KR101334123B1 - Composition for diagnosis of small cell lung cancer and diagnosis kit of small cell lung cancer - Google Patents
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Abstract
본 발명은 소세포폐암의 조기 진단에 유용한 바이오마커로서 퀴혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1), 피브릴린-1(Fibrillin-1), 리포폴리사카라이드-반응 및 베이지-유사 앵커 단백질(Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein), 아포리포단백질 D(Apolipoprotein D), 세로트랜스페린(Serotransferrin), 칼리스타틴(Kallistatin), 혈장 칼리클레인(Plasma kallikrein), 루미칸(Lumican), 히스티딘-리치 당단백질(Histidine-rich glycoprotein), 알파-2-HS-당단백질(Alpha-2-HS-glycoprotein), 알파-1B-당단백질(Alpha-1B-glycoprotein) 및 아포리포단백질A-IV(Apolipoprotein A-IV)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질 또는 합토글로빈(Haptoglobin), 헤모펙신(Hemopexin), C4b-결합 단백질 알파 체인(C4b-binding protein alpha chain), 보체성분 C9(Complement component C9), CD5 유사 항원(CD5 antigen-like), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H2(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2), 혈청 아밀로이드 P 성분(Serum amyloid P component), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H4(Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), 합토글로빈 관련 단백질(Isoform 1 of Haptoglobin-related protein), 알파-1-안티키모트립신(ALPHA-1-antichymotrypsin) 및 알파-1-안티트립신(Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질을 제공한다. The present invention is a biomarker useful for the early diagnosis of small cell lung cancer. Serum paraoxonase 1, Fibrillin-1, lipopolysaccharide-response and beige-like anchor proteins (Isoform). 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein, Apolipoprotein D, Serotransferrin, Kallistatin, Plasma kallikrein, Lumican, Histidine- Hisidine-rich glycoprotein, alpha-2-HS-glycoprotein, alpha-1B-glycoprotein, and apolipoprotein A-IV (Apolipoprotein) A-IV) at least one protein selected from the group consisting of Haptoglobin (Haptoglobin), Hemopexin (C4b-binding protein alpha chain), Complement component C9 (Complement component C9), CD5 antigen-like, inter-alpha-trypsin suppression Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2, serum amyloid P component, Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4, sum Isoform 1 of Haptoglobin-related protein, ALPHA-1-antichymotrypsin and Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin Provide one or more proteins.
Description
본 발명은 소세포폐암 특이적인 단백질 마커를 포함하는 소세포폐암 진단용 조성물 및 이를 이용한 소세포폐암 진단 키트에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for diagnosing small cell lung cancer comprising a small cell lung cancer specific protein marker and a small cell lung cancer diagnostic kit using the same.
현대의학의 눈부신 발전에도 불구하고 암 발생 및 암으로 인한 사망은 증가하고 있어, 이의 진단 및 치료에 소모되는 개인 및 국가적·사회적인 손실 역시 지속적으로 증가하고 있다. 종합적인 암 관리를 통한 암발생, 암으로 인한 사망을 최소화하여 비용 부담을 감소시키기 위해서는 암의 조기 검진이 필요하며, 스크리닝의 개념에서 다수를 대상으로 쉽고 빠르게 암을 진단하여 암환자의 생존율을 증가시킬 수 있는 바이오 마커의 개발이 절실히 필요하다.Despite the remarkable advances in modern medicine, cancer incidence and mortality from cancer are on the rise, and the individual and national and social losses of diagnosis and treatment are also increasing. In order to reduce the burden of cancer by minimizing cancer occurrence and cancer death through comprehensive cancer management, early screening of cancer is required, and the survival rate of cancer patients is increased by easily and quickly diagnosing cancer in the concept of screening. There is an urgent need for the development of biomarkers that can be made.
폐암은 국·내외적으로 사망률 1위, 발병율 2~3위인 암으로, 진단 당시에 Ⅲ기 이상으로 진행된 상태로 진단되므로 생존율이 매우 낮은 편이다. 따라서, 폐암을 조기에 진단하는 것이 중요한데, 현재까지 혈액을 이용하여, 폐암을 조기에 진단할 수 있는 바이오마커가 개발되어 있지 않은 상황이다. Lung cancer is a cancer with a mortality rate of 1st and 2nd and 3rd incidences, both domestically and internationally, and is diagnosed as having advanced beyond stage III at the time of diagnosis. Therefore, it is important to diagnose lung cancer early, but until now, there is no biomarker developed for early diagnosis of lung cancer using blood.
폐암은 세포의 크기에 따라 소세포폐암(small cell lung cancer, SCLC)과 비소세포폐암(non-small cell lung cancer, NSCLC)으로 구분된다. 소세포폐암은 전체 폐암의 약 20%를 차지하며, 신경내분비(neuroendocrine) 유래의 암세포로서 전이가 매우 빠르며, 소세포폐암 환자의 예후는 좋지 않은 편이다. 소세포폐암 환자의 대부분이 진단시 이미 말기 환자로 판명되어 5년 생존율이 5~10% 정도에 불과하다. Lung cancer is classified into small cell lung cancer (SCLC) and non-small cell lung cancer (NSCLC) according to cell size. Small cell lung cancer accounts for about 20% of the total lung cancer, cancer cells derived from neuroendocrine (neuroendocrine) is very fast metastasis, the prognosis of patients with small cell lung cancer is poor. Most patients with small cell lung cancer have already been diagnosed as terminally diagnosed, and the 5-year survival rate is only 5-10%.
현재, 폐암을 진단하는 방법으로, 흉부 X-ray 촬영, 흉부 전산화 단층 촬영(CT), 자기공명영상(MRI), 기관지 내시경이 있으나, 흉부전산화 단층 촬영의 경우 폐암의 크기가 약 0.1㎝ 이상 되어야 측정가능하며, 기관지 내시경을 이용한 방법은 내시경이 기관지로 삽입되어 폐 내부를 직접 관찰할 수 있으나 폐 말단에 있는 종양을 관찰하기 어렵다.Currently, as a method of diagnosing lung cancer, chest X-ray, chest computed tomography (CT), magnetic resonance imaging (MRI), and bronchoscope are used. However, chest computed tomography should be about 0.1cm or more in size. It is measurable, and the method using a bronchoscopy can insert the endoscope into the bronchus and directly observe the inside of the lung, but it is difficult to observe the tumor at the end of the lung.
최근에는 폐암 진단 방법으로 프로테오믹스(proteomics) 기법과 바이오마커가 유용하게 사용되고 있다. 프로테오믹스는 복잡한 단백질들의 시료들로부터 글로벌 스크리닝(global screening)이 가능할 뿐만 아니라 변화된 단백질 발현의 정량적 증거(quantitative evidence)를 제공할 수 있으며, 변역 후 변형(PTM, post-translational modification)이 발생한 부위의 직접적인 동정(identification)을 연구할 수 있는 방법이다. 또한, 프로테오믹스의 연구는 선택적 스플라이싱(alternative splicing), 변역 후 변형 및 단백질 상호작용에 의한 역가변화에 대한 정보를 줄 수 있다. 이는 포스트게놈(post-genomics) 시대가 열린 후, 25,000개 정도의 유전체 연구에서 보다 질병상태의 다양하고 동적인 변화를 잘 표현해주는 단백질에 대해 연구할 수 있어, 바이오마커 발굴을 위한 방법으로 활발히 이용 및 개발되고 있다.Recently, proteomics techniques and biomarkers have been used as diagnostic methods for lung cancer. Proteomics not only enables global screening from samples of complex proteins, but also provides quantitative evidence of altered protein expression, and allows direct access to post-translational modifications (PTMs). It is a way to study identification. In addition, proteomics studies can provide information on potency changes due to alternative splicing, post-translational modifications, and protein interactions. After the post-genomics era, more than 25,000 genomes can be used to study proteins that express diverse and dynamic changes in disease states, which are actively used as biomarkers. And are being developed.
최근에는, MALDI-TOF에 결합된 2-DE 또는 LC-MS/MS에 결합된 2-DE, 고효율 웨스턴 블롯(high-throughput western blot)을 이용하여 폐암 환자와 정상인의 혈청 사이에서 다르게 발현되는 단백질을 발굴하려는 연구가 진행되고 있다. Recently, proteins expressed differently between lung cancer patients and normal human serum using 2-DE bound to MALDI-TOF or 2-DE bound to LC-MS / MS, high-throughput western blot Research is underway to find out.
현재 폐암 진단용 마커로는 뉴런-특이적 에놀라제(neuron-specific enolase, NSE), 태아성 암 항원(carcinoembryonic antigen, CEA) 및 시토케라틴 19-단편-뉴런(cytokeratin 19-fragments neuron, CYFRA21-1) 이 혈청 마커로서 알려져 있으나, 이들은 폐암에 대한 충분한 민감도와 특이성을 가지고 있지 못한 실정이며, 특히 소세포폐암 진단용으로 활용할 수 있는 바이오 마커는 현재까지 없다. 따라서, 혈액에서 간편하게 소세포폐암을 조기 진단하여 환자의 생존율을 증가시킬 수 있는 바이오마커의 개발의 필요성이 절실히 요구되고 있다.
