KR101332836B1 - Composition comprising jaeumkanghwa-tang for treatment of breast cancer - Google Patents

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곽민아
변준석
손기철
구세광
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Abstract

The present invention relates to a composition enhancing the effect of anticancer drugs using Jaeumgangwha-tang and, more specifically, to a composition for treating breast cancer by administering the Jaeumgangwha-tang to individuals within 30 minutes of administration of anticancer drugs. Side effects in case of single administration of anticancer drugs are remarkably mitigated with coadministration of the Jaeumgangwha-tang. The composition also has advantages of low cytotoxicity and higher anticancer activity than the single administration of the anticancer drugs.

Description

자음강화탕을 포함하는 유방암 치료용 조성물 {Composition comprising Jaeumkanghwa-tang for treatment of Breast cancer}Composition comprising Jaeum Kanghwa-tang for the treatment of breast cancer {Composition comprising Jaeumkanghwa-tang for treatment of Breast cancer}

본 발명은 자음강화탕을 포함하는 유방암 치료용 조성물을 제공한다.
The present invention provides a composition for the treatment of breast cancer comprising Jyumganghwatang.

유방암이란 유방의 유관과 소엽에서 발생한 암을 일컫는 것으로, 현재 유방암의 발병 원인으로 여성 호르몬 복용, 가족력, 과거력, 출산력, 식생활 습관 등의 다양한 인자들이 거론되고 있으나, 아직까지 명확하게 규명된 것은 없다. 현대 여성에게 있어 유방암 발생율은 급격히 증가하고 있으며, 저출산, 짧은 수유기간, 이른 초경, 늦은 폐경 등의 요인과 함께 20대 및 30대에게도 발병되고 있는 실정이다.Breast cancer refers to cancers that occur in the ducts and lobules of the breast. Currently, various factors such as female hormone taking, family history, past history, fertility, and dietary habits have been discussed as causes of breast cancer, but have not been clearly identified. The incidence of breast cancer is increasing rapidly in modern women, and it is also occurring in the 20s and 30s with factors such as low birth rate, short lactation period, early menarche and late menopause.

Tamoxifen은 유방암을 포함한 다양한 질환의 치료제로 빈번히 사용되고 있는 대표적인 nonsteroidal estrogen agonist-antagonist 경구용 항암제이며, 최근 불임, 여성형 유방, 양극장애 (bipolar disorder), Albright’s 증후군, Riedel 갑상샘염, 혈관신생 및 유전자 발현 조절 등에도 사용되고 있다. 하지만, 골소실, 자궁내막암종, 혈전색전증, 지방간, 인지 및 기억 장애, 성욕감퇴, 성장판 조기 폐쇄, 면역억제, 용혈성 빈혈 및 과민반응을 포함하여 임상에서 의도하지 않은 다양한 부작용이 초래되고 있고, 특히 호르몬 장애에 의한 생식 장기 손상을 나타내는 것으로 알려져 있으며, 지질 과산화의 증가와 이에 따른 항산화 방어 시스템의 고갈 역시 tamoxifen의 다양한 독성과 관련되어 있다. Tamoxifen is a representative nonsteroidal estrogen agonist-antagonist oral anticancer agent that is frequently used for the treatment of various diseases including breast cancer. Recently, infertility, gynecomastia, bipolar disorder, Albright's syndrome, Riedel thyroiditis, angiogenesis and gene expression control It is also used. However, there are a variety of unintended side effects in clinical practice, including bone loss, endometrial carcinoma, thromboembolism, fatty liver, cognitive and memory disorders, loss of libido, premature growth obstruction, immunosuppression, hemolytic anemia and hypersensitivity. Reproductive organ damage due to hormonal disorders is known, and increased lipid peroxidation and depletion of antioxidant defense systems are also associated with various toxicities of tamoxifen.

또한 일부 환자에서 tamoxifen 장기투여에 의해 내성과 함께 유방암의 재발이 초래되며, 자궁내막암 발병의 위험성 역시 제기되고 있다. 따라서 항산화제를 포함한 다양한 약물의 병용 투여로 tamoxifen의 독성문제를 해결하기 위한 노력들이 시도되어 왔으며, 병용 투여에 의한 내성극복 및 약효 상승 효과 역시 다양하게 시도되어 왔다. In some patients, long-term administration of tamoxifen causes resistance and recurrence of breast cancer, and the risk of developing endometrial cancer has also been raised. Therefore, efforts have been made to solve the toxicity problem of tamoxifen by co-administration of various drugs including antioxidants, and various effects of overcoming resistance and synergistic effects by co-administration have also been attempted.

한편 자음강화탕은 한의학에서 부인과 질환에 빈번히 사용되고 있는 대표적인 보음지제로, 감초(甘草), 당귀(當歸), 대추나무(大棗), 맥문동(麥門冬), 삽주(白朮), 작약(芍藥), 지모(知母), 생지황(生地黃), 진피(陳皮), 황백(黃柏), 생강(生薑) 및 천문동(天門冬)의 총 12종의 천연물로 구성된 복합처방이다. 현재 항염 및 면역 활성 효과가 알려져 있고, 특히 최근 자음강화탕의 tamoxifen의 부작용 경감 효과가 보고된바 있다(Zheng et al, 2010).
On the other hand, Jaumganghwatang is one of the most commonly used vomit papers for gynecological diseases in oriental medicine. Licorice, Danggui, Jujube, Daemun, Macmun-dong, Sapju, Peony, It is a complex prescription consisting of 12 kinds of natural products such as Jimo (知母), Saengjihwang (生地黄), Jinpi (陳皮), Hwangbaek (黃柏), Ginger (生薑) and Cheonmundong (天 (). Currently, anti-inflammatory and immune activity effects are known, and in particular, recently, the side effects of tamoxifen of Zaumganghwatang have been reported to reduce side effects (Zheng et al, 2010).

본 발명은 상기와 같은 종래 기술상의 요구를 해결하기 위해 안출된 것으로, 자음강화탕을 항암제와 병용 투여하여, 항암치료 효과가 증대되고, 부작용이 경감된 유방암 치료용 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been made to solve the above-mentioned demands of the prior art, and an object of the present invention is to provide a composition for treating breast cancer by increasing the anti-cancer treatment effect and reducing side effects by administering a Jaumganghwatang in combination with an anticancer agent.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
However, the technical problem to be solved by the present invention is not limited to the above-mentioned problems, and other matters not mentioned can be clearly understood by those skilled in the art from the following description.

상기 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 항암제 및 자음강화탕을 포함하는 유방암 치료용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a composition for the treatment of breast cancer comprising an anticancer agent and Jaumganghwatang.

본 발명의 일 구현예로, 상기 항암제는 타목시펜(tamoxifen)인 것을 특징으로 한다.In one embodiment of the invention, the anticancer agent is characterized in that tamoxifen (tamoxifen).

본 발명의 다른 구현예로, 상기 자음강화탕은 감초, 당귀, 대추나무, 맥문동, 삽주, 작약, 지모, 생지황, 진피, 황백, 생강, 및 천문동을 포함하는 것을 특징으로 한다.In another embodiment of the present invention, the Jaesumganghwatang is characterized in that it comprises licorice, Angelica, jujube, Magmun-dong, shovel, peony, jimo, raw jihwang, dermis, yellowish white, ginger, and astronomical dong.

본 발명의 다른 구현예로, 상기 항암제 및 자음강화탕은 사전에 혼합되어 제형화되거나, 별도로 제형화 되는 것을 특징으로 한다.In another embodiment of the present invention, the anticancer agent and the Jaumganghwatang is formulated by mixing in advance, or characterized in that it is formulated separately.

본 발명의 또다른 구현예로, 상기 항암제 및 자음강화탕은 비경구, 경구, 부위한정(locoregionally), 또는 경피적으로 투여되는 것을 특징으로 한다.In another embodiment of the present invention, the anticancer agent and the Jaumganghwatang is characterized by being administered parenterally, orally, locoregionally, or transdermally.

본 발명의 또다른 구현예로, 상기 자음강화탕의 투여기간은 상기 항암제 투여 후 30분 이내에 시작되는 것을 특징으로 한다.
In another embodiment of the present invention, the period of administration of the Jaesumganghwatang is characterized in that it begins within 30 minutes after the administration of the anticancer agent.

본 발명에서 제공하는 자음강화탕을 포함하는 유방암 치료용 조성물은, 항암제와 병용 투여되어, 항암 효과를 증진시키는 효과가 있다.The composition for the treatment of breast cancer containing the Jaumganghwatang provided by the present invention is administered in combination with an anticancer agent, thereby improving the anticancer effect.

또한, 본 발명의 조성물은, 항암제를 단독투여하여 항암치료할 경우, 빈혈, 간질환, 악액질 등의 부작용을 가지고 있었던 종래 기술상의 문제를 해결할 수 있는 새로운 대체 수단으로 이용될 수 있다.
In addition, the composition of the present invention can be used as a new alternative means that can solve the problems of the prior art that had side effects such as anemia, liver disease, cachexia when the anticancer treatment is administered alone.

도 1은 본 발명에서 사용한 타목시펜의 구조식을 나타낸 도면이다.
도 2는 자음강화탕을 5분 이내에 단회 경구 병용투여할 경우의 혈중 타목시펜 농도의 변화를 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 3은 자음강화탕의 단회 경구 병용투여하는 경우의 Tmax, Cmax, AUC, t1 /2, 및 MRTinf 값을 타목시펜 단독 투여한 경우와 비교한 결과를 나타낸 도면이다.
도 4는 tamoxifen 또는 tamoxifen+자음강화탕을 초회 투여한 경우(A)와 마지막 8회까지 tamoxifen 또는 tamoxifen+자음강화탕을 경구 투여한 경우(B)의 혈중 타목시펜 함량을 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 5는 자음강화탕의 6일 반복 전투여 및 5분 이내 8일 반복 병용투여하는 경우의 Tmax, Cmax, AUC, t1 /2, 및 MRTinf 값을 타목시펜을 단독 투여한 경우와 비교한 결과를 나타낸 도면이다.
도 6은 자음강화탕 투여시의 세포 생존율 산출 결과를 나타낸 도면이다.
도 7은 종양이식 대조군과 정상매체 대조군의 체중 및 증체량의 변화를 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 8 및 9는 Tamoxifen 단독 투여군과 자음강화탕 병용투여군에 대하여 종양의 부피 및 중량의 변화를 관찰한 결과를 나타낸 도면이다.
도 10은 각 군에 대한 IL-6 및 IF-γ 함량의 변화량을 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 11은 각 군에 따른 비장 및 복강에서의 NK cell 활성의 변화를 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 12는 각 군에 따른 비장의 사이토카인 함량을 측정한 결과를 나타낸 도면이다.
도 13은 각 군에 따른 종괴의 조직병리학적 변화를 관찰한 결과를 나타낸 도면이다.
도 14는 각 군에 따른 종괴에서의 caspase-3 면역반응세포를 관찰한 결과를 나타낸 도면이다.
도 15는 각 군에 따른 종괴에서의 PARP 면역반응세포를 관찰한 결과를 나타낸 도면이다.
도 16은 각 군에 따른 종괴에서의 TNF-α 면역반응세포를 관찰한 결과를 나타낸 도면이다.
도 17은 비장의 조직병리학적 변화를 육안으로 관찰한 결과를 나타낸 도면이다.
도 18은 각 군에 따른 악하 임파절의 조직병리학적 변화를 육안으로 확인한 결과를 나타낸 도면이다.
도 19는 각 군에 따른 악하 임파절에서의 TNF-α 면역반응세포를 관찰한 결과이다.
도 20은 난소주위 축적 지방의 조직병리학적 변화를 관찰한 결과를 나타낸 도면이다.1 is a view showing the structural formula of the tamoxifen used in the present invention.
2 is a view showing the results of measuring the change in blood tamoxifen concentration when a single oral combined administration within 5 minutes.
3 is a view showing a result of comparing the Tmax, Cmax, AUC, t 1 /2, and MRT inf value in the case of co-administration of a single oral jaeumganghwatang as in the case of tamoxifen administration alone.
4 is a diagram showing the results of measuring the blood tamoxifen content in the case of first administration of tamoxifen or tamoxifen + jaumganghwatang (A) and the oral administration of tamoxifen or tamoxifen + jaumganghwatang up to the last eight times (B).
Figure 5 is showing the results of comparison in the case of 6-day repeated battle over and within 5 minutes 8-day repeated combination Tmax, Cmax, AUC, t 1 /2, and MRT inf value in the case of administering the jaeumganghwatang a single administration of tamoxifen Drawing.
6 is a diagram showing the results of calculating the cell viability upon administration of Jaumganghwatang.
7 is a view showing the results of measuring the change in body weight and weight gain of tumor transplantation control group and normal medium control group.
8 and 9 show the results of observing the change in the volume and weight of the tumor in the Tamoxifen alone administration group and the Jaumganghwatang combined administration group.
10 is a view showing the results of measuring the amount of change in the IL-6 and IF-γ content for each group.
11 is a view showing the results of measuring the change in NK cell activity in the spleen and abdominal cavity according to each group.
12 is a view showing the results of measuring the cytokine content of the spleen according to each group.
13 is a view showing the results of observing histopathological changes of the mass according to each group.
14 is a diagram showing the results of observing caspase-3 immune response cells in the mass according to each group.
15 shows the results of observing PARP immune-responsive cells in the mass according to each group.
Fig. 16 shows the results of observing TNF-α immune response cells in masses according to each group.
17 is a diagram showing the results of visual observation of histopathological changes of the spleen.
18 is a diagram showing the results of visual confirmation of histopathological changes of submandibular lymph nodes according to each group.
19 shows the results of observing TNF-α immune response cells in the submandibular lymph nodes according to each group.
20 is a diagram showing the results of observing histopathological changes of the accumulated ovarian fat.

