KR101316044B1 - Pharmaceutical Composition and Functional Food for Inhibiting Obesity Caused by Infection from Mulberry - Google Patents
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Abstract
본 발명은 오디 추출물 및 오디 유래의 화합물, 이 화합물의 염 및 이성질체가 감염성 비만을 치료 및/또는 예방할 수 있다는 점에 근거한다. 본 발명에 따르면 오디 추출물 및 오디 유래의 화합물 등이 감염성 비만을 야기하는 대표적인 병원균인 Ad36에 대한 항바이러스 효과와 아울러 Ad36의 감염에 의한 생체내 메커니즘 중에서 특히 염증 반응에 관여하는 물질의 활성 및 발현을 억제한다. 따라서 본 발명에 따라 얻어진 오디 추출물 및 오디 유래의 화합물 등을 활용하여 감염성 비만의 치료 및/또는 예방을 위한 약학적 조성물과 같은 의학적 응용은 물론, 감염성 비만의 개선을 위한 식품 조성물과 같은 식품공학적 응용이 기대된다. The present invention is based on the fact that the Audi extract and the compound derived from the Audi, salts and isomers of the compound can treat and / or prevent infectious obesity. According to the present invention, the extracts of Audi and the compounds derived from the mulberry are known to have anti-viral effects against Ad36, a representative pathogen causing infectious obesity, and to activate and express the activity and expression of substances that are particularly involved in the inflammatory response. Suppress Therefore, by utilizing the audi extract and the compound derived from the audio obtained in accordance with the present invention as well as medical applications such as pharmaceutical compositions for the treatment and / or prevention of infectious obesity, as well as food engineering applications such as food compositions for the improvement of infectious obesity This is expected.
Description
본 발명은 비만 억제용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 천연물인 오디 유래의 물질을 유효 성분으로 함유하는 바이러스 감염성 비만의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물 및 건강기능식품에 관한 것이다.
The present invention relates to a composition for inhibiting obesity, and more particularly, to a pharmaceutical composition and health functional food for the prevention or treatment of viral infectious obesity containing a natural substance derived from audi as an active ingredient.
현대 사회에서 비만은 만병의 근원이라고 일컬어지고 있을 정도여서 현대인의 건강을 위협하는 가장 심각한 요인의 하나로 비만이 손꼽히고 있다. 당뇨, 간질환, 심장병 등과 같은 각종 성인병의 대사질환에 비만은 큰 영향을 미치고 있다. 특히 에너지 함량이 높은 가공식품을 많이 섭취함에 따라 우리나라에서도 매년 성인 비만 비율이 3%씩 증가하고 있을 뿐만 아니라, 12-18세의 청소년을 대상으로 과체중 및 비만으로 발생하는 사회경제적 비용으로 1조 3천억 원에 달한다는 연구 보고도 있다(보건사회연구 30(1), 2010. 195-219). Obesity is said to be the source of all kinds of diseases in modern society, and obesity is one of the most serious factors that threaten the health of modern people. Obesity has a great impact on metabolic diseases of various adult diseases, such as diabetes, liver disease, heart disease. In particular, as the consumption of processed foods with high energy content increases, the rate of adult obesity is increasing by 3% every year in Korea, as well as the socioeconomic costs incurred by overweight and obesity among 12-18 year olds. There are also reports of 100 billion won (Health and Social Studies 30 (1), 2010. 195-219).
일반적으로 비만의 원인으로는 고열량의 음식을 많이 섭취함으로 인한 사회적 요인, 부모의 대사질환으로 인한 유전적 요인, 흡연 및 스트레스와 같은 환경적 요인들이 거론되고 있다. 하지만, 최근에 전통적인 비만의 원인이 아닌 미생물이나 바이러스의 감염에 의해 비만이 유도된다는 사실이 확인되고 있는데, 감염성 병원체들에 의해 유도되는 비만을 가리켜 감염성 비만(Infectobesity)라는 용어가 사용되기도 한다. In general, the causes of obesity are social factors due to high calorie intake of food, genetic factors due to metabolic disorders of parents, environmental factors such as smoking and stress. Recently, however, it has been confirmed that obesity is induced by infection of microorganisms or viruses, not traditional obesity, and the term infectious obesity is also used to refer to obesity induced by infectious pathogens.
현재까지 비만을 유도한다고 알려진 병원체들은 10여 종류가 보고되고 있는데, 그 중에서도 인간의 비만을 유도하는 것으로는 인간 아데노바이러스(human adenovirus)의 일부가 알려져 있다. 인간 아데노바이러스는 naked, linear 이중 나선 DNA 바이러스로서 대략 36 kDa 크기의 게놈을 가지며, icosahedral 모양의 60-85 ㎚의 직경을 가지고 감염된 숙주 세포의 핵에서 복제된다. 인간 아데노바이러스의 혈청형(serotype)은 6개의 subgroup(A-F)으로 분류되는데, 장기나 감염, 결막염 등의 질환을 야기한다. To date, about 10 types of pathogens known to induce obesity have been reported. Among them, part of human adenovirus is known to induce human obesity. Human adenovirus is a naked, linear double helix DNA virus with a genome of approximately 36 kDa and replicates in the nucleus of infected host cells with a icosahedral shape of 60-85 nm in diameter. The serotypes of human adenoviruses are classified into six subgroups (A-F), which cause diseases such as organs, infections, and conjunctivitis.
인간 아데노바이러스 중에서도 아데노바이러스 2(Ad2), 아데노바이러스 5(Ad5), 아데노바이러스 37(Ad37) 및 아데노바이러스 36(Ad36), 아데노바이러스 37(Ad37) 등이 비만과 관련이 있다고 알려져 있다. 그 중에서도 Ad5와 Ad-37의 경우 동물 실험에서 비만을 유도하고 인간의 stem cell에서 지방세포(adipocyte)로의 분화를 유도하였으나(Whigham LD, Israel BA, Atkinson RL. Adipogenic potential of multiple human adenovirus in vivo and in vitro in animals. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 2006; 290:R190-194, 비특허문헌 1), 실제 인간에서는 이들 바이러스에 대한 항체가 발견되지 않았다. 이에 반하여 Ad36의 경우는 동물 실험에서 비만을 유도하였을 뿐만 아니라 인간에게서도 Ad36에 대한 특이 항체가 발견되었다는 점에서 인간의 감염성 비만과 밀접한 관련이 있다(Dhurandhar NV, Israel BA, Kolesar JM, Mayhew GF, Cook ME, Atkinson RL. Increased adiposity in animals due to a human virus. Int J Obes. 2000; 24: 989-996, 비특허문헌 2; Dhurandhar NV. Contribution of Pathogens in Human Obesity. Drug News Perspect. 2004; 17: 307-313, 비특허문헌 3). 따라서 감염성 비만의 원인과 관련해서, 사람에게 비만을 유도할 가능성이 가장 큰 감염성 병원체로서 Ad36이 특히 거론되고 있다. Among human adenoviruses, adenovirus 2 (Ad2), adenovirus 5 (Ad5), adenovirus 37 (Ad37) and adenovirus 36 (Ad36) and adenovirus 37 (Ad37) are known to be associated with obesity. Among them, Ad5 and Ad-37 induced obesity in animal experiments and induced differentiation of human stem cells into adipocytes (Whigham LD, Israel BA, Atkinson RL. Adipogenic potential of multiple human adenovirus in vivo and Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol . 2006; 290: R190-194, Non-Patent Document 1), In reality, no antibodies to these viruses have been found in humans. In contrast, Ad36 is closely related to infectious obesity in humans in that it has not only induced obesity in animal experiments but also found specific antibodies against Ad36 in humans (Dhurandhar NV, Israel BA, Kolesar JM, Mayhew GF, Cook). ME, Atkinson RL. Increased adiposity in animals due to a human virus.Int J Obes . 2000; 24: 989-996, Non-Patent
Ad36과 인간의 비만과의 관계에 대한 역학 조사로서 Ad36 항체를 조사한 결과에 따르면 비만인 사람들의 경우에는 최대 30%까지 Ad36 항체를 갖는 것으로 확인되어(Atkinson RL. Dhurandhar NV. Allison DB. Bowen RL. Israel BA. Albu JB. Augustus AS. Human adenovirus-36 is associated with increased body weight and paradoxical reduction of serum lipids. Int J Obes. 2005; 29: 281-296, 비특허문헌 4; Na HN, Hong YM, Kim J, Kim HK, Jo I, Nam JH. Association between human adenovirus-36 and lipid disorders in Korean schoolchildren. Int J. Obes. 2010; 34: 89-93, 비특허문헌 5), 인간 비만의 주요한 원인의 하나로 Ad36을 비롯한 감염성 비만을 고려할 필요성이 제기되고 있다. An epidemiological study of the relationship between Ad36 and human obesity showed that up to 30% of people with obesity had Ad36 antibodies (Atkinson RL. Dhurandhar NV.Allison DB.Bowen RL.Israel). BA.Albu JB.August AS.Human adenovirus-36 is associated with increased body weight and paradoxical reduction of serum lipids.Int J Obes . 2005; 29: 281-296, Non-Patent Document 4; Na HN, Hong YM, Kim J , Kim HK, Jo I, Nam JH.Association between human adenovirus-36 and lipid disorders in Korean schoolchildren.Int J. Obes. 2010; 34: 89-93, Non-Patent Document 5), Ad36 as one of the leading causes of human obesity There is a need to consider infectious obesity.
Ad36을 비롯한 감염성 비만의 생체내 메커니즘과 관련해서는 현재까지는 초기 연구 단계에 불과하지만, 몇 가지 흥미로운 사실이 밝혀지고 있다. 숙주 세포의 cell cycle regulation과 transformation에 관여하는 아데노바이러스의 E4 단백질이 중요한 역할을 하는데, Ad36 E4 open-reading frame(orf)-1은 지방세포의 생성 과정을 조절하는 세포 신호 경로를 유도하며(Rogers PM, Fusinski KA, Rathod MA, Loiler SA, Parasric M, Shaw MK, Kilroy G, Sutton GM, MaAllister EJ, Mashtalir N, Gible JM, Holland TC, Dhurandhar NV. Human adenovirus Ad36 induces adipogenesis via its E4 orf-1 gene. Int J. Obes. 2008; 32:397-406, 비특허문헌 6), 지방세포 생성 과정에서 일어나는 각종 유전자들의 mRNA 수준을 증가시키며, 세포질에 지질을 축적시킨다(Vangipuram SD, Sheele J, Atkinson RL, Holland TC, Dhurandhar NV. A human adenovirus enhances preadipocyte differentiation. Obes Res. 2004; 12: 770-777, 비특허문헌 7; Pasarica M, Mashtalir N, McAllister EJ, Kilroy1 GE, Koska J, Permana P, de Courten B, Yu M, Ravussin E, Gimble JM, Dhurandhar NV. Adipogenic Human Adenovirus Ad36 Induces Commitment, Differentiation, and Lipid Accumulation in Human Adipose-Derived Stem Cell. Stem Cells. 2008; 26: 969-978, 비특허문헌 8).The in vivo mechanisms of infectious obesity, including Ad36, are only in the early stages of research, but some interesting facts have emerged. The adenovirus E4 protein, which is involved in cell cycle regulation and transformation of host cells, plays an important role. Ad36 E4 open-reading frame (orf) -1 induces cellular signaling pathways that regulate the production of adipocytes (Rogers). PM, Fusinski KA, Rathod MA, Loiler SA, Parasric M, Shaw MK, Kilroy G, Sutton GM, MaAllister EJ, Mashtalir N, Gible JM, Holland TC, Dhurandhar NV.Human adenovirus Ad36 induces adipogenesis via its E4 orf-1 gene Int J. Obes. 2008; 32: 397-406, Non-Patent Document 6), increases mRNA levels of various genes that occur during adipocyte production and accumulates lipids in the cytoplasm (Vangipuram SD, Sheele J, Atkinson RL). , Holland TC, Dhurandhar NV.A human adenovirus enhances preadipocyte differentiation.Obes Res. 2004; 12: 770-777, Non-Patent Document 7; Pasarica M, Mashtalir N, McAllister EJ, Kilroy1 GE, Koska J, Permana P, de Courten B, Yu M, Ravussin E, Gimble JM, Dhurandhar NV. Adipogenic Human Adenovi rus Ad36 Induces Commitment, Differentiation, and Lipid Accumulation in Human Adipose-Derived Stem Cell.Stem Cells . 2008; 26: 969-978, Non-Patent Document 8).
인간의 비만과 관련하여 Ad36을 비롯한 병원균의 연관성이 밝혀짐에 따라 이들 병원균을 활용하기 위한 일부 특허도 보고되고 있는데, 예를 들어 미국특허 제6,127,113호(특허문헌 1)에서는 Ad36 특유의 염기를 프로브(probe)로 사용하여 환자 샘플 중의 핵산과 반응시켜 검출물의 존재 여부에 따라 환자가 감염성 비만 여부를 검출하는 방법을 제안하고 있으며, 미국특허 6,664,050호(특허문헌 2)에서는 환자로부터 샘플을 취득하고 Ad36 특유의 항체와 반응시키는 방법으로 감염성 비만 여부를 진단하는 방법을 개시하고 있다. As the association of pathogens, including Ad36, has been associated with human obesity, some patents have been reported to utilize these pathogens. For example, US Pat. No. 6,127,113 (Patent Document 1) probes for bases specific to Ad36. Probe is used to react with nucleic acid in a patient's sample to propose a method for detecting a patient's infectious obesity according to the presence of a detectable object. US Patent 6,664,050 (Patent Document 2) obtains a sample from a patient and Ad36 A method of diagnosing infectious obesity is disclosed by reacting with a specific antibody.
최근의 연구에 따르면 Ad36에 의한 비만 유도 과정에서도 염증 반응이 관여한다. 일반적으로 비만이 진행되면 전-염증 사이토카인(pre-inflammation cytokine)이 분비되는데, 그 중에서 Monocyte chemoattractant protein-1(MCP-1)은 대식세포(macrophage)의 infiltration을 유도하고 VEGF 등을 발현한다. 더 심각한 비만으로 진행되면 infiltration 된 대식세포 등에서 MCP-1은 물론이고 IL-6, IL-8과 같은 인터류킨(interleukin)과 종양괴사인자(TNF-알파) 등의 사이토카인이 분비되어 유리 지방산 경로의 항상성을 소멸시킨다. 그런데, Ad36을 감염시킨 마우스의 경우에 초기에는 reproductive fat pad와 혈청에서 MCP-1이 증가하였다가 감소하지만, 3달 경과 후에는 MCP-1과 TNF-알파의 mRNA와 단백질 수준이 증가하고 이에 따라 reproductive fat pad의 무게도 증가한다. 따라서 Ad36에 의하여 우선 MCP-1의 발현이 증가하고, 증가한 MCP-1에 의해 유도된 대식세포 등이 다시 TNF-알파 등의 사이토카인의 분비를 촉진하여 염증을 유발하여 비만을 유도하는 것으로 추측되고 있다. Recent studies suggest that the inflammatory response is also involved in the obesity induction process by Ad36. In general, when obesity progresses, pre-inflammation cytokine is secreted. Among them, Monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) induces macrophage infiltration and expresses VEGF. In more severe obesity, infiltration of macrophages such as IL-6, IL-8, and interleukin (TNF-alpha), as well as MCP-1, secrete cytokines of the free fatty acid pathway. Destroys homeostasis However, in the case of Ad36-infected mice, MCP-1 increased and decreased initially in reproductive fat pads and serum, but after 3 months, mRNA and protein levels of MCP-1 and TNF-alpha increased. The weight of the reproductive fat pad also increases. Therefore, the expression of MCP-1 is first increased by Ad36, and macrophages induced by the increased MCP-1, etc., induce the inflammation by inducing the secretion of cytokines such as TNF-alpha and inducing obesity. have.
