서는 설사증상을 보이는 개체가 15두로 증상발현율이 8.3%로 확인되었고, 총 175두의 비투여군에서는 72두가 계속적으로 설사증상을 보여 증상발현율이 41.1%로 조사되었다. 따라서 육성돈구간에 병원성 E. coli 와 S. typhimurium가 복합감염되어 있는 농장에 초유제제 투여 시험결과 설사증상이 약 32.8% 완화되는 결과를 보임에 따라 본 제제가 육성돈의 설사병 치료 및 예방에 효과가 아주 있는 것으로 분석되었다.
병원성 대장균과 살모넬라균 복합감염농장의 육성돈(10주령)에 대한 초유면역항체제제 투여후 임상증상 발현율
구분 두수 설사발현두수3 ) 발현율(%)
투여군1 ) 180 15 8.3
비투여군2 ) 175 72 41.1
1) 초유제제 40ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
2) 식염수 40ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
3) 투여 10일후 설사증상을 보이는 개체 두수
4. 초유면역항체제제를 이용한 자돈의 호흡기 치료 및 예방 효과(D 농장)
이유자돈에서 기침과 복식호흡 등의 호흡기 증상을 보이는 일관사육농장을 대상으로 초유면역항체제제를 투여후 효능을 평가하였다. 즉, 1일령 신생자돈에 대한 초유면역항체제제의 호흡기증상 억제 효과 확인을 위해 분만사별로 투여군에는 1일령 자돈에 1일 2회씩 2ml의 초유제제를 2일간 직접 구강투여하였으며, 비투여군에서는 초유제제대신 생리식염수를 동일한 방법으로 투여하고 이유시(26일령) 자돈의 호흡기증상 발현 유무를 조사하였다. 하기 표 10과 같이 총 580두의 투여군에서는 호흡기증상을 보이는 개체가 12두로 증상발현율이 2.1%로 확인되었고, 총 410두의 비투여군에서는 72두가 계속적으로 기침 및 복식호흡증상을 보여 증상발현율이 17.6%로 조사되었다. 따라서 자돈 구간에 호흡기 바이러스 및 세균이 복합감염되어 있는 농장에 초유제제 투여 시험결과 호흡기증상이 약 15.5% 완화되는 결과를 보임에 따라 본 제제가 자돈의 호흡기질병의 치료 및 예방에 효과가 있는 것으로 분석되었다.
이유자돈에서 호흡기 질병이 있는 농장의 신생자돈(1일령)에 대한 초유면역항체제제 투여후 임상증상 발현율
구분 두수 호흡기증상 발현두수3 ) 발현율(%)
투여군1 ) 580 12 2.1
비투여군2 ) 410 72 17.6
1) 초유제제 2ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
2) 식염수 2ml씩 1일 2회 2일간 경구투여
3) 이유시(26일) 호흡기증상을 보이는 개체 두수

Claims (17)

  1. 돼지 유행성설사병 항원, 돼지 전염성위장염 항원, 돼지 로타바이러스감염증 항원, 돼지 써코바이러스감염증 항원, 돼지 대장균증 항원 및 돼지 살모넬라증 항원을 젖소에 접종하여 얻어진 젖소 초유면역항체를 포함하는 것을 특징으로 하는,
    돼지 유행 설사병, 돼지 전염성위장염, 돼지 로타바이러스감염증, 돼지 써코바이러스감염증, 돼지 대장균증 및 돼지 살모넬라증의 돼지 소모성질병의 치료 또는 예방용 항체 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 돼지 유행성 폐렴 항원, 글래서병 항원, 돼지 파스튜렐라증 항원 및 돼지 연쇄구균감염증 항원으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 항원을 젖소에 접종하여 얻은 젖소 초유면역항체를 추가로 포함하며,
    상기 돼지 소모성질병은 돼지 유행성폐렴, 글래서병, 돼지 파스튜렐라증 및 돼지 연쇄구균감염증으로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 질병을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  3. 삭제
  4. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 젖소 초유면역항체는 상기 질병에 대한 각각의 항체가인 P(가검혈청)/N(음성혈청) 값이 3.5 이상인 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 돼지 유행성설사병의 항원은 백신주인 SM98주(strain) 로부터 유래한 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 상기 돼지 로타바이러스감염증의 항원은 분리주인 G4, G5 및 G9 주(strain)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 분리주로부터 유래한 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 돼지전염성위장염의 항원은 백신주인 평택주로부터 유래한 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  8. 제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신주 또는 분리주는 농축 후에 브로모에틸아마이드 하이드로브로마이드로 불활화되어 항원으로 제조되는 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  9. 제1항에 있어서, 상기 돼지 써코바이러스감염증의 항원은 돼지 써코바이러스 타입 2로부터 유래한 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 상기 돼지 써코바이러스감염증의 항원은 써코바이러스의 캡시드 단백질을 이용하는 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 상기 캡시드 단백질은 브로모에틸아마이드 하이드로브로마이드로 불활화되어 항원으로 제조되는 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  12. 제2항에 있어서, 상기 돼지 파스튜렐라증 항원은 파스튜렐라 뮬토시다(Pasteurella multocida)타입 A로부터 유래한 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  13. 제12항에 있어서, 상기 항원은 포르말린으로 불활화된 균체인 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  14. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 젖소 초유면역항체는 항원 및 부형제를 젖소에 투여하여 생산된 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  15. 제14항에 있어서, 상기 부형제는 수산화알루미늄 겔 및 면역증강제의 혼합물인 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  16. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체 조성물은 파락토올리고당, 포도당, 글라이신, KCl, 아스코르브산(Ascorbic acid), 중조 및 소비톨(Sobitol)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 부형제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
  17. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 돼지 소모성 질병은 돼지 설사병 및 호흡기 질병을 포함하는 것을 특징으로 하는 항체 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN109517060A (zh) * 2015-12-25 2019-03-26 中国农业科学院兰州兽医研究所 猪流行性腹泻病毒m蛋白特异性重链抗体
CN112996808A (zh) * 2018-10-03 2021-06-18 埃努贝尔拜欧公司 用于治疗动物急性腹泻和肠道感染的组合物和方法

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