본 발명자들은 유방암 치료를 위해 타목시펜(tamoxifen)을 투여할 경우 나타나는 악액질과 같은 여러가지 부작용들을 완화시킬 수 있으면서도, 항암 치료의 효과를 보다 증가시킬 수 있는 조성물을 개발하고자, 한약재에 주목하게 되었고, 상기 한약재 중 자음강화탕에 뛰어난 항암치료 증진 효과가 있다는 것을 확인하여, 본 발명을 완성하게 되었다.The present inventors have focused on herbal medicines to develop a composition that can alleviate various side effects such as cachexia when tamoxifen is administered for the treatment of breast cancer, and further increase the effect of anticancer treatment. It was confirmed that there is an excellent anti-cancer treatment enhancement effect in the Jaesumganghwatang, to complete the present invention.

따라서 본 발명은 항암제(antitumor agent) 및 자음강화탕을 포함하는 유방암 치료용 조성물을 제공하는 것을 그 목적으로 한다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a composition for treating breast cancer, which comprises an antitumor agent and a Jaumganghwatang.

본 발명의 일구현예로, 상기 항암제는 종양성 질환에 사용되는 것이라면 제한이 없으나, 특히 유방암 치료에 이용되는 항암제로, 타목시펜(tamoxifen)이 이용될 수 있다.In one embodiment of the present invention, the anticancer agent is not limited as long as it is used for tumorous diseases, in particular, as an anticancer agent used to treat breast cancer, tamoxifen (tamoxifen) may be used.

본 발명의 다른 구현예로, 상기 자음강화탕은 감초, 당귀, 대추나무, 맥문동, 삽주, 작약, 지모, 생지황, 진피, 황백, 생강, 및 천문동을 포함한다.In another embodiment of the present invention, the Jaesumganghwatang includes licorice, Angelica, jujube tree, mammundong, shochu, peony, jimyeo, raw jihwang, dermis, baekbaek, ginger, and astronomical dong.

본 발명의 또다른 구현예로, 상기 항암제 및 자음강화탕은 사전에 혼합되어 제형화 되거나, 별도로 제형화 될 수 있다.In another embodiment of the present invention, the anticancer agent and Jaumganghwatang may be formulated by mixing in advance, or may be formulated separately.

상기 자음강화탕의 투여 기간은 상기 항암제의 투여 후 30분 이내에 수행될 수 있고, 바람직하게는 15분 이내에 수행되어야 하며, 가장 바람직하게는 5분 이내에 수행되는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.The administration period of the Jaumganghwatang may be performed within 30 minutes after the administration of the anticancer agent, preferably within 15 minutes, and most preferably within 5 minutes, but is not limited thereto.

상기 항암제 및 자음강화탕은 비경구, 경구, 부위한정(locoregionally), 또는 경피적으로 투여될 수 있다. 상기 자음강화탕은 경구 투여되는 것이 바람직하나, 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 및 기간 등에 따라, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.The anticancer agent and Jaumganghwatang may be administered parenterally, orally, locoregionally, or percutaneously. The Jaumganghwatang is preferably administered orally, but may be appropriately selected by those skilled in the art according to the condition and weight of the patient, the severity, and the duration of the patient.

본 발명에서 ‘개체’ 란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간, 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 쥐(rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유동물을 의미한다.As used herein, 'individual' means a subject in need of treatment for a disease, and more specifically, a human or non-human primate, mouse, rat, dog, cat, horse, and cow It means a mammal such as.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용 가능한 담체는 생리식염수, 폴리에틸렌글리콜, 에탄올, 식물성 오일, 및 이소프로필미리스테이트 등을 포함할 수 있으며, 이에 한정되지는 않는다.The compositions of the present invention may comprise a pharmaceutically acceptable carrier. The pharmaceutically acceptable carrier may include, but is not limited to, physiological saline, polyethylene glycol, ethanol, vegetable oil, and isopropyl myristate.

본 발명의 일구현예에 있어서, 상기 치료용 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물 형태, 투여경로, 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직하게는, 1일 0.001 내지 300 mg/체중kg으로, 보다 바람직하게는 0.01 내지 200 mg/체중kg으로 투여한다.In one embodiment of the present invention, the preferred dosage of the therapeutic composition depends on the condition and weight of the patient, the extent of the disease, the drug form, the route of administration, and the duration, and may be appropriately selected by those skilled in the art. Preferably, however, it is administered at 0.001 to 300 mg / kg body weight per day, more preferably 0.01 to 200 mg / kg body weight.

본 발명의 유방암 치료용 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여방법에는 제한이 없으며, 예를 들면, 경구, 직장, 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막, 또는 뇌혈관(intra cerbroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
The composition for treating breast cancer of the present invention can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, humans by various routes. The method of administration is not limited and can be administered, for example, orally, rectally, or by intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine, or intra-cerebroventricular injection.

본 발명의 항암제 및 자음강화탕을 포함하는 유방암 치료용 조성물은 항암 치료 효과를 증대시킬 수 있는 동시에, 기존에 항암제를 단독 투여하였을 경우에 야기되었던 여러 가지 부작용들을 완화시킬 수 있는 효과가 있다.
The composition for treating breast cancer including the anticancer agent and the Jaumganghwatang of the present invention can enhance the anticancer treatment effect, and at the same time, can alleviate various side effects caused when the anticancer agent is administered alone.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in order to facilitate understanding of the present invention. However, the following examples are provided only for the purpose of easier understanding of the present invention, and the present invention is not limited by the following examples.

[[ 실시예Example ]]

실시예Example 1.  One. TamoxifenTamoxifen 의 약물 동력(Drug power of pharmacokineticspharmacokinetics )에 미치는 ) 자음강화탕의Consonant 영향평가 - 5분 이내  Impact Assessment-within 5 minutes 단회One time 경구 병용투여 Oral Concomitant Administration

1-1. 재료준비1-1. Material preparation

Tamoxifen citrate는 Hangzhou Tacon Co., Ltd(Hangzhou, China)로부터 구입하여 사용하였으며, 그 구조를 도 1에 나타내었다.Tamoxifen citrate was purchased from Hangzhou Tacon Co., Ltd (Hangzhou, China) and used. The structure is shown in FIG.

자음강화탕은 한풍제약(Seoul, Korea)으로부터 구매하여 사용하였고, 그 성분과 양은 하기 표 1과 같다. 하기 실시예 2 및 3에서 사용하는 자음강화탕과 타목시펜 또한 본 실시예 1에서 사용하는 것과 동일한 것이다.
Jaumganghwatang was purchased from Hanpung Pharmaceutical (Seoul, Korea) and used, and its components and amounts are shown in Table 1 below. The Jaumganghwatang and tamoxifen used in Examples 2 and 3 below are also the same as those used in Example 1.

HerbsHerbs Scientific Names/ Produce RegionScientific Names / Produce Region Amounts (g)Amounts (g) Glycyrrhizae RhizomaGlycyrrhizae Rhizoma Glycyrrhiza uralensis Fisch(감초) Glycyrrhiza uralensis Fisch 0.500.50 Angelicae Gigantis RadixAngelicae Gigantis Radix Angelica gigas Nakai(당귀) Angelica gigas Nakai 0.830.83 Zizyphi FructusZizyphi Fructus Zizyphus jujuba var. inermis (Bunge) Rehder(대추나무) Zizyphus jujuba var. inermis (Bunge) Rehder 0.330.33 Liriopis TuberLiriopis Tuber Liriope platyphylla Wang et Tang(맥문동) Liriope platyphylla Wang et Tang 0.830.83 Atractylodis Rhizoma AlbaAtractylodis Rhizoma Alba Atractylodes ovata (Thunb.) DC.(삽주) Atractylodes ovata (Thunb.) DC. 1.001.00 Paeoniae RadixPaeoniae radix Paeonia lactiflora Pall.(작약) Paeonia lactiflora Pall. 0.830.83 Anemarrhenae RhizomaAnemarrhenae Rhizoma Anemarrhena asphodeloides Bunge(지모) Anemarrhena asphodeloides Bunge 0.500.50 Rehmanniae Radix CrudusRehmanniae Radix Crudus Rehmannia glutinosa var . purpurea (Makino) Makino & Nemoto(생지황) Rehmannia glutinosa there is . purpurea (Makino) Makino & Nemoto 0.830.83 Citri Unshii PericarpiumCitri Unshii Pericarpium Citrus unshiu S.Marcov.(진피) Citrus unshiu S. Marcov. (dermis) 0.830.83 Phellodendri CortexPhellodendri Cortex Phellodendron amurense Ruprecht(황백) Phellodendron amurense Ruprecht 0.500.50 Zingiberis Rhizoma CrudusZingiberis Rhizoma Crudus Zingiber officinale Roscoe(생강) Zingiber officinale Roscoe (ginger) 0.330.33 Asparagi TuberAsparagi Tuber Asparagus cochinchinensis (Lour.) Merr.(천문동) Asparagus cochinchinensis (Lour.) Merr. 0.830.83 TotalTotal 12 types12 types 8.148.14

1-2. 실험 동물 준비1-2. Experimental animal preparation

본 실시예에서는 실험 동물로 Male SD 랫트(SLC, Japan)를 선택하여 사용하였다. 10마리의 마우스를 입수하여, 총 2개군으로 군 당 5마리로 하여 Tamoxifen 50mg/kg 단독 투여군과 Tamoxifen 50mg/kg 및 자음강화탕 100mg/kg 투여군으로 나누어 실험을 진행하였다.
In this example, male SD rats (SLC, Japan) were selected and used as experimental animals. Ten mice were obtained and divided into two groups, 5 mice per group, divided into Tamoxifen 50mg / kg alone group, Tamoxifen 50mg / kg, and Jaumganghwatang 100mg / kg administration group.

1-3. 투여방법1-3. Dosing method

50mg/kg의 tamoxifen (Hangzhou Tacon Co., Ltd, Hangzhou, China)을 멸균 증류수에 용해 시켜, 5ml/kg의 용량으로 단회 경구 투여하였으며, tamoxifen 투여 5분 이내에 자음강화탕 100mg/kg을 멸균 증류수에 용해시켜, 동일한 용량으로 단회 경구 투여하였다. 한편 tamoxifen 단독 투여군에서는 자음강화탕 대신 동일한 용량의 멸균 증류수만 단회 경구투여하였다.50 mg / kg of tamoxifen (Hangzhou Tacon Co., Ltd, Hangzhou, China) was dissolved in sterile distilled water and administered once orally at a dose of 5 ml / kg, and 100 mg / kg of Jaum Ganghwatang was dissolved in sterile distilled water within 5 minutes of tamoxifen administration. , Single oral administration at the same dose. Meanwhile, in the tamoxifen alone group, sterile distilled water of the same dose was administered orally once instead of Jaumganghwatang.

약물 투여전 30분, 투여 후 30분, 1, 2, 3, 4, 6, 8 및 24시간에 안와 정맥총으로부터 약 0.5ml의 전혈을 50IU의 heparin (Sigma, MO, USA)이 처리된 tube를 이용하여 채취하였고, 채취 직후 13,000rpm에 10분간 원심분리하여, 혈장을 분리하였다. 분리한 혈장은 -70℃에 LC-MS/MS 분석 전까지 보관하였다.
30 minutes before drug administration, 30 minutes after administration, 1, 2, 3, 4, 6, 8, and 24 hours, approximately 0.5 ml of whole blood was injected from the orbital vena cava treated with 50 IU of heparin (Sigma, MO, USA). It was collected by using, centrifuged at 13,000rpm for 10 minutes immediately after collection, and plasma was separated. The separated plasma was stored at -70 ℃ until LC-MS / MS analysis.

1-4. 혈중 1-4. Blood TamoxifenTamoxifen 농도의 변화 확인 Confirmation of concentration change

분리한 plasma에서 Carbamazepine (Sigma, MO, USA)을 internal standard로 사용하여, tamoxifen의 농도를 LC-MS/MS 방법으로 각각 측정하였다. Chromatographic 분석은 Agilent 1100 Series HPLC (Agilent Technologies, CA, USA)를 이용하였으며, column effluent는 API 2000 triple-quadruple mass-spectometric detector (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)를 이용하여 분석하였다.Using carbamazepine (Sigma, MO, USA) as an internal standard in the separated plasma, the concentration of tamoxifen was measured by LC-MS / MS method, respectively. Chromatographic analysis was performed using Agilent 1100 Series HPLC (Agilent Technologies, CA, USA), and column effluent was analyzed using an API 2000 triple-quadruple mass-spectometric detector (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA).