Current diagnostic markers for lung cancer include neuron-specific enolase (NSE), carcinoembryonic antigen (CEA) and cytokeratin 19-fragments neuron (CYFRA21-1). Although these are known as serum markers, they do not have sufficient sensitivity and specificity for lung cancer, and there are no biomarkers that can be used for diagnosing small cell lung cancer. Therefore, there is an urgent need for the development of biomarkers that can easily diagnose small cell lung cancer in the blood and increase the survival rate of patients.
본 발명은 소세포폐암 특이적인 바이오마커를 발굴하여 소세포폐암을 빠르고 간편하며 정확하게 진단하고자 한다.
The present invention seeks to quickly and easily diagnose small cell lung cancer by discovering a specific biomarker for small cell lung cancer.
본 발명은 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1), 리포폴리사카라이드-반응 및 베이지-유사 앵커 단백질(Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein), 아포리포단백질 D(Apolipoprotein D), 세로트랜스페린(Serotransferrin), 칼리스타틴(Kallistatin), 혈장 칼리클레인(Plasma kallikrein), 루미칸(Lumican), 히스티딘-리치 당단백질(Histidine-rich glycoprotein), 알파-2-HS-당단백질(Alpha-2-HS-glycoprotein), 알파-1B-당단백질(Alpha-1B-glycoprotein) 및 아포리포단백질A-IV(Apolipoprotein A-IV)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 소세포폐암 진단용 조성물을 제공한다. The present invention relates to serum paraoxonase 1, lipopolysaccharide-response and beige-like anchor protein, apolipoprotein D, Serotransferrin, Kallistatin, Plasma kallikrein, Lumican, Histidine-rich glycoprotein, Alpha-2-HS-glycoprotein (Alpha-2) An antibody that specifically binds to at least one protein selected from the group consisting of -HS-glycoprotein), Alpha-1B-glycoprotein and Apolipoprotein A-IV. It provides a composition for diagnosing small cell lung cancer.
본 발명에서 상기 단백질은 푸코실화된 것을 특징으로 하며, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 발현이 감소하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the protein is characterized in that it is fucosylated, it is characterized in that the expression in the serum of small cell lung cancer patients compared to the serum of normal people.
본 발명에서, 상기 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질은 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 말기환자의 혈청에서 발현이 감소하나, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 말기환자의 혈청에서 푸코실화 정도는 증가하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1) protein is reduced in the serum of terminal patients with small cell lung cancer compared to the serum of normal people, but the degree of fucosylation in the serum of terminal patients with small cell lung cancer compared to the serum of normal people It is characterized by increasing.
본 발명은 합토글로빈(Haptoglobin), 헤모펙신(Hemopexin), C4b-결합 단백질 알파 체인(C4b-binding protein alpha chain), 보체성분 C9(Complement component C9), CD5 유사 항원(CD5 antigen-like), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H2(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2), 혈청 아밀로이드 P 성분(Serum amyloid P component), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H4(Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), 합토글로빈 관련 단백질(Isoform 1 of Haptoglobin-related protein), 알파-1-안티키모트립신(ALPHA-1-antichymotrypsin) 및 알파-1-안티트립신(Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 소세포폐암 진단용 조성물을 제공한다. Haptoglobin (Haptoglobin), hemopexin (Hemopexin), C4b-binding protein alpha chain (C4b-binding protein alpha chain), Complement component C9 (Complement component C9), CD5 antigen-like (CD5 antigen-like), Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2, Serum amyloid P component, Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), Isoform 1 of Haptoglobin-related protein, ALPHA-1-antichymotrypsin and Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin It provides a small cell lung cancer diagnostic composition comprising an antibody that specifically binds to at least one protein selected from the group consisting of.
본 발명에서 상기 단백질은 푸코실화된 것을 특징으로 하며, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 발현이 증가하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the protein is characterized in that it is fucosylated, it is characterized in that the expression in the serum of small cell lung cancer patients compared to the serum of normal people.
본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 하는 소세포폐암 진단용 키트를 제공한다. The present invention provides a kit for diagnosing small cell lung cancer using the composition as an active ingredient.
본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 하는 소세포폐암 진단용 마이크로 어레이를 제공한다. The present invention provides a microarray for diagnosing small cell lung cancer using the composition as an active ingredient.
본 발명은 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1), 리포폴리사카라이드-반응 및 베이지-유사 앵커 단백질(Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein), 아포리포단백질 D(Apolipoprotein D), 세로트랜스페린(Serotransferrin), 칼리스타틴(Kallistatin), 혈장 칼리클레인(Plasma kallikrein), 루미칸(Lumican), 히스티딘-리치 당단백질(Histidine-rich glycoprotein), 알파-2-HS-당단백질(Alpha-2-HS-glycoprotein), 알파-1B-당단백질(Alpha-1B-glycoprotein) 및 아포리포단백질A-IV(Apolipoprotein A-IV)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질을 인코딩하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함하는 소세포폐암 진단용 조성물을 제공한다. The present invention relates to serum paraoxonase 1, lipopolysaccharide-response and beige-like anchor protein, apolipoprotein D, Serotransferrin, Kallistatin, Plasma kallikrein, Lumican, Histidine-rich glycoprotein, Alpha-2-HS-glycoprotein (Alpha-2) Primers or probes specific for nucleic acids encoding one or more proteins selected from the group consisting of -HS-glycoprotein, Alpha-1B-glycoprotein and Apolipoprotein A-IV It provides a composition for diagnosing small cell lung cancer.
본 발명에서 상기 단백질은 푸코실화된 것을 특징으로 하며, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 발현이 감소하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the protein is characterized in that it is fucosylated, it is characterized in that the expression in the serum of small cell lung cancer patients compared to the serum of normal people.
본 발명에서, 상기 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질은 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 말기환자의 혈청에서 발현이 감소하나, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 말기환자의 혈청에서 푸코실화 정도는 증가하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1) protein is reduced in the serum of terminal patients with small cell lung cancer compared to the serum of normal people, but the degree of fucosylation in the serum of terminal patients with small cell lung cancer compared to the serum of normal people It is characterized by increasing.
본 발명은 합토글로빈(Haptoglobin), 헤모펙신(Hemopexin), C4b-결합 단백질 알파 체인(C4b-binding protein alpha chain), 보체성분 C9(Complement component C9), CD5 유사 항원(CD5 antigen-like), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H2(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2), 혈청 아밀로이드 P 성분(Serum amyloid P component), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H4(Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), 합토글로빈 관련 단백질(Isoform 1 of Haptoglobin-related protein), 알파-1-안티키모트립신(ALPHA-1-antichymotrypsin) 및 알파-1-안티트립신(Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질을 인코딩하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함하는 소세포폐암 진단용 조성물을 제공한다. Haptoglobin (Haptoglobin), hemopexin (Hemopexin), C4b-binding protein alpha chain (C4b-binding protein alpha chain), Complement component C9 (Complement component C9), CD5 antigen-like (CD5 antigen-like), Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2, Serum amyloid P component, Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), Isoform 1 of Haptoglobin-related protein, ALPHA-1-antichymotrypsin and Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin It provides a composition for diagnosing small cell lung cancer comprising a primer or probe specific for a nucleic acid encoding one or more proteins selected from the group consisting of.
본 발명에서 상기 단백질은 푸코실화된 것을 특징으로 하며, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 발현이 증가하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the protein is characterized in that it is fucosylated, it is characterized in that the expression in the serum of small cell lung cancer patients compared to the serum of normal people.
본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 하는 소세포폐암 진단용 키트를 제공한다. The present invention provides a kit for diagnosing small cell lung cancer using the composition as an active ingredient.
본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 하는 소세포폐암 진단용 마이크로 어레이를 제공한다. The present invention provides a microarray for diagnosing small cell lung cancer using the composition as an active ingredient.
본 발명은 소세포폐암 마커인 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1), 리포폴리사카라이드-반응 및 베이지-유사 앵커 단백질(Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein), 아포리포단백질 D(Apolipoprotein D), 세로트랜스페린(Serotransferrin), 칼리스타틴(Kallistatin), 혈장 칼리클레인(Plasma kallikrein), 루미칸(Lumican), 히스티딘-리치 당단백질(Histidine-rich glycoprotein), 알파-2-HS-당단백질(Alpha-2-HS-glycoprotein), 알파-1B-당단백질(Alpha-1B-glycoprotein) 및 아포리포단백질A-IV(Apolipoprotein A-IV)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 이용한 항원-항체 결합반응을 통해 생물학적 시료에서 상기 단백질로 이루어진 군에서 하나 이상의 단백질을 검출하는 방법을 제공한다. The present invention is a small cell lung cancer marker serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1), lipopolysaccharide-response and beige-like anchor protein (Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein), apolipoprotein D ( Apolipoprotein D), Serotransferrin, Kallistatin, Plasma kallikrein, Lumican, Histidine-rich glycoprotein, Alpha-2-HS-glycoprotein Specific binding to one or more proteins selected from the group consisting of Alpha-2-HS-glycoprotein, Alpha-1B-glycoprotein and Apolipoprotein A-IV. It provides a method for detecting one or more proteins in the group consisting of the protein in a biological sample through an antigen-antibody binding reaction using an antibody.
