KR101410589B1 - Neuropeptide derivatives and Composition for Skin External Application Comprising the Same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 뉴로펩타이드 유도체 및 이를 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 벤조산 유도체에 뉴로펩타이드가 결합된 펩타이드 유도체 및 이를 함유하는 피부 외용제 조성물은 안정성이 증가되면서도 동시에 우수한 항염, 항산화, 콜라겐 합성능을 가지고 있어, 기능성 화장품 소재로 널리 이용할 수 있다. The present invention relates to a neuropeptide derivative and an external preparation for skin containing the same.
The peptide derivative having the neuropeptide bound to the benzoic acid derivative according to the present invention and the composition for external application for skin containing the same have increased stability and at the same time have excellent antiinflammatory, antioxidant and collagen binding properties and can be widely used as a functional cosmetic material.
Description
본 발명은 벤조산 유도체에 뉴로펩타이드가 결합된 펩타이드 유도체 및 이를 함유하는 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a peptide derivative in which a neuropeptide is bound to a benzoic acid derivative, and a composition for external application for skin containing the peptide derivative.
산업이 발달함에 따라 환경 오염이 심각해지고, 피부의 노화 방지, 미백 등에 관한 관심이 고조되고 있다. 특히, 사람의 피부는 끊임없이 변화를 겪게 되는데, 가장 대표적인 변화가 노화에 의한 피부 기능 저하 및 시각적 아름다움의 감소이다. 피부 노화의 결과 나타나는 최종적인 피부 외관에서의 현상은 주름의 형성, 피부 탄력 저하, 노인성 반점 형성 등이 있으며, 주름의 형성이 가장 대표적인 현상으로 받아들여지고 있다. As the industry develops, environmental pollution becomes serious, and there is a growing interest in skin aging prevention and whitening. In particular, human skin constantly undergoes changes, the most representative of which is degradation of the skin caused by aging and a reduction in visual beauty. The final appearance of skin appearance as a result of skin aging is wrinkle formation, skin elasticity degradation, senile spots formation, and wrinkle formation is considered as the most representative phenomenon.
아울러, 환경 오염이 심각해짐에 따라, 피부 염증으로 인해 불편을 겪는 사람이 늘고 있으며, 이에 따라 피부 염증 완화, 치료를 위한 새로운 물질에 관한 연구도 활발히 이루어지고 있으며, 그 외에도, 피부 미백, 피부 진정 및 수렴, 항산화, 피부주름개선, 피부염증완화 등의 피부 상태 개선을 위한 기능성 화장품 제품 개발에 많은 노력을 기울이고 있는 실정이다 (대한민국공개특허 10-2008-080253, 10-2012-0017827).In addition, as the environmental pollution becomes serious, more and more people are experiencing discomfort due to skin inflammation. Therefore, researches on new substances for skin inflammation mitigation and treatment are actively carried out. In addition, skin whitening, (Korean Patent Laid-Open No. 10-2008-080253, 10-2012-0017827) for improving the skin condition such as astringency, convergence, antioxidation, skin wrinkle improvement and skin irritation relief.
특히, 항산화능을 가지면서도, 피부주름개선을 위한 콜라겐 합성능 증진과 동시에 항염 효능도 갖춰 복합기능을 갖춘 기능성 화장품 소재로 이용될 새로운 물질의 개발이 절실히 요구되어 왔다.
Particularly, there has been a desperate need to develop new materials which have antioxidant ability and have improved anti-inflammatory action as well as a collagen aggregation performance for improving skin wrinkles and which will be used as functional cosmetic materials having complex functions.
본 발명자들은 피부개선능이 있는 피부 외용제 조성물을 제조하기 위해 노력하던 중, 벤조산 유도체에 뉴로펩타이드가 결합된 펩타이드 유도체가 종래 벤조산 유도체가 가지는 화장품 적용에 있어서의 안정성의 문제점도 개선하면서, 항산화, 콜라겐 합성능, 항염능이 매우 우수함을 확인하고 본 발명을 완성하였다.The present inventors have made efforts to produce a composition for external application for skin having a skin improving ability, while peptide derivatives in which neuropeptides are bonded to benzoic acid derivatives have been improved in the stability of conventional benzoic acid derivatives in cosmetic applications, Performance, and anti-inflammatory ability, and completed the present invention.
따라서, 본 발명의 목적은 뉴로펩타이드 유도체 및 이를 함유하는 피부개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다. Accordingly, an object of the present invention is to provide a neuropeptide derivative and a composition for external application for skin for improving skin comprising the same.
상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 펩타이드 유도체를 제공한다:In order to achieve the above object, the present invention provides a peptide derivative represented by the following formula (1): < EMI ID =
[화학식 1][Chemical Formula 1]
상기 식에서, In this formula,
R1 내지 R5는 각각 독립적으로 수소, 히드록시, C1-C6의 알킬기, C1-C6의 알콕시기, 시아노, 할로 또는 아미노이고, n은 1 또는 2이며, L은 존재하지 않거나 연결기이고, A는 뉴로펩타이드이다.
본 발명은 또한, 상기 펩타이드 유도체를 유효성분으로 함유하는 피부개선용피부 외용제 조성물을 제공한다.
The present invention also provides a skin external composition for skin improvement comprising the peptide derivative as an active ingredient.
본 발명에 따른 벤조산 유도체에 뉴로펩타이드가 결합된 펩타이드 유도체 및 이를 함유하는 피부 외용제 조성물은 안정성이 증가되면서도 동시에 우수한 항염, 항산화, 콜라겐 합성능을 가지고 있어, 기능성 화장품 소재로 널리 이용할 수 있다. The peptide derivative having the neuropeptide bound to the benzoic acid derivative according to the present invention and the composition for external application for skin containing the same have increased stability and at the same time have excellent antiinflammatory, antioxidant and collagen binding properties and can be widely used as a functional cosmetic material.
도 1은 본 발명에 따른 펩타이드 유도체의 항산화능 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 2는 본 발명에 따른 펩타이드 유도체의 콜라겐 합성 증진 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3는 본 발명에 따른 펩타이드 유도체의 염증 억제 활성을 확인한 그래프이다. FIG. 1 is a graph showing the results of the antioxidant activity test of the peptide derivative according to the present invention.
2 is a graph showing the results of a collagen synthesis enhancement test of a peptide derivative according to the present invention.
3 is a graph showing the anti-inflammatory activity of a peptide derivative according to the present invention.
본 발명은 벤조산 유도체에 뉴로펩타이드가 결합된 펩타이드 유도체 및 이를 함유하는 피부개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a peptide derivative in which a neuropeptide is bound to a benzoic acid derivative, and a composition for external application for skin containing the same.
본 발명은 일 관점에서, 벤조산 유도체에 뉴로펩타이드가 결합된 펩타이드 유도체에 관한 것이다. In one aspect, the present invention relates to a peptide derivative in which a neuropeptide is bound to a benzoic acid derivative.
본 발명의 펩타이드 유도체의 구성은 하기 화학식 1로 표시할 수 있다:The structure of the peptide derivative of the present invention can be represented by the following formula 1:
[화학식 1][Chemical Formula 1]
상기 식에서, In this formula,
R1 내지 R5는 각각 독립적으로 수소, 히드록시, C1-C6의 알킬기, C1-C6의 알콕시기, 시아노, 할로 또는 아미노이고, n은 1 또는 2이며,L은 존재하지 않거나 연결기이고, A는 뉴로펩타이드이다.