상기에서 사용한 HPLC 조건은 하기와 같다:The HPLC conditions used above are as follows:

Column: Waters Xterra MS C18 (2.1×50mm, 3.5μm) (Waters Corp., MA, USA)Column: Waters Xterra MS C18 (2.1 × 50mm, 3.5μm) (Waters Corp., MA, USA)

Column Oven: 30℃Column Oven: 30 ℃

Mobile phase: Linear gradient from 5% acetonitrile/95% distilled water (0.1% formic acid) to 95% acetonitrile/5% distilled water (0.1% formic acid)Mobile phase: Linear gradient from 5% acetonitrile / 95% distilled water (0.1% formic acid) to 95% acetonitrile / 5% distilled water (0.1% formic acid)

Flow rate: 0.35 ml/minFlow rate: 0.35 ml / min

Injection Volume: 5.0μlInjection Volume: 5.0μl

LC-MS/MS 방법은 하기와 같다:LC-MS / MS method is as follows:

Ion source: Turbo Ion Spray (400℃)Ion source: Turbo Ion Spray (400 ℃)

Polarity: PositivePolarity: Positive

The multiple reaction monitoring (MRM): Carbamazepine (IS) = m/z 237>194 (Retention time: 2.4 min), tamoxifen = 372>72 (Retention time: 2.3 min)The multiple reaction monitoring (MRM): Carbamazepine (IS) = m / z 237> 194 (Retention time: 2.4 min), tamoxifen = 372> 72 (Retention time: 2.3 min)

Standard Curve: Analyst 1.4.2, Quadratic (1/x, no Iterate)
Standard Curve: Analyst 1.4.2, Quadratic (1 / x, no Iterate)

그 결과, Tamoxifen 또는 tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 각각 투여 30분 후부터 혈중에서 tamoxifen 이 검출되기 시작하여, 투여후 24시간까지 검출되었다. 또한 tamoxifen 단독 투여군과 비교하여 tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서 인정된 투여 30분 및 1시간 후의 유의성 없는 혈중 tamoxifen 농도의 증가를 포함하여, 의미있는 혈중 tamoxifen 농도의 변화는 인정되지 않았다 (도 2). As a result, in the Tamoxifen or tamoxifen + Jaumganghwatang administration group, tamoxifen was detected in the blood from 30 minutes after administration, and up to 24 hours after administration. In addition, significant changes in blood tamoxifen concentrations were not recognized, including significant increase in blood tamoxifen concentrations 30 minutes and 1 hour after the admitted group in the tamoxifen + Zaumganghwatang administration group compared to the tamoxifen alone group (FIG. 2).

Tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 투여 후 30분, 투여 후 1, 2, 3, 4, 6, 8 및 24시간의 혈중 tamoxifen 농도가 tamoxifen 단독 투여군에 비해 각각 26.53, 49.94, -6.49, -3.76, -6.59, -13.04, -15.36 및 -8.81%의 변화를 나타내었다.
In the group treated with Tamoxifen + Jaumganghwatang, the blood tamoxifen concentrations at 30 minutes, 1, 2, 3, 4, 6, 8, and 24 hours after administration were 26.53, 49.94, -6.49, -3.76, -6.59, Changes of -13.04, -15.36 and -8.81%.

1-5. 1-5. TmaxTmax 의 변화 확인The change in

Tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 tamoxifen의 혈중 Tmax가 4.80±1.10hr로 관찰되어, tamoxifen 단독 투여군의 5.60±2.19hr에 비해 -14.29%의 유의성 없는 경미한 감소를 나타내었다(도 3).
Tamoxifen + Zaumganghwatang administration group was found to have a Tmax of 4.80 ± 1.10 hr in tamoxifen group, showing a slight insignificant decrease of -14.29% compared to 5.60 ± 2.19 hr in the tamoxifen alone group (FIG. 3).

1-6. 1-6. CmaxCmax 의 변화 확인The change in

Tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 tamoxifen의 혈중 Cmax가 345.00±46.69ng/ml로, tamoxifen 단독 투여군의 364.20±121.77ng/ml에 비해 -5.27%의 유의성 없는 경미한 감소를 나타내었다(도 3).
Tamoxifen + Zaumganghwatang administration group showed a Tamoxifen blood Cmax of 345.00 ± 46.69 ng / ml, a slight decrease of -5.27% compared to 364.20 ± 121.77 ng / ml of the tamoxifen alone group (Fig. 3).

1-7. 1-7. AUCAUC 의 변화 확인The change in

Tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 혈중 tamoxifen AUC0 -t및 AUC0 - inf가 각각 4.73±0.85 및 6.30±2.07hr·μg/ml로, tamoxifen 단독 투여군의 5.27±1.79 및 6.86±2.92hr·μg/ml에 비해 AUC0 -t및 AUC0 - inf가 각각 -10.37 및 -8.16%의 유의성 없는 감소를 나타내었다(도 3).
In the group treated with Tamoxifen + Jaumganghwatang, the blood tamoxifen AUC 0 -t and AUC 0 - inf were 4.73 ± 0.85 and 6.30 ± 2.07hr · μg / ml, respectively, compared to 5.27 ± 1.79 and 6.86 ± 2.92hr · μg / ml of the tamoxifen alone group. AUC 0- t and AUC 0 - inf showed significant decreases of -10.37 and -8.16%, respectively (Figure 3).

1-8. 1-8. tt 1One /2/2 의 변화 확인The change in

Tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 tamoxifen의 혈중 t1 /2가 10.91±3.99hr 로, tamoxifen 단독 투여군의 9.56±4.16hr에 비해 14.16%의 유의성 없는 감소를 나타내었다(도 3).
Tamoxifen + jaeumganghwatang treated in a plasma t 1/2 of tamoxifen 10.91 ± 3.99hr, it showed no significant reduction of 14.16% compared to tamoxifen 9.56 ± 4.16hr a single group (Figure 3).

1-9. 1-9. MRTMRT infinf 의 변화 확인The change in

Tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 tamoxifen의 혈중 MRTinf가 16.02±5.60hr로, tamoxifen 단독 투여군의 14.87±6.29hr에 비해 7.75%의 유의성 없는 경미한 증가를 나타내었다(도 3).
The Tamoxifen + Zaumganghwatang administration group showed an insignificant and slight increase in blood MRT inf of tamoxifen to 16.02 ± 5.60hr, 7.75% compared to 14.87 ± 6.29hr in the tamoxifen alone group (FIG. 3).

실시예 1의 결과를 종합해볼 때, 자음강화탕의 5분 이내 단회 병용투여시에는 tamoxifen의 흡수 및 배설에 별 다른 영향을 미치지 않는 것으로 관찰되었으나, 좀더 명확한 자음강화탕과 tamoxifen의 약물상호 작용을 평가하기 위해서는 자음강화탕 반복 전투여후 tamoxifen의 약물동력학에 미치는 영향을 일정 기간의 반복 병용 투여 후, tamoxifen의 약물동력학에 미치는 영향을 평가해야 할 것으로 판단된다.
In summary, the results of Example 1 were observed to have little effect on the absorption and excretion of tamoxifen in a single concomitant administration of Jaumganghwatang within 5 minutes.However, in order to evaluate the drug interactions of tamoxifen more clearly, Jaumganghwatang The effects of tamoxifen on the pharmacokinetics after repeated battles should be evaluated after a period of repeated co-administration.

실시예Example 2.  2. TamoxifenTamoxifen 의 약물동력 (Pharmacological power of pharmacokineticspharmacokinetics )에 미치는 ) 자음강화탕의Consonant 영향 평가 -  Impact Assessment- 자음강화탕Consonant Ganghwatang 6일 반복 경구 전투여 및  6-day repeated oral battle 5분이내In 5 minutes 8일 반복 병용 경구투여  8-day repeated combination oral administration

2-1. 실험 동물 준비2-1. Experimental animal preparation

본 실시예 2에서는 실험 동물로 Male SD 랫트(SLC, Japan)를 선택하여 사용하였다. 10마리의 마우스를 입수하여, 총 2개군으로 군 당 5마리로 하여 Tamoxigen 50mg/kg 단독 투여군과 Tamoxifen 50mg/kg 및 자음강화탕 100mg/kg 투여군으로 나누어 실험을 진행하였다.
In Example 2, Male SD rats (SLC, Japan) were selected and used as experimental animals. Ten mice were obtained and divided into two groups, 5 mice per group, divided into a Tamoxigen 50 mg / kg alone group, a Tamoxifen 50 mg / kg group, and a Jaumganghwatang 100 mg / kg group.

2-2. 투여방법2-2. Dosing method

100mg/kg의 자음강화탕을 멸균 증류수에 용해 시켜, 5ml/kg의 용량으로 매일 1회씩 14일간 반복 경구 투여하였으며, 자음강화탕 투여시작 6일 후부터 50mg/kg의 tamoxifen (Hangzhou Tacon Co., Ltd, Hangzhou, China)을 멸균 증류수에 용해 시켜, 5ml/kg의 용량으로 매일 1회씩 8일간 반복 경구 투여하였다. 자음강화탕 전투여 후 병용 투여군에서는 tamoxifen 투여 후 5분 이내에 자음강화탕 100mg/kg 경구 투여하였고, tamoxifen 단독 투여군에서는 자음강화탕 전투여기간 및 병용 투여기간 동안 자음강화탕 대신 동일한 용량의 멸균 증류수만을 투여하였다. 100mg / kg of Jaumganghwatang was dissolved in sterile distilled water and repeatedly administered orally once daily for 14 days at a dose of 5ml / kg. ) Was dissolved in sterile distilled water and repeatedly administered orally once daily for 8 days at a dose of 5 ml / kg. In the concomitant group after the battle of Jhamganghwatang, 100mg / kg of Jaumganghwatang was administered orally within 5 minutes after tamoxifen administration, and the same dose of sterile distilled water was administered in the tamoxifen-only group instead of Jhamganghwatang during the combat period and concomitant administration.

Tamoxifen 초회 및 마지막 8회 투여전 30분, 투여 후 30분, 1, 2, 3, 4, 6, 8 및 24시간에 각각 안와 정맥총으로 부터 약 0.5ml의 전혈을 50IU의 heparin (Sigma, MO, USA)이 처리된 tube를 이용하여 채취하였고, 채취 직후 13,000rpm에 10분간 원심분리하여, 혈장을 분리하였다. 분리한 혈장은 -70℃ 에 LC-MS/MS 분석 전까지 보관하였다.
Approximately 0.5 ml of whole blood from the orbital venous plexus was injected 30 min before the first and last 8 doses of tamoxifen, 30 min, 1, 2, 3, 4, 6, 8 and 24 h, respectively, with 50 IU of heparin (Sigma, MO, USA) was collected using the treated tube, and plasma was separated by centrifugation at 13,000 rpm for 10 minutes immediately after the collection. The separated plasma was stored at -70 ° C until LC-MS / MS analysis.

2-3. 혈중 2-3. Blood TamoxifenTamoxifen 농도의 변화 확인 Confirmation of concentration change

혈중 농도 분석에 이용하는 방법, HPLC조건, LC-MS/MS 조건은 상기 실시예 1과 같다.The method used for blood concentration analysis, HPLC conditions, LC-MS / MS conditions are the same as in Example 1.

자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 초회 및 마지막 8회 경구투여한 tamoxifen 또는 tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 각각 투여 30분 후부터 혈중에서 tamoxifen이 검출되기 시작하여, 투여후 24시간까지 검출되었다. 또한 자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 초회 및 마지막 8회 경구투여한 tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 tamoxifen 단독 투여군과 비교하여, 투여 후 30분 또는 1시간에 혈중 tamoxifen의 함량이 유의성 없는 경미한 증가가 관찰된 이외에 의미 있는 혈중 tamoxifen 농도의 변화는 인정되지 않았다 (도 4). In tamoxifen or tamoxifen + jaumganghwatang administration group, which were first treated with or after tamoxifen after the battle of Jaumganghwa-tang, tamoxifen was detected in the blood from 30 minutes after administration, and detected until 24 hours after administration. In addition, in the tamoxifen + Zaumganghwatang administration group, which was the first and last 8 oral administrations of tamoxifen after combating the Jaumganghwa-tang, compared with the tamoxifen-only group, there was no significant increase in blood tamoxifen content at 30 minutes or 1 hour after administration. No change in blood tamoxifen concentration was recognized (FIG. 4).

자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 초회 경구투여 후, tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 투여 후 30분, 투여 후 1, 2, 3, 4, 6, 8 및 24시간의 혈중 tamoxifen 농도가 tamoxifen 단독 투여군에 비해 각각 9.95, 16.43, 3.22, 9.26, -11.05, -1.26, 0.22 및 0.53%의 변화를 나타내었다.After tamoxifen oral administration of tamoxifen, the tamoxifen concentration in the tamoxifen + Zaumganghwatang administration group was 9.95 compared to the tamoxifen-only group compared to the tamoxifen alone group for 30 minutes, 1, 2, 3, 4, 6, 8 and 24 hours after administration. , 16.43, 3.22, 9.26, -11.05, -1.26, 0.22 and 0.53%.