본 발명은 소세포폐암 마커인 합토글로빈(Haptoglobin), 헤모펙신(Hemopexin), C4b-결합 단백질 알파 체인(C4b-binding protein alpha chain), 보체성분 C9(Complement component C9), CD5 유사 항원(CD5 antigen-like), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H2(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2), 혈청 아밀로이드 P 성분(Serum amyloid P component), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H4(Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), 합토글로빈 관련 단백질(Isoform 1 of Haptoglobin-related protein), 알파-1-안티키모트립신(ALPHA-1-antichymotrypsin) 및 알파-1-안티트립신(Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 이용한 항원-항체 결합반응을 통해 생물학적 시료에서 상기 단백질로 이루어진 군에서 하나 이상의 단백질을 검출하는 방법을 제공한다. The present invention is a small cell lung cancer marker Haptoglobin (Haptoglobin), Hemopexin (C4b-binding protein alpha chain), Complement component C9 (Complement component C9), CD5 like antigen (CD5 antigen) -like), Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2, Serum amyloid P component, Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4 (Isoform 2 of Inter-alpha) -trypsin inhibitor heavy chain H4), isoform 1 of Haptoglobin-related protein, alpha-1-antichymotrypsin and alpha-1-antitrypsin (Isoform 1 of Alpha- 1-antitrypsin) provides a method for detecting one or more proteins from the group consisting of the protein in the biological sample through an antigen-antibody binding reaction using an antibody that specifically binds to one or more proteins selected from the group consisting of.
본 발명에서, 상기 생물학적 시료는 포유동물로부터 수득된 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담 및 소변으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 한다.
In the present invention, the biological sample is characterized in that at least one selected from the group consisting of tissues, cells, whole blood, serum, plasma, saliva, sputum and urine obtained from a mammal.
본 발명에 의해 소세포폐암의 조기 진단에 유용하게 쓰일 수 있는 민감성 및 특이성이 뛰어난 소세포폐암 진단용 조성물이 제공된다.
The present invention provides a composition for diagnosing small cell lung cancer excellent in sensitivity and specificity that can be usefully used for early diagnosis of small cell lung cancer.
도 1은 본 발명의 3개의 혈청 샘플군(정상인(Healthy, HE), 소세포폐암 초기환자(SCC-LD, LD), 소세포폐암 말기환자(SCC-ED, ED))에서 알부민과 IgG가 제거된 혈청 샘플의 SDS PAGE 겔 전기영동 결과(A), 푸코실화된 당단백질의 AAL 렉틴 블롯 결과(B) 및 푸코실화된 당단백질의 질량분석을 위한 쿠마씨 염색 결과(C)를 나타낸 것이다.
도 2는 본 발명의 3개의 혈청 샘플군(정상인(Healthy, HE), 소세포폐암 초기환자(SCC-LD, LD), 소세포폐암 말기환자(SCC-ED, ED))에서 농축 푸코실화된 단백질을 질량분석기로 비교분석하여 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질의 질량분석 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 소세포폐암에 특이적인 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질에 당사슬 제거 효소인 PNGase F를 처리하여 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질에 푸코스(fucose)를 포함하는 당사슬이 붙어 있는지를 확인한 것이다.
도 4는 혈청 샘플군(정상인의 혈청(Healthy, 29명), 소세포폐암 초기환자의 혈청(SCC-LD, 25명), 소세포폐암 말기환자의 혈청(SCC-ED, 29명))에서 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질의 발현정도를 웨스턴 블롯으로 관찰한 결과(A)와 이를 정량적으로 나타낸 덴시토메트리 측정 결과(B)를 나타낸 것이다.
도 5는 혈청 샘플군(정상인(Healthy, HE), 소세포폐암 초기환자(SCC-LD, LD), 소세포폐암 말기환자(SCC-ED, ED))에서 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질의 푸코실화 정도를 하이브리드 ELISA 방법으로 측정한 결과를 나타낸 것이다.
도 6은 혈청 샘플군(정상인(Healthy, HE), 소세포폐암 초기환자(SCC-LD, LD), 소세포폐암 말기환자(SCC-ED, ED))에서 웨스턴 블랏을 이용한 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질 레벨과 하이브리드 렉틴 ELISA를 이용한 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 푸코실화 레벨을 ROC curve를 이용하여 나타낸 것이다. 1 is albumin and IgG removed from the three serum sample group of the present invention (Healthy, HE, small cell lung cancer early patients (SCC-LD, LD), small cell lung cancer terminal patients (SCC-ED, ED)) SDS PAGE gel electrophoresis results of serum samples (A), AAL lectin blot results of fucosylated glycoproteins (B) and Coomassie staining results (C) for mass spectrometry of fucosylated glycoproteins.
FIG. 2 shows concentrated fucosylated proteins in three serum sample groups of the present invention (Healthy, HE, early stage small cell lung cancer (SCC-LD, LD), late stage small cell lung cancer (SCC-ED, ED)). Comparative analysis by mass spectrometry shows the results of mass spectrometry of serum paraoxonase 1 protein.
Figure 3 is a serum paraoxonase 1 (serum paraoxonase 1) protein specific to the small cell lung cancer of the present invention by treating the oligosaccharide-removing enzyme PNGase F to serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1) protein fucose (fucose) We checked whether sugar chain to include was included.
Figure 4 shows serum para in serum sample group (normal serum (Healthy, 29 patients), small cell lung cancer early patients serum (SCC-LD, 25), small cell lung cancer terminal patients serum (SCC-ED, 29)) Western blot expression of oxonase 1 (Serum paraoxonase 1) protein is observed (A) and quantitative densitometry measurement results (B) are shown.
FIG. 5 shows serum paraoxonase 1 protein in serum sample groups (Healthy, HE, early stage small cell lung cancer (SCC-LD, LD), late stage small cell lung cancer (SCC-ED, ED)). The result of measuring the degree of fucosylation of by hybrid ELISA method is shown.
FIG. 6 shows serum paraoxonase 1 using Western blot in serum sample group (Healthy, HE, early stage small cell lung cancer (SCC-LD, LD), late stage small cell lung cancer (SCC-ED, ED)). paraoxonase 1) Protein levels and serum paraoxonase 1 fucosylation levels using hybrid lectin ELISA are shown using the ROC curve.
본 발명은 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1), 리포폴리사카라이드-반응 및 베이지-유사 앵커 단백질(Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein), 아포리포단백질 D(Apolipoprotein D), 세로트랜스페린(Serotransferrin), 칼리스타틴(Kallistatin), 혈장 칼리클레인(Plasma kallikrein), 루미칸(Lumican), 히스티딘-리치 당단백질(Histidine-rich glycoprotein), 알파-2-HS-당단백질(Alpha-2-HS-glycoprotein), 알파-1B-당단백질(Alpha-1B-glycoprotein) 및 아포리포단백질A-IV(Apolipoprotein A-IV)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 소세포폐암 진단용 조성물을 제공한다. 바람직하게는 상기 소세포폐암 진단용 조성물은 상기 마커에 특이적으로 결합하는 항체를 유효성분으로 포함한다.The present invention relates to serum paraoxonase 1, lipopolysaccharide-response and beige-like anchor protein, apolipoprotein D, Serotransferrin, Kallistatin, Plasma kallikrein, Lumican, Histidine-rich glycoprotein, Alpha-2-HS-glycoprotein (Alpha-2) An antibody that specifically binds to at least one protein selected from the group consisting of -HS-glycoprotein), Alpha-1B-glycoprotein and Apolipoprotein A-IV. It provides a composition for diagnosing small cell lung cancer. Preferably the small cell lung cancer diagnostic composition comprises an antibody that specifically binds to the marker as an active ingredient.
본 발명에서 상기 단백질은 푸코실화된 것을 특징으로 하며, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 발현이 감소하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the protein is characterized in that it is fucosylated, it is characterized in that the expression in the serum of small cell lung cancer patients compared to the serum of normal people.
본 발명에서, 상기 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질은 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 말기환자의 혈청에서 발현이 감소하나, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 말기환자의 혈청에서 푸코실화 정도는 증가하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1) protein is reduced in the serum of terminal patients with small cell lung cancer compared to the serum of normal people, but the degree of fucosylation in the serum of terminal patients with small cell lung cancer compared to the serum of normal people It is characterized by increasing.
본 발명은 합토글로빈(Haptoglobin), 헤모펙신(Hemopexin), C4b-결합 단백질 알파 체인(C4b-binding protein alpha chain), 보체성분 C9(Complement component C9), CD5 유사 항원(CD5 antigen-like), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H2(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2), 혈청 아밀로이드 P 성분(Serum amyloid P component), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H4(Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), 합토글로빈 관련 단백질(Isoform 1 of Haptoglobin-related protein), 알파-1-안티키모트립신(ALPHA-1-antichymotrypsin) 및 알파-1-안티트립신(Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하는 소세포폐암 진단용 조성물을 제공한다. Haptoglobin (Haptoglobin), hemopexin (Hemopexin), C4b-binding protein alpha chain (C4b-binding protein alpha chain), Complement component C9 (Complement component C9), CD5 antigen-like (CD5 antigen-like), Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2, Serum amyloid P component, Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), Isoform 1 of Haptoglobin-related protein, ALPHA-1-antichymotrypsin and Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin It provides a small cell lung cancer diagnostic composition comprising an antibody that specifically binds to at least one protein selected from the group consisting of.
