KR101199946B1 - Detoxifying methods for extracts of Corydalis Tuber and Pharbitidis seed, detoxified herbal extracts manufactured by the same, and compositions for preventing and treating a gastrointestinal dyskinetic disease comprising the herbal extracts - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 현호색 및 흑축 추출물의 독성 저감화 방법에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 생약 추출물의 독성 저감화를 위해 현호색과 흑축을 단독으로 또는 이들을 혼합하여 특정 온도 및 시간 조건에서 추출하는 것을 포함하는 현호색, 흑축 또는 이들의 혼합 추출물의 독성 저감화 방법, 이로부터 제조된 독성이 저감화된 생약추출물, 및 그 생약추출물을 함유하는 위장관 운동장애질환 치료용 조성물에 관한 것이다.
The present invention relates to a method for reducing the toxicity of corydalis and black shaft extract, more specifically, to reduce the toxicity of herbal extracts, including the extract of the cortex and black shaft alone or a mixture of them at a specific temperature and time conditions The present invention relates to a method for reducing toxicity of these mixed extracts, a medicinal herb extract reduced in toxicity, and a composition for treating gastrointestinal motility disorders containing the herbal extract.
위장관 운동 장애 질환군 중의 대표적인 기능성 소화불량증(functional dyspepsia; FD)은 위산, 위 운동 이상, 과감각, 헬리코박터 파이로리(Helicobacter pylori) 감염, 위를 자극하는 국소인자의 증가, 스트레스, 유전적 원인 등 여러 가지 요인이 복잡하게 작용하는 질환으로, 내시경이나 조직학적 및 생화학적인 기질적(organic) 이상 소견이 없는데도 불구하고 상복부 통증 혹은 불쾌감이 상부 위장관에 관련되어 산발적으로 일어나는 경우에 진단되는 새로운 증후군으로 아직까지 병태생리가 정확하게 밝혀지지 않았다. 이 때 불쾌감에 속하는 특징적인 증상으로는 상복부 포만감, 조기 만복감, 팽만감, 오심, 구역, 트림, 구토, 헛구역질 등이 있으며, 이러한 증상들은 서로 동반되어 나타날 수 있다.Typical functional digestion of gastrointestinal motility disorders diseases bulryangjeung (functional dyspepsia; FD) is a multiple, such as gastric, gastric motility or more, drastic angle, Helicobacter pylori (Helicobacter pylori) increase in local factors, infections, stimulating the stomach, stress, genetic cause It is a new syndrome that is diagnosed when sporadic pain or discomfort occurs sporadically related to the upper gastrointestinal tract despite the absence of endoscopy or histological and biochemical organic abnormalities. Pathophysiology is not known exactly. At this time, the characteristic symptoms belonging to the discomfort include abdominal satiety, early bloating, bloating, nausea, nausea, belching, vomiting, and nausea, and these symptoms may be accompanied by each other.
위장관 운동은 자율신경에 의한 길항적 이중지배를 받으며, 운동을 항진시키는 자극계와 운동을 저하시키는 억제계가 균형을 이루고 있다. 콜린효능성 신경말단에서 유리되는 아세틸콜린(ACh)은 위장관 운동을 촉진하는데, 아세틸콜린 분해효소(AChE)에 의해 그 효력을 상실한다. 한편, 도파민은 콜린 효능성 신경의 절전 섬유에 있는 도파민 수용체(주로 D2)에 작용하여 ACh의 작용을 억제하고 위장관 운동을 저하시킨다. 이러한 위장관의 운동 장애와 관련된 주요 치료제는 위장 운동 촉진제(prokinetics), H2 수용체 길항제, PPIs(Proton pump inhibitors) 등이 주로 사용된다.Gastrointestinal motility is subjected to antagonistic dual domination by autonomic nerves, and the balance between the stimulatory system that promotes exercise and the suppressor system that decreases exercise is balanced. Acetylcholine (ACh), released from cholinergic nerve endings, promotes gastrointestinal motility, which is lost by acetylcholine degrading enzyme (AChE). Dopamine, on the other hand, acts on dopamine receptors (primarily D2) in the power-saving fibers of cholinergic neurons, inhibiting the action of ACh and lowering gastrointestinal motility. The main therapeutic agents related to the movement disorders of the gastrointestinal tract are mainly used as gastric prokinetics, H2 receptor antagonists, and proton pump inhibitors (PPIs).
위장관 운동 촉진제는 도파민 수용체에 대한 억제제(antidopaminergic agent), 세로토닌 증강제(serotonergic agent) 또는 모틸린 수용체 작용제(motilin receptor agonist)로 작용하여 소화관 평활근 수축을 자극하게 되어 하부 식도 괄약근의 압력을 높이고 식도 청소율 및 위 배출 기능을 증가시키며, 위장관 통과 시간을 단축한다. 위장관 운동을 활성화시키거나 구토를 억제하는 약으로 현재 쓰이고 있는 약제로는 메토클로프라마이드(metoclopramide), 돔페리돈(domperidone), 시사프라이드(cisapride), 이토프라이드(itopride), 레보술피라이드(levosulpiride), 모사프라이드(mosapride) 등이 있다. 하지만 이러한 약제들은 저하된 소화관의 운동기능을 회복시킴으로써 만성 위염이나 위 절제 후 증후군 등에 수반되는 소화기 증상을 개선하지만 각 약물마다 부작용을 안고 있어 처방에 문제를 겪고 있다.Gastrointestinal motility promoters act as inhibitors of dopamine receptors, serotonergic agents, or motilin receptor agonists to stimulate gastrointestinal smooth muscle contraction, increasing pressure in the lower esophageal sphincter, increasing esophageal clearance and Increases gastric emptying and shortens gastrointestinal transit time. Metoclopramide, domperidone, cisapride, itopride, levosulpiride are drugs that are currently being used to activate gastrointestinal motility or inhibit vomiting. , Mosapride, and the like. However, these drugs improve the digestive tract symptoms associated with chronic gastritis or gastrectomy syndrome by restoring the exercise function of the digestive tract, but each drug has side effects and thus suffers from prescription problems.