자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 8회 반복 병용 경구투여 후, tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 투여 후 30분, 투여 후 1, 2, 3, 4, 6, 8 및 24시간의 혈중 tamoxifen 농도가 tamoxifen 단독 투여군에 비해 각각 14.93, 15.95, -4.73, -7.79, -6.95, 1.28, -8.41 및 -3.69%의 변화를 나타내었다.Tamoxifen after 8 times combined oral administration of tamoxifen after the battle of Jaumganghwa-tang, the blood tamoxifen concentration of 1, 2, 3, 4, 6, 8 and 24 hours in the tamoxifen + Zaumganghwatang administration group was administered to tamoxifen alone group. Compared with 14.93, 15.95, -4.73, -7.79, -6.95, 1.28, -8.41 and -3.69%, respectively.

2-4. 2-4. TmaxTmax 의 변화 확인The change in

Tmax의 변화 자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 초회 경구투여 후, tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 tamoxifen의 혈중 Tmax가 2.80±1.30hr로 관찰되어, tamoxifen 단독 투여군의 3.60±0.00hr에 비해 -22.22%의 유의성 없는 감소를 나타내었으나, 자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 8회 반복 병용 경구투여 후는, tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 tamoxifen의 혈중 Tmax가 3.80±0.45hr로, tamoxifen 단독 투여군의 3.40±0.89hr에 비해 11.76%의 경미한 유의성 없는 증가를 나타냈다 (도 5).
Changes in Tmax After the first oral administration of tamoxifen after combating Jaumganghwa-tang, tamoxifen + Zaumganghwa-tang showed a T80 of 2.80 ± 1.30hr in the tamoxifen group, a significant decrease of -22.22% compared to 3.60 ± 0.00hr in the tamoxifen alone group. However, after oral administration of tamoxifen in combination with eight repeated doses of tamoxifen after fighting battles with tamoxifen, the tamoxifen + Zaumganghwatang administration group had a Tmax of 3.80 ± 0.45hr in blood and 11.76% of the tamoxifen alone group, compared with 3.40 ± 0.89hr. There was no significant increase (FIG. 5).

2-5. 2-5. CmaxCmax 의 변화 확인The change in

자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 초회 경구투여 후, tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 tamoxifen의 혈중 Cmax가 0.32±0.17μg/ml로, tamoxifen 단독 투여군의 0.28±0.16μg/ml 에 비해 17.39%의 유의성 없는 증가를 나타내었으나, 자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 8회 반복 병용 경구투여 후에도 tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서 tamoxifen의 혈중 Cmax가 0.70±0.17μg/ml로, tamoxifen 단독 투여군의 0.77±0.22μg/ml에 비해 -9.54%의 유의성 없는 감소를 나타내었다 (도 5).
After the first oral administration of tamoxifen after the battle of Jaumganghwa-tang, tamoxifen + Zaumganghwatang-administered group showed a C.C.max of 0.32 ± 0.17μg / ml compared with 0.28 ± 0.16μg / ml of the tamoxifen alone group, which was 17.39%. However, tamoxifen + Zaumganghwatang administration group had a Cmax of 0.70 ± 0.17μg / ml in the tamoxifen + Zaumganghwatang administration group, which was -9.54% compared to 0.77 ± 0.22μg / ml in the tamoxifen alone group. There was no significant reduction (FIG. 5).

2-6. 2-6. AUCAUC 의 변화 확인The change in

자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 초회 경구투여 후, tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 혈중 tamoxifen AUC0 -t 및 AUC0 - inf 가 각각 3.70±2.22 및 4.88±4.09hr·μg/ml로, tamoxifen 단독 투여군의 3.23±1.79 및 4.86±2.87hr·μg/ml 에 비해 각각 14.32 및 0.40%의 유의성 없는 경미한 증가를 나타내었으며, 자음강화탕 전투여후 tamoxifen을 8회 반복 병용경구투여 한 경우에도, tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 혈중 tamoxifen 의 AUC0 -t 및 AUC0 - inf 가 각각 12.11±3.24 및 19.60±2.60hr·μg/ml로 관찰되어, tamoxifen 단독 투여군의 12.39±2.66 및 21.50±3.04hr·μg/ml에 비해 각각 -2.26 및 -8.83%의 의미 없는 경미한 감소를 나타내었다 (도 5).
After the first oral administration of tamoxifen after the battle of Jaumganghwa-tang, tamoxifen + Jaumganghwatang-administered group showed that tamoxifen AUC 0 -t and AUC 0 - inf were 3.70 ± 2.22 and 4.88 ± 4.09hr · μg / ml, respectively, and 3.23 ± of tamoxifen alone. A significant increase of 14.32 and 0.40% was found in comparison with 1.79 and 4.86 ± 2.87hr · μg / ml, respectively, and the tamoxifen A-group of tamoxifen in the blood treated with tamoxifen + Zaum-ganghwa-tang, even after 8 consecutive combined oral administrations of tamoxifen after the battle of Jaumganghwa-tang. 0 -t and AUC 0 - inf were observed at 12.11 ± 3.24 and 19.60 ± 2.60hr · μg / ml, respectively, compared to -2.26 and -8.83 compared to 12.39 ± 2.66 and 21.50 ± 3.04hr · μg / ml of tamoxifen alone. An insignificant minor decrease of% was shown (FIG. 5).

2-7. 2-7. tt 1One /2/2 의 변화 확인The change in

자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 초회 경구투여 후, tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 tamoxifen의 혈중 t1 /2가 12.47±5.01hr 로, tamoxifen 단독 투여군의 13.11±5.77hr에 비해 -4.86%의 유의성 없는 경미한 감소를 나타내었으며, 자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 8회 반복 병용 경구투여 후에도 tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서 tamoxifen의 혈중 t1 /2가 18.86±7.30hr 로, tamoxifen 단독 투여군의 19.62±5.84hr에 비해 -4.79%의 유의성 없는 경미한 감소를 나타내었다 (도 5).
Jaeumganghwatang after the battle yeohan tamoxifen following initial oral administration, tamoxifen + jaeumganghwatang treated in a plasma t 1/2 of 12.47 ± 5.01hr tamoxifen, tamoxifen significantly without slight decrease of -4.86% compared to 13.11 ± 5.77hr a single group showed, to the fighting yeohan jaeumganghwatang following tamoxifen in 8 replications combination oral tamoxifen + jaeumganghwatang blood t 1/2 is 18.86 ± 7.30hr of tamoxifen in the treated group after administration of -4.79% compared to 19.62 ± 5.84hr of tamoxifen alone administration group There was a slight decrease without significance (FIG. 5).

2-8. 2-8. MRTMRT infinf 의 변화 확인The change in

자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 초회 경구투여 후, tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서는 tamoxifen의 혈중 MRTinf가 17.16±8.35hr 로, tamoxifen 단독 투여군의 18.12±5.71hr에 비해 -5.30%의 유의성 없는 감소를 나타내었으며, 자음강화탕을 전투여한 다음 tamoxifen을 8회 반복 병용 경구투여 후에도 tamoxifen + 자음강화탕 투여군에서 tamoxifen의 혈중 MRTinf가 26.85±10.69hr 로, tamoxifen 단독 투여군의 28.48±8.53hr에 비해 -5.75%의 의미 없는 감소를 나타내었다 (도 5).
After the first oral administration of tamoxifen after combating Jaumganghwa-tang, the MRT inf of tamoxifen + 17.16 ± 8.35hr in the tamoxifen + Zaumganghwatang-administered group showed a significant decrease of -5.30% compared to 18.12 ± 5.71hr in the tamoxifen-only group. Tamoxifen + Zaumganghwatang administration group showed 26.85 ± 10.69hr of blood MRT inf in tamoxifen + Zaumganghwatang administration group, which was -5.75% in comparison with 28.48 ± 8.53hr of tamoxifen alone group. (Figure 5).

실시예 2의 결과를 종합해 볼 때, 실시예 1의 5분 이내 단회 병용 투여실험 과 유사하게 자음강화탕의 전투여는 tamoxifen의 pharmacokinetics에 영향을 미치지 않는 것으로 관찰되었으며, 8일간의 반복 병용 투여 역시 tamoxifen의 경구 생체 이용률에 별다른 영향을 미치지 않는 것으로 관찰되어, pharmacodynamics 및 독성경감 등에서 양호한 synergic 효과를 나타낸다면, 통합의료에서 breast cancer에 대한 새로운 효과적인 치료 방법을 제공할 수 있을 것으로 판단된다.
Taken together, the results of Example 2 showed that, similar to the single-dose administration experiment within 5 minutes of Example 1, it was observed that the battle of Jaumganghwatang did not affect the pharmacokinetics of tamoxifen. It has been observed that there is no significant effect on oral bioavailability, and thus, if the synergic effect is good in pharmacodynamics and toxicity reduction, it may be possible to provide a new effective treatment method for breast cancer in integrative medicine.

실시예Example 3.  3. 자음강화탕과Consonant Ganghwatang TamoxifenTamoxifen 의 병용투여실험: Concomitant Dosing of: 자음강화탕이Consonant Ganghwatang TamoxifenTamoxifen 의 항암 효과에 미치는 영향 확인The effects of cancer on cancer

3-1. 실험 동물 준비3-1. Experimental animal preparation

본 실시예에서는 실험 동물로 Balb/c Slc nu/nu 마우스(5 주령 암컷, SLC, Shizuoka, Japan)를 선택하여 사용하였다. 73마리의 누드 마우스를 입수하여, 67 마리의 우측 둔부 피하부위에 MCF-7 세포를 이식 14일 후 종양 volume 이 50mm3이상 되는 이식 마우스만 선정하여, 군 당 7마리씩 본 실험에 사용하였으며, 별도의 7마리의 정상 매체 대조군 역시 준비하여, 표 2와 같이 실험에 사용하였다. In this example, Balb / c Slc nu / nu mice (5 week old female, SLC, Shizuoka, Japan) were selected and used as experimental animals. Seventy-three nude mice were obtained, and MCF-7 cells were implanted into 67 right gluteal subcutaneous regions, and only 14 transplanted mice with a tumor volume of 50 mm 3 or more were selected for this experiment. Seven normal media controls were also prepared and used for the experiments as shown in Table 2.

상기 MCF-7 세포 이식은, MCF-7 (American Type Culture Collection Center, VA, USA) 세포를 10% fetal bovine serum (FBS)이 첨가된 RPMI 1640 (Gibco, Grand Island, NY, USA) 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 incubator에서 계대 배양하여 유지하였으며, 1.0×108cell/ml이 되도록 종양세포 부유액을 만들어, 마우스의 우측 등쪽 둔부 피하에 MCF-7 종양세포 부유액 0.2 mL (2×107cell/mouse)씩을 이식하여, 고형 종괴를 형성시켰다. 본 실험에서는 MCF-7 유방암 세포 주 이식 15일 (종양 volume; 50mm3이상) 후부터 tamoxifen 또는 자음강화탕을 투여하였다.
For MCF-7 cell transplantation, RPMF 1640 (Gibco, Grand Island, NY, USA) medium containing 10% fetal bovine serum (FBS) was added to MCF-7 (American Type Culture Collection Center, VA, USA) cells. The cells were passaged and maintained at 37 ° C. in a 5% CO 2 incubator. Tumor cell suspensions were prepared to 1.0 × 10 8 cells / ml. 7 cells / mouse) were implanted to form solid masses. In the present study, tamoxifen or jaumganggangtang was administered 15 days after the MCF-7 breast cancer cell transplantation (tumor volume; 50mm 3 or more).

Group Group XenograftXenograft Dose (mg/kg/day)Dose (mg / kg / day) Animal No.Animal No. MCa003-PD:Effects on MCF-7 cell xenograft nude miceMCa003-PD: Effects on MCF-7 cell xenograft nude mice ControlControl SalineSaline Vehicle 10ml/kgVehicle 10ml / kg M01~M07M01-M07 ControlControl MCF-7 cellsMCF-7 cells Vehicle 10ml/kgVehicle 10ml / kg M08~M14M08 ~ M14 ReferenceReference MCF-7 cellsMCF-7 cells Tamoxifen single (120mg/kg)Tamoxifen single (120mg / kg) M15~M21M15-M21 ReferenceReference MCF-7 cellsMCF-7 cells BJIK single (400mg/kg)BJIK single (400mg / kg) M22~M28M22-M28 ActiveActive MCF-7 cellsMCF-7 cells Tamoxifen and JEKHT (120 and 100mg/kg)Tamoxifen and JEKHT (120 and 100mg / kg) M29~M35M29-M35 ActiveActive MCF-7 cellsMCF-7 cells Tamoxifen and JEKHT (120 and 200mg/kg)Tamoxifen and JEKHT (120 and 200mg / kg) M36~M42M36-M42 ActiveActive MCF-7 cellsMCF-7 cells Tamoxifen and JEKHT (120 and 400mg/kg)Tamoxifen and JEKHT (120 and 400mg / kg) M43~M49M43-M49

3-2. 투여방법3-2. Dosing method

MCF-7 유방암 세포 이식 15일후부터, 500, 250 또는 125mg/kg의 자음강화탕을 tamoxifen 20mg/kg과 5분 이내에 매일 1회씩 35일간 각각 병용 투여하였으며, 각 단독 투여군에서는 자음강화탕 또는 tamoxifen 투여시 동일 용량의 멸균증류수만 투여하였고, 매체 대조군에서는 매체인 멸균증류수만 각각 5분 간격으로 2회 투여하였다.
After 15 days of MCF-7 breast cancer cell transplantation, 500, 250, or 125 mg / kg of Jaumganghwatang was combined with tamoxifen 20mg / kg once daily within 35 minutes for 35 days. Only sterile distilled water was administered, and in the medium control group, only sterile distilled water was administered twice at 5 minute intervals, respectively.

