KR101238461B1

KR101238461B1 - 항바이러스성 뉴클레오시드

Info

Publication number: KR101238461B1
Application number: KR1020087016625A
Authority: KR
Inventors: 전병권; 제레미 클라크; 케샵 사르마; 페이유안 왕
Original assignee: 길리어드 파마셋 엘엘씨; 에프. 호프만-라 로슈 아게
Priority date: 2005-12-09
Filing date: 2006-11-29
Publication date: 2013-03-05
Also published as: WO2007065829A1; JP2009518354A; CN101336247A; NO20082934L; HN2006041184A; CA2632626E; TWI394759B; AU2006324098C1; JP4979710B2; AU2006324098A1; CR10136A; KR20080079671A; GT200800095A; CA2632626C; US7754699B2; JP2012097098A; MA30057B1; ECSP088518A; AU2006324098B2; AR056850A1

Abstract

하기 식 Ⅰ을 갖는 화합물(상기에서 R¹은 본 명세서에 정의되어 있다)은 C형 간염 바이러스 NS5b 중합효소 억제제이다. 또한 간염 복제를 억제하기 위한 조성물 및 방법, 및 식 Ⅰ의 화합물을 제조하는 방법이 개시되어 있다.

Description

항바이러스성 뉴클레오시드{ANTIVIRAL NUCLEOSIDES}

본 발명은 C형 간염 바이러스(HCV) RNA 의존성 RNA 바이러스 중합효소의 억제제의 전구약물인 아실화된 뉴클레오시드를 제공한다. 경구 투여되었을 때 이러한 화합물은 위장관으로부터 쉽게 흡수되고 혈액 내에서 모(parent) 뉴클레오시드로 효율적으로 전환된다. 이러한 전구약물은 RNA 의존성 RNA 바이러스 복제의 억제제이고 HCV NS5B 중합효소의 억제제로서, HCV 복제의 억제제로서 그리고 포유류에서 C형 간염 감염 치료에 유용하다.

본 발명은 HCV 복제의 억제제인 뉴클레오시드 전구약물에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 뉴클레오시드가 경구 투여되었을 때, 약물 흡수를 향상시키는 아실화된 피리미딘 뉴클레오시드 화합물의 용도에 관한 것이다.

C형 간염 바이러스는 주요한 건강 문제이고 전세계에 걸쳐 만성 간질환의 주요 원인이다(Boyer, N. et al . J. Hepatol . 2000 32:98-112). HCV에 감염된 환자들은 진행성 간경변 및 그 후의 간세포암의 위험이 있고 따라서 HCV는 간 이식의 주요한 지표이다.

세계보건기구에 따르면, 세계적으로 2억 이상의 감염자가 있고 적어도 3 내지 4백만명이 매년 감염된다. 한번 감염되면 약 20%의 사람들은 바이러스를 없앨 수 있으나, 나머지는 여생 동안 HCV에 감염된 채 살 수 있다. 만성 감염 환자의 10 내지 20 퍼센트는 결국 간을 파괴하는 간경화나 암으로 발전한다. 바이러스 질환은 오염된 혈액 및 혈액 제품에 의해, 오염된 바늘에 의해 비경구적으로 또는 성적으로 그리고 감염된 모친이나 보균자 모친으로부터 그들의 자손으로 수직 감염된다. 재조합 인터페론-α 단독 또는 뉴클레오시드 유사체 리바비린과 병용한 면역치료로 한정되어 있는 HCV 감염에 대한 현재의 치료는 내성이 빠르게 발달하기 때문에 임상적 효과에 한계가 있다. 만성 HCV 감염에 효과적으로 대결할 향상된 치료제에 대한 필요성이 시급하다.

HCV는 플라비바이러스, 페스티바이러스 및 헤파시바이러스 속(C형 간염 바이러스 포함)을 포함하는 바이러스과인 플라비비리대(Flaviviridae)의 멤버로 분류되어 왔다(Rice, C. M., Flaviviridae : The viruses and their replication, in: Fields Virology, Editors: Fields, B. N., Knipe, D. M., and Howley, P. M., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, Pa., Chapter 30, 931-959, 1996). HCV는 약 9.4 kb의 양성 센스 단일 가닥 RNA 게놈을 포함하는 외피 바이러스이다. 바이러스 게놈은 5'-비번역 부위(UTR), 약 3011 아미노산인 다중단백질 전구체를 암호화하는 긴 열린 해독틀(ORF) 및 짧은 3' UTR로 이루어져 있다. 5' UTR은 HCV 게놈의 최고 보존부이고 다중단백질 번역의 개시 및 조절에 중요하다.

HCV의 유전적 분석으로 그들의 DNA 서열에서 30% 보다 큰 차이를 나타내는 6 개의 유전자형을 동정하였다. 각 유전자형은 뉴클레오티드 서열에서 20-25%의 차이를 나타내는 보다 밀접하게 관련된 일련의 아형을 포함한다(Simmonds, P. 2004 J. Gen . Virol . 85:3173-88). 30 개 이상의 아종이 구별되었다. 미국에서 약 70%의 감염자가 타입 1a 및 1b에 감염되어 있다. 타입 1b는 아시아에서 가장 널리 퍼진 아종이다(X. Forns and J. Bukh, Clinics in Liver Disease 1999 3:693-716; J. Bukh et al ., Semin . Liv. Dis . 1995 15:41-63). 불행하게도 타입 1 감염은 타입 2나 3 유전자형보다 치료에 더 내성이 있다(N. N. Zein, Clin . Microbiol . Rev ., 2000 13:223-235).

페스티바이러스 및 헤파시바이러스 ORF의 비구조적 단백질 부분의 유전자의 구조 및 다중단백질 가공은 매우 유사하다. 이러한 양성 가닥 RNA 바이러스는 바이러스 복제를 위해 필요한 모든 바이러스 단백질을 암호화하는 단일한 큰 ORF를 가지고 있다. 이러한 단백질들은 세포 및 바이러스-암호화된 단백질 분해효소 모두에 의해 동시 및 후번역적으로 가공되어 성숙한 바이러스 단백질을 생산하는 다중단백질로 발현된다. 바이러스 게놈 RNA의 복제를 맡는 바이러스 단백질은 카르복시 말단 근처 내에 위치한다. ORF의 2/3는 비구조적(NS) 단백질로 명명된다. 페스티바이러스 및 헤파시바이러스 모두에서, 상기의 성숙한 비구조적(NS) 단백질은 비구조적 단백질 암호화 부위의 아미노 말단으로부터 ORF의 카르복시 말단까지 연속적인 순서로, p7, NS2, NS3, NS4A, NS4B, NS5A 및 NS5B로 이루어져 있다.

페스티바이러스 및 헤파시바이러스의 NS 단백질은 특정 단백질 기능에 특유한 서열 도메인을 공유한다. 예를 들어, 두 그룹 모두에서 바이러스의 NS3 단백질은 세린 단백질 분해효소 및 헬리카제에 특유한 아미노산 서열 모티프를 갖는다(Gorbalenya et al . Nature 1988 333:22; Bazan and Fletterick Virology 1989 171:637-639; Gorbalenya et al . Nucleic Acid Res . 1989 17.3889-3897). 유사하게, 페스티바이러스 및 헤파시바이러스의 NS5B 단백질은 RNA-지정 RNA 중합효소에 특유한 모티프를 갖는다(Koonin, E. V. and Dolja, V. V. Crit . Rev . Biochem . Molec . Biol . 1993 28:375-430).

바이러스의 생활주기에서 페스티바이러스 및 헤파시바이러스의 NS 단백질의 실제 역할 및 기능은 매우 유사하다. 두 경우 모두, NS3 세린 단백질 분해효소는 ORF 내에 본래 위치의 하류의 다중단백질 전구체의 모든 단백질 분해 가공을 맡는다(Wiskerchen and Collett Virology 1991 184:341-350; Bartenschlager et al . J. Virol. 1993 67:3835-3844; Eckart et al . Biochem . Biophys. Res . Comm . 1993 192:399-406; Grakoui et al . J. Virol . 1993 67:2832-2843; Grakoui et al . Proc . Natl . Acad . Sci . USA 1993 90:10583-10587; Ilijikata et al . J. Virol . 1993 67:4665-4675; Tome et al . J. Virol . 1993 67:4017-4026). 두 경우 모두, NS4A 단백질은 NS3 세린 단백질 분해효소와 함께 보조인자로 작용한다(Bartenschlager et al . J. Virol . 1994 68:5045-5055; Failla et al . J. Virol . 1994 68: 3753-3760; Xu et al . J. Virol . 1997 71:53 12-5322). 두 바이러스 모두 NS3 단백질은 또한 헬리카제로서 작용한다(Kim et al . Biochem . Biophys . Res . Comm . 1995 215: 160-166; Jin and Peterson Arch . Biochem . Biophys . 1995, 323:47-53; Warrener and Collett J. Virol . 1995 69:1720-1726). 마지막으로, 페스티바이러스 및 헤파시바이러스의 NS5B 단백질은 예상되는 RNA-지정 RNA 중합효소 활성을 가지고 있다(Behrens et al. EMBO 1996 15:12-22; Lechmann et al . J. Virol . 1997 71:8416- 8428; Yuan et al . Biochem . Biophys . Res . Comm . 1997 232:231-235; Hagedorn, PCT WO 97/12033; Zhong et al . J. Virol . 1998 72:9365-9369).

현재 HCV 감염 치료에 사용가능한 제한된 수의 승인된 치료방법이 있다. HCV 치료 및 HCV NS5B 중합효소 억제를 위한 신규 및 기존의 치료적 접근방법은 다음에 의해 검토되었다: R. G. Gish, Sem . Liver . Dis., 1999 19:5; Di Besceglie, A. M. and Bacon, B. R., Scientific American, October: 1999 80-85; G. Lake-Bakaar, Current and Future Therapy for Chronic Hepatitis C Virus Liver Disease, Curr . Drug Targ . Infect Dis . 2003 3(3):247-253; P. Hoffmann et al ., Recent patents on experimental therapy for hepatitis C virus infection(1999-2002), Exp . Opin . Ther . Patents 2003 13(11):1707-1723; F. F. Poordad et al . Developments in Hepatitis C therapy during 2000-2002, Exp . Opin . Emerging Drugs 2003 8(1):9-25; M. P. Walker et al ., Promising Candidates for the treatment of chronic hepatitis C, Exp. Opin . Investig . Drugs 2003 12(8):1269-1280; S.-L. Tan et al ., Hepatitis C Therapeutics: Current Status and Emerging Strategies, Nature Rev . Drug Discov . 2002 1:867-881; R. De Francesco et al . Approaching a new era for hepatitis C virus therapy: inhibitors of the NS3-4A serine protease and the NS5B RNA-dependent RNA polymerase, Antiviral Res . 2003 58:1-16; Q. M. Wang et al . Hepatitis C virus encoded proteins: targets for antiviral therapy, Drugs of the Future 2000 25(9):933-8-944; J. A. Wu and Z. Hong, Targeting NS5B-Dependent RNA Polymerase for Anti-HCV Chemotherapy Cur . Drug Targ .- Inf . Dis .2003 3:207-219. 상기 검토들은 다양한 단계의 개발 과정에서 현재 화합물을 인용한다. 동일하거나 서로 다른 표적을 향하는, 2 또는 3 개 약품으로 실시하는 병용요법이 바이러스 내성 균주의 발달을 피하거나 늦추기 위한 표준 치료방법이 되어왔고, 상기 검토에 개시된 화합물은 본 발명의 화합물로 실시하는 병용요법에 사용될 수 있고 이들 검토는 전체가 참조로 본 명세서에 포함된다.

리바비린(1a; 1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-디히드록시-5-히드록시메틸-테트라히드로푸란-2-일)-1H-[1,2,4]트리아졸-3-카르복시산 아미드; VIRAZOLE^?)은 합성이고 비-인터페론-유도의 광범위한 항바이러스 뉴클레오시드 유사체이다. 리바비린은 플라비비리대를 포함하여 몇 가지 DNA 및 RNA 바이러스에 대해 시험관내 활성을 가지고 있다(Gary L. Davis, Gastroenterology 2000 118:S104-S114). 단일요법에서 리바비린은 혈청 아미노 전이효소 레벨을 40%의 환자에서 정상으로 감소시키지만 HCV-RNA의 혈청 레벨을 낮추지는 않는다. 리바비린은 또한 상당한 독성을 나타내고 빈혈을 유발하는 것으로 알려져 있다. 리바비린은 HCV에 대한 단일요법으로 승인되지는 않지만 인터페론 α-2a 및 인터페론 α-2b와 같이 실시하는 병용요법에는 승인된다.