기능성 소화 불량증은 위장관 기능이상의 흔한 장애로서 정신적 스트레스와 관련이 있어 신경증, 불안, 우울증 상이 함께 나타나기 때문에 정신사회적 치료가 도움이 되고 있으며, 복합적인 질환의 특성상 한방제제를 양약과 함께 처방하는 경우에도 증상이 더욱 개선되는 것으로 나타났다. 따라서 기능성 소화 불량증과 같이 여러 가지 증상을 보이면서 한 가지 원인으로만 설명될 수 없는 질환은 한 가지 약제의 처방으로는 효과적이지 못하며, 복합기전(multi-mechanism)을 가지는 위장운동 촉진제의 개발이 필요하다.Functional dyspepsia is a common disorder of gastrointestinal dysfunction, which is related to mental stress, so neurosocial, anxiety, and depressive symptoms are shown. Psychosocial treatment is also helpful. This has been shown to be further improved. Therefore, diseases such as functional dyspepsia, which show various symptoms and cannot be explained by only one cause, are not effective with the prescription of one drug, and development of gastrointestinal motility accelerator with multi-mechanism is needed. .
또한, 현재까지 상기의 약물들은 소화관 운동장애에 대하여 효과가 있으나, 여러 가지 독성 및 부작용이 존재하여 실제적으로 안전한 약물의 개발이 필요한 상황이며, 이와 관련하여 부작용 없이 기능성 위장질환을 치료, 개선 또는 예방할 수 있는 조성물의 필요성이 요구되고 있는 실정이다.In addition, to date, the above drugs are effective against dyskinesia, but there are various toxicities and side effects, and there is a need for the development of a practically safe drug. In this regard, the treatment, improvement or prevention of functional gastrointestinal diseases without side effects can be achieved. There is a need for a composition that can be used.
그러나 생약은 한약의 원료가 되는 천연약물이고 전통 천연약물로써 한방의 치료목적으로 수천년 동안 사용되어 왔다. 1977년부터 본격적으로 한방의 의료보험 수혜에 따라 즉, 생약의 액기스제는 의료보험 해당 약품이 된 이후 한약제제 뿐 아니라 생약제제 추출 및 분획 등에 의한 천연물 신약으로서 이용이 확대되고 있는 실정이지만 이들의 안전성 및 독성에 관한 현대 과학적 연구는 매우 미미하다. However, herbal medicine is a natural medicine that is the raw material of Chinese medicine and has been used for thousands of years as a traditional natural medicine for the treatment of oriental medicine. Since the medical benefits of herbal medicines have been in full swing since 1977, that is, the extracts of herbal medicines have been used as natural medicine new drugs by extracting and fractionating herbal medicines as well as herbal medicines since they became medical insurance-related drugs. And modern scientific research on toxicity is insignificant.
2004년 4월 파이넨셜 뉴스를 보면 민간요법이나 대체보완요법제, 건강기능식품 등 안전성이 확보되지 않은 생약의 섭취가 독성간염유발 등 생체부작용 가능성을 높인다는 연구결과가 나와 논란되었으며 특히 식품의약품안전청 국립독성연구원은 한림대 의대 김동준 교수(내과)에게 의뢰해 ‘식이유래 독성간염의 진단 및 보고체계 구축을 위한 다기관 예비연구’를 실시한 결과 이같이 나타났다고 밝혔다.In the April 2004 financial news, research results showed that the intake of unsafe drugs such as folk remedies, alternative complementary therapies, and health functional foods increased the possibility of side effects such as toxic hepatitis, especially the Korea Food and Drug Administration. The National Toxic Research Institute, which was commissioned by Professor Kim Dong-jun (Medicine) of Hallym University Medical School, conducted the 'multi-center preliminary study to establish a diagnosis and reporting system for dietary toxic hepatitis'.
김교수의 연구에 따르면 연구결과 독성간염의 90.8%는 한약, 한약재, 민간요법, 기능성식품 섭취로 인해 발생되는 것으로 나타났다.According to Professor Kim's research, 90.8% of toxic hepatitis is caused by ingestion of herbal medicine, herbal medicine, folk medicine, and functional food.
독성간염의 원인으로는 한약과 한약재 61.7%(34건), 민간요법과 건강식품 29.1%(16건), 일반의약품 7.3%(3건) 순으로 파악됐으며, 독성간염이 간질환 환자에게 중복 발생되어 사망한 예도 3.6%에 달했다.The causes of toxic hepatitis were 61.7% (34 cases) of herbal medicines and herbs, 29.1% (16 cases) of folk medicine and health foods, and 7.3% (3 cases) of general medicines. Died 3.6%.
한편, 대한민국 등록특허 제10-0861438호에는 백개자, 현호색, 흑축 및 보두 등의 한약재를 에탄올 등으로 추출한 생약추출물 및 이를 함유하는 조성물이, 5-HT3 길항작용 및 5-HT4 효능작용 기전을 통하여 위장관의 운동을 유의성 있게 증가시킴으로, 위장관운동장애 질환의 치료 및 예방에 효과적임을 보고하고 있다. 특히 이러한 생약추출물 중 현호색(Corydalis Tuber)은 양귀비과(Papaveraceae)의 들현호색(Corydalis ternata Nakai)과 그 밖의 동속식물의 덩이줄기로, 베르베린(Berberine)과 1-카나딘(1-Canadine), 프로토핀(Protopine), 1-테트라히드로코프티신(1-Tetrahydrocoptisine)을 함유하고, 진통작용과 진정, 진경, 진토, ACTH 분비항진작용을 한다 (대한약전V 제2부 pp664). 독성에 대하여는 1.5g 내지 9g을 내복하면 혈관장애, 호흡억제 및 심장기능장애가 발생하고 중독현상이 일어난다는 보고가 있으면 최근 연구에서 비교적 독성이 크다고 밝혀졌고 임상에서 사용 시 독을 제거하는 약재에 포함하는 것이 옳다는 견해를 제시하였다 (동서의학 6(1) pp87-99. 2008).Meanwhile, Korean Patent No. 10-0861438 discloses a herbal extract obtained by extracting herbal medicines such as Baekjaja, Hyunho-color, black shaft and bodu with ethanol, and the composition containing the same, through the mechanism of 5-HT3 antagonism and 5-HT4 agonism. Significantly increasing the exercise of, has been reported to be effective in the treatment and prevention of gastrointestinal motility disorders. Especially among these herbal extracts, Corydalis Tuber) are those of Corydalis Papaveraceae (Papaveraceae) (Corydalis ternata Nakai) and with tubers of other dongsok plant, berberine (Berberine) and 1-Kana Dean (1-Canadine), Proto pin (Protopine), 1-tetrahydronaphthalene Contains 1-Tetrahydrocoptisine and has analgesic and sedative effects, soothing, jingling, jinto, and ACTH secretion (KPV Part 2 pp664). As for toxicity, when 1.5g to 9g is used, vascular disorders, respiratory depression and cardiac dysfunction occur, and if there are reports of poisoning, recent studies have found that it is relatively toxic. It suggested that it is right (East-West Medicine 6 (1) pp87-99. 2008).
