KR101255939B1 - Composition for prevention or treatment of diabetes containing 4-(1H-indazol-6-ylamino)-N-isopropyl-2-(methylthio)pyrimidine-5-carboxamide or pharmaceutically acceptable salt thereof - Google Patents

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Abstract

본 발명은 화학식 1로 표시되는 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물; 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능식품 및 베타세포 사멸 억제용 조성물; 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 및 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명은 탁월한 베타세포 사멸 억제 효과 및 혈당조절 효과 등을 나타내므로, 당뇨병의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.The present invention provides a 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable thereof. Pharmaceutical compositions for preventing or treating diabetes, including salts; A dietary supplement for preventing or improving diabetes and a composition for inhibiting beta cell death, including the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof; A compound represented by Chemical Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof; And it relates to a method for producing a compound represented by the formula (1). The present invention shows excellent beta cell death inhibitory effect and glycemic control effect, etc., can be usefully used for the prevention or treatment of diabetes.

Description

4-(1Ｈ-인다졸-6-일아미노)-Ｎ-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 조성물{Composition for prevention or treatment of diabetes containing 4-(1H-indazol-6-ylamino)-N-isopropyl-2-(methylthio)pyrimidine-5-carboxamide or pharmaceutically acceptable salt thereof}For preventing or treating diabetes comprising 4- (1H-indazol-6-ylamino) -N-isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof Composition {composition for prevention or treatment of diabetes containing 4- (1H-indazol-6-ylamino) -N-isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide or

본 발명은 화학식 1로 표시되는 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물; 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능식품 및 베타세포 사멸 억제용 조성물; 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 및 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법에 관한 것이다.
The present invention provides a 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable thereof. Pharmaceutical compositions for preventing or treating diabetes, including salts; A dietary supplement for preventing or improving diabetes and a composition for inhibiting beta cell death, including the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof; A compound represented by Chemical Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof; And it relates to a method for producing a compound represented by the formula (1).

일반적으로 당뇨병은 혈액 내 포도당 농도가 높아져서 발병하는 만성대사질환이다. 혈중 당농도가 높으면 췌장베타세포는 이를 인지하여 인슐린을 분비하고 분비된 인슐린은 표적세포 (근육, 간, 지방세포)에서 포도당 흡수를 촉진하여 혈당을 낮추게 한다. 그러나, 인슐린의 당조절 기능에 문제가 발생하여 식후에도 일정시간이 지나도 혈액 내 포도당 농도가 높은 수준으로 유지되거나, 공복시에도 혈액 내 포도당 농도가 높은 수준으로 유지될 수 있으며, 이를 당뇨병이라 일컫는다. 혈액내에 포도당이 지속적으로 증가되면 눈, 신장 및 신경 손상뿐만 아니라 뇌경색, 협심증 및 말초혈관질환 등의 심각한 합병증을 초래하여 당뇨병으로 인한 사망률이 증가하고 삶의 질을 저하시키게 된다. 이러한 만성질환인 제 2 형 당뇨병은 세계적으로 가파르게 성장하고 있는 질병으로 25년 후에는 당뇨 질환 환자가 지금의 2배에 이를 것으로 추정되며, 현재 우리나라에서도 사망에 이르는 원인 4위를 차지하고 있다.In general, diabetes is a chronic metabolic disease caused by high blood glucose levels. If the blood glucose level is high, pancreatic beta cells recognize this and secrete insulin, and the secreted insulin lowers blood sugar by promoting glucose absorption in target cells (muscle, liver, and fat cells). However, there is a problem in the glycemic control function of insulin, even after a certain period of time, even after a meal, the blood glucose concentration can be maintained at a high level, or even fasting blood glucose concentration can be maintained at a high level, which is called diabetes. Continued increases in glucose in the blood can lead to serious complications such as eye injuries, kidneys and nerves, as well as cerebral infarction, angina and peripheral vascular disease, resulting in increased mortality and decreased quality of life. Type 2 diabetes, which is a chronic disease, is a rapidly growing disease worldwide. After 25 years, it is estimated that the number of diabetic patients is twice that of the present, and now ranks 4th in Korea to cause death.

제 2 형 당뇨병의 병인은 크게 2가지로 나뉜다. 첫째로는 인슐린의 작용이상 (인슐린 저항성: Insulin resistance)으로 근육과 같은 말초 조직 및 간에서의 혈중 당흡수를 자극하는 인슐린 작용 능력이 감소되어 당흡수가 저하되거나 간에서 당생산 억제를 못하기 때문이며, 두 번째로는 인슐린 저항성을 극복 하려고 초기에는 인슐린 분비가 증가하지만 결국 췌장의 인슐린 분비 기능이 감소하여 인슐린이 상대적으로 부족해지기 때문이다. 현재 보고에 의하면 인슐린저항성 환자의 약 30% 정도가 당뇨병으로 이환 되는데, 이때 베타세포의 인슐린 분비능력이 당뇨병으로의 이환에 결정적인 역할을 한다고 알려져 있다(Chiasson JL, Rabasa-Lhoret R. Prevention of type 2 diabetes: insulin resistance and beta-cell function. Diabetes. 2004 Dec;53 Suppl 3:S34-8). 즉, 인슐린 저항성이 증가됨에 따라 인슐린 분비가 증가한다면 정상혈당 상태를 유지하게 되어 당뇨병으로 진단되고 있지 않는 상태로 유지할 수 있으나, 어떤 개인에게 있어서 인슐린 저항성의 증가에 따른 인슐린 분비가 충분하지 못하고 혈중 인슐린 농도가 떨어지게 된다면 IGT (impaired glucose tolerance) 상태를 지나 당뇨병(diabetes) 상태로 진행된다. The etiology of type 2 diabetes is largely divided into two. First, insulin dysfunction (Insulin resistance) decreases the ability of insulin to stimulate blood glucose absorption in peripheral tissues such as muscles and liver, resulting in decreased glucose uptake or inability to inhibit glucose production in the liver. Second, to overcome insulin resistance, insulin secretion increases initially, but the insulin secretion function of the pancreas decreases, resulting in a relatively lack of insulin. According to the current report, about 30% of insulin resistant patients are affected by diabetes mellitus, in which beta-cell insulin secretion plays a decisive role in diabetes (Chiasson JL, Rabasa-Lhoret R. Prevention of type 2). diabetes: insulin resistance and beta-cell function.Diabetes. 2004 Dec; 53 Suppl 3: S34-8). In other words, if insulin secretion increases as insulin resistance increases, normal blood sugar can be maintained and not be diagnosed as diabetes. However, in some individuals, insulin secretion due to increased insulin resistance is insufficient and blood insulin If the concentration drops, it passes through IGT (impaired glucose tolerance) and progresses to diabetes.

따라서, 인슐린 저항성 환자에서 당뇨병 환자로 이환은 베타세포의 인슐린 분비능의 지속적인 감소 또는 베타세포의 양적 감소가 핵심적인 원인임을 알 수 있다. 그러므로, 혈당을 감소시키기 위해서는 인슐린 민감도를 증진하는 동시에 베타세포의 양적 감소 없이 인슐린 분비를 증강시킬 수 있는 새로운 차원의 약물개발이 필수적이다. 즉, 인슐린 저항성을 극복하고 베타세포의 양적 감소를 억제하는 새로운 당뇨병 치료제의 개발이 필요한 것이다. Therefore, it can be seen that the morbidity from insulin resistance patients to diabetic patients is due to the continuous decrease in insulin secretion ability of beta cells or the quantitative decrease of beta cells. Therefore, in order to reduce blood glucose, it is essential to develop a new level of drug that can increase insulin sensitivity and enhance insulin secretion without reducing the amount of beta cells. In other words, it is necessary to develop a new diabetes treatment that overcomes insulin resistance and suppresses the quantitative reduction of beta cells.

현재까지 당뇨병 치료제에 사용되는 물질은 인슐린 분비를 증가시키거나 인슐린에 대한 감수성을 높이는 약제들이다. 싸이아졸리딘다이온 계열 (Thiazolidinedions)의 약제 중 피오글리타존 (pioglitazone)과 로지글리타존 (rosiglitazone)은 인슐린의 반응을 증강시키는 효과가 있고, 바이구아나이드 (biguanide) 계열의 약제인 메트포민 (metformin)은 인슐린 저항성을 개선시키고 간에서 포도당 생합성을 줄여준다. 또한, 인슐린분비촉진제로는 췌장의 베타세포에서 인슐린분비를 자극하여 강력한 혈당감소 효과를 나타내는 썰폰요소제 (sulfonylurea)와 메글리티나이드 (meglitinide)계열이 있다. 그러나, 이러한 약물들은 나름대로 부작용이 있어, 부작용이 없으며 효과적으로 혈당을 조절하는 새로운 약물에 대한 개발이 필요한 실정이다.To date, substances used in the treatment of diabetes are drugs that increase insulin secretion or increase sensitivity to insulin. Among the drugs of the thiazolidinedions, pioglitazone and rosiglitazone have the effect of enhancing insulin response, and the biguanide drug, metformin, is an insulin resistance. Improves and reduces glucose biosynthesis in the liver. In addition, insulin secretagogues include sulfonylurea and meglitinide, which stimulate potentiated insulin secretion in the beta cells of the pancreas and exhibit a strong blood sugar reducing effect. However, these drugs have their own side effects, and there is no side effect, and there is a need for the development of new drugs that effectively regulate blood glucose.