인터페론(INF)은 거의 10년 동안 만성 간염의 치료에 이용되어 왔다. IFN은 바이러스 감염에 반응하여 면역세포에 의해 생산되는 당단백질이다. 2 개의 다른 형태의 인터페론이 인식된다: 타입 1은 몇 개의 인터페론 α 및 1 개의 인터페론 β를 포함하고, 타입 2는 인터페론 γ를 포함한다. 타입 1 인터페론은 주로 감염된 세포에 의해 생산되어 드 노보(de novo) 감염으로부터 주변 세포를 보호한다. IFN은 HCV를 포함하는 많은 바이러스의 바이러스 복제를 억제하고, C형 간염 감염에 대한 단독 치료방법으로 사용되면 혈청 HCV-RNA를 검출 불가능한 레벨로 억제한다. 추가로, IFN은 혈청 아미노 전이효소 레벨을 정상화한다. 불행하게도, IFN의 효과는 일시적이다. 치료를 중단하면 70% 재발율이 나타나고 단 10-15%만 정상 혈청 알라닌 전이효소와 함께 지속적인 바이러스학적 반응을 나타낸다(L.-B. Davis, 이전과 동일).

초기 IFN 치료의 한 가지 한계는 혈액으로부터 단백질이 빨리 제거되는 것이었다. 폴리에틸렌글리콜(PEG)로 IFN을 화학적으로 유도하는 것은 실질적으로 향상된 약력학적 특성을 갖는 단백질을 만들어냈다. PEGASYS^?은 인터페론 α-2a와 40 kD의 분지된 모노-메톡시 PEG의 콘쥬게이트이고, PEG-INTRON^?은 인터페론 α-2b와 12 kD 모노-메톡시 PEG의 콘쥬게이트이다(B. A. Luxon et al., Clin . Therap . 2002 24(9):13631383; A. Kozlowski and J. M. Harris, J. Control . Release, 2001 72:217-224).

인터페론 α-2a 및 인터페론 α-2b는 현재 HCV 치료용 단일요법으로 승인되었다. ROFERON-A^?(Roche)은 인터페론 α-2a의 재조합 형태이다. PEGASYS^?(Roche)은 인터페론 α-2a의 페길화된(즉, 폴리에틸렌글리콜 변형된) 형태이다. INTRON-A^?(Schering Corporation)는 인터페론 α-2b의 재조합 형태이고, PEG-INTRON^?(Schering Corporation)은 인터페론 α-2b의 페길화된 형태이다.

인터페론 α 뿐만 아니라 인터페론 β, γ, τ 및 ω의 다른 형태는 현재 HCV 치료를 위해 임상 개발 중에 있다. 예를 들어, InterMune의 INFERGEN^?(인터페론 알파콘-1), Viragen의 OMNIFERON^?(천연 인터페론), Human Genome Sciences의 ALBUFERON^?, Ares-Serono의 REBIF^?(인터페론 β-1a), BioMedicine의 오메가 인터페론(Omega Interferon), Amarillo Biosciences의 오랄 인터페론 알파(Oral Interferon Alpha) 및 InterMune의 인터페론 γ, 인터페론 τ 및 인터페론 γ-1b가 개발 중에 있다.

리바비린 및 인터페론 α로 실시하는 HCV 병용요법은 현재 최적의 치료를 나타낸다. 리바비린 및 PEG-IFN(후술)을 병용하면 54-56%의 환자에서 지속적인 바이러스 반응을 나타낸다. SVR은 타입 2 및 3 HCV에 대해 80%에 이른다(Walker, 전술). 불행하게도, 병용은 또한 임상 실험을 어렵게 하는 부작용을 발생시킨다. 우울, 감기-유사 증상 및 피부 반응은 피하 IFN-α와 관련되어 있고 용혈성 빈혈은 리바비린으로 실시하는 지속적인 치료와 관련되어 있다.

C형 간염 바이러스 치료를 위해 현재 전임상 또는 임상 개발 중에 있는 다른 거대분자 화합물은 다음을 포함한다: Schering-Plough의 Interleukin-10, Intemeuron의 IP-SO1, Vertex의 Merimebodib(VX-497), RPI의 HEPTAZYME^?, Idun Pharma의 IDN-6556, XTL의 XTL-002, Chiron의 HCV/MFS9, NABI의 CIVACIR^?(hepatitis C Immune Globulin), SciClone의 ZADAXIN^?(티모신 α-l), SciClone의 티모신 플러스 페길화된 인터페론, E2를 표적화하는 치료용 백신인 CEPLENE^?, Intercell의 치료용 백신, Epimmune/Genencor의 치료용 백신, Merix의 치료용 백신, Tripep의 치료용 백신 Chron-VacC.

다른 거대분자 접근방법은 HCV RNA에서 표적화된 리보자임을 포함한다. 리보자임은 RNA의 서열-특이적인 절단을 촉진하는 엔도뉴클라제 활성을 갖는 짧고 천연적으로 존재하는 분자이다. 대안적인 접근방법은 RNA에 결합하고 RNaseH 매개된 절단을 자극하는 안티센스 올리고뉴클레오티드를 사용하는 것이다.

항-HCV 치료에 있어서 약물 개발을 위한 수많은 잠재적인 분자 표적이 현재 동정되었으며 이는 NS2-NS3 자가 단백질 분해효소, N3 단백질 분해효소, N3 헬리카제 및 NS5B 중합효소를 포함하나 이에 한정되지는 않는다. RNA 의존성 RNA 중합효소는 단일 가닥, 양성 센스, RNA 게놈의 복제에 절대적으로 필요하고 효소는 의약 화학자들 사이에서 상당히 관심을 끌어왔다.

NS5B 중합효소의 뉴클레오시드 억제제는 사슬 종결을 가져오는 비-천연 기질이나 중합효소에 결합하는 뉴클레오티드와 경쟁하는 경쟁적 억제제 중 하나로 작용할 수 있다. 사슬 종결자로 작용하기 위해서 뉴클레오시드 유사체는 세포에 의해 흡수되고, 중합효소 뉴클레오티드 결합 부위에 대해 경쟁하기 위해 생체 내에서 트리포스페이트로 전환되어야 한다. 이러한 트리포스페이트로의 전환은 일반적으로 세포의 키나아제에 의해 매개되는데, 키나아제는 잠재적인 뉴클레오시드 중합효소 억제제에게 추가적인 구조적 필요조건을 부여한다. 불행하게도, 이는 HCV 복제의 억제제로서 뉴클레오시드의 직접적 평가를 제 위치 인산화가 가능한 세포 기반 분석으로만 제한한다.

B= 아데닌, 티미딘, 우라실, 시티딘, 구아닌 및 하이포크산틴

2001년 11월 29일에 공개된 WO 01/90121에서, J.-P. Sommadossi 및 P. Lacolla는 식 2 및 3의 1'-알킬- 및 2'-알킬 뉴클레오시드의 항-HCV 중합효소 활성을 개시 및 예시한다. 2001년 12월 6일 공개된 WO 01/92282에서 J.-P. Sommadossi 및 P. Lacolla는 식 2 및 3의 1'-알킬 및 2'-알킬 뉴클레오시드로 플라비바이러스 및 페스티바이러스를 치료하는 것을 개시 및 예시한다. 2003년 4월 3일에 공개된 WO 03/026675에서, G. Gosselin은 플라비바이러스 및 페스티바이러스 치료용 4'-알킬 뉴클레오시드를 개시한다.

2004년 1월 8일 공개된 WO 20041003000에서, J.-P. Sommadossi 등은 1'-, 2'-, 3'- 및 4'-치환된 β-D 및 β-L 뉴클레오시드의 2'- 및 3'- 전구약물을 개시한다. 2004년 1월 8일에 공개된 WO 2004/002422에서, 플라비비리대 감염 치료용 2'-C-메틸-3'-O-발린 에스테르 리보푸란실 시티딘을 개시한다. Idenix는 관련된 화합물 NM283에 대한 임상 실험을 보고했는데, 이는 시티딘 유사체 2의 발린 에스테르 5라 여겨진다(B=시토신). 2004년 1월 8일 공개된 WO 2004/002999에서, J.-P. Sommadossi 등은 HCV 감염을 포함하는 플라비바이러스 감염 치료용 1', 2', 3', 또는 4' 분지된 뉴클레오시드의 일련의 2' 또는 3' 전구약물을 개시한다.

2004년 6월 3일에 공개된 WO 2004/046331에서, J. P. Sommadossi 등은 2'-분지된 뉴클레오시드 및 플라비비리대 돌연변이를 개시한다. 2003년 4월 3일에 공개된 WO 03/026589에서, G. Gosselin 등은 4'-변형된 뉴클레오시드를 사용하여 C형 간염 바이러스를 치료하는 방법을 개시한다. 2005년 2월 3일에 공개된 WO 20051009418에서, R. Storer 등은 HCV를 포함하는 플라비비리대에 의해 일어나는 질환 치료용 퓨린 뉴클레오시드 유사체를 개시한다.

다른 특허 출원은 C형 간염 바이러스 감염을 치료하기 위한 특정 뉴클레오시드 유사체의 용도를 개시한다. 2001년 5월 10일에 공개된 WO 01/32153은 바이러스 질환을 치료하기 위한 뉴클레오시드 유도체를 개시한다. 2001년 8월 23일에 공개된 WO 01/60315에서, H. Ismaili 등은 뉴클레오시드 화합물을 이용한 플라비바이러스 감염의 치료 또는 예방방법을 개시한다. 2002년 3월 7일에 공개된 WO 02/18404에서, R. Devos 등은 HCV 바이러스 치료용 4'-치환된 뉴클레오티드를 개시한다. 2001년 10월 25일에 공개된 WO 01/79246에서, K. A. Watanabe는 바이러스 질환 치료용 2'- 또는 3'-히드록시메틸 뉴클레오시드에 대해 개시한다. 2002년 4월 25일에 공개된 WO 02/32920 및 2002년 6월 20일에 공개된 WO 02/48165에서 L. Stuyver 등은 바이러스 질환 치료용 뉴클레오시드 화합물을 개시한다.

2003년 12월 24일에 공개된 WO 03/105770에서 B. Bhat 등은 HCV 감염 치료에 유용한 연속적인 카르보시클릭 뉴클레오시드 유도체를 개시한다. 2003년 1월 22일에 공개된 WO 2004/007512에서 B. Bhat 등은 RNA 의존성 RNA 바이러스 중합효소를 억제하는 뉴클레오시드 화합물을 개시한다. 이 문헌에 개시된 뉴클레오시드는 주로 2'-메틸-2'-히드록시 치환된 뉴클레오시드이다. 2002년 7월 25일에 공개된 WO 2002/057425에서 S. S. Carroll 등은 RNA 의존성 바이러스 중합효소의 억제제인 뉴클레오시드 유도체 및 HCV 감염 치료 방법에 대해 개시한다. 2002년 7월 25일에 공개된 WO 02/057287에서 S. S. Carroll 등은 관련된 2α-메틸 및 2β-메틸리보스 유도체를 개시하는데, 여기서 염기는 선택적으로 치환된 7H-피롤로[2,3-d]피리미딘 라디칼 6이다. 동일한 출원은 3β-메틸 뉴클레오시드의 한 예를 개시한다. S.S. Carroll et al .(J. Biol . Chem . 2003 278(14):11979-11984)은 2'-O-메틸시티딘에 의한 HCV 중합효소의 억제에 대해 개시한다(6a). 2004년 1월 29일에 공개된 WO 2004/009020에서 D. B. Olsen 등은 RNA 의존성 RNA 바이러스 중합효소의 억제제로서 일련의 티오뉴클레오시드 유도체를 개시한다.

"2'-플루오로뉴클레오시드"를 명칭으로 하는 에모리 대학의 PCT 공개번호 WO 99/43691은 HCV 치료용 특정 2'-플루오로뉴클레오시드의 용도에 대해 개시한다. "2'-플루오로뉴클레오시드"를 명칭으로 하는 에모리 대학의 미국 특허번호 6,348,587은 B형 간염, HCV, HIV 및 비정상적 세포 증식을 치료하는데 유용한 2'-플루오로뉴클레오시드의 패밀리를 개시한다. 양쪽 모두 2'플루오로 치환기의 구조가 개시되어 있다.

Eldrup 등(Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16^th International Conference on Antiviral Research (Apr. 27, 2003, Savannah, Ga.))은 HCV 억제용 2'-변형된 뉴클레오시드의 구조 활성 관계를 개시한다.

Bhat 등(Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16^th International Conference on Antiviral Research (Apr. 27, 2003, Savannah, Ga.); p A75)은 HCV RNA 복제의 가능한 억제제로서 뉴클레오시드 유사체의 합성 및 약력학적 특성에 대해 개시한다. 저자는 2'-변형된 뉴클레오시드가 세포 기반 레플리콘 분석에서 강력한 억제 활성을 나타낸다고 보고한다.

Olsen 등(Oral Session V, Hepatitis C Virus, Flaviviridae; 16^th International Conference on Antiviral Research (Apr. 27, 2003, Savannah, Ga.) p A76)은 또한 2'-변형된 뉴클레오시드의 HCV RNA 복제에 대한 효과를 개시한다.