흑축(Pharbitidis seed, 견우자)은 메꽃과(Convolvulaceae)의 나팔꽃 (Pharbitis nil Choisy)의 씨로 지방유 약 11%와 수지성 배당체인 파비틴(pharbitin)을 2% 함유하고 있고, 사하작용과 이뇨작용, 살충작용이 알려져 있다 (대한약전V 제2부 pp651). 독성에 대하여는 민간에서는 독성이 강하여 하약으로 분류하고 있으며 장 계통에 자극작용이 있으며 중한 경우 중추신경 계통에 손해를 끼쳐서 일련의 중독증상을 나타낸다고 보고되었다. 또한 연속해서 195g 복용하면 사망에 이른다는 보고가 있다 (동서의학 33(2) pp1-13. 2008). Pharbitidis seed (Powbite) is a morning glory ( Pharbitis ) of the Convolvulaceae family. nil Choisy ) seeds contain about 11% fat oil and 2% pharbitin, a resinous glycoside, known for hypothalamic, diuretic, and insecticidal effects (KP Part 2 pp651). Toxicity has been reported to be classified as a laxative because it is highly toxic in the private sector, and it has been reported that it has a stimulating effect on the intestinal system and, in the severe case, causes damage to the central nervous system and shows a series of poisoning symptoms. In addition, 195g of consecutive doses have been reported to cause death (East-West Medicine 33 (2) pp1-13. 2008).
이와 같이, 현호색 및 흑축의 경우 유용한 효능 뿐 아니라 부작용에 대하여 알려져 있어 한약재로 사용할 때 볶는 방법 등의 수치법을 사용한다. 특히 독초로 분류된 생약을 추출하여 복용할 경우에는 예기치 못할 독성작용이 나타날 가능성과 임상에 사용할 독성허용범위가 매우 좁아져서 안전성 측면에서 주의해야할 측면도 있다. As such, in the case of Hyunho colors and black shafts, as well as the useful effects are known about the side effects, using a numerical method such as roasting method when used as a herbal medicine. In particular, when taking herbal medicines classified as poisonous toxins, the possibility of unexpected toxic effects and the tolerance range for clinical use are very narrow, so there are aspects to be careful in terms of safety.
이에, 본 발명자는 흑축 추출물, 현호색 추출물 또는 흑축과 현호색의 혼합 추출물의 경우 신장 독성, 간독성 및 독성으로 인한 치사 등의 문제점이 있음에도 불구하고 독성 및 부작용 제거에 대한 어떠한 내용도 문헌 또는 특허에 개시되어 있지 않고 있는 점에 착안하여, 흑축 추출물, 현호색 추출물 또는 흑축과 현호색의 혼합 추출물 제조 시 추출온도 및 추출시간을 달리하여 추출물의 독성을 저감화시킴으로써 생약제로서 유용하게 사용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.
Thus, the present inventors have disclosed in the literature or patent any information on the elimination of toxicity and side effects in spite of the problems such as mortality due to kidney toxicity, hepatotoxicity and toxicity in the case of black shaft extract, corydalis extract or mixed extracts of black shaft and corydalis Focusing on the fact that it is not, it is confirmed that it can be useful as a herbal medicine by reducing the toxicity of the extract by varying the extraction temperature and extraction time in the preparation of black shaft extract, corydalis extract or mixed extract of black shaft and corydalis color, and completed the present invention. It was.
따라서, 본 발명의 주된 목적은 생약재의 독성을 저감화시키면서 그 본래의 효능을 발휘할 수 있는 현호색 및 흑축 추출물의 독성 저감화 방법을 제공하는 데 있다.Therefore, the main object of the present invention is to provide a method for reducing the toxicity of Hyunho color and black shaft extract that can exhibit the original efficacy while reducing the toxicity of the herbal medicine.
본 발명의 다른 목적은 상기 방법으로 제조된 현호색, 흑축 또는 이들의 혼합 생약 추출물을 제공하는데 있다.
It is another object of the present invention to provide an extract of cinnabar red, black shaft or mixed herbal medicines prepared by the above method.
본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 현호색과 흑축을 단독으로 또는 이들을 혼합하여 10 내지 15℃의 온도조건에서 24 내지 72시간 동안 용매추출 하는 것을 포함하는 현호색, 흑축 또는 이들의 혼합 추출물의 독성 저감화 방법을 제공한다.According to one aspect of the present invention, the present invention is a toxicity of Hyunho color, black axis or mixed extract thereof comprising the solvent extraction for 24 to 72 hours at a temperature of 10 to 15 ℃ alone or mixed with Hyunho color and black axis Provide a method of reduction.