한편, 소포체 스트레스는 생리적 혹은 병리적 환경에 의해 소포체 기능에 장애가 발생하는 것을 말한다. 소포체 스트레스 반응은 특히 단백질을 합성하여 분비하는 기능이 활발한 형질세포, 췌장의 베타세포, 간세포, 조골세포와 같은 곳에서 잘 관찰되고 있으며, 최근 많은 연구들은 소포체 스트레스가 당뇨병과 같은 여러 가지 질환의 병인이 될 수 있다고 보고하였다(대한내분비학회지: 제 23 권 제 1 호 2008).On the other hand, endoplasmic reticulum stress refers to the generation of disorders in endoplasmic reticulum by physiological or pathological environment. The endoplasmic reticulum stress response is well observed in places such as plasma cells, pancreatic beta cells, hepatocytes, and osteoblasts, which are active in synthesizing and secreting proteins. Recently, many studies have suggested that vesicle stress causes various diseases such as diabetes. The Korean Journal of Endocrinology: Vol. 23, No. 1 2008.

세포가 소포체 스트레스를 극복하지 못하면 세포자연사 과정이 작동한다. 소포체 스트레스가 발생하는 동안 여러 가지 세포자연사 경로가 활성화되는데 C/EBP 가족에 속하는 C/EBP homologus protein (CHOP) 유전자의 활성에 의한 세포자연사가 대표적인 예이다. CHOP 유전자가 결손 (CHOP knock out)된 세포는 소포체 스트레스에 의한 세포자연사에 저항적이며, 반대로 CHOP 유전자를 과발현시키면 세포자연사가 촉진된다. CHOP 이외에도 소포체막에 존재하는 시스테인 단백질 분해효소 (ER-membrane proapoptotic cysteine protease)인 caspase-12의 활성화와 cJUN NH2-terminal kinase (JNK)의 활성화도 소포체 스트레스에 의한 세포자연사를 유도하는 주요 인자로 알려졌다.
If the cells do not overcome the vesicle stress, the process of cell death works. Several apoptosis pathways are activated during endoplasmic reticulum stress, a typical example of apoptosis caused by the activity of the C / EBP homologus protein (CHOP) gene in the C / EBP family. CHOP knocked out cells are resistant to apoptosis caused by vesicle stress, whereas overexpression of the CHOP gene promotes apoptosis. In addition to CHOP, the activation of caspase-12, an ER-membrane proapoptotic cysteine protease, and the activation of cJUN NH2-terminal kinase (JNK), which are present in the endoplasmic reticulum membranes, are also known as major factors that induce cell death by ER stress. .

이러한 상황에서, 본 발명자들은 인슐린 저항성을 극복하고 베타세포의 양적 감소 및 소포체 스트레스를 억제하는 당뇨병 치료제를 개발하기 위하여 예의 노력한 결과, 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물이 베타세포 사멸 억제 및 베타세포 보존의 탁월한 효능을 나타낼 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다.
In this situation, the present inventors have made diligent efforts to develop anti-diabetic agents that overcome insulin resistance and inhibit quantitative reduction of beta cells and vesicle stress, resulting in 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -N-. It was confirmed that the isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound can exhibit excellent efficacy of inhibiting beta cell death and preserving beta cells, thus completing the present invention.

본 발명의 목적은 화학식 1로 표시되는 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. An object of the present invention is a 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically thereof It is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes comprising an acceptable salt.

본 발명의 다른 목적은 상기 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 당뇨병이 발현한 또는 발병 가능성이 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 당뇨병의 예방 또는 치료방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for preventing or treating diabetes, comprising administering the pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes to an individual in whom diabetes is expressed or probable.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공하는 것이다. Still another object of the present invention is to provide a dietary supplement for preventing or improving diabetes comprising the compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 베타세포 사멸 억제용 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention to provide a composition for inhibiting beta cell death comprising a compound represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하는 것이다.Still another object of the present invention is to provide a compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 제조방법을 제공하는 것이다. Still another object of the present invention is to provide a method for preparing the compound represented by Chemical Formula 1.

상기 과제를 해결하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.As one aspect for solving the above problems, the present invention provides 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5 represented by the following general formula (1): Provided is a pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes, including a carboxamide compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

[화학식 1][Formula 1]

Figure 112011041030015-pat00001

Figure 112011041030015-pat00001

본 발명자들은 상기 화합물에 베타세포 사멸 억제 효과 및 항당뇨 효과가 있음을 최초로 확인함으로써, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 개발하였다. The inventors for the first time to confirm that the compound has a beta-cell killing inhibitory effect and anti-diabetic effect, has developed a pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes comprising the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 약학적으로 허용가능한 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 유리산으로는 유기산과 무기산을 사용할 수 있으며, 무기산으로는 염산, 브롬산, 황산, 아황산, 인산 등을 사용할 수 있고, 유기산으로는 구연산, 초산, 말레산, 퓨마르산, 글루코산, 메탈설폰산, 아세트산, 글리콜산, 석신산, 타타르산, 4-톨루엔설폰산, 갈락투론산, 엠본산, 글루탐산, 시트르산, 아스파르탄산 등을 사용할 수 있다.As the pharmaceutically acceptable salt of the compound represented by Formula 1, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful. Organic acids and inorganic acids may be used as the free acid, and hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid, sulfurous acid, phosphoric acid, etc. may be used as the inorganic acid, and citric acid, acetic acid, maleic acid, fumaric acid, gluconic acid, metalsulfonic acid may be used as the organic acid. , Acetic acid, glycolic acid, succinic acid, tartaric acid, 4-toluenesulfonic acid, galacturonic acid, embonic acid, glutamic acid, citric acid, aspartic acid, and the like can be used.

본 발명에 의한 부가염은 통상의 방법, 즉, 화학식 1의 화합물을 수혼화성 유기용매, 예를 들면 아세톤, 메탄올, 에탄올, 또는 아세토니트릴 등에 녹이고 당량 또는 과량의 유기산을 가하거나 무기산의 산 수용액을 가한 후 침전시키거나 결정화시켜서 제조하거나, 또는 용매나 과량의 산을 증발시킨 후 건조하거나 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.The addition salt according to the present invention is conventionally used, that is, the compound of formula 1 is dissolved in a water-miscible organic solvent such as acetone, methanol, ethanol, or acetonitrile, and an equivalent or excess organic acid is added or an acid aqueous solution of an inorganic acid is added. It can be prepared by addition, followed by precipitation or crystallization, or by evaporation of the solvent or excess acid followed by suction filtration of the dried or precipitated salt.

본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐 아니라 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물 및 입체이성질체도 모두 발명의 범주 내로 포함할 수 있다.The present invention may include all of the compounds of Formula 1 and their pharmaceutically acceptable salts as well as the possible solvates, hydrates and stereoisomers that may be prepared therefrom within the scope of the invention.

본 발명에서, "예방"이란 조성물의 투여에 의해 당뇨병에 의한 증상을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "치료"란 조성물의 투여에 의해 당뇨병에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.In the present invention, "prevention" means any action that suppresses or delays the onset of diabetes by administration of the composition, and "treatment" means that symptoms of diabetes are improved or beneficially changed by administration of the composition. It means all actions.

본 발명에서, 당뇨병은 췌장에서 분비되는 인슐린이 부족하거나 기능이 제대로 작용하지 못하여 포도당이 세포 내에서 이용되지 않고 혈액 속에 포도당 농도가 높아져서 발생하는 만성대사성 질환으로서, 바람직하게 제1형 당뇨병 및 제2형 당뇨병을 포함할 수 있다.In the present invention, diabetes is a chronic metabolic disease caused by a lack of insulin secreted from the pancreas or a malfunction of glucose, resulting in high glucose concentration in the blood without glucose being used in cells, preferably type 1 diabetes and type 2 It may include type diabetes.