본 발명에서 상기 단백질은 푸코실화된 것을 특징으로 하며, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 발현이 증가하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the protein is characterized in that it is fucosylated, it is characterized in that the expression in the serum of small cell lung cancer patients compared to the serum of normal people.
본 발명은 소세포폐암 진단용 마커를 규명하고자, 정상인의 혈청(Healthy), 소세포폐암 초기환자의 혈청(SCC-LD), 소세포폐암 말기환자의 혈청(SCC-ED)에 60% 이상을 차지하는 알부민과 IgG를 제거하고, 이들 혈청 샘플로부터 푸코실화된 당단백질을 분리 및 농축한 후, 1D-SDS PAGE 겔에서 분리하고 인 겔 트립신 다이제스쳔(In gel tryptic digestion)를 이용하여 펩티드 상태로 전처리한 다음 질량분석기를 이용하여 분석하여 각 혈청 샘플군 당 80~100개의 푸코실화된 단백질을 동정하고, 스캐폴드 2 프로그램을 이용하여 3개의 혈청 샘플군을 비교분석하여 정상인에 비해 소세포폐암 환자에서 발현이 감소하거나 증가하는 다수의 푸코실화된 혈청 단백질을 동정하였다. The present invention to identify markers for diagnosing small cell lung cancer, albumin and IgG accounting for more than 60% in the serum (Healthy) of normal people, the serum of early patients with small cell lung cancer (SCC-LD), the serum of patients with late stage small cell lung cancer (SCC-ED) , The fucosylated glycoproteins were isolated and concentrated from these serum samples, separated on 1D-SDS PAGE gels and pretreated in peptide state using In gel tryptic digestion, followed by mass. Analyze using an analyzer to identify 80-100 fucosylated proteins per serum sample group and compare the three serum sample groups using the Scaffold 2 program to reduce expression in small cell lung cancer patients compared to normal An increasing number of fucosylated serum proteins were identified.
본 발명에서 사용된 용어, "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 폐암 발병 여부를 확인하는 것이다.As used herein, the term "diagnosis" means identifying the presence or characteristic of a pathological condition. For the purposes of the present invention, the diagnosis is to ascertain whether lung cancer develops.
폐암은 4개의 주된 조직학적 유형을 가지며, 소세포폐암(SCLC) 및 비소세포폐암(NSCLC)의 2가지로 구분되며, 비소세포폐암(NSCLC)은 폐선암, 편평상피암 및 대세포폐암을 포함한다. 본 발명의 폐암은 폐암의 조직학적 유형 중에서, 소세포폐암을 진단하는 것을 목적으로 한다. Lung cancer has four major histological types and is divided into two types, small cell lung cancer (SCLC) and non-small cell lung cancer (NSCLC), and non-small cell lung cancer (NSCLC) includes lung adenocarcinoma, squamous cell carcinoma and large cell lung cancer. Lung cancer of the present invention aims to diagnose small cell lung cancer among histological types of lung cancer.
본 발명에서 항체는 전체 형태의 항체(이하 "전항체"라고 함) 또는 그의 기능적인 단편일 수 있다. 상기 전항체는 단량체 또는 2 이상의 전항체가 결합되어 있는 다량체의 형태일 수 있다. 상기 항체의 기능적인 단편은 전항체의 중쇄 및 경쇄 가변영역을 갖는 항체로서, 실질적으로 전항체가 인식하는 것과 동일한 항원결합부위(epitope)를 인식하는 것을 의미한다. In the present invention, the antibody may be a whole form of an antibody (hereinafter referred to as "whole antibody") or a functional fragment thereof. The whole antibody may be in the form of a monomer or a multimer having two or more whole antibodies bound thereto. The functional fragment of the antibody is an antibody having a heavy chain and light chain variable region of the whole antibody, which means that it recognizes the same antigen binding site (epitope) that virtually all antibodies recognize.
상기 항체의 기능적인 단편에는 단일쇄 가변영역 단편 (scFv), (scFv)2, Fab, Fab' 및 F(ab')2 등이 포함되나, 이에 한정되지 않는다. 상기 단일쇄 가변영역(scFv)은 중쇄 가변영역과 경쇄 가변영역이 링커 펩타이드를 통해 연결되어 단일쇄 폴리펩티드 형태를 취하는 항체 단편을 의미한다.Functional fragments of the antibody include, but are not limited to, single chain variable region fragment (scFv), (scFv) 2, Fab, Fab 'and F (ab') 2. The single chain variable region (scFv) refers to an antibody fragment in which a heavy chain variable region and a light chain variable region are linked through a linker peptide to take the form of a single chain polypeptide.
상기 항체는 효소, 형광 물질, 방사선 물질 및 단백질 등과 같은 다양한 분자와 결합하여 변형될 수 있다. 변형된 항체는 화학적으로 항체를 변형하여 수득할수 있다. 이러한 변형 방법은 당업계에서 통상적으로 사용된다. 또한, 상기 항체는 비인간 항체로부터 유래한 변형 부위(variable region)와 인간 항체로부터 유래한 불변 부위(constant region)가 결합된 키메라 항체(chimeric antibody)로 수득되거나, 또는 인간이 아닌 항체로부터 유도된 상보성 결정 부위를 포함하여 인간 항체로부터 유도된 구조 부위(frame work region, FR)와 불변부위가 결합된 인간화 항체(humanized antibody)로 수득될 수 있다. 이러한 항체는 당업계에 알려져 있는 방법을 이용하여 제조될 수 있다.The antibody can be modified by binding to various molecules such as enzymes, fluorescent materials, radioactive materials and proteins. Modified antibodies can be obtained by chemically modifying the antibody. Such modification methods are commonly used in the art. In addition, the antibody is obtained as a chimeric antibody in which a variable region derived from a non-human antibody and a constant region derived from a human antibody are combined, or complementarity derived from a non-human antibody. It may be obtained as a humanized antibody in which a constant region is combined with a frame work region (FR) derived from a human antibody including a crystal site. Such antibodies can be prepared using methods known in the art.
본 발명의 진단용 조성물은 단백질에 특이적인 항체 이외에 면역학적 분석에 사용되는 당업계에 공지된 시약을 추가로 포함할 수 있다. 상기에서 면역학적 분석은 항원과 항체의 결합을 측정할 수 있는 방법이라면 모두 포함될 수 있다. The diagnostic composition of the present invention may further comprise a reagent known in the art used for immunological analysis in addition to the antibody specific for the protein. Immunological analysis in the above may include any method that can measure the binding of the antigen and the antibody.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 하는 소세포폐암 진단용 키트를 제공한다. The present invention also provides a kit for diagnosing small cell lung cancer using the composition as an active ingredient.
상기 진단용 키트로는 예를 들면, 시료 중의 특정 단백질을 검출하기 위해 면역크로마토그래피법을 기초로 하는 측방 유동 검정 키트(lateral flow assay kit)의 형태로 제공될 수 있다. 측방 유동 검정 키트는 통상 시료가 적용되는 샘플패드(sample pad), 탐지용 항체가 코팅되어 있는 방출패드(releasing pad), 시료가 이동하여 분리되고 항원-항체 반응이 일어나는 전개용 막(예를 들어 니트로셀룰로스) 또는 스트립, 그리고 흡수패드(absorption pad)로 이루어진다.The diagnostic kit may be provided, for example, in the form of a lateral flow assay kit based on immunochromatography to detect a specific protein in a sample. Lateral flow assay kits typically include a sample pad to which a sample is applied, a releasing pad coated with a detection antibody, a developing membrane that separates the sample and separates the antigen-antibody reaction (for example, Nitrocellulose) or strips, and an absorption pad.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 유효성분으로 하는 소세포폐암 진단용 마이크로 어레이를 제공한다. The present invention also provides a microarray for diagnosing small cell lung cancer using the composition as an active ingredient.
상기 마이크로어레이는 일반적으로 특정 시약으로 처리된 슬라이드 글라스 표면 위에 항체를 부착하여 항원-항체 반응에 의해 상기 항체에 특이적으로 부착하는 단백질을 검출할 수 있도록 하는 것이다.The microarray generally attaches an antibody on a surface of a slide glass treated with a specific reagent so that a protein specifically binding to the antibody can be detected by an antigen-antibody reaction.
또한, 본 발명은 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1), 리포폴리사카라이드-반응 및 베이지-유사 앵커 단백질(Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein), 아포리포단백질 D(Apolipoprotein D), 세로트랜스페린(Serotransferrin), 칼리스타틴(Kallistatin), 혈장 칼리클레인(Plasma kallikrein), 루미칸(Lumican), 히스티딘-리치 당단백질(Histidine-rich glycoprotein), 알파-2-HS-당단백질(Alpha-2-HS-glycoprotein), 알파-1B-당단백질(Alpha-1B-glycoprotein) 및 아포리포단백질A-IV(Apolipoprotein A-IV)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질을 인코딩하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함하는 소세포폐암 진단용 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides serum paraoxonase 1, lipopolysaccharide-response and beige-like anchor protein, apolipoprotein D ), Serotransferrin, Kallistatin, Plasma kallikrein, Lumican, Histidine-rich glycoprotein, Alpha-2-HS-glycoprotein (Alpha) Primers specific for nucleic acids encoding one or more proteins selected from the group consisting of -2-HS-glycoprotein, Alpha-1B-glycoprotein and Apolipoprotein A-IV Or it provides a composition for diagnosing small cell lung cancer comprising a probe.