그런데, Ad36과 같은 병원체에 의해 야기되는 감염성 비만은 일반적인 비만과 다른 특징을 지는 것으로 알려져 있다. 예를 들어 Ad36에 감염된 사람들은 비만 지수가 높음에도 불구하고 일반적인 비만과 달리 혈청 내 콜레스테롤 수치와 트리글리세라이드(trigyiceride) 농도가 오히려 낮다(비특허문헌 4). 따라서 Ad36에 감염되면 인간의 체중은 증가하지만 역설적으로 혈청 내 lipid의 수치를 낮춘다. 뿐만 아니라 보통 비만이 되면 고지혈증을 초개하고 특히 인슐린 저항성(insulin resistance)의 경향을 보이며 렙틴(leptin)의 함량이 증가한다. 하지만 Ad36의 감염에 의해 유도된 지방세포 분화가 일어나면 오히려 렙틴의 발현 및 방출이 감소되고 인슐린 민감성(insulin sensitivity)을 나타낸다(Vangipuram SD, Yu M, Tian J, Stanhope KL, Pasarica M, Havel PJ, Heydari AR, Dhurandhar NV. Adipogenic human adenovirus-36 reduces leptin expression and secretion and increases glucose uptake by fat cells. Int J Obes. 2007; 31: 87-96; 비특허문헌 9). 아직까지 Ad36 등에 의해 유도되는 감염성 비만이 일반적인 비만에서 나타나는 현상과 반대되는 생리적 현상을 나타내는 것에 대한 자세한 기작은 밝혀지지 않았다. However, infectious obesity caused by pathogens such as Ad36 is known to have different characteristics from general obesity. For example, people infected with Ad36 have low serum cholesterol levels and trigyiceride concentrations, unlike general obesity, despite high obesity indices (Non-Patent Document 4). Therefore, infection with Ad36 increases human body weight but paradoxically lowers serum lipid levels. In addition, obesity usually initiates hyperlipidemia, especially insulin resistance, and increases the leptin content. However, when adipocyte differentiation induced by Ad36 infection occurs, the expression and release of leptin is reduced and insulin sensitivity (Vangipuram SD, Yu M, Tian J, Stanhope KL, Pasarica M, Havel PJ, Heydari). AR, Dhurandhar NV. Adipogenic human adenovirus-36 reduces leptin expression and secretion and increases glucose uptake by fat cells.Int J Obes. 2007; 31: 87-96; Non-Patent Document 9). So far, the detailed mechanisms of infectious obesity induced by Ad36 et al. Show physiological phenomena as opposed to those of general obesity.
따라서 Ad36을 비롯한 병원균에 의한 감염성 비만이 비만의 주요한 원인일 뿐만 아니라 일반적인 비만과 다른 생물학적 기작을 보인다는 점에서 특히 감염성 비만을 사전에 방지하는 한편 사후에 치료할 수 있는 방안을 모색할 필요가 있다. 전술한 것과 같이 비만의 위험성이 대두됨에 따라 현재 식욕 억제제, 체열 발생제 및 이뇨제와 같은 비만 치료제가 개발되고 있다. 하지만 대표적인 비만 치료제인 식욕 억제제의 경우, 혈압 상승, 중독성, 고혈압 유발, 변비, 불면 등의 부작용을 보이고 있기 때문에 최근에는 식품 소재에 대한 관심이 높아지고 있는 실정이다. Therefore, the infectious obesity caused by pathogens such as Ad36 is not only a major cause of obesity, but also has a biological mechanism that is different from general obesity. As mentioned above, as the risk of obesity is on the rise, currently, obesity treatments such as appetite suppressants, heat generators and diuretics are being developed. However, in the case of the appetite suppressant which is a representative obesity treatment agent, since the side effects such as increased blood pressure, addictive, hypertension, constipation, insomnia, the interest in food materials is increasing recently.
하지만, 식품 소재를 활용한 제품에 있어서도, 식사량을 줄이고 이러한 제품을 섭취할 경우 영양소의 부족으로 인한 부작용으로 정상적인 생활이 어렵고 복용을 중단하면 다시 비만해지는 것으로 알려져 있다(L. U. Pizzorno et al., Natural Medicine Instrutions for Patients, Churchill Livingstone, 2002). 뿐만 아니라, 현재까지 개발된 비만 치료제는 단순히 종래의 일반적인 비만에만 초점을 맞추고 있기 때문에, 일반 비만과는 상이한 감염 메커니즘을 가지는 감염성 비만의 예방 및/또는 치료에는 효과적이지 못할 가능성이 많다.
However, even in the case of food-based products, it is known that reducing the amount of meals and ingesting these products makes it difficult for normal life due to side effects due to lack of nutrients and becomes obese again after stopping taking (LU Pizzorno et al., Natural Medicine). Instrutions for Patients, Churchill Livingstone, 2002). In addition, since the anti-obesity agents developed to date focus only on conventional general obesity, there is a high possibility that they will not be effective in the prevention and / or treatment of infectious obesity having an infection mechanism different from that of general obesity.
한편, 뽕나무의 암나무에만 열리는 핵과를 의미하는 오디(mulberry)는 수확의 어려움 등으로 인하여 그 이용이 극히 제한적이다. 그러나 최근에 오디의 생리적 활성 효과에 대한 연구가 일부 수행되고 있는데, 일례로 건조시킨 오디 씨앗을 착유하여 얻어진 탈지박을 메탄올을 이용하여 1차로 추출한 뒤 n-헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트 등의 유기용매로 분획한 뒤 크로마토그래피로 분리, 정제하여 얻어진 폴리페놀화합물이 항산화 활성이 있다는 연구(Yu-Jin Lee et al. Isolation and Identification of Antioxidant Polyphenolic Compounds in Mulberry (Morus alba L.) Seeds. J Korean Soc Food Sci Nutr. 2011; 40: 517-524; 비특허문헌 10), 오디의 메탄올 추출물 또는 오디에서 유래한 안토시아닌의 일종인 C3G(cyanidin-3-glucoside)가 H2O2에 의한 신경세포사멸의 억제, 뇌교세포주에서 NO 생성 억제, 뇌허혈 모델 세포에서 뇌세포 보호와 같은 신경세포 보호활성과 일부 세균에 대한 항균 활성을 갖는다는 연구(Hyun-Bok Kim et al. Protective Effect against Neuronal Cell and Inhibitory Activity against Bacteria of Mulberry Fruit Extracts. Korean J. Crop Sci. 2005; 50: 220-223, 비특허문헌 11; 대한민국공개특허 2004-0005434, 특허문헌 3)가 보고된 바 있다. On the other hand, mulberry, which means the nucleus that opens only on the mulberry of the mulberry tree is extremely limited due to the difficulty of harvesting. Recently, however, some studies on the physiological activity effects of Audi have been conducted. For example, degreasing foil obtained by milking dried mulberry seeds is first extracted with methanol, followed by organic extraction of n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate, and the like. Yu-Jin Lee et al. Isolation and Identification of Antioxidant Polyphenolic Compounds in Mulberry (Morus alba L.) Seeds. J Korean Soc Food Sci Nutr. 2011; 40: 517-524; Non-Patent Document 10), C3G (cyanidin-3-glucoside), a kind of anthocyanin derived from Methanol extract of Audi or Audi, was used for H 2 O 2 neuronal cell death. Inhibition, inhibition of NO production in glial cell lines, neuroprotective activity such as brain cell protection in cerebral ischemia model cells and antimicrobial activity against some bacteria (Hyun-Bok Kim et al. Pr Otective Effect against Neuronal Cell and Inhibitory Activity against Bacteria of Mulberry Fruit Extracts.Korean J. Crop Sci. 2005; 50: 220-223, Non-Patent Document 11; Korean Patent Publication 2004-0005434, Patent Document 3) .
이와 같이 오디는 특히 항산화 활성을 갖는 물질을 다량 함유하고 있고, 특히 토코페롤(비타민 E)에 비하여 노화 효과가 5-7배나 뛰어난 우수한 항산화 물질로서 안토시아닌 색소의 하나인 C3G의 함량이 높기 때문에 이를 활용하여 노화 예방, 망막 장애 치료 및 시력 개선, 피부의 종양 세포의 성장 억제를 통한 암 치료 등에 활용될 수 있을 것으로 기대되고 있다. 하지만, 오디는 노동집약적인 수확작업을 통하여 매우 짧은 시기에만 수확이 이루어지고 있으며 저장이 곤란하여 2차 가공제품의 소재로서의 시장은 거의 이루어지고 있지 않은 실정이다.
As such, Audi contains a large amount of a substance having antioxidant activity, and in particular, it is an excellent antioxidant substance having an aging effect 5-7 times higher than tocopherol (vitamin E), and because of its high content of C3G, an anthocyanin pigment, It is expected to be used for preventing aging, treating retinal disorders and improving vision, and treating cancer through inhibition of growth of tumor cells in the skin. However, Audi is harvesting only at very short time through labor-intensive harvesting, and since it is difficult to store, there is little market for secondary processed products.
전술한 것과 같이 아데노바이러스36(Ad36)은 대표적인 감염성 비만을 야기하는 병원균으로서, 감염성 비만의 생체내 메커니즘이 일부 알려져 있으나, 감염성 비만을 억제하는 물질은 알려져 있지 않다. As described above, adenovirus 36 (Ad36) is a representative pathogen that causes infectious obesity. Some mechanisms of infectious obesity are known in vivo, but substances that inhibit infectious obesity are not known.
본 발명은 이러한 문제점을 해결하기 위하여 제안된 것으로, 본 발명의 목적은 오디 유래의 추출물 및/또는 화합물을 유효 성분으로 함유하는 감염성 비만의 치료 및/또는 예방을 위한 약학 조성물을 제공하고자 하는 것이다. The present invention has been proposed to solve this problem, and an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of infectious obesity containing an extract and / or compound derived from Audi as an active ingredient.
본 발명의 다른 목적은 오디 유래의 추출물 및/또는 화합물을 유효 성분으로 함유하는 감염성 비만의 예방 및/또는 개선을 위한 식품 조성물 및/또는 건강기능식품을 제공하는 데 있다. Another object of the present invention is to provide a food composition and / or dietary supplement for preventing and / or ameliorating infectious obesity containing an extract and / or compound derived from audi as an active ingredient.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 후술하는 발명의 상세한 설명 및 첨부하는 도면을 통하여 더욱 분명해질 것이다.
Other objects and advantages of the present invention will become more apparent from the following detailed description of the invention and the accompanying drawings.
본 발명에 따르면, 오디(mulberry) 추출물을 유효 성분으로 함유하는, 아데노바이러스 36(Adenovirus 36, Ad36)에 의해 야기되는 감염성 비만의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물을 제공한다. According to the present invention, there is provided a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of infectious obesity caused by Adenovirus 36 (Ad36), which contains an mulberry extract as an active ingredient.
상기 오디 추출물은 상기 Ad36에 대한 항바이러스 활성을 가지는데, Monocyte chemoattractant Protein-1(MCP-1) 및 종양괴사인자알파(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)의 발현을 억제하거나, 대식세포(macrophage)의 지방세포 내부로의 유입을 억제하거나, Ad36의 감염으로 인하여 활성화되는 유전자 중에서 E1A 유전자 및 Hexon 유전자의 발현을 억제한다. The Audi extract has antiviral activity against Ad36, and inhibits expression of Monocyte chemoattractant Protein-1 (MCP-1) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), or macrophages ( It inhibits the influx of macrophage into adipocytes or inhibits the expression of E1A gene and Hexon gene among genes activated by Ad36 infection.
아울러, 오디 추출물은 세포내 peroxisome-proliferator-activated receptor-α(PPAR-α) 및 CCAAT/enhancer binding protein α(C/EBP-α)의 발현을 억제한다. In addition, the Audi extract inhibits the expression of intracellular peroxisome-proliferator-activated receptor-α (PPAR-α) and CCAAT / enhancer binding protein α (C / EBP-α).
바람직하게는 상기 오디 추출물은 상기 약학 조성물 중에 0.1 ng/㎖ 내지 100 ㎍/㎖의 농도로 함유될 수 있다. Preferably, the Audi extract may be contained in the pharmaceutical composition at a concentration of 0.1 ng / ml to 100 μg / ml.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1 내지 화학식 5의 화합물 또는 이들 화합물의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는, 아데노바이러스 36(Adenovirus 36, Ad36)에 의해 야기되는 감염성 비만의 예방 또는 치료를 위한 약학 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides for the prevention or treatment of infectious obesity caused by Adenovirus 36 (Ad36), containing as an active ingredient a compound of
화학식 1
화학식 2(2)
화학식 3(3)
화학식 4Formula 4
화학식 5Formula 5
전술한 화합물 또는 이들 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은 상기 Ad36 Ad36에 대한 항바이러스 활성을 가지는데, Ad36의 유전자 중에서 E1A(E1 Open reading frame-1) 유전자 및/또는 Hexon 유전자의 발현을 억제한다. The aforementioned compounds or pharmaceutically acceptable salts of these compounds have antiviral activity against Ad36 Ad36, which inhibits the expression of E1 Open reading frame-1 (E1A) and / or Hexon genes among Ad36 genes. .
화학식 1 내지 화학식 5의 화합물 또는 이들 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은 세포내 peroxisome-proliferator-activated receptor-α(PPAR-α) 및 CCAAT/enhancer binding protein α(C/EBP-α)의 발현을 억제하는 방법으로 Ad36에 의한 감염성 비만을 억제한다. Compounds of Formulas 1-5 or pharmaceutically acceptable salts of these compounds may be used to inhibit the expression of peroxisome-proliferator-activated receptor-α (PPAR-α) and CCAAT / enhancer binding protein α (C / EBP-α) in cells. Inhibitory method inhibits infectious obesity caused by Ad36.
바람직하게는 전술한 화합물 또는 이들 화합물의 약학적으로 허용가능한 염은 상기 약학 조성물 중에 0.1 ~ 1000 ng/㎖의 농도로 함유된다. Preferably the above-mentioned compounds or pharmaceutically acceptable salts of these compounds are contained in the pharmaceutical composition at a concentration of 0.1-1000 ng / ml.
또한, 본 발명은 오디(mulberry) 추출물을 유효 성분으로 함유하는, 인간 아데노바이러스 36(Adenovirus 36, Ad36)에 의해 야기되는 감염성 비만의 억제 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다. The present invention also provides a dietary supplement for suppressing or improving infectious obesity caused by human Adenovirus 36 (Ad36), which contains mulberry extract as an active ingredient.
아울러, 본 발명은 전술한 화합물 또는 이들 화합물의 약학적으로 허용가능한 염을 유효 성분으로 함유하는, 인간 아데노바이러스 36(Adenovirus 36, Ad36)에 의해 야기되는 감염성 비만의 억제 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.
In addition, the present invention provides a dietary supplement for suppressing or ameliorating infectious obesity caused by human Adenovirus 36 (Ad36), which contains the aforementioned compounds or pharmaceutically acceptable salts of these compounds as active ingredients. to provide.
본 발명에서는 오디 추출물 및 오디 유래의 화합물이 특히 아데노바이러스 36(Ad36)에 의한 감염성 비만의 예방, 치료 및/또는 개선과 같은 생리활성 기능을 확인하였다. In the present invention, audi extracts and compounds derived from audi have identified bioactive functions such as the prevention, treatment and / or amelioration of infectious obesity, in particular by adenovirus 36 (Ad36).
본 발명에 따른 생리활성 기능을 갖는 유효성분들은 천연물에서 유래한 것이기 때문에 이러한 유효성분을 함유하는 감염성 비만의 치료 및/또는 예방을 위한 약품 및/또는 건강기능식품의 경우, 기존의 비만 치료제가 가지고 있는 부작용과 약리학적 문제점을 해소할 수 있을 것으로 기대된다. Since the active ingredients having a physiologically active function according to the present invention are derived from natural products, in the case of drugs and / or health functional foods for the treatment and / or prevention of infectious obesity containing such active ingredients, the existing anti-obesity agents have It is expected to resolve side effects and pharmacological problems.