본 발명의 당뇨병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier. The composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier can be of various oral or parenteral formulations. In the case of formulation, a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant is usually used. Solid formulations for oral administration include tablet pills, powders, granules, capsules and the like, which may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose ), Gelatin and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate, talc and the like are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solution solutions, emulsions, and syrups, and various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin, may be included. have. Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of the non-aqueous solvent and the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, and injectable ester such as ethyl oleate. As the base of the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.

상기 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.The pharmaceutical composition may be in the form of tablets, pills, powders, granules, capsules, suspensions, solutions, emulsions, syrups, sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, freeze- It can have one formulation.

상기 본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 용어 "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 당업자에 의해 적절하게 결정될 수 있다. The composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. The term “pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and an effective dose level is determined by the type and severity of the subject, age, sex, activity of the drug, drug Sensitivity, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including concurrent use of drugs, and other factors well known in the medical art, may be appropriately determined by those skilled in the art.

본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.The composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. And single or multiple administrations. It is important to take into account all of the above factors and administer an amount that will achieve the maximum effect in the least amount without side effects.

본 발명의 조성물은 당뇨병 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.The composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, hormonal therapy, drug therapy and biological response modifiers for the prevention and treatment of diabetes.

상기 화학식 1의 화합물은 베타세포 사멸을 억제하는 활성을 나타낼 수 있으며, 이를 통하여 인슐린을 분비하는 베타세포를 보호할 수 있다. 바람직하게, 상기 베타세포 사멸은 포도당/지방산 독성에 의한 베타세포 사멸일 수 있다.
The compound of Formula 1 may exhibit activity to inhibit beta cell death, thereby protecting beta cells secreting insulin. Preferably, the beta cell killing may be beta cell killing due to glucose / fatty acid toxicity.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 당뇨병이 발현한 또는 발병 가능성이 있는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는 당뇨병의 예방 또는 치료방법을 제공하는 것이다.In another aspect, the present invention is to provide a method for preventing or treating diabetes, comprising administering the pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes to an individual who has diabetes or is likely to develop it.

본 발명의 구체적인 실시예에서는, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 베타세포 사멸 억제 효과, 소포체 스트레스 감소 효과(도 1 내지 2) 및 당뇨병 모델 생쥐에서의 항당뇨 효과(도 4 내지 7)를 확인하였다. 따라서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 당뇨병의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다. In a specific embodiment of the present invention, the beta-cell death inhibitory effect, the endoplasmic reticulum stress reduction effect (Figs. 1 to 2) of the compound represented by the formula (1) and the antidiabetic effect in the diabetic model mice (Figs. 4 to 7) was confirmed . Therefore, the compound represented by Formula 1 and pharmaceutically acceptable salts thereof may be usefully used for the prevention and treatment of diabetes.

본 발명에서 용어, "개체"란 당뇨병이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미하고, 본 발명의 조성물을 개체에게 투여함으로써, 상기 질환을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다.As used herein, the term "individual" means all animals including humans who may or may develop diabetes, and by effectively administering the composition of the present invention to an individual, the disease may be effectively prevented and treated.

상기 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 목적하는 바에 따라 복강 내 투여, 정맥 내 투여, 근육 내 투여, 피하 투여, 피 내 투여, 경구 투여, 비 내 투여, 폐 내 투여, 직장 내 투여될 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다
The route of administration of the composition may be administered via any conventional route so long as it can reach the target tissue. The composition of the present invention may be administered as desired, such as intraperitoneal administration, intravenous administration, intramuscular administration, subcutaneous administration, intradermal administration, oral administration, intranasal administration, pulmonary administration, rectal administration, but is not limited thereto. Do not. In addition, the composition may be administered by any device in which the active agent may migrate to the target cell.

또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다. 즉, 상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 당뇨병의 예방 또는 개선을 목적으로 식품에 첨가할 수 있다.As another aspect, the present invention provides a dietary supplement for preventing or improving diabetes comprising the compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. That is, the compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be added to food for the purpose of preventing or improving diabetes.

본 발명에서, "예방"이란 건강기능식품의 섭취에 의해 당뇨병에 의한 증상을 억제시키거나 발병을 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "개선"이란 건강기능식품의 섭취에 의해 당뇨병에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 보든 행위를 의미한다.In the present invention, "prevention" means any action that suppresses or delays the onset of symptoms caused by the intake of health functional foods, and "improved" means the symptoms of diabetes improve by the intake of health functional foods. Any action that is or is beneficially altered.

본 발명의 건강기능식품은 건강 기능성 식품, 영양 보조제, 영양제, 파머푸드(pharmafood), 건강 식품, 뉴트라슈티칼(nutraceutical), 디자이너 푸드, 식품 첨가제 등의 모든 형태에 해당한다. The health functional food of the present invention corresponds to all types of health functional foods, nutritional supplements, nutritional supplements, pharmafoods, health foods, nutraceutical, designer foods, food additives and the like.

상기 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 건강기능식품의 첨가물로 사용할 경우, 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방 또는 개선적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다.When the compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof is used as an additive for a health functional food, the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be added as it is or may be used together with other food or food ingredients, and It may be appropriately used depending on the method. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to the intended use (preventive or remedial treatment).

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없으며, 예를 들면 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.There is no particular limitation on the type of the food. Examples of the food include meat, sausage, bread, chocolate, candy, snack, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, dairy products including ice cream, Alcoholic beverages, and vitamin complexes, all of which include health functional foods in a conventional sense.

상기 외에 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. In addition to the above, the health functional food of the present invention may contain various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acids and salts thereof, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloid thickeners, pH adjusters, stabilizers, Alcohols, carbonating agents used in carbonated drinks, and the like.

그밖에 본 발명의 건강기능식품은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
In addition, the health functional food of the present invention may contain natural fruit juice, fruit juice beverage and flesh for the production of vegetable beverages.

또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 베타세포 사멸 억제용 조성물을 제공한다.As another aspect, the present invention provides a composition for inhibiting beta cell death comprising the compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

베타세포가 고농도의 포도당과 지방산에 노출되었을 때 베타세포 내에 지질 분자 축적 (intracellular lipid molecules accumulation)이 증가하고, 베타세포의 인슐린 분비 기능을 가진 인슐린 관련 유전자 발현이 감소하며, 최종적으로 베타세포 사멸이 유도된다. 따라서, 바람직하게 상기 베타세포 사멸은 고농도의 포도당과 지방산에 의해 유도된 베타세포 사멸일 수 있다. When beta cells are exposed to high concentrations of glucose and fatty acids, intracellular lipid molecule accumulation increases in beta cells, decreases the expression of insulin-related genes with insulin secretion function of beta cells, and finally beta cell death. Induced. Therefore, preferably, the beta cell death may be beta cell death induced by high concentrations of glucose and fatty acids.

상기 베타세포 사멸 억제용 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 이는 상기에서 설명한 바와 같다. The composition for inhibiting beta cell death may further include a pharmaceutically acceptable carrier, as described above.

본 발명의 구체적인 실시예에서는, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 고농도의 포도당/지방산에 의한 베타세포 사멸 억제 효과 및 소포체 스트레스 감소 효과(도 1 내지 2)가 있음을 확인하였다. 따라서, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 베타세포 사멸을 억제함으로써, 궁극적으로 당뇨병의 예방 및 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
In a specific embodiment of the present invention, it was confirmed that the compound represented by the formula (1) has a beta cell death inhibitory effect and vesicle stress reduction effect (Figs. 1 to 2) by a high concentration of glucose / fatty acid. Therefore, the compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be usefully used for preventing and treating diabetes by inhibiting beta cell death.

또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.In another embodiment, the present invention provides 4- (1H - indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide represented by Formula 1 above. Provided are compounds or pharmaceutically acceptable salts thereof.

또한, 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 화학식 1의 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물의 제조방법을 제공한다.In still another aspect, the present invention provides a 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound of formula (1). It provides a method of manufacturing.

[반응식 1][Reaction Scheme 1]

Figure 112011041030015-pat00002

Figure 112011041030015-pat00002

본 발명의 제조방법은 상기 반응식 1로 나타낼 수 있으며, 구체적으로, 1) 4-클로로-2-메틸티오-5-피리미딘 카르복실산 에틸 에스테르(2)와 6-아미노인다졸(3)을 염기 존재하에 반응시켜 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(4)를 제조하는 단계; 2) 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르(4)를 수화반응시켜 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산(5)을 제조하는 단계; 및 3) 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산(5)과 이소프로필 아민(6)을 반응시켜 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물(1)을 제조하는 단계를 포함할 수 있다.The production method of the present invention can be represented by the reaction scheme 1, specifically, 1) 4-chloro-2-methylthio-5-pyrimidine carboxylic acid ethyl ester (2) and 6-aminoindazole (3) Reacting in the presence of a base to prepare 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylic acid ethyl ester (4); 2) 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylic acid ethyl ester (4) by hydration to 4- ( 1H -indazol-6 Preparing -ylamino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylic acid (5); And 3) 4- (1H - indazol-6-ylamino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylic acid (5) and isopropyl amine (6) to react 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) - N - it is an isopropyl-2 (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide the compound (1) may comprise a step of producing.