본 발명에 있어서, 상기 뉴로펩타이드(neuropeptide)는 신경조직과 연계되어 활성화되는 펩타이드를 의미한다. In the present invention, the neuropeptide refers to a peptide which is activated in association with a nerve tissue.
일 구현예로써, 다음과 같은 구조식을 가지는 뉴로펩타이드들을 포함한다. As an embodiment, it includes neuropeptides having the following structural formula.
(1) 엑소핀(Exorphin)(1) Exorphin
(2) Met-엔케팔린(Met-Enkephalin)(2) Met-enkephalin
(3) Leu-엔케팔린(Leu-Enkephalin)(3) Leu-enkephalin (Leu-Enkephalin)
(4) 알파-네오엔돌핀(α-Neoendorphin)(4) Alpha-neoendorphin
(5) 베타-네오엔돌핀(β-Neoendorphin)(5) Beta-neoendorphin
(6) 알파-엔돌핀(α-Endorphin)(6) Alpha-endorphin
(7) 베타-엔돌핀(β-Endorphin)(7) Beta-endorphin
(8) 감마-엔돌핀(γ-Endorphin)(8) Gamma-endorphin
본 발명에 있어서, C1-C6의 알킬기는 탄소수 1 내지 6개로 구성된 직쇄형 또는 분지형 탄화수소를 의미하며, 예를 들어 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸 등이 포함되나 이에 한정되는 것은 아니다. C1-C6의 알콕시기는 탄소수 1 내지 6개로 구성된 직쇄형 또는 분지형 알콕시기를 의미하며, 예를 들어 메톡시, 에톡시, n-프로판옥시 등이 포함되나 이에 한정되는 것은 아니다.In the present invention, the C1-C6 alkyl group means a linear or branched hydrocarbon group having 1 to 6 carbon atoms and includes, for example, methyl, ethyl, n-propyl, i- But is not limited thereto. The C1-C6 alkoxy group means a straight-chain or branched alkoxy group having 1 to 6 carbon atoms, and includes, for example, methoxy, ethoxy, n-propaneoxy and the like, but is not limited thereto.
본 발명에 있어서, 펩타이드를 명명하는 일반적인 규칙은 구체적으로 지시된 예외사항이 없는 경우 3문자 또는 1문자 아미노산 코드 적용을 기초로 한다. 다시 말해서, 아미노산 구조의 중심부를 3문자 코드(예를 들어, Ala, Lys)로 표시하며, 3문자 코드의 앞에 "D-"를 적음으로써 D-입체형태(예를 들어, D-Ala, D-Lys)를 구체적으로 지시하지 않은 경우에는 L-입체형태로 가정한다. 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기는 천연 또는 비-천연아미노산 잔기가 모두 가능하다.In the present invention, the general rules for naming peptides are based on the application of three-letter or one-letter amino acid codes unless specifically indicated otherwise. In other words, the central part of the amino acid structure is represented by a three-letter code (e.g., Ala, Lys), and a D-stereotype (e.g., D-Ala, D -Lys) is not specifically indicated, it is assumed to be L-stereoisomer. The amino acid residues constituting the peptide are all natural or non-natural amino acid residues.
본 발명에 있어서, 상기 벤조산 유도체에는 화학식 1에 있어서, R1 내지 R5가 각각 독립적으로 수소 또는 히드록시인 것일 수 있다. In the present invention, in the benzoic acid derivative, R1 to R5 in Formula (1) may be independently hydrogen or hydroxy.
일 구현예로써, R1 및 R5가 모두 수소이고, R2 내지 R4는 모두 히드록시인 갈릭산 일 수 있다. In one embodiment,
본 발명에 있어서, 상기 벤조산 유도체가 갈릭산일 경우, 이러한 갈릭산에 뉴로펩타이드가 결합된 펩타이드 유도체들의 구조식은 다음을 포함한다:In the present invention, when the benzoic acid derivative is galactic acid, the structural formula of the peptide derivatives to which neuropeptide is bound to galactic acid includes the following:
(1) Galloyl-Exorphin (1) Galloyl-Exorphin
(2) Galloyl-Met-Enkephalin(2) Galloyl-Met-Enkephalin
(3) Galloyl-Leu-Enkephalin(3) Galloyl-Leu-Enkephalin
(4) Galloyl-α-Neoendorphin(4) Galloyl-α-Neoendorphin
(5) Galloyl-β-Neoendorphin(5) Galloyl-β-Neoendorphin
(6) Galloyl-α-Endorphin(6) Galloyl-α-Endorphin
(7) Galloyl-β-Endorphin(7) Galloyl-β-Endorphin
(8) Galloyl-γ-Endorphin(8) Galloyl-γ-Endorphin
본 발명에 있어서, 일 구현예로써 제시된 상기 뉴로펩타이드 유도체와 뉴로펩타이드들의 분자량 및 서열은 다음과 같다:In the present invention, the molecular weights and sequences of the neuropeptide derivatives and neuropeptides presented as one embodiment are as follows:
본 발명에 따른 펩타이드 유도체는 목적하는 펩타이드를 합성한 다음, 벤조산 유도체와 결합 반응시켜 제조할 수 있다.The peptide derivative according to the present invention can be prepared by synthesizing a desired peptide and then reacting with a benzoic acid derivative.
상기 목적하는 펩타이드는 펩타이드 합성기 등을 이용한 화학 합성 방법으로 제조할 수 있다.The desired peptide can be prepared by a chemical synthesis method using a peptide synthesizer or the like.
본 발명에 따른 펩타이드 유도체는,The peptide derivative according to the present invention is a peptide derivative,
(1) 통상의 고체상 펩타이드 합성법(solid phase peptide synthesis: SPPS)으로 NH2-보호된 펩타이드-레진을 수득하는 단계;(1) obtaining an NH2-protected peptide-resin by a conventional solid phase peptide synthesis (SPPS);
(2) 수득된 NH2-보호된 펩타이드-레진을 벤조산 유도체와 반응시키는 단계; 및(2) reacting the obtained NH2-protected peptide-resin with a benzoic acid derivative; And
(3) 레진을 제거하는 단계를 포함하여 제조할 수 있다.(3) removing the resin.
목적하는 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기의 측쇄에 작용기가 존재하는 경우에는 상기 단계 (1)에서 상기 작용기가 보호된 아미노산을 사용하여 펩타이드를 합성할 수 있으며, 상기 작용기에 결합된 보호기는 단계 (3)에서 제거된다.When a functional group is present in the side chain of the amino acid residue constituting the desired peptide, a peptide can be synthesized using the amino acid in which the functional group is protected in the above step (1) Lt; / RTI >
작용기가 보호된 아미노산을 사용한 본 발명에 따른 펩타이드 유도체의 제조과정의 한 구체예를 하기의 반응식 1에 간략히 나타내었다:One embodiment of the process for preparing a peptide derivative according to the present invention using a functional group-protected amino acid is shown briefly in
[반응식 1]
[Reaction Scheme 1]
상기 반응식 1을 참고하여, 본 발명에 따른 펩타이드 유도체의 합성과정을 설명하면 아래와 같다: The synthesis of the peptide derivative according to the present invention will be described with reference to
(1) 펩타이드 합성 및 정제(1) Peptide synthesis and purification
본 발명에 따른 뉴로펩타이드, 뉴로펩타이드 유도체들 (예컨대, 실시예에 구체적으로 제시되어 있는 Exorphin, Galloyl Exorphin, Galloyl-Enkephalin, Galloyl-α-Neoendorphin, Galloyl-β-Neoendorphin, Galloyl-α-Endorphin 및 Galloyl-β-Endorphin)은 Fmoc을 이용한 고체상합성법(Solid Phase Peptide Synthesis)을 사용하여 제조할 수 있다.The neuropeptides, neuropeptide derivatives according to the present invention (for example Exorphin, Galloyl Exorphin, Galloyl-enkephalin, Galloyl-α-Neoendorphin, Galloyl-β-Neoendorphin, Galloyl- -β-Endorphin) can be prepared using Solid Phase Peptide Synthesis using Fmoc.
