KR101378537B1 - Process for preparing paclitaxel from 10-deacetylpaclitaxel - Google Patents

Abstract

본 발명은 파클리탁셀 중간체로부터 파클리탁셀을 단일용기 내에서 반합성하여 고수율로 제조하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 제조방법은 10-디아세틸파클리탁셀을 출발물질로 사용함으로써 파클리탁셀이 얻어지기까지의 전 단계를 중간체의 분리 없이 단일 용기 반응으로 진행할 수 있으며, 또한 보다 적은 양의 시약을 사용할 수 있어 매우 경제적이며, 결정화 및 정제 공정을 포함함으로써 대량생산 적용시에도 80~95%에 달하는 고수율로 파클리탁셀을 얻을 수 있어 보다 용이하고 효율적으로 파클리탁셀을 얻을 수 있으며, 나아가 파클리탁셀을 산업적으로 대량 생산하는 공정에의 적용시 매우 유리한 효과가 있다.The present invention relates to a process for producing paclitaxel from a paclitaxel intermediate in high yield by semisynthesizing in a single container.
According to the preparation method of the present invention, by using 10-diacetyl paclitaxel as a starting material, the entire step until paclitaxel is obtained can be carried out in a single container reaction without separation of an intermediate, and a smaller amount of reagent can be used, which is very economical. By including crystallization and refining processes, paclitaxel can be obtained with high yield of 80-95% even in mass production applications, and paclitaxel can be obtained more easily and efficiently. In application there is a very advantageous effect.

Description

10-디아세틸파클리탁셀로부터 파클리탁셀을 제조하는 방법{PROCESS FOR PREPARING PACLITAXEL FROM 10-DEACETYLPACLITAXEL}Process for preparing paclitaxel from 10-diacetyl paclitaxel {PROCESS FOR PREPARING PACLITAXEL FROM 10-DEACETYLPACLITAXEL}

본 발명은 파클리탁셀 중간체로부터 파클리탁셀을 단일용기 내에서 반합성하여 고수율로 제조하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a process for producing paclitaxel from a paclitaxel intermediate in high yield by semisynthesizing in a single container.

파클리탁셀의 제조와 관련된 종래의 기술인 논문 [문헌참조: Rao, K. V.; Bhakuni, R. S.; Johnson, J.; Oruganti, R. S. J. Med. Chem. 1995, 38, 3411-3414] 에 따르면, 10-디아세틸파클리탁셀 로부터 파클리탁셀을 수득하기 위하여 헥사메틸디실라젠(hexamethyldisilazane; HMDS)를 사용하는 기술을 기재하고 있으나, 이는 보호기인 트리메틸실릴기의 불안정성으로 인하여 반응 중에 탈보호가 일어나 원치 않는 부수물인 파클리탁셀 2’-아세테이트가 다량 생성됨으로써 목적하는 물질인 파클리탁셀의 수율이 매우 낮아지는 등의 단점이 있어 더 큰 규모의 산업적 대량 합성 시스템으로의 적용이 어려운 단점이 있었다.Prior art papers relating to the preparation of paclitaxel [see Rao, K. V .; Bhakuni, R. S .; Johnson, J .; Oruganti, R. S. J. Med. Chem. 1995, 38, 3411-3414 describes a technique using hexamethyldisilazane (HMDS) to obtain paclitaxel from 10-diacetyl paclitaxel, but this is due to the instability of the protecting group trimethylsilyl group. Due to the deprotection during the reaction, a large amount of unwanted by-product paclitaxel 2'-acetate is generated, resulting in a very low yield of paclitaxel, a target substance, which makes it difficult to apply to a larger industrial mass synthesis system. There was this.

또한, 미국특허 제 7,563,914에 따르면 바카틴으로부터 단일용기 안에서 보호된 바카틴 유도체를 고수율(80%)로 제조하는 방법에 대하여 기술하고 있는데, 이에 따라 파크리탁셀을 제조하기 위해서는 상기 얻어진 바카틴 유도체를 이용하여 추가적으로 단계를 거쳐야 한다. 즉 상기 미국특허 제 7,563,914호에 기재된 방법에 의하면 단일용기 안에서 보호된 바카틴 유도체를 얻은 후, 얻어진 중간체를 이용하여 연속적인 축합반응을 통해 파크리탁셀을 제조하는 방법에 관하여 기술하고 있으며, 이때 원료인 바카틴으로부터 파크리탁셀을 얻기까지의 총수율은 65%로 보고되어 있어 역시 제조된 파클리탁셀의 수율이 매우 낮다는 문제가 있다. In addition, US Pat. No. 7,563,914 describes a method for producing a high yield (80%) of a baccatin derivative protected in a single container from bacatin. Thus, in order to prepare paclitaxel, the obtained bacatin derivative is obtained. Additional steps must be taken using. That is, according to the method described in US Pat. No. 7,563,914, a method for preparing paclitaxel through a continuous condensation reaction using the obtained intermediate after obtaining a protected bacatin derivative in a single container, wherein The total yield from the in baccatin to the paclitaxel has been reported to be 65%, and there is a problem that the yield of the produced paclitaxel is also very low.

상기 살펴본 바와 같이, 10-디아세틸파클리탁셀로부터 파클리탁셀이 얻어지기까지의 전 단계를 단일용기에서 진행하는 공정은 아직까지 보고되지 않고 있으며, 이와 같은 종래의 기술은 의약품 등 산업에서의 파클리탁셀의 수요증가에도 불구하고 대량의 파클리탁셀을 생산하는데 매우 비효율적이고, 낮은 생산성으로 인해 그 생산이 제한되고 있는 실정이다. 따라서 파클리탁셀을 고수율로 효율적인 방법으로 생산하는 방법에 대한 기술 개발이 절실히 요구되고 있다.As described above, a process for carrying out the entire step from 10-diacetyl paclitaxel to paclitaxel in a single container has not been reported until now, and such a conventional technique is used to increase the demand for paclitaxel in industries such as pharmaceuticals. Nevertheless, it is very inefficient to produce a large amount of paclitaxel, and its production is limited due to low productivity. Therefore, there is an urgent need for technology development of a method for producing paclitaxel in a high yield in an efficient manner.

이에 본 발명은 10-디아세틸파클리탁셀을 출발 물질로 하여 중간체의 분리 없이 단일 용기 내에서 파클리탁셀을 고수율로 보다 용이하게 제조하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a method for easily producing paclitaxel in a high yield in a single container without separating intermediates using 10-diacetyl paclitaxel as a starting material.

보다 상세하게는 본 발명은 1) 10-디아세틸파클리탁셀과 실릴화제를 반응시켜 10-디아세틸파클리탁셀의 2’-, 7- 위치의 히드록시기를 실릴화된 라디칼로 보호하는 단계;More specifically, the present invention comprises the steps of: 1) reacting 10-diacetylpaclitaxel with a silylating agent to protect hydroxy groups at the 2′-, 7-position of 10-diacetylpaclitaxel with silylated radicals;

2) 10- 위치의 히드록시기를 아세틸화하는 단계; 및2) acetylating the hydroxy group at the 10-position; And

3) 상기 실릴화된 라디칼로부터 2’-, 7- 위치의 히드록시기를 탈보호하는 단계를 포함하며 상기 1) 내지 3) 단계는 단일 용기 반응으로 이루어지는 것인, 파클리탁셀의 제조방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.3) deprotecting the hydroxyl group at the 2′-, 7-position from the silylated radical, wherein steps 1) to 3) consist of a single vessel reaction, and an object of the present invention is to provide a method for producing paclitaxel. It is done.

의약품 등 산업에서의 파클리탁셀의 수요증가에도 불구하고 현재까지 개발된 파클리탁셀의 제조방법은 대량생산에 적용시 매우 비효율적이고, 낮은 생산성으로 인해 한계가 있었다. 따라서 본 발명자들이 보다 효율적인 방법으로 단시간 내 파클리탁셀을 고수율로 제조하는 방법을 개발하기 위해 연구한 결과, 10-디아세틸파클리탁셀을 출발물질로 사용하여 안정화된 중간체를 경유함으로써 원치 않는 부반응 및 이로 인해 생성되는 부수물의 생성을 억제할 수 있고, 파클리탁셀이 얻어지기까지의 전 단계를 중간체의 분리 없이 단일 용기 반응으로 진행할 수 있으며, 또한 보다 적은 양의 시약을 사용하여 단 시간 내 파클리탁셀을 제조할 수 있어 매우 경제적이며, 결정화 및 정제 공정을 포함함으로써 대량생산 적용시에도 80~95%에 달하는 고수율로 파클리탁셀을 얻을 수 있어 보다 용이하고 효율적으로 파클리탁셀을 얻을 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.Despite the increased demand for paclitaxel in the pharmaceutical and other industries, the manufacturing method of paclitaxel, which has been developed so far, has been limited due to its inefficiency and low productivity. Therefore, the present inventors have studied to develop a method for producing paclitaxel in a high yield in a short time in a more efficient manner, by using the 10-diacetyl paclitaxel as a starting material via a stabilized intermediate through the unwanted side reactions and thereby It is possible to suppress the formation of adjuncts to be obtained, to proceed the whole step until paclitaxel is obtained in a single vessel reaction without separation of the intermediate, and also to prepare paclitaxel in a short time using a smaller amount of reagents. The present invention was completed by confirming that paclitaxel can be obtained with economical and high yield of 80-95% even in a mass production application by including crystallization and purification process, so that paclitaxel can be obtained more easily and efficiently.

이에 본 발명은 10-디아세틸파클리탁셀을 출발 물질로 하여 중간체의 분리 없이 단일 용기 내에서 파클리탁셀을 고수율로 보다 용이하게 제조하는 방법을 제공한다.Accordingly, the present invention provides a method for producing paclitaxel in high yield more easily in a single container without separating intermediates using 10-diacetylpaclitaxel as a starting material.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명하기로 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail.

본 발명은 1) 10-디아세틸파클리탁셀(10-deacetylpaclitaxel, 10-DAP)과 실릴화제를 반응시켜 10-디아세틸파클리탁셀의 2’-, 7- 위치의 히드록시기를 실릴화된 라디칼로 보호하는 단계;The present invention comprises the steps of: 1) reacting a 10-diacetylpaclitaxel (10-DAP) with a silylating agent to protect a hydroxyl group at the 2′-, 7-position of 10-diacetylpaclitaxel with a silylated radical;

2) 10- 위치의 히드록시기를 아세틸화하는 단계; 및2) acetylating the hydroxy group at the 10-position; And

3) 상기 실릴화된 라디칼로부터 2’-, 7- 위치의 히드록시기를 탈보호하는 단계를 포함하며 상기 1) 내지 3) 단계는 단일 용기 반응으로 이루어지는 것인, 파클리탁셀의 제조방법을 제공한다. 3) deprotecting the hydroxyl group at the 2′-, 7-position from the silylated radical, wherein steps 1) to 3) are performed in a single vessel reaction.

본 명세서에서, “단일 용기 반응(one-pot reaction)”이라 함은 출발물질인 10-디아세틸파클리탁셀로부터 최종생성물인 파클리탁셀을 얻기까지의 모든 단계에 있어서 형성된 중간 생성물의 분리, 단리 또는 따로 수득하는 단계 없이, 연속적으로 상기 1) 내지 3) 공정이 수행되는 것을 의미한다. As used herein, the term "one-pot reaction" refers to the separation, isolation or separately obtained intermediate product formed in every step from starting material 10-diacetylpaclitaxel to obtaining the final product paclitaxel. It means that the steps 1) to 3) are carried out continuously without a step.