본 발명에서 상기 단백질은 푸코실화된 것을 특징으로 하며, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 발현이 감소하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the protein is characterized in that it is fucosylated, it is characterized in that the expression in the serum of small cell lung cancer patients compared to the serum of normal people.
본 발명에서, 상기 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질은 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 말기환자의 혈청에서 발현이 감소하나, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 말기환자의 혈청에서 푸코실화 정도는 증가하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1) protein is reduced in the serum of terminal patients with small cell lung cancer compared to the serum of normal people, but the degree of fucosylation in the serum of terminal patients with small cell lung cancer compared to the serum of normal people It is characterized by increasing.
본 발명은 합토글로빈(Haptoglobin), 헤모펙신(Hemopexin), C4b-결합 단백질 알파 체인(C4b-binding protein alpha chain), 보체성분 C9(Complement component C9), CD5 유사 항원(CD5 antigen-like), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H2(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2), 혈청 아밀로이드 P 성분(Serum amyloid P component), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H4(Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), 합토글로빈 관련 단백질(Isoform 1 of Haptoglobin-related protein), 알파-1-안티키모트립신(ALPHA-1-antichymotrypsin) 및 알파-1-안티트립신(Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질을 인코딩하는 핵산에 특이적인 프라이머 또는 프로브를 포함하는 소세포폐암 진단용 조성물을 제공한다. Haptoglobin (Haptoglobin), hemopexin (Hemopexin), C4b-binding protein alpha chain (C4b-binding protein alpha chain), Complement component C9 (Complement component C9), CD5 antigen-like (CD5 antigen-like), Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2, Serum amyloid P component, Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), Isoform 1 of Haptoglobin-related protein, ALPHA-1-antichymotrypsin and Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin It provides a composition for diagnosing small cell lung cancer comprising a primer or probe specific for a nucleic acid encoding one or more proteins selected from the group consisting of.
본 발명에서 상기 단백질은 푸코실화된 것을 특징으로 하며, 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 발현이 증가하는 것을 특징으로 한다.In the present invention, the protein is characterized in that it is fucosylated, it is characterized in that the expression in the serum of small cell lung cancer patients compared to the serum of normal people.
상기 프라이머를 이용한 특정 핵산의 검출은 PCR과 같은 증폭 방법을 사용하여 목적 유전자의 서열을 증폭한 다음 당 분야에 공지된 방법으로 유전자의 증폭여부를 확인함으로써 수행될 수 있다. 또한, 프로브를 이용한 특정 핵산의 검출은 적합한 조건하에서 시료 핵산을 프로브와 접촉시킨 후 하이브리드화되는 핵산의 존재여부를 확인함으로써 수행될 수 있다.The detection of the specific nucleic acid using the primer can be performed by amplifying the sequence of the target gene using an amplification method such as PCR and confirming whether the gene is amplified by a method known in the art. In addition, the detection of a particular nucleic acid using a probe may be performed by contacting a sample nucleic acid with a probe under suitable conditions and confirming the presence of the hybridizing nucleic acid.
상기 "프라이머"란 짧은 자유 수산화기를 가지는 핵산 서열로서 상보적인 템플리트와 염기쌍을 형성할 수 있고 템플리트 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능하는 짧은 핵산서열을 말한다. The term "primer" refers to a nucleic acid sequence having a short free hydroxyl group, which can form a base pair with a complementary template and serves as a starting point for template strand copying.
상기 "프로브"는 mRNA와 특이적으로 결합할 수 있는 수 개 내지 수 백 개의 염기로 이루어진 RNA 또는 DNA 등의 핵산 단편을 의미하며, 라벨링되어 있어 특정 mRNA의 존재유무를 확인할 수 있다. 프로브는 올리고뉴클레오타이드 프로브, 단쇄 DNA 프로브, 이중쇄 DNA 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 제작될 수 있고 비오틴, FITC, 로다민, DIG 등으로 표지되거나 방사선 동위 원소 등으로 표지될 수 있다.The "probe" refers to a nucleic acid fragment such as RNA or DNA consisting of several to several hundred bases that can specifically bind to mRNA, and labeled to confirm the presence of a specific mRNA. Probes can be prepared in the form of oligonucleotide probes, single-stranded DNA probes, double-stranded DNA probes, RNA probes, and the like, and can be labeled with biotin, FITC, rhodamine, DIG, or the like, or radioisotopes.
또한, 상기 프로브는 검출 가능한 물질 예를 들면, 적합한 신호를 제공하고 충분한 반감기를 갖는 방사성 표지로 표지할 수 있다. 표지된 프로브는 공지된 바와 같이 고체 지지체 상의 핵산에 하이브리드화시킬 수 있다.The probe may also be labeled with a detectable substance, for example, a radiolabel that provides a suitable signal and has sufficient half-life. The labeled probe can be hybridized to a nucleic acid on a solid support as is known.
상기 프로브나 프라이머를 이용하여 특정 핵산을 검출할 수 있는 방법으로는 예를 들면, 이에 한정되지는 않으나 중합효소 연쇄반응(PCR), DNA 시퀀싱, RT-PCR, 프라이머 연장법, 올리고뉴클레오타이드 연장 분석, 대립형질 특이적 PCR법, RNase 불일치 절단, 단일가닥 입체 다형화, SSCP 및 헤테로두플렉스 동시 분석법, 변성 구배 젤 전기영동(DGGE), 변성 고압 액체 크로마토그래피, 혼성화 반응, DNA 칩 등이 있다. 상기 혼성화 반응의 예로는 노던 하이브리다이제이션, 인시츄 하이브리다이제이션 및 마이크로어레이 방법 등이 있다.Examples of the method for detecting a specific nucleic acid using the probe or the primer include but are not limited to PCR, DNA sequencing, RT-PCR, primer extension, oligonucleotide extension analysis, Allogeneic PCR, RNase mismatch cleavage, single stranded polymorphism, SSCP and Heteroduplex simultaneous assays, denaturing gradient gel electrophoresis (DGGE), denaturing high pressure liquid chromatography, hybridization reactions, and DNA chips. Examples of the hybridization reaction include Northern hybridization, in situ hybridization, and microarray method.
상기 본 발명의 소세포폐암 진단용 조성물은 상술한 핵산을 검출하는 방법에 일반적으로 사용되는 시약을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들면, PCR 반응에 요구되는 dNTP(deoxynulceotide triphosphate), 내열성 중합효소(polymerase), 염화 마그네슘 등의 금속이온염이 포함될 수 있으며, 시퀀싱에 요구되는 dNTP, 시쿼나제(sequenase) 등을 포함할 수 있다.The composition for diagnosing small cell lung cancer of the present invention may further include a reagent generally used in the method for detecting the above-described nucleic acid. For example, metal ion salts such as deoxynulceotide triphosphate (dNTP), a heat resistant polymerase, and magnesium chloride required for a PCR reaction may be included, and may include dNTP, a sequencenase, etc. required for sequencing. have.
바람직하게는, 본 발명의 소세포폐암 진단용 조성물은 진단용 키트 또는 마이크로어레이의 형태로 제공될 수 있다. 예를 들면, 이에 한정되지는 않으나 본 발명의 상기 단백질로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 유전자에 대하여 특이적인 각각의 프라이머 쌍을 포함하는 RT-PCR 키트, 본 발명의 마커 유전자의 cDNA 또는 올리고뉴클레오타이드가 부착된 기판을 포함하는 DNA 칩 등이 있다.Preferably, the composition for diagnosing small cell lung cancer of the present invention may be provided in the form of a diagnostic kit or microarray. For example, but not limited to, RT-PCR kit including each primer pair specific for one or more genes selected from the group consisting of the proteins of the present invention, cDNA or oligonucleotide of the marker gene of the present invention is attached DNA chips including the prepared substrates.
또한, 본 발명은 소세포폐암 마커인 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1), 리포폴리사카라이드-반응 및 베이지-유사 앵커 단백질(Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein), 아포리포단백질 D(Apolipoprotein D), 세로트랜스페린(Serotransferrin), 칼리스타틴(Kallistatin), 혈장 칼리클레인(Plasma kallikrein), 루미칸(Lumican), 히스티딘-리치 당단백질(Histidine-rich glycoprotein), 알파-2-HS-당단백질(Alpha-2-HS-glycoprotein), 알파-1B-당단백질(Alpha-1B-glycoprotein) 및 아포리포단백질A-IV(Apolipoprotein A-IV)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 이용한 항원-항체 결합반응을 통해 생물학적 시료에서 상기 단백질로 이루어진 군에서 하나 이상의 단백질을 검출하는 방법을 제공한다. In addition, the present invention is a small cell lung cancer marker serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1), lipopolysaccharide-response and beige-like anchor protein (Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein), apolipoprotein Apolipoprotein D, Serotransferrin, Kallistatin, Plasma kallikrein, Lumican, Histidine-rich glycoprotein, Alpha-2-HS- Specific to at least one protein selected from the group consisting of glycoprotein (Alpha-2-HS-glycoprotein), alpha-1B-glycoprotein and apolipoprotein A-IV It provides a method for detecting one or more proteins in the group consisting of the protein in a biological sample through an antigen-antibody binding reaction using a binding antibody.