(2) 벤조산유도체-Peptide Solid Phase Peptide Synthesis법 이용(2) Benzoic acid derivative -Peptide using solid phase peptide synthesis method
고체상 펩타이드 합성법은 coupling-deprotection을 되풀이 하는 것이다. 고체 지지체에 결합해있는 peptide의 보호되어 있지 않은 N-terminal인 아미드 그룹에 N-terminal이 보호되어 있는 다음 amino acid의 C-terminal인 카르복시그룹이 반응한다. 그 후, 탈보호시켜 그 다음 amino acid가 반응할 수 있도록 N-terminal을 노출시킨다. Solid-phase peptide synthesis is a repetition of coupling-deprotection. The C-terminal carboxy group of the next amino acid in which the N-terminal is protected is reacted to the unprotected N-terminal amide group of the peptide bound to the solid support. Thereafter, the N-terminal is exposed so that the amino acid can then be deprotected and reacted.
고체상 peptide 합성법은 Fmoc 그리고 tert-butoxycarbonyl(Boc) 두 개의 전략이 주로 사용된다. 리보솜 단백질 합성과 다르게 고체상 펩타이드 합성법은 C-terminal에서 N-terminal로 합성되어진다. amino acid의 N-terminal은 이들 보호기로 보호되어 있어 Fmoc-amino acid 그리고 Boc-amino acid형태로 이루어져 있고 전략에 따라 탈보호 과정이 다르다. 그 중 Fmoc 전략은 amino acid의 N-terminal 끝에는 염기에 쉽게 제거되는 Fmoc 보호기와 산에서 쉽게 제거되는 tertiary-butyl(tBu) 보호기가 곁사슬을 보호하고 있다. 첫 번째 Fmoc-amino acid를 resin의 linker에 결합시킨 후에 Fmoc은 Piperidine을 사용하여 제거한다. Kaiser test로 Fmoc 보호기가 제거되었는지 확인하고 다음 Fmoc-amino acid의 카로복실기를 활성화시켜 두 번째 반응을 시킨다. Kaiser test를 통해 Resin에 free 아민을 확인하여 반응완료 여부를 확인한다. 합성은 Fmoc 보호기의 제거 그리고 다음 Fmoc-amino acid의 반응을 한 cycle로 하여 peptide 서열에 따라 합성되어진다. 합성 완료된 펩타이드는 TFA를 처리하여 resion으로부터 떨어지고 곁사슬의 보호기도 이때 제거된다.Fmoc and tert-butoxycarbonyl (Boc) are two strategies for solid phase peptide synthesis. Unlike ribosomal protein synthesis, solid phase peptide synthesis is synthesized from the C-terminal to the N-terminal. The amino acid N-terminal is protected by these protecting groups and is composed of Fmoc-amino acid and Boc-amino acid. Among them, the Fmoc strategy protects the side chain at the N-terminal end of the amino acid with the Fmoc protecting group, which is easily removed from the base, and the tertiary-butyl (tBu) protecting group, which is easily removed from the acid. After binding the first Fmoc-amino acid to the linker of the resin, Fmoc is removed using Piperidine. The Kaiser test confirms that the Fmoc protecting group has been removed and then activates the carboxy group of the Fmoc-amino acid to give a second reaction. The free amine is checked on Resin by Kaiser test to confirm completion of reaction. The synthesis is synthesized according to the peptide sequence with the removal of the Fmoc protecting group and the subsequent reaction of Fmoc-amino acid in one cycle. The synthesized peptide is removed from the resion by treatment with TFA and the protection of the side chain is removed at this time.
또한, 작용기가 보호된 아미노산을 사용한 본 발명에 따른 펩타이드 유도체의 제조과정의 다른 구체예를 하기의 반응식 2에 간략히 나타내었다.Further, another embodiment of the process for producing a peptide derivative according to the present invention using a functional group-protected amino acid is schematically shown in Reaction Scheme 2 below.
[반응식 2][Reaction Scheme 2]
위와 같은 반응식에 따라서, 벤조산 유도체는 복수로 뉴로펩타이드와 결합하여 펩타이드 유도체를 형성할 수 있다. According to the above reaction formula, a benzoic acid derivative can bind to a plurality of neuropeptides to form a peptide derivative.
다른 관점에서, 본 발명에 따른 펩타이드 유도체를 유효성분으로 함유하는 피부개선용 피부외용제 조성물에 관한 것이다. In another aspect, the present invention relates to a composition for external application for skin for improving skin comprising a peptide derivative according to the present invention as an active ingredient.
본 발명에 있어서, 펩타이드 유도체의 조성물 내의 함량은 실험예에서는 일 예시로써 50ppm으로 실험하였으나, 이를 포함하여 총 조성물 내에 0.001~10중량%, 0.001~5중량%, 좁게는, 0.001~1중량%, 0.001~0.01, 0.001~0.005중량% 함유할 수 있다. In the present invention, the content of the peptide derivative in the composition of the present invention is 50 ppm as an example. However, the content of the peptide derivative is 0.001 to 10 wt%, 0.001 to 5 wt%, and more preferably 0.001 to 1 wt% 0.001 to 0.01, and 0.001 to 0.005% by weight.
본 발명에 있어서, “피부개선용”이란, 피부 보호 및 피부 상태 개선, 피부 미백, 피부 노화 및 주름의 예방 또는 개선, 피부 보호 및 피부의 염증 반응의 완화, 면역질환 개선능, 또는 피부 장벽 기능 개선, 피부자극 완화, 피부 세포 증식 및 재생능, 항산화능, 콜라겐 합성 증진능 등을 모두 포함하는 개념이다.In the present invention, the term " for skin improvement " is intended to mean skin protection and skin condition improvement, skin whitening, prevention or improvement of skin aging and wrinkles, skin protection and alleviation of skin inflammation reaction, Improvement of skin irritation, improvement of skin cell proliferation and regeneration ability, antioxidant ability, and ability to promote collagen synthesis.