상기 반응에서 출발 물질 및 반응물질로 사용되는 4-클로로-2-메틸티오-5-피리미딘 카르복실산 에틸 에스테르(2), 6-아미노인다졸(3) 및 이소프로필 아민(6) 화합물은 상업적으로 시판되는 물질로서 쉽게 구할 수 있다. 4-chloro-2-methylthio-5-pyrimidine carboxylic acid ethyl ester (2), 6-aminoindazole (3) and isopropyl amine (6) compounds used as starting materials and reactants in the reaction are It is readily available as a commercially available material.

상기 단계 1)을 구체적으로 설명하면, 염기로는 유기 염기를 사용할 수 있으며, 예를 들면, 트리에틸아민, N,N-디이소프로필에틸아민, N-메틸모르포린, N-메틸피페리딘, N-디메틸아미노피리딘, N,N-디메틸아닐린, 2,6-루티딘, 피리딘 등과 같은 일반적인 삼급 유기염기를 사용하는 것이 바람직하다.Specifically describing step 1), an organic base may be used as the base, for example, triethylamine, N , N -diisopropylethylamine, N -methylmorpholine, N -methylpiperidine , N - dimethylaminopyridine, N, N - it is preferable to use a general tertiary organic base such as dimethylaniline, 2,6-lutidine, pyridine.

반응 온도는 20℃~40℃인 것이 바람직하고, 반응 시간은 1~6시간으로 하는 것이 바람직하다. It is preferable that reaction temperature is 20 degreeC-40 degreeC, and it is preferable to make reaction time into 1 to 6 hours.

반응 용매로는 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등에서 선택된 단일 용매 또는 혼합 용매를 사용함이 바람직하다. It is preferable to use a single solvent or a mixed solvent selected from methanol, ethanol, chloroform, methylene chloride, acetonitrile and the like as the reaction solvent.

상기 단계 2)를 구체적으로 설명하면, 단계 2)의 수화반응은 수산화나트륨, 수산화칼륨, 탄산나트륨 또는 탄산칼륨 수용액에 의해 수화반응이 일어나는 것이 바람직하다.Specifically, the step 2), the hydration reaction of step 2) is preferably a hydration reaction by sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate or potassium carbonate aqueous solution.

반응 용매로는 메탄올, 에탄올, 물, 아세토니트릴, 이소프로판올 등에서 선택된 단일 용매 또는 혼합 용매를 사용함이 바람직하다.As the reaction solvent, it is preferable to use a single solvent or a mixed solvent selected from methanol, ethanol, water, acetonitrile, isopropanol and the like.

상기 단계 3)을 구체적으로 설명하면, 단계 2)에서 제조된 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산(5)와 빌스마이어 시료인 N,N-디메틸포름아미드와 티오닐 클로라이드를 반응시켜 엑시드클로라이드 중간체를 합성하고, 이에 이소프로필 아민(6)을 첨가함으로써 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드(1)를 제조한다. Specifically describing step 3), 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylic acid (5) and Vils prepared in step 2) N, N -dimethylformamide as a Meyer sample was reacted with thionyl chloride to synthesize an intermediate chloride, and 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -N was added by adding isopropyl amine (6). -Isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide (1) is prepared.

반응 용매로는 클로로포름, 메틸클로라이드, 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란 등에서 선택된 단일 용매 또는 혼합 용매를 사용할 수 있고, 반응온도는 0℃~60℃인 것이 바람직하다.
As the reaction solvent, a single solvent or a mixed solvent selected from chloroform, methyl chloride, acetonitrile, tetrahydrofuran and the like may be used, and the reaction temperature is preferably 0 ° C to 60 ° C.

본 발명의 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물 및 건강기능식품은 탁월한 베타세포 사멸 억제 효과 및 혈당조절 효과 등을 나타내므로, 당뇨병의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
Pharmaceutical comprising a 4- (1 H- indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof The red composition and the health functional food exhibit excellent beta cell death inhibitory effect and blood sugar control effect, and thus can be usefully used for the prevention or treatment of diabetes.

도 1은 화학식 1의 화합물이 고농도의 포도당과 지방산 (HG/PA)에 의한 INS-1세포의 세포사멸을 효과적으로 억제할 수 있음을 보이는 Cell death detection ELISA 결과이다.
도 2a는 화학식 1의 화합물이 고농도의 포도당과 지방산 (HG/PA)에 의한 INS-1세포의 세포사멸 유도를 효과적으로 억제하는 것을 보이는 웨스턴 블랏 결과이다.
도 2b는 화학식 1의 화합물이 고농도의 포도당과 지방산 (HG/PA)에 의한 INS-1세포의 ER 스트레스 유도를 효과적으로 억제하는 것을 보이는 웨스턴 블랏 결과이다.
도 3a 및 3b는 마우스 동물실험에 있어서, DMSO+식염수 투여군 (DMSO)과 화학식 1의 화합물 투여군의 체중 및 먹이 섭취량을 나타낸 그래프이다.
도 4는 화학식 1의 화합물 투여군과 DMSO+식염수 투여 대조군 (DMSO)의 포도당 투여 후 시간경과에 따른 혈당의 변화를 나타내는 당내성 검사 (IPGTT) 결과이다.
도 5a는 DMSO+식염수 투여 대조군 (DMSO)과 화학식 1의 화합물 투여군의 췌장 베타세포의 인슐린 염색 결과이다.
도 5b는 DMSO+식염수 투여 대조군 (DMSO)과 화학식 1의 화합물 투여군의 췌장의 H&E 염색 결과이다.
도 6은 췌도의 온전성을 평가하기 위한 기준을 나타낸 사진이다.
도 7은 DMSO+식염수 투여 대조군과 화학식 1의 화합물 투여군의 췌도의 파괴 등급기준에 따른 췌도 등급 비율을 나타낸 결과이다.1 is a cell death detection ELISA result showing that the compound of Formula 1 can effectively inhibit the cell death of INS-1 cells by high concentrations of glucose and fatty acids (HG / PA).
Figure 2a is a result of Western blot showing that the compound of formula 1 effectively inhibits apoptosis induction of INS-1 cells by high concentrations of glucose and fatty acids (HG / PA).
Figure 2b is a Western blot showing that the compound of formula 1 effectively inhibits the ER stress induction of INS-1 cells by high concentrations of glucose and fatty acids (HG / PA).
Figure 3a and 3b is a graph showing the body weight and food intake of the DMSO + saline administration group (DMSO) and the compound administration group of the formula (1) in mouse animal experiments.
Figure 4 is a result of glucose tolerance test (IPGTT) showing the change in blood glucose over time after administration of the compound of Formula 1 and DMSO + saline administration control group (DMSO).
Figure 5a is the result of insulin staining of pancreatic beta cells of DMSO + saline administration control group (DMSO) and the compound administration group of formula (1).
Figure 5b is the result of H & E staining of the pancreas of the DMSO + saline administration control group (DMSO) and the compound administration group of formula (1).
Figure 6 is a photograph showing the criteria for evaluating the integrity of the pancreatic islets.
Figure 7 is a result showing the ratio of pancreatic islets according to the destruction grade criteria of the pancreatic islets of the DMSO + saline administration control group and the compound administration group of formula (1).

이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기의 실시 예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail by way of examples. However, the following examples are illustrative of the present invention, and the contents of the present invention are not limited to the following examples.