특히, 비만은 성인 당뇨병, 고혈압, 동맥 경화, 심장질환 및 관절염 등과 같은 다양한 난치성 질환의 직접적인 원인이 되고 있으므로, 본 발명에 따른 유효성분을 활용하여 국민 건강의 수준을 증대시킬 수 있다. In particular, obesity is a direct cause of various refractory diseases such as diabetes mellitus, high blood pressure, arteriosclerosis, heart disease and arthritis, and can increase the level of public health by utilizing the active ingredient according to the present invention.
아울러 국내 자원식물인 오디에서 얻어진 물질을 사용하기 때문에 오디 재배 영농조합의 안정적인 수매를 통한 수입확대 및 고부가가치 창출에 기여할 수 있다.
In addition, the use of materials obtained from the domestic resource plant, Audi, can contribute to the expansion of imports and the creation of high added value through the stable purchase of the Audi cultivation farming association.
도 1은 본 발명의 실시예에 따라 오디 추출물을 경구 투여의 방법으로 일정 기간 섭취한 마우스에서의 Ad36에 대한 항바이러스 활성을 측정한 것으로, 마우스의 지방층(fat pad)에서 RNA를 뽑아 PCR을 이용하여 Ad36의 titer를 측정한 그래프로서, "mulberry"는 오디 추출물을 경구 투여의 방법으로 섭취시킨 뒤 Ad36로 감염시킨 마우스를 대상으로 한 것이고, "Ad36"은 오디 추출물의 섭취 없이 Ad36으로 감염시킨 뒤에 물만 섭취한 마우스를 대상으로 한 것이다.
도 2a 내지 도 2c는 각각 본 발명의 실시예에 따라 일정기간 오디 추출물을 섭취하고 Ad36로 감염시킨 마우스의 비만 억제 정도를 측정한 그래프로서, 도 2a는 마우스의 체중 증가를 측정한 것이고, 도 2b는 각 Group 마우스의 지방층을 촬영한 사진이며, 도 2c는 지방층 중량의 증가를 측정한 것이다. "Group 1"은 오디 추출물을 일정기간 섭취한 뒤 마우스에 Ad36을 주입한 마우스를 대상으로 한 것이고, "Group 2"는 Ad36을 사전에 주입하고 Ad36의 감염과 동시에 오디 추출물의 섭취를 일정기간 지속한 마우스를 대상으로 한 것이며, "Ad36(water)"는 Ad36로 감염시킨 뒤에 오디 추출물의 섭취 없이 물만 섭취한 마우스를 대상으로 한 것이고, "Mock"은 오디 추출물의 섭취도 없고 Ad36로 감염시키지 않은 마우스를 대상으로 한 것이다. 오디 추출물을 섭취한 마우스의 경우 Ad36의 감염에도 불구하고 체중과 체지방 증가가 억제되었음을 알 수 있다.
도 3a 내지 도 3b는 각각 본 발명의 일 실시예에 따라 일정기간 오디 추출물을 섭취하고 Ad36로 감염시킨 마우스의 지방 조직에서 AD36의 감염에 의한 비만 유도 과정에 관여하는 전-염증 사이토카인(pro-inflammatory cytokine)의 분비 억제 정도를 측정한 그래프로서, 도 3a는 MCP-1의 분비 억제 정도를 측정한 것이고, 도 3b는 TNF-α의 분비 억제 정도를 측정한 것이다. "Group 1", "Group 2", "Ad36(water)", "Mock"의 의미는 도 2a 내지 도 2c와 동일하다.
도 4a 내지 도 4c는 각각 본 발명의 일 실시예에 따라 일정기간 오디 추출물을 섭취하고 Ad36로 감염시킨 마우스의 면역 반응과 관련하여 macrophage의 infiltration 억제 효능을 측정한 그래프로서, 도 4a는 대식세포의 infiltration 정도를 촬영한 사진이고, 도 4b는 전체적인 macrophage의 양을 알기 위하여 F4/80 항체를 염색하여 FACS로 측정한 것이고, 도 4c는 Th1 경로가 일어나도록 하는데 감염 현상과 관련이 있는 M1 macrophage(CD64)의 양을 FACS로 측정한 것이다. "Group 1", "Group 2", "Ad36(water)", "Mock"의 의미는 도 2a 내지 도 2c와 동일하다.
도 5a 내지 도 5d는 각각 본 발명의 일 실시예에 따라 오디 유래 물질의 Ad36의 항바이러스 효과를 알아보기 위하여 Ad36에 의해 유도되는 유전자의 mRNA 발현 정도를 측정한 그래프로서, 초기 유전자인 E1A와 후기 유전자인 Hexon 유전자를 대상으로 한 것이다. 도 5a는 오디 추출물의 농도별 투여에 따른 E1A 유전자의 mRNA 발현 정도를 측정한 그래프, 도 5b는 오디 추출물의 농도별 투여에 따른 Hexon 유전자의 mRNA 발현 정도를 측정한 그래프, 도 5c는 오디 유래 화합물의 농도별 투여에 따른 E1A 유전자의 mRNA 발현 정도를 측정한 그래프, 도 5d는 오디 유래 화합물의 농도별 투여에 따른 Hexon 유전자의 발현 정도를 측정한 그래프이다.
도 6a 내지 도 6d는 각각 본 발명의 일 실시예에 따라 오디 유래 물질의 세포내 지방축적 억제 효과를 측정한 그래프로서, 세포내 지방 축적을 유도하는 유전자를 대상으로 한 것이다. 도 6a는 오디 추출물의 농도별 투여에 따른 PPAR 유전자의 mRNA 발현 정도를 측정한 그래프, 도 6b는 오디 추출물의 농도별 투여에 따른 C/EBPα 유전자의 mRNA 발현 정도를 측정한 그래프, 도 6c는 오디 유래 화합물의 농도별 투여에 따른 PPAR 유전자의 mRNA 발현 정도를 측정한 그래프, 도 6d는 오디 유래 화합물의 농도별 투여에 따른 C/EBPα 유전자의 발현 정도를 측정한 그래프이다.1 is a measure of the antiviral activity against Ad36 in a mouse ingested for a certain period by the method of oral administration of the Audi extract according to an embodiment of the present invention, by using RNA extracted from the fat pad (fat pad) of the mouse using PCR The titer of Ad36 was measured by "mulberry" in mice infected with Ad36 after ingestion of the Audi extract by oral administration, and "Ad36" after infection with Ad36 without ingestion of the Audi extract. The mice were fed with water only.
Figure 2a to 2c is a graph measuring the degree of inhibition of obesity in mice infected with Ad36 and ingested the Audi extract for a period of time according to an embodiment of the present invention, Figure 2a is a measure of the weight gain of the mouse, Figure 2b Is a photograph of the fat layer of each group mouse, Figure 2c is a measure of the increase in the fat layer weight. "
3A to 3B show pro-inflammatory cytokines involved in the obesity-inducing process of AD36 infection in adipose tissue of mice infected with Ad36 and fed with Ad36 for a period of time, according to an embodiment of the present invention. As a graph measuring the degree of inhibition of inflammatory cytokine secretion, Figure 3a is a measure of the inhibition of secretion of MCP-1, Figure 3b is a measure of the degree of inhibition of secretion of TNF-α. The meanings of "
4A to 4C are graphs illustrating the infiltration inhibitory effect of macrophage in relation to the immune response of mice infected with Ad36 and ingested with Audi extract for a period of time according to one embodiment of the present invention. Figure 4b is a photograph of the degree of infiltration, Figure 4b was measured by FACS staining F4 / 80 antibodies to determine the overall amount of macrophage, Figure 4c shows the Th1 pathway occurs M1 macrophage (CD64) related to the infection phenomenon ) Is measured by FACS. The meanings of "
5A to 5D are graphs measuring mRNA expression levels of genes induced by Ad36 in order to determine the antiviral effect of Ad36 of an Audi-derived material according to one embodiment of the present invention. Hexon gene, a gene. Figure 5a is a graph measuring the mRNA expression level of the E1A gene according to the concentration of the audio extract, Figure 5b is a graph measuring the mRNA expression level of the Hexon gene according to the concentration of the audio extract, Figure 5c is a compound derived from audio Figure 5d is a graph measuring the mRNA expression level of the E1A gene according to the concentration of the administration, Figure 5d is a graph measuring the expression level of the Hexon gene according to the concentration of the compound derived from Audi.
6A to 6D are graphs measuring the effects of inhibiting intracellular fat accumulation of an Audi-derived substance according to one embodiment of the present invention, respectively, targeting genes that induce intracellular fat accumulation. Figure 6a is a graph measuring the mRNA expression level of the PPAR gene according to the administration of the concentration of the audio extract, Figure 6b is a graph measuring the mRNA expression level of the C / EBPa gene according to the administration of the concentration of the audio extract, Figure 6c Graph of measuring the mRNA expression level of the PPAR gene according to the concentration of the derived compound, Figure 6d is a graph measuring the expression level of the C / EBPa gene according to the concentration of the compound derived from Audi.
본 발명자들은 특히 Ad36로 대표되는 병원균에 의한 감염성 비만의 예방, 치료 또는 개선을 위한 생리활성 기능을 갖는 식물 천연소재 물질에 대한 연구를 수행하여, 오디에서 유래한 성분이 감염성 비만에 효과가 있다는 사실을 밝혀내고 본 발명을 완성하였다. The inventors of the present invention have conducted studies on plant natural material having a physiologically active function for preventing, treating or improving infectious obesity caused by a pathogen represented by Ad36, in particular, the fact that an ingredient derived from Audi has an effect on infectious obesity. It was found and completed the present invention.
본 명세서에서 "감염성 비만"이라는 용어는 바이러스나 미생물과 같은 병원균이 숙주 세포로 침투하여 숙주 세포를 감염시키는 과정에서 야기되는 비만을 의미한다. As used herein, the term “infectious obesity” refers to obesity caused by a pathogen such as a virus or microorganism penetrating into a host cell to infect the host cell.
본 명세서에서 "오디 추출물"이라는 용어는 적절한 유기용매를 사용하여 얻어지는 형태(유기용매 추출물)는 물론이고, 이러한 유기용매 추출물을 분리, 정제하여 얻어진 형태를 포함하는 의미이다. As used herein, the term "audio extract" is meant to include the form obtained by separating and purifying the organic solvent extract, as well as the form (organic solvent extract) obtained by using an appropriate organic solvent.
본 명세서에서 "오디 유래의 물질"이라는 용어는 오디 추출물, 이러한 오디 추출물에 포함되어 있는 화합물로서, 후술하는 화학식 1 내지 화학식 5의 화합물 및/또는 이들 화합물의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 것을 의미한다. As used herein, the term "substance derived from audi" refers to an audio extract, a compound included in such an audio extract, including compounds of the following
이하, 본 발명에 따른 감염성 비만을 예방, 치료 및/또는 개선할 수 있는 유효 성분으로서 오디 유래의 물질 및 약학적, 식품공학적 응용에 대해서 설명한다.
Hereinafter, a substance derived from audi and pharmaceutical and food engineering applications will be described as an active ingredient capable of preventing, treating and / or improving infectious obesity according to the present invention.
[유효 성분][Active ingredient]
1. 오디 추출물1. Audi Extract
오디 추출물은 식물에 통상적인 유기용매를 이용하여 얻을 수 있으며, 필요에 따라 유기 용매 추출물을 분리/정제하여 얻은 것일 수 있다. 우선, 본 발명에 따른 식물소재로서의 오디는 뽕나무(white mulberry; Morus alba L.)로부터 수확할 수 있으며 일례로 우리나라에서 재배되고 있는 다양한 변종이나 개량 품종에서 얻어질 수 있다. 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니지만, 오디를 수확할 수 있는 뽕나무의 계통으로는 산상계, 백상계 및 노상계를 포함하며, 이러한 뽕나무의 품종 및 변종으로는 "수성뽕", "강선", "국광", "사방소", "태전조생", "절곡조생", "부사", "팥청시평", "수원노상", "청노상", "천현노상", "죽천조생", "이대내", "당상", "목상", "장소상", "원고""청일뽕", "수일뽕", "한성뽕", "밀성뽕", "신광뽕", "청운뽕", "수성뽕", "상일뽕", "수봉뽕", "신일뽕", "용천뽕", "청올뽕", "홍올뽕", "대륙뽕", "수계뽕", "검설뽕", "수원뽕" 등을 포함할 수 있다. The Audi extract may be obtained by using an organic solvent common to plants, and may be obtained by separating / purifying the organic solvent extract as necessary. First, the mulberry as a plant material according to the present invention can be harvested from mulberry ( Morus alba L.) and can be obtained from various varieties or improved varieties that are cultivated in Korea, for example. The present invention is not limited thereto, but the mulberry tree that can be harvested by the Audi includes a mountain system, a white family and a roadbed, such varieties and varieties of the mulberry "aqueous mulberry", "steel wire", " Gwanggwang "," Square Place "," Taejeon Jo "," Bending Jo "," Adverb "," Red Bean Cheong Sipyeong "," Suwon Nosang "," Cheongno Award "," Cheonhyun Nosang "," Jukcheon Joseong "," Daenae Inner "," Dangsang "," Wood "," Location "," Plan "," Cheonil-Mong "," Soil Mulberry "," Hanseong Mulberry "," Milgong Mulberry "," Shingwang Mulberry "," Chungwoon Mulpong "," Suseong "Mongmul", "Sangil-mong", "Subong-mong", "Sinil-Mong", "Yongcheon-mong", "Cheongol-mong", "Hong-ol-mong", "Continental", "Su-Gye-Mong" Mulberry "and the like.
용매 추출을 위해서 냉동 건조된 오디 분말에 적절한 용매를 사용할 수 있는데, 본 발명에 따른 추출용매로는 탄소수 1 내지 4의 알코올이 특히 사용될 수 있다. 바람직하게는 식용으로 사용가능한 주정(에탄올)이고, 특히 바람직하게는 50 ~ 100%, 예를 들어 70%의 주정이다. 추출 방법으로는 예를 들어 냉침추출법, 온침추출법 열 추출법을 활용할 수 있으며, 통상의 추출기, 초음파 분쇄기 또는 분획기를 이용할 수 있다. Suitable solvents may be used for the freeze-dried Audi powder for solvent extraction. As the extraction solvent according to the present invention, an alcohol having 1 to 4 carbon atoms may be used. It is preferably alcohol (ethanol) usable for food, particularly preferably from 50 to 100%, for example 70%. As the extraction method, for example, cold extraction method, hot extraction method heat extraction method may be used, and a conventional extractor, an ultrasonic mill or a fractionator may be used.
본 발명의 실시예에 따르면 뽕나무에서 수확하고, 냉동 건조된 오디를 적당한 크기로 분쇄하여 분말 상태로 만든 상태에서 추출 용기에 넣고, 적당한 양의 70% 주정을 12~36 시간 첨가하여 상온에서 조추출액을 얻는다. 이때, 필요에 따라서 적절한 농도(예를 들어 0.1 ~ 1.0%)의 구연산을 추출 용매로 사용된 주정과 함께 첨가하여 오디에 함유된 일부 성분을 안정화시킬 수 있다. 추출 효율을 높이기 위하여 이 과정을 수회 이상 반복 수행할 수 있으며, 얻어진 조추출액을 여과한 뒤 손으로 직접 오디를 짓이겨 추출하거나, 진탕기를 이용하는 등의 방법이 사용될 수 있다. According to an embodiment of the present invention, harvested from mulberry, lyophilized audi in a state of pulverized in a powder state and put into an extraction container, the crude extract at room temperature by adding a suitable amount of 70% alcohol 12-36 hours Get At this time, citric acid at an appropriate concentration (for example, 0.1 to 1.0%) may be added together with the alcohol used as the extraction solvent, if necessary, to stabilize some components contained in the Audi. This process may be repeated several times or more in order to increase the extraction efficiency, and after filtering the crude extract obtained by hand squeezing the Audi directly by hand, a method such as using a shaker may be used.