본 발명에 있어서, "유효성분으로 함유하는"의 의미는, 피부 외용제 조성물로써 피부 개선 효과를 나타낼 수 있는, 예컨대, 피부 외용제 조성물로써 주름개선효능과 관련된 콜라겐 합성 또는 iNOS 억제 활성을 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 함유하는 것을 의미한다.In the present invention, the term "comprising as an active ingredient" means a composition capable of exhibiting a skin improving effect as a composition for external application for skin, for example, a composition capable of exhibiting collagen synthesis or iNOS inhibitory activity associated with wrinkle- ≪ / RTI >
특히, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은, 신규 펩타이드 유도체를 함유하고 있어, 자유라디칼 소거 활성능에 따른 항산화능을 가지고 있고, 특히, 기존에 알려져 있지 않은 프로콜라겐 증가, 콜라겐 생합성 증가능을 가지고 있어, 피부 노화 방지, 피부 주름 개선/방지용으로 적용될 수 있으며, 이외에도 iNOS 억제 활성을 통한 항염, 피부 염증 예방, 완화, 경감, 치료용으로 적용될 수 있다. Particularly, the composition for external application for skin according to the present invention contains a novel peptide derivative, has an antioxidative ability according to the ability of free radical scavenging activity, and has an increase in pro-collagen and collagen biosynthesis , Skin aging prevention, skin wrinkle improvement / prevention, and may be applied for anti-inflammation, skin inflammation prevention, alleviation, alleviation, and treatment through iNOS inhibitory activity.
본 발명에 있어서, 상기 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물 또는 약제학적 조성물일 수 있다.In the present invention, the composition for external application for skin may be a cosmetic composition or a pharmaceutical composition.
상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.The cosmetic composition of the present invention may contain an acceptable carrier in cosmetic preparations. Herein, "an acceptable carrier for a cosmetic preparation" is a known or used compound or composition that can be contained in a cosmetic preparation, or a compound or composition to be developed in the future, which is toxic, instable or irritating It says nothing.
상기 담체는 본 발명의 피부 외용제 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량 % 내지 약 99.99 중량 %, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량% 내지 약 99.99 중량 %로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 제조되는 후술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.The carrier may be included in the skin topical composition of the present invention in an amount of from about 1% by weight to about 99.99% by weight, preferably from about 90% by weight to about 99.99% by weight of the composition, based on the total weight thereof. However, since the ratio varies depending on the formulations described below in which the composition for external application for skin of the present invention is prepared, and its specific application site (face, neck, etc.) or its preferable application amount and the like, And should not be construed as limiting the scope of the invention.
상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선산란제, 자외선흡수제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.Examples of the carrier include an alcohol, an oil, a surfactant, a fatty acid, a silicone oil, a wetting agent, a moisturizer, a viscous modifier, an emulsifier, a stabilizer, an ultraviolet scattering agent, an ultraviolet absorber, a coloring agent and a perfume. The compounds / compositions which can be used as the above-mentioned alcohol, oil, surfactant, fatty acid, silicone oil, humectant, humectant, viscous modifier, emulsifier, stabilizer, ultraviolet scattering agent, ultraviolet absorber, The person skilled in the art can select and use the appropriate substance / composition.
본 발명의 일 구현예로써, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 상기 펩타이드 유도체 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 착색료, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다. The composition for external application for skin according to the present invention may contain glycerin, butylene glycol, propylene glycol, polyoxyethylene hardened castor oil, ethanol, triethanolamine, etc., as preservatives, Flavor, coloring agent, purified water and the like can be included as needed.
본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 화장수, 에센스, 젤, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말, 또는 젤라틴 등의 피막이 있는 캅셀 (소프트 캅셀, 하드 캅셀) 제형 등의 형태로 제조될 수 있다. The composition for external application for skin according to the present invention can be prepared in various forms such as lotion, essence, gel, emulsion, lotion, cream (underwater type, water type, multiphase), solution, suspension ), Capsules (soft capsules, hard capsules) having a coating such as anhydrous products (oil and glycol), gel, mask, pack, powder or gelatin.
본 발명에 있어서의 피부는 얼굴 뿐만 아니라, 두피, 전신도 포함되는 개념으로, 이러한 두피에 적용될 수 있는 피부 외용제 조성물로써, 샴푸, 린스, 트리트먼트, 발모제 등이 있고, 전신에 적용될 수 있는 바디클렌져 등의 용도로써 다양한 형태로 제조될 수 있다. The skin of the present invention includes not only the face but also the scalp and whole body. The composition for external application for skin which can be applied to such scalp includes shampoo, rinse, treatment, hair removal agent, etc., and a body cleanser And the like can be manufactured in various forms.
본 발명에 따른 펩타이드 유도체 함유 피부 외용제 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 본 발명에 따른 대두 태좌조직 배양 추출물을 함유 피부 외용제 조성물을 제조할 수 있다.The method for preparing a skin external composition containing a peptide derivative according to the present invention is not limited to the above-described manufacturing method, and any person skilled in the art may make modifications The composition for external application for skin containing the soybean placenta tissue culture extract according to the present invention can be prepared.
특히, 상기 피부 외용제 조성물은 본 발명에 특별히 개시된 제조방법 이외에도, 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다. In particular, the composition for external application for skin may be prepared in the form of a general emulsified formulation and a solubilized formulation, by a known manufacturing method, in addition to the manufacturing method specifically disclosed in the present invention.
화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다. When the cosmetic composition is manufactured from a cosmetic composition, the cosmetic composition of the emulsified formulation includes nutritional lotion, cream, essence and the like. It can also be prepared in the form of adjuvants which can be applied topically or systemically, which are conventionally used in the field of dermatology by containing a dermatologically acceptable medium or base.
또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다. In addition, suitable cosmetic formulations include, for example, solutions, gels, solid or kneaded anhydrous products, emulsions obtained by dispersing an oil phase in water, suspensions, microemulsions, microcapsules, microgranules or ionic forms (liposomes) May be provided in the form of a follicular dispersing agent of the type, cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or conical stick. It can also be prepared in the form of a foam or an aerosol composition further containing a compressed propellant.
또한, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일,염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.In addition, the composition for external application for skin of the present invention may further comprise at least one selected from the group consisting of fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, softening agents, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, As used herein means any emulsion or emulsion which is commonly used in emulsifying or emulsifying agents, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles or cosmetics Adjuvants commonly used in the cosmetics or dermatological fields, such as other ingredients. And, the above ingredients can be introduced in amounts commonly used in the field of dermatology.
이러한, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 항산화능, 콜라겐 합성 증진능에 따른 피부 노화 방지, iNOS 활성 저해를 통한 염증의 완화/예방 등을 비롯한 면역질환 치료/예방의 기능을 할 수 있는 기능성 화장품의 형태를 포함한다.Such a composition for external application for skin according to the present invention is a functional cosmetic composition capable of functioning as an anti-inflammatory / anti-inflammatory agent for preventing and / or preventing immune diseases, such as antioxidant activity, prevention of skin aging due to the ability to promote collagen synthesis, .
본 발명에 있어서, 약제학적 조성물의 경우, 하기 실시예에서 제시하는 iNOS 활성저해능을 가지고 있어, 면역질환 치료, 예방용 약제학적 조성물로써 기능할 수 있다. In the present invention, the pharmaceutical composition has the iNOS activity inhibiting ability shown in the following examples, and can function as a pharmaceutical composition for the treatment and prevention of immune diseases.