본 발명에 있어서, 상기 현호색은 위장관운동장애에 효과가 있는 것으로 알려져 있어 유용한 생약재로서 사용될 수 있으나, 유용한 효능 뿐 아니라 비교적 독성이 크다고 알려져 있어 그 사용에 제약이 따른다. 또한, 상기 흑축은 장계통에 자극작용이 있으나 독성이 강하여 중독증상을 나타내는 경우도 있는 것으로 알려져 있다. 이와 같이, 현호색 및 흑축 추출물은 고농도 또는 장기간 사용할 경우 독성이 커 인체에 바람직하지 못한 문제를 야기할 수 있고, 저농도로 사용할 경우는 효과적인 약효를 기대할 수 없는 문제를 야기한다.In the present invention, the cortex is known to have an effect on gastrointestinal motility disorders can be used as a useful herbal medicine, but is known to be relatively toxic as well as useful efficacy is limited in its use. In addition, the black axis is known to have a stimulating effect on the intestinal system, but the toxicity is strong to show symptoms of poisoning. As such, Hyunho red and black shaft extracts are highly toxic when used at high concentrations or for long periods of time, which may cause undesirable problems for the human body, and when used at low concentrations, effective effects cannot be expected.
따라서 생약 추출물의 활용 측면에서, 본래의 효능을 발휘하면서도 세포독성이 저감된 새로운 방법의 개발이 요구된다 할 것인데, 본 발명자들은 위장관운동장애에 효과가 있는 생약 추출물에 대해 특정 추출온도 및 시간 조건에서 독성이 현저히 줄어드는 사실을 발견하고 본 발명을 완성한 것이다.Therefore, in terms of the use of herbal extracts, it would be required to develop a new method with reduced cytotoxicity while exhibiting inherent efficacy, and the present inventors have a specific extraction temperature and time conditions for the herbal extracts that are effective for gastrointestinal motility disorders. The present invention has been completed by discovering that the toxicity is significantly reduced.
또한, 현호색 및 흑축 추출물의 독성이 줄어든다 하여도 생약재의 본래 효능을 유지할 수 없다면 문제가 될 수 있는데, 본 발명의 방법에 의해 제조된 현호색 또는 흑축 추출물은 독성이 줄어들면서도 생약제의 본래 효능인 위장관운동장애에 대한 효과에는 전혀 감소되지 않았다.In addition, even if the toxicity of the corydalis and black shaft extract is reduced, it may be a problem if the original efficacy of the herbal medicine can not be maintained. There was no reduction in the effects on the disorder.
본 발명에 있어서, 상기 용매추출은 현호색 및 흑축물의 각각 분쇄물 또는 혼합 분쇄물을 1 내지 25배 분량의 물, 에탄올 또는 메탄올과 같은 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물과 에탄올의 혼합용매, 더욱 바람직하게는 30-70% 에탄올 수용액으로 추출할 수 있다.In the present invention, the solvent extraction is 1 to 25 times the amount of water or ethanol or methanol, such as lower alcohol or mixed solvents thereof, It can be extracted with a mixed solvent of water and ethanol, more preferably with an aqueous 30-70% ethanol solution.
또한 상기 용매를 이용한 추출방법으로서 환류냉각추출, 초음파추출 등 통상의 식물추출방법을 이용할 수 있으나, 10 내지 15℃의 온도 조건을 유지하기 위해서는 환류냉각장치를 이용하여 추출하는 것이 바람직하다.
In addition, a conventional plant extraction method such as reflux cooling extraction and ultrasonic extraction may be used as the extraction method using the solvent, but in order to maintain a temperature condition of 10 to 15 ° C, it is preferable to extract using a reflux cooling device.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 상기 방법으로 제조된 독성이 저감화된 현호색, 흑축 또는 이들의 혼합 생약 추출물을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention provides an extract of the present invention with reduced toxicity corydale, black shaft or mixed herbal medicines thereof.
또한, 상기 생약 추출물을 유효성분으로 함유하는 위장관 운동장애질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition for preventing or treating gastrointestinal motility disorders containing the herbal extract as an active ingredient.
본 발명의 방법에 따른 생약 추출물은 특정 온도 및 시간조건에서 추출됨으로써 독성이 저감화되었음에도 불구하고 그 본래의 약효가 감소되지 않았으며 오히려 20℃ 이상의 온도 조건에서 추출된 생약 추출물에 비해 위장관 운동장애질환에 대한 효과가 상승된다 (표 4 참조). 따라서 본 발명의 방법에 따라 제조된 생약 추출물은 독성이 저감화되어 그 사용 범위에 제약이 없으면서도 위장관 운동장애 질환의 치료 및 개선에 유용하게 사용될 수 있다.The herbal extract according to the method of the present invention was extracted at a specific temperature and time conditions, even though the toxicity was reduced, the original drug efficacy was not reduced, but rather, compared to the herbal extract extracted at a temperature of 20 ° C. or higher, Effect is elevated (see Table 4). Therefore, the herbal extract prepared according to the method of the present invention can be usefully used for the treatment and improvement of gastrointestinal motility disorders without limiting its range of use due to reduced toxicity.
상기 예방 또는 치료용 조성물이 약학 조성물로 사용되는 경우, 본 발명의 방법에 따라 제조된 흑축 추출물, 현호색 추출물 또는 흑축과 현호색의 혼합 추출물 외에 추가로 기능성 소화불량을 포함하는 위장관 운동장애 질환 치료에 효과가 있는 성분을 더 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 약학 조성물은 돔페리돈(Domperidone), 메토클로프라마이드(metoclopramide), 레보설프라이드(levosulpiride), 모사프라이드(mosapride), 이토프리드(itopride), 에리트로마이신(erythromycin), 시사프리드(cisapride) 등을 더 포함할 수 있다.When the prophylactic or therapeutic composition is used as a pharmaceutical composition, it is effective in treating gastrointestinal motility disorders including functional dyspepsia in addition to black shaft extract, corydalis extract or mixed extract of black shaft and corydalis prepared according to the method of the present invention. It may further comprise a component. For example, the pharmaceutical composition may include domperidone, metoclopramide, metoclopramide, levosulpiride, mosapride, itopride, erythromycin, and cisapride. cisapride) and the like.
또한 상기 약학 조성물은 위장관 운동장애 질환을 치료 또는 개선하기 위하여 단독 또는 수술, 호르몬 치료, 약물 치료 또는 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition may be used alone or in combination with methods using surgery, hormone therapy, drug treatment or biological response modifiers to treat or ameliorate gastrointestinal dyskinesia.