이처럼 본 발명은 파클리탁셀의 제조공정을 단일-용기 반응으로 수행할 수 있어 전체 제조 공정을 현저히 단순화 내지 간소화시킬 수 있으며, 이에 따라 단시간 내 보다 효율적으로 파클리탁셀을 제조할 수 있다. 뿐만 아니라, 상기 3) 단계 이후에 선택적으로 수행 가능한 정제 공정 또한 상기 3) 단계에 이어서 마찬가지로 단일 용기 내에서 실시할 수 있어, 반응 후의 워크업(work up) 또는 중간체 회수과정이나 용기 이동 과정 중에 발생할 수 있는 물질의 손실을 방지할 수 있으므로 수득되는 파클리탁셀의 수율 및 순도를 현저히 향상시킬 수 있다.As such, the present invention can perform the process of producing paclitaxel in a single-vessel reaction, thereby greatly simplifying or simplifying the entire manufacturing process, thereby producing paclitaxel more efficiently in a short time. In addition, a purification process that can be selectively performed after step 3) can also be carried out in a single vessel following step 3) as well, which may occur during work up after the reaction or during intermediate recovery or vessel transfer. It is possible to significantly prevent the loss of material, which can significantly improve the yield and purity of the paclitaxel obtained.

한편, 탄소 위치의 기재와 관련하여, “2’-”와 같이 탄소 위치를 나타내는 숫자 “2” 뒤에 “작은 따옴표(’)” 표시를 한 것은 측쇄 전구체, 보다 상세하게는 10-DAP의 13-위치의 히드록시기에 에스테르화 반응으로 축합된 측쇄 전구체의 탄소 위치를 의미한다. 예를 들어, 상기 측쇄 전구체가 하기 화학식 5의 화합물인 경우, 각 탄소 위치의 표기는 하기 화학식 5에 기재된 바와 같다.On the other hand, in connection with the description of the carbon position, the "single quote" (') after the number "2" indicating the carbon position, such as "2'-", indicates that the branched precursor, more specifically 13- of 10-DAP By the hydroxyl group of the position is meant the carbon position of the side chain precursor condensed by esterification reaction. For example, when the side chain precursor is a compound of Formula 5, the notation of each carbon position is as described in Formula 5 below.

본 발명의 일 구현예에 따른 파클리탁셀의 제조방법은 바람직하게는 하기 반응식 1로 나타낼 수 있다.The method for preparing paclitaxel according to an embodiment of the present invention may be preferably represented by Scheme 1 below.

[반응식 1][Reaction Scheme 1]

상기 반응식 1에서, 1) 단계를 거쳐 얻어진 화합물(화학식 3)의 M은 히드록시기를 보호하기 위해 도입된 실릴화된 라디칼이다.In Scheme 1, M of the compound (Formula 3) obtained through step 1) is a silylated radical introduced to protect the hydroxy group.

상기 실릴화된 라디칼은 바람직하게는 트리알킬실릴, 디알킬아릴실릴, 알킬디아릴실릴, 또는 트리아릴실릴기(상기 알킬 라디칼은 직쇄 또는 분지쇄인 탄소수 1 내지 4의 알킬기일 수 있으며, 상기 아릴은 탄소수 6 내지 10의 아릴, 바람직하게는 페닐일 수 있다.The silylated radical is preferably trialkylsilyl, dialkylarylsilyl, alkyldiarylsilyl, or triarylsilyl group (The alkyl radical may be an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms which is straight or branched chain, and the aryl May be aryl having 6 to 10 carbon atoms, preferably phenyl.

예컨대, 상기 실릴화된 라디칼은 트리에틸실릴 또는 트리메틸실릴기일 수 있으며, 다만 상기 트리메틸실릴기를 보호기로 사용할 경우, 아세틸화 과정 중 불안정한 트리메틸실릴기의 탈보호가 일어남으로써 원치 않는 부수물이 발생할 우려가 있으므로, 보다 바람직하게는 트리에틸실릴기일 수 있다. For example, the silylated radical may be triethylsilyl or trimethylsilyl group, but when the trimethylsilyl group is used as a protecting group, there is a fear that an undesired accompaniment may occur due to deprotection of an unstable trimethylsilyl group during acetylation. Therefore, more preferably, it may be a triethylsilyl group.

상기 실릴화된 라디칼, 바람직하게는 트리에틸실릴기를 도입하기 위해 바람직하게는 TESCl (chlorotriethylsilane), TBSCl (tert-Butyldimethylsilyl chloride), 또는 TBDPSCl (tert-Butylchlorodiphenylsilane)를 실릴화제로 사용하여 10-디아세틸파클리탁셀과 반응시킬 수 있다.In order to introduce the silylated radical, preferably triethylsilyl group, 10-diacetylpaclitaxel is preferably used as silylating agent using TESCl (chlorotriethylsilane), TBSCl (tert-Butyldimethylsilyl chloride), or TBDPSCl (tert-Butylchlorodiphenylsilane) as a silylating agent. Can be reacted with.

또한 바람직하게는 상기 실릴화제는 10-디아세틸파클리탁셀(화학식 2) 1몰(mol) 당 3 내지 10몰, 더욱 바람직하게는 4 내지 6 몰로 반응시킬 수 있다. 실릴화제를 상기 범위에 미달하여 사용할 경우, 히드록시기에 대한 실릴화제의 반응 비율이 낮아져서 실릴화 반응 효율이 낮아질 수 있는 문제점이 있으며, 상기 범위를 초과하여 실릴화제를 사용할 경우, 제조비용이 증가하여 효과의 상승에 비하여 공정의 경제성이 낮아지는 문제점이 있을 수 있다.Also preferably, the silylating agent may be reacted at 3 to 10 moles, more preferably 4 to 6 moles per 1 mole of 10-diacetyl paclitaxel (Formula 2). When the silylating agent is used in less than the above range, there is a problem that the reaction ratio of the silylating agent to the hydroxy group is lowered, so that the silylation reaction efficiency may be lowered. There may be a problem that the economic efficiency of the process is lower than the increase of.

상기 1) 단계 즉, 10-디아세틸파클리탁셀(화학식 2)과 실릴화제를 반응시켜 10-디아세틸파클리탁셀의 2’-, 7- 위치의 히드록시기를 선택적으로 실릴화하여 2’-, 7- 위치의 히드록시기가 실릴화된 라디칼로 보호된 화합물(화학식 3)을 얻는 단계는, 바람직하게는 0 내지 40 ℃ 의 온도, 보다 바람직하게는 15 내지 25 ℃ 의 온도 또는 상온에서 수행될 수 있어 공정상 매우 편리하다.Step 1), namely, by reacting 10-diacetyl paclitaxel (Formula 2) with a silylating agent to selectively silylate 2'-, 7-hydroxy group of 10-diacetyl paclitaxel to 2'-, 7-position The step of obtaining the compound (Formula 3) in which the hydroxy group is protected with the silylated radical is preferably very convenient in terms of process since it may be carried out at a temperature of 0 to 40 ° C, more preferably at a temperature of 15 to 25 ° C or at room temperature. Do.

상기 1) 단계는 바람직하게는 염기성 유기용매 또는 비활성 유기용매와 염기의 혼합 반응액 내에서 수행할 수 있다. Step 1) may preferably be performed in a reaction mixture of a basic organic solvent or an inert organic solvent and a base.

상기 염기성 유기용매는 피리딘 또는 2,6-루티딘(2,6-lutidine) 일 수 있으며, 바람직하게는 피리딘일 수 있다. 또한 상기 비활성 유기용매와 염기의 혼합 반응액은, 바람직하게는 톨루엔, 테트라히드로푸란, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 에틸 아세테이트, 및 클로로포름으로 이루어진 군에서 선택된 비활성 유기용매와, 바람직하게는 피리딘, 2,6-루티딘, 디메틸아미노피리딘, 피페리딘, 및 트리에틸아민으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 염기가 혼합된 것일 수 있다.The basic organic solvent may be pyridine or 2,6-lutidine, preferably pyridine. In addition, the reaction mixture of the inert organic solvent and the base is preferably an inert organic solvent selected from the group consisting of toluene, tetrahydrofuran, dichloromethane, 1,2-dichloroethane, ethyl acetate, and chloroform, preferably One or more bases selected from the group consisting of pyridine, 2,6-lutidine, dimethylaminopyridine, piperidine, and triethylamine may be mixed.

예컨대 유럽 특허 EP336840에 기술된 방법에 따라 피리딘의 존재하에서, 또는 국제 출원 WO 94/14787에 기술된 방법에 따라 디클로로메탄과 같은 비활성 유기 용매 중 4-디메틸아미노피리딘 등의 염기성 물질의 존재하에서, 트리에틸실릴 클로라이드의 작용에 의해 수행될 수 있다.In the presence of pyridine, for example according to the method described in European patent EP336840, or in the presence of a basic substance such as 4-dimethylaminopyridine in an inert organic solvent such as dichloromethane according to the method described in international application WO 94/14787 It can be carried out by the action of ethylsilyl chloride.

상기 염기성 유기용매 또는 비활성 유기용매와 염기의 혼합 반응액은 바람직하게는 10-디아세틸파클리탁셀 대비 0.01 M 내지 0.8 M, 더욱 바람직하게는 0.1 M 내지 0.5 M 의 농도로 사용할 수 있다. 상기 농도 범위에 미달하여 희석된 농도로 사용할 경우 반응시간이 길어지는 단점이 있고, 상기 농도 범위보다 초과하여 농축된 조건으로 사용할 경우에는 반응액의 유동성이 낮아지고, 반응이 균일하게 진행하지 못할 수 있는 단점이 있어 바람직하지 않다. The basic organic solvent or the mixed reaction solution of the inert organic solvent and the base may be preferably used at a concentration of 0.01 M to 0.8 M, more preferably 0.1 M to 0.5 M relative to 10-diacetyl paclitaxel. The reaction time is long when used at a concentration that is less than the concentration range, and the reaction time is long, and when used in a concentration exceeding the concentration range, the fluidity of the reaction solution is lowered, and the reaction may not proceed uniformly. It is not desirable because of the disadvantage.

또한 상기 염기성 유기용매 또는 비활성 유기용매와 염기의 혼합 반응액의 총 부피는 바람직하게는 10-디아세틸파클리탁셀 1g 당 0.5 내지 10 ml일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 10-디아세틸파클리탁셀 1g 당 1.0 내지 3 ml일 수 있다.In addition, the total volume of the reaction mixture of the basic organic solvent or the inert organic solvent and the base may be preferably 0.5 to 10 ml per 1 g of 10-diacetyl paclitaxel, and more preferably 1.0 to 1 g of 10-diacetyl paclitaxel. 3 ml.