이러한 약제학적 조성물은 유효성분인 대두 태좌조직 배양물 또는 그 추출물 외에, "약학적으로 허용가능한 담체"를 포함할 수 있으며, 이러한 담체는 희석제, 활택제, 결합제, 붕해제, 감미제, 안정제 및 방부제로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다. 상기 약학 조성물은 첨가제를 더 포함할 수 있다. 상기 첨가제로 향료, 비타민, 및 항산화제가 포함될 수 있다. 상기 담체로 약제학적으로 허용 가능한 담체는 모두 가능하며, 예를 들면, 희석제로는 유당, 덱스트린, 타피오카(tapioca) 녹말, 옥수수 전분, 대두유, 미정질 셀룰로오스, 또는 만니톨, 활택제로는 스테아린산 마그네슘 또는 탈크, 결합제로는 폴리비닐피롤리돈 또는 히드록시프로필셀룰로오스일 수 있다. 또한, 붕해제로는 카르복시메틸셀룰로오스 칼슘, 전분글리콜산나트륨, 폴라크릴린칼륨, 또는 크로스포비돈, 감미제로는 백당, 과당, 솔비톨, 또는 아스파탐, 안정제로는 카르복시메틸셀룰로오스나트륨, 베타-사이클로덱스트린, 또는 잔탄검, 방부제로는 파라옥시안식향산메틸, 파라옥시안식향산프로필, 또는 솔빈산칼륨일 수 있다.Such a pharmaceutical composition may contain, in addition to the active ingredient soybean placental tissue culture or extract thereof, a "pharmaceutically acceptable carrier ", which carrier is selected from the group consisting of diluents, lubricants, binders, disintegrants, sweeteners, ≪ / RTI > The pharmaceutical composition may further comprise an additive. The additives may include flavoring agents, vitamins, and antioxidants. Examples of the diluent include lactose, dextrin, tapioca starch, corn starch, soybean oil, microcrystalline cellulose or mannitol as a carrier, magnesium stearate or talc as a lubricant, , And the binding agent may be polyvinylpyrrolidone or hydroxypropylcellulose. Examples of the disintegrant include carboxymethylcellulose calcium, sodium starch glycolate, polacrilin potassium, or crospovidone; examples of sweeteners include white sugar, fructose, sorbitol, or aspartame; stabilizers include sodium carboxymethylcellulose, Or xanthan gum, and the preservative may be methyl paraoxybenzoate, propyl p-hydroxybenzoate, or potassium sorbate.
상기 약제학적 조성물은 당해 기술분야에 공지되어 있는 통상적인 약제학적 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 경구 투여제제, 주사제, 좌제, 경피 투여제제, 및 경비 투여제제의 제형으로 제제화되어 투여될 수 있다. 예를 들면, 상기 제형은 액제, 현탁제, 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 환제, 또는 엑스제와 같은 경구 투여용 제형일 수 있다.
The pharmaceutical composition may be formulated into conventional pharmaceutical formulations known in the art. The pharmaceutical composition may be formulated and administered in the form of an oral administration preparation, an injection preparation, a suppository, a transdermal preparation, and a dosage form. For example, the formulations may be formulations for oral administration such as solutions, suspensions, powders, granules, tablets, capsules, pills, or expanses.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. It is to be understood by those skilled in the art that these embodiments are only for illustrating the present invention and that the scope of the present invention is not construed as being limited by these embodiments.
1.1 1.1 뉴로펩타이드의Neuropeptide 합성 synthesis
(1) (One) ExorphinExorphin ( ( YGGWLYGGWL ) 합성) synthesis
NH2-보호된 펩타이드-레진의 합성Synthesis of NH2-Protected Peptide-Resin
9-플루오레닐메톡시카르보닐(9-fluorenylmethoxycarbonyl: Fmoc)을 아미노산의 보호기로 사용하여 고체상 펩타이드 합성법(Solid-phase Peptide Synthesis: SPPS)에 의해 합성하였으며, N-히드록시벤조트리아졸(N-hydroxybenzotriazole:HOBt)와 N,N‘-디시클로헥실카보디이미드(N,N'-dicyclohexylcarbodiimide: DCC)을 활성화제로 사용하여 아미노산 잔기를 연장하였다. Was synthesized by solid phase peptide synthesis (SPPS) using 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) as an amino acid protecting group, and N-hydroxybenzotriazole : HOBt) and N, N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC) were used as activators to extend the amino acid residues.
구체적으로, 유리 반응기에서 아미노기가 Fmoc으로 보호된 루신 레진(Nova Biochem, Inc) 0.04g을 용매인 N-메틸-2-피롤리돈(N-methyl-2-pyrrolidone: NMP) 3ml에서 20분 동안 부풀린(swelling) 다음, 용매를 제거하고 20% 피페리딘(piperidine) 3ml로 2회 처리하여 Fmoc을 제거하였다. Specifically, 0.04 g of Lucine resin (Nova Biochem, Inc.) protected with Fmoc in an amino acid group in a glass reactor was reacted with 3 ml of N-methyl-2-pyrrolidone (NMP) After swelling, the solvent was removed and Fmoc was removed by treatment with 2 ml of 20% piperidine (3 ml).
Fmoc이 제거된 루신 레진을 디클로로메탄(dichloromethane: DCM)으로 2회, NMP로 2회 처리하고, HOBt-DCC로 활성화된 트립토판(Trp, W) 용액과 실온에서 약 2시간 동안 반응시켰다. 이와 같은 과정으로 티로신-글리신-글리신(YGG) 등과 연속적으로 반응시켜 수득한 NH2-보호된 펩타이드(YGGWL)-레진을 DCM으로 2회, NMP로 2회, DCM으로 2회 세척한 후 완전히 건조시켰다. 건조된 레진을 TFA-Phenol-H2O-Thioanisole-Ethanedithiol 혼합액으로 2시간 처리하여 얻어진 용액을 차가운 ether에 첨가하여 흰색 분말의 정제되지 않은 펩타이드를 획득하였다..Fmoc-free Lucine resin was treated twice with dichloromethane (DCM), twice with NMP, and reacted with HOBt-DCC-activated tryptophan (Trp, W) solution at room temperature for about 2 hours. The obtained NH2-protected peptide (YGGWL) -resin obtained by successive reaction with tyrosine-glycine-glycine (YGG) etc. was washed twice with DCM, twice with NMP, twice with DCM, and then completely dried . The dried resin was treated with a mixture of TFA-Phenol-H2O-Thioanisole-Ethanedithiol for 2 hours, and the resulting solution was added to cold ether to obtain an unpurified peptide of white powder.
이와 같이 획득한 펩타이드를 고성능액체크로마토그래피 (HPLC)를 이용하여 정제한 다음 동결건조 후 순도 95% 이상의 Exorphin을 얻을 수 있었다.The peptide thus obtained was purified by high performance liquid chromatography (HPLC) and then lyophilized to obtain Exorphin having a purity of 95% or more.
하기 2) ~ 6) 뉴로펩타이드도 동일한 방법으로 얻을 수 있었다.The following 2) to 6) neuropeptides were also obtained by the same method.