제조예Manufacturing example 1 : 4-(1 1: 4- (1 H-H- 인다졸Indazole -6--6- 일아미노Amino )-) - N-N- 아이소프로필Isopropyl -2-(-2-( 메틸티오Methylthio )피리미딘-5-카Pyrimidine-5-car 르복스아미드Levoxamide 의 제조Manufacturing

1-1. 4-(11-1. 4- (1 HH -- 인다졸Indazole -6--6- 일아미노Amino )-2-()-2-( 메틸티오Methylthio )피리미딘-5-) Pyrimidin-5- 카르복실산Carboxylic acid 에틸 에스테르의 제조 Preparation of ethyl ester

메탄올(70 ㎖)에 4-클로로-2-메틸티오-5-피리미딘카르복실산 에틸 에스테르 (5 g)와 6-아미노인다졸 (3.14 g) 및 트리에틸아민 (3.3 ㎖)를 차례로 가한 후, 25 ℃~30 ℃에서 3 시간 동안 반응시켰다. 20 ℃에서 1 시간 동안 교반한 후 여과하고, 메탄올 (20 ㎖)로 세척하였다. 얻어진 결정을 40 ℃~50 ℃에서 진공 건조하여 5.8 g (수율 82 %)의 목적 화합물을 얻었다.
To methanol (70 mL) was added 4-chloro-2-methylthio-5-pyrimidinecarboxylic acid ethyl ester (5 g) followed by 6-aminoindazole (3.14 g) and triethylamine (3.3 mL). The reaction was carried out at 25 ° C. ~ 30 ° C. for 3 hours. Stir at 20 ° C. for 1 h, then filter and wash with methanol (20 mL). The obtained crystals were vacuum dried at 40 deg. C to 50 deg. C to obtain 5.8 g (yield 82%) of the title compound.

Mass (H+) : 330.1Mass (H + ): 330.1

1H-NMR (DMSO-d6), ppm : δ 1.33(t, 3H), 2.53(s, 3H), 4.33(m, 2H), 7.10(d, 1H), 7.70(d, 1H), 8.00(s, 1H), 8.22(s, 1H), 8.72(s, 1H), 10.40(s, 1H), 13.09(brs, 1H).
1 H-NMR (DMSO-d 6), ppm: δ 1.33 (t, 3H), 2.53 (s, 3H), 4.33 (m, 2H), 7.10 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 8.00 (s , 1H), 8.22 (s, 1H), 8.72 (s, 1H), 10.40 (s, 1H), 13.09 (brs, 1H).

1-2. 4-(11-2. 4- (1 HH -- 인다졸Indazole -6--6- 일아미노Amino )-2-()-2-( 메틸티오Methylthio )피리미딘-5-) Pyrimidin-5- 카르복실산의Carboxylic acid 제조 Produce

메탄올(100 ㎖)에 제조예 1-1을 통해 얻은, 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-2-메틸티오-5-피리미딘카르복실산 에틸 에스테르 (3.84 g)과 3N-수산화나트륨 용액 (4 당량)을 가한 후, 40 ℃~50 ℃에서 4 시간 동안 반응시켰다. 0 ℃~5 ℃로 온도를 낮추고, 3N-염산 용액을 사용하여 반응용액을 pH를 5~6으로 맞춘 후 물 50 ㎖를 넣고 상온에서 1 시간 교반한다. 교반 후 여과하고, 물(50 ㎖)로 세척하였다. 얻어진 결정을 40 ℃~50 ℃에서 진공 건조하여 3.44 g (수율 98 %)의 목적 화합물을 얻었다.
3-N with 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -2-methylthio-5-pyrimidinecarboxylic acid ethyl ester (3.84 g) obtained in Preparation Example 1-1 in methanol (100 mL) Sodium hydroxide solution (4 equivalents) was added, followed by reaction at 40 ° C.-50 ° C. for 4 hours. Lower the temperature to 0 ℃ ~ 5 ℃, adjust the pH of the reaction solution to 5 ~ 6 using 3N hydrochloric acid solution, 50 ml of water was added and stirred at room temperature for 1 hour. After stirring, it was filtered and washed with water (50 mL). The obtained crystals were vacuum dried at 40 deg. C to 50 deg. C to obtain 3.44 g (yield 98%) of the title compound.

Mass (H+) : 302.1Mass (H + ): 302.1

1H-NMR (DMSO-d6), ppm : δ 2.56(s, 3H), 7.10(d, 1H), 7.72(d, 1H), 8.01(s, 1H), 8.25(s, 1H), 8.73(s, 1H), 10.81(brs, 1H), 13.06(brs, 1H).
1H-NMR (DMSO-d6), ppm: δ 2.56 (s, 3H), 7.10 (d, 1H), 7.72 (d, 1H), 8.01 (s, 1H), 8.25 (s, 1H), 8.73 (s , 1H), 10.81 (brs, 1H), 13.06 (brs, 1H).

1-3. 4-(11-3. 4- (1 HH -- 인다졸Indazole -6--6- 일아미노Amino )-) - N-N- 아이소프로필Isopropyl -2-(-2-( 메틸티오Methylthio )피리미딘-5-) Pyrimidin-5- 카르복스아미드의Carboxamide 제조 Produce

메틸렌클로라이드 (50 ㎖)에 N,N-디메틸포름아미드(0.24 ㎖)와 티오닐클로라이드(0.28 ㎖)를 가한 후 2 시간 환류반응 한다. 이 용액에 상기 제조예 1-2에서 얻은 4-(1H-6-인다졸일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 (500 mg)를 넣은 후 3 시간 환류반응 한다. 이 용액을 0 ℃~5 ℃로 온도를 내린 후, 이소프로필 아민(1.4 ㎖)을 천천히 적가한 후 같은 온도에서 1 시간 교반 한다. 메탄올 20 ㎖로 반응을 종결시키고 감압 증류한 후, 메탄올 50 ㎖에서 1 시간 교반한다. 고체를 여과하고 메탄올 20 ㎖로 씻어내고 진공 건조하여 367 mg (수율 65 %)의 목적 화합물을 얻었다.
N, N -dimethylformamide (0.24 mL) and thionyl chloride (0.28 mL) were added to methylene chloride (50 mL), followed by reflux for 2 hours. 4- ( 1H -6-indazolylamino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylic acid (500 mg) obtained in Preparation Example 1-2 was added to this solution, followed by reflux for 3 hours. . The solution is cooled to 0 ° C. to 5 ° C., isopropyl amine (1.4 ml) is slowly added dropwise, followed by stirring at the same temperature for 1 hour. The reaction was terminated with 20 ml of methanol and distilled under reduced pressure, followed by stirring in 50 ml of methanol for 1 hour. The solid was filtered off, washed with 20 ml of methanol and dried in vacuo to afford 367 mg (yield 65%) of the title compound.

Mass (H+) : 343.2Mass (H + ): 343.2

1H-NMR (DMSO-d6), ppm : δ 1.20(d, 6H), 2.57(s, 3H), 4.13(m, 1H), 7.06(d, 1H), 7.71(d, 1H), 8.00(s, 1H), 8.29(s, 1H), 8.56(d, 1H), 8.72(s, 1H), 11.55(s, 1H).
1 H-NMR (DMSO-d 6), ppm: δ 1.20 (d, 6H), 2.57 (s, 3H), 4.13 (m, 1H), 7.06 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 8.00 (s , 1H), 8.29 (s, 1H), 8.56 (d, 1H), 8.72 (s, 1H), 11.55 (s, 1H).

실시예Example 1 : 4-(1 1: 4- (1 HH -- 인다졸Indazole -6--6- 일아미노Amino )-) - NN -- 아이소프로필Isopropyl -2-(-2-( 메틸티오Methylthio )피리미딘-5-카Pyrimidine-5-car 르복스아미드Levoxamide 의 포도당/지방산 독성에 의한 베타세포 사멸 억제 효과 확인Inhibition of Beta Cell Death by Glucose / fatty Acid Toxicity

1-1. 1-1. CellCell deathdeath detectiondetection ELISAELISA 방법에 의한 베타세포 사멸 분석 Beta cell death assay by method

4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드(이하, 화학식 1의 화합물)가 포도당/지방산 (HG/PA) 독성 (Glucolipotoxicity)에 의한 베타세포 사멸을 억제할 수 있는지 알아보았다. 4- (1H - indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide (hereafter compound of formula 1) is glucose / fatty acid (HG / PA We investigated whether beta cell death caused by Glucolipotoxicity can be suppressed.