상술한 바와 같이, 본 발명의 일 구현예에 따른 파클리탁셀의 제조방법은 상기 1) 단계에 사용되는 용매의 사용량을 최소화하여 사용함으로써, 상기 1) 단계의 반응물의 농도를 높일 수 있어 단 시간 내에 반응이 효율적으로 일어나도록 할 수 있으며, 따라서 반응시간 및 반응에 사용되는 실릴화제 등의 사용량을 감소시킬 수 있고 이에 따라 제조비용 또한 절감할 수 있는 효과가 있다. As described above, the method for producing paclitaxel according to an embodiment of the present invention can minimize the amount of the solvent used in step 1), thereby increasing the concentration of the reactant in step 1) and reacting within a short time. This can occur efficiently, thus reducing the reaction time and the amount of the silylating agent used in the reaction and the like, thereby reducing the manufacturing cost.

한편, 상기 염기성 유기용매의 염기는 10-DAP 대비 5 내지 15 당량으로 사용하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 8 내지 13 당량의 염기를 사용할 수 있다. 염기의 사용량이 상기 범위에 미달될 경우 반응속도가 느려져 불순물의 양이 증가할 가능성이 있고, 상기 범위를 초과할 경우 반응 종료 후 여분의 염기를 제거하기가 힘든 단점이 있어 바람직하지 않다.On the other hand, the base of the basic organic solvent is preferably used in 5 to 15 equivalents compared to 10-DAP, more preferably 8 to 13 equivalents of base may be used. When the amount of the base used is less than the above range, the reaction rate may be slowed down and the amount of impurities may increase, and when the amount of the base is exceeded, the excess base may be difficult to remove after completion of the reaction.

또한, 상기 비활성 유기용매와 염기의 혼합 반응액에 있어서, 비활성 유기용매는 염기의 양을 기준으로 1:1(w/w) 내지 1:20(w/w)의 비율(염기:비활성 유기용매)로 사용할 수 있다. 상기 범위를 초과하여 비활성 유기용매를 사용할 경우 즉, 염기의 양에 비해 용매의 양이 많을 때는 반응시간이 길어지는 단점이 있고, 상기 범위에 미달하여 비활성 유기용매를 사용할 경우 반응액의 유동성이 낮아지고, 반응이 균일하게 진행하지 못할 수 있는 단점이 있어 바람직하지 않다. In addition, in the reaction mixture of the inert organic solvent and the base, the inert organic solvent has a ratio of 1: 1 (w / w) to 1:20 (w / w) (base: inactive organic solvent) based on the amount of base. Can be used as) When using an inert organic solvent exceeding the above range, that is, when the amount of the solvent is large compared to the amount of the base, the reaction time is long, and when the inert organic solvent is used below the range, the fluidity of the reaction solution is low. It is not preferable because there is a disadvantage that the reaction may not proceed uniformly.

상기 2) 단계 즉, 화학식 3의 화합물의 10- 위치의 히드록시기를 아세틸화하여 화학식 4의 화합물을 얻는 단계는 아세틸화제를 사용하여 이루어질 수 있으며, 상기 아세틸화제는 바람직하게는 무수아세트산 및 아세틸할라이드(예컨대, 아세틸 클로라이드)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있으며, 보다 바람직하게는 무수 아세트산일 수 있다.Step 2), that is, the step of acetylating the hydroxy group in the 10-position of the compound of Formula 3 to obtain a compound of Formula 4 may be performed using an acetylating agent, the acetylating agent is preferably acetic anhydride and acetyl halide ( For example, acetyl chloride) may be one or more selected from the group consisting of, more preferably acetic anhydride.

상기 아세틸화 공정은 유럽 특허 EP336840에 기술된 조건 하에서 수행할 수 있으며, 바람직하게는 0 내지 25 ℃의 온도에서, 디메틸아미노-4 피리딘 존재하에 무수 아세트산을 첨가함으로써 수행될 수 있다. 또한 바람직하게는, 상기 아세틸화제는 사용된 10-디아세틸파크리탁셀의 몰당 1.2몰 내지 5몰, 바람직하게는 1.5 내지 2.5 몰로 사용될 수 있다.The acetylation process can be carried out under the conditions described in European patent EP336840, preferably by addition of acetic anhydride in the presence of dimethylamino-4 pyridine at a temperature of 0 to 25 ° C. Also preferably, the acetylating agent may be used in an amount of 1.2 to 5 moles, preferably 1.5 to 2.5 moles per mole of 10-diacetylpacrytaxel used.

상기 3) 단계 즉, 2’- 및 7- 위치에 도입된 실릴화된 라디칼을 제거하여 2’-, 7- 위치의 히드록시기를 실릴화된 라디칼로부터 탈보호하여 화학식 1의 화합물인 파클리탁셀을 얻는 단계는 바람직하게는 -10 내지 30 ℃의 온도, 보다 바람직하게는 0 내지 10 ℃의 온도에서 수행할 수 있으며, 무기산 및 유기산으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상의 산을 적가하여, 또는 상기 산과 유기용매의 혼합용매를 적가함으로써 탈보호가 이루어질 수 있다.Step 3), namely, removing the silylated radicals introduced at the 2'- and 7-positions to deprotect the hydroxyl groups at the 2'-, 7-positions from the silylated radicals to obtain paclitaxel as a compound of Formula 1 May be preferably performed at a temperature of −10 to 30 ° C., more preferably at a temperature of 0 to 10 ° C., at least one acid selected from the group consisting of an inorganic acid and an organic acid is added dropwise, or Deprotection may be achieved by dropwise addition of the mixed solvent.

상기 무기산은 예컨대, 할로겐화수소산, 황산, 질산, 인산, 설파민산, 과염소산, 크롬산, 아황산, 또는 아질산 등이 될 수 있으며, 유기산은 예컨대, 할로겐화산, 포름산, 아세트산, 옥살아세트산, 프로피온산, 옥살산, 글리콜산, 주석산, 구연산, 푸마르산, 말산, 숙신산, 부티르산, 시트르산, 또는 트리플루오로아세트산 등이 될 수 있다. 또한 상기 유기용매는 바람직하게는 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올일 수 있다.The inorganic acid may be, for example, hydrofluoric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfamic acid, perchloric acid, chromic acid, sulfurous acid, or nitrous acid, and the like, and the organic acid may be, for example, halogenated acid, formic acid, acetic acid, oxalacetic acid, propionic acid, oxalic acid, glycols. Acids, tartaric acid, citric acid, fumaric acid, malic acid, succinic acid, butyric acid, citric acid, trifluoroacetic acid and the like. In addition, the organic solvent may be a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms.

상기 산과 유기용매의 혼합용매를 적가함으로써 탈보호할때, 상기 산과 유기용매의 혼합용매에 포함되는 산과 유기용매의 부피비는 이에 제한되지 않으나, 바람직하게는 산 및 유기용매를 1 : 0.5 내지 1 : 10 부피비, 보다 바람직하게는 1 : 2 내지 1 : 4의 부피비로 혼합한 것일 수 있으며, 또한 바람직하게는 할로겐화산(예컨대 염산)과 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올(예컨대, 에탄올 또는 메탄올)의 혼합용매일 수 있다. When the deprotection is carried out by dropwise addition of the mixed solvent of the acid and the organic solvent, the volume ratio of the acid and the organic solvent included in the mixed solvent of the acid and the organic solvent is not limited thereto. Preferably, the acid and the organic solvent are 1: 0.5 to 1: 1. It may be mixed at a volume ratio of 10, more preferably 1: 2 to 1: 4, and preferably a halogenated acid (such as hydrochloric acid) and a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms (such as ethanol or methanol). ) May be a mixed solvent.

바람직하게는 상기 3) 단계 이후에, 4) 상기 탈보호 단계를 거쳐 제조된 파클리탁셀을 분리 및 정제하는 단계를 더 포함할 수 있다.Preferably, after step 3), 4) may further comprise the step of separating and purifying the paclitaxel prepared through the deprotection step.

또한 바람직하게는 상기 4) 단계 이전에 상기 3) 단계를 거쳐 얻어진 파클리탁셀을 액액 추출하는 3-2) 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 액액 추출 단계는 당업계에 널리 사용되는 일반적인 방법을 사용하여 수행할 수 있으며, 예컨대 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 클로로포름, 에테르 등의 일반적인 유기 용매를 물과 함께 사용하여 이루어질 수 있다. Also preferably, the method may further include a step 3-2) of extracting the liquid paclitaxel obtained through the step 3) before the step 4). The liquid extraction step may be performed using a general method widely used in the art, for example, it may be made by using a common organic solvent, such as dichloromethane, ethyl acetate, chloroform, ether with water.

상기 4) 단계 즉, 수득된 파클리탁셀의 분리 및 정제 단계는 바람직하게는 결정화 방법 및 크로마토그래피법을 통하여 이루어질 수 있으며, 상세하게는 상기 3) 단계를 거쳐 수득된 파클리탁셀을 결정화 공정을 거쳐 파클리탁셀을 함유하는 고체로서 분리한 후, 상기 파클리탁셀을 함유하는 고체를 크로마토그래피로 정제함으로써 보다 고수율의 파클리탁셀을 얻을 수 있다.Step 4), namely, separation and purification of the obtained paclitaxel may be preferably performed through a crystallization method and a chromatographic method, and in detail, the paclitaxel obtained through step 3) may be crystallized to contain paclitaxel. After separation as a solid to be obtained, higher yield of paclitaxel can be obtained by purification of the solid containing paclitaxel by chromatography.

이처럼 본 발명의 바람직한 일 구현예에 따르면, 상기 4) 단계를 더욱 포함함으로써 단일 용기 내에서 감소된 양의 시약을 사용하더라도 보다 단시간 내에 약 80~95%에 달하는 고수율로 파클리탁셀을 회수할 수 있게 된다. 나아가 상기 4) 단계 또한 이전 단계와 마찬가지로 단일 용기 내에서 실시할 수 있어, 반응 후의 워크업(work up) 또는 중간체 회수과정이나 용기 이동 과정 중에 발생할 수 있는 물질의 손실을 방지할 수 있으므로 수득되는 파클리탁셀의 수율 및 순도를 현저히 향상시킬 수 있다.Thus, according to a preferred embodiment of the present invention, by further comprising the step 4) it is possible to recover paclitaxel with a high yield of about 80 to 95% in a shorter time even using a reduced amount of reagent in a single container do. Furthermore, the step 4) can also be carried out in a single container as in the previous step, so that paclitaxel obtained can be prevented from the loss of substances that may occur during the work up after the reaction or during the intermediate recovery or the container movement. Can significantly improve the yield and purity.

바람직하게는 상기 4) 단계의 분리는 물 또는 무기염의 수용액, 및 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올을 가하거나, 또는 2종 이상의 유기용매를 가하여 파클리탁셀을 침전 및 결정화하는 단계를 포함하여 이루어지는 것일 수 있다.Preferably the separation of step 4) comprises the step of precipitating and crystallizing paclitaxel by adding an aqueous solution of water or an inorganic salt and a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, or by adding two or more organic solvents. It may be.

상기 침전 및 결정화 단계가 물 또는 무기염의 수용액, 및 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올을 가하여 이루어지는 것일 경우, 바람직하게는 상기 물 또는 무기염의 수용액, 및 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올을 20: 1 내지 4 : 1의 부피비, 바람직하게는 10 : 1 내지 7 : 1의 부피비로 사용하여 파클리탁셀을 침전 및 결정화시킬 수 있다. When the precipitation and crystallization step is made by adding an aqueous solution of water or an inorganic salt and a straight or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms, preferably the aqueous solution of the water or an inorganic salt and a straight or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms. Paclitaxel can be precipitated and crystallized using a volume ratio of 20: 1 to 4: 1, preferably 10: 1 to 7: 1.