본 발명의 약학 조성물은 통상의 방법에 따른 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may further comprise a suitable carrier, excipient or diluent according to conventional methods.
상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 또는 광물유를 들 수 있다.Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, mannitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose , Methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate or mineral oil.
또한 상기 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 바람직하게는 경구투여 될 수 있다.In addition, the composition may be administered orally or parenterally (eg, applied intravenously, subcutaneously, intraperitoneally, or topically) according to a desired method, and preferably, orally.
본 발명의 조성물은 투여를 위하여 여러 가지 제제로 제형화될 수 있다. 예를 들면, 정제, 피복 정제, 캡슐제, 환제, 과립제, 좌약, 액제, 현탁액제, 에멀전제, 페이스트제(pastes), 연고제, 겔제, 크림제, 로션제, 산제 또는 분무제로 제형화될 수 있다.The compositions of the present invention can be formulated into a variety of formulations for administration. For example, it can be formulated into tablets, coated tablets, capsules, pills, granules, suppositories, solutions, suspensions, emulsions, pastes, ointments, gels, creams, lotions, powders or sprays. have.
상기 조성물은 경구 투여를 위하여 정제, 환제, 산제, 과립제 또는 캡슐제 등의 고형제제 또는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등의 액상제제로 제형화 될 수 있다. 또는 상기 조성물을 비경구 투여를 위하여 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제 또는 좌제 등으로 제형화될 수 있다.The composition may be formulated into solid preparations such as tablets, pills, powders, granules or capsules or liquid preparations such as suspensions, solvents, emulsions or syrups for oral administration. Alternatively, the composition may be formulated in sterile aqueous solution, non-aqueous solvent, suspension, emulsion, lyophilized or suppository for parenteral administration.
본 발명의 조성물은 담체, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제, 윤활제 및 첨가제를 사용하여 서방성 또는 속방성 제제로 제형화 될 수 있다. 예를 들면, 본 발명에 따른 약학 조성물의 유효 성분을 특정 부위에 방출할 수 있도록 서방성 또는 속방성 제제로 제형화 될 수 있다.The compositions of the present invention may be formulated into sustained or immediate release formulations using carriers, diluents, dispersants, surfactants, binders, lubricants and additives. For example, it may be formulated as a sustained release or immediate release preparation to release the active ingredient of the pharmaceutical composition according to the present invention to a specific site.
본 발명의 조성물을 서방성 제제로 제형화하는 경우, 장용성 고분자, 수불용성 중합체, 소수성 화합물 또는 친수성 고분자등의 중합성 물질 또는 왁스와 같은 봉매제 조성물을 사용하여 서방형으로 제형화할 수 있다. 예를 들면, 상기 약학 조성물을 정제, 캡술제, 환제 또는 과립제로 제형화하는 경우, 외부에 코팅막을 형성하여 서방성으로 제형화할 수 있다.When the composition of the present invention is formulated in a sustained release formulation, it may be formulated in a sustained release form using a sealing material composition such as a wax or a polymerizable material such as an enteric polymer, a water insoluble polymer, a hydrophobic compound or a hydrophilic polymer. For example, when the pharmaceutical composition is formulated into tablets, capsules, pills, or granules, it may be formulated in a sustained release by forming a coating film on the outside.
상기 조성물의 제형화에 있어서, 첨가되는 담체, 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 분산제, 계면활성제 또는 희석제 등의 부형제 및 첨가제의 함량을 특별히 한정되는 것을 아니며, 통상의 제형화에 사용되는 함량 범위 내에서 적절하게 조절될 수 있다.In formulating the composition, the content of excipients and additives such as carriers, fillers, weighting agents, binders, wetting agents, disintegrants, dispersants, surfactants, or diluents to be added is not particularly limited, and is used in conventional formulations. It can be adjusted appropriately within the content range.
본 발명에 따른 약학 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 투여기간 또는 간격, 배설률, 체질 특이성, 제제의 성질, 성질질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 예를 들면, 본 발명의 약학 조성물은 상기 혼합 추출물이 추출되기 전의 혼합 분쇄물 기준으로 약 0.01 내지 10 g/kg, 바람직하게는 1 내지 5 g/Kg의 양으로 투여될 수 있으며, 투여 횟수는 일일 1 회 내지 수회로 나우어 투여할 수 있다.The dosage of the pharmaceutical composition according to the present invention depends on the weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, method of administration, duration or interval of administration, excretion rate, constitution specificity, the nature of the preparation, the severity of the disease, etc. The range varies. For example, the pharmaceutical composition of the present invention may be administered in an amount of about 0.01 to 10 g / kg, preferably 1 to 5 g / Kg, based on the mixed ground before the mixed extract is extracted, the number of administration It can be administered once to several times daily.
본 발명에 따른 약학 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 특별히 제한되지 않으며, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention can be administered to mammals such as rats, mice, livestock, humans by various routes. All modes of administration are not particularly limited and can be administered, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or intracerebroventricular injection.
본 발명의 독성이 저감화된 흑축 추출물, 현호색 추출물 또는 흑축과 현호색의 혼합 추출물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.
Since the toxicity of the present invention is reduced to black shaft extract, corydalis extract or mixed extract of black shaft and corydalis is almost no toxicity and side effects can be used with confidence even for long-term use for prophylactic purposes.
이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르면 현호색과 흑축은 그 본래의 유용한 효능이 있음에도 불구하고 독성이 존재하는 생약제로 알려져 있어 그 사용에 제한이 있다. 그러나 본 발명의 특정 추출온도 및 추출시간에 따른 방법으로 제조된 현호색과 흑축 추출물은 그 본래의 효능을 발휘하면서도 독성이 저감화된 생약 추출물로서 사용될 수 있다. 따라서 독성이 저감화된 현호색과 흑축 추출물을 이용하여 위장관장애에 효과가 있는 안전한 치료제로서 사용될 수 있다.