이를 위하여, 96 웰 플레이트에 INS-1 세포를 5 x 104 개씩 분주하여 24 시간 동안 배양한 후 고농도 포도당 (25 mM)과 지방산 (400 μM palmitate) (HG/PA)과 함께 화학식 1의 화합물 (2.5, 5, 10, 20 μM)을 16 시간 동안 동시에 배양하였다. 용균버퍼(lysis buffer, 0.1 % tritonX-100, 0.1 % sodium citrate)로 세포를 용해한 후에 원심분리 (700 x g, 5 분)하여 상층에 있는 조각 난 nucleosome DNA를 샌드위치 ELISA를 통해 정량분석 하였다. ELISA 플레이트에는 항-히스톤 단일클론항체 (anti-histone monoclonal antibodies)가 코팅되어 있어서 조각난 DNA/히스톤 복합체를 붙일 수 있고 여기에 peroxidase-conjugated anti-DNA monoclonal antibodies를 넣었다. Nucleosome DNA complex에 붙은 peroxidase를 통해 반응을 유도하였고, Microplate reader 405 nm 파장에서 측정하였다.To this end, 5 x 10 4 aliquots of INS-1 cells were inoculated into 96 well plates and cultured for 24 hours, followed by high concentration of glucose (25 mM) and fatty acid (400 μM palmitate) (HG / PA). 2.5, 5, 10, 20 μM) were incubated simultaneously for 16 hours. Cells were lysed with lysis buffer (lysis buffer, 0.1% tritonX-100, 0.1% sodium citrate) and centrifuged (700 xg, 5 minutes) to quantify the fragmented nucleosome DNA in the upper layer by sandwich ELISA. The ELISA plate was coated with anti-histone monoclonal antibodies so that fragmented DNA / histone complexes could be attached to which peroxidase-conjugated anti-DNA monoclonal antibodies were added. The reaction was induced by peroxidase attached to the nucleosome DNA complex and measured at 405 nm wavelength of Microplate reader.

그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이, INS-1 세포에 고농도 포도당과 지방산을 처리한 경우 DNA fragmentation이 증가하였으나, 화학식 1의 화합물을 동시에 처리한 그룹에서는 화학식 1 화합물의 농도 의존적으로 DNA fragmentation이 감소하였다. 이러한 결과는 화학식 1의 화합물이 고농도 포도당과 지방산 (HG/PA)에 의한 INS-1 세포의 사멸을 효과적으로 억제할 수 있음을 나타낸다(도 1).
As a result, as shown in FIG. 1, DNA fragmentation was increased when INS-1 cells were treated with high concentrations of glucose and fatty acids, but DNA fragmentation was reduced in a concentration-dependent manner of the compound of Formula 1 at the same time. It was. These results indicate that the compound of formula 1 can effectively inhibit the death of INS-1 cells by high glucose and fatty acid (HG / PA) (FIG. 1).

1-2. 1-2. 웨스턴Western 블랏에On the blot 의한 베타세포 사멸 분석 및 소포체 스트레스 ( Beta cell death assay and vesicle stress ERER stress) 분석 stress analysis

화학식 1의 화합물의 포도당/지방산 (HG/PA) 독성에 의한 베타세포 사멸 억제 효과 및 베타세포의 소포체 스트레스 감소 효과를 알아보았다. 이를 위하여, INS-1 베타 세포를 12 웰 플레이트에 웰 당 5×105 으로 분주하고 24 시간 동안 배양한 후, 고농도 포도당 (25 mM)과 지방산 (400 μM palmitate) (HG/PA)과 함께 화학식 1의 화합물 (2.5, 5, 10, 20 μM)을 처리하여 16 시간 동안 배양하였다. 세포들을 수거하여 RIPA 버퍼 (1 % triton X-100, 1 % sodium deoxycholate, 50 mM NaCl2, 50 mM Tris-HCl, 1 mM sodium vanadate, 2 mM PMSF)를 이용하여 세포로부터 단백질을 추출하고, 동일 양의 단백질을 sample 버퍼 (187 mM Tris-HCl pH 6.8, 10 % SDS, 30 % glycerol, 100 mM DTT, 0.3 % bromophenol blue)에 희석하여 5 분간 끓인 다음 8~12 % SDS-pholyacrylamide gel에서 전기영동 한 후, gel 상의 단백질을 전기적으로 Immobilon membrane (Milipore, Bedford, MA)으로 이동시키고 5 % 탈지유로 한 시간 동안 blocking하였다. 각각의 항체와 4 ℃에서 12 시간 동안 반응시킨 후 TBST 버퍼(25 mM Tris-buffered saline, 0.3 % Tween20) 로 세 번 세척하였다. Horse radish peroxidase가 결합된 2차 항체로 한 시간 동안 반응시킨 후, TBST로 세 번 세척한 후, ECL (enhanced chemiluminescence) system (Amersham Bioscience, Pittsburgh, USA)을 사용하여 항체반응 양을 조사하여, 도 2a와 도 2b에 나타내었다. The effects of inhibiting beta cell death and beta cell vesicle stress reduction of the compound of Formula 1 by glucose / fatty acid (HG / PA) toxicity were examined. For this purpose, INS-1 beta cells were dispensed in 12 well plates at 5 × 10 5 per well and incubated for 24 hours, followed by chemical formula with high glucose (25 mM) and fatty acid (400 μM palmitate) (HG / PA). Compound 1 (2.5, 5, 10, 20 μM) was treated and incubated for 16 hours. The cells were harvested and extracted protein from cells using RIPA buffer (1% triton X-100, 1% sodium deoxycholate, 50 mM NaCl 2 , 50 mM Tris-HCl, 1 mM sodium vanadate, 2 mM PMSF) Amount of protein was diluted in sample buffer (187 mM Tris-HCl pH 6.8, 10% SDS, 30% glycerol, 100 mM DTT, 0.3% bromophenol blue) and boiled for 5 minutes, followed by electrophoresis on 8-12% SDS-pholyacrylamide gel. Afterwards, the protein on the gel was electrically transferred to an Immobilon membrane (Milipore, Bedford, Mass.) And blocked for 5 hours with 5% skim milk. After the reaction with each antibody for 12 hours at 4 ℃ washed three times with TBST buffer (25 mM Tris-buffered saline, 0.3% Tween20). After reacting with horse radish peroxidase-conjugated secondary antibody for one hour, washing three times with TBST, and then examining the amount of antibody reaction using an enhanced chemiluminescence (ECL) system (Amersham Bioscience, Pittsburgh, USA), 2a and FIG. 2b.

베타세포 사멸과 관련하여, HG+PA 처리에서 세포사멸 관련 단백질인 cleaved 형태의 caspase3 (C-caspase3)의 수준이 높게 관찰되었지만, 화학식 1의 화합물을 동시에 처리한 군에서는 농도 의존적으로 C-caspase3의 수준이 감소하였다. 즉, 화학식 1의 화합물에 의하여 고농도의 포도당과 지방산에 의한 베타세포 사멸이 억제될 수 있음을 확인할 수 있었다(도 2a). In relation to beta cell death, high levels of cleaved form of caspase3 (C-caspase3), apoptosis-related protein, were observed in HG + PA treatment, but the concentration of C-caspase3 Levels decreased. That is, it was confirmed that beta cell death by high concentrations of glucose and fatty acids could be inhibited by the compound of Formula 1 (FIG. 2A).

소포체 스트레스 (ER stress)와 관련하여, HG+PA 처리에서 소포체 스트레스 관련 단백질인 P-JNK와 CHOP, Calnexin의 수준이 높은데 반해, 화학식 1의 화합물을 동시에 처리한 군에서는 농도 의존적으로 발현 수준이 감소하였다. 즉, 화학식 1의 화합물에 의하여 고농도의 포도당과 지방산에 의해 유도된 소포체 스트레스가 감소하였음을 확인할 수 있었다(도 2b).
In relation to ER stress, the levels of P-JNK, CHOP, and Calnexin, which are related to ER stress proteins, were high in HG + PA treatment, whereas the expression level decreased in the group treated with the compound of Formula 1 simultaneously. It was. That is, it was confirmed that the endoplasmic reticulum stress induced by high concentrations of glucose and fatty acids was reduced by the compound of Formula 1 (FIG. 2B).