물 또는 무기염의 수용액 대비 알코올의 비율이 상기 범위보다 낮을 때는 용매 내 물질의 용해도가 낮아져 목적하는 물질만의 선택적 침전형성이 원활하게 이루어지지 않아 최종생성물의 순도가 낮아 질 수 있는 문제가 있을 수 있고, 상기 범위를 초과하여 알코올을 사용할 경우, 물의 양이 적어져 선택적인 침전 및 결정화가 어렵게 되어 최종생성물의 수율이 낮아질 수 있는 문제가 있어 바람직하지 않다.When the ratio of the alcohol to the aqueous solution of water or inorganic salt is lower than the above range, the solubility of the substance in the solvent is lowered, there is a problem that the purity of the final product may be lowered because the selective precipitation of only the target material is not smoothly made. When the alcohol is used in excess of the above range, the amount of water is small, so that it is difficult to selectively precipitate and crystallize, and thus the yield of the final product may be low, which is not preferable.

상기 물 또는 무기염의 수용액에 사용되는 물은 일반수(수돗물), 증류수, 초순수 등일 수 있으며, 바람직하게는 증류수일수 있다. 또한 상기 무기염의 수용액은 상기의 물에 염화나트륨(NaCl), 또는 염화암모늄(NH4Cl)과 같은 무기염을 첨가한 수용액일 수 있으며 더욱 바람직하게는 염화나트륨(NaCl)이 첨가된 염화나트륨 수용액일 수 있다. 한편 상기 무기염의 농도는 특별히 제한되지 않으나, 바람직하게는 무기염의 포화 용액을 사용할 수 있다.The water used in the aqueous solution of the water or inorganic salt may be general water (tap water), distilled water, ultrapure water, etc., preferably distilled water. The aqueous solution of the inorganic salt may be an aqueous solution in which an inorganic salt such as sodium chloride (NaCl) or ammonium chloride (NH 4 Cl) is added to the water, and more preferably, an aqueous sodium chloride solution in which sodium chloride (NaCl) is added. On the other hand, the concentration of the inorganic salt is not particularly limited, but preferably a saturated solution of the inorganic salt may be used.

상기 침전 및 결정화 단계가 2종의 유기용매를 가하여 이루어지는 것일 경우, 바람직하게는 상기 2종의 유기용매로서 서로 섞이는 특성을 갖는 극성 용매 및 무극성 용매를 사용할 수 있으며, 상세하게는 극성 용매를 가하여 파클리탁셀을 용해시킨 후, 무극성 용매를 천천히 가하여 파클리탁셀을 침전 및 결정화시킬 수 있다. 또한 바람직하게는 상기 침전 및 결정화 단계는 0 내지 30 ℃의 온도에서 5분 내지 60분간, 더욱 바람직하게는 10분 내지 30분간 수행한 후, 약 0 에서 10 ℃로 5분 내지 24시간, 바람직하게는 10분 내지 15 시간, 더욱 바람직하게는 30분 내지 60분간 유지시킬 수 있다. When the precipitation and crystallization step is made by adding two organic solvents, preferably, a polar solvent and a non-polar solvent having a characteristic of mixing with each other as the two organic solvents may be used, and in detail, paclitaxel may be added by adding a polar solvent. After dissolving, paclitaxel can be precipitated and crystallized by slowly adding a nonpolar solvent. Also preferably the precipitation and crystallization step is carried out at a temperature of 0 to 30 ℃ 5 minutes to 60 minutes, more preferably 10 minutes to 30 minutes, and then from about 0 to 10 ℃ 5 minutes to 24 hours, preferably Can be maintained for 10 minutes to 15 hours, more preferably 30 minutes to 60 minutes.

상기 극성 용매는 탄소수 2 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, 또는 아세톤일 수 있고, 상기 무극성 용매는 헥산, 헵탄, 또는 펜탄일 수 있다. 바람직하게는 상기 극성 용매는 탄소수 2 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올일 수 있고, 상기 무극성 용매는 헥산일 수 있다.The polar solvent may be straight or branched alcohol having 2 to 4 carbon atoms, dichloromethane, ethyl acetate, or acetone, and the nonpolar solvent may be hexane, heptane, or pentane. Preferably, the polar solvent may be a straight chain or branched alcohol having 2 to 4 carbon atoms, and the nonpolar solvent may be hexane.

또한 바람직하게는 상기 극성 용매와 상기 무극성 용매를 1: 3 내지 15 부피비, 보다 바람직하게는 1: 5 내지 10의 부피비로 사용할 수 있다.Also preferably, the polar solvent and the nonpolar solvent may be used in a volume ratio of 1: 3 to 15, more preferably 1: 5 to 10.

극성 용매의 비율이 상기 범위보다 작으면 용매 내 물질의 용해도가 낮아져 목적하는 물질만의 선택적 침전형성이 원활하게 이루어지지 않아 최종생성물의 순도가 낮아 질 수 있는 문제가 있을 수 있고, 상기 범위보다 클 때는 선택적인 침전 및 결정화가 어렵게 되어 최종생성물의 수율이 낮아질 수 있는 문제가 있어 바람직하지 않다.If the ratio of the polar solvent is less than the above range, there is a problem that the solubility of the material in the solvent is lowered, so that the selective precipitation formation of only the target material is not smoothly performed, the purity of the final product may be lowered, greater than the above range At this time, the selective precipitation and crystallization becomes difficult, so that the yield of the final product may be lowered, which is not preferable.

상기 4) 단계의 분리는 또한 바람직하게는 서로 섞이지 않는 2종의 유기용매를 사용하여, 파클리탁셀 내 과량의 잔류 용매의 제거를 통해 고형의 파클리탁셀을 얻는 단계를 포함하여 이루어지는 것일 수 있다.Separation of step 4) may also comprise the step of obtaining a solid paclitaxel through the removal of excess residual solvent in paclitaxel, preferably using two organic solvents that are not mixed with each other.

상기 2종의 유기용매는 서로 섞이지 않는 특성을 갖는 극성 용매 및 무극성 용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 메탄올 및 아세토나이트릴로 이루어진 군에서 선택된 극성 유기용매; 및 헥산, 헵탄, 및 펜탄 등의 탄소수 6 이상의 탄화수소 중 선택된 무극성 유기용매를 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 극성용매로서 메탄올 및 무극성 용매로서 헥산을 사용할 수 있다.The two organic solvents may be a polar solvent and a non-polar solvent having a property that does not mix with each other, preferably a polar organic solvent selected from the group consisting of methanol and acetonitrile; And a nonpolar organic solvent selected from hydrocarbons having 6 or more carbon atoms, such as hexane, heptane, and pentane, and more preferably, methanol as a polar solvent and hexane as a nonpolar solvent can be used.

보다 상세하게는 상기 잔류 용매의 제거를 통한 고형의 파클리탁셀을 얻는 단계는, 상기 3) 단계를 거친 합성물을 극성의 유기용매에 용해시키고 상기 극성의 유기용매와 섞이지 않는 무극성의 유기용매를 가하여 강하게 교반해준 후, 무극성 유기용매층을 버리고 극성 유기용매층을 취하여 농축함으로써 고형화된 파클리탁셀을 얻을 수 있다. 상기 과정을 통해 무극성 유기용매뿐만 아니라, 이와 마찬가지로 무극성인 잔류 시약을 함께 제거해줄 수 있다.More specifically, the step of obtaining a solid paclitaxel through the removal of the residual solvent, is dissolved in the organic solvent of the polarity step 3) by adding a non-polar organic solvent that is not mixed with the organic solvent of the polar and vigorously stirred After this, the nonpolar organic solvent layer is discarded and the polar organic solvent layer is taken and concentrated to obtain a solidified paclitaxel. Through this process, it is possible to remove not only the nonpolar organic solvent but also the residual reagent which is likewise nonpolar.

상기 잔류용매의 제거를 통한 파클리탁셀의 결정화는 상기 극성 유기용매 및 무극성 유기용매를 바람직하게는 1 :0.1 내지 10 부피비, 보다 바람직하게는 1: 0.5 내지 1 (극성 유기용매: 무극성 유기용매)의 부피비로 사용하여 이루어지는 것일수 있다. Crystallization of paclitaxel through the removal of the residual solvent is preferably a volume ratio of the polar organic solvent and the nonpolar organic solvent in a volume ratio of 1: 0.1 to 10, more preferably 1: 0.5 to 1 (polar organic solvent: apolar organic solvent). It may be made using.

상기 극성 유기용매 및 무극성 유기용매의 범위에 있어서 극성 유기용매 대비 무극성 유기 용매의 비율이 상기 범위를 벗어날 경우, 층분리가 어려워 질 수 있으며, 또한 합성한 파클리탁셀의 손실이 발생하는 문제가 발생할 우려가 있어 바람직하지 않다.When the ratio of the non-polar organic solvent to the non-polar organic solvent in the range of the polar organic solvent and the non-polar organic solvent is outside the above range, it may be difficult to separate the layers, and there is a concern that a problem of loss of the synthesized paclitaxel may occur. It is not desirable.

상기 분리된 파클리탁셀을 함유하는 고체는 크로마토그래피 또는 재결정화 로 정제할 수 있으며, 바람직하게는 크로마토그래피로 정제할 수 있다. The solid containing the separated paclitaxel may be purified by chromatography or recrystallization, preferably by chromatography.

상기 크로마토그래피에 사용되는 용매는 헥산:에틸아세테이트, 디클로로메탄: 메탄올, 헥산:에테르 등과 같이 일반적으로 크로마토그래피 정제에 사용되는 용매의 사용이 가능하며, 바람직하게는 헥산:에틸아세테이트 (1:1의 부피비)을 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.The solvent used in the chromatography may be a solvent generally used for chromatographic purification, such as hexane: ethyl acetate, dichloromethane: methanol, hexane: ether, and the like, and preferably hexane: ethyl acetate (1: 1). Silica gel chromatography using a volume ratio), but is not limited thereto.

상술한 바와 같은 본 발명의 바람직한 일 구현예에 따른 파클리탁셀 제조방법에 의해 얻어지는 최종 파클리탁셀의 양은 출발물질로서 사용된 10-디아세틸파클리탁셀의 약 80~95%에 해당하여 매우 고수율로 파클리탁셀을 얻을 수 있음을 확인할 수 있다.The amount of the final paclitaxel obtained by the method for preparing paclitaxel according to the preferred embodiment of the present invention as described above corresponds to about 80-95% of 10-diacetylpaclitaxel used as a starting material to obtain paclitaxel in a very high yield. It can be confirmed.

본 발명의 제조방법은 10-디아세틸파클리탁셀을 출발물질로 사용함으로써 파클리탁셀이 얻어지기까지의 전 단계를 중간체의 분리 없이 단일 용기 반응으로 진행할 수 있으며, 또한 보다 적은 양의 시약을 사용할 수 있어 매우 경제적이며, 결정화 및 정제 공정을 포함함으로써 대량생산 적용시에도 80~95%에 달하는 고수율로 파클리탁셀을 얻을 수 있어 보다 용이하고 효율적으로 파클리탁셀을 얻을 수 있으며, 나아가 파클리탁셀을 산업적으로 대량 생산하는 공정에의 적용시 매우 유리한 효과가 있다.According to the preparation method of the present invention, by using 10-diacetyl paclitaxel as a starting material, the entire step until paclitaxel is obtained can be carried out in a single container reaction without separation of an intermediate, and a smaller amount of reagent can be used, which is very economical. By including crystallization and refining processes, paclitaxel can be obtained with high yield of 80-95% even in mass production applications, and paclitaxel can be obtained more easily and efficiently. In application there is a very advantageous effect.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 파클리탁셀 제조 공정을 개략적으로 나타낸 것이다. 1 schematically shows a paclitaxel manufacturing process according to an embodiment of the present invention.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 더욱 상세히 설명하기로 한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the present invention is not limited to the following examples.