3-3. 세포독성(3-3. Cytotoxicity CytotoxicityCytotoxicity ) 확인) Confirm

(1) (One) 자음강화탕의Consonant MCFMCF -7 세포생존율에 미치는 영향-7 effect on cell viability

매체 대조군과 비교하여 유의성 있는 (p<0.01) MCF-7세포 생존율의 감소가 자음강화탕 5mg/ml 처리군에서부터 인정되기 시작하여, IC50가 38.01mg/ml로 산출되었다(도 6(A)). A significant (p <0.01) decrease in MCF-7 cell viability compared to the media control began to be recognized from the Jamganghwatang 5 mg / ml treatment group, resulting in an IC 50 of 38.01 mg / ml (FIG. 6 (A)).

자음강화탕 0.5, 1, 5, 10, 50, 100 및 500mg/ml 농도 처리군에서는 무처리 매체 대조군 (0mg/ml 처리군)에 비해 각각 -5.57, -5.97, -15.21, -32.00, -57.58, -65.67 및 -83.90%의 MCF-7 세포 생존율의 변화를 나타내었다.
In groups treated with 0.5, 1, 5, 10, 50, 100, and 500 mg / ml concentrations, Jaumganghwatang was -5.57, -5.97, -15.21, -32.00, -57.58,-compared to the untreated medium control group (0 mg / ml treated group), respectively. Changes in MCF-7 cell viability of 65.67 and -83.90% were shown.

(2) (2) TamoxifenTamoxifen 의 of MCFMCF -7 세포생존율에 미치는 영향-7 effect on cell viability

매체 대조군과 비교하여 유의성 있는 (p<0.01) MCF-7세포 생존율의 감소가 tamoxifen 0.1μM 처리군에서부터 인정되기 시작하여, IC50가 1.88μM (0.69μg/ml) 로 산출되었다(도 6(A)). A significant (p <0.01) decrease in MCF-7 cell viability compared to the media control began to be recognized from the tamoxifen 0.1 μM treatment group, resulting in an IC 50 of 1.88 μM (0.69 μg / ml) (FIG. 6 (A). )).

Tamoxifen 0.01, 0.1, 1, 5, 10 및 50μM 농도 처리군에서는 무처리 매체 대조군 (0mg/ml 처리군)에 비해 각각 -9.94, -24.71, -40.55, -52.69, -64.60 및 -87.95%의 MCF-7 세포 생존율의 변화를 나타내었다.
In the Tamoxifen 0.01, 0.1, 1, 5, 10 and 50 μM concentration groups, MCF of -9.94, -24.71, -40.55, -52.69, -64.60 and -87.95%, respectively, compared to the untreated medium control group (0 mg / ml treated group) A change in -7 cell viability was shown.

3-4. 체중 및 3-4. Body weight and 증체량의Weight gain 변화 확인 Confirm change

종양이식 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 체중의 감소가 투여 28일부터 인정되기 시작하였으며, 최종 부검시 정상 대조군에 비해 종양 중량을 제외한 실제 체중 (actual body weight) 및 실제 체중을 바탕으로 한 투여기간 동안의 증체량(Body weight gain)의 유의성 있는 (p<0.01) 감소가 각각 인정되었다(Actual body weights=Body weights at sacrifice - tumor weights at sacrifice; Body weight gains=Actual body weight - body weight at initial administration). 한편 tamoxifen 단독 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는 체중의 변화는 인정되지 않았으나, 자음강화탕 단독 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 체중의 증가가 최종 희생일에 국한되어 인정되었으며, 실제 체중 및 증체량의 유의성 있는 (p<0.01) 증가를 각각 나타내었고, tamoxifen 20mg/kg과 자음강화탕 250 및 500mg/kg 병용 투여군에서는 tamoxifen 20mg/kg 단독 투여군과 비교하여 유의성있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 체중의 증가가 각각 투여 34 및 21일 후부터 인정되기 시작하여 실제 체중 및 증체량의 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 증가를 나타내었다(도 7).Significant (p <0.01 or p <0.05) body weight loss in the tumor transplantation control group was recognized from the 28th day of administration compared to the normal medium control group. And significant reductions in body weight gain (p <0.01) during the dosing period, based on actual body weight, respectively (Actual body weights = Body weights at sacrifice-tumor weights at sacrifice; Body weight gains = Actual body weight-body weight at initial administration). On the other hand, no significant change in body weight was observed in the tamoxifen-only group compared to the tumor-transplanting control group. It was recognized and showed a significant (p <0.01) increase in the actual body weight and weight gain, respectively.Tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 250 and 500mg / kg combination group showed a significant (p <0.01) increase compared to tamoxifen 20mg / kg alone group. Or p <0.05) body weight gain began to be recognized 34 and 21 days after administration, respectively, indicating a significant (p <0.01 or p <0.05) increase in actual body weight and weight gain (FIG. 7).

실제 체중을 바탕으로 한 투여기간 동안의 증체량 (35일; 실제 중량 - 투여 시작일의 체중)은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -99.57%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -11162.72, 19162.71, 12132.20, 15800.00 및 22328.81%의 변화를 나타내었다.
Body weight gain (35 days; actual weight-body weight on start date) based on actual body weight showed a change of -99.57% in the tumor transplant control group compared to the normal media control group, tamoxifen 20 mg / kg and Jaumganghwatang The 500mg / kg alone group, 125, 250 and 500mg / kg and 20 mg / kg of tamoxifen co-administration group, -11162.72, 19162.71, 12132.20, 15800.00 and 22328.81%, respectively, compared to the tumor transplantation control group.

3-5. 종양 3-5. tumor volumevolume 의 변화 확인The change in

종양의 volume 변화값을 하기 표 3에 나타내었다. Tamoxifen 단독 투여군에서는 투여 7일 후부터 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는(p<0.01) 종양 volume의 감소를 나타내어, 투여기간 동안의 종양 volume의 변화량 역시 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는(p<0.01) 감소를 나타내었다. 한편 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군에서도 투여 21일 후부터 종양 이식 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 종양 volume의 감소가 인정되었고, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 투여 7 또는 1일 후부터 종양 이식 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.015) 종양 volume의 감소가 관찰되었고, 특히 tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 종양 volume의 감소가 자음강화탕 250 및 500mg/kg 투여군에서 각각 투여 34 및 14일 후부터 인정되었다 (도 8 및 9).The volume change of the tumor is shown in Table 3 below. In the group treated with Tamoxifen alone, the tumor volume was significantly decreased (p <0.01) compared with the tumor transplant control group after 7 days of administration, and the amount of change in tumor volume during the administration period was also significantly (p <0.01) compared with the tumor transplant control group. Indicated. On the other hand, in the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, significant decreases in tumor volume (p <0.01 or p <0.05) were observed compared to the tumor transplantation control group after 21 days of administration, and in the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen combination groups, respectively. A significant (p <0.015) decrease in tumor volume was observed after 7 or 1 day of administration compared to the tumor transplantation control group. Especially, a significant (p <0.01 or p <0.05) decrease in tumor volume compared to the tamoxifen alone group was observed. And 500 mg / kg administered group were recognized from 34 and 14 days after administration (FIGS. 8 and 9), respectively.

약물 투여기간 동안의 tumor volume의 변화량 (5주; 최종 희생일의 tumor volume - 투여 시작일의 tumor volume)은 tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -66.73, -55.42, -62.60, -84.93 및 -93.17%의 변화를 나타내었다.
The change in tumor volume during the period of drug administration (week 5; tumor volume on the day of the last sacrifice-tumor volume on the start of the administration) was 20 mg / kg of tamoxifen and 500 mg / kg of Jaumganghwatang alone, 125, 250 and 500 mg / kg of tamoxifen and 20 mg of tamoxifen. The / kg combination group showed changes of -66.73, -55.42, -62.60, -84.93 and -93.17%, respectively, compared with the tumor transplant control group.

GroupsGroups Tumor volume (mm3)Tumor volume (mm 3 ) Changes (mm3)
[B-A]Changes (mm 3 )
[BA] 1 day before first administration1 day before first administration First administration [A]First administration [A] Sacrifice [B]Sacrifice [B] ControlControl TBTB 55.23±6.3255.23 ± 6.32 58.26±5.7058.26 ± 5.70 436.78±67.11436.78 ± 67.11 373.53±67.43373.53 ± 67.43 Single treatedSingle treated TamoxifenTamoxifen 55.05±6.2455.05 ± 6.24 58.92±13.2258.92 ± 13.22 184.85±37.69a 184.85 ± 37.69 a 125.92±40.49a 125.92 ± 40.49 a JEKHTJEKHT 54.58±4.5554.58 ± 4.55 57.00±8.5557.00 ± 8.55 225.74±43.71a 225.74 ± 43.71 a 168.74±47.65a 168.74 ± 47.65 a Tamoxifen and JEKHT co-administeredTamoxifen and JEKHT co-administered 125 mg/kg125 mg / kg 54.76±3.4454.76 ± 3.44 56.86±4.8956.86 ± 4.89 198.45±51.46a 198.45 ± 51.46 a 141.58±51.13a 141.58 ± 51.13 a 250 mg/kg250 mg / kg 54.24±3.8054.24 ± 3.80 59.03±8.1759.03 ± 8.17 116.08±42.20ab 116.08 ± 42.20 ab 57.05±41.33ab 57.05 ± 41.33 ab 500 mg/kg500 mg / kg 54.58±2.9254.58 ± 2.92 56.47±4.1756.47 ± 4.17 82.32±19.34ab 82.32 ± 19.34 ab 25.85±17.76ab 25.85 ± 17.76 ab

a p<0.01 and bp<0.05 as compared with intact control by LSD test a p <0.01 and bp <0.05 as compared with intact control by LSD test

c p<0.01 as compared with TB control by LSD test c p <0.01 as compared with TB control by LSD test

d p<0.01 as compared with tamoxifen single treated mice by LSD test d p <0.01 as compared with tamoxifen single treated mice by LSD test

e p<0.01 and fp<0.05 as compared with intact control by MW test e p <0.01 and fp <0.05 as compared with intact control by MW test

g p<0.01 and hp<0.05 as compared with TB control by MW test g p <0.01 and hp <0.05 as compared with TB control by MW test

i p<0.01 and jp<0.05 as compared with tamoxifen single treated mice by MW test
 i p <0.01 and jp <0.05 as compared with tamoxifen single treated mice by MW test

3-6. 중량의 변화 확인3-6. Check the change in weight

종양(Tumor), 비장(spleen), 악하임파절(Submandibular lymph node), 및 난소 주위 지방(Periovarian fad pad) 중량의 변화를 측정하여 하기 표 4에 나타내었다.
Changes in the weight of tumor, spleen, submandibular lymph node, and perovarian fat pad (Periovarian fad pad) are measured and shown in Table 4 below.

Figure 112013043144341-pat00001
Figure 112013043144341-pat00001

(1) 종양 중량의 변화(1) change in tumor weight

중양 중량의 절대변화량(A) 및 상대변화량(B)을 상기 표 4에 나타내었다. 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군을 포함한 모든 약물 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 종양 상대 및 절대 중량의 감소가 인정되었다. 한편 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 20mg/kg 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01) 종양 중량의 감소가 인정되었고, 자음강화탕 125mg/kg 과 tamoxifen 병용 투여군에서도 tamoxifen 단독 투여군에 비해 유의성 없는 경미한 종양 중량의 감소가 인정되었다 (도 8).Absolute change (A) and relative change (B) of the weight are shown in Table 4 above. All drug administration groups, including Jaumganghwa-tang 500 mg / kg alone, were found to have significant (p <0.01) tumor relative and absolute weight reductions compared to tumor transplant controls. On the other hand, a significant (p <0.01) decrease in tumor weight was observed in the Jaumganghwatang 250 and 500 mg / kg and tamoxifen combination groups, respectively, compared to the tamoxifen 20 mg / kg alone group. No significant decrease in tumor weight was noted (FIG. 8).

종양 절대 중량은 tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -48.99, -32.76, -55.85, -65.83 및 -73.95%의 변화를 나타내었다. Tumor absolute weight was -48.99, -32.76, -55.85, -65.83 in the tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 500mg / kg single-administered groups, and the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / kg combination groups, respectively, compared to the tumor transplant control group. -73.95% change.

종양 상대 중량은 tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -42.22, -19.59, -55.15, -62.33 및 -71.84%의 변화를 나타내었다.
Tumor relative weights were -42.22, -19.59, -55.15, -62.33, and 20 mg / kg of tamoxifen and 500 mg / kg of Jaumganghwatang alone, and 125, 250, and 500 mg / kg of tamoxifen and 20 mg / kg. -71.84% change.