필요에 따라서 전술한 방법으로 얻어진 오디의 유기용매 추출물에 대하여 n-헥산과 같은 헥산, 디클로로메탄, 에틸아세테이트, n-부탄올, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 에틸에테르, 클로로포름, 물 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 용매로 분획과정을 더욱 실시할 수 있다. 또는 전술한 오디 유래의 유기용매 추출물 또는 유기용매를 이용한 분획물을 물에 현탁시킨 뒤에 헥산/에틸아세테이트 또는 클로로포름/메탄올 등의 혼합 용매를 사용한 칼럼 크로마토그래피를 수행하여 오디 유래의 분획물을 얻을 수도 있을 것이다. 예를 들어, 오디의 에탄올/구연산 추출물을 실리카겔 칼럼으로 충진된 크로마토그래피를 이용할 수 있다. If necessary, the organic solvent extract of Audi obtained by the above-described method is composed of hexane, such as n-hexane, dichloromethane, ethyl acetate, n-butanol, methylene chloride, acetone, ethyl ether, chloroform, water, and a mixture thereof. The fractionation process can be further carried out with a solvent selected from. Alternatively, the above-mentioned organic solvent extract or the fraction using the organic solvent may be suspended in water and then subjected to column chromatography using a mixed solvent such as hexane / ethyl acetate or chloroform / methanol to obtain a fraction derived from Audi. . For example, chromatographically packed ethanol / citric acid extracts of Audi with silica gel columns can be used.
또한, 필요에 따라 유기용매를 이용한 분획물 또는 칼럼 크로마토그래피를 이용한 분획물을 대상으로 예를 들어 Sephadex LH-20 칼럼으로 충진된 칼럼 크로마토그래피를 수행하거나 고속 액체크로마토그래피(HPLC)를 수행하는 등의 방법으로 정제하는 단계가 수행될 수 있다.
In addition, if necessary, fractions using an organic solvent or fractions using column chromatography may be subjected to, for example, column chromatography packed with a Sephadex LH-20 column or high performance liquid chromatography (HPLC). Purifying may be performed.
전술한 방법에 따라 얻어진 유기용매 추출물 또는 분획과정을 통하여 얻어진 분획물은 이후 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거할 수 있으며, 여과, 농축 및 건조를 모두 수행할 수 있다. 구체적으로 상기 여과는 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 상기 농축은 감압 농축기, 일예로 회전 증발기를 이용하여 감압농축할 수 있으며, 상기 건조는 일예로 동결건조법으로 수행할 수 있다. 예를 들면 70% 주정과 0.1% 구연산을 혼합 사용하여 얻어진 오디의 조추출액을 35 ~ 45℃에서 회전진공 농축기를 이용하여 감압농축하여 농축된 형태의 오디 추출물을 얻을 수 있다. The organic solvent extract or fractions obtained through the fractionation process obtained in accordance with the above-described method may then be filtered or concentrated or dried to remove the solvent, it is possible to perform both filtration, concentration and drying. Specifically, the filtration can be performed using a filter paper or a vacuum filter, and the concentration can be reduced by using a vacuum concentrator, for example, a rotary evaporator. The drying can be performed by, for example, freeze drying. For example, the crude extract of the obtained audio using a mixture of 70% alcohol and 0.1% citric acid can be concentrated under reduced pressure using a rotary vacuum concentrator at 35 ~ 45 ℃ to obtain a concentrated audio extract.
오디의 농축물을 바로 동결건조하여 분말 형태의 오디 추출물로 활용될 수 있으나 이러한 형태의 분말은 수분에 대한 흡습성이 높아 보관할 때 안전성에 문제가 있을 수 있다. 따라서 저-흡습성으로 수분흡수를 억제하는 부형제, 예를 들어 덱스트린이나 말토덱스트린을 적절한 비율로 오디 농축물에 첨가하는 것이 바람직할 수 있다. Directly freeze-dried concentrates of the Audi can be utilized as a powdery extracts, but this type of powder may have a safety problem when stored because of high hygroscopicity for moisture. Thus, it may be desirable to add excipients that are low-hygroscopic and inhibit water absorption, such as dextrin or maltodextrin, in appropriate proportions in the Audi concentrate.
전술한 방법을 통하여 얻어진 오디 추출물의 아데노바이러스36(Ad36)에 대한 항바이러스 효과 및 이 바이러스로 야기되는 감염성 비만의 억제를 살펴보았다. 비교를 위해서 오디 추출물을 사전에 섭취하고 Ad36으로 감염시킨 그룹 (Group1), Ad36의 감염과 동시에 오디 추출물을 섭취한 그룹 (Group 2), 오디 추출물 섭취 없이 물을 섭취하며 Ad36으로 감염시킨 그룹 (Ad36), 오디 추출물 섭취도 Ad36의 감염도 없는 그룹 (mock)으로 구분하였다. 오디 추출물을 섭취한 그룹(Group 1 및 Group 2)의 경우, 비만을 야기하는 것으로 알려져 있는 Ad36에 대한 항바이러스 활성을 보였을 뿐만 아니라, 오디 추출물의 섭취에 의하여 대조군에 비하여 체중 증가가 억제되고, 지방 세포의 무게 역시 감소하는 것을 확인하였다. 특이하게도 최적 항바이러스, 항비만 활성을 보이는 최적 농도가 있음이 확인되었다. The antiviral effect of adenovirus 36 (Ad36) and the inhibition of infectious obesity caused by this virus were examined. For comparison, the group was previously fed with Audi extract and infected with Ad36 (Group1), the group was fed with Audi extract at the same time as Ad36 infection (Group 2), and the group was infected with Ad36 with water without taking Audi extract (Ad36) ), They were divided into two groups (mock) without ingestion of Audi extract and infection with Ad36. Groups ingested with Audi extracts (
본 발명의 실시예에 따르면 오디 추출물은 Ad36에 대한 항-바이러스 활성을 보여서 Ad36의 감염을 억제하는 효과가 있고(도 1 참조), 오디 추출물을 투여하고 Ad36로 감염시킨 경우나, Ad36의 감염 및 오디 추출물의 투여를 동시에 한 경우에 모두 체중을 감소시켜 비만을 억제할 수 있었다(도 2a 내지 도 2c 참조). According to an embodiment of the present invention, the Audi extract exhibits anti-viral activity against Ad36, and thus has an effect of inhibiting infection of Ad36 (see FIG. 1), when the Audi extract is administered and infected with Ad36, or when infected with Ad36 and In the case of simultaneous administration of the Audi extract, weight was all reduced to prevent obesity (see FIGS. 2A to 2C).
한편, Ad36 감염 후 90일 정도가 경과하면 비만이 진행되어 지방 조직에서 만성 염증이 진행되고, 이 과정에서 전-염증 사이토카인인 MCP-1이나 TNF-α의 분비가 촉진되는 것으로 알려져 있다. 본 발명에 따른 오디 추출물을 투여한 마우스의 경우, 비만을 유지하는데 영향을 주는 전-염증 사이토카인의 발현이나 분비를 억제한다는 점을 확인하였다(도 3a 및 도 3b 참조). 아울러 비만이 유도되면 전술한 전-염증 사이토카인에 의하여 대식세포(macrophage)와 같은 다양한 면역 세포들이 지방조직 내부로 유도되는 infiltration이 일어난다. 이에 본 발명에서는 감염과 관련이 있는 대식세포인 CD64의 infiltration 정도를 측정하였으며, 본 발명에 따른 오디 추출물이 이들 대식세포의 infiltration을 억제한다는 점을 확인하였다(도 4a 내지 도 4c 참조). On the other hand, about 90 days after Ad36 infection, obesity progresses, chronic inflammation progresses in adipose tissue, and in this process, secretion of pro-inflammatory cytokines MCP-1 or TNF-α is known to be promoted. In the case of the mouse administered with the Audi extract according to the present invention, it was confirmed that it inhibits the expression or secretion of pro-inflammatory cytokines affecting the maintenance of obesity (see FIGS. 3A and 3B). In addition, when obesity is induced, various infiltration of various immune cells such as macrophage (macrophage) is induced by aforesaid pro-inflammatory cytokines into adipose tissue. Therefore, in the present invention, the degree of infiltration of CD64, which is a macrophage associated with infection, was measured, and it was confirmed that the Audi extract according to the present invention inhibited infiltration of these macrophages (see FIGS. 4A to 4C).
특히, 본 발명에 따라 얻어진 오디 추출물은 Ad36의 감염을 통하여 개시되는 감염성 비만의 진행에 있어서 밀접한 관련이 있는 것으로 알려진 유전자의 발현을 억제함으로써, Ad36에 대한 항바이러스 활성을 갖는다. 예를 들어, 본 발명의 오디 추출물은 Ad36으로 인한 감염성 비만과 관련이 있는 E1A 유전자 및 Hexon 유전자의 발현을 억제한다(도 5a 및 도 5b 참조). 아울러, 세포 내의 지방 축적과 밀접한 관련이 있는 peroxisome-proliferator-activated receptor-α(PPAR-α) 및 CCAAT/enhancer binding protein α(C/EBP-α)의 발현을 억제하여 세포내의 지방축적을 억제하는 것으로 확인되었다(도 6a 및 도 6b 참조). 이러한 결과에 비추어 볼 때, 오디 추출물은 감염성 비만, 특히 Ad36의 감염으로 인한 비만의 진행을 억제한다는 점을 알 수 있다.
In particular, the Audi extract obtained according to the present invention has antiviral activity against Ad36 by inhibiting the expression of genes known to be closely involved in the progression of infectious obesity initiated through infection with Ad36. For example, the Audi extract of the present invention inhibits the expression of the E1A and Hexon genes associated with infectious obesity due to Ad36 (see FIGS. 5A and 5B). In addition, it inhibits the expression of peroxisome-proliferator-activated receptor-α (PPAR-α) and CCAAT / enhancer binding protein α (C / EBP-α), which are closely related to the accumulation of fat in cells. (See FIGS. 6A and 6B). In light of these results, it can be seen that the Audi extract inhibits the progression of infectious obesity, especially obesity due to infection with Ad36.
2. 오디 유래의 화합물2. Compounds from Audi
본 발명자들은 전술한 결과에 기초하여, 오디에 감염성 비만의 예방 또는 치료를 위한 활성 성분이 포함되어 있음을 확인하고, 오디 유래의 화합물질에 대해서도 감염성 비만의 예방 또는 치료를 위한 효과 여부를 확인하였다. 이를 위하여 오디 유래 성분이라고 알려져 있는 화합물 성분 중에서 상업적으로 입수할 수 있는 화합물에 대하여 Ad36의 항바이러스 활성을 검토하였다. 특히 본 발명에 따라 감염성 비만의 예방 또는 치료 효능이 오디 유래의 화합물로는 하기 화학식 1 내지 하기 화학식 5로 표시되는 화합물 및/또는 이들 화합물의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.Based on the above results, the present inventors have confirmed that Audi contains active ingredients for the prevention or treatment of infectious obesity, and has confirmed the effects of preventing or treating infectious obesity with respect to the compound derived from Audi. . For this purpose, the antiviral activity of Ad36 was examined for a commercially available compound among the compound components known as an Audi-derived component. In particular, according to the present invention, compounds having an effect of preventing or treating infectious obesity include a compound represented by the following general formulas (1) to (5) and / or pharmaceutically acceptable salts of these compounds.
화학식 1
화학식 2(2)
화학식 3(3)
화학식 4Formula 4
화학식 5Formula 5
화학식 1의 화합물은 polyhydroxylated alkaloid의 일종인데, 통상적으로1-디옥시노지리마이신(1-Deoxynojirmycin)이라는 명칭으로 불리고 있으나, 정식 명칭은 (2R,3R,4R,5S)-2-(Hydroxymethyl)-3,4,5-piperidinetriol이다. 화학식 2의 화합물은 안토시아닌(anthocyanin)의 일종으로서, kuromanin chloride, Chrysanthemin, Glucocyanidin 등의 다양한 관용 명칭으로 불리고 있는데, 정식 명칭은 (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxychromenylium-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol chloride이다. 화학식 3의 화합물은 항암 효과 등이 있는 것으로 알려진 폴리페놀계 화합물로서, 레스베라트롤(Resevertrol)이라는 명칭으로 잘 알려져 있으며, 정식 명칭은 (E)-5-(p-Hydroxystyryl)resorcinol (E)-5-(4-hydroxystyryl)benzene-1,3-diol이다. 또한, 화학식 4의 화합물은 안토시아닌의 일종으로서 통상적으로 Callistephin chloride라는 명칭으로 불리고 있지만, 정식 명칭은 5,7-Dihydroxy-2-(4-hydroxy-phenyl)-3-((2S,3R,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-hydroxymethyl-tetrahydro-pyran-2-yloxy)-chromenylium chloride이다. 아울러 화학식 5의 화합물 역시 안토시아닌의 일종으로서 keracyanin chloride, Cyanidin 3-rutinoside 등의 다양한 명칭으로 불리는데, 정식 명칭은 (2S,3R,4S,5S,6R)-2-[2-(3,4-dihydroxyphenyl)-5,7-dihydroxychromenylium-3-yl]oxy-6-[[(2R,3R,4R,5R,6S)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxymethyl]oxane-3,4,5-triol chloride이다. The compound of
본 발명은 상기 화학식 1 내지 화학식 5로 표시되는 화합물 및 이들 화합물의 약학적으로 허용되는 염은 상업적으로 입수 가능하다. 특히, 본 발명에 따른 화학식 1 내지 화학식 5로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. The present invention is a compound represented by
산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 술폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.Acid addition salts include inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid and aliphatic mono and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxy alkanoates and alkanediodes. Obtained from non-toxic organic acids such as acids, aromatic acids, aliphatic and aromatic sulfonic acids. Such pharmaceutically innocuous salts include, but are not limited to, sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogenphosphate, dihydrogenphosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, Butyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, succinate, maleic anhydride, maleic anhydride, , Sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitrobenzoate, hydroxybenzoate, Methoxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzene sulfonate, toluene sulfonate, chlorobenzene sulfide Propyl sulphonate, naphthalene-1-yne, xylenesulfonate, phenylsulfate, phenylbutyrate, citrate, lactate,? -Hydroxybutyrate, glycolate, maleate, Sulfonate, naphthalene-2-sulfonate or mandelate.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1의 화합물을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 생성된 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 특히 화학식 1의 화합물의 염산염의 형태로 사용할 수 있다. The acid addition salts according to the invention can be prepared in a conventional manner, for example, by dissolving a compound of
아울러, 동량의 화합물 및 물에 용해된 산 또는 알코올을 가열하고, 이어서 이 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다. 또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다.In addition, the same amount of the compound and acid or alcohol dissolved in water may be heated and then the mixture is evaporated to dryness or prepared by suction filtration of the precipitated salt. In addition, bases can be used to make pharmaceutically acceptable metal salts.
알칼리금속염 또는 알칼리토금속염은 예를 들면 화학식 1의 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 약제학적으로 볼 때 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.
Alkali metal salts or alkaline earth metal salts are obtained, for example, by dissolving a compound of formula (1) in an excess of alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering insoluble compound salts, and evaporating and drying the filtrate. In this case, as the metal salt, it is suitable to prepare sodium, potassium, or calcium salt from the pharmaceutical viewpoint. In addition, corresponding silver salts are obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable negative salt (eg, silver nitrate).