HIV 역전사효소의 비-뉴클레오시드 알로스테릭(allosteric) 억제제는 단독, 및 뉴클레오시드 억제제 및 단백질 분해효소 억제제와 병용하였을 때의 치료효과가 입증되었다. 몇 가지 부류의 비-뉴클레오시드 HCV NS5B 억제제가 개시되었고 현재 다음을 포함하는 다양한 개발 단계에 있다: 벤즈이미다졸(H. Hashimoto et al . WO 01/47833, H. Hashimoto et al . WO 03/000254, P. L. Beaulieu et al . WO 03/020240 A2; P. L. Beaulieu et al . US 6,448,281 B1; P. L. Beaulieu et al . WO 03/007945 A1); 인돌(P. L. Beaulieu et al . WO 03/0010141 A2); 벤조티아디아진, 예, 7(D. Dhanak et al . WO 01/85172 A1; D. Dhanak et al . WO 03/037262 A2; K. J. Duffy et al . WO 03/099801 A1, D.Chai et al . WO 20041052312, D.Chai et al . WO 20041052313, D.Chai et al . WO 02/098424, J. K. Pratt et al . WO 2004/041818 A1; J. K. Pratt et al . WO 2004/087577 A1), 티오펜, 예, 8(C. K. Chan et al . WO 02/100851);

벤조티오펜(D. C. Young and T. R. Bailey WO 00/18231); b-케토피루베이트(S. Attamura et al . US 6,492,423 B1, A. Attamura et al . WO 00/06529); 피리미딘(C. Gardelli et al . WO 02/06246 A1); 피리미딘디온(T. R. Bailey and D. C. Young WO 00/13708); 트리아진(K.-H. Chung et al . WO 02/079187 A1); 로다닌 유도 체(T. R. Bailey and D. C. Young WO 00/10573, J. C. Jean et al . WO 01/77091 A2); 2,4-디옥소피란(R. A. Love et al . EP 256628 A2); 페닐알라닌 유도체(M. Wang et al . J. Biol . Chem . 2003 278:2489-2495).

NS3 단백질 분해효소는 새로운 항-HCV 치료 개발을 위한 주요 표적으로 드러났다. 1998년 5월 28일에 공개된 WO 98/22496에서 M. R. Attwood 등은 단백질 분해효소의 기작 기반 활성 부위 억제제를 개시한다(M.R. Attwood et al ., Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1999 10:259-273; M.R. Attwood et al ., Preparation and use of amino acid derivatives as anti-viral agents, German Patent Pub. DE 19914474). 1998년 4월 30일에 공개된 WO 98/17679에서 R. D. Tung 등은 NS3 단백질 분해효소에 대한 기작 기반 펩티드 억제제를 개시한다.

1999년 2월 18일에 공개된 WO 99/07734 및 1999년 8월 9일에 공개된 WO 00/09543에서 M Llinas-Brunet 등은 단백질 분해효소의 펩티드 억제제를 개시한다. 2000년 10월 12일에 공개된 WO 00/59929에서 Y. S. Tsantrizos 등은 HCV NS3 단백질 분해효소의 강력한 억제제인 매크로시클릭 트리펩티드를 개시한다. Boehringer-Ingleheim의 일련의 관련 특허는 관련된 단백질 분해효소 억제제를 개시하고, 트리펩티드 유도체 BILN 2061의 동정으로 이끌었다(M. Llinas-Brunet et al . Biorg . Med . Chem . Lett . 2000 10(20):2267-70; J. Med Chem .2004 47(26):6584-94; J. Med . Chem . 2004 47(7):1605-1608; Angew . Chem . Int . Ed. Eng. 2003 42(12):1356-60).

Bristol-Myers Squibb에 의해 동정된 다른 트리펩티드 억제제는 특히 2003년 12월 4일에 공개된 WO 03/099274, 2004년 4월 22일에 공개된 WO 2004/032827, 2003년 7월 3일에 공개된 WO 03/053349, 2005년 5월 26일에 공개된 WO 2005/046712 및 2005년 6월 9일에 공개된 WO 2005/051410 중에 개시되었다. 2004년 8월 26일에 공개된 WO 2004/072234 및 2004년 11월 4일에 공개된 WO 2004/093798에 트리펩티드 단백질 분해효소 억제제가 Enanta Pharmaceutical에 의해 추가로 개시되었다. 2005년 4월 28일에 공개된 WO 2005/037214에서 M. Blatt 등은 HCV NS3 단백질 분해효소를 억제하는 또 다른 트리펩티드 유도체를 개시한다. 2005년 4월 7일에 공개된 WO 2005/030796에서 S. Venkatraman 등은 HCV NS3 세린 단백질 분해효소의 매크로시클릭 억제제를 개시한다. 2005년 6월 30일에 공개된 WO 2005/058821에서 F. Velazquez 등은 HCV NS3/NS4a 세린 단백질 분해효소의 억제제를 개시한다. 2002년 6월 20일에 공개된 WO 02/48172에서 Z. Zhu는 NS3 단백질 분해효소의 억제제로서 디아릴 펩티드를 개시한다. 2002년 1월 31일에 공개된 WO 02/08187 및 WO 02/08256 모두에서 A. Saksena 등은 HCV NS3 단백질 분해효소의 펩티드 억제제를 개시한다. 2002년 1월 31일에 공개된 WO 02/08251에서 M. Lim-Wilby 등은 NS3 단백질 분해효소의 펩티드 억제제를 개시한다. 1999년 12월 21일에 공개된 미국 특허 6,004,933에서, L. W. Spruce 등은 HCV 엔도펩티다제를 포함하는 시스테인 단백질 분해효소를 억제하는 헤테로시클릭 펩티드 유도체를 개시한다.

RD3-4082 및 RD3-4078(전자는 아미드가 14 개 탄소 체인으로 치환되었고 후자는 파라-페녹시페닐기를 가공함)을 포함하는 2,4,6-트리히드록시-3-니트로-벤즈아미드 유도체와 같은 비-기질 기반 NS3 단백질 분해효소 억제제(Sudo K. et al ., BBRC 1997 238:643-647; Sudo K. et al . Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1998 9:186) 또한 연구되고 있다.

페난트렌퀴논인 SCH 68631은 HCV 단백질 분해효소 억제제이다(Chu M. et al. Tetrahedron Lett . 1996 37:7229-7232). 동일한 저자에 의한 다른 예시에서, 곰팡이 페니실리움 그리세오풀붐(Penicillium griseofulvum)으로부터 분리된 SCH 351633이 단백질 분해효소로 동정되었다(Chu M. et al ., Bioorg . Med . Chem. Lett . 1999 9:1949-1952). HCV NS3 단백질 분해효소에 대한 나노몰 효과는 거대분자 에글린 c(eglin c)에 기반을 둔 선택적인 억제제의 디자인에 의해 달성되었다. 거머리로부터 분리된 에글린 c는 S. 그리세우스 단백질 분해효소 A 및 B, α-키모트립신, 키마제 및 섭틸리신과 같은 몇 가지 세린 단백질 분해효소의 강력한 억제제이다(Qasim M. A. et al ., Biochemistry 1997 36:1598-1607).

NS3/4A 융합 단백질 및 NS5A/5B를 기질로 한 역상 HPLC 분석에서 관련된 억제를 나타내는 티아졸리딘 유도체(Sudo K. et al . Antiviral Research 1996 32:9-18), 특히 화합물 RD-1-6250은 긴 알킬 체인인 RD4 6205 및 RD4 6193으로 치환된, 융합된 시나모일 모이어티를 갖는다. 티아졸리딘 및 벤즈아닐리드는 N. Kakiuchi 등(FEBS Let. 1998 421:217-220) 및 N. Takeshita 등(Anal . Biochem. 1997 247:242-246)에 의해 동정되었다.

HCV의 NS3 세린 단백질 분해효소 억제제로서 이미다졸리디논은 2002년 1월 31일에 공개된 Schering Corporation의 WO 02/08198 및 2002년 6월 20일에 공개된 Bristol Myers Squibb의 WO 02/48157에 개시되어 있다. 2002년 6월 20일에 공개된 WO 02/48116에서 P. Glunz 등은 NS3 단백질 분해효소의 피리미디논 억제제를 개시한다.

항-HCV에 대한 다른 효소 표적은 HCV IRES 부위(Internal Ribosomal Entry Site) 및 HCV 헬리카제를 포함한다. IRES 억제제는 Immusol, Rigel Pharmaceuticals(R803) 및 Anady(ANA 245 및 ANA 246)에 의해 보고되었다. Vertex는 HCV 헬리카제 억제제를 개시하였다.

내성이 있는 돌연변이 균주를 억제할 수 있는 병용치료는 항-바이러스 화학치료에 대한 훌륭한 접근방법으로 확립되었다. 본 명세서에 개시된 뉴클레오시드 억제제는 다른 뉴클레오시드 HCV 중합효소 억제제, 비-뉴클레오시드 HCV 중합효소 억제제 및 HCV 단백질 분해효소 억제제와 함께 병용될 수 있다. 다른 종류의 HCV 약물, 예를 들어 바이러스 도입 억제제, 헬리카제 억제제, IRES 억제제, 리보자임 및 안티센스 올리고뉴클레오티드가 나타나 개발되고 있는데 이들은 또한 병용 치료를 위한 우수한 후보자일 것이다. 인터페론 유도체는 이미 리바비린 및 인터페론과 성공적으로 병용되어 왔고 화학적으로 변형된 인터페론은 본 명세서에 개시된 뉴클레오시드와 병용되어 사용될 것이다.

뉴클레오시드 유도체는 종종 강력한 항-바이러스(예: HIV, HCV, 헤르페스 심플렉스, CMV) 및 항암 화학치료제이다. 불행히도 그들의 실용성은 종종 두 가지 인자에 의해 제한된다. 먼저, 좋지 않은 약력학적 특성은 종종 소화관으로부터의 뉴클레오시드의 흡수 및 뉴클레오시드 유도체의 세포 내 농도를 제한하고, 두번째로 차선의 물리적 특성이 활성 성분의 전달을 증진시키기 위해 사용될 수 있는 제 형의 선택을 제한한다.

Albert는 내부의 생물학적 활성은 없지만 활성 약물로 대사 변형을 할 수 있는 화합물을 개시하기 위해 전구약물이라는 용어를 도입했다(A. Albert, Selective Toxicity, Chapman and Hall, London, 1951). 전구약물은 최근에 검토되었다(P. Ettmayer et al., J. Med Chem. 2004 47(10):2393-2404; K. Beaumont et al., Curr. Drug Metab. 2003 4:461-485; H. Bundgaard, Design of Prodrugs: Bioreversible derivatives for various functional groups and chemical entities in Design of Prodrugs, H. Bundgaard(ed) Elsevier Science Publishers, Amersterdam 1985; G. M. Pauletti et al. Adv. Drug Deliv. Rev. 1997 27:235-256;R. J. Jones and N. Bischofberger, Antiviral Res. 1995 27; 1-15 and C. R. Wagner et al., Med. Res. Rev. 2000 20:417-45). 대사 변환이 특정 효소, 종종 하이드롤라제에 의해 촉진될 수 있는 반면, 상기 활성 화합물들은 비-특이적인 화학적 과정에 의해서도 재생될 수 있다.

약학적으로 허용가능한 전구약물은 본 발명의 화합물을 형성하기 위해 숙주 내에서, 예를 들어 가수분해되거나 산화되는 것과 같이 대사되는 화합물을 일컫는다. 생물학적 전환(bioconversion)은 독성학적으로 불리한 점(liabilities)을 갖는 절편을 형성하는 것을 피해야 한다. 전구약물의 전형적인 예는 활성 화합물의 기능적 모이어티와 관련된, 생물학적으로 민감한 보호기를 갖는 화합물을 포함한다. 당 모이어티에서 히드록시기의 알킬화, 아실화 또는 다른 친지성 변형은 전구 뉴클레오티드의 디자인에 사용되어 왔다. 이러한 전구 뉴클레오티드는 활성 화합 물을 생성하기 위해 생체 내에서 가수분해되거나 탈알킬화될 수 있다.

경구를 통한 생체이용률을 제한하는 요소는 소화관 및 소화관 벽 및 간에 의한 제1 통과 분비(first-pass excretion)로부터 흡수된다. 소화관을 통한 세포간 흡수의 최적화는 0보다 더 큰 D_(7.4)를 요구한다. 그러나 분배계수의 최적화가 성공을 보장하지는 않는다. 전구약물은 장세포 내에서 활성인 유출 운송자(efflux transporter)를 피해야 할 것이다. 장세포에서 세포내 대사는 소화관강(gut lumen)으로 돌아가는 유출 펌프에 의해 대사물질의 수동 전달 또는 능동 전달을 초래할 수 있다. 전구약물은 또한 표적 세포 또는 수용체에 도달하기 전에 혈액 내에서 원치 않는 생물학적 변환(biotransformation)이 일어나지 않아야 한다.

때때로 분자 내에 존재하는 화학적 기능성에 기반을 두고 추정되는 전구약물이 이론적으로 디자인될 수는 있으나. 활성 화합물의 화학적 변형으로 인하여 모 화합물에 없는 바람직하지 않은 물리적, 화학적 및 생물학적 특성을 나타낼 수 있는 완전히 새로운 물질이 생성될 수 있다. 다중 경로에 의해 복수의 대사물질이 생성되는 경우에는 대사물질을 동정하도록 하는 허가 규정 요건이 걸림돌이 될 수 있다. 그러므로, 전구약물의 동정은 확실하지 않고 도전해야 할 과제로 남아 있다. 더욱이, 잠재적인 전구약물의 약력학적 특성을 평가하는 것은 어렵고 비용이 드는 시도이다. 동물모델로부터 나온 약력학적 결과는 인간에 대해 추정하기 어려울 수 있다.