(2) 비장((2) spleen spleenspleen ) 중량의 변화 확인) Change of weight

상기 표 4에 나타낸 것과 같이, 종양이식 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 비장 절대 및 상대 중량의 감소가 각각 인정되었으나, 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군과 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 각각 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 비장 중량의 증가가 인정되었고, 특히 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 비장 절대 및 상대 중량의 증가가 인정되었다(표 4).As shown in Table 4, in the tumor transplantation control group, significant decreases in absolute and relative weights of the spleen (p <0.01) were observed, respectively, compared to the normal medium control group, but the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group and the Jaumganghwatang 250 and 500mg / kg and The tamoxifen 20 mg / kg combination group showed a significant (p <0.01) increase in the spleen weight compared to the tumor transplant control group, especially in the Jaumganghwatang 250 and 500 mg / kg and tamoxifen combination groups, respectively (p <0.01). <0.01) An increase in spleen absolute and relative weight was recognized (Table 4).

비장 절대 중량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -50.92%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -8.29, 48.93, 14.97, 44.39 및 67.11%의 변화를 나타내었다.The absolute weight of the spleen was -50.92% in the tumor transplantation control group compared to the normal medium control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone administration group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / kg combination. The administration group showed -8.29, 48.93, 14.97, 44.39 and 67.11% changes compared to the tumor transplant control, respectively.

비장 상대 중량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -50.94%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 3.26, 77.01, 17.55, 56.45 및 81.12%의 변화를 나타내었다.
The relative weight of the spleen was -50.94% in the tumor transplantation control group compared to the normal medium control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / kg combination The administration group showed changes of 3.26, 77.01, 17.55, 56.45 and 81.12%, respectively, compared with the tumor transplantation control group.

(3) (3) 악하임파절Maxillary fracture 중량의 변화 Change in weight

종양이식 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 악하 임파절 절대 및 상대 중량의 감소가 각각 인정되었으나, 자음강화탕 및 자음강화탕 250또는 500mg/kg과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 악하 임파절 중량의 증가가 인정되었고, 특히 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 악하 임파절 절대 및 상대 중량의 증가가 인정되었다(표 4).Significant (p <0.01) reductions in absolute and relative weight of the submandibular lymph nodes were observed in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, respectively. (p <0.01 or p <0.05) An increase in submandibular lymph node weight was noted, especially in the Jaumganghwatang 250 and 500 mg / kg and tamoxifen co-administrated groups, respectively (p <0.01). An increase was recognized (Table 4).

악하 임파절 절대 중량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -71.74%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -38.46, 80.77, 57.69, 100.00 및 153.85%의 변화를 나타내었다. Abdominal lymph node absolute weight was -71.74% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / kg. The combination dose group showed -38.46, 80.77, 57.69, 100.00 and 153.85% changes compared to the tumor transplant control, respectively.

악하 임파절 상대 중량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -71.85%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -30.48, 114.04, 58.19, 110.52 및 175.14%의 변화를 나타내었다.
The relative weight of the lymph node was -71.85% in the tumor transplantation control group compared with the normal media control group, and tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / kg. The combination dose group showed -30.48, 114.04, 58.19, 110.52 and 175.14% change compared to the tumor transplant control, respectively.

(4) 난소주위 지방 중량의 변화(4) Changes in the weight of fats around the ovary

종양이식 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 난소주위 지방 절대 및 상대 중량의 감소가 각각 인정되었으나, 자음강화탕 단독 투여군과 자음강화탕 250 또는 500mg/kg과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 난소주위 지방 중량의 증가가 인정되었고, 특히 모든 자음강화탕과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 난소주위 지방 중량의 증가가 인정되었다. 한편 tamoxifen 20mg/kg 단독 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 난소주위 축적 지방 중량의 감소를 나타내었다(표 4).Significant (p <0.01) decreases in absolute and relative weight of ovarian fat were observed in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, but in the Jaumganghwatang alone group and the Jaumganghwatang 250 or 500 mg / kg and tamoxifen combination groups, respectively, A significant (p <0.01) increase in ovarian fat mass was observed, especially in all Jaumganghwatang and tamoxifen combination groups, which were significantly (p <0.01 or p <0.05) increased in ovarian fat mass compared to the tamoxifen alone group, respectively. Admitted. On the other hand, tamoxifen 20mg / kg alone group showed a significant (p <0.01 or p <0.05) decrease in the ovarian cumulative fat weight compared to the tumor transplant control group (Table 4).

난소주위 지방 절대 중량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -77.08%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -46.55, 109.48, 13.79, 92.24 및 181.90%의 변화를 나타내었다. Absolute ovarian fat weight was -77.08% in the tumor grafting control group compared to the normal media control group, tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, Zaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / The kg combination group showed changes of -46.55, 109.48, 13.79, 92.24 and 181.90%, respectively, compared to the tumor transplant control group.

난소주위 지방 상대 중량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -76.99%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -40.34, 149.36, 15.66, 108.98 및 200.94%의 변화를 나타내었다.
The relative ovarian fat weight was -76.99% in the tumor transplantation control group compared with the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / The kg combination group showed changes of -40.34, 149.36, 15.66, 108.98 and 200.94%, respectively, compared to the tumor transplant control group.

3-7. 혈중 3-7. Blood ILIL -6 및 -6 and IFNIFN -γ 함량의 변화 -γ content change

도 10에 각 군에 대한 IL-6 및 IF-γ 함량의 변화량을 도시하였다. 종양이식 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 혈중 IL-6 함량의 증가와 IFN-γ 함량의 감소가 각각 인정되었으나, 자음강화탕 단독 및 자음강화탕 250 또는 500mg/kg과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 혈중 IL-6 함량의 감소와 IFN-γ 함량의 증가가 인정되었고, 특히 모든 세 용량의 자음강화탕과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01) 혈중 IL-6 함량의 감소 및 IFN-γ 함량의 증가가 인정되었다. 한편 tamoxifen 단독 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01) 혈중 IL-6 함량의 증가와 유의성 없는 혈중 IFN-γ 함량의 감소를 각각 나타내었다.Figure 10 shows the amount of change in IL-6 and IF-γ content for each group. Significant (p <0.01) increased IL-6 and IFN-γ levels were observed in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, respectively, but in the Jaumganghwatang alone and the Jaumganghwatang 250 or 500mg / kg and tamoxifen combination groups, respectively. Significant (p <0.01 or p <0.05) decreases in serum IL-6 and IFN-γ levels were observed in comparison with the tumor transplantation control group, especially in all three doses of Jaumganghwatang and tamoxifen. In comparison, a significant (p <0.01) decrease in blood IL-6 content and an increase in IFN-γ content were recognized. Tamoxifen alone showed significant (p <0.01) increase in serum IL-6 and insignificant decrease in IFN-γ.

혈중 IL-6 함량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 507.46%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 21.68, -20.65, -10.07, -16.99 및 -38.79%의 변화를 나타내었다.Serum IL-6 content was 507.46% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / kg The combined administration group showed 21.68, -20.65, -10.07, -16.99 and -38.79% change compared to the tumor transplant control group, respectively.

혈중 IFN-γ 함량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -48.74%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -14.77, 35.76, 18.11, 34.12 및 56.19%의 변화를 나타내었다.
The serum IFN-γ content was -48.74% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / The kg combination group showed changes of -14.77, 35.76, 18.11, 34.12 and 56.19%, respectively, compared to the tumor transplant control group.

3-8. 3-8. NKNK cellcell 활성의 변화 Change in activity

도 11에 각 군에 따른 비장 및 복강에서의 NK cell 활성의 변화를 측정하여 나타내었다. 종양이식 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 비장 및 복강 NK cell 활성의 감소가 각각 인정되었으나, 자음강화탕 단독 및 모든 병용 투여군에서는 각각 종양이식 대조군에 비해 현저한 비장 및 복강 NK cell 활성의 증가가 인정되었고, 특히 모든 자음강화탕과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01) 비장 및 복강 NK cell 활성의 증가가 인정되었다. 한편 tamoxifen 단독 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해서도 유의성은 인정되지 않았으나, 현저한 비장 및 복강 NK cell 활성의 감소가 인정되었다.Figure 11 shows the measurement of the change in NK cell activity in the spleen and abdominal cavity according to each group. Significant (p <0.01) decreases in spleen and intraperitoneal NK cell activity were observed in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group. An increase in spleen and intraperitoneal NK cell activity was found, especially in all Jaumganghwatang and tamoxifen combination groups, compared with tamoxifen alone group (p <0.01). In the tamoxifen alone group, no significant difference was observed compared with the tumor transplantation control group, but significant reduction of spleen and intraperitoneal NK cell activity was observed.

비장 NK cell 활성은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -57.37%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -12.73, 37.32, 20.57, 34.09 및 47.02%의 변화를 나타내었다.The spleen NK cell activity was -57.37% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / kg The combination dose group showed changes of -12.73, 37.32, 20.57, 34.09 and 47.02%, respectively, compared to the tumor transplant control.

복강 NK cell 활성은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -57.69%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -26.39, 38.94, 19.38, 28.98 및 52.09%의 변화를 나타내었다.
Intraperitoneal NK cell activity was -57.69% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / kg The combination group showed changes of -26.39, 38.94, 19.38, 28.98 and 52.09%, respectively, compared to the tumor transplant control.

3-9. 비장 3-9. spleen cytokinecytokine 함량의 변화 확인 Confirmation of change in content

도 12에 각 군에 따른 비장의 사이토카인 함량을 측정하여 나타내었다. 종양이식 대조군에서는 정상 매체 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 비장 TNF-α, IL-1β 및 IL-10 함량의 감소가 각각 인정되었으나, 자음강화탕 단독 투여군과 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 비장 cytokine 함량의 증가가 인정되었고, 특히 모든 세 용량의 자음강화탕 (125, 250 및 500mg/kg)과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 현저한 비장 TNF-α, IL-1β 및 IL-10 함량의 증가가 인정되었다. 한편 tamoxifen 단독 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해서도 유의성은 인정되지 않았으나, 현저한 비장 TNF-α, IL-1β 및 IL-10함량의 감소가 각각 인정되었다.12 shows the cytokine content of the spleen according to each group. Significant (p <0.01) decreases in splenic TNF-α, IL-1β and IL-10 contents were observed in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, but the Jaumganghwatang alone group and the Jaumganghwatang 250 and 500mg / kg and tamoxifen combination groups Significant (p <0.01 or p <0.05) increased splenic cytokine content was observed in tumors compared to tumor transplantation controls, especially tamoxifen alone in all three doses of Jaumganghwatang (125, 250 and 500 mg / kg) and tamoxifen. Significant increases in splenic TNF-α, IL-1β and IL-10 contents were observed compared to the administration group. In the tamoxifen alone group, no significant difference was observed in the tumor transplantation control group, but significant decreases in the spleen TNF-α, IL-1β and IL-10 contents were observed.

비장 TNF-α 함량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -65.91%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -23.94, 57.95, 20.38, 52.24 및 110.88%의 변화를 나타내었다.The spleen TNF-α content was -65.91% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 500mg / kg alone groups, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / The kg combination group showed changes of -23.94, 57.95, 20.38, 52.24 and 110.88%, respectively, compared to the tumor transplant control group.

비장 IL-1β 함량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -68.15%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -10.82, 84.73, 19.66, 82.76 및 104.18%의 변화를 나타내었다.The splenic IL-1β content of the tumor transplantation control group was -68.15% compared to the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / The kg combination group showed changes of -10.82, 84.73, 19.66, 82.76 and 104.18%, respectively, compared to the tumor transplant control group.

비장 IL-10 함량은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -67.46%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -33.33, 75.89, 22.36, 72.39 및 99.81%의 변화를 나타내었다.
The splenic IL-10 content was -67.46% in the tumor transplantation control group compared to the normal medium control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / The kg combination group showed changes of -33.33, 75.89, 22.36, 72.39 and 99.81%, respectively, compared to the tumor transplant control group.

3-10. 조직학적 변화 확인3-10. Confirm histological changes

(1) 종괴의 조직병리학적 변화 확인(1) Confirmation of histopathological changes of the mass

하기 표 5에 종괴의 부피, apoptotic 세포 및 Caspase-3, PARP,TNF-α 면역반응 세포들의 비율을 측정하여 나타내었다.
Table 5 shows the mass of the mass, apoptotic cells and the ratio of Caspase-3, PARP, TNF-α immunoreactive cells were measured.