As described above, according to the present invention, even though the present color and black axis have its original useful efficacy, it is known as a herbal medicine in which toxicity exists, and thus its use is limited. However, Hyunho color and black shaft extract prepared by the method according to the specific extraction temperature and extraction time of the present invention can be used as a herbal extract with reduced toxicity while reducing its original efficacy. Therefore, it can be used as a safe treatment that is effective in gastrointestinal disorders by using the ulcer and black axis extract reduced toxicity.
도 1은 본 발명에 따른 생약 추출물의 독성 저감화 방법을 도식화한 것이다.1 is a schematic diagram showing a method for reducing toxicity of herbal extracts according to the present invention.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.
시료의 준비Preparation of sample
본 발명에 사용한 흑축 및 현호색은 2011년 12월경 서울 경동 약령시장의 한약 재료상에서 구입하여 준비하였다.
The black shaft and Hyunho color used in the present invention were prepared and purchased on the herbal medicine material of the Yangnyeong market in Gyeongdong, Seoul, around December 2011.
실시예Example 1. 현호색 추출물 제조 1. Corydalis Extract Preparation
환류냉각관을 부착시킨 둥근 플라스크에 건조된 현호색(Corydalis Tuber)의 오염물을 제거한 뒤 분쇄하였다. 상기 분쇄된 현호색 50 g에 50%의 에탄올 수용액 500 mL을 가해 10 내지 15℃에서 12 내지 120시간 추출하고 추출물을 여과한 다음 40-50℃ 조건에서 감압농축 하여 고형물 80.5%의 현호색 추출물 연조엑스 2.5±0.1g을 수득하여 하기 실험예의 시료로 사용하였다.
Corydalis dried in a round flask with reflux condenser The contaminants of the tuber ) were removed and then ground. 50 g of 50% ethanol aqueous solution was added to 50 g of the pulverized cinnabar red color, extracted 12 to 120 hours at 10 to 15 ° C, and the extract was filtered and concentrated under reduced pressure at 40 to 50 ° C. ± 0.1 g was obtained and used as a sample of the following experimental example.
실시예Example 2. 2. 흑축Black axis 추출물 제조 Extract manufacturer
환류냉각관을 부착시킨 둥근 플라스크에 건조된 흑축(Pharbitis seed)의 오염물을 제거한 뒤 분쇄하였다. 상기 분쇄된 흑축 50 g에 50%의 에탄올 수용액 500 mL을 가해 10 내지 15℃ 에서 12 내지 120시간 추출하고 추출물을 여과한 다음 40-50℃ 조건에서 감압농축 하여 흑축 추출물 연조엑스 2.5±0.1g 수득하여 하기 실험예의 시료로 사용하였다.
The contaminants of the dried Pharbitis seed were removed from the round flask to which the reflux condenser was attached and then ground. 50 g of 50% ethanol aqueous solution was added to 50 g of the pulverized black shaft, which was extracted for 12 to 120 hours at 10 to 15 ° C., and the extract was filtered and concentrated under reduced pressure at 40 to 50 ° C. to obtain 2.5 ± 0.1 g of black shaft extract soft extract. It was used as a sample of the following experimental example.
실시예Example 3. 현호색과 3. Coral color 흑축Black axis 혼합추출물 제조 Mixed Extract Manufacturing
환류냉각관을 부착시킨 둥근 플라스크에 건조된 현호색과 흑축의 오염물을 제거한 뒤 분쇄하였다. 상기 분쇄된 현호색 100 g과 흑축 20 g을 혼합한 후 50%의 에탄올 수용액 1200 mL을 가해 10 내지 15℃에서 12 내지 120시간 추출하고 추출물을 여과한 다음 40-50℃ 조건에서 감압농축 하여 현호색 및 흑축 혼합 추출물 연조엑스 6.0±0.2g를 수득하여 하기 실험예의 시료로 사용하였다.
The round flask attached with the reflux condenser was pulverized after removing dried condensate and black shaft. 100 g of the pulverized cinnabar red and 20 g of black shaft were mixed, and then, 1200 mL of 50% aqueous ethanol was added thereto, followed by extraction at 10 to 15 ° C. for 12 to 120 hours, and the extract was filtered and concentrated under reduced pressure at 40 to 50 ° C. 6.0 ± 0.2 g of black shaft extract extract soft extract was used as a sample of the following experimental example.
비교예Comparative example 1. 현호색 추출물 제조 1. Corydalis Extract Preparation
상기 실시예 1에서 추출 온도를 20 내지 80℃ 에서 추출하는 조건 외에는 동일하게 제조하였다.
Except for extracting the extraction temperature in 20 to 80 ℃ in Example 1 was prepared in the same manner.
비교예Comparative example 2. 2. 흑축Black axis 추출물 제조 Extract manufacturer
상기 실시예 2에서 추출 온도를 20 내지 80℃에서 추출하는 조건 외에는 동일하게 제조하였다.
Except for extracting the extraction temperature in 20 to 80 ℃ in Example 2 was prepared in the same manner.
비교예Comparative example 3. 현호색과 3. Coral color 흑축Black axis 혼합추출물 제조 Mixed Extract Manufacturing
상기 실시예 3에서 추출 온도를 20 내지 80℃에서 추출하는 조건 외에는 동일하게 제조하였다.
Except for extracting the extraction temperature in 20 to 80 ℃ in Example 3 was prepared in the same manner.
실험예Experimental Example 1. 세포독성 실험 1. Cytotoxicity Test
본 발명에 따른 흑축 추출물, 현호색 추출물 또는 흑축과 현호색의 혼합 추출물의 세포 독성을 알아보기 위하여, 정상세포주인 vero cell(신장 세포주, monkey kidney cell line; KCLB 10081)과 chang cell(간 세포주, human liver cell line; ATCC CCL13)은 각각 한국 세포주 은행(Korean Cell Lines Bank) 및 미국유전자은행(American Type Culture Collection)으로부터 분양받아 사용하였다. vero cell과 chang cell의 배지로는 10% 우태아혈청(fetal bovine serum, FBS), 1% 항생제가 첨가된 DMEM(Dulbecco’s modified eagle medium)를 사용하였고, 38℃에서 5% CO2 인큐베이터(MCO-17AIC, Sanyo Electric Co., Toky, Japan)를 사용하여 배양하였다.In order to examine the cytotoxicity of the black shaft extract, corydalis cortex extract or the mixed extract of black shaft and corydalis cortex, normal cell lines vero cells (kidney cell line, monkey kidney cell line; KCLB 10081) and chang cells (liver cell line, human liver) The cell line; ATCC CCL13) was used from the Korean Cell Lines Bank and American Type Culture Collection, respectively. As medium for vero and chang cells, DMEM (Dulbecco's modified eagle medium) with 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% antibiotics was used and 5% CO 2 incubator (MCO-) at 38 ° C. 17AIC, Sanyo Electric Co., Toky, Japan).