본 발명의 실시예에 따르면, 전술한 화학식 1 내지 화학식 5의 화합물 및/또는 이들 화합물의 약학적으로 허용가능한 염의 경우, Ad36에 대하여 항바이러스 활성을 보이고 있어서, 이들 화합물 역시 Ad36에 의해 야기되는 감염성 비만의 억제 효과라는 생리적 활성 기능을 가지고 있다는 점을 확인하였다. According to an embodiment of the present invention, the compounds of
본 발명에 따르면, 전술한 화학식 1 내지 화학식 5의 화합물 또는 이들 화합물의 염은 감염성 비만의 주요 인자인 Ad36의 감염에 의하여 야기되는 Ad36 유래의 유전자의 발현을 억제한다. 구체적으로, 화학식 1 내지 화학식 5의 화합물 또는 이들 화합물의 염은 Ad36으로 인한 감염성 비만과 관련이 있는 E1A 유전자 및 Hexon 유전자의 발현을 억제한다(도 5c 및 도 5d 참조). 아울러, 세포 내의 지방 축적과 밀접한 관련이 있는 peroxisome-proliferator-activated receptor-α(PPAR-α) 및 CCAAT/enhancer binding protein α(C/EBP-α)의 발현을 억제하여 세포내의 지방축적을 억제하는 것으로 확인되었다(도 6c 및 도 6d 참조). 따라서 이들 화합물 및 약학적으로 허용가능한 염 등은 감염성 비만을 억제할 수 있다는 점을 확인하였다.
According to the present invention, the above-described compounds of formulas (1) to (5) or salts of these compounds inhibit the expression of genes derived from Ad36 caused by infection of Ad36, a major factor of infectious obesity. Specifically, the compounds of
[응용][Applications]
따라서 본 발명에 따르면 전술한 오디 추출물 및/또는 화학식 1 내지 화학식 5의 화합물, 이들 화합물의 약학적으로 허용되는 염 및/또는 이들 화합물의 이성질체는 특히 Ad36에 의하여 야기되는 감염성 비만의 치료, 예방 개선을 위한 조성물 중에 유효 성분으로 사용될 수 있다. Thus according to the present invention the above-mentioned Audi extracts and / or compounds of the formulas (1) to (5), pharmaceutically acceptable salts of these compounds and / or isomers of these compounds, in particular, improve the treatment, prevention of infectious obesity caused by Ad36. It can be used as an active ingredient in a composition for.
우선, 본 발명에 따른 오디 유래의 물질을 유효 성분으로 사용하여 감염성 비만의 예방 및/또는 치료를 위한 약학적 조성물, 이러한 약학적 조성물을 함유하는 감염성 비만 치료제와 같은 의약품으로 활용될 수 있다. 따라서 본 발명은 오디 유래의 물질을 유효 성분으로 함유하는 감염성 비만의 예방 및 치료용의 약학 조성물에 관한 것이다. First of all, a pharmaceutical composition for the prevention and / or treatment of infectious obesity, an infectious obesity-containing therapeutic agent containing such a pharmaceutical composition, may be utilized as an active ingredient using the substance derived from an Audi according to the present invention. Accordingly, the present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention and treatment of infectious obesity, containing a substance derived from audi as an active ingredient.
본 발명에 따른 오디 추출물 또는 화학식 1 내지 화학식 5의 화합물(이들 화합물의 이성질체 포함)의 약학적 투여 형태는 약학적 허용가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 약학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다. 감염성 비만의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 본 발명에 따른 오디 유래의 물질을 유효성분으로 단독으로 포함할 수 있고, 이외 제형, 사용방법 및 사용목적에 따라 추가성분 즉, 약제학적으로 허용되거나 영양학적으로 허용되는 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분을 추가로 포함할 수 있다. Pharmaceutical dosage forms of the Audi extracts according to the invention or compounds of
본 발명에 따른 오디 유래의 물질을 포함하는 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 오디 유래의 물질은 임상 투여 시에 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 계면활성제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 또는 방부제와 같은 희석제 또는 부형제 등을 더욱 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구 모두 사용할 수 있다. Pharmaceutical compositions comprising substances derived from Audi according to the present invention are oral formulations, external preparations, suppositories, and sterile injectable solutions, such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., according to conventional methods, respectively. Formulated in the form of can be used. For example, the Audi-derived material of the present invention may be administered in various oral or parenteral formulations for clinical administration, which, when formulated, is commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, surfactants, anticoagulants, Diluents or excipients such as lubricants, wetting agents, fragrances, emulsifiers or preservatives may be further included, and can be used orally or parenterally.
또한 예를 들어, 오디 유래의 물질을 포함하는 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이드, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀, 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1 이상 일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용가능하다. 상기 유효성분인 오디 유래의 물질에는 상기 성분들이 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다. Also, for example, carriers, excipients and diluents that may be included in pharmaceutical compositions comprising substances derived from Audi include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, Gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil, dextrin, calcium carbonate , Propylene glycol, liquid paraffin, may be one or more selected from the group consisting of physiological saline, but is not limited thereto, and all common carriers, excipients or diluents can be used. The components derived from Audi, which is the active ingredient, may be added independently or in combination.
경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 본 발명의 오디 유래의 물질에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, and the like. , Sucrose or lactose, gelatin and the like are mixed and prepared. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate talc are also used.
경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions and syrups. Various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances and preservatives may be included in addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents. have.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제와 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 및 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 비경구 투여시 피하주사, 정맥 주사 또는 근육내 주사를 통할 수 있다. Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of non-aqueous solvents and suspensions include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate, and the like. As a suppository base, witepsol, macrogol, tween 61, cacao paper, laurin, glycerol, gelatin and glycerogelatin can be used. The pharmaceutical composition of the present invention may be via subcutaneous injection, intravenous injection or intramuscular injection during parenteral administration.
비경구 투여를 위한 형태로는 치약, 국소 투여제(크림, 연고, 드레싱 용액, 분무제, 기타 도포제 등) 등을 들 수 있다. 상기 국소 투여제의 제형의 일예로는, 유효성분인 오디 유래의 물질을 함유하는 감염성 비만의 예방 또는 치료용 조성물을 천연 섬유 또는 합성 섬유로 만든 거즈 등의 담체에 함침시킨 것일 수 있다. Forms for parenteral administration include toothpastes, topical administrations (creams, ointments, dressing solutions, sprays, other coatings, and the like). As an example of the formulation of the topical dosage form, the composition for preventing or treating infectious obesity containing a substance derived from Audi as an active ingredient may be impregnated into a carrier such as gauze made of natural fibers or synthetic fibers.
또한 본 발명에 따른 감염성 비만의 예방 또는 치료용 조성물의 제형은 사용방법에 따라 바람직한 형태일 수 있으며, 특히 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 채택하여 제형화할 수 있다. 구체적인 제형의 예로는 경고제, 과립제, 로션제, 리니멘트제, 리모나데제, 산제, 시럽제, 안연고제, 액제, 에어로솔제, 엑스제(EXTRACTS), 엘릭실제, 연고제, 유동엑스제, 유제, 현탁제, 전제, 침제, 점안제, 정제, 좌제, 주사제, 주정제, 캅셀제, 크림제, 환제, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀 등이 있다. In addition, the formulation of the composition for the prevention or treatment of infectious obesity according to the present invention may be in a preferred form depending on the method of use, and in particular in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to a mammal. Known methods may be employed to formulate. Exemplary formulations include, but are not limited to, excipients, granules, lotions, liniments, rimonadense, powders, syrups, ointments, liquids, aerosols, EXTRACTS, elixirs, ointments, Suspensions, premixes, infusions, eye drops, tablets, suppositories, injections, main tablets, capsules, creams, pills, soft or hard gelatin capsules.
더 나아가 본 발명의 감염성 비만의 예방 또는 치료용 조성물은 당해 기술분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 바람직하게 제형화 될 수 있다.Furthermore, the compositions for the prevention or treatment of infectious obesity of the present invention can be prepared using any suitable method known in the art or as disclosed in Remington's Pharmaceutical Science (Recent Edition, Mack Publishing Company, Easton PA). It may be preferably formulated using.
아울러, 감염성 비만의 예방 또는 치료용 조성물은 상기 유효성분 외에 추가로 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 추가로 함유할 수 있다. In addition, the composition for the prevention or treatment of infectious obesity, in addition to the active ingredient in addition to nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, coloring agents, neutralizing agents, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickener, pH It may further contain a regulator, stabilizer, preservative, glycerin, alcohol, carbonation agent used in the carbonated beverage.
상기 감염성 비만의 예방 또는 치료용 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 오디 유래의 물질을 0.001 중량% 내지 99.9 중량%, 바람직하게는 0.1 중량% 내지 99 중량%, 더욱 바람직하게는 1 중량% 내지 50 중량% 포함될 수 있다. 하지만, 본 발명의 감염성 비만을 예방 또는 치료용 조성물의 사용방법 및 사용목적에 따라 유효성분의 함량을 적절히 조절할 수 있다. The composition for preventing or treating infectious obesity is 0.001% to 99.9% by weight, preferably 0.1% to 99% by weight, more preferably 1% to 50% by weight, based on the total weight of the composition. % May be included. However, according to the method of use and purpose of using the composition for preventing or treating infectious obesity of the present invention, the content of the active ingredient can be appropriately adjusted.
예를 들어, 상기 오디 추출물은 감염성 비만의 예방 또는 치료용 조성물 중에 0.1 ng/㎖ 내지 100 ㎍/㎖의 농도, 바람직하게는 1 ng/㎖ 내지 100 ㎍/㎖의 농도, 더욱 바람직하게는 1 ~ 200 ng/㎖의 농도로 함유된다. 또한, 전술한 화학식 1 내지 화학식 5의 화합물 내지 이들 화합물의 약학적으로 허용가능한 염의 경우에는 감염성 비만의 예방 또는 치료용 조성물 중에 0.1 ~ 1000 ng/㎖의 농도, 바람직하게는 1 ~ 1000 ng/㎖의 농도로 함유될 수 있다. For example, the Audi extract may have a concentration of 0.1 ng / ml to 100 µg / ml, preferably 1 ng / ml to 100 µg / ml, more preferably 1 to 1, in a composition for preventing or treating infectious obesity. It is contained at a concentration of 200 ng / ml. In addition, in the case of the aforementioned compounds of
본 발명의 감염성 비만의 예방 또는 치료용 조성물은 인간을 포함한 동물에 직접 적용될 수 있다. 상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하며, 소화나 배설 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하고, 바람직하게는 척추동물, 더욱 바람직하게는 포유류일 수 있다. 구체적으로는 상기 포유류는 인간, 돼지, 소 또는 염소 등일 수 있다. 본 발명에 따른 오디 유래의 물질은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. The composition for preventing or treating infectious obesity of the present invention can be directly applied to animals including humans. The animal is a biological group corresponding to a plant. It mainly consumes organic matter as nutrients, and has digestion or excretion and differentiation of the respiratory organs. Preferably, it may be a vertebrate, more preferably a mammal. Specifically, the mammal may be a human, a pig, a cow, or a goat. The substance derived from Audi according to the present invention can be administered to various mammals such as rats, mice, livestock, humans, and the like. All modes of administration may be expected, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intra-uterine or intracerebroventricular injections.
본 발명의 오디 유래의 물질을 포함하는 감염성 비만의 예방 또는 치료용 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 오디 유래의 물질은 1일 0.0001 내지 100 ㎎/㎏으로, 바람직하게는 0.001 내지 100 ㎎/㎏으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.Preferred dosages of the composition for the prevention or treatment of infectious obesity comprising the substance derived from an Audi of the present invention vary depending on the condition and body weight of the patient, the extent of the disease, the form of the drug, the route of administration and the duration of time. It may be appropriately chosen by one with knowledge. However, for the preferred effect, the substance derived from the Audi of the present invention is preferably administered at 0.0001 to 100 mg / kg, preferably at 0.001 to 100 mg / kg. The administration may be carried out once a day or divided into several times. The dose is not intended to limit the scope of the invention in any way.
투약 단위는, 예를 들면 개별 투약량의 1, 2, 3 또는 4배를 함유하거나 또는 1/2, 1/3 또는 1/4배를 함유할 수 있다. 개별 투약량은 바람직하기로는 유효 약물이 1회에 투여되는 양을 함유하며, 이는 통상 1일 투여량의 전부, 1/2, 1/3 또는 1/4배에 해당한다. 본 발명의 약학적 조성물의 유효 용량은 예를 들어, 0.0001 ~ 10 g/㎏이고, 바람직하기로는 0.0001 g ~ 5 g/kg이며, 하루 1~6회 투여될 수 있다.
The dosage unit may contain, for example, 1, 2, 3 or 4 times the individual dose or may contain 1/2, 1/3 or 1/4 times the dose. The individual dosage preferably contains an amount in which the effective drug is administered at one time, which usually corresponds to all, 1/2, 1/3 or 1/4 times the daily dose. The effective dose of the pharmaceutical composition of the present invention is, for example, 0.0001 to 10 g / kg, preferably 0.0001 g to 5 g / kg, may be administered 1 to 6 times a day.
또한, 본 발명은 오디 유래의 물질을 유효성분으로 함유하는 감염성 비만의 예방 및 개선용 식품 조성물로서의 건강기능식품을 제공한다. 본 발명의 식품 조성물의 예로는 식품, 식품첨가제, 음료 또는 음료첨가제를 들 수 있다. 본 명세서에서 식품이란 함은 영양소를 한 가지 또는 그 이상 함유하고 있는 천연물 또는 가공품을 의미하며, 바람직하게는 어느 정도의 가공 공정을 거쳐 직접 먹을 수 있는 상태가 된 것을 의미하며, 통상적인 의미로서, 식품, 식품 첨가제, 건강 기능성 식품 및 음료를 모두 포함하는 의도이며, 바람직하게는 껌 또는 캔디일 수 있다. The present invention also provides a health functional food as a food composition for the prevention and improvement of infectious obesity containing a substance derived from Audi. Examples of the food composition of the present invention include food, food additives, beverages or beverage additives. In the present specification, the term "food" means a natural product or processed product containing one or more nutrients, and preferably means a state in which it can be directly eaten through some processing process. It is intended to include all foods, food additives, health functional foods and beverages, preferably gum or candy.
본 발명은 감염성 비만의 예방 효과를 나타내는 상기 오디 유래의 물질 및 식품학적으로 허용가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 건강기능식품을 제공한다. 본 발명의 오디 유래의 물질을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 캔디, 차, 비타민 복합제, 기능성 식품 등이 있으며 식품의 종류에는 특별한 제한이 없다. 오디 유래의 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸컬릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함하는 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다. The present invention provides a dietary supplement comprising the above-derived substance derived from Audi and a food-acceptable food supplement additive that exhibits a prophylactic effect of infectious obesity. Examples of the food to which the substance derived from Audi of the present invention can be added include various foods, beverages, gums, candy, tea, vitamin complexes, functional foods, and the like. Examples of foods to which the substance derived from Audi can be added include meat, sausages, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice cream, various soups, drinks, tea , Drink, alcoholic beverages and vitamin complexes, and includes all of the health food in the conventional sense.
추가로, 본 명세서에서 식품에는 특수영양식품(예, 조제유류, 영,유아식 등), 식육 가공품, 어육제품, 두부류, 묵류, 면류(예, 라면류, 국수류 등), 건강보조식품, 조미식품(예, 간장, 된장, 고추장, 혼합장 등), 소스류, 과자류(예, 스넥류), 유가공품(예, 발효유, 치즈 등), 기타 가공식품, 김치, 절임식품(각종 김치류, 장아찌 등), 음료(예, 과실,채소류 음료, 두유류, 발효음료류, 아이스크림류 등), 천연조미료(예, 라면 스프 등), 비타민 복합제, 알코올 음료, 주류 및 그 밖의 건강보조식품류를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 식품, 음료 또는 식품첨가제는 통상의 제조방법으로 제조될 수 있다.In addition, in the present specification, the food includes special nutritional foods (e.g., crude oil, infant food, baby food, etc.), processed meat products, fish products, tofu, jelly, noodles (e.g., ramen, noodles, etc.), health supplements, seasoned foods ( For example, soy sauce, miso, red pepper paste, mixed soy sauce), sauces, confectionery (e.g. snacks), dairy products (e.g. fermented milk, cheese, etc.), other processed foods, kimchi, pickles (various kimchi, pickles, etc.), beverages ( Examples include, but are not limited to, fruits, vegetable drinks, soy milk, fermented beverages, ice cream, etc., natural seasonings (eg, ramen soup, etc.), vitamin complexes, alcoholic beverages, alcoholic beverages, and other health supplements. The food, beverage or food additive may be prepared by a conventional production method.