실시예Example 2 : 당뇨병 모델  2: diabetes model 생쥐에서In mice 4-(1 4- (1 HH -- 인다졸Indazole -6--6- 일아미노Amino )-N-) -N- 아이소프로Isopro 필-2-( Phil-2- ( 메틸티오Methylthio )피리미딘-5-) Pyrimidin-5- 카르복스아미드의Carboxamide 항당뇨Anti-diabetic 효과 확인 Check the effect

2-1. 실험 방법2-1. Experimental Method

<2-1-1> 실험설계<2-1-1> Experimental Design

랩틴 (leptin) 수용체가 제거된 당뇨병 모델 생쥐 C57BLKS/J-db/db를 이용하여 화학식 1의 화합물의 혈당감소 효과 및 베타세포 보존 효과를 알아보았다. 5 주령의 웅성의 C57BLKS/J-db/db mice를 일본의 SLC에서 수입하였고, 이 동물을 우리당 3 마리씩 분리하여 온도 22±0.5 ℃, 습도 55±5 %에서 12 시간 밤낮의 주기로 사육하였다. 7 주령의 C57BLKS/J-db/db mice를 2 개의 군으로 나누고 대조군에는 DMSO와 식염수 (saline)를 투여하였고 실험군에는 화학식 1의 화합물을 DMSO와 PBS에 녹여서 40 μg/mice로 6 주간 주 3 회 복강 투여하였다. 1 주마다 몸무게, 먹이 섭취량을 측정하였고 투여 종료 후 포도당을 복강에 투입하고 대조군 및 실험군을 대상으로 복강 내 당부하 검사 (IPGTT)와 인슐린 민감도 실험 (췌장조직의 염색)을 수행하였다.
The diabetic model mouse C57BLKS / J-db / db from which the leptin receptor was removed was used to investigate the hypoglycemic effect and the beta-cell preservation effect of the compound of Formula 1. Five-week-old male C57BLKS / J-db / db mice were imported from Japan's SLC, and three animals per cage were separated and reared for 12 hours day and night at 22 ± 0.5 ° C and 55 ± 5% humidity. The 7-week-old C57BLKS / J-db / db mice were divided into two groups, and the control group was administered DMSO and saline, and the experimental group was dissolved in DMSO and PBS at 40 μg / mice. Intraperitoneal administration. Weight and food intake were measured every week, and glucose was injected into the abdominal cavity after the end of the administration. Intraperitoneal glucose tolerance test (IPGTT) and insulin sensitivity experiment (pancreatic tissue staining) were performed in the control group and the experimental group.

<2-1-2> 췌장 조직의 인슐린 염색과 H&E 염색 <2-1-2> Insulin staining and H & E staining of pancreatic tissue

췌장의 형태 계측을 위해 14 주령 때에 C57BLKS/J-db/db를 희생하여 췌장을 적출하고 4 ℃에서 4 % 파라포름알데하이드로 24 시간 동안 고정한 후 흐르는 물에 수세한 다음 파라핀으로 포매하여 조직을 5 μm 두께로 박절하였다. 박절한 조직을 코팅 슬라이드 위에 붙인 후 xylen으로 파라핀을 제거하고 계열 알콜순 (100 %, 95 %, 90 %, 80 %, 70 % EtOH)으로 함수 과정을 거친 후 면역 조직학적 염색을 시행하였다. To measure the shape of the pancreas, at 14 weeks of age, the pancreas was extracted at the sacrifice of C57BLKS / J-db / db, fixed at 4 ° C. with 4% paraformaldehyde for 24 hours, washed with running water, and embedded with paraffin. Cut into μm thickness. The detached tissue was attached onto the coating slide, paraffin was removed with xylen, and then treated with a series of alcohols (100%, 95%, 90%, 80%, 70% EtOH), followed by immunohistostaining.

췌장 조직의 인슐린 염색방법으로 박절한 조직을 PBS (pH 7.4)으로 세척한 후 15 분간 3 % H2O2를 처리하여 세포 내 과산화 효소 활성을 억제시켰으며, 항원성을 증가시키기 위해 0.01 M citrate buffer (pH 6.0)에 넣고 전자레인지로 10 분간 가열하고 실온에서 식힌 후 PBS로 세척하였다. 세척한 조직위에 인슐린에 대한 1 차 항체 (DAKO. co, CA. USA, guinea pig anti-insulin)를 항체 희석액 (DAKO. co, CA. USA)에 1 : 1000으로 희석하여 4 ℃에서 하룻밤 동안 반응시키고 PBS로 세척하였다. 2차 항체로 기니피그에 대한 항체 (anti-guinea pig)를 상온에서 30 분간 반응시킨 후 PBS로 세척하였다. 0.05 % 3,3‘-duaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB, DAKO. co, CA. USA) 발색시약을 조직에 떨어뜨려 2 분간 발색시키고 흐르는 물에 염색 시약을 제거하였다. 물기를 제거한 후 여과시킨 harry's hematoxylin으로 2 분간 대조염색을 시행하고 함수의 역방향으로 탈수과정을 거친 후 봉입하여 현미경 (Olympus, Tokyo, Japan)으로 관찰하였다.Insulin stained pancreatic tissue was washed with PBS (pH 7.4) and treated with 3% H 2 O 2 for 15 minutes to inhibit intracellular peroxidase activity and 0.01 M citrate to increase antigenicity. Put in buffer (pH 6.0) and heated in a microwave for 10 minutes, cooled at room temperature and washed with PBS. The primary antibody against insulin (DAKO. Co, CA. USA, guinea pig anti-insulin) was diluted 1: 1000 in antibody diluent (DAKO. Co, CA. USA) on the washed tissue and reacted overnight at 4 ° C. And washed with PBS. As a secondary antibody, the antibody against guinea pigs (anti-guinea pig) was reacted at room temperature for 30 minutes and then washed with PBS. 0.05% 3,3'-duaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB, DAKO. Co, CA. USA) color reagent was dropped on the tissue and developed for 2 minutes, and the staining reagent was removed in running water. After removal of water, the resultant was stained with filtered harry's hematoxylin for 2 minutes, dehydrated in the reverse direction of hydration, and then sealed and observed under a microscope (Olympus, Tokyo, Japan).

췌장 조직의 Hematoxylin-Eosin (H&E) 염색방법으로 박절한 조직을 Harry's hematoxylin 염색액으로 5 분간 염색한 후 흐르는 물에 5 분간 수세하고 1 % HCl - alcohol과 ammonia로 탈 염색하였다. 이후, 흐르는 물에 10 분간 수세한 후 다시 Eosin 염색액으로 1 분간 대조염색하고 함수의 역방향으로 탈수 과정을 거친 후 봉입하여 현미경 (Olympus, Tokyo, Japan)으로 관찰하였다.
Hematoxylin-Eosin (H & E) staining of pancreatic tissues was then stained with Harry's hematoxylin stain for 5 minutes, washed with running water for 5 minutes and destained with 1% HCl alcohol and ammonia. Thereafter, the resultant was washed with running water for 10 minutes, and then counterstained with Eosin stain for 1 minute, dehydrated in the reverse direction of hydration, and sealed.

<2-1-3> 인슐린 염색에 의한 <2-1-3> by insulin staining 췌도Islet 평가방법 Assessment Methods

췌도의 파괴 상태에 따라 인슐린을 염색한 조직을 6 개의 등급으로 나누고, 이를 기준으로 모든 개체의 조직샘플에서 각각의 췌도에 등급을 매겨 전체에서 각 등급이 차지하는 비율을 표시하였다. 1 등급이 가장 정상 췌도 형태에 가까우며 등급의 숫자가 증가할수록 파괴된 정도가 심한 것을 나타낸다(도 6).
Insulin-stained tissues were divided into six grades according to the destruction status of the pancreatic islets. Based on this, each pancreatic islet was graded in the tissue samples of all individuals, and the ratio of each grade in the whole was expressed. Grade 1 is closest to the most normal islet morphology and shows a greater degree of destruction as the number of grades increases (FIG. 6).

2-2. 실험 결과2-2. Experiment result

<2-2-1> 4-(1<2-2-1> 4- (1 HH -- 인다졸Indazole -6--6- 일아미노Amino )-) - NN -- 아이소프로필Isopropyl -2-(-2-( 메틸티오Methylthio )피리미딘-5-카르복스아미드의 체중 및 먹이 섭취에 미치는 영향Effect of Pyrimidine-5-Carboxamide on Body Weight and Food Intake

화학식 1의 화합물을 C57BLKS/J-db/db mice에 6 주간 투여한 후 체중 및 먹이섭취량을 조사한 결과, 도 3a 및 3b에 나타난 바와 같이, 대조군과 화학식 1의 화합물 투여군 사이에 유의적인 차이가 없었음을 확인할 수 있었다(도 3a 및 3b).
After administration of the compound of Formula 1 to C57BLKS / J-db / db mice for 6 weeks, the body weight and food intake were examined. As shown in FIGS. 3A and 3B, there was no significant difference between the control group and the compound administration group of Formula 1 It could be confirmed (Fig. 3a and 3b).