<약어 표시><Abbreviation display>

TESCl : 트리에틸실릴 클로라이드(Triethylsilyl chloride)TESCl: Triethylsilyl chloride

DCM : 디클로로메탄(Dichloromethane)DCM: Dichloromethane

IPA : 이소프로필알콜(Iso-propyl alcohol)IPA: Iso-propyl alcohol

EA : 에틸 아세테이트(Ethyl acetate)EA: ethyl acetate

sat. NaCl : 포화 소듐 클로라이드(Saturated sodium chloride)sat. NaCl: Saturated sodium chloride

conc. HCl : 농염산(Concentrated hydrochloric acid)conc. HCl: Concentrated hydrochloric acid

DMAP : 4-디메틸아미노피리딘(4-Dimethylaminopyridine)DMAP: 4-Dimethylaminopyridine

HMDS : 헥사메틸디실라젠(hexamethyldisilazane)
HMDS: hexamethyldisilazane

TLC : 박막 크로마토그래피(Thin layer chromatography)(TLC 전개액: 헥산/에틸아세테이트 = 1/2)TLC: Thin layer chromatography (TLC developing solution: Hexane / Ethyl acetate = 1/2)

HPLC : 고속액체 크로마토그래피(High Performance Liquid Chromatography)
HPLC: High Performance Liquid Chromatography

<HPLC 분석조건><HPLC Analysis Conditions>

컬럼: eclipse plus C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 um Column: eclipse plus C18, 4.6 x 150 mm, 3.5 um

온도: 35℃Temperature: 35 ℃

유속: 1ml/minFlow rate: 1 ml / min

측정 파장: 227 nmMeasuring wavelength: 227 nm

농도구배조건: 하기 표 1과 같이 함.Concentration gradient conditions: as shown in Table 1 below.

시간(분)Time (minutes) 이동상 A
물 (%)Mobile phase A
Water (%) 이동상 B
ACN (%)Mobile phase B
ACN (%) 00 6565 3535 3030 3535 6565 3131 00 100100 3535 00 100100 3636 6565 3535 6060 6565 3535

실시예Example 1. One.

7.35 g 의 10-디아세틸파클리탁셀(9.95 mmol) 를 10 ml 의 피리딘 및 10 ml 의 DCM 혼합액에 용해시켰다. 여기에 10 ml 의 TESCl (59.6 mmol)을 가한 후, 실온에서 20 시간 교반하여 20 시간 경과 후, TLC 로 반응 종료를 확인하였다. 상기 종료된 반응액 중의 샘플을 소량으로 채취하여 구조결정을 한 결과 2’-,7-비스(트리에틸실릴)-10-디아세틸-파클리탁셀(2’-,7-bis(triethylsilyl)-10-deacetyl-paclitaxel; 중간체Ⅰ)이 생성되었음을 확인할 수 있었다.7.35 g of 10-diacetylpaclitaxel (9.95 mmol) was dissolved in 10 ml of pyridine and 10 ml of DCM mixture. After 10 ml of TESCl (59.6 mmol) was added thereto, the mixture was stirred at room temperature for 20 hours, and after 20 hours, the reaction was completed by TLC. A small amount of the sample in the finished reaction solution was collected and structured to determine 2 '-, 7-bis (triethylsilyl) -10-diacetyl-paclitaxel (2'-, 7-bis (triethylsilyl) -10- It was confirmed that deacetyl-paclitaxel (Intermediate I) was produced.

이후 2.2 ml 의 Ac₂O (23.3 mmol) 를 가하여 2시간 교반 후, HPLC 로 반응 종료를 확인하고 10 ml 의 DCM 을 가하여 0℃로 냉각하였다. 종료된 반응액 중의 샘플을 채취하여 구조결정을 한 결과 2’-,7-비스(트리에틸실릴)-파클리탁셀(2’-,7-bis(triethylsilyl)-paclitaxel; 중간체 Ⅱ)이 생성되었음을 확인하였다.Thereafter, 2.2 ml of Ac ₂ O (23.3 mmol) was added thereto, followed by stirring for 2 hours. The reaction was confirmed by HPLC, and 10 ml of DCM was added thereto and cooled to 0 ° C. Samples in the finished reaction solution were sampled to confirm that 2 '-, 7-bis (triethylsilyl) -paclitaxel (2'-, 7-bis (triethylsilyl) -paclitaxel; Intermediate II) was produced. .

별도의 용기에 20 ml 의 conc. HCl 과 40 ml 의 메탄올을 혼합한 후, 이 염산 혼합액을 반응액에 천천히 적가하였다. 이때 반응액의 온도는 0℃로 유지하였다. 염산 혼합액의 투입 완료 후, 반응액의 온도를 5℃로 유지하면서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후 TLC를 통해 반응 종료를 확인하고, 반응 완료 후, 반응액에 50 ml DCM, 및 50 ml 의 증류수를 가하여 층분리를 시킨 후, DCM 층을 취하였다. 수층에 다시 50 ml 의 DCM 을 가한 후 다시 한번 추출을 하였다. 얻어진 DCM 층을 모아서 sat. NaCl(50ml)로 2회 세척한 후, MgSO₄ (6g) 로 건조, 여과 하여 농축하였다. In a separate container 20 ml of conc. After mixing HCl and 40 ml of methanol, the hydrochloric acid mixture was slowly added dropwise to the reaction solution. At this time, the temperature of the reaction solution was maintained at 0 ℃. After the addition of the hydrochloric acid mixed solution, the reaction solution was stirred for 1 hour while maintaining the temperature at 5 ° C. After 1 hour, the reaction was completed by TLC. After completion of the reaction, 50 ml DCM and 50 ml of distilled water were added to the reaction solution to separate the layers, and a DCM layer was taken. 50 ml of DCM was added to the aqueous layer and extracted again. The obtained DCM layer was collected and sat. Washed twice with NaCl (50 ml), dried over MgSO ₄ (6 g), filtered and concentrated.

상기의 농축액에 30 ml 의 IPA 를 가하여 용해시키고 여기에 300 ml 의 헥산을 천천히 가하여 파크리탁셀의 침전을 형성하였다. 실온에서 1시간 교반 후, 여과, 건조하여 백색의 파크리탁셀을 함유하는 고체를 수득하였으며, 헥산:에틸아세테이트 (1:1의 부피비)을 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 파클리탁셀 (6.5g) 을 84% (96.8% 의 HPLC 면적) 의 수율로 수득하였다. 상기 각 단계별 중간체 Ⅰ, Ⅱ, 및 최종생성물인 파클리탁셀의 특성을 ¹H NMR 및 ¹³C NMR로 규명하였으며, 구체적으로 각 스텝의 반응 종료 확인 후, 반응액 중의 샘플을 소량으로 채취하여 prep-TLC (조건: hex/EA=6/1) 를 이용해 분리 정제한 후 구조결정 하여 그 결과를 하기에 나타냈다.
30 ml of IPA was added and dissolved in the concentrate, and 300 ml of hexane was slowly added thereto to form a precipitate of paclitaxel. After stirring for 1 hour at room temperature, the mixture was filtered and dried to give a solid containing white paclitaxel, which was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (volume ratio of 1: 1) to obtain paclitaxel (6.5 g). Obtained in a yield of 84% (96.8% HPLC area). The characteristics of the intermediates I, II, and final product, paclitaxel, were characterized by ¹ H NMR and ¹³ C NMR. Specifically, after confirming the completion of the reaction of each step, a small amount of the sample in the reaction solution was taken to prepare the prep-TLC ( Condition: Hex / EA = 6/1) was used to isolate and purify the structure, and the results are shown below.

<중간체 Ⅰ: 2’-,7-비스(트리에틸실릴)-10-디아세틸-파클리탁셀><Intermediate I: 2 '-, 7-bis (triethylsilyl) -10-diacetyl-paclitaxel>

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 8.12 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.59 (m, 1H), 7.53-7.48 (m, 3H), 7.41-7.26 (m, 7H), 7.14 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.31 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.69 (dd, J =8.8, 2.0 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 5.11 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 4.70 (dd, J = 6.0, 1.6 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 10.8, 6.8 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.89 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.47 (m, 1H), 2.37 (m, 1H), 1.96 (s, 3H), 1.95 (m, 1H), 1.21 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 0.94 (m, 9H), 0.82 (m, 9H), 0.55 (m, 6H), 0.48 (m, 6H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) 209.99, 171.64, 170.37, 167.16, 167.07, 138.64, 138.31, 136.18, 134.18, 133.78, 131.91, 130.37, 129.35, 128.90, 128.83, 128.80, 128.09, 127.21, 126.62, 84.43, 81.16, 79.10, 76.75, 75.14, 75.01, 74.17, 72.96, 71.65, 57.87, 55.88, 46.57, 43.36, 37.37, 36.05, 26.79, 23.21, 21.14, 14.31, 10.30, 6.93, 6.69, 5.31, 4.49; LRMS (ESI) m/z 1062.6 (M+Na)⁺.
¹ H NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) 8.12 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.76 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.59 (m, 1H), 7.53-7.48 (m, 3H), 7.41-7.26 (m, 7H), 7.14 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.31 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.69 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 5.66 (d , J = 7.2 Hz, 1H), 5.11 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 7.6, 1.6 Hz, 1H), 4.70 (dd, J = 6.0, 1.6 Hz, 1H), 4.39 (dd, J = 10.8, 6.8 Hz, 1H), 4.32 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.29 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.22 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.89 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.56 (s, 3H), 2.47 (m, 1H), 2.37 (m, 1H), 1.96 (s, 3H), 1.95 (m, 1H), 1.21 (s, 3H), 1.09 (s, 3H), 0.94 (m, 9H), 0.82 (m, 9H), 0.55 (m, 6H), 0.48 (m, 6H); ¹³ C NMR (100 MHz, CDCl ₃ ) 209.99, 171.64, 170.37, 167.16, 167.07, 138.64, 138.31, 136.18, 134.18, 133.78, 131.91, 130.37, 129.35, 128.90, 128.83, 128.80, 128.09, 127.21, 126.62, 126.62 81.16, 79.10, 76.75, 75.14, 75.01, 74.17, 72.96, 71.65, 57.87, 55.88, 46.57, 43.36, 37.37, 36.05, 26.79, 23.21, 21.14, 14.31, 10.30, 6.93, 6.69, 5.31, 4.49; LRMS (ESI) m / z 10 62.6 (M + Na) ⁺ .