(( 2) 2) MetMet -- EnkephalinEnkephalin ( ( YGGFMYGGFM ) 및 ) And LeuLeu -- EnkephalinEnkephalin (( YGGFLYGGFL ) 합성) synthesis
(( 3) α-3) α- NeoendorphinNeoendorphin ( ( YGGFLRKYPKYGGFLRKYPK ) 합성) synthesis
(( 4) β-4) β- NeoendorphinNeoendorphin (( YGGFLRKYPYGGFLRKYP ) 합성) synthesis
(( 5) α-5) α- EndorphinEndorphin ( ( YGGFMTSEKSQTPLVTYGGFMTSEKSQTPLVT ) 합성) synthesis
(( 6) β-6) β- EndorphinEndorphin (( YGGFMTSEKSQTPLVTLFKNAIIKNAYKKGEYGGFMTSEKSQTPLVTLFKNAIIKNAYKKGE ) 합성) synthesis
(( 7) γ-7) γ- EndorphinEndorphin (( YGGFMTSEKSQTPLVTLYGGFMTSEKSQTPLVTL )합성)synthesis
상기 (2) 내지 (7)의 뉴로펩타이드는 (1)에 제시된 방법을 이용하여 합성하였다.
The neuropeptides of (2) to (7) above were synthesized using the method described in (1).
1.2. 1.2. 뉴로펩타이드Neuropeptide 유도체 합성 Derivative synthesis
(1) (One) GalloylGalloyl ExorphinExorphin ( ( GalloylGalloyl YGGWLYGGWL ) 합성) synthesis
상기에서 합성된 NH2-보호된 펩타이드(YGGWL)-레진에 20% 피페리딘/NMP 용액을 가하여 아미노기에 결합된 Fmoc를 제거하고, NMP와 DCM으로 세척한 후 갈릭산(gallic acid, Lancaster사) 5당량과 실온에서 하룻밤 동안 결합 반응시켰다. 반응이 종료된 후 NMP와 DCM으로 각각 3회 세척한 다음 건조시켰다. 건조된 Galloyl-YGGWL-레진을 트리플루오로아세트산 : 페놀 : 티오아니솔 : 물 : 에탄디티올(82.5:5:5:5:2.5 (v/v))의 혼합 용액으로 실온에서 2 내지 3시간 동안 반응시켜, 펩타이드를 구성하는 아미노산 잔기의 측쇄에 존재하는 작용기의 보호기인 t-부틸(t-Bu) 그룹을 제거하고 레진으로부터 갈로일-YGGWL을 분리시킨 다음, 차가운 디에틸에테르로 상기 펩타이드를 침전시켰다. 수득한 갈로일-엑솔핀을 0.1% 트리플루오로아세트산이 포함된 물과 아세토니트릴을 용매로 역상 고성능 액체크로마토그래피(reverse phase high performance liquid chromatography; column: Gemini, C18 110A 250×21.2mm)하여 정제하였다.To the NH2-protected peptide (YGGWL) -resin synthesized above, 20% piperidine / NMP solution was added to remove the Fmoc bound to the amino group, washed with NMP and DCM, and then gallic acid (Lancaster) 5 equivalents and overnight at room temperature. After the reaction was completed, the cells were washed three times with NMP and DCM, respectively, and then dried. The dried Galloyl-YGGWL-resin was dissolved in a mixed solution of trifluoroacetic acid: phenol: thioanisole: water: ethanedithiol (82.5: 5: 5: 5: 2.5 (v / v)) at room temperature for 2 to 3 hours (T-Bu) group, which is a protecting group of a functional group present in the side chain of the amino acid residues constituting the peptide, is removed, and then galoisyl-YGGWL is separated from the resin. Then, the peptide is reacted with cold diethyl ether Precipitated. The obtained galloyl-exosphin was purified by reverse phase high performance liquid chromatography (Gemini, C18 110A 250 x 21.2 mm) using water containing 0.1% trifluoroacetic acid and acetonitrile as a solvent Respectively.
2) Galloyl Met - Enkephalin ( Galloyl YGGFM ) 및 Galloyl Leu - Enkephalin ( Galloyl YGGFL) 합성 : 상기의 방법과 동일한 방법으로 얻었다. 2) Galloyl Met - Enkephalin ( Galloyl YGGFM ) and Galloyl Leu - Enkephalin ( Galloyl YGGFL) : Obtained by the same method as described above.
3) Galloyl α- Neoendorphin ( Galloyl YGGFLRKYPK ） 합성 : 상기의 방법과 동일한 방법으로 얻었다. 3) Galloyl α- Neoendorphin ( Galloyl YGGFLRKYPK ) Synthesis : Obtained by the same method as above.
4) Galloyl β- Neoendorphin ( Galloyl YGGFMTSEKSQTPLVTLFKNAIIKNAYKKGE ) 합성 : 상기의 방법과 동일한 방법으로 얻었다. 4) Galloyl β- Neoendorphin ( Galloyl YGGFMTSEKSQTPLVTLFKNAIIKNAYKKGE ) Synthesis : Obtained by the same method as above.
5) Galloyl α- Endorphin ( Galloyl YGGFMTSEKSQTPLVT ) 합성 : 상기의 방법과 동일한 방법으로 얻었다. 5) Galloyl [alpha] - Endorphin ( Galloyl YGGFMTSEKSQTPLVT ) Synthesis : Obtained by the same method as above.
6) Galloyl β- Endorphin ( Galloyl - YGGFLRKYP ) 합성 : 상기의 방법과 동일한 방법으로 얻었다. 6) Galloyl β- Endorphin (Galloyl - YGGFLRKYP) synthesis was obtained by the same method as that described above.
7) Galloyl γ- Endorphin ( Galloyl YGGFMTSEKSQTPLVTL )합성: 상기의 방법과 동일한 방법으로 얻었다.
7) Galloyl γ- Endorphin (Galloyl YGGFMTSEKSQTPLVTL ) Synthesis: Obtained by the same method as above.
실험예Experimental Example 1 : One : 뉴로펩타이드가Neuropeptide 결합된Combined 갈릭산Garlic Mountain 유도체의 Derivative 항산화능Antioxidant ability 시험 exam
화합물 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH, Sigma D9132-1G, USA)는 에탄올 내에서 자유라디칼을 발생하는데, 본 발명에 따른 펩타이드 유도체와 일정 비율로 혼합하여 생성된 자유라디칼의 양이 어느 정도 감소하는지(자유라디칼 소거활성 시험)를 확인함으로써 항산화 효과를 갖는지를 알아보았다. 자유라디칼 소거활성 실험은 Kim 등 (Kor. J. Pharmacogn., 24(4), 299-303(1993))의 방법을 변형한 것으로써, 안정한 자유라디칼인 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl, Sigma D9132-1G, USA)시약을 사용하였다.The
0.2 mM DPPH 용액(Blank인 경우는 에탄올) 150 ㎕에 실시예 1에서 제조된 펩타이드 유도체를 50ppm이 되도록 희석하여 이들을 각각 150 ㎕ 첨가하여 혼합하고, 실온에서 30분간 방치한 후 517 nm에서 흡광도를 측정하였으며, 이에 대한 대조군은 정제수를 이용한 경우로 설정하였다. 상기 실험군과 대조군에 대한 흡광도 측정 후, 항산화능의 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 백분율로 표시하였다. 하기 [수식 1]를 이용하여 자유라디칼 소거활성을 측정하였다.The peptide derivative prepared in Example 1 was diluted to a concentration of 50 ppm in 150 μl of a 0.2 mM DPPH solution (ethanol in the case of blank), and 150 μl of each of them was added and mixed. After allowing to stand at room temperature for 30 minutes, absorbance was measured at 517 nm And the control group was set to use purified water. After the absorbance of the test group and the control group was measured, the degree of antioxidant activity was expressed as a percentage based on the absorbance of the control group using pure water. The free radical scavenging activity was measured using the following equation [1].