세포 생존율 측정을 위하여 상기 실시예 1, 2 및 3의 추출물의 vero cell과 chang cell에 대한 독성 측정에는 MTT(3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyl tetrazolium bromide) 분석법으로 세포생존율을 측정하였다. MTT 분석법은 세포내 미토콘드리아의 호흡사슬(respiratory chain)에 존재하며 생존세포에만 활성이 있는 숙시네이트-테트라졸리움 환원효소(succinate-tetrazolium reductase)와 반응하여 노란색의 수용성 기질인 MTT를 청자색의 비수용성 MTT 포르마잔(formazan)으로 환원시키는 능력을 이용한 검사법이다. Vero cell 및 chang cell을 24웰 플레이트에 3×104 cell/mL/웰 씩 분주하여 1일간(chang cell은 2일간) CO2 인큐베이터에서 배양한 후, 0.1%의 DMSO(Dimethylsulfoxide)에 용해시킨 실시예 1, 2 및 3의 추출물에 대한 독성을 비교하고자 고농도인 500 μg/mL 농도로 처리하여 세포 생존율을 측정하였다. 대조군에는 세포에 0.1% DMSO를 처리하여 24시간 동안 배양하였다. 그 후 배양액을 제거하고 PBS(Phosphate Buffered Saline)에 용해시킨 MTT solution 300 μL 씩을 각 웰에 분주하여 2시간 동안 반응시켜서 제거하고, 250 μL의 DMSO를 가하여 형성된 formazan 결정을 용해시켰다. 100 μL 씩을 96웰 플레이트에 취하여 ELISA 리더(Spectra Max 250, Molecular Devices Co, Sunnyvale, CA, U.S.A.)로 540 nm에서 흡광도를 측정하여 세포생존율을 계산하였다. 생존율(%)은 ((대조군의 흡광도-실험군의 흡광도)/대조군의 흡광도)×100 식으로부터 구하였으며, 추출 온도에 따른 세포독성 결과는 하기 표 1에, 추출 시간에 따른 세포독성 결과는 하기 표 2에 세포생존율로 나타내었다.
In order to measure cell viability, MTT (3- (4, 5-dimethylthiazol-2-yl) -2, 5-diphenyl tetrazolium bromide) was used to determine the toxicity of vero and chang cells. Cell viability was measured by the assay. The MTT assay reacts with succinate-tetrazolium reductase, which is present in the respiratory chain of intracellular mitochondria and is active only in viable cells, to react the yellow water-soluble matrix MTT to a blue-violet water-insoluble MTT. This test is based on the ability to reduce to formazan. Vero cells and chang cells were dispensed in 24 well plates at 3 × 10 4 cells / mL / well, incubated in a CO 2 incubator for 1 day (chang cells for 2 days), and then dissolved in 0.1% DMSO (dimethylsulfoxide). To compare the toxicity of the extracts of Examples 1, 2, and 3, cell viability was measured by treatment at a high concentration of 500 μg / mL. In the control group, cells were treated with 0.1% DMSO and incubated for 24 hours. Thereafter, the culture solution was removed, and 300 μL of MTT solution dissolved in PBS (Phosphate Buffered Saline) was dispensed into each well for reaction for 2 hours, and 250 μL of DMSO was added to dissolve formazan crystals. Cell viability was calculated by taking 100 μL into 96-well plates and measuring absorbance at 540 nm with an ELISA reader (Spectra Max 250, Molecular Devices Co, Sunnyvale, Calif., USA). Survival rate (%) was obtained from ((absorbance of the control group-absorbance of the experimental group) / absorbance of the control group) × 100, the cytotoxicity results according to the extraction temperature is shown in Table 1 below, the cytotoxicity results according to the extraction time is shown in the following table 2 shows the cell viability.
조건
Condition
추출온도(℃)
Extraction temperature (℃)
추출시간(hr)
Extraction time (hr)
(신장 세포주) vero cell
(Renal cell line)
(간 세포주)chang cell
(Liver cell line)
상기 표 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 현호색 추출물, 흑축 추출물 또는 현호색과 흑축 혼합 추출물 제조 시 추출시간은 48시간으로 일치시키고 추출 온도를 10 내지 80℃로 변화를 주어 추출하여 얻은 각각의 추출물을 정상세포주인 신장세포주 및 간세포주에 처리했을 때의 세포 생존율을 비교하여 보면, 본 발명에 따른 모든 추출물에서 온도에 따른 생존율의 현저한 차이를 보였으며, 특히 추출온도 10 내지 15℃ 범위에서 얻은 추출물이 세포생존율이 90% 이상으로 세포 독성이 저감화되는 것으로 나타났다. 반면, 추출 온도 20℃부터는 세포생존율이 80% 이하로 감소하여 현격한 세포독성 증가 현상이 나타났다. 또한 현호색 및 흑축을 혼합하여 추출하였을 경우 흑축 단독 추출물 보다는 우려할 만한 세포독성 작용이 현저히 감소하는 경향을 확인하였다.