본 발명은 소세포폐암 마커인 합토글로빈(Haptoglobin), 헤모펙신(Hemopexin), C4b-결합 단백질 알파 체인(C4b-binding protein alpha chain), 보체성분 C9(Complement component C9), CD5 유사 항원(CD5 antigen-like), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H2(Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2), 혈청 아밀로이드 P 성분(Serum amyloid P component), 인터-알파-트립신 억제제 중쇄 H4(Isoform 2 of Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4), 합토글로빈 관련 단백질(Isoform 1 of Haptoglobin-related protein), 알파-1-안티키모트립신(ALPHA-1-antichymotrypsin) 및 알파-1-안티트립신(Isoform 1 of Alpha-1-antitrypsin)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 이용한 항원-항체 결합반응을 통해 생물학적 시료에서 상기 단백질로 이루어진 군에서 하나 이상의 단백질을 검출하는 방법을 제공한다. The present invention is a small cell lung cancer marker Haptoglobin (Haptoglobin), Hemopexin (C4b-binding protein alpha chain), Complement component C9 (Complement component C9), CD5 like antigen (CD5 antigen) -like), Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H2, Serum amyloid P component, Inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4 (Isoform 2 of Inter-alpha) -trypsin inhibitor heavy chain H4), isoform 1 of Haptoglobin-related protein, alpha-1-antichymotrypsin and alpha-1-antitrypsin (Isoform 1 of Alpha- 1-antitrypsin) provides a method for detecting one or more proteins from the group consisting of the protein in the biological sample through an antigen-antibody binding reaction using an antibody that specifically binds to one or more proteins selected from the group consisting of.
본 발명은 소세포폐암 마커인 상기 단백질들로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 이용한 항원-항체 결합반응을 통해 생물학적 시료에서 이들 단백질을 검출하여, 소세포폐암의 진단 또는 예후를 조기에 예측할 수 있다. 구체적으로, 상기 단백질들을 SDS-PAGE에서 전기영동하여 분획하고 고정체로 전이하여 고정시킨 후, 상기 단백질들에 특이적으로 결합하는 항체를 가하여 항원-항체 결합반응을 수행하고, 이들 단백질의 발현 수준을 측정한다. 즉, 소세포폐암 환자와 정상인의 조직에서 이들 단백질의 발현 수준을 측정하고 비교하여, 소세포폐암 환자의 조직에서의 이들 단백질의 발현 수준이 정상인의 조직에서 보다 높으면, 소세포폐암을 갖는 것으로 진단하거나 소세포폐암의 가능성을 가질 것으로 예측하는 것이다.The present invention detects these proteins in a biological sample through an antigen-antibody binding reaction using an antibody that specifically binds to one or more proteins selected from the group consisting of small cell lung cancer markers, thereby diagnosing or prognosticting small cell lung cancer. It can be predicted early. Specifically, the proteins are fractionated by electrophoresis on SDS-PAGE, transferred to a fixture, immobilized, and then an antibody that specifically binds to the proteins is added to perform an antigen-antibody binding reaction, and the expression level of these proteins is increased. Measure That is, by measuring and comparing the expression levels of these proteins in the tissues of small cell lung cancer patients and normal humans, if the expression levels of these proteins in the tissues of small cell lung cancer patients are higher than those in normal human tissues, they are diagnosed as having small cell lung cancer or small cell lung cancer It is expected to have the possibility of.
상기 생물학적 시료는 포유동물로부터 수득된 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 소변과 같은 시료를 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 상기 시료는 검출에 사용하기 전에 여과, 증류, 추출, 농축, 방해 성분의 불활성화, 시약의 첨가 등으로 전처리할 수 있다.The biological sample may include, but is not limited to, tissues, cells, whole blood, serum, plasma, saliva, sputum and urine obtained from a mammal. The sample can be pretreated by filtration, distillation, extraction, concentration, inactivation of disturbance components, addition of reagents, etc. before use in detection.
상기 항원-항체 결합반응을 위한 고정체로는 니트로셀룰로오스 막, PVDF 막(polyvinylidene difluoride membrane), 폴리비닐 수지 또는 폴리스티렌 수지로 합성된 96 웰 플레이트, 및 유리로 된 슬라이드글라스 등이 사용될 수 있다.As a fixture for the antigen-antibody conjugation reaction, a nitrocellulose membrane, a PVDF membrane (polyvinylidene difluoride membrane), a 96 well plate synthesized from polyvinyl resin or polystyrene resin, and a glass slide glass can be used.
상기 항원-항체 결합반응은 통상의 효소면역분석법(ELISA), 방사능면역분석법(radioimmnoassay, RIA), 샌드위치 측정법(sandwich assay), 웨스턴 블롯팅, 면역침강법, 면역조직화학염색법(immnohistochemical staining), 유체 세포 측정법(flow cytometry), 형광활성화 세포분류법(FACS), 효소기질발색법, 항원-항체 응집법 등의 방법을 이용하여 수행할 수 있다.The antigen-antibody binding reaction is conventional enzyme immunoassay (ELISA), radioimmunoassay (RIIA), sandwich assay, Western blotting, immunoprecipitation, immunohistochemical staining, fluid Flow cytometry, fluorescence activated cell sorting (FACS), enzymatic substrate coloration, antigen-antibody aggregation, etc. can be used.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in order to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the examples.
<< 실시예Example 1> : 혈액 샘플 수집 및 혈청에서 다량 존재하는 단백질의 제거 1>: Blood sample collection and removal of large amounts of protein from serum
삼성병원으로부터 정상인 29명, 소세포폐암 초기환자 25명, 소세포폐암 말기 환자 29명의 혈액 시료를 수집하였다. 혈액 시료를 4℃에서 12000rpm으로 10분간 원심분리하여 혈청을 수득하였고, 실험에 사용하기 전까지 -70℃에서 보관하였다.Blood samples from 29 healthy patients, 25 early small cell lung cancer patients and 29 late small cell lung cancer patients were collected from Samsung Hospital. Blood samples were centrifuged at 12000 rpm for 10 minutes at 4 ° C. to obtain serum and stored at −70 ° C. until used in the experiment.
상기 수득한 정상인의 혈청(Healthy, 29명), 소세포폐암 초기환자의 혈청(SCC-LD, 25명), 소세포폐암 말기환자의 혈청(SCC-ED, 29명)의 질량분석을 위하여, 각 혈청 샘플군 당 5명씩 선택하여 실험에 사용하였다. 각 혈청 샘플군의 혈청에 60% 이상을 차지하는 알부민과 IgG를 Agilent Technologies(Multi Affinity Removal Spin Catridge) depletion kit를 이용하여 제거하였다.
For the mass spectrometry of the obtained normal serum (Healthy, 29), serum of early stage small cell lung cancer (SCC-LD, 25), serum of late stage small cell lung cancer (SCC-ED, 29), Five people per sample group were used for the experiment. Albumin and IgG, which account for more than 60% of the serum of each serum sample group, were removed using Agilent Technologies (Multi Affinity Removal Spin Catridge) depletion kit.
<< 실시예Example 2> : 혈청 샘플로부터 2>: from serum sample 푸코실화된Fucosylated 당단백질의 분리 및 농축 Isolation and Concentration of Glycoproteins
아가로오스-결합 AAL(Aleuria aurantia lectin)을 스핀 컬럼에 넣고 알부민과 IgG가 제거된 혈청 샘플을 500㎕의 완충액으로 희석한 후 스핀 컬럼에 로딩하여 용출액(elution)과 유통 분획(flow-through fraction)을 분리하였다. 분리된 용출액을 농축하여 푸코실화된 당단백질을 얻었다. 푸코실화된 당단백질이 분리되었는지 검증하기 위하여 푸코실화된 당단백질을 AAL 렉틴 블롯을 이용하여 검출하였다. 렉틴 블롯 방법은 면역블롯팅 방법과 동일하나 1차 항체 대신 비오티닐레이티드(biotinylated) AAL, 2차 항체 대신 HRP 결합된 스트렙타비딘을 사용한다.
Agarose-binding Aleuria aurantia lectin (AAL) was added to the spin column, and serum samples depleted of albumin and IgG were diluted with 500 μl of buffer and loaded onto the spin column to elution and flow-through fractions. ) Was separated. The separated eluate was concentrated to give a fucosylated glycoprotein. Fucosylated glycoproteins were detected using AAL lectin blots to verify that fucosylated glycoproteins were isolated. The lectin blot method is the same as the immunoblotting method but uses biotinylated AAL instead of the primary antibody and HRP bound streptavidin instead of the secondary antibody.