Figure 112013043144341-pat00002
Figure 112013043144341-pat00002

종양이식 대조군에서는 미분화 성향이 강한 악성 샘암종 (undifferentiated polymorphic adenocarcinoma) MCF-7 세포로 충실히 구성되어 있었으며, 일부 세포에서 apoptosis에 의한 세포질의 호산성 증가 및 핵 농축이 인정되었다. 한편 tamoxifen 단독 투여군 및 세 용량의 모든 자음강화탕 병용 투여군에서는 각각 종양이식 대조군에 비해 apoptotic 세포의 현저한 증가가 인정되었고, 결과적으로 MCF-7 세포가 차지하는 비율 역시 현저히 감소되었으며, 특히 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01) 종양세포 volume의 감소 및 apoptotic 세포의 수적 증가가 인정되었다 (도 13) (도 13 내지 도 16에서, A, B: Tumor-bearing control; C, D: Tamoxifen 20mg/kg single treated mice; E, F: JEKHT 500mg/kg single treated mice; G, H: Tamoxifen 20mg/kg and JEKHT 125mg/kg co-administered mice; I, J: Tamoxifen 20mg/kg and JEKHT 250mg/kg co-administered mice; K, L: Tamoxifen 20mg/kg and JEKHT 500mg/kg co-administered mice 임). The tumor transplantation control group consisted of undifferentiated polymorphic adenocarcinoma MCF-7 cells with high tendency to differentiate, and some cells showed increased eosinophility and nuclear enrichment due to apoptosis. On the other hand, in the tamoxifen alone group and all three doses of the Jaumganghwatang combination group, a significant increase in apoptotic cells was observed, respectively, compared with the tumor transplant control group, and as a result, the proportion of MCF-7 cells also decreased significantly, especially between Jaumganghwatang 250 and 500mg / kg. In the tamoxifen 20 mg / kg combination group, significant decreases in the tumor cell volume and an increase in the number of apoptotic cells were observed as compared with the tamoxifen alone group (Fig. 13) (Figs. 13 to 16, A and B: Tumor-bearing control; C, D: Tamoxifen 20mg / kg single treated mice; E, F: JEKHT 500mg / kg single treated mice; G, H: Tamoxifen 20mg / kg and JEKHT 125mg / kg co-administered mice; I, J : Tamoxifen 20mg / kg and JEKHT 250mg / kg co-administered mice; K, L: Tamoxifen 20mg / kg and JEKHT 500mg / kg co-administered mice).

또한 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군을 포함한 모든 투여군에서는 종양이식 대조군에서 비해 유의성 있는 (p<0.01) 종괴내 caspase-3 및 PARP 면역반응세포의 수적 증가가 인정되었으며, 특히 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 각각tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01) caspase-3 및 PARP 면역반응세포의 수적 증가가 인정되었다 (도 14 및 도 15). In addition, all groups, including Jaumganghwatang 500mg / kg alone, were found to have a significant (p <0.01) increase in caspase-3 and PARP immunoreactive cells in the tumor transplantation control group, especially Jaumganghwatang 250 and 500mg / kg and tamoxifen. In the 20 mg / kg co-administered group, significant increase in the number of caspase-3 and PARP immune-responsive cells (p <0.01) was also observed as compared to the tamoxifen alone-administered group (FIGS. 14 and 15).

또한 단독 투여군과 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen병용 투여군에서는 종양 이식 대조군에 비해 현저한 종괴내 TNF-α 면역반응세포의 수적 증가가 인정되었고, 특히 세 용량의 모든 자음강화탕과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01) TNF-α 면역반응세포의 수적 증가가 인정되었으나, tamoxifen 단독 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해서 유의성 없는 종괴내 TNF-α 면역반응세포의 수적 감소를 나타내었다(도 16). In addition, a significant increase in the number of TNF-α-immunoreactive cells in the masses was observed in the single-administered group and the 250- and 500-mg / kg / tamoxifen-combined group, compared to the tumor transplant control group, and tamoxifen alone in all the three-dose groups. Significant increase in the number of (p <0.01) TNF-α-immunoreactive cells was observed compared to the administration group, but the tamoxifen-only group showed a significant decrease in the number of TNF-α-immunoreactive cells in the tumor compared to the tumor transplant control group (Fig. 16).

종양 조직에서 종양세포가 차지하는 비율은 tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서 종양이식 대조군에 비해 각각 -39.26, -17.92, -30.79, -57.28 및 -68.62%의 변화를 나타내었다. The proportion of tumor cells in the tumor tissues was -39.26, -17.92,-compared with the tumor transplantation control group in the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg single-administered groups, and the Zaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / kg combination groups, respectively. 30.79, -57.28 and -68.62%.

종양 조직에서 apoptotic 세포가 차지하는 비율은 tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서 종양이식 대조군에 비해 각각 122.52, 80.74, 108.65, 292.66 및 434.67%의 변화를 나타내었다.The proportion of apoptotic cells in tumor tissues was 122.52, 80.74, 108.65, and 292.66 in the tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 500mg / kg single-administered groups, and the Zaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / kg combination groups, respectively, compared with the tumor transplant control group. And 434.67%.

종양 조직에서 caspase-3 면역반응세포가 차지하는 비율은 tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서 종양이식 대조군에 비해 각각 194.23, 125.00, 169.23, 330.77 및 548.08%의 변화를 나타내었다.The proportion of caspase-3 immune-responsive cells in tumor tissues was 194.23 and 125.00 in the tamoxifen 20 mg / kg and Jaumganghwatang 500 mg / kg single-administered groups, and the Zaumganghwatang 125, 250, and 500 mg / kg and tamoxifen 20 mg / kg combination groups, respectively, compared to the tumor transplant control group. , 169.23, 330.77 and 548.08%.

종양 조직에서 PARP 면역반응세포가 차지하는 비율은 tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서 종양이식 대조군에 비해 각각 162.71, 52.54, 130.51, 347.46 및 538.98%의 변화를 나타내었다.The proportion of PARP immunoreactive cells in tumor tissues was 162.71, 52.54 and 130.51 in the tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 500mg / kg single-administered groups, and the Zaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / kg combination groups, respectively. , 347.46 and 538.98%.

종양 조직에서 TNF-α면역반응세포가 차지하는 비율은 tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서 종양이식 대조군에 비해 각각 -45.83, 104.17, 50.00, 193.75 및 279.17%의 변화를 나타내었다.
The proportion of TNF-α-immunoreactive cells in tumor tissues was -45.83, compared to the tumor transplantation control group in the tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 500mg / kg single-administered groups, and the Zaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / kg combined groups, respectively. Changes of 104.17, 50.00, 193.75 and 279.17% were shown.

(2) 비장의 조직병리학적 변화 확인(2) Confirmation of histopathological changes of the spleen

하기 표 6에 비장의 두께, 백색 수질의 수(white pulp number) 및 직경(diameter)을 나타내었다.
Table 6 shows the thickness of the spleen, the white pulp number and the diameter.

GroupsGroups Total thickness
(mm/central regions)Total thickness
(mm / central regions) White pulp numbers (/mm2)White pulp numbers (/ mm 2 ) White pulp diameters (μm/white pulp)White pulp diameters (μm / white pulp) ControlsControls IntactIntact 1.63±0.161.63 + 0.16 16.00±1.4116.00 ± 1.41 560.61±110.01560.61 ± 110.01 TBTB 1.18±0.13a 1.18 ± 0.13 a 5.14±1.35a 5.14 ± 1.35 a 323.60±36.28a 323.60 ± 36.28 a Single treatedSingle treated TamoxifenTamoxifen 1.15±0.13a 1.15 ± 0.13 a 4.14±1.07a 4.14 ± 1.07 a 298.11±61.88a 298.11 ± 61.88 a JEKHTJEKHT 1.45±0.11bcd 1.45 ± 0.11 bcd 9.86±1.57acd 9.86 ± 1.57 acd 438.05±67.25acd 438.05 ± 67.25 acd Tamoxifen and JEKHT co-administeredTamoxifen and JEKHT co-administered 125mg/kg125mg / kg 1.37±0.15acd 1.37 ± 0.15 acd 6.29±1.38ad 6.29 ± 1.38 ad 386.88±107.60ae 386.88 ± 107.60 ae 250mg/kg250 mg / kg 1.47±0.10bcd 1.47 ± 0.10 bcd 9.57±1.51acd 9.57 ± 1.51 acd 460.53±43.88bcd 460.53 ± 43.88 bcd 500mg/kg500mg / kg 1.63±0.11cd 1.63 ± 0.11 cd 12.86±1.35acd 12.86 ± 1.35 acd 517.32±71.28cd 517.32 ± 71.28 cd

표 6에 나타난 것과 같이, 종양이식 대조군에서는, 정상 매체 대조군 비해 비장 백색수질 부분의 현저한 임파구 감소를 특징으로 하는 위축이 인정되어, 유의성 있는 (p<0.01) 비장 두께, 백색수질 직경 및 수의 감소가 각각 인정되었다. 한편 자음강화탕 및 모든 세 용량의 병용 투여군에서는 각각 종양이식 대조군에 비해 현저한 비장 두께, 백색수질 직경 및 수의 증가가 조직병리학적으로 인정되었고, 특히 모든 자음강화탕과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 비장 두께, 백색수질 직경 및 수의 증가가 인정되었다 (도 17, A~C:Intact control; D~F:Tumor-bearing control; G~I:Tamoxifen 20mg/kg single treated mice; J~L:JEKHT 500mg/kg single treated mice; M~O:Tamoxifen 20mg/kg and JEKHT 125mg/kg co-administered mice; P~R:Tamoxifen 20mg/kg and JEKHT 250mg/kg co-administered mice; S~U:Tamoxifen 20mg/kg and JEKHT 500mg/kg co-administered mice).As shown in Table 6, in the tumor transplantation control, atrophy was noted, which was characterized by significant lymphocyte reduction in the splenic white medulla fraction compared to the normal media control, resulting in a significant (p <0.01) reduction in spleen thickness, white medulla diameter and number. Were each recognized. On the other hand, the concomitant administration group of Jaumganghwatang and all three doses showed a significant increase in spleen thickness, white membranous diameter and number compared to the tumor transplant control group. Histopathologically, especially in all Jaumganghwatang and tamoxifen 20mg / kg combination groups, respectively, tamoxifen alone group Significant (p <0.01 or p <0.05) increase in spleen thickness, white membranous diameter and number was observed (Fig. 17, A-C: Intact control; D-F: Tumor-bearing control; G-I :). Tamoxifen 20mg / kg single treated mice; J ~ L: JEKHT 500mg / kg single treated mice; M ~ O: Tamoxifen 20mg / kg and JEKHT 125mg / kg co-administered mice; P ~ R: Tamoxifen 20mg / kg and JEKHT 250mg / kg co-administered mice; S ~ U: Tamoxifen 20mg / kg and JEKHT 500mg / kg co-administered mice).

비장 전체 두께는 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -27.93%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -2.43, 23.57, 16.52, 24.79 및 38.40%의 변화를 나타내었다.The total thickness of the spleen was -27.93% in the tumor transplantation control group compared to the normal medium control group, and tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, and Zaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / kg combination. The administration group showed changes of -2.43, 23.57, 16.52, 24.79 and 38.40%, respectively, compared with the tumor transplantation control group.

비장 백색수질의 수는 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -67.68%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -19.44, 91.67, 22.22, 86.11 및 150.00%의 변화를 나타내었다.The number of splenic white medulla was -67.68% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / The kg combination group showed changes of -19.44, 91.67, 22.22, 86.11 and 150.00%, respectively, compared to the tumor transplant control group.

비장 백색 수질의 직경은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -42.28%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -7.87, 35.37, 19.56, 42.32 및 59.87%의 변화를 나타내었다.
The diameter of the splenic white medulla was -42.28% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / The kg combination group showed changes of -7.87, 35.37, 19.56, 42.32 and 59.87%, respectively, compared to the tumor transplant control group.

(3) (3) 악하Evil 임파절의Lymph node 조직병리학적 변화 확인 Confirmation of histopathological changes

하기 표 7에 악하 임파절의 조직병리학적 변화를 관찰하여 그 측정값을 나타내었다.
In Table 7, the histopathological changes of the submandibular lymph nodes were observed and the measured values are shown.