<중간체 Ⅱ: 2’-,7-비스(트리에틸실릴)-파클리탁셀><Intermediate II: 2 '-, 7-bis (triethylsilyl) -paclitaxel>

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 8.12 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.59 (m, 1H), 7.52-7.46 (m, 3H), 7.41-7.27 (m, 3H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.25 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz, 1H), 5.70 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 7.6 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.70 (dd, J = 6.0, 1.6 Hz, 1H), 4.48 (dd, J = 10.8, 6.8 Hz, 1H), 4.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.83 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.52 (m, 1H), 2.40 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 2.12 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.90 (m, 1H), 1.22 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 0.93 (m, 9H), 0.81 (m, 9H), 0.61-0.57 (m, 6H), 0.49-0.42 (m, 6H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) 201.87, 171.73, 170.24, 169.47, 167.18, 167.07, 140.33, 138.56, 134.19, 133.80, 133.79, 131.90, 130.37, 129.33, 128.87, 128.82, 128.80, 128.10, 127.19, 126.61, 84.38, 81.27, 78.96, 76.69, 75.12, 75.05, 74.96, 72.36, 71.57, 58.52, 55.85, 46.80, 43.45, 37.35, 35.68, 26.69, 23.51, 21.61, 21.04, 14.33, 10.26, 6.91, 6.68, 5.42, 4.49; LRMS (ESI) 1104.4 (M+Na)⁺.
¹ H NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) 8.12 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.59 (m, 1H), 7.52-7.46 (m, 3H), 7.41-7.27 (m, 3H), 7.12 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.45 (s, 1H), 6.25 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 8.8, 2.0 Hz , 1H), 5.70 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 4.95 (dd, J = 7.6 Hz, 1.6 Hz, 1H), 4.70 (dd, J = 6.0, 1.6 Hz, 1H), 4.48 (dd, J = 10.8, 6.8 Hz, 1H), 4.31 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.20 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 3.83 (d, J = 7.2 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H ), 2.52 (m, 1H), 2.40 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 2.17 (s, 3H), 2.12 (m, 1H), 2.02 (s, 3H), 1.90 (m, 1H) , 1.22 (s, 3H), 1.18 (s, 3H), 0.93 (m, 9H), 0.81 (m, 9H), 0.61-0.57 (m, 6H), 0.49-0.42 (m, 6H); ¹³ C NMR (100 MHz, CDCl ₃ ) 201.87, 171.73, 170.24, 169.47, 167.18, 167.07, 140.33, 138.56, 134.19, 133.80, 133.79, 131.90, 130.37, 129.33, 128.87, 128.82, 128.80, 128.10, 126.61. 84.38, 81.27, 78.96, 76.69, 75.12, 75.05, 74.96, 72.36, 71.57, 58.52, 55.85, 46.80, 43.45, 37.35, 35.68, 26.69, 23.51, 21.61, 21.04, 14.33, 10.26, 6.91, 6.68, 5.42, 4.49; LRMS (ESI) 1104.4 (M + Na) ⁺ .

<최종생성물: Final product: 파클리탁셀Paclitaxel >>

¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) 8.11 (m, 2H), 7.73 (m, 2H), 7.43 (m, 5H), 7.36 (m, 5H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.27 (s, 1H), 6.21 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 6.96 Hz, 1H), 4.93 (dd, J = 9.84, 2.16 Hz, 1H), 4.78 (d, J = 2.92 Hz, 1H), 4.38 (dd, J = 10.62 Hz, 6.6 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 8.44 Hz, 1H), 3.78 (dd, J = 6.96, 1.0 Hz, 1H), 2.54 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.29 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.88 (m, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.66 (s, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.12 (s, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) 203.7, 172.8, 171.3, 170.5, 167.3, 167.0, 142.0, 138.1, 133.7, 133.6, 133.2, 132.0, 130.3, 129.3, 129.0, 128.8, 128.7, 128.4, 127.2, 127.1, 84.5, 81.2, 79.0, 76.6, 75.7, 75.1, 73.3, 72.3, 72.2, 58.6, 55.2, 45.8, 43.3, 35.8, 35.7, 26.9, 22.7, 21.9, 20.9, 14.9, 9.7; LRMS (ESI) 876.32 (M+Na)⁺.
¹ H NMR (400 MHz, CDCl ₃ ) 8.11 (m, 2H), 7.73 (m, 2H), 7.43 (m, 5H), 7.36 (m, 5H), 7.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.27 (s, 1H), 6.21 (t, J = 8.8 Hz, 1H), 5.77 (dd, J = 8.8 Hz, 2.5 Hz, 1H), 5.66 (d, J = 6.96 Hz, 1H), 4.93 (dd, J = 9.84, 2.16 Hz, 1H), 4.78 (d, J = 2.92 Hz, 1H), 4.38 (dd, J = 10.62 Hz, 6.6 Hz, 1H), 4.28 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.18 (d, J = 8.44 Hz, 1H), 3.78 (dd, J = 6.96, 1.0 Hz, 1H), 2.54 (m, 1H), 2.37 (s, 3H), 2.29 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.88 (m, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.66 (s, 3H), 1.21 (s, 3H), 1.12 (s, 3H); ¹³ C NMR (100 MHz, CDCl ₃ ) 203.7, 172.8, 171.3, 170.5, 167.3, 167.0, 142.0, 138.1, 133.7, 133.6, 133.2, 132.0, 130.3, 129.3, 129.0, 128.8, 128.7, 128.4, 127.2, 127.1, 84.5, 81.2, 79.0, 76.6, 75.7, 75.1, 73.3, 72.3, 72.2, 58.6, 55.2, 45.8, 43.3, 35.8, 35.7, 26.9, 22.7, 21.9, 20.9, 14.9, 9.7; LRMS (ESI) 876.32 (M + Na) ⁺ .

실시예Example 2. 2.

7.35 g 의 10-DAP (9.95 mmol) 를 10 ml 의 피리딘 및 10 ml 의 DCM 혼합액에 용해시켰다. 여기에 10 ml 의 TESCl (59.6 mmol)을 가한 후, 실온에서 20 시간 교반하였다. 20 시간 경과 후, TLC 로 반응 종료를 확인하고 2.2 ml 의 Ac₂O (23.3 mmol) 를 가한 후 2시간 교반하였다. 2시간 교반 후, HPLC 로 반응 종료를 확인하고 10 ml 의 DCM 을 가하여 0 ℃로 냉각하였다. 별도의 용기에 20 ml 의 conc. HCl 과 40 ml 의 메탄올을 혼합한 후, 이 염산 혼합액을 반응액에 천천히 적가하였다. 이 때 반응액의 온도는 0℃로 유지하였다. 투입 완료 후, 반응액의 온도를 5℃ 로 유지하면서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후 TLC 를 이용하여 반응이 종료 되었음을 확인하고, 반응 완료 후, 반응액에 50 ml DCM, 50 ml 의 증류수를 가하여 층분리를 시킨 후, DCM 층을 취하였다. 수층에 다시 50 ml 의 DCM 을 가한 후 다시 한번 추출을 하였다. 얻어진 DCM 층을 모아서 sat. NaCl (50ml)로 2회 세척한 후, MgSO₄ (6g)로 건조, 여과 하여 농축하였다. 7.35 g of 10-DAP (9.95 mmol) was dissolved in 10 ml of pyridine and 10 ml of DCM mixture. 10 ml of TESCl (59.6 mmol) was added thereto, followed by stirring at room temperature for 20 hours. After 20 hours, the reaction was completed by TLC, and 2.2 ml of Ac ₂ O (23.3 mmol) was added thereto, followed by stirring for 2 hours. After stirring for 2 hours, the completion of reaction was confirmed by HPLC, and 10 ml of DCM was added and cooled to 0 ° C. In a separate container 20 ml of conc. After mixing HCl and 40 ml of methanol, the hydrochloric acid mixture was slowly added dropwise to the reaction solution. At this time, the temperature of the reaction solution was maintained at 0 ° C. After the addition was completed, the reaction solution was stirred for 1 hour while maintaining the temperature at 5 ° C. After 1 hour, it was confirmed that the reaction was completed using TLC. After completion of the reaction, 50 ml DCM and 50 ml of distilled water were added to the reaction solution to separate the layers, and a DCM layer was taken. 50 ml of DCM was added to the aqueous layer and extracted again. The obtained DCM layer was collected and sat. After washing twice with NaCl (50ml), dried over MgSO ₄ (6g), filtered and concentrated.

상기의 농축액에 30 ml 의 메탄올을 가하여 용해시키고 여기에 300 ml 의 포화 염화나트륨 수용액을 천천히 가하여 파크리탁셀의 침전을 형성하였다. 실온에서 1시간 교반 후, 여과하고 얻어진 침전을 100 ml 의 증류수로 2회 세척한 후, 건조하여 백색의 파크리탁셀을 함유하는 고체를 수득하였다. 이 고체를 헥산:에틸아세테이트 (1:1)을 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 파클리탁셀 (6.5g) 을 84% 의 수율 (97.2% 의 HPLC 면적)로 수득하였다. 각 반응 스텝의 생성물은 실시예 1에서와 같은 NMR 결과로 상동성을 확인하였다.
30 ml of methanol was added to the concentrated solution to dissolve it, and 300 ml of saturated aqueous sodium chloride solution was slowly added thereto to form a precipitate of paclitaxel. After stirring for 1 hour at room temperature, the resultant was filtered and washed twice with 100 ml of distilled water, and then dried to give a solid containing white paclitaxel. This solid was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (1: 1) to give paclitaxel (6.5 g) in 84% yield (97.2% HPLC area). The product of each reaction step confirmed homology by the same NMR result as in Example 1.

실시예Example 3 3

7.35 g 의 10-DAP (9.95 mmol) 를 10 ml 의 피리딘 및 10 ml 의 EA 혼합액에 용해시켰다. 여기에 10 ml 의 TESCl (59.6 mmol)을 가한 후, 실온에서 20 시간 교반하였다. 20 시간 경과 후, TLC 로 반응 종료를 확인하고 2.2 ml 의 Ac₂O (23.3 mmol) 를 가한 후 2 시간 교반하였다. 2 시간 교반 후, HPLC 로 반응 종료를 확인하고 10 ml 의 EA 를 가하고 0 ℃로 냉각하였다. 별도의 용기에 20 ml 의 conc. HCl 과 40 ml 의 에탄올을 혼합한 후, 이 염산 혼합액을 반응액에 천천히 적가하였다. 이 때 반응액의 온도는 0 ℃로 유지하였다. 염산 혼합액의 투입 완료 후, 반응액의 온도를 5 ℃ 로 유지하면서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후 TLC 를 이용하여 반응이 종료 되었음을 확인하고, 반응 완료 후 반응액에 50 ml EA, 50 ml 의 증류수를 가하여 층분리를 시킨 후, EA 층을 취하였다. 수층에 다시 50 ml 의 EA 를 가한 후 다시 한번 추출을 하였다. 얻어진 EA 층을 모아서 sat. NaCl (50ml)로 2회 세척한 후, MgSO₄ (6g) 로 건조, 여과 하여 농축하였다. 7.35 g of 10-DAP (9.95 mmol) was dissolved in 10 ml of pyridine and 10 ml of EA mixture. 10 ml of TESCl (59.6 mmol) was added thereto, followed by stirring at room temperature for 20 hours. After 20 hours, the reaction was completed by TLC, and 2.2 ml of Ac ₂ O (23.3 mmol) was added thereto, followed by stirring for 2 hours. After stirring for 2 hours, reaction completion was confirmed by HPLC, and 10 ml of EA was added and cooled to 0 ° C. In a separate container 20 ml of conc. After mixing HCl and 40 ml of ethanol, this hydrochloric acid mixture was slowly added dropwise to the reaction solution. At this time, the temperature of the reaction solution was maintained at 0 ° C. After the addition of the hydrochloric acid mixed solution, the reaction solution was stirred for 1 hour while maintaining the temperature at 5 ° C. After 1 hour, it was confirmed that the reaction was completed using TLC. After completion of the reaction, 50 ml EA and 50 ml of distilled water were added to the reaction solution to separate the layers, and an EA layer was taken. 50 ml of EA was added to the aqueous layer and extracted again. The obtained EA layer was collected and sat. Washed twice with NaCl (50 ml), dried over MgSO ₄ (6 g), filtered and concentrated.