[수식 1][Equation 1]
자유 라디칼 소거 효과 (%) = 1 - [(실험군 흡광도-Blank 흡광도)/대조군의 흡광도] × 100Free radical scavenging effect (%) = 1 - [(absorbance of experiment group - blank absorbance) / absorbance of control group] × 100
그 결과, 표 2 및 도 1에 나타난 바와 같이, 50 ppm 농도에서 갈릭산의 경우 65% 정도로 우수한 항산화능을 보였다. 반면, 같은 농도의 엑소핀, 엔케팔린, 네오엔돌핀, 엔돌핀의 경우 자유라디칼 소거능을 거의 보이지 않았고, 갈릭산이 융합된 Galloyl-Exorphin, Galloyl-Enkephalin, Galloyl-Neoendorphin 및 Galloyl-Endorphin은 76%, 71.4%, 65%, 69% 높은 자유라디칼 소거능을 보여, 양성 대조군인 0.1% Vitamin C와 유사한 70% 정도의 자유라디컬 제거능을 보였다. 또한, 갈릭산이 가진 제형 내 불안정성 또한 감소시킬 수 있었다.
As a result, as shown in Table 2 and Fig. 1, the antioxidative ability of gallic acid was about 65% at 50 ppm concentration. On the other hand, the free radical scavenging ability of exopin, enkephalin, neoendorphin, and endorphin of the same concentration was almost not shown, whereas 76%, 71.4% of Galloyl-Exorphin, Galloyl-Enkephalin, Galloyl-Neoendorphin and Galloyl- 65% and 69% higher free radical scavenging ability than the positive control group, 0.1% Vitamin C. In addition, instability in the formulations of gallic acid could also be reduced.
실험예Experimental Example 2: 콜라겐 2: Collagen 합성능Sum performance 시험 exam
사람 섬유아세포(Human dermal fibroblast)를 48 well-plate에 1×105 cell/ ml로 분주하고, 약 60%의 confluency에 도달할 때까지 1일간 배양하고, FBS-free 배지에서 1일간 추가 배양하였다. 실시예 1의 펩타이드 유도체 처리 전에 배지를 제거한 후 PBS(phosphate buffered saline)로 세척한 다음 FBS를 첨가하지 않은 DMEM배지에 실시예 1의 펩타이드 유도체를 50ppm이 되도록 희석하여 시료를 처리하여 CO2 배양기에서 48시간 배양하였다. 음성 대조군(Negative Control, NC)은 상기와 동일한 배지에서 시험 물질을 첨가하지 않은 상태로 배양한 것을 이용하였다. 양성 대조군(Positive Control, PC)로서 TGF-β(10ng/ml)을 처리하였다. Procollagen의 발현을 평가하기 위하여 상기의 배양 방법으로 배양하여 얻은 배양액을 Procollagen Type I C-Peptide(PIP) EIA Kit (Cat #. MK101, Takara, Japan)를 이용하여 정량분석 하였다. 상층액을 이용하여 Kit에서 제공된 Coating된 96-well plate에 Primary antibody인 Anti-collagen antibody를 37℃에서 90분간 처리한 후, TPBS(0.1% Tween 20 in PBS)로 3회 세척하였다. Secondary antibody인 anti-mouse IgG(Whole mouse, alkaline phosphatase conjugated)를 90분간 반응시킨 후 TPBS로 3회 세척하였다. Alkaline phosphatease substrate solution (1 mg/mL p-nitrophenyl phosphate in diethanolamine buffer)을 상온에서 30분간 반응시킨 후 microplate reader로 405 nm에서 흡광도를 측정하였다. .Human dermal fibroblast was dispensed into 1 x 10 5 cells / ml on a 48 well plate, cultured for 1 day until reaching a confluency of about 60%, and further cultured for 1 day in FBS-free medium . Before the peptide derivative treatment of Example 1, the medium was removed and washed with PBS (phosphate buffered saline). The peptide derivative of Example 1 was diluted to 50 ppm with DMEM without FBS, and the sample was treated with CO 2 Lt; / RTI > for 48 hours. The negative control (NC) was prepared by culturing the cells in the same medium without the addition of the test substance. TGF-beta (10 ng / ml) was treated as a positive control (PC). In order to evaluate the expression of procollagen, the culture was cultured by the above culture method and quantitatively analyzed using Procollagen Type I C-Peptide (PIP) EIA Kit (Cat #. MK101, Takara, Japan). The supernatant was applied to the coated 96-well plate and the primary antibody, anti-collagen antibody, was treated at 37 ° C for 90 minutes and then washed three times with TPBS (0.1
그 결과, 표 3 및 도 2에 나타난 바와 같이, 갈릭산은 콜라겐 합성능은 보이지 않았고, Exorphin, Enkephalin, Neoendorphin 및 Endorphin의 경우 Type I 콜라겐 합성을 증가시킴을 확인하였으나, 이보다도, 본 발명에 따른 펩타이드 유도체인, Galloyl-Exorphin, Galloyl-Enkephlain, Galloyl-Neoendorphin, Galloyl-Endorphin의 경우에 우수한 수준으로 Type I 콜라겐 합성을 증진시키는 것으로 확인되었다.As a result, as shown in Table 3 and FIG. 2, it was confirmed that collagen aggregation performance was not observed in gallic acid and that Type I collagen synthesis was increased in the case of Exorphin, Enkephalin, Neoendorphin and Endorphin. It has been found that the derivatives of Galloyl-Exorphin, Galloyl-Enkephlain, Galloyl-Neoendorphin and Galloyl-Endorphin enhance the synthesis of Type I collagen to a superior level.
실험예Experimental Example 3: 3: iNOSiNOS 활성 저해 시험 Active inhibition test
생쥐의 대식세포인 Raw264.7 세포를 이용하여 인위적으로 유발시킨 염증의 억제 효과를 알아보기 위하여, iNOS가 들어있지 않은 10% FBS-DMEM(Fetal Bovine Serum, 우태아혈청, Dulbecco's Modified Eagle Medium, GIBCO사) 배지에 1×105세포를 현탁시켜 24 well plate에 접종하여 부착시켰다. 하루 후 실시예1에서 제조된 펩타이드 유도체를 50ppm 농도로 처리하여 18시간 배양한 후 1 ㎍/ml의 Lipopolysaccharide (Sigma사)를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 그 후, 상층액을 회수하여 96 well plate에 100 ㎕씩 넣고 Griess reagent (Sigma사)을 동량 첨가하여 상온에서 10분간 가볍게 흔들어 주어 570 nm에서 흡광도를 측정했다. Sodium Nitrite를 표준품으로 하여 검량선을 작성하고 각 시료를 배양액 중의 Nitric Oxide의 생성량을 구하였다. Lipopolysaccharide를 처리한 군의 Nitric Oxide의 생성량을 100%로 하여 각 시료의 % 수득율을 구하였다.In order to investigate the inhibitory effect of artificially induced inflammation using mouse macrophage Raw264.7 cells, 10% FBS-DMEM (Fetal Bovine Serum, Fetal Bovine Serum, Dulbecco's Modified Eagle Medium, GIBCO G) 1 × 10 5 cells were suspended in the culture medium and inoculated on a 24-well plate. After one day, the peptide derivative prepared in Example 1 was treated at a concentration of 50 ppm and cultured for 18 hours, followed by treatment with 1 μg / ml of Lipopolysaccharide (Sigma) for 24 hours. After that, the supernatant was recovered, and 100 μl of the supernatant was added to 96-well plate. Griess reagent (Sigma) was added in the same amount, and the absorbance was measured at 570 nm by gently shaking at room temperature for 10 minutes. Sodium nitrite was used as a standard and calibration curves were prepared and the amount of nitric oxide produced in each sample was determined. The percent yield of each sample was determined by taking the amount of nitric oxide produced by the lipopolysaccharide-treated group as 100%.