<2-2-2> 4-(1<2-2-2> 4- (1 H-H- 인다졸Indazole -6--6- 일아미노Amino )-) - NN -- 아이소프로필Isopropyl -2-(-2-( 메틸티오Methylthio )피리미딘-5-카르복스아미드의 혈당 조절 효과Blood Glucose Control Effects of Pyrimidine-5-Carboxamides

화학식 1의 화합물을 6 주간 투여한 후 쥐의 복강에 2 g/kg의 포도당을 주입하고 혈중 포도당량을 측정 (당내성 검사, IPGTT) 하였다. 그 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 화학식 1의 화합물 투여군의 공복 혈당이 대조군에 비해 낮았으며, 화학식 1의 화합물 투여군에서 포도당 투여 3 시간 후 혈중 포도당이 빠르게 감소하였음을 확인할 수 있었다. 구체적으로, 대조군의 공복혈당은 388 ㎎/㎗ 이었으나, 화학식 1의 화합물 투여군의 공복혈당은 240 ㎎/㎗ 이었으며, 대조군의 당 부하 3 시간 후 혈당은 600 ㎎/㎗ 이었으나, 화학식 1의 화합물 투여군의 혈당은 303 ㎎/㎗ 이었다(도 4). After 6 weeks of administration of the compound of Formula 1, 2 g / kg of glucose was injected into the abdominal cavity of rats and blood glucose levels were measured (glucose tolerance test, IPGTT). As a result, as shown in Figure 4, the fasting blood glucose of the compound administration group of Formula 1 was lower than the control group, it was confirmed that the blood glucose was rapidly reduced after 3 hours of glucose administration in the compound administration group of Formula 1. Specifically, the fasting glucose of the control group was 388 mg / dL, but the fasting glucose of the compound-administered group of Formula 1 was 240 mg / dL, and the blood glucose was 600 mg / dL after 3 hours of sugar loading of the control group, Blood glucose was 303 mg / dL (FIG. 4).

이러한 결과는 화학식 1의 화합물이 혈중 포도당 농도를 감소시키는 우수한 효과를 나타내므로, 화학식 1의 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 당뇨병의 예방 또는 치료를 위하여 유용하게 사용할 수 있음을 나타내는 것이다.
These results indicate that the compound of Formula 1 exhibits an excellent effect of reducing blood glucose concentration, and therefore, the pharmaceutical composition comprising the compound of Formula 1 may be usefully used for the prevention or treatment of diabetes.

<2-2-3> 4-(1<2-2-3> 4- (1 HH -- 인다졸Indazole -6--6- 일아미노Amino )-) - NN -- 아이소프로필Isopropyl -2-(-2-( 메틸티오Methylthio )피리미딘-5-카르복스아미드의 베타세포 보존 효과Beta cell preservation effect of pyrimidine-5-carboxamide

화학식 1의 화합물을 투여한 군에서 인슐린을 분비하는 베타세포의 형태적 변화를 관찰하기 위하여 췌장의 조직을 인슐린 염색과 H&E 염색을 수행하였다. In order to observe the morphological changes of insulin secreting beta cells in the group administered the compound of Formula 1, the tissues of the pancreas were subjected to insulin staining and H & E staining.

인슐린 염색 결과, 대조군의 췌도는 모양이 파괴되고 인슐린이 염색되지 않은 췌도가 많았으나, 화학식 1의 화합물 투여군의 췌도는 온전한 원형 형태를 나타내었으며, 인슐린 염색된 베타세포가 잘 보존되어 있었다(도 5a). As a result of insulin staining, the pancreatic islets of the control group were destroyed in shape and insulin-stained. ).

또한, H&E 염색 결과, 대조군의 췌도는 원형에서 불규칙형으로 바뀌었고 인슐린 염색 세포가 흩어져 존재하는 것이 관찰되었으며, 염색된 세포의 양이 감소하였으나, 화학식 1의 화합물을 투여한 군에서는 대조군에 비해 인슐린 염색이 뚜렷한 췌도가 온전히 원형 형태로 관찰되었다(도 5b). 구체적으로, 대조군은 4·5·6 등급이 56 %를 차지하고 있었으나, 화학식 1의 화합물 투여군은 4·5·6 등급이 40 %로 감소하였으며, 1 등급은 2 %에서 19 %로 증가되어 있었다(도 7). 이러한 결과는 화학식 1의 화합물이 인슐린을 생산하는 베타세포 보존에 우수한 효과를 가지고 있음을 나타낸다. In addition, as a result of H & E staining, the pancreatic islets of the control group were changed from circular to irregular and scattered insulin staining cells were observed. Clearly stained pancreas was observed in a fully circular form (FIG. 5B). Specifically, the control group occupied 56% of the 4 · 5 · 6 grade, but the compound-administered group of Formula 1 decreased the 40 · 6 · 4 grade to 40%, and the first grade increased from 2% to 19% ( 7). These results indicate that the compound of formula 1 has an excellent effect on preserving beta cells producing insulin.

Claims (11)

하기 화학식 1로 표시되는 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
[화학식 1]
Figure 112011041030015-pat00003

4- (1H - indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound represented by Formula 1 below or a pharmaceutically acceptable salt thereof Pharmaceutical composition for preventing or treating diabetes, comprising.
[Formula 1]
Figure 112011041030015-pat00003

 제1항에 있어서, 상기 조성물은 베타세포 사멸 억제 활성을 갖는 것인 조성물.
The composition of claim 1, wherein the composition has beta cell killing inhibitory activity.
제2항에 있어서, 상기 베타세포 사멸은 포도당/지방산 독성에 의한 것인 조성물.The composition of claim 2, wherein the beta cell killing is due to glucose / fatty acid toxicity. 하기 화학식 1로 표시되는 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능식품.
[화학식 1]
Figure 112011041030015-pat00004

4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof Health functional foods for preventing or improving diabetes.
[Formula 1]
Figure 112011041030015-pat00004

 제4항에 있어서, 상기 건강기능식품은 베타세포 사멸 억제 활성을 갖는 것인 건강기능식품.
The health functional food according to claim 4, wherein the health functional food has beta cell death inhibitory activity.
하기 화학식 1로 표시되는 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 베타세포 사멸 억제용 조성물.
[화학식 1]
Figure 112011041030015-pat00005

4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof Beta cell death inhibiting composition comprising.
[Formula 1]
Figure 112011041030015-pat00005

 하기 화학식 1로 표시되는 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
[화학식 1]
Figure 112011041030015-pat00006

4- (1H - indazol-6-ylamino) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
[Formula 1]
Figure 112011041030015-pat00006

 1) 4-클로로-2-메틸티오-5-피리미딘 카르복실산 에틸 에스테르와 6-아미노인다졸을 염기 존재하에 반응시켜 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르를 제조하는 단계;
2) 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산 에틸 에스테르를 수화반응시켜 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산을 제조하는 단계; 및
3) 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복실산과 이소프로필 아민을 반응시켜 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물을 제조하는 단계를 포함하는, 4-(1H-인다졸-6-일아미노)-N-아이소프로필-2-(메틸티오)피리미딘-5-카르복스아미드 화합물의 제조방법.
1) 4-Chloro-2-methylthio-5-pyrimidine carboxylic acid ethyl ester and 6-aminoindazole were reacted in the presence of a base to give 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -2- ( Preparing methylthio) pyrimidine-5-carboxylic acid ethyl ester;
2) 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylic acid ethyl ester by hydration to 4- ( 1H -indazol-6-ylamino Preparing) -2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxylic acid; And
3) 4- (1 H - indazol-6-ylamino) -2- (methylthio) pyrimidine-5 by reacting the carboxylic acid and isopropylamine 4- (1 H- indazol-6-ylamino ) -N -isopropyl-2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound, comprising the step of preparing a 4- ( 1H -indazol-6-ylamino) -N -isopropyl- Process for the preparation of 2- (methylthio) pyrimidine-5-carboxamide compound.
제8항에 있어서, 상기 단계 1)의 반응은 메탄올, 에탄올, 클로로포름, 메틸렌 클로라이드 및 아세토니트릴로 이루어진 군으로부터 선택된 단독 용매 또는 이들의 혼합 용매하에 수행되는 것인 제조방법.
The method according to claim 8, wherein the reaction of step 1) is carried out in a single solvent or a mixed solvent thereof selected from the group consisting of methanol, ethanol, chloroform, methylene chloride and acetonitrile.
제8항에 있어서, 상기 단계 2)의 반응은 물, 메탄올, 에탄올, 아세토니트릴 및 이소프로판올로 이루어진 군으로부터 선택된 단독 용매 또는 이들의 혼합 용매하에 수행되는 것인 제조방법.The method of claim 8, wherein the reaction of step 2) is carried out in a single solvent or a mixed solvent thereof selected from the group consisting of water, methanol, ethanol, acetonitrile and isopropanol. 제8항에 있어서, 상기 단계 3)의 반응은 클로로포름, 메틸클로라이드, 아세토니트닐 및 테트라하이드로퓨란으로 이루어진 군으로부터 선택된 단독 용매 또는 이들의 혼합 용매하에 수행되는 것인 제조방법.
The process according to claim 8, wherein the reaction of step 3) is carried out in a single solvent or a mixed solvent thereof selected from the group consisting of chloroform, methyl chloride, acetonitrile and tetrahydrofuran.
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