본 명세서에서 기능성 식품이란 식품에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 식품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 식품군이나 식품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 식품을 의미하며, 바람직하게는 본 발명의 기능성 식품은 감염성 비만의 예방 또는 개선에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현할 수 있는 식품을 의미한다. 상기 기능성 식품에는 식품학적으로 허용가능한 식품 보조 첨가제를 포함할 수 있으며, 기능성 식품의 제조에 통상적으로 사용되는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다. Functional food as used herein refers to the control of biological defense rhythm, disease prevention and recovery of food groups or food compositions that have added value to the food by using physical, biochemical, biotechnological techniques, etc. It means a food processed and designed to fully express the gymnastic function related to the living body, and preferably the functional food of the present invention can fully express the gymnastic function related to the prevention or improvement of infectious obesity to the living body. Means food. The functional food may include food acceptable food additives, and may further include appropriate carriers, excipients and diluents commonly used in the manufacture of functional foods.
한편, 본 명세서에서 음료란 갈증을 해소하거나 맛을 즐기기 위하여 마시는 것의 총칭을 의미하며 기능성 음료를 포함하는 의도이다. 본 명세서에서 기능성 음료란 음료에 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 음료의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 음료 군이나 음료 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 음료를 의미한다.Meanwhile, in the present specification, the drink refers to a generic term for drinking to relieve thirst or to enjoy a taste, and is intended to include a functional drink. In the present specification, the functional beverage refers to a biological defense rhythm control, disease prevention, and the like having a beverage group or a beverage composition which has added value to the beverage by using physical, biochemical, or biotechnological techniques to act and express the function of the beverage to a specific purpose. Means a beverage that is designed and processed to fully express the gymnastics function related to recovery.
본 발명의 오디 유래의 물질을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 오디 유래의 물질을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 상기 오디 유래의 물질을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물은 그 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더욱 포함할 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. In the case of using the substance derived from the Audi of the present invention as a food additive, the substance derived from the Audi can be added as it is or used together with other food or food ingredients, and can be suitably used according to a conventional method. The food composition comprising the substance derived from the Audi as an active ingredient may further include a suitable carrier, excipient and diluent commonly used in the preparation thereof. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to the intended use (prevention, health or therapeutic treatment).
또한, 감염성 비만의 예방 및 개선을 목적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 오디 유래의 물질의 양은 전체 식품 중량의 0.0001 내지 50 중량%, 바람직하게는 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.01 내지 10g, 바람직하게는 0.02 내지 5g, 더욱 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있지만, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다. 예를 들어, 강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다. It may also be added to foods or beverages for the purpose of preventing and improving infectious obesity. At this time, the amount of the substance derived from the Audi in food or beverage may be added at 0.0001 to 50% by weight, preferably 0.01 to 15% by weight of the total food weight, the health beverage composition is 0.01 to 10g, based on 100 ml, Preferably, it can be added in a ratio of 0.02 to 5 g, more preferably 0.3 to 1 g, but the present invention is not limited thereto. For example, in the case of long-term intake for the purpose of health and hygiene or health control, the amount may be below the above range, and since there is no problem in terms of safety, the active ingredient may be used in an amount above the above range. Can be.
본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제, 액제 등의 형태를 포함한다. 본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 오디 유래의 물질을 함유하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물과 같은 식품 보조 첨가제 성분을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. Health functional food of the present invention includes the form of tablets, capsules, pills, liquids and the like. The health functional beverage composition of the present invention is not particularly limited to other ingredients except for containing the above-derived substances as essential ingredients in the indicated proportions, and may contain various flavoring or food supplement additive ingredients such as natural carbohydrates, such as ordinary drinks. It may contain as an additional component.
상술한 천연 탄수화물의 예는 포도당, 과당과 같은 단당류; 말토오스, 수크로오스 등과 같은 이당류; 덱스트린, 시클로덱스트린과 같은 다당류 등과 같은 통상적인 당은 물론이고, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알코올이다. 상술한 것 이외의 향미제 또는 감미제로서 타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진)과 같은 천연 향미제/감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 향미제/감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 식품 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내 지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다. 상기 천연탄수화물의 비율은 본 발명에 따른 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 내지 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 내지 0.03 g 이다. Examples of the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose; Disaccharides such as maltose, sucrose and the like; Conventional sugars such as polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin and the like, as well as sugar alcohols such as xylitol, sorbitol and erythritol. As natural or sweetening agents other than those mentioned above, natural flavoring / sweetening agents such as taumartin, stevia extract (eg Rebaudioside A, glycyrgin); Synthetic flavors / sweetening agents such as saccharin, aspartame and the like can be used. The proportion of the natural carbohydrate is generally about 1 to 20 g, preferably about 5 to 12 g per 100 ml of the food composition of the present invention. The proportion of said natural carbohydrate is generally from about 0.01 to 0.04 g, preferably from about 0.02 to 0.03 g per 100 ml of the composition according to the invention.
상기 외에 본 발명의 오디 유래의 물질은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명에 따른 식품공학적 조성물 중에는 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 오디 유래의 물질 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부, 바람직하게는 0.01 ~ 1.0 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
In addition to the above, the substances derived from audi of the present invention include various nutrients, vitamins, minerals (electrolytes), flavors such as synthetic flavors and natural flavors, coloring and neutralizing agents (such as cheese, chocolate), pectic acid and salts thereof, Alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, carbonation agents used in alcoholic beverages, and the like. In addition, the food engineering composition according to the present invention may contain a flesh for preparing natural fruit juice and fruit juice beverage and vegetable beverage. These components may be used independently or in combination. The proportion of such additives is not so critical but is usually selected in the range of 0 to about 20 parts by weight, preferably 0.01 to 1.0 part by weight, per 100 parts by weight of the audio derived material of the present invention.
이하, 예시적인 실시예를 통하여 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명이 하기 실시예로 한정되는 것은 결코 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to exemplary embodiments, but the present invention is not limited to the following examples.
실시예 1 : 오디 추출물의 제조Example 1: Preparation of Audi Extract
국내산 뽕나무에서 수확한 뒤 냉동 건조된 오디 분말 10g에 70% 에탄올(주정)과 안전성을 위하여 0.1 % 구연산(citric acid)으로 추출하여 여과하였다. 추출 용매를 가한 뒤 오디를 직접 짓이겨 추출하거나 진탕기를 이용하여 4℃에서 24 시간 동안 추출하였다. 추출된 여과액은 회전진공 농축기를 이용하여 40℃에서 85 mbar, 50 rpm으로 농축물을 분리하였다. 얻어진 오디의 농축물을 -85℃에서 5 mTorr로 48시간 동안 동결건조하여 오디 추출물의 분말을 제조하였다. 얻어진 분말이 수분에 대한 흡습성이 높아서 야기되는 갈변을 방지하기 위하여 부형제로서 덱스트린 또는 말토덱스트린을 오디 농축물: 덱스트린(말토덱스트린) = 1:1 중량비로 첨가하여 저-흡습성의 오디 추출물 분말을 제조하였다.
After harvesting from domestic mulberry, 10g of lyophilized mulberry powder was extracted with 70% ethanol (alcohol) and 0.1% citric acid (citric acid) for safety. After the addition of the extraction solvent, the udi was extracted directly by squeezing or by using a shaker for 24 hours at 4 ℃. The extracted filtrate was separated using a rotary vacuum concentrator at 40 ℃ 85 mbar, 50 rpm. The concentrate of the obtained Audi was lyophilized at −85 ° C. at 5 mTorr for 48 hours to prepare a powder of the Audi extract. In order to prevent browning caused by the hygroscopicity of the obtained powder due to moisture absorption, dextrin or maltodextrin was added as an excipient in an audio concentrate: dextrin (maltodextrin) = 1: 1 by weight to prepare a low-hygroscopic audio extract powder. .
실시예 2 : 오디 추출물물의 항바이러스 효과 측정Example 2 Determination of Antiviral Effects of Audi Extracts
본 실시예에서는 전술한 실시예 1에서 제조된 오디 추출물이 감염성 비만과 밀접한 관련이 있는 아데노바이러스-36(Ad36)의 활성을 억제할 수 있는지를 살펴보았다. 실험에 사용한 마우스를 크게 2개의 group으로 구분하여 Group 1은 Ad36 감염 전에 오디 추출물을 4주 동안 미리 섭취한 뒤, Ad36의 감염과 함께 다시 12주 동안 오디 추출물을 섭취하게 하였다. 한편 Group 2는 사전에 오디 추출물 섭취 없이 Ad36의 감염과 동시에 오디 추출물을 섭취를 시작하게 하였다. 대조군으로서 "Ad36(water)"군은 Ad36 감염 후, 오디 추출물을 섭취하지 않고 물만 섭취하였으며, "Mock"군은 Ad36의 감염도 없고, 오디 추출물의 섭취도 없이 물만 섭취한 군이다. In this example, it was examined whether the audi extract prepared in Example 1 can inhibit the activity of adenovirus-36 (Ad36), which is closely related to infectious obesity. The mice used in the experiment were largely divided into two groups, and
구체적으로 Group 1은 4주령의 C57BL/6 마우스에 실시예 1에서 제조된 오디 추출물을 60 ㎍/day의 양으로 4주 동안 경구투여를 통해 섭취하게 하였다(사전 섭취). 한 달 후, Group 1의 마우스와, 9주령의 C57BL/6 마우스인 Group 2, 대조군인 "Ad36(water)"군 마우스에 Human Adenovirus 36(Ad36)을 4 × 106 pfu/mouse의 단위로 주입, 감염시켰다. 이어서 Group 1, Group 2 마우스에 12주 동안 오디 추출물을 60 ㎍/day의 양으로 12주 동안 경구투여를 통해 섭취하게 하였고, 대조군인 Ad36(water) 군의 마우스는 Ad36 감염 후 물만 섭취하게 하였다. 한편, Mock 군의 마우스에 대해서는 Ad36의 감염 처리를 대신하여 PBS를 주입하였으며, 물론 오디 추출물의 섭취도 하지 않고 물만 섭취하게 하였다. Specifically,
이어서, 오디 추출물의 Ad36에 대한 항바이러스를 측정하기 위하여, Group 1 마우스를 희생시켜, reproductive fat pad의 장기에서 RNA를 뽑아서 quantitative real-time PCR을 이용해 Ad36 titer를 측정하였다. 이를 위해서 Ad36로 감염 후 3일 째에, Group 1 마우스를 희생시킨 뒤, lipid (reproductive fat pad)를 harvest하였다. lipid를 LN2에서 마쇄한 후, Trizol reagent 500 ㎕를 넣고 RNA isolation을 진행하였다. Chloroform을 넣고 강하게 vortex 한 후 10분 동안 상온에서 incubation하고, 원심분리(12000 rpm, 15 min, 4℃) 후 상층액을 새로운 전해연마(EP) 튜브로 옮겼다. 상층액에 isopropanol을 넣어주고 10분 동안 상온에서 incubation한 뒤, 다시 원심분리(12000rpm, 10 min, 4℃) 한 후 상층액을 버렸다. pellet을 70% 에탄올로 washing하고 원심분리(9500rpm, 5min, 4℃)한 뒤, 10) pellet을 air dry 하고 디에틸피로인산(DEPC, Diethyl pyrocarbonate)-water로 녹였다. 얻어진 RNA를 Reverse transcriptase(RT&GO)이용하여 PCR을 통해 cDNA를 만들었다(RNA 5 ㎕, oligo-dT primer 1 ㎕, DTT(dithiothreitol) 2 ㎕, RT&Go 8 ㎕, D.W 4 ㎕). cDNA를 이용해 quantitative real-time PCR을 수행하였다(cDNA 1 ㎕, primer 1+1 ㎕, 2XSYBR 12.5 ㎕, D.W 9.5 ㎕, 40 cycle). 얻어진 결과를 물을 섭취하고 Ad36로 감염시킨 군을 기준으로 하여 2(-ΔΔCt) method를 이용하여 상대적으로 계산하였다. 지방조직 내 발현하고 있는 바이러스 유전자의 증폭을 확인하기 위해 사용한 프라이머 서열은 아래와 같다.
Subsequently, in order to measure the antivirus against Ad36 of the Audi extract,
Ad36 E1A 정방향(forward) 프라이머: 5'-GAG ACA CCT GCG CCT TCT AC-3'Ad36 E1A forward primer: 5'-GAG ACA CCT GCG CCT TCT AC-3 '
Ad36 E1A 역방향(Reverse) 프라이머: 5'-GGG CAT CTA CCT CCA GAT CA-3'
Ad36 E1A Reverse Primer: 5'-GGG CAT CTA CCT CCA GAT CA-3 '
도 1에 본 실시예에 따른 결과가 도시되어 있다. 도시된 것과 같이, Ad36으로 감염시키고 물만 섭취한 군(Ad36)에 비하여 Group 1의 마우스의 reproductive fat pad 내의 Ad36의 감염이 훨씬 적게 일어난 것을 알 수 있으며, 오디 추출물의 Ad36에 대한 항바이러스 효과를 확인하였다. 1 shows the results according to this embodiment. As shown, the infection of Ad36 in the reproductive fat pad of
실시예 3 : 오디 추출물의 비만 감소 효과 확인Example 3 Confirming the Obesity Reducing Effect of the Audi Extract
오디 추출물의 섭취를 통해 Ad36 감염 후 유도되는 감염성 비만의 억제효능이 있는지 확인하였다. 오디 추출물을 미리 섭취한 그룹 (Group 1)과, Ad36 감염과 동시에 오디 추출물을 섭취한 그룹(Group 2)을 구별하였으며, 오디 추출물 섭취를 통해 체중과 reproductive fat pad 크기와 무게의 감소 여부를 측정하였다. Ingestion of the Audi extract confirmed that there was an inhibitory effect on infectious obesity induced after Ad36 infection. The groups were pre-ingested with the Audi extract (Group 1) and the group with the Audi extract at the same time as the Ad36 infection (Group 2), and the weight, reproductive fat pad size and weight were measured by ingesting the Audi extract. .
위 실시예 2의 절차를 통해 구분된 각 군의 마우스에 대하여 매 주마다 섭취량과 체중을 측정하였고, Ad36 감염 및 오디 추출물 섭취 12주 후에 마우스를 희생시켜 체지방(reproductive fat pad)을 측정하였다. 도 2a 내지 도 2c는 각 그룹에 대한 체중과 체내 지방 측정 결과를 도시하고 있다. Ad36 감염 후에 물만을 섭취한 대조군 "Ad36(water)"에 비하여, 오디 추출물을 섭취한 그룹인 Group 1, Group 2 마우스의 체중 및 체지방 함량이 감소된 것으로 측정되어, 오디 추출물의 항비만 효과를 확인하였다. 실시예 2에서 오디 추출물이 Ad36에 대한 항바이러스 효과가 있다는 것과 연관시켜 볼 때, 본 발명의 오디 추출물이 Ad36에 의한 감염성 비만의 억제, 예방, 또는 치료에 효과가 있는 것으로 추론된다.