본 발명의 목적은 C형 간염 바이러스로 감염된 숙주의 치료를 위한 새로운 화합물, 방법 및 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 4-아미노-1-((2R,3R,4R,5R)-3-플루오로-4-히드록시-5-히드록시메틸-3-메틸-테트라시드로-푸란-2-일)-1H-피리미딘-2-온((2R)2'-데옥시-2'-메틸-2'-플루오로-시티딘으로도 일컬어진다)의 신규한 디-아실 유도체에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 식 Ⅰ에 따른 구조를 갖는다.

상기에서:

R¹ 은 C₂ _-5 비분지 또는 분지된 알킬, C₂ _-5비분지 또는 분지된 알케닐, C₂ _-5비분지 또는 분지된 알키닐, C₂ _-5 저급 할로알킬, C₃ _-6 시클로알킬 및 C₂ _-4알콕시; 및

상기 화합물의 수화물, 용매화물 및 산 부가 염.

본 발명의 화합물은 HCV에 의해 매개된 질환을 치료하는데 유용하다.

본 발명은 본 발명의 화합물 및 상기 화합물을 함유하는 약학적 조성물로 HCV를 치료하는 방법을 추가로 포함한다.

본 발명의 하나의 구현예에서, 식 Ⅰ에 따른 화합물을 제공하고 여기서 R¹ 은 본 명세서의 상기에 정의된 바와 같다.

본 발명의 다른 구현예에서, 식 Ⅰ에 따른 화합물을 제공하고 여기서 R¹ 은 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸 또는 이소-부틸이다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 식 Ⅰ에 따른 화합물을 제공하고 여기서 R¹ 은 에틸 또는 이소-프로필이다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 식 Ⅰ에 따른 화합물을 제공하고 여기서 R¹ 은 이소-프로필이고 상기 화합물은 염산염 또는 황산염이다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 식 Ⅰ에 따른 화합물을 제공하고 여기서 R¹은 이소-프로필이고 상기 화합물은 염산염이다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 식 Ⅰ에 따른 화합물을 제공하고 여기서 R¹ 은 에톡시, n-프로폭시 또는 이소-프로폭시이다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 치료용, 특히 HCV 바이러스 매개된 질환 치료용으로 식 Ⅰ에 따른 화합물을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, HCV 바이러스에 의해 매개된 질환 치료용 약제의 제조를 위해 식 Ⅰ에 따른 화합물의 용도를 제공한다.

식 Ⅰ에 따른 화합물은 특히 치료적 유효량, 바람직하게는 1일 0.1 내지 10 g의 용량, 보다 바람직하게는 1일 0.5 내지 7 g의 용량 또는 보다 더 바람직하게는 1일 1.0 내지 6.0 g의 용량으로 약제를 필요로 하는 환자 투여용 약제의 제조에 사용될 수 있다.

식 Ⅰ에 따른 화합물은 인터페론, 화학적으로 유도된 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 인자 또는 콜로니 자극 인자와 같은 하나 이상의 면역계 조절제 및/또는 HCV 단백질 분해효소 억제제, 다른 뉴클레오시드 HCV 중합효소 억제제, 비-뉴클레오시드 HCV 중합효소 억제제, HCV 헬리카제 억제제, HCV 프리마제 억제제 또는 HCV 융합 억제제와 같이 HCV의 복제를 억제하는 하나 이상의 항바이러스제의 치료적 유효량을 추가로 포함하는 약제의 제조에 추가로 사용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 명세서의 상기에 개시된 바와 같이 식 Ⅰ에 따른 화합물의 치료적 유효량을 필요로 하는 환자에 투여하는 것을 포함하는 HCV 바이러스에 의해 매개되는 질환을 치료하기 위한 방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 명세서의 상기에 개시된 바와 같이 식 Ⅰ에 따른 화합물의 1일 0.1 내지 10 g 용량을 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 포함하는 HCV 바이러스에 의해 매개되는 질환을 치료하기 위한 방법을 제공한다.

또 다른 구현예에서, 상기 용량은 1일 0.5 내지 7 g이고 또 다른 구현예에서, 용량은 1일 1.0 내지 6.0 g이다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 명세서의 상기에 개시된 바와 같이 식 Ⅰ에 따른 화합물의 치료적 유효량 및 하나 이상의 면역계 조절제 및/또는 HCV의 복제를 억제하는 하나 이상의 항바이러스제의 치료적 유효량을 필요로 하는 환자에게 동시투여하는 것을 포함하는 HCV에 의해 매개되는 질환을 치료하기 위한 방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 명세서의 상기에 개시된 바와 같이 식 Ⅰ에 따른 화합물의 치료적 유효량 및 하나 이상의 면역계 조절제의 치료적 유효량을 필요로 하는 환자에게 동시투여하는 것을 포함하는 HCV에 의해 매개되는 질환을 치료하기 위한 방법을 제공하고 여기서 면역계 조절제는 인터페론, 인터루킨, 종양 괴사 인자 또는 콜로니 자극 인자이다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 명세서의 상기에 개시된 바와 같이 식 Ⅰ에 따른 화합물의 치료적 유효량 및 하나 이상의 면역계 조절제의 치료적 유효량을 필요로 하는 환자에게 동시투여하는 것을 포함하는 HCV에 의해 매개되는 질환을 치료하기 위한 방법을 제공하고 여기서 면역계 조절제는 인터페론이나 화학적으로 유도된 인터페론이다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 명세서의 상기에 개시된 바와 같이 식 Ⅰ에 따른 화합물의 치료적 유효량 및 하나 이상의 다른 항바이러스 화합물의 치료적 유효량을 필요로 하는 환자에게 동시투여하는 것을 포함하는 HCV에 의해 매개되는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 명세서의 상기에 개시된 바와 같이 식 Ⅰ에 따른 화합물의 치료적 유효량 및 하나 이상의 다른 항바이러스 화합물의 치료적 유효량을 필요로 하는 환자에게 동시투여하는 것을 포함하는 HCV에 의해 매개되는 질환을 치료하기 위한 방법을 제공하고, 여기서 화합물은 HCV 단백질 분해효소 억제제, 다른 뉴클레오시드 HCV 중합체 억제제, 비-뉴클레오시드 HCV 중합효소 억제제, HCV 헬리카제 억제제, HCV 프리마제 억제제 또는 HCV 융합 억제제이다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 본 명세서의 전술한 식 Ⅰ에 따른 화합물을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 또 다른 구현예에서, 본 명세서의 상기에 개시된 바와 같이 식 Ⅰ에 따른 화합물의 제조방법을 제공하는데, 이 방법은 청구항 17에 열거된 단계(ⅰ)-(ⅴ)를 포함하고, 실시예에 예시되어 있다. 상기 방법은 DMAP 및 약 7.5 이상의 pH로 용액을 유지하기 위해 충분한 염기의 존재하에서 본 명세서에 정의된 아실화제로 균질화 또는 2상화(biphasic) 할 수 있는 염기 수성 유기 배지에서 Ⅱ를 처리하는 단계를 포함한다. 본 방법은 헤테로시클릭 염기의 부수적인 반응없이 아실화를 가능하게 한다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이 "하나(a)" 또는 "한(an)" 실체라는 구는 하나 이상의 실체를 일컫는다; 예를 들어, 하나의 화합물(a compound)은 하나 이상의 화합물 또는 적어도 하나의 화합물을 일컫는다. "하나"(또는 "한") 및 "하나 이상" 및 "적어도 하나"라는 용어는 본 명세서에서 서로 바꿔서 사용할 수 있다.

본 명세서에 사용되는 바와 같이 "선택적" 또는 "선택적으로"라는 용어는 이어서 개시된 사건 또는 환경이 반드시 일어날 필요는 없지만, 상기 기재는 사건이나 환경이 일어나는 경우와 일어나지 않는 경우를 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, "선택적 결합"은 결합이 존재하거나 존재하지 않을 수 있고 개시는 단일, 이중 또는 삼중 결합을 포함한다.

본 명세서에서, "독립적으로"라는 용어는 동일한 화합물 내에서 같거나 다른 정의를 갖는 변수의 존재 또는 부재에 관계없이 변수가 임의의 하나의 예에서 적용된다는 것을 나타내기 위해 사용된다. 그러므로, R이 두 번 나오고 "독립적으로 탄소 또는 질소"와 같이 정의된 화합물에서, R 모두는 탄소일 수 있고, R 모두는 질소일 수 있고, 또는 하나의 R은 탄소이고 나머지는 질소일 수 있다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "알케닐"이라는 용어는 1 또는 2 개의 올레핀 이중 결합[바람직하게는 하나의 올레핀 이중 결합]을 갖는 2 내지 10 개의 탄소 원자를 갖는 치환되지 않은 탄화수소 체인 라디칼을 가리킨다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이 "C₂ _-10 알케닐"은 2 내지 10 개의 탄소를 포함하는 알케닐을 일컫는다. 예는 비닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐(알릴) 또는 2-부테닐(크로틸)이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, "알킬"이라는 용어는 1 내지 10 개의 탄소 원자를 포함하는 비분지쇄 또는 분지쇄의 포화된 1가의 탄화수소 잔기를 가리킨다. "저급 알킬"은 1 내지 6 개의 탄소 원자를 포함하는 직쇄 또는 분지쇄의 탄화수소 잔기를 가리킨다. 본 명세서에서 사용된 바와 같이, "C₁ _-10알킬"은 1 내지 10 개의 탄소를 포함하는 알킬을 일컫는다. 알킬기의 예는 메틸, 에틸, 프로필, i-프로필, n-부틸, i-부틸, t-부틸 또는 펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, 헥실, 헵틸 및 옥틸을 포함하는 저급 알킬기를 포함하나 이에 한정되지는 않는다. (아릴)알킬 또는 (헤테로아릴)알킬이라는 용어는 알킬기가 아릴 또는 헤테로아릴기에 의해 각각 선택적으로 치환된다는 것을 나타낸다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이 "알키닐"이라는 용어는 2 내지 10 개의 탄소 원자, 바람직하게는 2 내지 5 개의 탄소 원자를 갖고 하나의 삼중 결합을 갖는 비분지쇄 또는 분지쇄의 탄화수소 라디칼을 나타낸다. 본 명세서에 사용된 "C₂ _-10 알키닐"은 2 내지 10 개의 탄소를 포함하는 알키닐을 일컫는다. 예는 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐 또는 3-부티닐이다.

본 명세서에 사용된 "시클로알킬"이라는 용어는 3 내지 8 개의 탄소 원자, 즉 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸 또는 시클로옥틸을 포함하는 포화된 탄소고리환을 가리킨다. 본 명세서에 사용된 "C_3-7 시클로알킬"은 탄소고리환에 3 내지 7 개의 탄소를 포함하는 시클로알킬을 일컫는다.

본 명세서에 사용된 "할로알킬"이라는 용어는 상기에서 정의된 바와 같이 비분지쇄 또는 분지쇄의 알킬기를 가리킨다. 여기서 1,2,3 또는 그 이상의 수소 원자는 할로겐에 의해 치환된다. 본 명세서에서 사용된 "C₁ _-3 할로알킬"은 1 내지 3 개의 탄소 및 1 내지 8 개의 할로겐 치환기를 포함하는 할로알킬을 일컫는다. 예로는 1-플루오로메틸, 1-클로로메틸, 1-브로모메틸, 1-요오드메틸, 트리플루오로메틸, 트리클로로메틸, 트리브로모메틸, 트리요오드메틸, 1-플루오로에틸, 1-클로로에틸, 1-브로모에틸, 1-요오드에틸, 2-플루오로에틸, 2-클로로에틸, 2-브로모에틸, 2-요오드에틸, 2,2-디클로로에틸, 3-브로모프로필 또는 2,2,2-트리플루오로에틸이다.

본 명세서에 사용된 "알콕시"라는 용어는 -O-알킬기를 의미하고, 여기서 알킬은 상기에서 정의된 바와 같다. 예는 메톡시, 에톡시, n-프로필옥시, i-프로필옥시, n-부틸옥시, i-부틸옥시, t-부틸옥시이다. 본 명세서에서 사용된 "저급 알콕시"는 이전에 정의된 바와 같이 "저급 알킬"기를 갖는 알콕시기를 가리킨다. "C₁ _-10 알콕시"는 -O-알킬을 일컫고 여기서 알킬은 C₁ _- ₁₀ 이다.

본 명세서에 사용된 "디-아실" 유도체라는 용어는 본 명세서에 개시된 바와 같이 유도된 뉴클레오시드 화합물을 일컫고, 여기서 3'- 및 5'-히드록시는 에스테르-OC(=O)R¹ 및 OC(=O)R² 이고 여기서 R¹ 및 R²는 청구항 1에 정의되어 있는 바와 같다.