<< 실시예Example 3> 분리된 3> separated 푸코실화된Fucosylated 당단백질의 Glycoprotein SDSSDS -- PAGEPAGE 분리 및 Separation and 쿠마씨Mr. Kumar 블루blue 염색 dyeing
상기 용출액(농축된 푸코실화된 당단백질)과 유통 분획을 각각 아크릴아미드겔로 전기영동한 후 겔을 증류수로 5분간 3회 세척하고, 바이오-세이프 쿠마씨 염색용액(Coomassie G250 Stain; Bio-Rad)을 이용하여 실온에서 부드럽게 교반하면서 1시간 동안 염색하였다. 그 다음, 겔을 증류수에서 밤새도록 탈색시키고 증류수로 세척하여 염색과정을 마쳤다.The eluate (concentrated fucosylated glycoprotein) and the flow fraction were each electrophoresed with acrylamide gel, and then the gel was washed three times with distilled water for 5 minutes and bio-safe Coomassie staining solution (Coomassie G250 Stain; Bio-Rad). ) Was dyed for 1 hour with gentle stirring at room temperature. The gel was then decolorized overnight in distilled water and washed with distilled water to complete the dyeing process.
본 발명의 3개의 혈청 샘플군(정상인(Healthy, HE), 소세포폐암초기환자(SCC-LD, LD), 소세포폐암 말기환자(SCC-ED, ED))에서 알부민과 IgG가 제거된 혈청 샘플의 SDS PAGE 겔 전기영동 결과를 도 1(A)에 나타내었다 (T: 혈청원액, B: 제거(depletion) 컬럼에 결합한 단백질인 알부민과 IgG, D: 제거(depletion)된 혈청). 도 1(A)에 나타난 바와 같이, 3개의 혈청 샘플군에서 알부민과 IgG가 제거됨을 확인하였다.The serum samples from which albumin and IgG were removed from the three serum sample groups of the present invention (Healthy, HE, early small cell lung cancer patients (SCC-LD, LD), late small cell lung cancer patients (SCC-ED, ED)) SDS PAGE gel electrophoresis results are shown in Figure 1 (A) (T: serum stock, B: albumin and IgG, proteins bound to the depletion column, D: depletioned serum). As shown in FIG. 1 (A), it was confirmed that albumin and IgG were removed from three serum sample groups.
도 1(B)는 푸코실화된 당단백질의 AAL 렉틴 블롯 관찰 결과를 나타낸 것이다(T: 혈청원액, Flow through: 푸코실화 인리치 컬럼에 결합하지 않은 샘플, elution: 푸코실화 컬럼에 결합한 푸코실화된 당단백질). 알부민과 IgG가 제거된 혈청으로부터 분리한 푸코실화된 당단백질을 포함한 용출액의 AAL 렉틴 블롯 관찰 결과, 렉틴 컬럼에 결합된 용출액(elution) 샘플에서 푸코실화된 당단백질이 강하게 발현됨을 확인하였다. Figure 1 (B) shows the results of the observation of the AAL lectin blot of the fucosylated glycoprotein (T: serum stock, Flow through: sample not bound to the fucosylated enrichment column, elution: fucosylated bound to the fucosylated column) Glycoproteins). The observation of the AAL lectin blot of the eluate containing the fucosylated glycoprotein separated from the serum from which albumin and IgG were removed confirmed that the fucosylated glycoprotein was strongly expressed in the elution sample bound to the lectin column.
도 1(C)는 푸코실화 컬럼에 결합되지 않은 샘플과 결합된 샘플의 쿠마씨 블루 염색 결과를 나타낸 것이다(Flow through: 푸코실화 컬럼에 결합하지 않은 샘플, elution: 푸코실화 컬럼에 결합한 샘플).
1 (C) shows the results of Coomassie blue staining of a sample bound to a sample not bound to a fucosylation column (Flow through: a sample not bound to a fucosylation column, elution: a sample bound to a fucosylation column).
<< 실시예Example 4> 4> 푸코실화된Fucosylated 당단백질의 동정 Identification of Glycoproteins
상기 실시예 2에서 얻은 농축된 푸코실화된 당단백질을 1D-SDS PAGE 겔에서 분리한 후 인 겔 트립신 다이제스쳔(In gel tryptic digestion)을 이용하여 펩티드 상태로 전처리하였다. 전처리된 3개의 혈청 샘플군(정상인, 소세포폐암 초기환자, 소세포폐암 말기환자)을 질량분석기를 이용하여 분석하여 단백질을 동정하였다. 그 다음, 스캐폴드 2 프로그램(Scaffold2 program)을 이용하여 3개의 혈청 샘플군을 비교분석하여 소세포폐암에 특이적인 단백질을 동정하였다.The concentrated fucosylated glycoprotein obtained in Example 2 was separated from the 1D-SDS PAGE gel and then pretreated in peptide state using In gel tryptic digestion. Three pretreated serum sample groups (normal, early small cell lung cancer patients, late small cell lung cancer patients) were analyzed using a mass spectrometer to identify proteins. Then, three serum sample groups were compared using the Scaffold2 program to identify proteins specific for small cell lung cancer.
본 발명의 3개의 혈청 샘플군(정상인 (Healthy, HE), 소세포폐암 초기환자(SCC-LD, LD), 소세포폐암 말기환자(SCC-ED, ED))에서 농축된 푸코실화된 당단백질로부터 소세포폐암에 특이적인 푸코실화된 당단백질의 질량분석 결과는 도 2에 나타내었다. 상기 비교분석은 2번 반복 수행되었으며, 그래프에 표시된 y축 수치는 질량분석기로 측정된 펩타이드의 detection 수를 의미한다.Small cells from fucosylated glycoproteins enriched in three serum sample groups of the present invention (Healthy, HE, early stage small cell lung cancer (SCC-LD, LD), late stage small cell lung cancer (SCC-ED, ED)) Mass spectrometry of fucosylated glycoproteins specific for lung cancer is shown in FIG. 2. The comparative analysis was performed twice, and the y-axis value indicated in the graph means the number of detection of the peptide measured by the mass spectrometer.
도 2에 나타난 바와 같이, 3개의 혈청 샘플군(정상인 (Healthy, HE), 소세포폐암 초기환자(SCC-LD, LD), 소세포폐암 말기환자(SCC-ED, ED))에서 농축된 푸코실화된 당단백질로부터 소세포폐암에 특이적인 푸코실화된 당단백질의 질량분석 결과 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질이 소세포폐암 말기 환자의 혈청에서 감소됨을 확인할 수 있었다. 따라서, 소세포폐암에 특이적인 당단백질로, 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질로 동정하였다. As shown in FIG. 2, the concentration of fucosylated in three serum sample groups (Healthy, HE, early small cell lung cancer (SCC-LD, LD), late small cell lung cancer (SCC-ED, ED)) Mass spectrometry of fucosylated glycoproteins specific for small cell lung cancer from glycoproteins revealed that serum paraoxonase 1 (PON1) protein was reduced in the serum of patients with late stage small cell lung cancer. Therefore, as a glycoprotein specific for small cell lung cancer, serum paraoxonase 1 (PON1) protein was identified.
(HE)Normal people
(HE)
(LD)Small cell lung cancer early
(LD)
말기
(ED)Small cell lung cancer
last period
(ED)
(HE)Normal people
(HE)
(LD)Small cell lung cancer early
(LD)
말기
(ED)Small cell lung cancer
last period
(ED)
리포폴리사카라이드-반응 및 베이지-유사 앵커 단백질(Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like anchor protein)
Isoform 1 of Lipopolysaccharide-responsive and beige-like
(HE)Normal people
(HE)
(LD)Small cell lung cancer early
(LD)
말기
(ED)Small cell lung cancer
last period
(ED)
(HE)Normal people
(HE)
(LD)Small cell lung cancer early
(LD)
말기
(ED)Small cell lung cancer
last period
(ED)
5 13
5
0 34
0
9 62
9
9 13
9
3 35
3
6 63
6
0
또한, 푸코실화된 당단백질 분석을 통하여 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 뿐만 아니라, 정상인에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 감소되는 당단백질을 확인하였으며 이를 표 1에 나타내었다. 한편, 정상인에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 증가되는 당단백질을 확인하였으며, 이를 표 2에 나타내었다.
Fucosylated glycoprotein analysis also confirmed that glycoproteins were reduced in serum of small cell lung cancer patients as well as serum paraoxonase 1 (PON1). On the other hand, the glycoproteins increased in the serum of small cell lung cancer patients compared to normal people, and these are shown in Table 2.
<< 실시예Example 5> 혈청 5> serum 파라옥소나제Paraoxonase 1 단백질의 1 of protein 푸코실화Fucosylated (( fucosylationfucosylation ) 정도의 검증Degree of verification
소세포폐암 말기 환자에서 감소 패턴을 보이는 단백질인 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질이 푸코스(fucose)를 포함하는 당사슬을 가지고 있는지를 확인하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다. 구체적으로는, 상기 실시예 4에서 동정된 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질에 당사슬 제거 효소인 PNGase F를 처리하여 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질에 푸코스를 포함하는 당사슬이 붙어 있는지를 확인하였다. 만일, 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질에 당사슬 제거 효소인 PNGase F를 처리하여 이 단백질에 붙어있는 당사슬을 잘랐을때 단백질의 질량이 떨어진다면 상기 단백질에 당사슬이 붙어 있었다는 것을 확인할 수 있다.In order to determine whether serum paraoxonase 1 (PON1) protein, a protein showing a decreasing pattern in terminal patients with small cell lung cancer, had oligosaccharides containing fucose, the following experiment was performed. Specifically, the serum paraoxonase 1 (PON1) protein identified in Example 4 is treated with PNGase F, the oligosaccharide-removing enzyme, to the serum paraoxonase 1 (PON1) protein, and the fucose to the serum. It was confirmed whether the sugar chain containing the. When the serum paraoxonase 1 (PON1) protein was treated with PNGase F, an oligosaccharide-removing enzyme, and the oligosaccharides attached to the protein were cut, the protein weight was reduced, indicating that the oligosaccharide was attached to the protein. have.