상기의 농축액을 200 ml 의 메탄올에 용해 시킨 후, 100 ml 의 헥산을 가하여 추출하였다. 층분리 후 헥산층을 버리고 메탄올에 다시 한번 100 ml 의 헥산을 가하여 추출한 후 메탄올 층을 취하여 농축하는 방법을 통해 잔류 시약을 제거하였다. 이후 메탄올층을 취하여 농축하였다. 추가 건조 후 백색의 파크리탁셀을 함유하는 고체를 수득하였다. 이 고체는 헥산:에틸아세테이트 (1:1)을 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 파클리탁셀 (6.3g) 을 82% 의 수율 (97.8% HPLC 면적)로 수득하였다. 각 반응 스텝의 생성물은 실시예 1에서와 같은 NMR 결과로 상동성을 확인하였다.
The concentrated solution was dissolved in 200 ml of methanol, and then extracted by adding 100 ml of hexane. After separation of the layers, the hexane layer was discarded, and 100 ml of hexane was extracted and extracted once again to methanol, and the remaining reagents were removed by taking a methanol layer and concentrating. Then methanol layer was taken and concentrated. After further drying a white solid containing paclitaxel was obtained. This solid was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (1: 1) to give paclitaxel (6.3 g) in 82% yield (97.8% HPLC area). The product of each reaction step confirmed homology by the same NMR result as in Example 1.

실시예Example 4 4

73.5 g 의 10-DAP (99.5 mmol) 를 500 ml 의 DCM 에 용해시켰다. 여기에 100 g의 DMAP (818.5 mmol) 및 100 ml 의 TESCl (596 mmol)을 가한 후, 실온에서 1 시간 교반하였다. 1 시간 경과 후, TLC 로 반응 종료를 확인하고 13 ml 의 Ac₂O (137 mmol) 를 가한 후 1 시간 교반하였다. 1 시간 교반 후, HPLC 로 반응 종료를 확인하고 반응액을 감압 농축하였다. 위의 농축액에 400 ml 의 메탄올을 가한 후 0 ℃ 로 냉각하였다. 별도의 용기에 200 ml 의 conc. HCl 과 400 ml 의 메탄올을 혼합한 후, 이 염산 혼합액을 반응액에 천천히 적가하였다. 이 때 반응액의 온도는 0℃ 로 유지하였다. 투입 완료 후, 반응액의 온도를 5 ℃ 로 유지하면서 1시간 동안 교반하였다. 1시간 후 TLC 를 이용하여 반응이 종료 되었음을 확인하고 반응 완료 후, 반응액에 500 ml DCM, 500 ml 의 증류수를 가하여 층분리를 시킨 후, DCM 층을 취하였다. 수층에 다시 500 ml 의 DCM 을 가한 후 다시 한번 추출을 하였다. 얻어진 DCM 층을 모아서 500 ml 의 5%(w/v) NaCl 수용액으로 세척하였다. DCM 층을 MgSO₄(60g)로 건조한 후, 여과 하여 농축하였다. 73.5 g of 10-DAP (99.5 mmol) was dissolved in 500 ml of DCM. 100 g of DMAP (818.5 mmol) and 100 ml of TESCl (596 mmol) were added thereto, followed by stirring at room temperature for 1 hour. After 1 hour, the reaction was completed by TLC, and 13 ml of Ac ₂ O (137 mmol) was added thereto, followed by stirring for 1 hour. After stirring for 1 hour, reaction completion was confirmed by HPLC, and the reaction solution was concentrated under reduced pressure. 400 ml of methanol was added to the above concentrate, followed by cooling to 0 ° C. In a separate container 200 ml of conc. After mixing HCl and 400 ml of methanol, this hydrochloric acid mixture was slowly added dropwise to the reaction solution. At this time, the temperature of the reaction liquid was kept at 0 degreeC. After the addition was completed, the reaction solution was stirred for 1 hour while maintaining the temperature at 5 ° C. After 1 hour, it was confirmed that the reaction was completed by using TLC. After completion of the reaction, 500 ml DCM and 500 ml of distilled water were added to the reaction solution to separate the layers, and a DCM layer was taken. 500 ml of DCM was added to the aqueous layer and extracted again. The obtained DCM layer was collected and washed with 500 ml of 5% (w / v) NaCl aqueous solution. The DCM layer was dried over MgSO ₄ (60 g), filtered and concentrated.

상기의 농축액에 500 ml 의 DCM를 가하여 용해시켰다. 이 용해시킨 용액을 4 ℃로 냉각시킨 헥산 2.5 L 에 10 분에 걸쳐 가하여 파크리탁셀의 침전을 형성하였다. 상기 침전 혼합액을 10 ℃에서 30분 추가로 교반한 후, 침전물을 여과하여, 40℃ 드라이오븐 내에서 건조하여 백색의 파크리탁셀을 함유하는 고체를 수득하였다. 이 고체는 헥산:에틸아세테이트 (1:1)을 사용하는 실리카겔 크로마토그래피로 정제하여 파클리탁셀 (7.4 g) 을 95% 의 수율 (97.5% HPLC 면적)로 수득하였다. 각 반응 스텝의 생성물은 실시예 1에서와 같은 NMR 결과로 상동성을 확인하였다.
500 ml of DCM was added to the concentrate to dissolve it. This dissolved solution was added to 2.5 L of hexane cooled to 4 ° C. over 10 minutes to form a precipitate of paclitaxel. The precipitate mixture was further stirred at 10 ° C. for 30 minutes, and then the precipitate was filtered and dried in a 40 ° C. dry oven to obtain a solid containing white paclitaxel. This solid was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (1: 1) to give paclitaxel (7.4 g) in 95% yield (97.5% HPLC area). The product of each reaction step confirmed homology by the same NMR result as in Example 1.

비교예Comparative Example 1. One.

874 g 의 10-DAP (1.077 mol), 331 g 의 DMAP 를 아세토나이트릴 5.5 L 에 녹이고 HMDS(1121 ml) 를 첨가하였다. 반응액을 상온에서 2시간 교반 후 반응액을 농축하였다. 농축한 반응물을 5.5 L 의 THF 에 녹이고, 무수아세트산 115 ml 를 첨가한 후 6시간 반응시켰다. 반응 종료 확인 후, 메탄올 4L 를 주입하고 0℃로 냉각하였다. 냉각이 완료된 후 4N HCl (3.3L) 을 약 한 시간에 걸쳐 천천히 적가하였다. 1시간 후 반응 종료 확인하고, 포화 NaCl (3.3L)과 DCM (12L) 을 이용하여 추출하고 수득된 DCM 층은 포화 NaHCO3 수용액 (4L)으로 씻어주었다. 이어서 DCM층을 MgSO₄ 로 건조한 후, 여과, 농축하여 크루드한 파클리탁셀 반합성 물질을 얻었다. 874 g of 10-DAP (1.077 mol), 331 g of DMAP was dissolved in 5.5 L of acetonitrile and HMDS (1121 ml) was added. After stirring the reaction solution at room temperature for 2 hours, the reaction solution was concentrated. The concentrated reaction product was dissolved in 5.5 L of THF, and 115 ml of acetic anhydride was added, followed by reaction for 6 hours. After confirming the reaction was completed, 4 L of methanol was injected and cooled to 0 ° C. After cooling was complete 4N HCl (3.3 L) was slowly added dropwise over about an hour. After 1 hour, the reaction was confirmed to be complete, extracted with saturated NaCl (3.3L) and DCM (12L), and the obtained DCM layer was washed with saturated NaHCO 3 aqueous solution (4L). The DCM layer was then dried over MgSO ₄ , filtered and concentrated to yield crude paclitaxel semisynthetic material.

얻어진 크루드한 파클리탁셀 반합성 물질을 실리카겔크로마토그래피 (DCM→DCM:MeOH=10)로 정제하여 파클리탁셀 400g (수율 43%, 93.2% HPLC 면적), 10-디아세틸파클리탁셀 150 g(수율 17%, 80.5% HPLC 면적), 파클리탁셀 2’-아세테이트(paclitaxel 2’-acetate) 100 g (수율 10%, 84.5% HPLC 면적)을 수득하였다[Rao, K. V.; Bhakuni, R. S.; Johnson, J.; Oruganti, R. S. J. Med . Chem. 1995, 38, 3411-3414 참조].
The obtained crude paclitaxel semisynthetic material was purified by silica gel chromatography (DCM → DCM: MeOH = 10) to give 400 g of paclitaxel (yield 43%, 93.2% HPLC area), 150 g of 10-diacetylpaclitaxel (yield 17%, 80.5%). HPLC area), and 100 g (yield 10%, 84.5% HPLC area) of paclitaxel 2'-acetate [Rao, KV; Bhakuni, RS; Johnson, J .; Oruganti, RS J. Med . Chem. 1995, 38, 3411-3414].

시험예Test Example 1.  One. 실시예Example 4 및  4 and 비교예Comparative Example 1에 따라 제조된  1 파클리탁셀의Paclitaxel 수율 및 순도 비교 Yield and Purity Comparison

상기 실시예 4 및 비교예 1의 방법에 따라 각각 제조된 파클리탁셀의 수율 및 순도와 부수물의 생성 여부 및 생성량을 확인하여 하기 표 2에 나타내었다[Rao, K. V.; Bhakuni, R. S.; Johnson, J.; Oruganti, R. S. J. Med. Chem. 1995, 38, 3411-3414 참조].The yield and purity of paclitaxel prepared according to the method of Example 4 and Comparative Example 1 were confirmed, respectively, and the production amount and the amount thereof are shown in Table 2 below [Rao, K. V .; Bhakuni, R. S .; Johnson, J .; Oruganti, R. S. J. Med. Chem. 1995, 38, 3411-3414].