본 명세서에 사용된 "아실화제"라는 용어는 무수물, 산 할라이드, 클로로카르보닐알콕시드(예: 에틸 클로로포르메이트) 또는 N-보호된 알파 아미노산의 활성화된 유도체 중 하나를 일컫는다. 본 명세서에 사용된 "무수물"이라는 용어는 일반구조 R¹C(O)-O-C(O)R¹의 화합물을 일컫고 여기서 R¹은 청구항 1에 정의된 바와 같다. 본 명세서에 사용된 "산 할라이드"라는 용어는 일반구조 R¹C(O)X의 화합물을 일컫고 여기서 X는 할로겐이다. 본 명세서에 사용된 "아실 이미다졸"이라는 용어는 일반구조 R¹C(O)X의 화합물을 일컫고 여기서 X는 N-이미다졸릴이다. 본 명세서에 사용된, 화합물의 "활성화된 유도체"라는 용어는 원하는 화학반응에서 화합물이 활성이도록 하는 본래 화합물의 일시적인 반응성 형태를 일컫는데, 본래 화합물은 단지 적당히 반응성이거나 비-반응성이다. 활성화는 모 화합물보다 더 높은 자유 에너지 함량을 갖는 분자 내에서 유도체 형성이나 화학적 그룹화(chemical grouping)에 의해 달성되고, 이는 활성화된 형태가 다른 시약과 보다 반응하기 쉽게 만든다. 본 발명의 문맥에서 카르복시기의 활성화는 특히 중요하고 카르복시기를 활성화시키는 해당 활성화제나 그룹화는 아래에 보다 자세히 설명되어 있다. 본 발명의 특히 관심있는 부분은 카르복실산 무수물 및 카르복실산 염화물이다.

본 명세서에 사용된 "불균질 수성 용매 혼합물"이라는 구는 2상 또는 이형유래의 혼합물을 생산하는 물 및 유기 공용매의 혼합물을 일컫는다. 이러한 불균질 수성 용매 혼합물은 제한된 수용성을 갖는 공용매로부터 유래할 수 있거나 수성 성분의 이온 강도가 수상에서 공용매의 용해도를 제한하기 위해 조절될 수 있다.

"알칼리 금속 히드록시드"라는 용어는 식 MOH인 화합물을 일컫는데 여기서 M은 리튬, 나트륨, 칼륨 또는 세슘이고, "알칼리 금속 바이카르보네이트"는 MHCO₃기를 일컫고 여기서 M은 나트륨 또는 칼륨이고, "알칼리 금속 카르보네이트"는 M₂CO₃기를 일컫고 여기서 M은 나트륨 또는 칼륨이다. 당업자는 원하는 범위로 pH를 유지하기 위해 다른 염기가 사용될 수 있고 다른 염기는 본 발명의 범위 내에 있음을 이해할 것이다.

본 발명에 사용되는 약자는 다음을 포함한다: 아세틸(Ac), 아세트산(HOAc), 1-N-히드록시벤조트리아졸(HOBt), 대기(Atm), 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 메틸(Me), tert-부톡시카르보닐(Boc), 아세토니트릴(MeCN), 디-tert-부틸 피로카르보네이트 또는 boc 무수물(BOC₂O), 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드(EDCI), 벤질(Bn), 부틸(Bu), 메탄올(MeOH), 벤질옥시카르보닐(cbz 또는 Z), 녹는점(mp), 카르보닐 디이미다졸(CDI), MeSO₂-(메실 또는 Ms), 1,4-디아자비시클로[2.2.2.]옥탄(DABCO), 질량 스펙트럼(ms), 메틸 t-부틸 에테르(MTBE), 1,5-디아자비시클로[4.3.0]논-5-엔(DBN), 1,8-디아자비시클로[5.4.0]운데-7-센(DBU), N-메틸모르폴린(NMM), N-메틸피롤리돈(NMP), 1,2-디클로로에탄(DCE), N,N'-디시클로헥실카르보디이미드(DCC), 피리디늄 디크로메이트(PDC), 디클로로메탄(DCM), 프로필(Pr), 제곱 인치당 파운드(psi), 디이소프로필에틸아민(DIPEA, Hunig's Base), 피리딘(pyr), 실온(rt 또는 RT), N,N-디메틸 아세트아미드(DMA), tert-부틸디메틸실릴 또는 t-BuMe₂Si(TBDMS), 4-N,N-디메틸아미노피리딘(DMAP), 트리에틸아민(Et₃N 또는 TEA), N,N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸 술폭시드(DMSO), 트리플루오로아세트산(TFA), 박층 크로마토그래피(TLC), 에틸 아세테이트(EtOAc), 테트라히드로푸란(THF), 디에틸 에테르(Et₂O), 트리메틸실릴 또는 Me₃Si(TMS), 에틸(Et), p-톨루엔술폰산 모노하이드레이트(TsOH 또는 pTsOH), 4-Me-C₆H₄SO₂- 또는 토실(Ts), 이소-프로필(i-Pr), N-우레탄-N-카르복시무수물(UNCA), 에탄올(EtOH). 접두사 노르말(n), 이소(i-), 2차(sec -), 터셔리(tert -) 및 네오를 포함하는 통상의 명명법은 알킬 모이어티에 사용될 때 그 관습적인 의미를 갖는다(J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry , IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.).

본 발명 및 본 발명의 범위 내에 포함되는 대표적인 화합물의 예는 표 1에 나타내었다. 이 실시예 및 다음의 제조방법은 당업자가 본 발명을 보다 정확히 이해하고 본 발명을 실행할 수 있도록 제공된다. 그들은 본 발명의 범위를 한정하는 것으로 간주되어서는 안 되고 단지 그의 예시 및 대표라고 간주되어야 한다.

일반적으로, 본 발명에 사용되는 명명법은 IUPAC 시스템 명명법의 생성을 위해 베일스타인 연구소의 컴퓨터화된 시스템인 AUTONOM^TM v.4.0에 기반을 두고 있다. 만약 도시된 구조와 그 구조에 주어진 명칭 간에 차이가 있다면, 도시된 구조에 더 비중을 둔다. 추가로, 만약 구조의 입체화학 또는 구조의 일부가 예를 들어 볼드나 대시선으로 표시되지 않았다면, 구조 또는 구조의 일부는 그것의 모든 입체화학을 포함하는 것으로 해석된다. 이러한 고리 시스템에 대한 번호 매기기 시스템은 다음과 같다:

화합물 및 제조

(2R)-2'-데옥시-2'-플루오로-2'-C-메틸시티딘의 HCV 중합효소 억제 활성이 개시되어 왔다(J. L. Clark et al . J. Med . Chem . 2005 48(17):5504-8; J. Clark 미국 공개번호 2005/0009737이고 두 문헌 모두 본 명세서에 그 전체가 참조로 포함되어 있다). 바이러스가 돌연변이를 일으키고 내성 균주를 선택하기 위한 기회를 최소화하는 조건 하에서, HCV 중합효소를 빠르게 억제하고 그에 의해 바이러스 레벨을 낮추기 위해 처음에 고용량의 Ⅰ-6을 투여하는 것이 바람직하다. 충분히 높은 레벨은 모 뉴클레오시드로 달성하기 어려울 것이다. 전구약물은 화합물의 약력학적 및 물리적 특성을 향상시키고 그에 의해 생체이용률을 최적화하기 위한 하나의 전략을 제공한다. 미국 특허 공개 2005/0009737은 2'-데옥시-2'-플루오로-2'-메틸 뉴클레오시드의 뉴클레오시드 전구약물에 대한 일반적인 접근방법을 제시한다. 전구약물 후보를 생각하는 것은 믿을 수 없을 만큼 단순하지만, 적당한 생리화학적 및 약력학적 특성, 생체 내 형질전환 및 안전성 프로필을 갖는 화합물을 동정하는 것은 상당한 실험을 필요로 하는 복잡하고 여러 분야를 통합한 일이다. 경구 전달을 위한 전구약물을 동정하는데 있어서의 장애물은 투여 후 활성 모이어티의 빠르고 효율적인 방출을 가능하게 하는 동시에 충분한 수용성(水溶性), 친지질성 및 화학적 안정성을 유지하는 것을 포함한다. 추가로, 상당한 비-에스테라제 대사 및 전구약물의 전달자 매개된 제거는 최소화되어야 한다(K. Beaumont et al . Curr . Drug Metab. 2003 4(6):461-485). 또한, 시토크롬 P₄₅₀ 효소의 억제 또는 유도는 원치않는 바람직하지 않은 약물-약물 상호작용을 만들어낼 수 있다. 표 1에 도시된 Ⅰ-6의 저급 알킬 디에스테르는 놀랍게도 Ⅰ-6의 생체이용률을 상당히 향상시키는 것으로 밝혀졌다.

잠재적인 전구약물의 약력학적 반응은 종간 인위적인 결과(intra-species artifact)를 가져올 수 있는 종간 다양성 및 유전적 다형성을 최소화하기 위해 래트 및 원숭이 모두에서 평가되었다. 효소적 변환이 에스테르 결합의 가수분해의 원인이 되는 범위까지는 전구약물에 대한 특이적인 친화도가 변환을 촉진할 수 있는 에스테라제 및/또는 펩티다제의 특이적인 구조에 달려있을 수 있다. 래트 에스테라제 활성은 종종 인간보다 상당히 더 높게 나타났다(J. A. Fix et al . Pharm . Res . 1990 7(4):384-387; W. Li et al . Antimicrob . Agents Chemother 1998 42(3):647-653). 다른 잠재적으로 중요한 매개변수는 디아미나제에 의한 시티딘 염기의 유리딘으로의 생물학적 전환이었다. 시티딘 및 유리딘의 트리포스페이트가 중합효소 억제제일지라도, 생체 내에서 유리딘의 인산화는 시티딘에 비교할 때 비효율적이다. 그러므로 증가된 유리딘 레벨은 바람직하지 않다고 여겨진다. HCV 레플리콘에서 유리딘 유도체에 의해 나타나는 효과가 없음이 보고되었다(J. Clark et al . J. Med . Chem ., supra).

[표 1]

표 1
화합물 번호		mp	Caco-2(2-7d) P_app(x10^-6 cm/sec)	래트 C_max ¹ AUC(cyt)² AUC(urd)	원숭이 C_max AUC(cyt) AUC(urd)
	R
I-1	C(=O)-n-C₄H₉	157-158.8	23.2	0.65 9.8(본래) 7.7(유리딘)	0.9 8.3 <0.3
I-2	C(=O)-i-C₃H₇	190.4-190.9	3.93,4.62,6.04	- 25.7 7.8	1.88 16.17 0.13
I-3	C(=O)-C₂H₅	185.2-186.0	3.01,1.06,1.02	- 22.4 5.38	1.2 9.3 0.16
I-4	C(=O)-O-CH₂CHMe₂	210.0-211.5	6.4	1.2 13.6 3.8	1.1 9.2 0.2
I-5	C(=O)-O-n-C₃H₇	192.0-194.4	13.4		0.97 6.2 0.19
I-6	H³		0.4	0.82 5.6 5.4	0.6 2.97 0.9
1. Cmax는 혈액 내에서 I-7의 피크농도이다. 2. AUC(cyt)는 시티딘 뉴클레오시드에 대한 곡선 밑 면적이다. AUC(urd)는 유리딘 뉴클레오시드에 대한 곡선 밑 면적이다. 3. 레플리콘에서 EC₉₀은 5.40±2.6 μM이다(J. Clark et al . J. Med . Chem ., 이전과 동일)

놀랍게도, Ⅰ-6의 C₂ _-5 알킬 디에스테르는 우수한 전구약물 특성을 나타내는 것으로 현재 밝혀졌다. 래트 및 원숭이 모두의 혈액 내에서 실질적으로 더 높은 레벨의 불소가 함유된 뉴클레오시드가 관찰되었다. 나아가 뉴클레오시드가 디에스테르로서 투여되었을 때, 불소가 함유된 염기에서 유리딘에 대한 시티딘의 비는 두 종 모두에서 더 높다.

나아가, 디에스테르는 2 개의 다른 모노에스테르 및 비-에스테르화된 뉴클레오시드를 형성할 수 있다. 모든 종이 상당한 농도로 혈액 내에 존재한다면 이러한 상황에서의 약력학적 분석은 복잡할 수 있다. 혈액 내에 다수의 대사물질이 존재하는 것은 전구약물의 안전성을 확립하는데 추가적인 부담을 가한다. 놀랍게도 두 에스테르 모두 가수분해가 아주 쉽고, 모 뉴클레오시드에 더하여 혈액 내에서 관찰되는 유일하게 중요한 대사물질은, 빠르게 Ⅰ-6으로 전환되는 3'-모노에스테르이다.

인간 개체에서의 잠재적인 작용을 추가로 평가하기 위해, 추정되는 전구약물에 대해 Caco-2 세포를 통한 전달을 평가하였다. Caco-2 세포는 일반적으로 분자의 잠재적인 흡수/투과를 평가하기 위해 사용된다(G. Gaviraghi et al. in Pharmacokinetic optimization in drug research . Biological , Pharmacokinetic and Computational Strategies . B. Testa et al . eds . Wiley Interscience VCH, Zurich 2001 pp 3-14). Caco-2 투과도는 Ⅰ-6의 C₂ _-5 알킬 디에스테르에 대해 허용가능한 것으로 밝혀졌다.