Intake and body weight were measured every week for each group of mice divided by the procedure of Example 2 above, and body fat was measured at 12 weeks after Ad36 infection and Audi extract ingestion. 2A to 2C show the results of body weight and body fat measurement for each group. Compared to the control group "Ad36 (water), which consumed only water after infection with Ad36, the weight and body fat content of
실시예 4 : 오디 추출물의 전-염증 사이토카인 분비 억제Example 4 Inhibition of Pro-inflammatory Cytokine Secretion of Audi Extracts
본 실시예에서는 Ad36의 감염에 의해 유도되는 비만의 진행에서 분비 및 발현이 증가하는 전-염증 사이토카인의 활성을 오디 추출물이 억제하는지를 측정하였다. 통상 Ad36 감염 후 12주 정도가 경과하면 체내 지방 세포 및 지방 조직에서 만성 염증 반응이 진행되고 비만을 유지하는데, 본 실시예에서는 Ad36로 감염시킨 마우스의 reproductive fat pad에서 비만 유지와 연관이 있는 MCP-1(Monocyte Chemoattractant Protein-1)과 종양괴사인자알파(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)와 같은 전-염증 사이토카인의 단백질 수준을 측정하였다. In this example, it was determined whether the Audi extract inhibits the activity of pro-inflammatory cytokines with increased secretion and expression in the progression of obesity induced by infection with Ad36. Normally, about 12 weeks after Ad36 infection, chronic inflammatory reactions in the body's adipose cells and adipose tissue progress and maintain obesity. In this example, MCP- is associated with maintenance of obesity in reproductive fat pads of mice infected with Ad36. Protein levels of pro-inflammatory cytokines such as 1 (Monocyte Chemoattractant Protein-1) and tumor necrosis factor alpha (TNF-α) were measured.
구체적으로 실시예 1의 방법으로 구분한 각 그룹의 마우스에 대하여 Ad36로 감염시킨 후, 12주 후에 마우스를 희생시키고 lipid(reproductive fat pad)를 수집하였다. lipid의 무게를 측정한 후, 무혈청 배지(serum free media)를 넣고 가위로 chopping한 뒤, 균질기(homogenizer)를 사용하여 마우스의 장기를 마쇄하였다. 원심분리(12000 rpm, 5 min, 4℃)하여 상층액을 얻고, MCP-1 (R&D), TNF-α (eBioscience) cytokine ELISA kit를 사용하여 450 ㎚에서 측정하였다. Specifically, the mice of each group classified by the method of Example 1 were infected with Ad36, and then, 12 weeks later, the mice were sacrificed and lipid (reproductive fat pad) was collected. After measuring the weight of the lipid, serum-free medium (serum free media) and chopping with scissors, and then using a homogenizer (homogenizer) to crush the organs of the mouse. The supernatant was obtained by centrifugation (12000 rpm, 5 min, 4 ° C.) and measured at 450 nm using MCP-1 (R & D) and TNF-α (eBioscience) cytokine ELISA kits.
본 실시예에 따라 마우스의 지방조직에서의 전-염증 사이토카인의 발현 정도를 측정한 결과가 도 3a 및 도 3b에 도시되어 있다. 도 3a는 MCP-1의 발현 정도를 측정한 그래프이고, 도 3b는 TNF-α의 발현 정도를 측정한 그래프이다. Ad36 감염 및 물을 섭취한 군에서 전-염증 사이토카인이 많이 증가되는 것에 비해서, 오디 추출물을 섭취한 모든 군에서는 사이토카인의 발현이 크게 감소하였다. 특히 오디 추출물을 사전에 섭취한 그룹(Group 1)에 비하여, 오디 추출물의 섭취와 Ad36의 감염을 동시에 진행한 그룹(Group 2)에서 사이토카인의 발현이 더 많이 감소되어 있는 현상을 관찰하였다.
3A and 3B show the results of measuring the expression level of pro-inflammatory cytokines in adipose tissue of mice according to this example. Figure 3a is a graph measuring the expression level of MCP-1, Figure 3b is a graph measuring the expression level of TNF-α. Compared with the increase in pro-inflammatory cytokines in the Ad36 infection and water groups, the expression of cytokines was significantly decreased in all the groups ingested with the Audi extract. In particular, it was observed that the expression of cytokines was decreased more in the group (Group 2) which simultaneously ingested the audio extract and the infection of Ad36 (Group 2), compared to the group in which the Audi extract was previously ingested (Group 1).
실시예 5 : 오디 추출물의 대식세포 infiltration 억제Example 5 Inhibition of Macrophage Infiltration by Audi Extracts
비만이 유도되면 전-염증 등에 의해 다양한 면역 세포들이 lipid 조직 안으로 유도된다. 특히 비만과 관련하여 macrophage가 지방 조직으로 유입되면 많은 metabolism dysfunction에 영향을 주는데, 본 실시예에서는 오디 추출물의 투여를 통하여 지방으로의 macrophage 유입(macrophage infiltration)을 줄일 수 있는지의 여부를 확인하였다. When obesity is induced, various immune cells are induced into lipid tissues by pro-inflammatory and the like. In particular, when macrophage is introduced into adipose tissue in relation to obesity, it affects many metabolism dysfunctions. In this embodiment, it was confirmed whether macrophage infiltration into fat could be reduced by administration of an audiovisual extract.
우선 각각의 그룹에서 지방조직으로 유입된 대식세포의 양을 알기 위하여 F4/80 antibody를 염색하여 형광표지세포분리기(fluorescence activated cell sorter, FACS)를 사용하여 측정하였다. 각 그룹의 마우스를 Ad36으로 감염시킨 뒤, 12주 후에 희생시켜 lipid (reproductive fat pad)를 채집하였다. lipid를 chopping하고 collagenase type I in 5% FBS DMEM media을 넣고 30분 동안 37℃에서 incubation하였다. 5% FBS PBS를 3배 volume으로 넣어주고, 100 ㎛ strainer에 여과시킨 뒤, 통과한 용액을 원심분리(200g, 10 min, 4℃)하였다. 상층액을 제거한 후 5% FBS PBS로 2회 세척한 뒤, pellet cell 을 Fc block antibody를 이용하여 상온에서 20분 동안 blocking하였다. F4/80 antibody(1:50)를 1차 antibody로 사용하여 30분 동안 4℃에서 incubation한 뒤, 0.2% sodium azide에 용해된 PBS를 이용하여 2회 세척하였다. anti-rabbit-FITC 2차 antibody(1:50)를 사용하여 30분 동안 4℃에서 incubation한 뒤, 0.2% sodium azide에 용해된 PBS를 이용하여 2회 세척하였다. 2% paraformaldehyde 500 ㎕를 넣고 fixation한 뒤 FACS(Beckman)를 사용하여 전체 대식세포의 양을 측정하였다. 또한 지방조직으로 유입된 면역세포들을 확인하기 위해서 Hematoxylin & eosin (H&E) staining을 수행하였다. 각 그룹이 마우스를 Ad36으로 감염하고 12주 후에 마우스로부터 얻은 lipid (reproductive fat pad)를 1% paraformaldehyde에 고정하였다. 그리고 H&E staining을 수행한 후에 현미경을 통하여 지방조직내의 면역세포들을 관찰하였다. First, in order to know the amount of macrophages introduced into adipose tissue from each group, F4 / 80 antibody was stained and measured using a fluorescence activated cell sorter (FACS). Each group of mice was infected with Ad36 and sacrificed 12 weeks later to collect lipid (reproductive fat pad). Lipid chopping and collagenase type I in 5% FBS DMEM media was incubated at 37 ℃ for 30 minutes. 5% FBS PBS was added in 3 volumes, filtered through a 100 μm strainer, and the passed solution was centrifuged (200 g, 10 min, 4 ° C.). After removing the supernatant and washed twice with 5% FBS PBS, pellet cells were blocked for 20 minutes at room temperature using Fc block antibody. After incubation at 4 ° C. for 30 minutes using F4 / 80 antibody (1:50) as a primary antibody, the mixture was washed twice with PBS dissolved in 0.2% sodium azide. After incubation at 4 ° C. for 30 minutes using anti-rabbit-FITC secondary antibody (1:50), the cells were washed twice with PBS dissolved in 0.2% sodium azide. After inserting 500 μl of 2% paraformaldehyde, fixation was performed and FACS (Beckman) was used to measure total macrophages. In addition, Hematoxylin & eosin (H & E) staining was performed to identify the immune cells introduced into the adipose tissue. Twelve weeks after each group of mice infected with Ad36, lipid (reproductive fat pad) obtained from the mice was fixed in 1% paraformaldehyde. After H & E staining, the immune cells in the adipose tissue were observed through a microscope.
측정 결과가 도 4a 및 도 4b에 도시되어 있다. 도 4a에서 볼 수 있는 것처럼 오디 추출물을 감염 전후에 먹인 두 그룹의 마우스 모두에서 Ad36의 감염에 의해 대식세포가 유입되어 지방세포를 사멸시키기 위해 지방세포 주위를 둘러싸서 일어나는 소위 "crown 현상"(도 4a의 Ad36만 감염된 사진의 화살표)이 현저히 줄어들어 있음을 확인하였다. The measurement results are shown in FIGS. 4A and 4B. As can be seen in Figure 4a, the so-called "crown phenomenon" that occurs around the adipocytes in order to kill the adipocytes by the influx of macrophages by Ad36 infection in both groups of mice fed the Audi extract before and after the infection (Fig. The arrow of the photo infected only with Ad36 of 4a) was confirmed to be significantly reduced.
한편, 비만과 관련이 있는 대식세포의 mRNA 레벨은 다음과 같이 측정하였다. 각 그룹의 마우스에 Ad36으로 감염시킨 후 12주 후에 이들 마우스를 희생시켜 lipid (reproductive fat pad)를 수집하였다. lipid를 LN2에 마쇄한 후, Trizol reagent 500 ㎕를 넣은 후 RNA isolation을 진행하였다. Chloroform을 넣고 강하게 vortex한 후 10분 동안 상온에서 incubation한 뒤, 원심분리(12000 rpm, 15 min, 4℃) 후 상층액을 새로운 e.p. tube로 옮겼다. 상층액에 isopropanol을 넣어주고 10분 동안 상온에서 incubation하고, 원심분리(12000 rpm, 10 min, 4℃) 후 상층액을 버렸다. pellet을 70% 에탄올로 세척하고 원심분리(9500 rpm, 5 min, 4℃)한 뒤, pellet을 air dry 하고 DEPC-water로 녹여주었다. 분리된 RNA를 Reverse transcriptase(RT&GO)이용하여 PCR을 통해 cDNA를 제조하였다(RNA 5 ㎕, oligo-dT primer 1 ㎕, DTT 2 ㎕, RT&Go 8 ㎕, D.W 4 ㎕). cDNA를 이용해 quantitative real-time PCR을 수행하였다(cDNA 1 ㎕, primer 1+1 ㎕, 2XSYBR 12.5 ㎕, D.W 9.5 ㎕, 40cycle). 측정된 결과를 물을 섭취하고 Ad36으로 감염시킨 그룹을 기준으로 하여 2(-ΔΔCt) method를 이용하여 상대적으로 계산하였다. 본 실시예에 따른 측정 결과가 도 4c에 도시되어 있다. 감염 현상을 유도하며 이 때 발현이 증가되는 CD64의 증폭을 확인하기 위해 사용한 프라이머 서열은 아래와 같다.
Meanwhile, mRNA levels of macrophages associated with obesity were measured as follows. Twelve weeks after infection with Ad36 in each group of mice, these mice were sacrificed to collect lipid (reproductive fat pad). After grinding the lipid in LN 2 , 500 μl of Trizol reagent was added and RNA isolation was performed. Chloroform was added and strongly vortexed and incubated at room temperature for 10 minutes. After centrifugation (12000 rpm, 15 min, 4 ° C), the supernatant was transferred to a new ep tube. Isopropanol was added to the supernatant, incubated at room temperature for 10 minutes, and the supernatant was discarded after centrifugation (12000 rpm, 10 min, 4 ° C.). The pellet was washed with 70% ethanol and centrifuged (9500 rpm, 5 min, 4 ° C.). The pellet was air dried and dissolved in DEPC-water. CDNA was prepared by PCR using reverse transcriptase (RT & GO) (RNA 5 μl, oligo-
CD64 forward (정방향) 프라이머 : 5'- GTG TCA TGC GTG GAA GGA TA -3'CD64 forward primer: 5'- GTG TCA TGC GTG GAA GGA TA -3 '
CD64 reverse (역방향) 프라이머 : 5'- GCA CTG GAG CTG GAA ATA GC -3'
CD64 reverse primer: 5'- GCA CTG GAG CTG GAA ATA GC -3 '
도 4b 및 도 4c에서 알 수 있는 것처럼, 오디를 섭취한 그룹에서는 macrophage와 면역세포가 모두 크게 감소하였다. 즉 Ad36에 의해 감염이 되어 일어나는 염증반응의 정도를 나타내는 지표인 지방세포로 대식세포가 흡입되는 양이 오디 추출물을 섭취한 그룹에서는 현저히 주는 것을 H&E 사진 및 FACS를 이용한 대식세포의 양 그리고 염증 유발 대식세포에서 특이적으로 발현되는 CD64의 mRNA 양 등을 통해 도 4c에서 확인하였다. 따라서 오디 추출물의 섭취를 통하여 Ad36의 감염과 이로 인한 염증 반응을 줄일 수 있다는 점을 확인하였다.
As can be seen in Figures 4b and 4c, both the macrophage and immune cells were significantly reduced in the group ingested by the Audi. In other words, the amount of macrophages inhaled by the adipocytes, which is an indicator of the degree of inflammatory response caused by infection with Ad36, was significantly increased in the group ingested by the Audi extract. It was confirmed in Figure 4c through the mRNA amount of CD64 specifically expressed in phagocytes. Therefore, it was confirmed that ingestion of the Audi extract can reduce the infection of Ad36 and the resulting inflammatory response.
실시예 6 : 오디 추출물과 오디 유래 화합물의 항바이러스 효과 확인Example 6 Identification of Antiviral Effects of an Audi Extract and an Audi-Derived Compound
본 실시예에서는 오디 유래 물질의 항바이러스 효과를 측정하기 위하여 Ad36의 감염으로 인하여 발현되는 Ad36 유전자들의 발현 정도를 측정하였다. 우선 사용된 세포주는 3T3-L1 세포주로서, Mus musculus (mouse)의 fibroblast embryo에서 기원한 것이다. 세포 배양액으로는 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM)을 사용하였으며, 10% fetal bovine serum (FBS)과, 1% antibiotic-antimycotic을 DMEM과 혼합하여 세포 배양액으로 사용하였다. 인간 아데노바이러스36 (Ad36)을 확인하기 위하여 Ad36 유전자인 E1A와 Hexon을 이용하였으며, 각각의 서열을 증폭하기 위해 사용한 프라이머 서열은 아래와 같다.
In this example, the expression level of the Ad36 genes expressed by the infection of Ad36 was measured in order to measure the antiviral effect of the Audi-derived material. First of all, the cell line used is a 3T3-L1 cell line, originating from the fibroblast embryo of Mus musculus (mouse). Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) was used as cell culture medium, and 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% antibiotic-antimycotic were mixed with DMEM and used as cell culture medium. Ad1 genes E1A and Hexon were used to identify human adenovirus 36 (Ad36), and the primer sequences used to amplify the respective sequences are as follows.