구분/물질Category / Material 수율% [순도%]Yield% [Purity%] 파클리탁셀Paclitaxel 10-디아세틸파클리탁셀(회수)10-diacetylpaclitaxel (recovery) 파클리탁셀 2'-아세테이트Paclitaxel 2'-Acetate 비교예1Comparative Example 1 43% [93.2%]43% [93.2%] 17% [80.5%]17% [80.5%] 10% [84.5%]10% [84.5%] 실시예4Example 4 95% [97.5%]95% [97.5%] -- --

상기 표 2에 기재된 바와 같이, 비교예 1에 따라 파클리탁셀을 제조한 경우 얻어진 파클리탁셀의 수율은 43%에 불과하여 절반에도 미치지 못하였고, 반응 공정 중 보호기인 트리메틸실릴기의 탈보호로 인해 원치 않는 부수물인 파클리탁셀 2’-아세테이트가 10% 의 수율로 생성되었으며, 원료물질인 10-디아세틸파클리탁셀 또한 17%에 달하는 수율로 회수되었다. 상기 회수된 원료인 10-디아세틸파클리탁셀은 미반응 물질이 아닌, 아세틸화 과정중 불안정한 트리메틸실릴(TMS)기가 탈보호 됨으로써 생성된 것으로 보여지며, 실제로 합성 중간체인 2’-, 7-비스(트리메틸실릴)-10-디아세틸파클리탁셀(2’-, 7-bis(trimethylsilyl)-10-deacetylpaclitaxel)을 실온에서 공기 중에 방치 하였을 때에 보호기인 TMS기가 서서히 탈보호 되는 것을 관측 할 수 있었다. As shown in Table 2, when paclitaxel was prepared according to Comparative Example 1, the yield of paclitaxel was only 43%, which was less than half, and was unwanted due to deprotection of the trimethylsilyl group as a protecting group during the reaction process. Paclitaxel 2'-acetate, a water, was produced in a yield of 10%, and raw material 10-diacetylpaclitaxel was also recovered in a yield of 17%. The recovered raw material 10-diacetylpaclitaxel, which is not an unreacted substance, appears to be produced by deprotection of an unstable trimethylsilyl (TMS) group during the acetylation process, and is actually a synthetic intermediate 2'-, 7-bis (trimethyl When silyl) -10-diacetylpaclitaxel (2'-, 7-bis (trimethylsilyl) -10-deacetylpaclitaxel) was left in the air at room temperature, the TMS group, which is a protecting group, was gradually deprotected.

반면 실시예 4에 따라 파클리탁셀을 제조한 경우 얻어진 파클리탁셀의 수율은 비교예 1에 따른 파클리탁셀의 수율과 비교하여 2배 이상에 달하는 현저히 높은 수율로 파클리탁셀을 얻을 수 있음을 확인할 수 있었으며, 그 외 부수물인 파클리탁셀 2’-아세테이트 또는 원료물질인 10-디아세틸파클리탁셀은 전혀 생성되지 않아 매우 효율적으로 파클리탁셀을 제조할 수 있음을 확인할 수 있었다.뿐만 아니라 제조된 파클리탁셀의 순도 또한 97.5%로 나타나 비교예 1에 따라 얻어진 파클리탁셀의 순도인 93.2%에 비해 월등히 높은 순도를 갖는 파클리탁셀이 제조됨을 확인할 수 있었다. On the other hand, when the paclitaxel was prepared according to Example 4, the yield of paclitaxel obtained was significantly higher than that of paclitaxel according to Comparative Example 1, and it was confirmed that the paclitaxel can be obtained with a significantly higher yield. It was confirmed that paclitaxel 2'-acetate or 10-diacetyl paclitaxel as a raw material could not be produced at all, thereby producing paclitaxel very efficiently. Furthermore, the purity of the prepared paclitaxel was also 97.5%, according to Comparative Example 1. It was confirmed that paclitaxel having a significantly higher purity than 93.2% of the obtained paclitaxel was produced.

이와 같이, 본 발명의 제조방법은 고순도의 파클리탁셀을 고수율로 제조할 수 있으므로, 산업적인 대량 합성 시스템에 매우 유용하게 적용될 수 있음을 알 수 있다.
As such, it can be seen that the manufacturing method of the present invention can be produced in high yield of paclitaxel with high yield, and thus can be very usefully applied to industrial mass synthesis system.

Claims (19)

1) 10-디아세틸파클리탁셀과 실릴화제를 반응시켜 10-디아세틸파클리탁셀의 2’-, 7- 위치의 히드록시기를 실릴화된 라디칼로 보호하는 단계;
2) 10- 위치의 히드록시기를 아세틸화하는 단계; 및
3) 상기 실릴화된 라디칼로부터 2’-, 7- 위치의 히드록시기를 탈보호하는 단계
를 포함하며 상기 1) 내지 3) 단계는 단일 용기 반응으로 이루어지는 것인,
파클리탁셀의 제조방법.
1) reacting 10-diacetylpaclitaxel with a silylating agent to protect the hydroxyl groups at the 2'-, 7-positions of 10-diacetylpaclitaxel with silylated radicals;
2) acetylating the hydroxy group at the 10-position; And
3) deprotecting the hydroxyl group at the 2'-, 7- position from the silylated radical
It includes and wherein steps 1) to 3) consists of a single vessel reaction,
Method for preparing paclitaxel.
제1항에 있어서,
상기 실릴화된 라디칼은 트리알킬실릴, 디알킬아릴실릴, 알킬디아릴실릴 및 트리아릴실릴로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 파클리탁셀의 제조방법.
The method of claim 1,
Wherein said silylated radical is at least one selected from the group consisting of trialkylsilyl, dialkylarylsilyl, alkyldiarylsilyl and triarylsilyl.
제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 1) 단계는 10-디아세틸파클리탁셀 1몰 당 실릴화제 3 내지 10 몰을 반응시키는 것인 파클리탁셀의 제조방법.
3. The method according to claim 1 or 2,
Step 1) is a method for producing paclitaxel to react 3 to 10 moles of silylating agent per 1 mole of 10-diacetyl paclitaxel.
제1항에 있어서,
상기 1) 단계는 염기성 유기용매 또는 비활성 유기용매와 염기의 혼합 반응액 내에서 수행하는 것인 파클리탁셀의 제조방법.
The method of claim 1,
Step 1) is a method for producing paclitaxel which is carried out in a reaction mixture of a basic organic solvent or an inert organic solvent and a base.
제4항에 있어서,
상기 비활성 유기용매는 톨루엔, 테트라히드로푸란, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 에틸 아세테이트, 또는 클로로포름이고,
상기 염기는 피리딘, 디메틸아미노피리딘, 피페리딘, 및 트리에틸아민으로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인, 파클리탁셀의 제조방법.
5. The method of claim 4,
The inert organic solvent is toluene, tetrahydrofuran, dichloromethane, 1,2-dichloroethane, ethyl acetate, or chloroform,
The base is at least one selected from the group consisting of pyridine, dimethylaminopyridine, piperidine, and triethylamine, a method for producing paclitaxel.
제1항에 있어서,
상기 2) 단계는 무수아세트산 및 아세틸할라이드로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상의 아세틸화제를 사용하여 이루어지는 것인 파클리탁셀의 제조방법.
The method of claim 1,
Step 2) is a method for producing paclitaxel is made using at least one acetylating agent selected from the group consisting of acetic anhydride and acetyl halide.
제1항 또는 제6항에 있어서,
상기 아세틸화제는 10-디아세틸파클리탁셀 1몰 당 1.2 내지 5몰로 사용하는 것인 파클리탁셀의 제조방법.
7. The method according to claim 1 or 6,
The acetylating agent is a method for producing paclitaxel is used in 1.2 to 5 mol per mole of 10-diacetyl paclitaxel.
제1항에 있어서,
상기 3) 단계는 무기산 및 유기산으로 이루어진 군에서 선택된 1 종 이상의 산, 또는 상기 산과 유기용매의 혼합용매를 적가하여 수행하는 것인 파클리탁셀의 제조방법
The method of claim 1,
Step 3) is a method for producing paclitaxel is carried out by dropwise addition of one or more acids selected from the group consisting of inorganic and organic acids, or a mixed solvent of the acid and the organic solvent.
제8항에 있어서,
상기 유기용매는 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올인 파클리탁셀의 제조방법.
9. The method of claim 8,
The organic solvent is a method for producing paclitaxel which is a linear or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms.
제1항에 있어서,
4) 상기 탈보호 단계를 거쳐 제조된 파클리탁셀을 분리 및 정제하는 단계
를 더 포함하는 파클리탁셀의 제조방법.
The method of claim 1,
4) separating and purifying the paclitaxel prepared through the deprotection step
Method for producing paclitaxel further comprising.
제10항에 있어서,
상기 4) 단계의 분리는 물 또는 무기염의 수용액, 및 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올을 가하여 파클리탁셀을 침전 및 결정화하는 단계를 포함하여 이루어지는 것인 파클리탁셀의 제조방법.
11. The method of claim 10,
Separation of step 4) is a method of producing paclitaxel comprising the step of precipitating and crystallizing paclitaxel by adding an aqueous solution of water or inorganic salts, and a straight or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms.
제11항에 있어서,
상기 물 또는 무기염의 수용액, 및 탄소수 1 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올은 20 : 1 내지 4 : 1 부피비로 가하는 것인 파클리탁셀의 제조방법
12. The method of claim 11,
The aqueous solution of the water or inorganic salt, and a straight chain or branched alcohol having 1 to 4 carbon atoms is added in a volume ratio of 20: 1 to 4: 1 volume of the method for producing paclitaxel.
제10항에 있어서,
상기 4) 단계의 분리는 2종의 유기용매를 가하여 파클리탁셀을 침전 및 결정화하는 단계를 포함하여 이루어지는 것인 파클리탁셀의 제조방법.
11. The method of claim 10,
Separation of step 4) comprises the step of precipitating and crystallizing paclitaxel by adding two organic solvents.
제13항에 있어서,
상기 2종의 유기용매는 극성 유기용매 및 무극성 유기용매인 파클리탁셀의 제조방법.
14. The method of claim 13,
The two organic solvents are a polar organic solvent and a nonpolar organic solvent, a method for producing paclitaxel.
제14항에 있어서,
상기 극성 용매는 탄소수 2 내지 4의 직쇄 또는 분지형 알코올이고, 상기 무극성 용매는 헥산인 파클리탁셀의 제조방법.
15. The method of claim 14,
The polar solvent is a straight or branched alcohol having 2 to 4 carbon atoms, and the nonpolar solvent is hexane.
제14항에 있어서,
상기 극성 유기용매 및 무극성 유기용매는 1 : 3 내지 15의 부피비로 가하는 것인 파클리탁셀의 제조방법.
15. The method of claim 14,
The polar organic solvent and the non-polar organic solvent is a method of producing paclitaxel is added in a volume ratio of 1: 3 to 15.
제10항에 있어서,
상기 4) 단계의 분리는 서로 섞이지 않는 2종의 유기용매를 사용하여 파클리탁셀 내 잔류용매의 제거를 통해 고형의 파클리탁셀을 얻는 단계를 포함하여 이루어지는 것인 파클리탁셀의 제조방법.
11. The method of claim 10,
Separation of step 4) is a method for producing paclitaxel comprising the step of obtaining a solid paclitaxel through the removal of the residual solvent in paclitaxel using two organic solvents that are not mixed with each other.
제17항에 있어서,
상기 2종의 유기용매는 메탄올 및 아세토나이트릴 중 선택된 극성 유기용매; 및
탄소수 6 이상의 탄화수소 중 선택된 무극성 유기용매인 파클리탁셀의 제조방법.
18. The method of claim 17,
The two organic solvents include a polar organic solvent selected from methanol and acetonitrile; And
A process for producing paclitaxel, which is a nonpolar organic solvent selected from hydrocarbons having 6 or more carbon atoms.
제18항에 있어서,
상기 극성 유기용매 및 무극성 유기용매는 1: 0.1 내지 10 부피비로 사용하는 것인 파클리탁셀의 제조방법.
19. The method of claim 18,
The polar organic solvent and the non-polar organic solvent is a method of producing paclitaxel is used in 1: 0.1 to 10 volume ratio.

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