효율적인 생체 내 생물학적 변환과 더불어, 경구 투여용 전구약물은 또한 약물을 제형화하기에 적당한 생리화학적 특성을 나타내고, 소화관으로부터 원하는 생물학적 변환이 일어날 수 있는 부위로의 흡수를 보장해야만 한다. 특히, 수용성, 분배계수, 및 위 및 장액에서의 안정성과 관련이 있다. 이러한 매개변수에 대한 값은 표 2에 나타낸다.

[표 2]

표 2
	K_O _/ _W ¹	log D²	용해도.³	SGF⁴ T₁ _/2(h) 37^oC	SIF⁵ T₁ _/2(h) 37^oC
I-1	3.39	ND⁷	0.016	18.6	>8.4¹¹
I-2	2.33	1.67	0.18⁶	25.1	866
I-3	1.27	0.9	3.7⁸	9	72
I-4	3.00	ND	0.013⁹	>7¹¹	>15¹¹
I-5	2.20	ND	0.13	>10.4¹¹	>11¹¹
I-6	-0.94	ND	76	>12¹¹	>12¹¹
1. 계산된 옥탄올/물 분배계수 2. pH 7.4에서 실험적으로 결정된 분포계수 3. 수성 배지, 물 또는 pH 6.5의 완충용액에서의 용해도(mg/㎖). 4. 모조 위액에서의 용해도(SGF; pH 1.2) 5. 모조 장액에서의 용해도(SIF; pH 7.4) 6. SGF에서의 용해도는 13.3 mg/㎖ 7. 결정되지 않음 8. 배지는 SIF, SGF에서의 용해도는 13.6 mg/㎖ 9. 배지는 SIF, SGF에서의 용해도는 0.16 mg/㎖ 10. 물 및 pH 6 완충용액에서 측정 11. 일정 기간에 걸쳐 기록된 중요하지 않은 분해(Insignificant degradation) 12. pH 5.5에서 결정

오일-물 분배 계수 P_O _/W(clogP는 계산된 P_OW이다)는 경구 투여된 약물에서 중요한 특성이다. 약물 재료는 제형, 및 위 및 장에서 내피세포를 접촉시키는 위장액에 용해되기에 충분한 수용성 및 이러한 세포의 지질 이중층막을 가로질러 궁극적으로 혈액으로 가기에 충분한 지용성을 가져야 한다. 경구를 통한 생체이용률을 위한 화합물의 log P의 적당한 범위는 본 발명의 화합물이 나타내는 1 내지 3이다.

본 명세서에서 사용된 P_O _/W라는 표현은 옥탄올/물 분배계수를 일컫는다. 본 명세서에서 사용된 clogP라는 표현은 계산된 P_O _/W를 일컫는다. P_O _/W를 계산하는 컴퓨터 프로그램은 약학 및 의화학자에게 쉽게 이용가능하다. 분포 계수라는 용어는 옥탄올 및 완충 수용액 사이에서 실험적으로 결정된 분배계수를 일컫는다. 분배계수 및 분포계수는 일반적으로 유사하나 후자는 수용액의 pH의 함수인데 반해 P_OW _는 pH에 독립적이다.

경구 투여된 전구약물의 물에서의 용해도는 적당한 제형용으로 약 0.1 ㎎/㎖ 이상이고, 위를 가로질러 장에서 흡수되는 충분한 시간을 주기 위해 모조 위액 및 모조 장액에서 반감기는 각각 1-2 시간 및 2-4시간이어야 한다.

본 발명의 화합물은 수성 유기 용매에서 Ⅰ-6의 아실화에 의해 한 단계로 간편하게 제조된다. 용매는 균질의 수용액이거나 2상 용액 중 하나일 수 잇다. 수성 유기 용매의 pH는 아실화에 의해 생산된 산을 중화하기 위한 염기 첨가에 의해 7.5 이상으로 유지된다. 염기는 알칼리 또는 알칼리 금속 히드록시드 또는 터셔리 아민 중 하나일 수 있다. 반응은 아실화를 위한 촉매로 당업계에 알려진 DMAP의 존재 하에 수행된다. 본 방법의 잇점은 원하는 산물이 헤테로고리 염기의 아실화 없이 얻어질 수 있다는 것이다. 보호기가 필요하지 않아 보호/탈보호 단계가 필요없다. 상기 방법은 수반되는 실시예에 개시되어 있다.

용량 및 투여

본 발명의 화합물은 매우 다양한 경구 투여 용량 형태 및 담체로 제형화될 수 있다. 경구 투여는 정제, 코팅된 정제, 경질 및 연질 젤라틴 캡슐, 용액, 에멀전, 시럽 또는 현탁액의 형태일 수 있다. 본 발명의 화합물은 다른 투여 경로 가운데 좌약 투여로 투여할 때 효과가 있다. 가장 편리한 투여방법은 일반적으로 편리한 일일 복용 방법을 사용한 경구 투여인데, 이는 질병의 심한 정도 및 항바이러스 약제에 대한 환자의 반응에 따라 조절될 수 있다.

본 발명의 화합물 또는 화합물들 및 그의 약학적으로 사용가능한 염은 하나 이상의 통상의 부형제, 담체 또는 희석제와 함께 약학적 조성물 및 단위 용량의 형태로 할 수 있다. 약학적 조성물 및 단위 용량 형태는 추가 활성 화합물과 함께 또는 이들 없이 통상의 비율로 통상의 성분을 포함할 수 있고 단위 용량 형태는 사용될 일일 용량 범위에 상응하는 임의의 적당한 유효량의 활성 성분을 포함할 수 있다. 약학적 조성물은 정제 또는 충진 캡슐과 같은 고체, 반고체, 분말, 서방형 제형, 또는 현탁액, 에멀전 또는 경구용 충진 캡슐과 같은 액체; 또는 직장 또는 질 투여용 좌약의 형태로 사용될 수 있다. 일반적인 제제(preperation)는 약 5% 내지 약 95%의 활성 화합물 또는 화합물들을 포함할 것이다(w/w). "제제" 또는 "용량 형태"라는 용어는 활성 화합물의 고체 및 액체 제형 모두를 포함하기 위한 것이고 당업자는 활성 성분이 원하는 용량 및 약력학적 매개변수에 따라 다른 제제로 존재할 수 있음을 이해할 것이다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같이 "부형제"라는 용어는 약학적 조성물을 제조하는데 사용되는 일반적으로 안전하고 비독성이며 생물학적 또는 그 이외에 바람직하지 않은 효과를 나타내지 않는 화합물을 일컫는다. 인간의 약학적 용도 뿐 아니라 동물용으로 허용될 수 있는 부형제를 포함한다. 본 발명의 화합물은 단독으로 투여될 수 있지만 일반적으로 의도하는 투여 경로 및 표준 약학적 관례와 관련하여 선택된 하나 이상의 적당한 약학적 부형제, 희석제 또는 담체와 함께 혼합하여 투여될 것이다.

활성 성분의 "약학적으로 허용가능한 염" 형태는 또한 비-염 형태가 없는 활성성분에 원하는 약력학적 특성을 최초로 부여할 수 있고, 체내에서 그 치료 활성과 관련하여 활성 성분의 약력학에 훨씬 긍정적으로 영향을 미칠 수 있다. 본 명세서에 사용된 화합물의 "약학적으로 허용가능한 염"이라는 구는 약학적으로 허용가능하고 본래 화합물의 원하는 약학적 활성을 갖는 염을 의미한다. 그러한 염은 다음을 포함한다: (1) 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등과 같은 무기산으로 형성되거나; 또는 글리콜산, 피루브산, 젖산, 말론산, 말산, 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 3-(4-히드록시벤조일)벤조산, 신남산, 만델산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 1,2-에탄-디술폰산, 2-히드록시에탄술폰산, 벤젠술폰산, 4-클로로벤젠술폰산, 2-나프탈렌술폰산, 4-톨루엔술폰산, 캄포술폰산, 라우릴 황산, 글루콘산, 글루탐산, 살리실산, 뮤콘산 등과 같은 유기산으로 형성된 산 부가 염. 약학적으로 허용가능한 염에 대한 모든 참고문헌은 동일한 산 부가 염의, 본 명세서에서 정의된 바와 같은 용매 첨가 형태(용매 화합물) 또는 결정 형태(다형체)를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.

고체 형태 제제는 분말, 정제, 알약, 캡슐, 좌약 및 분산가능한 과립을 포함한다. 고체 담체는 또한 희석제, 향료, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제, 방부제, 정제 붕해제 또는 캡슐화 물질로 작용할 수 있는 하나 이상의 물질일 수 있다. 분말에서, 담체는 일반적으로 미세하게 쪼개진 활성 성분과의 혼합물인 미세하게 쪼개진 고체이다. 정제에서, 활성 성분은 일반적으로 적당한 비율로 필요한 결합 능력을 갖는 담체와 혼합되고 원하는 모양 및 크기로 압축된다. 적당한 담체는 마그네슘 카르보네이트, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 당, 락토스, 펙틴, 덱스트린, 녹말, 젤라틴, 트라가칸트, 메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스, 저용융(low melting) 왁스, 코코아 버터 등을 포함한다. 고체 형태 제제는 활성 성분에 추가로 착색제, 향료, 안정화제, 완충제, 인공 및 천연 감미료, 분산제, 증점제, 가용화제 등을 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다.

경구 투여용으로 적합한 액체 제형은 또한 에멀전, 시럽, 엘릭시르 및 수성 현탁액을 포함하는 액체 제형을 포함한다. 이들은 사용 바로 전에 액체 형태 제제로 전환되도록 하는 고체 형태 제제를 포함한다. 에멀전은 예를 들어, 수성 프로필렌 글리콜 용액으로 제조될 수 있고 레시틴, 소르비탄, 모노올레이트 또는 아카시아와 같은 유화제를 포함할 수 있다. 수성 현탁액은 천연 또는 합성 고무, 수지, 메틸셀룰로스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로스와 같은 점성 물질 및 다른 잘 알려진 현탁제와 미세하게 쪼갠 활성 성분을 물에 분산시켜 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물은 좌약과 같이 투여를 위해 제형화될 수 있다. 지방산 글리세라이드 또는 코코아 버터의 혼합물과 같은 저용융 왁스는 먼저 용융되고 활성 성분은 예를 들어 교반에 의해 균질하게 분산된다. 그리고나서 용융된 균질한 혼합물은 사용하기 좋은 크기의 틀에 부어 식히고 고체화시킨다.

본 발명의 화합물은 질 투여를 위해 제형화될 수 있다. 활성 성분에 추가하여 담체를 포함하는 페서리, 탐폰, 크림, 젤, 페이스트, 폼(foam) 또는 스프레이가 적합한 것으로 당업계에 알려져 있다.

약학적 담체, 희석제 및 부형제와 함께 적당한 제형이 Remington에 개시되어 있다(Remington : The Science and Practice of Pharmacy 1995, edited by E. W. Martin, Mack Publishing Company, 19th edition, Easton, Pennsylvania). 숙련된 제형 과학자는 본 발명의 조성물을 불안정하게 하거나 그들의 치료 효과를 손상시키지 않고 특정 투여 경로용의 다양한 제형을 제공하기 위해 명세서의 교지 내에서 제형을 변형할 수 있다.

본 화합물의 변형은 물이나 다른 용액에서 그들이 보다 용해가능하도록 예를 들어, 최소한의 변형(예: 염 제형)이 쉽게 수행될 수 있는데, 이는 당업계 통상의 개시 범위 내에 있다. 또한 환자에서 최대의 이로운 효과를 내기 위해 본 화합물의 약력학을 유지하기 위한 특정 화합물의 투여 경로 및 용량 처방을 변경하는 것 또한 당업계 통상의 개시 범위 내에 있다.

본 명세서에서 사용되는 "약학적 유효량"이라는 용어는 개인에게서 질환의 증상을 감소시키는데 필요한 양을 의미한다. 그 용량은 각각의 특정한 경우에 개인별 필요에 맞춰질 것이다. 용량은 치료될 질환의 심한 정도, 환자의 나이 및 일반적인 건강 상태, 환자가 치료받는 다른 약제, 투여의 경로 및 형태, 및 관계된 의료인의 선호 및 경험과 같은 다양한 인자에 따라 넓은 한도 내에서 달라질 수 있다. 경구 투여를 위해, 1일 약 0.1 내지 약 10g의 일일 용량이 단독치료 및/또는 병용치료에서 적당하다. 바람직한 1일 용량은 1일 약 0.5 내지 약 7.5 g, 보다 바람직하게는 1일 약 1.5 내지 약 6.0 g이다. 일반적으로 치료는 빠르게 바이러스를 감소시키거나 제거하기 위해 대량의 초기 "부하 용량"으로 시작되고 이어서 감염의 재발을 방지하기에 충분한 레벨로 용량을 감소시킨다. 본 명세서에 개시된 질환을 치료하기 위해 당업자는 지나친 실험없이 그리고 개인적 지식, 경험 및 본 발명의 개시에 따라 주어진 질환 및 환자를 위한 본 발명의 치료적 유효량의 화합물을 확정할 수 있다.