Ad36 E1A 정방향(forward) 프라이머: 5'-GAG ACA CCT GCG CCT TCT AC-3'Ad36 E1A forward primer: 5'-GAG ACA CCT GCG CCT TCT AC-3 '
Ad36 E1A 역방향(Reverse) 프라이머: 5'-GGG CAT CTA CCT CCA GAT CA-3'
Ad36 E1A Reverse Primer: 5'-GGG CAT CTA CCT CCA GAT CA-3 '
Ad36 Hexon 정방향 프라이머 : 5'-TCC TCG TCC AGA TGC TCT CT-3'Ad36 Hexon Forward Primer: 5'-TCC TCG TCC AGA TGC TCT CT-3 '
Ad36 Hexon 역방향 프라이머 : 5'-GGA GTA CAT CGC GTC CTT GT-3'
Ad36 Hexon Reverse Primer: 5'-GGA GTA CAT CGC GTC CTT GT-3 '
구체적으로, 3T3-L1을 6 well plate에 seeding한 후, 37℃, 5% CO2 incubator에서 16 시간 (over-night) 동안 incubation한 다음 CM(complete media) DMEM (10% FBS, 1% AA)을 제거하고 SF(serum free media) DMEM을 넣어 4 시간 동안 starvation하였다. 그 후에 culture media에 오디추출물을 1 ng/㎖ ~ 100 ㎍/㎖, 오디 구성 성분인 1-Deoxynojirimycin, Kuromanin Chloride, Resveratrol, Callistephin Chloride, Keracyanin Chloride를 각각 10 ng/㎖ ~ 1 ㎍/㎖로 처리하여 16시간 동안 pre-incubation하였다. 이어서, Ad36을 4 moi(multiplicity of infection)로 1시간 30분 동안 infection시킨 뒤, Infection시키지 않는 group은 SF DMEM을 넣고 동일하게 실험을 수행하였다. 그 후 각각 농도의 오디 추출물과 오디 구성 성분이 포함된 culture media를 넣어 준 후 8시간 동안 post-incubation하였다. 다음에 media를 제거하고 PBS 1㎖을 넣고 scraper로 cell을 collection하고 4000 rpm, 4 ℃에서 centrifugation하여 cell을 harvest하였다. 그 후 trizol 500 ㎖씩 넣어서 mRNA를 추출한 후에, reverse transcriptional PCR을 수행하여 cDNA를 얻었다. 이 cDNA로 quantitative Real-time PCR을 수행하여 Ad36과 관련된 E1A Hexon의 상대적인 발현양을 확인하였다. Specifically, after seeding 3T3-L1 in a 6 well plate, incubation for 16 hours (over-night) in 37 ℃, 5% CO 2 incubator, followed by CM (complete media) DMEM (10% FBS, 1% AA) Removed and added SF (serum free media) DMEM to starvation for 4 hours. Subsequently, the culture extract was treated with 1 ng / ml ~ 100 ㎍ / ml, and 1-Deoxynojirimycin, Kuromanin Chloride, Resveratrol, Callistephin Chloride and Keracyanin Chloride, respectively, at 10 ng / ml ~ 1 ㎍ / ml. Pre-incubation for 16 hours. Subsequently, Ad36 was infected with 4 moi (multiplicity of infection) for 1 hour and 30 minutes, and the group without infection was subjected to the same experiment with SF DMEM. After that, the culture media containing the audio extract and the audio component of each concentration was added and post-incubated for 8 hours. Next, the media was removed, 1 ml of PBS was added, the cells were collected with a scraper, and the cells were harvested by centrifugation at 4000 rpm and 4 ° C. Thereafter, 500 ml of trizol was added to extract mRNA, and cDNA was obtained by performing reverse transcriptional PCR. Quantitative real-time PCR was performed with this cDNA to confirm the relative expression levels of E1A Hexon associated with Ad36.
E1A mRNA 발현 정도를 측정한 그래프인 도 5a 및 도 5c에서 알 수 있는 것처럼, Ad36이 세포에 infection되어 초기에 발현되는 E1A mRNA를 Quantitative Real-time PCR로 확인한 결과, 오디 추출물은 100 ng/㎖에서 antiviral 효과가 가장 크게 나타났다. 또한 오디 구성 성분의 경우, 1-Deoxynojirimycin를 처리한 그룹과 Kuromanin Chloride를 처리한 그룹에서는 1 ㎍/㎖에서 antiviral 효과가 크게 나타났으며, Resveratrol을 처리한 그룹에서는 100 ng/㎖에서, Callistephin Chloride, Keracyanin Chloride를 각각 처리한 그룹에서는 10 ng/㎖에서 그 효과가 가장 크게 나타난 것을 확인할 수 있다. 이는 오디 추출물 및 오디성분의 가장 유효한 생리적 활성 농도가 있음을 의미한다. 종합적으로 정리하면 오디 추출물과 각 구성성분을 처리하게 되면, 3T3-L1의 비만세포생성 (adipogenesis)을 유발하는 Ad36의 감염을 억제하며, 나아가 비만이 유도되는 현상을 감소시킬 수 있는 점을 확인하였다.
As can be seen in FIGS. 5A and 5C, which are graphs measuring the level of E1A mRNA expression, the Ad1 extract was initially detected by Quantitative Real-time PCR. As a result, the Audi extract was detected at 100 ng / ml. The antiviral effect was greatest. In addition, the antiviral effect of 1-Deoxynojirimycin-treated group and Kuromanin Chloride-treated group showed a significant antiviral effect at 1 ㎍ / ml, and the Resveratrol-treated group at 100 ng / ml, and Callistephin Chloride, In the group treated with Keracyanin Chloride, the effect was the greatest at 10 ng / ml. This means that there is the most effective physiologically active concentration of the Audi extract and the Audi component. Taken together, it was confirmed that treatment with the Audi extract and each component inhibits the infection of Ad36, which induces 3T3-L1 adipogenesis, and further reduces obesity-induced phenomena. .
실시예 7 : 오디 추출물과 오디 유래 화합물의 세포내 지방축적 억제 효과 측정Example 7 Measurement of Intracellular Fat Accumulation Inhibition Effect of an Audi Extract and an Audi-Derived Compound
본 실시예에서는 오디 추출물과 오디 유래의 성분이 지방세포 내의 지방축적의 억제효과가 있는지 알아보고자 하였다. 세포내의 지방축적이 진행되면 PPAR와 C/EBPα의 발현량이 증가되어 지방축적을 증가시키고 지방세포로의 분화를 유도하는 것으로 보고되어 있다. 따라서 해당 mRNA의 발현량을 측정하여, 세포내 지방축적의 억제효과를 알아보았다. 전술한 실시예에서 얻어진 오디 추출물과, 오디 유래의 화합물로서, 1-Deoxynojirimycin (Cayman chemical campany, Cat.1001718), Kuromanin chloride (Sigma, Cat.52976), Resveratrol (Sigma, Cat.R5010), Callistephin chloride (Sigma, Cat.79576), Keracyanin chloride (Sigma, Cat.36428)와 같은 오디 유래 화합물을 이용하여 세포내의 지방축적의 억제효과에 대해 확인하였다.In this example, we tried to find out whether the extract and the components derived from the Audi has an inhibitory effect of fat accumulation in adipocytes. As intracellular fat accumulation progresses, the expression levels of PPAR and C / EBPa are increased to increase fat accumulation and induce differentiation into adipocytes. Therefore, the expression level of the corresponding mRNA was measured to investigate the inhibitory effect of intracellular fat accumulation. The audi extract obtained in the above-described examples, and as a compound derived from audi, 1-Deoxynojirimycin (Cayman chemical campany, Cat. 1001718), Kuromanin chloride (Sigma, Cat.52976), Resveratrol (Sigma, Cat.R5010), Callistephin chloride (Sigma, Cat. 79576) and compounds derived from Audi such as Keracyanin chloride (Sigma, Cat. 36428) were used to investigate the inhibitory effect of fat accumulation in cells.
사용된 세포주는 3T3-L1 세포주로서, Mus musculus (mouse)의 fibroblast embryo에서 기원한 것이다. 세포 배양액으로는 Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM)을 사용하였으며, 10% fetal bovine serum(FBS)와, 1% antibiotic-antimycotic을 DMEM과 혼합하여 세포 배양액으로 사용하였다. 세포내 지방축적 억제효과를 확인하기 위하여 PPARα와 C/EBPα의 mRNA 발현량을 측정하였으며, 각각의 서열을 증폭하기 위해 사용한 프라이머 서열은 아래와 같다.
The cell line used is a 3T3-L1 cell line, originating from fibroblast embryos of Mus musculus (mouse). Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) was used as cell culture medium, and 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% antibiotic-antimycotic were mixed with DMEM and used as cell culture medium. In order to confirm the inhibitory effect of intracellular fat accumulation, mRNA expression levels of PPARα and C / EBPa were measured. The primer sequences used to amplify each sequence are as follows.
PPARα 정방향프라이머 : 5'- CTG GTC AAG CTC AGG ACA CA -3'PPARα Forward Primer: 5'- CTG GTC AAG CTC AGG ACA CA -3 '
PPARα 역방향프라이머 : 5'- AAA GGG ATT GCA TTG TGT GA -3'PPARα Reverse Primer: 5'- AAA GGG ATT GCA TTG TGT GA -3 '
C/EBPα 정방향 프라이머 : 5'- GAC CCC CAT GAG AGA AGG AG -3'C / EBPa forward primer: 5'- GAC CCC CAT GAG AGA AGG AG -3 '
C/EBPα 역방향프라이머 : 5'- TTC TAA GGA CAG GCG TGG AG -3'
C / EBPa reverse primer: 5'- TTC TAA GGA CAG GCG TGG AG -3 '
구체적으로, 3T3-L1을 6 well plate에 seeding한 후, 37℃, 5% CO2 incubator에서 16시간 (over-night) 동안 incubation한 다음 CM DMEM (10% FBS, 1% AA)을 제거하고 SF(serum free media) DMEM 을 넣어 4시간 동안 starvation하였다. 그 후에 culture media에 오디추출물을 1 ng/㎖ ~ 100 ㎍/㎖, 오디 구성 성분인 1-Deoxynojirimycin, Kuromanin Chloride, Resveratrol, Callistephin Chloride, Keracyanin Chloride를 각각 10 ng/㎖ ~ 1 ㎍/㎖로 처리하여 16시간 동안 pre-incubation하였다. 이어서, Ad36을 4 moi (multiplicity of infection)로 1시간 30분 동안 infection시킨 뒤, Infection시키지 않는 group은 SF DMEM을 넣고 동일하게 실험을 수행하였다. 그 후 각각 농도의 오디 추출물과 오디 구성 성분이 포함된 culture media를 넣어 준 후 8시간 동안 post-incubation하였다. 다음에 media를 제거하고 PBS 1㎖을 넣고 scraper로 cell을 collection하고 4000rpm, 4℃에서 centrifugation하여 supernatant를 제거하였다. 그 후 trizol 500 ㎖씩 넣어서 mRNA를 추출한 후에, reverse transcriptional PCR을 수행하여 cDNA를 얻었다. 이 cDNA로 quantitative Real-time PCR을 수행하여 세포내 지방축적과 관련된 PPARα와 C/EBPα mRNA의 상대적인 발현량을 확인하였다. Specifically, after seeding 3T3-L1 in a 6 well plate, incubation for 16 hours (over-night) at 37 ℃, 5% CO 2 incubator and then remove CM DMEM (10% FBS, 1% AA) and SF (serum free media) DMEM was added and starvated for 4 hours. Subsequently, the culture extract was treated with 1 ng / ml ~ 100 ㎍ / ml, and 1-Deoxynojirimycin, Kuromanin Chloride, Resveratrol, Callistephin Chloride and Keracyanin Chloride, respectively, at 10 ng / ml ~ 1 ㎍ / ml. Pre-incubation for 16 hours. Subsequently, Ad36 was infected with 4 moi (multiplicity of infection) for 1 hour and 30 minutes, and the group without infection was subjected to the same experiment with SF DMEM. After that, the culture media containing the audio extract and the audio component of each concentration was added and post-incubated for 8 hours. Next, the media was removed, 1 ml of PBS was added, the cells were collected with a scraper, and the supernatant was removed by centrifugation at 4000 rpm and 4 ° C. Thereafter, 500 ml of trizol was added to extract mRNA, and cDNA was obtained by performing reverse transcriptional PCR. Quantitative real-time PCR was performed on the cDNA to confirm the relative expression levels of PPARα and C / EBPα mRNAs associated with intracellular fat accumulation.
도 6a 내지 도 6d에서 확인할 수 있듯이, 세포내 지방축적과 관련된 PPARα와 C/EBPα mRNA를 quantitative Real-time PCR로 확인한 결과, 오디 추출물은 1 ng/㎖에서 세포내 지방축적 억제효과가 가장 크게 나타났다. 또한 오디 구성 성분의 경우, 두 mRNA 발현량을 비교하였을 때 1-Deoxynojirimyin를 처리한 그룹은 1 ug/㎖에서, Kuromanin Chloride를 처리한 그룹에서는 1 ng/㎖ 과 1 ug/㎖에서, Resveratrol을 처리한 그룹에서는 100 ng/㎖에서, Callistephin Chloride, Keracyanin Chloride를 각각 처리한 그룹에서는 10 ng/㎖에서 그 효과가 가장 크게 나타난 것을 확인할 수 있다. 오디 추출물 및 오디 구성 성분들의 항바이러스 효능에서 본 것처럼 (도 5 참조), 항비만 억제 효능 역시 각 성분들의 최적 생리 활성 농도가 존재함을 확인하였다. 종합적으로 정리하면 오디 추출물과 각 구성성분들은 Ad36 감염에 의해 3T3-L1의 비만세포생성(adipogenesis)을 유발하는 세포내 지방축적을 억제할 수 있으며, 나아가 비만이 유도되는 현상을 감소시킬 수 있음을 확인하였다.
6A to 6D, PPARα and C / EBPa mRNAs related to intracellular fat accumulation were identified by quantitative real-time PCR. As a result, the Audi extract showed the greatest inhibitory effect on intracellular fat accumulation at 1 ng / ml. . In addition, in the case of the Audi component, 1-Deoxynojirimyin-treated group was treated at 1 ug / ml, and Kuromanin Chloride-treated group was treated at 1 ng / ml and 1 ug / ml. In the group treated with Callistephin Chloride and Keracyanin Chloride at 100 ng / ml, the effect was the highest at 10 ng / ml. As seen in the antiviral efficacy of the Audi extract and the Audi components (see FIG. 5), the anti-obesity inhibitory effect also confirmed that the optimal bioactive concentration of each component was present. Taken together, the Audi extract and its components can inhibit intracellular fat accumulation, which causes adipogenesis of 3T3-L1 by Ad36 infection, and further reduce obesity-induced phenomena. Confirmed.
상기에서는 본 발명의 바람직한 실시예에 기초하여 본 발명을 설명하였으나, 본 발명이 이들 실시예에 기재된 발명으로만 한정되는 것은 결코 아니다. 오히려, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 전술한 실시예에 기초하여 다양한 변형과 변경을 용이하게 추고할 수 있을 것이다. 하지만 이러한 변형과 변경은 모두 본 발명의 권리범위에 속한다는 사실은, 첨부하는 청구의 범위를 통해서 더욱 분명해질 것이다. In the above, the present invention has been described based on the preferred embodiments of the present invention, but the present invention is not limited only to the invention described in these examples. Rather, one of ordinary skill in the art to which the present invention pertains will be able to easily make various modifications and changes based on the above-described embodiments. However, the fact that all such modifications and variations are included in the scope of the present invention will become more apparent through the appended claims.
Claims (14)
An antiviral composition for Adenovirus 36, Ad36, containing mulberry extract as an active ingredient.
The antiviral composition of claim 1, wherein the Audi extract is extracted using ethanol and citric acid.
According to claim 1 or 2, wherein the Audi extract Ad36 characterized in that the suppression of the expression of Monocyte chemoattractant Protein-1 (MCP-1) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) Antiviral composition for.
The antiviral composition according to claim 1 or 2, wherein the Audi extract inhibits the influx of macrophage into the adipocytes.
The antiviral composition according to claim 1 or 2, wherein the Audi extract is contained in the antiviral composition at a concentration of 0.1 ng / ml to 100 µg / ml.
The antiviral composition according to claim 1 or 2, wherein the Audi extract inhibits the expression of the E1A gene and the Hexon gene activated by the infection of Ad36.
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