도 3에 나타난 바와 같이, 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질에 당사슬 제거 효소인 PNGase F를 처리하였을 때 40kDa에 위치하던 밴드가 37kDa 정도로 떨어진 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 소세포폐암-특이적 단백질인 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질에 푸코스(fucose)를 포함하는 당사슬이 붙어 있었다는 것을 알 수 있다(Crude - 혈청원액, Untreat - PNGase F 효소 처리를 하지 않은 샘플, Treat - PNGase F 효소를 처리한 샘플).
As shown in FIG. 3, when the serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1, PON1) protein was treated with PNGase F, which is an oligosaccharide removing enzyme, it was confirmed that the band located at 40 kDa fell to about 37 kDa. Therefore, it can be seen that the oligosaccharide containing fucose was attached to the serum paraoxonase 1 (PON1) protein, a small cell lung cancer-specific protein of the present invention (Crude-serum stock, Untreat-). PNGase F untreated, Treat-PNGase F treated).
<< 실시예Example 6> 혈청 6> serum 파라옥소나제Paraoxonase 1 단백질의 1 of protein 웨스턴Western 블롯Blot 및 And 덴시토메트리Densitometry 실험 검증 Experiment verification
혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질의 발현 양상을 검증하기 위하여, 보다 많은 혈청 샘플군(정상인의 혈청(Healthy, 29명), 소세포폐암 초기환자의 혈청(SCC-LD, 25명), 소세포폐암 말기환자의 혈청(SCC-ED, 29명))에서 웨스턴 블롯 실험을 수행하였으며, 또한, 웨스턴 블롯 결과에 대한 덴시토메트리를 측정하였다. 대조군(control)은 각 블롯당 같은 혈청 샘플을 사용하였다. To verify the expression of Serum paraoxonase 1 (PON1) protein, a larger serum sample group (normal serum (Healthy, 29 patients), small cell lung cancer early patients (SCC-LD, 25 patients) ), Western blot experiments were performed on serum of late stage patients with small cell lung cancer (SCC-ED, 29 patients), and densitometry of Western blot results was also measured. A control group used the same serum sample for each blot.
도 4에 나타난 바와 같이, 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질은 정상인의 혈청에서보다 소세포폐암 초기환자의 혈청(SCC-LD), 소세포폐암 말기환자의 혈청(SCC-ED)으로 갈수록 발현 정도가 크게 감소하는 것을 확인하였다.
As shown in Figure 4, the serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1, PON1) protein in the serum of early patients with small cell lung cancer (SCC-LD), serum from the end of small cell lung cancer (SCC-ED) than normal serum It was confirmed that the degree of expression decreases gradually.
<< 실시예Example 7> 혈청 7> serum 파라옥소나제Paraoxonase 1 단백질의 1 of protein 푸코실화Fucosylated 정도 측정 Measure
혈청 샘플군(정상인의 혈청(Healthy; HE, 29명), 소세포폐암 초기환자의 혈청(SCC-LD; LD, 25명), 소세포폐암 말기환자의 혈청(SCC-ED; ED, 29명))에서 본 발명의 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질의 푸코실화 변화 정도를 하이브리드 ELISA 방법으로 측정하였다. 하이브리드 ELISA 방법은 샌드위치 ELISA 방법과 동일하나 코팅을 특이 단백질 항체를 이용하고 샘플 반응 후 1차 항체 대신 비오티닐레이티드(biotinylated) AAL, 2차 항체 대신 HRP 결합된 스트렙타비딘을 사용하였다. 실험은 2번 반복 수행하였다.Serum sample group (normal serum (Heal; HE, 29), early small cell lung cancer (SCC-LD; LD, 25), small cell lung cancer terminal patients (SCC-ED; ED, 29)) The degree of fucosylation of serum paraoxonase 1 (PON1) protein of the present invention was measured by hybrid ELISA method. The hybrid ELISA method was the same as the sandwich ELISA method, but the coating was carried out using a specific protein antibody and biotinylated AAL instead of the primary antibody and HRP conjugated streptavidin instead of the secondary antibody after the sample reaction. The experiment was repeated twice.
도 5에 나타난 바와 같이, 푸코실화된 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질의 발현 정도는 정상인에 비해 소세포폐암 말기로 갈수록 크게 증가함을 확인하였다. 즉. 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질당 푸코스 당의 결합이 소세포폐암 말기로 갈수록 증가함을 의미하는 것이다.
As shown in Figure 5, the expression level of fucosylated serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1, PON1) protein was confirmed to increase significantly toward the end of small cell lung cancer compared to normal. In other words. It means that the binding of fucose sugar per serum paraoxonase 1 protein (Serum paraoxonase 1, PON1) increases toward the end of small cell lung cancer.
<< 실시예Example 8> 혈청 8> Serum 파라옥소나제Paraoxonase 1 단백질 및 1 protein and 푸코실화Fucosylated 레벨의 민감도 및 특이도 측정 Level sensitivity and specificity measurements
도 6에서는 혈청 샘플군(정상인의 혈청(Healthy; HE, 29명), 소세포폐암 초기환자의 혈청(SCC-LD; LD, 25명), 소세포폐암 말기환자의 혈청(SCC-ED; ED, 29명))에서 웨스턴 블랏을 이용한 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질 레벨과 하이브리드 렉틴 ELISA를 이용하여 푸코실화된 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1) 단백질 레벨을 ROC curve를 이용하여 나타내었다. In Figure 6, serum sample group (Healthy (He, 29 patients), serum of early stage small cell lung cancer (SCC-LD; LD, 25), serum of late stage small cell lung cancer (SCC-ED; ED, 29 Serum paraoxonase 1 protein level using Western blot and fucosylated serum paraoxonase 1 protein level using hybrid lectin ELISA were expressed using ROC curve. .
그 결과 웨스턴 블랏으로 측정한 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질의 레벨보다 하이브리드 렉틴 ELISA 로 측정한 푸코실화된 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 레벨의 AUC(Area under curve)값이 더 높음을 확인하였다. As a result, AUC (Area under) of fucosylated serum paraoxonase 1 (Serum paraoxonase 1, PON1) level measured by hybrid lectin ELISA than the level of serum paraoxonase 1 (PON1) protein measured by Western blot. curve) value was higher.
상기 방법은 본 발명에서 처음 밝혀진 것으로 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질의 단백질량 감소를 측정하는 것보다 혈청 파라옥소나제 1(Serum paraoxonase 1,PON1) 단백질의 푸코실화 정도의 증가를 측정하는 것이 폐암을 진단함에 있어 진단율이 높을 것임을 시사한다.
The method was first discovered in the present invention and increases the degree of fucosylation of serum paraoxonase 1 (PON1) protein rather than measuring the decrease in protein amount of serum paraoxonase 1 (PON1) protein. Measures suggest that the diagnosis rate will be high in diagnosing lung cancer.
Claims (21)
상기 혈청 파라옥소나제 1 단백질의 발현 정도는 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 감소하고, 혈청 파라옥소나제 1 단백질의 푸코실화 정도는 정상인의 혈청에 비해 소세포폐암 환자의 혈청에서 증가하는 것을 특징으로 하고,
하이브리드 렉틴 ELISA에서 나온 결과의 컷-오프(cut-off) 값을 0.18로 하였을 때, 소세포폐암 초기 환자(LD)의 진단 효율이 65~80% 이고, 소세포폐암 말기 환자(ED)의 진단 효율이 85~99% 인 것을 특징으로 하는 소세포폐암 진단용 조성물.
An antibody that specifically binds to a fucosylated serum paraoxonase 1 protein and a substance that specifically binds to a fucose included in the serum paraoxonase 1 protein. In the small cell lung cancer diagnostic composition, characterized in that for measuring the degree of fucosylation of the protein,
The expression level of the serum paraoxonase 1 protein was decreased in the serum of small cell lung cancer patients compared to the serum of normal persons, and the degree of fucosylation of the serum paraoxonase 1 protein was increased in the serum of small cell lung cancer patients compared to the serum of normal persons. Features,
When the cut-off value of the result of the hybrid lectin ELISA was 0.18, the diagnostic efficiency of early small cell lung cancer patients (LD) was 65 to 80%, and the diagnostic efficiency of late small cell lung cancer patients (ED) was Small cell lung cancer diagnostic composition, characterized in that 85 to 99%.
Small cell lung cancer diagnostic kit comprising the composition of claim 1 as an active ingredient.
Microarray for diagnosing small cell lung cancer using the composition of claim 1 as an active ingredient.
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Non-Patent Citations (4)
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| BMC cancer. 2007, vol. 7, pp. 48-(1-8).* |
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