치료 효과는 혈청 단백질(예: 알부민, 응혈 인자, 알칼리 포스파타제, 아미노트랜스퍼라제(예: 알라닌 트랜스아미나제, 아스파테이트 트랜스아미나제), 5'-뉴클레오시다제, γ-글루타미닐트랜스펩티다제 등)과 같은 단백질 레벨, 빌리루빈의 합성, 콜레스테롤의 합성 및 담즙산의 합성을 포함하나 이에 한정되지는 않는 간 기능 테스트; 탄화수소 대사, 아미노산 및 암모니아 대사를 포함하나 이에 한정되지는 않는 간 대사 기능으로부터 확인될 수 있다. 대안적으로 치료 효과는 HCV-RNA를 측정하여 모니터될 수 있다. 이들 테스트의 결과는 용량 최적화를 가능하게 할 것이다.

본 발명의 구현예에서, 활성 화합물이나 염은 리바비린과 같은 다른 항바이러스제, 다른 뉴클레오시드 HCV 중합효소 억제제, HCV 비-뉴클레오시드 중합효소 억제제, HCV 단백질 분해효소 억제제, HCV 헬리카제 억제제 또는 HCV 융합 억제제와 병용하여 투여될 수 있다. 활성 화합물이나 그 유도체 또는 염이 다른 항바이러스제와 병용투여될 때 활성이 본래 화합물에 비해 증가될 수 있다. 치료가 병용치료일 때, 그러한 투여는 뉴클레오시드 유도체 투여에 대해 병용 또는 순차적일 수 있다. 본 명세서에서 사용된 "병용투여"는 그러므로 동시에 또는 다른 시간에 약제를 투여하는 것을 포함한다. 동시에 둘 이상의 약제를 투여하는 것은 둘 이상의 활성 성분을 포함하는 단일 제형에 의해 또는 단일 활성 약제를 갖는 둘 이상의 용량 형태를 실질적으로 동시에 투여하는 것에 의해 달성될 수 있다.

본 명세서에서 치료에 대한 기준은 예방 뿐 아니라 존재하는 증상의 치료까지 확대되는 것으로 이해될 것이다. 나아가, 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 HCV 감염의 "치료"라는 용어는 또한 HCV 감염과 관련되거나 HCV 감염에 의해 매개된 질환이나 증상의 치료 또는 예방 또는 그의 임상 증상의 치료를 포함한다.

실시예 1

프로피온산(2R,3R,4R,5R)-5-(4-아미노-2-옥소-2H-피리미딘-1-일)-4-플루오로-4-메틸-3-프로피오닐옥시-테트라히드로-푸란-2-일메틸 에스테르(Ⅰ-3)

THF(300 ㎖) 및 물(150 ㎖) 내의 Ⅰ-6(30 g, 0.116 mol), DMAP(1.4 g, 11.57 mmol)의 현탁액에 TEA(35.1 g, 0.347 mol)을 첨가하여 맑은 용액(pH 약 11)을 얻었다. 반응 혼합물은 5-10 ℃로 냉각시키고 프로피온산 무수물(30.1 g, 0.231 mol)을 교반한 2상 반응에 적가하였다. pH를 모니터하고 동시에 KOH 용액을 첨가하여 약 11-12로 유지하였다. 반응의 진행은 HPLC 분석에 의해 모니터하고 프로피오닐 클로라이드를 첨가한 후, 약 52% 디에스테르, 30% 모노에스테르 및 15% 출발 물질 이 있게 되었다. 추가의 프로피온산 무수물(45.2 g, 0.347 mol)을 상기 조건 하에서 적가하였다. 반응 혼합물은 교반하지 않고 밤새 놓아두었다. 유기상의 HPLC는 약 96% 디에스테르 및 약 2% 모노에스테르를 가리켰다. 상들을 분리하고 수상은 THF(100 ㎖)로 두 번 추출하였다. 혼합된 유기상은 염수로 세척하였다. 유기상은 여과, 증발시키고 나머지는 물(약 500 ㎖)에 녹이고나서 IPA(약 100 ㎖)로 희석하였다. 결과 혼합물은 교반하면서 주변 온도로 천천히 냉각시켰다. 결과 침전을 여과시켜 물 및 헵탄으로 세척하고 약 60 시간 동안 진공하 약 60 ℃에서 건조하여 HPLC로 98.75% 순수한 Ⅰ-3 3.45 g(80.3%)을 얻었다.

실시예 2

이소부티르산(2R,3R,4R,5R)-5-(4-아미노-2-옥소-2H-피리미딘-1-일)-4-플루오로-3-이소부티릴옥시-4-메틸-테트라히드로-푸란-2-일메틸 에스테르(Ⅰ-2)

THF(10 ℓ) 내의 Ⅰ-6(970 g, 3.74 mol) 및 DMAP(50 g, 0.412 mol)의 얼음같이 차가운 현탁액에 TEA(2.3 ㎏, 16.5 mol) 및 물(7 ℓ)을 첨가하여 맑은 용액을 만들었다. 약 0 ℃로 온도를 유지하면서, 이소부티릴 클로라이드(3 당량)를 교반한 혼합물에 천천히 첨가하였다. HPLC가 반응이 완전히 종료되었음을 나타낼 때까지 추가로 1.2 다음 0.7 당량의 이소부티릴 클로라이드를 첨가하였다(전체 약 1.95 ㎏). 반응 혼합물은 농축 HCl로 pH 약 6.4로 산화시켰고 유기상은 EtOAc(2x 10 ℓ)로 세척하였다. 혼합된 추출물은 물(1x15 ℓ)로 세척하였다. 유기상은 여과하고 진공에서 농축시켰다. 잔류물은 IPA(약 20 ㎏)에서 용해하고 헵탄(14.2 ㎏)을 첨가하였다. 용액은 약 74-75℃로 가열하여 맑은 용액은 제조했고 그리고나서 약 5 ℓ를 증류로 제거하였다. 결과 수용액은 실온으로 천천히 냉각시켰다. 약 42-43 ℃에서 침전이 형성되었다. 5 ℃까지 천천히 냉각을 계속하고나서 밤새 교반하였다. 결과 고체는 여과시키고 여과물은 IPA/헵탄(1:8) 혼합물(13.4 ㎏)로 세척하고 약 60-70 ℃ 진공에서 건조시켜 HPLC로 99.45% 순수한 Ⅰ-2 1.295 ㎏(86.65%)을 얻었다.

실시예 3

카르본산(2R,3R,4R,5R)-5-(4-아미노-2-옥소-2H-피리미딘-1-일)-4-플루오로-2-이소부톡시카르보닐옥시메틸-4-메틸-테트라히드로-푸란-3-일 에스테르 이소부틸 에스테르(Ⅰ-4)

THF(7 ㎖) 내의 Ⅰ-6(700 ㎎), DMAP(33 ㎎)의 현탁액을 염수(7 ㎖)로 희석했다. 희석한 NaOH를 pH가 약 11이 될 때까지 첨가하였다. 반응 혼합물을 얼음조(ice bath)에서 냉각시키고, 필요한 만큼 NaOH를 첨가하여 약 11로 pH를 유지한 교반된 2상 반응 혼합물에 이소부틸 클로로포르메이트(1.11 g)를 적가하였다. HPLC 분석은 약 15%의 모노카르보네이트로 오염된 디카르보네이트를 대부분 나타내었다. 첨가된 추가의 1 당량의 이소부틸 클로로포르메이트를 얼음처럼 차가운 용액에 적가하였다. HPLC는 거의 완전한 전환을 나타내었다. 결과 혼합물은 실온에서 밤새 놓아두었다. EtOAc(약 50 ㎖)를 첨가하고 수상의 pH는 농축 HCl로 약 7.5로 조정하였다. 상들을 분리하고 유기상을 물(3x)로 세척하고 증발 건조시켜 무색의 고체(약 1.22 g)를 얻었다. 고체를 뜨거운 아세톤에 용해시켜 맑은 용액을 만들고 실온으로 냉각시켜 큰 덩어리의 고체를 생산하였다. 고체를 IPA(약 20 ㎖)로 희석하여 슬러리를 만들고 이를 여과하고 나서 IPA 및 헵탄으로 순차적으로 세척하고 건조하여 HPLC에 의해 97.5% 순수한 0.85 g(68.5%)의 Ⅰ-4를 얻었다.

실시예 4

카르본산(2R,3R,4R,5R)-5-(4-아미노-2-옥소-2H-피리미딘-1-일)-4-플루오로-4-메틸-2-프로폭시카르보닐옥시메틸-테트라히드로-푸란-3-일 에스테르 프로필 에스테르; 염산 염(Ⅰ-5)

THF(7 ㎖) 내의 Ⅰ-6(700 ㎎, 2.70 mmol), DMAP(33 ㎎, 0.27 mmol)의 현탁액 및 희석한 염수(7 ㎖)에 희석한 KOH를 첨가하여 pH 약 11로 맞추었다. 반응은 약 5℃로 냉각하고 n-프로필 클로로포르메이트(1.0 g)를 교반한 2상 반응 혼합물에 적가하였다. HPLC 분석 결과, 약 20%의 모노카르보네이트와 함께 원하는 산물의 형성을 나타냈다. HPLC 분석으로 반응이 완결되었음을 나타낼 때까지 2번의 추가 첨가량(2x1 당량)의 프로필 클로로포르메이트를 차가운 용액에 첨가하였다. 반응 혼 합물을 EtOAc(30 ㎖)로 희석하고 수상의 pH를 농축 HCl을 이용하여 약 6.5로 맞추었다. 상들을 분리하고 유기상은 물(3x)로 세척하고 증발 건조시켜 무색의 고체(약 1.1 g)를 얻었다. 뜨거운 IPA 용액을 4N HCl(약 1 ㎖)로 산화시키고 증발 건조시켰다. 결과 고체는 뜨거운 EtOH(약 115 ㎖)에 재용해시키고 실온에서 밤새 교반하였다. 형성된 고체 덩어리는 여과시키고 잔류물은 메탄올/헵탄(1:1)으로 세척하였다. 남아있는 고체는 약 60 ℃에서 진공 건조하여 HPLC 분석에 의해 97.5% 순수한 0.325 g(28.5%)의 Ⅰ-5를 만들었다.

실시예 5

래트에서 약력학적 매개변수의 결정

200-250 g의 온전한 수컷 IGS Wistar Han Rat Crl:WI(GLx/BRL/Han)IGS BR(Hanover-Wistar)를 사용하였다. 군당 3마리의 래트를 각각의 용량 레벨의 실험 화합물에 사용하였다. 동물은 실험 내내 먹이 및 물에 대해 정상적인 접근을 허락하였다. 테스트 물질은 10 ㎎/kg의 Ⅰ-6과 등가인 용량으로 Captex355EP, Capmul MCM, EtOH 및 프로필렌 글리콜(30:20:20:30)을 포함하는 수성 현탁액으로 제형화하였고 위관영양법(gavage)에 의해 경구 투여하였다. 혈액 시료(0.3 ㎖)를 0.25, 0.5, 1, 3, 5 및 8 시간에 경정맥 캐뉼러(jugular cannula)로부터 그리고 24 시간에 심장천자(cardiac puncture)로 처리한 래트로부터 회수하였다. 칼륨 옥살레이트/NaF는 시료 획득 과정 동안 얼음에 보관한 시료에 첨가하였다. 시료를 가능한 한 빨리 -4℃의 냉장 원심분리기에서 회전시키고 혈장 시료를 분석 시까지 -80℃ 냉동고에 저장하였다. 분취량의 혈장(0.05 ㎖)을 0.1 ㎖의 아세토니트릴과 혼합하였다. 내부 표준(물에서 0.05 ㎖) 및 0.02 ㎖ 블랭크 용매를 첨가하였다. 처리되지 않은 래트로부터 온 0.05 ㎖ 분취량의 혈장을, 0.1 ㎖ 아세토니트릴, 메탄올:물(1:1) 내의 0.02 ㎖ 분취량의 표준 용액 및 물 내의 0.05 ㎖ 분취량의 내부 표준과 혼합하여 한 세트의 교정 표준을 제조하였다. 각각의 혈장 시료 및 교정 표준은 완전히 와동(vortex)시키고 5분 동안 3000 rpm에서 원심분리하여 단백질을 침전시켰다. 원심분리로부터 상층액(각각 100 ㎕)을 LC/MS/MS 분석용 200 ㎕의 수성 이동상을 포함하는 96-웰 플레이트로 이동시켰다.