그 결과, 표 4 및 도 3에 나타난 바와 같이, 1 ㎍/ml의 염증유발인자 Lipopolysaccharide (LPS) 를 처리하게 되면, 세포독성이 있어 일부 세포는 죽으며, 염증인자인 NO생성량이 증대됨을 음성 대조군 실험에서 알 수 있으며, 갈릭산 및 펩타이드만을 처리군보다 본 발명에 따른 펩타이드 유도체인 Galloyl-Exorphin, Galloyl -Enkephalin, Galloyl-Neoendorphin, Galloyl-Endorphin 처리군에서 염증 유발과 관련된 NO생성을 더 줄이는 것을 확인하였다. 이는 본 발명에 따른 펩타이드 유도체가 우수한 항염 소재로 쓰일 수 있음을 의미한다.As a result, as shown in Table 4 and FIG. 3, when treated with 1 μg / ml of inflammatory inducer Lipopolysaccharide (LPS), cytotoxicity was observed, and some cells died, and NO production, an inflammatory factor, Experimental results showed that the production of NO related to inflammation was further reduced in the group treated with the peptide derivatives of the present invention, Galloyl-Exorphin, Galloyl-Enkephalin, Galloyl-Neoendorphin and Galloyl-Endorphin, than gallic acid and peptide alone Respectively. This means that the peptide derivative according to the present invention can be used as an excellent anti-inflammatory substance.
물질처리
(LPS처리)Inflammation induction
Material treatment
(LPS treatment)
화장료 조성물의 제조Preparation of cosmetic composition
본 발명의 대두 태좌조직 배양 추출물를 유효성분으로 함유하는 화장품으로 영양화장수, 크림, 에센스 등의 유화 제형의 화장품 및 유연화장수 등의 가용화 제형의 화장품을 제조하였다.Cosmetics of emulsified form such as nutrient lotion, cream, essence, etc. and cosmetics of solubilized form such as softened longevity were prepared with the cosmetic containing the soybean placenta tissue culture extract of the present invention as an active ingredient.
제조예Manufacturing example 2-1: 화장수 2-1: Lotion
다음 처방에 따라 통상의 화장수 제조 방법에 따라 제조하였다.According to the following formulation, it was prepared according to the conventional lotion preparation method.
제조예Manufacturing example 2-2: 에센스 2-2: Essence
다음 처방에 따라 통상의 에센스 제조 방법에 따라 제조하였다.According to the following prescription, it was prepared according to a conventional method for producing essence.
제조예Manufacturing example 2-3: 로션 2-3: Lotion
다음 처방에 따라 통상의 로션 제조 방법에 따라 제조하였다.According to the following formulation, it was prepared according to a conventional lotion preparation method.
제조예Manufacturing example 2-4: 크림 2-4: Cream
다음 처방에 따라 통상의 크림 제조 방법에 따라 제조하였다.According to the following formulation, it was prepared according to a conventional cream production method.
제조예Manufacturing example 2-5: 젤 2-5: Gel
다음 처방에 따라 통상의 젤 제조 방법에 따라 제조하였다.According to the following prescription, it was prepared according to a conventional gel preparation method.
이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
While the present invention has been particularly shown and described with reference to specific embodiments thereof, those skilled in the art will appreciate that such specific embodiments are merely preferred embodiments and that the scope of the invention is not limited thereby. It will be obvious. Accordingly, the actual scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.
<110> Bio FD&C <120> Neuropeptide derivatives and Composition for Skin External Application Comprising the Same <130> 2012-07 <160> 8 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Exorphin <400> 1 Tyr Gly Gly Trp Leu 1 5 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> alpha-neoendorphin <400> 2 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Lys Tyr Pro Lys 1 5 10 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> beta-neoendorphin <400> 3 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Lys Tyr Pro 1 5 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> alpha-endorphin <400> 4 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 <210> 5 <211> 31 <212> PRT <213> beta-endorphin <400> 5 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 Leu Phe Lys Asn Ala Ile Ile Lys Asn Ala Tyr Lys Lys Gly Glu 20 25 30 <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> gamma-endorphin <400> 6 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 Leu <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Met-enkephalin <400> 7 Tyr Gly Gly Phe Met 1 5 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Leu-enkephalin <400> 8 Tyr Gly Gly Phe Leu 1 5 <110> Bio FD & C <120> Neuropeptide derivatives and Composition for Skin External Application Comprising the Same <130> 2012-07 <160> 8 <170> Kopatentin 2.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Exorphin <400> 1 Tyr Gly Gly Trp Leu 1 5 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> alpha-neoendorphin <400> 2 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Lys Tyr Pro Lys 1 5 10 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> beta-neoendorphin <400> 3 Tyr Gly Gly Phe Leu Arg Lys Tyr Pro 1 5 <210> 4 <211> 16 <212> PRT <213> alpha-endorphin <400> 4 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 <210> 5 <211> 31 <212> PRT <213> beta-endorphin <400> 5 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 Leu Phe Lys Asn Ale Ile Ile Lys Asn Ala Tyr Lys Lys Gly Glu 20 25 30 <210> 6 <211> 17 <212> PRT <213> gamma-endorphin <400> 6 Tyr Gly Gly Phe Met Thr Ser Glu Lys Ser Gln Thr Pro Leu Val Thr 1 5 10 15 Leu <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Met-enkephalin <400> 7 Tyr Gly Gly Phe Met 1 5 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Leu-enkephalin <400> 8 Tyr Gly Gly Phe Leu 1 5
Claims (6)
[화학식 1]
상기 식에서,
R1 및 R5가 모두 수소이고, R2 내지 R4는 모두 히드록시이고, n은 1 또는 2이며, L은 존재하지 않거나 연결기이고, A는 엑소핀(exorphin), 알파-네오엔돌핀(alpha-neoendorphin), 베타-네오엔돌핀(beta-neoendorphin), 알파-엔돌핀(alpha-endorphin), 베타-엔돌핀(beta-endorphin), 감마-엔돌핀(gamma-endorphin), 및 엔케팔린(enkephalin)으로 구성된 군에서 선택되는 뉴로펩타이드이다.
A peptide derivative represented by the following formula (1): < EMI ID =
[Chemical Formula 1]
In this formula,
R1 and R5 are both hydrogen, R2 to R4 are all hydroxy, n is 1 or 2, L is absent or is a linking group, A is exorphin, alpha-neoendorphin, A neuropeptide selected from the group consisting of beta-neoendorphin, alpha-endorphin, beta-endorphin, gamma-endorphin, and enkephalin to be.
A pharmaceutical composition for anti-inflammation comprising the peptide derivative according to claim 1.
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2012
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Patent Citations (3)
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Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| J. Clin. Aesthet. Dermatol. 4(7): 51-54(2011) * |
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