GroupsGroups Total thickness
(μm/central regions)Total thickness
(μm / central regions) Cortex lymphoid cell follicle numbers (/mm2)Cortex lymphoid cell follicle numbers (/ mm 2 ) Cortex thickness (μm/lymph node)Cortex thickness (μm / lymph node) TNF--positive cells (cells/mm2 of lymphnode)TNF--positive cells (cells / mm 2 of lymphnode) ControlsControls IntactIntact 1030.73±192.311030.73 ± 192.31 14.57±2.6414.57 ± 2.64 531.34±103.85531.34 ± 103.85 46.43±10.0346.43 ± 10.03 TBTB 596.37±86.25a 596.37 ± 86.25 a 6.57±1.51g 6.57 ± 1.51 g 320.49±53.38a 320.49 ± 53.38 a 9.86±2.61g 9.86 ± 2.61 g Single treatedSingle treated TamoxifenTamoxifen 487.38±83.96a 487.38 ± 83.96 a 4.14±1.68gj 4.14 ± 1.68 gj 255.43±46.37a 255.43 ± 46.37 a 6.57±2.51gj 6.57 ± 2.51 gj JEKHTJEKHT 795.63±170.00ace 795.63 ± 170.00 ace 11.71±1.60hik 11.71 ± 1.60 hik 429.74±88.96bce 429.74 ± 88.96 bce 27.14±5.96gik 27.14 ± 5.96 gik Tamoxifen and JEKHT co-administeredTamoxifen and JEKHT co-administered 125mg/kg125mg / kg 637.30±101.28af 637.30 ± 101.28 af 7.14±1.07gk 7.14 ± 1.07 gk 325.51±44.65a 325.51 ± 44.65 a 12.00±3.27gk 12.00 ± 3.27 gk 250mg/kg250 mg / kg 763.09±79.94ade 763.09 ± 79.94 ade 10.71±2.69hik 10.71 ± 2.69 hik 392.35±58.56ae 392.35 ± 58.56 ae 16.14±3.13gik 16.14 ± 3.13 gik 500mg/kg500mg / kg 869.17±109.94bce 869.17 ± 109.94 bce 13.43±1.72ik 13.43 ± 1.72 ik 492.20±85.39ce 492.20 ± 85.39 ce 25.71±6.05gik 25.71 ± 6.05 gik

종양이식 대조군에서는, 정상 매체 대조군 비해 임파절 피질 부분의 현저한 임파구 감소를 특징으로 하는 위축이 인정되어, 유의성 있는 (p<0.01) 악하 임파절 전체 및 피질 두께, 피질내 follicle 수의 감소가 각각 인정되었으며, TNF-α면역반응세포의 유의성 있는 (p<0.01) 감소 역시 인정되었다. 한편 자음강화탕 단독 투여군과 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 종양이식 대조군에 비해 현저한 임파절 전체 및 피질 두께, 피질내 follicle 수, TNF-α면역반응세포의 증가가 조직병리학적으로 인정되었고, 특히 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01) 임파절 전체 및 피질 두께, 피질내 follicle 수, TNF-α 면역반응세포의 수적 증가가 인정되었다. 한편 tamoxifen 단독 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해서도 현저한 임파절 전체 및 피질 두께, 피질내 follicle 수, TNF-α 면역반응세포의 수적 감소 각각 인정되었다 (도 18 및 도 19).In the tumor transplantation control group, atrophy was characterized by significant lymphocyte reduction of the lymph node cortex compared to the control group of normal medium, and significant (p <0.01) submandibular lymph node total and cortical thickness and decrease in the number of intracortical follicles were recognized. A significant (p <0.01) decrease in TNF-α immune-responsive cells was also recognized. On the other hand, in the Jaumganghwatang alone group, the Jaumganghwatang 250 and 500mg / kg and tamoxifen combination groups, significant increase in total lymph node and cortex thickness, cortical follicle, and TNF-α-immunoreactive cells were observed in histopathology compared with the tumor transplantation control group, respectively. In particular, in the group treated with Jaumganghwatang 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / kg, there was a significant (p <0.01) increase in total lymph node and cortex thickness, number of intrafollicles, and number of TNF-α-immunoreactive cells compared with tamoxifen alone. It became. On the other hand, in the tamoxifen alone group, significant decreases in total lymph node and cortex thickness, cortical follicle number, and number of TNF-α immune-responsive cells were observed, respectively, compared with the tumor transplantation control group (FIGS. 18 and 19).

악하 임파절 전체 두께는 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -42.14%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -18.28, 33.41, 6.86, 27.96 및 45.74%의 변화를 나타내었다.The total thickness of the submandibular lymph nodes was -42.14% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg / kg The combination dose group showed -18.28, 33.41, 6.86, 27.96 and 45.74% change compared to the tumor transplant control, respectively.

악하 임파절 피질내 follicle의 수는 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -54.90%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -36.96, 78.26, 8.70, 63.04 및 104.35%의 변화를 나타내었다.The number of follicles in the submandibular lymph node cortex was -54.90% in the tumor transplantation control group compared with the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone groups, the 125, 250 and 500mg / kg of the tamoxifen and the tamoxifen The 20 mg / kg combination group showed changes of -36.96, 78.26, 8.70, 63.04 and 104.35%, respectively, compared to the tumor transplant control group.

악하 임파절 피질 두께는 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -39.68%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -20.30, 34.09, 1.57, 22.42 및 53.58%의 변화를 나타내었다.Subcutaneous lymph node cortex thickness was -39.68% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and tamoxifen 20mg / kg and Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and tamoxifen 20mg / kg. Combination group showed -20.30, 34.09, 1.57, 22.42 and 53.58% change compared to tumor transplant control, respectively.

악하 임파절 조직내 TNF-α 면역반응세포가 차지하는 비율은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -78.77%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -33.33, 175.38, 21.74, 63.77 및 160.87%의 변화를 나타내었다.
The percentage of TNF-α-immunoreactive cells in the submandibular lymph node tissues was -78.77% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and 20 mg / kg of tamoxifen and 500mg / kg of Jaumganghwatang alone, and Jaumganghwatang 125 and 250. And 500 mg / kg and tamoxifen 20 mg / kg co-administration group showed changes of -33.33, 175.38, 21.74, 63.77 and 160.87%, respectively, compared with the tumor transplant control group.

(4) 난소주위 지방의 조직병리학적 변화 확인(4) Confirmation of histopathological changes in the surrounding ovary

하기 표 8에 난소주위 지방의 축적 지방 두께 및 백색 지방세포 평균 직경을 나타내었다.
Table 8 shows the cumulative fat thickness and the average diameter of white adipocytes of the ovarian fat.

GroupsGroups Total thickness (mm/central regions)Total thickness (mm / central regions) White adipocyte diameters (μm)White adipocyte diameters (μm) ControlsControls IntactIntact 1.94±0.171.94 ± 0.17 53.75±11.2953.75 ± 11.29 TBTB 0.40±0.15a 0.40 ± 0.15 a 23.01±6.90a 23.01 ± 6.90 a Single treatedSingle treated TamoxifenTamoxifen 0.28±0.10a 0.28 ± 0.10 a 19.89±5.09a 19.89 ± 5.09 a JEKHTJEKHT 1.31±0.19abc 1.31 ± 0.19 abc 38.72±4.69abc 38.72 ± 4.69 abc Tamoxifen and JEKHT co-administeredTamoxifen and JEKHT co-administered 125mg/kg125mg / kg 0.58±0.20ac 0.58 ± 0.20 ac 29.38±6.46ad 29.38 ± 6.46 ad 250mg/kg250 mg / kg 1.18±0.22abc 1.18 ± 0.22 abc 33.61±4.96abc 33.61 ± 4.96 abc 500mg/kg500mg / kg 1.55±0.13abc 1.55 ± 0.13 abc 41.43±4.18abc 41.43 ± 4.18 abc

종양이식 대조군에서는, 정상 매체 대조군 비해 현저한 백색 지방세포의 크기 감소를 특징으로 하는 위축이 인정되어, 유의성 있는 (p<0.01) 축적 지방 두께 및 백색 지방세포 평균 직경의 감소가 각각 인정되었다. 한편 자음강화탕 단독 투여군과 자음강화탕 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 종양이식 대조군에 비해 유의성 있는 (p<0.01) 축적 지방 두께 및 백색 지방세포 평균 직경의 증가가 조직병리학적으로 인정되었고, 특히 모든 자음강화탕과 tamoxifen 병용 투여군에서는 각각 tamoxifen 단독 투여군에 비해서도 유의성 있는 (p<0.01 또는 p<0.05) 축적 지방 두께 및 백색 지방세포 평균 직경의 증가가 인정되었다. 한편 tamoxifen 단독 투여군에서는 종양 이식 대조군에 비해 유의성 없는 난소주위 축적 지방 조직 두께 및 백색 지방세포 평균 직경의 감소를 각각 나타내었다 (도 20).In the tumor transplantation control, atrophy was characterized by a marked reduction in the size of white adipocytes compared to the normal medium control, and a significant (p <0.01) accumulation of adipocyte thickness and a decrease in mean white adipocyte diameter, respectively. On the other hand, in the Jaumganghwatang alone group, the Jaumganghwatang 250 and 500mg / kg and tamoxifen combination groups, significant (p <0.01) accumulation fat thickness and mean white fat cell mean diameters were significantly compared with the tumor transplant control group. In the group treated with Jaumganghwatang and tamoxifen, there was a significant increase (p <0.01 or p <0.05) of accumulated fat thickness and mean white adipocyte diameter compared to tamoxifen alone. On the other hand, tamoxifen alone group showed a significant decrease in peri-ovarian cumulative adipose tissue thickness and mean white adipocyte diameter, respectively, compared to the tumor transplant control (FIG. 20).

난소주위 축적 지방의 두께는 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -79.46%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -28.67, 229.03, 44.80, 195.34 및 289.25%의 변화를 나타내었다.The thickness of the accumulated ovarian fat was -79.46% in the tumor transplantation control group compared with the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg and the tamoxifen 20mg The / kg combination group showed changes of -28.67, 229.03, 44.80, 195.34 and 289.25%, respectively, compared to the tumor transplant control group.

난소주위 백색 지방세포의 평균 직경은 종양 이식 대조군의 경우, 정상 매체 대조군에 비해 -57.19%의 변화를 나타내었으며, tamoxifen 20mg/kg 및 자음강화탕 500mg/kg 단독 투여군, 자음강화탕 125, 250 및 500mg/kg과 tamoxifen 20mg/kg 병용 투여군에서는 종양이식 대조군에 비해 각각 -13.57, 68.29, 27.66, 46.07 및 80.07%의 변화를 나타내었다.
The mean diameter of ovarian white adipocytes was -57.19% in the tumor transplantation control group compared to the normal media control group, and the tamoxifen 20mg / kg and the Jaumganghwatang 500mg / kg alone group, the Jaumganghwatang 125, 250 and 500mg / kg The tamoxifen 20mg / kg combination group showed changes of -13.57, 68.29, 27.66, 46.07 and 80.07%, respectively, compared with the tumor transplant control group.

실시예 3의 결과를 종합해볼 때, 자음강화탕 500 또는 250mg/kg의 병용투여는 tamoxifen 의 항암 효과를 면역활성을 통해 현저히 증가시키는 것으로 관찰되었으며, 종양 관련 악액질 현상 역시 현저히 억제하는 것으로 관찰되었다. 따라서, 250mg/kg 이상의 자음강화탕의 병용 투여는 tamoxifen의 생체 이용률에 영향을 미치지 않으면서, 면역활성에 의해, tamoxifen의 MCF-7 세포 이식 마우스에서의 항암 효과를 현저히 증가시키고, 종양 관련 약액질 현상을 감소시키는 것으로 판단되어, 유방암 환자에 대한 tamoxifen과 자음강화탕의 병용은 양한방 협진 및 치료에 매우 유용한 새로운 치료방법을 제공해 줄 수 있을 것으로 기대된다.
Combining the results of Example 3, it was observed that concomitant administration of Jaumganghwatang 500 or 250mg / kg significantly increased the anticancer effect of tamoxifen through immune activity, and also significantly suppressed tumor-related cachexia. Therefore, concomitant administration of more than 250 mg / kg of Jaumganghwatang does not affect the bioavailability of tamoxifen, but significantly increases the anticancer effect of tamoxifen in MCF-7 cell-transplanted mice and suppresses tumor-related drug-induced phenomena. In conclusion, the combination of tamoxifen and Jaumganghwatang in breast cancer patients is expected to provide a new method of treatment that is very useful for both oriental medicine consultation and treatment.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해되어야 한다.
It will be understood by those skilled in the art that the foregoing description of the present invention is for illustrative purposes only and that those of ordinary skill in the art can readily understand that various changes and modifications may be made without departing from the spirit or essential characteristics of the present invention. will be. It is therefore to be understood that the above-described embodiments are illustrative in all aspects and not restrictive.

Claims (6)

타목시펜(tamoxifen)과 병용되는 유방암 치료 효과 증진용 조성물로서, 상기 조성물은 자음강화탕을 포함하되, 상기 자음강화탕은 감초, 당귀, 대추나무, 맥문동, 삽주, 작약, 지모, 생지황, 진피, 황백, 생강, 및 천문동을 포함하는, 조성물.
A composition for enhancing breast cancer treatment effect in combination with tamoxifen, wherein the composition comprises a Jaum ganghwatang, wherein the Jaum ganghwatang is licorice, donkey, jujube, pulmundong, shochu, peony, jimo, raw sulfur, dermis, yellowish white, ginger, and A composition comprising astronomical dong.
삭제delete 삭제delete 제 1항에 있어서,
상기 타목시펜 및 자음강화탕은 사전에 혼합되어 제형화되거나, 별도로 제형화 되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
The method of claim 1,
The tamoxifen and Jyumganghwatang is characterized in that the mixture is formulated in advance, or formulated separately.
제 1항에 있어서,
상기 타목시펜 및 자음강화탕은 비경구, 경구, 부위한정(locoregionally), 또는 경피적으로 투여되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
The method of claim 1,
The tamoxifen and jaumganghwatang is characterized in that the parenteral, oral, locoregionally, or percutaneously administered.
제 1항에 있어서,
상기 자음강화탕의 투여기간은 상기 타목시펜 투여 후 30분 이내에 시작되는 것을 특징으로 하는, 조성물.
The method of claim 1,
The period of administration of the Jaumganghwatang is characterized in that it starts within 30 minutes after the tamoxifen administration, composition.
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