시료 분석:

전구약물을 텐덤 질량 분석기를 갖는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC/MS/MS)를 사용하여 분석하였다. Thermo Aquasil C18 4.6 x 50 mm 컬럼(5 μM)을 분리를 위해 사용하였다. 전기분무 이온화(Electrospray Ionization(ESI))는 이온화 과정을 위해 사용하였다. 이동상 A는 물에 0.1% 포름산과 5mM 암모늄 아세테이트를 포함하였고 이동상 B는 0.1% 포름산과 MeOH를 포함하였다. 용리는 1 ㎖/분의 유속으로 다음의 구배로 수행하였다:

시간	% A	% B
0 분	95	5
0.5 분	95	5
0.8 분	85	15
1.5 분	85	15
2.8 분	10	90
3.8 분	10	90
3.9 분	95	5
5 분	95	5

실시예 6

원숭이에서 약력학적 매개변수의 결정

8-10 ㎏의 세 마리의 수컷 시노몰구스(Cynomolgus) 원숭이를 사용하였다. 동물은 실험 내내 먹이와 물에 정상적인 접근을 허용하였다. 동물의 약물 투여 및 부적당한 반응시 동물 무게를 기록하였다. 테스트 물질은 10 ㎎/㎏의 Ⅰ-6과 등가의 용량으로 히프로멜로스(2910, 50 cps), USP, 폴리소르베이트 80, NF, 벤질 알코올, NF(5.0, 4.0 및 9.0 ㎎/㎖) 및 멸균수(1.0 ㎖를 만들기에 충분한 양)를 포함하는 수성 현탁 제형으로 제형화하고 위관영양법에 의해 경구 투여하였다. 혈액 시료(0.5-1.0 ㎖)는 0, 0.083, 0.25, 0.5, 1, 3, 5, 8 및 24 시간에서 회수하였다. 시료 취급 및 분석은 래트 실험에 개시된 바와 같이 수행하였다. 5 ㎖ 소변 시료는 복용 전 및 0-8 시간에 각각의 원숭이로부터 채취했다. 소변 시료는 -80 ℃에 저장하고 LC/MS/MS로 분석하였다. 표준곡선은 NaF 및 칼륨 옥살레이트를 포함하는 블랭크 원숭이 혈장으로부터 준비하였다.

실시예 7

Caco 프로토콜

재료:

Krebs-Henseleit 완충용액 분말, 칼슘 클로라이드 디하이트레이트 및 나트륨 바이카르보네이트는 Sigma(St. Louis, MO)에서 구입했다. Caco-2 세포(~100 계대)는 Roche Basel로부터 입수했다. DMEM/고 배지, 4-(2-히드록시에틸)-1-피페라진에탄-술폰산(HEPES), 및 소 혈청은 JRH Bioscience(Lenexa, KS)로부터 입수했다. MEM 비필수 아미노산, L-글루타민, 페니실린 및 스트렙토마이신은 GIBCO Labs, Life Tech. LLC(Grand Island, NY)로부터 입수했다. Snapwell 세포 배양 삽입물(6.5 mm 직경, 1.12 cm², 0.4　㎛ 기공 크기)는 Costar(Cambridge, MA)로부터 입수했다.

세포 배양:

세포는 75cm² 플라스크에서 배양하였고 5% CO₂ 및 95% 공기의 대기 37 ℃로 유지하였다. 배양 배지는 5% 소 혈청 보충된 DMEM/고 배지, 25 mM HEPES, 1% MEM 비-필수 아미노산, 1% L-글루타민, 100 U/㎖ 페니실린 및 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신으로 이루어졌다. 배양은 1-3의 분열 비율로 매주 계대하였다. 투과도 연구를 위해서, Snapwell 삽입물 내의 Transwell 폴리카르보네이트 필터 상에 계대수 110-120인 Caco-2 세포를 400,000 세포/cm²의 밀도로 플레이팅하고 사용 전 7일 동안 배양하도록 했다.

Krebs-Henseleit 완충용액:

pH 6.5 및 7.4로 맞추고 10 mM 글루코스 및 2.5 mM CaCl₂를 포함하는 Krebs-Henseleit 바이카르보네이트 완충용액은 지시사항에 따라 제조하였다. 분말염은 밀리포아 물(Millipore water)로 필요한 부피의 약 90%에서 정량적으로 용해시켰 다. 칼슘 클로라이드 디하이드레이트 및 나트륨 바이카르보네이트는 1N HCl 또는 1N NaOH로 pH 조정하기 전에 첨가하였다. 추가되는 밀리포아 물은 용액이 최종부피가 되도록 첨가하였다. 용액은 0.22 마이크론의 기공률을 갖는 막을 사용하여 여과에 의해 멸균하여 사용할 때까지 냉장고(~20 ℃)에 저장하였다.

세포 준비:

분화된 세포는 Cell Culture Core Facility에서 입수하여 5% CO₂ 및 95% 공기의 대기에서 37℃에서 평형이 되도록 하였다. caco-2 단일층을 포함하는 Snapwell 삽입물은 37 ℃의 평형이 유지된 Krebs-Henseleit pH 7.4 완충용액에서 세척하였다.

방법:

세포 삽입물은 확산 챔버로 사용하였다. Krebs-Henseleit 완충용액의 pH는 맨 위(apical) 및 아래 옆(base lateral) 챔버에서 각각 6.5 및 7.4였고 위쪽(apical side)에서 기질의 최초 농도는 100 μM였다. 맨 위 챔버에서 테스트된 화합물로 세포를 5% CO₂ 및 95% 공기의 대기하 37 ℃에서 약 30 분 동안 전배양하였다. pH 6.5 Krebs-Henseleit 완충용액에서 100 μM 화합물로 세포 삽입물을 아래 옆 챔버에서 전평형 유지된 완충용액을 갖는 새로운 플레이트로 옮길 때 실험이 개시되었다. 분석을 위해, 0 분에 공여자 측, 30분에 공여자 및 수신자 측 모두로부 터 온 시료를 회수하였다.

실험 후 대조군:

Lucifer Yellow를 사용하여 확산 시스템의 성능을 평가하였다. 테스트 화합물에 대한 마지막 시료 획득 후에, Lucifer Yellow를 맨 위 챔버로 첨가하여 최초 농도가 100 μM이 되게 하였다. 60 분 배양 후에, 기저 챔버로부터 250 ㎕를 꺼내어 분석하였다.

투과 상수(P_app)의 계산:

P_app는 다음 식을 이용하여 계산하였다:

여기서 V는 수신자 용액의 부피(cm³)이고, A는 Snapwell 삽입물의 표면적(cm²)이고, C_o는 최초 농도(nM)이고, dC/dt는 시간에 대한 수신자 챔버에서의 농도 변화, 즉 수신자 챔버 내 농도 대 시간의 기울기(nM/분)이다. 각각의 시료 획득 시각에서의 농도는 실험에 따라 꺼낸 분취량이나 공여자 삽입물을 새로운 플레이트로 이동시킨 것을 간주하여 정정하였다.

실시예 8

몇 가지 경로를 통한 투여용 목적 화합물의 약학적 조성물은 실시예 8에 개시된 바와 같이 제조되었다.

경구 투여용 습윤 과립 제형용 조성물(A):

성분	% wt./wt.
과립내
활성 성분(I-2)	50.0
만니톨(Partech M200) USP	39.0
포비돈 K30 USP	5.0
크로스카멜로스 나트륨 NF	4.0
정제수 USP	과립용
과립외
크로스카멜로스 USP	2.0

성분을 혼합하고, 과립화하고 약 500 mg의 활성 화합물을 포함하는 단단한 젤라틴 캡슐로 분배했다.

경구 투여용 조성물(B):

성분	% wt./wt.
활성 성분(I-2)	50.0
만니톨(Partech M200)USP	30.0
포비돈 K30 USP	5.0
크로스카멜로스 나트륨 NF	9.5
미세결정성 셀룰로스	5.0
마그네슘 스테아레이트	0.5

성분은 물과 같은 용매를 사용하여 혼합하고 과립화하였다. 그리고나서 제형은 건조시켜 적당한 정제 기계로 500 mg의 활성 화합물을 포함하는 정제로 제형화하였다.

경구 투여용 조성물(C)

성분	% wt./wt.
활성 화합물	6 g
카르복시메틸셀룰로스	1 g
메틸 파라벤	0.15 g
프로필 파라벤	0.05 g
항료	0.035 ㎖
착색제	0.5 mg
증류수	100 ㎖가 되도록 충분히
염산	약 pH 4에 맞춰 충분히

상기 성분을 혼합하여 경구 투여용 현탁액을 만들었다.

좌약 제형(D):

성분	% wt./wt.
활성 성분	1.0%
폴리에틸렌글리콜 1000	74.5%
폴리에틸렌글리콜 4000	24.5%

상기 성분을 함께 용해시켜 수증기조에서 혼합하고 전체 2.5 g 무게를 포함하는 틀로 부었다.

앞서 개시된 특징이나 그의 특이적 형태나, 개시된 기능을 수행하는 수단이나 개시된 결과를 적절히 얻기 위한 방법이나 과정으로 표현된 다음의 청구항은 각각 또는 그러한 특징의 임의의 조합으로, 그 다양한 형태로 본 발명을 실현하기 위해 사용될 수 있다.

앞선 발명은 명확성 및 이해를 위해 설명 및 실시예에 의하여 아주 상세하게 개시되었다. 당업자에게 변화 및 변형은 부가된 청구항의 범위 내에서 실시될 수 있음이 분명할 것이다. 그러므로, 개시된 것은 예시하려는 것일 뿐 제한하려는 것이 아님이 이해될 것이다. 그러므로 본 발명의 범위는 개시된 것을 참조로 결정되 는 것이 아니라 대신 청구항이 권리화된 등가물의 전체 범위에 따라, 다음의 부가된 청구항을 참고로 결정되어야 한다.

본 발명에 인용된 모든 특허, 특허 출원 및 공개는 각각의 개별 특허, 특허 출원 또는 공개가 개별적으로 나타내는 것과 같은 정도까지 다목적으로 그 전체가 참조로 본 명세서에 포함된다.

Claims

식 Ⅰ의 화합물 또는 그의 산 부가 염.

상기에서:

R¹은 C_2-5 비분지 또는 분지된 알킬, C_2-5 비분지 또는 분지된 알케닐, C_2-5 비분지 또는 분지된 알키닐, C_2-5 저급 할로알킬, C_3-6 시클로알킬 및 C_2-4 알콕시로 이루어진 군에서 선택된다.
청구항 1에 있어서,

R¹은 에틸 또는 이소-프로필인 화합물.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,

R¹은 이소-프로필이고, 상기 화합물은 염산염 또는 황산염인 화합물.
청구항 1 또는 청구항 2에 있어서,

R¹은 이소-프로필이고, 상기 화합물은 염산염인 화합물.
청구항 1에 따른 화합물을 포함하는 C형 간염 바이러스(HCV)에 의해 매개되는 질환의 치료용 약제.
청구항 5에 있어서,

상기 약제는 약제를 필요로 하는 환자에게 치료적 유효량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 약제.
청구항 5에 있어서,

상기 약제는 약제를 필요로 하는 환자에게 1일 0.1 내지 10 g의 용량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 약제.
청구항 7에 있어서,

상기 약제는 추가로 하나 이상의 면역계 조절제 또는 HCV 복제를 억제하는 하나 이상의 항바이러스제와 함께 투여되는 것을 특징으로 하는 약제.
하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합된 청구항 1에 따른 화합물의 치료적 유효량을 포함하는 C형 간염 바이러스(HCV)에 의해 매개되는 질환의 치료용 약학적 조성물.
청구항 9에 있어서,

상기 치료적 유효량은 1일 0.1 내지 10 g인 약학적 조성물.
청구항 9 또는 청구항 10에 있어서,

추가로 하나 이상의 면역계 조절제 또는 HCV 복제를 억제하는 하나 이상의 항바이러스제를 추가로 포함하는 약학적 조성물.
염기 반응 조건 하에서 O-아실 뉴클레오시드 Ⅰ을 제공하기 위해 뉴클레오시드 Ⅱ를 선택적으로 O-아실화하는 방법;

상기에서 R¹은 C_2-5 비분지 또는 분지된 알킬, C_2-5 비분지 또는 분지된 알케닐, C_2-5 비분지 또는 분지된 알키닐, C_2-5 저급 할로알킬, C_3-6 시클로알킬 및 C_2-4 알콕시, 또는 그의 산 부가 염으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 방법은 다음의 단계를 포함한다:

(ⅰ) 불균질 수성 용매 혼합물 내에서 Ⅱ 및 DMAP(4-N,N-디메틸아미노피리딘)를 용해시키고 수성 염기를 첨가하여 pH를 7.5 내지 12로 조정하는 단계;

(ⅱ) 포화된 수성 NaCl을 선택적으로 첨가하여 2상의 반응 혼합물을 생산하는 단계;

(ⅲ) 아실화제 및 pH를 7.5 내지 12로 유지하도록 추가적인 염기를 첨가하는 단계;

(ⅳ) 반응을 모니터하여 전환이 완료되었을 때 상기 아실화제 및 염기 첨가를 중단하는 단계;

(ⅴ) O-아실 뉴클레오시드를 약학적으로 허용가능한 산과 선택적으로 접촉시켜 O-아실 뉴클레오시드의 산 부가 염을 형성하는 단계.
삭제
삭제
삭제
삭제
삭제