As shown in Table 1, the extraction time of the preparation of Hyunho color extract, black shaft extract or Hyunho color and black shaft mixed extract of the present invention is matched with 48 hours and the extraction temperature is changed to 10 to 80 ℃ to extract each extract obtained Comparing the cell viability when treated with the normal cell line renal cell line and hepatocyte cell line, all the extracts according to the present invention showed a significant difference in the survival rate according to the temperature, in particular the extract obtained in the extraction temperature range of 10 to 15 ℃ The cell viability was found to be reduced to more than 90% cytotoxicity. On the other hand, from the extraction temperature of 20 ℃ cell viability was reduced to less than 80% showed a significant increase in cytotoxicity. In addition, it was confirmed that the extract of a mixture of Hyunho colors and black shafts tended to significantly reduce the cytotoxic effect of concern than the extract of black shafts alone.
조건
Condition
추출온도(℃)
Extraction temperature (℃)
추출시간 (hr)
Extraction time (hr)
(신장 세포주) vero cell
(Renal cell line)
(간 세포주)chang cell
(Liver cell line)
상기 표 1의 실험 결과를 토대로, 본 발명의 현호색 추출물, 흑축 추출물 또는 현호색과 흑축 혼합 추출물 제조 시 대체로 안전성이 확보되는 90% 내외의 세포생존율을 보이는 추출 온도인 15℃를 기준으로 하고 추출시간을 10 내지 120시간으로 변화를 주어 추출하여 얻은 각각의 추출물을 정상세포주인 신장세포주 및 간세포주 처리했을 때의 세포 생존율을 표 2에 나타내었다. Based on the results of the experiment in Table 1, the extraction time is based on the extraction temperature showing the cell survival rate of about 90%, which is generally secured when the Hyunho color extract, black shaft extract or Hyunho color and black shaft mixture extract of the present invention is secured Table 2 shows the cell viability when each extract obtained by varying the extraction time to 10 to 120 hours was treated with the renal cell line and the hepatocyte cell line, which are normal cell lines.
그 결과, 본 발명에 따른 모든 추출물에서 시간에 따른 생존율의 현저한 차이를 보였으며, 특히 24 내지 72시간 범위에서 얻은 추출물이 세포독성이 저감화되는 것으로 나타났다. 또한 현호색 및 흑축을 혼합하여 추출하였을 경우 흑축 단독 추출물 보다는 우려할 만한 세포독성작용이 현저히 감소하는 경향을 확인하였다.
As a result, all the extracts according to the present invention showed a remarkable difference in survival rate over time, and particularly, extracts obtained in the range of 24 to 72 hours were shown to reduce cytotoxicity. In addition, it was confirmed that the extract of a mixture of corydalis and black axis significantly reduced the cytotoxic effect of concern than the extract of black axis alone.
실험예Experimental Example 2. 2. 급성독성실험Acute Toxicity Experiment
현호색 추출물, 흑축 추출물 또는 현호색과 흑축 혼합 추출물을 단기간에 과량을 섭취하였을 시 급성적으로 동물체내에 미치는 독성을 조사하고, 치사율을 결정하기 위하여 1주간 관찰하면서 실험을 수행하였다. 일반적인 마우스인 ICR 마우스 계통 100마리를 대조군에 10마리, 실험군에 각각 10마리씩 배정하였다. 대조군에는 아무것도 투여하지 않았으며, 실험군은 실시예 및 비교예의 추출물을 2.0 g/㎏의 농도로 경구 투여하였다. Experiments were carried out to observe the toxicity of animal extracts, black shaft extracts, or mixed extracts of brown peppers and black shafts acutely upon ingestion in a short period of time. 100 ICR mouse strains, which are common mice, were assigned to 10 mice in the control group and 10 mice in the experimental group. Nothing was administered to the control group, and the experimental group orally administered the extracts of Examples and Comparative Examples at a concentration of 2.0 g / kg.
투여 1주일 후에 각각의 치사율을 조사한 결과, 대조군과 15℃에서 48시간 추출한 실시예의 현호색 추출물, 흑축 추출물 및 현호색과 흑축 혼합 추출물의 경우 모두 생존한 반면, 추출온도를 20℃에서 48시간 추출한 비교예의 시료를 투여한 실험군에서는 1 내지 3배로 치사율이 증가되는 현상이 관찰되었으며, 특히 추출온도를 80℃에서 48시간 추출한 시료를 투여한 실험군에서는 5 내지 7배로 치사율이 증가되는 심각한 독성을 보였다 (표 3 참조).
After one week of administration, the mortality was examined, and the control samples and the extracts of the cotyledon extract, the black shaft extract, and the mixed extract of the cotyledon and black shaft were all survived for 48 hours at 15 ° C., whereas the extraction temperature was extracted for 48 hours at 20 ° C. In the experimental group to which the sample was administered, the mortality was increased by 1 to 3 times, and especially in the experimental group to which the sample was extracted at 80 ° C. for 48 hours, the mortality was increased by 5 to 7 times (Table 3). Reference).
(%)Animal mortality
(%)
상기 독성시험 결과를 종합하여 보면, 표 1 내지 3의 결과에서와 같이, 본 발명의 추출방법에 따른 실시예 및 비교예의 현호색 추출물, 흑축 추출물 또는 현호색과 흑축 혼합 추출물의 경우 추출온도가 높을수록, 추출시간이 장시간 일수록 독성이 강하게 나타나는 것으로 나타났다. 따라서 정상세포주을 이용한 세포독성실험과 급성독성실험 결과로부터 독성작용이 저감화되는 최적의 추출조건은 10 내지 15℃ 범위에서 24 내지 72시간 추출할 때 독성이 현저히 감소 또는 제거되어 세포독성 및 급성독성에 의한 동물치사율이 개선되는 것을 알 수 있었다.
Taken together, the results of the toxicity test, as shown in the results of Tables 1 to 3, in the case of Hyunho color extract, black shaft extract or Hyunho color and black shaft mixed extract of the examples and comparative examples according to the extraction method of the present invention, the higher the extraction temperature, The longer the extraction time, the stronger the toxicity appeared. Therefore, the optimal extraction conditions for reducing toxic effects from the cytotoxicity test and acute toxicity test results using normal cell lines were significantly reduced or eliminated when extracted for 24 to 72 hours in the range of 10 to 15 ° C. Animal mortality was found to be improved.
실험예Experimental Example 3. 생약 추출물의 3. of herbal extract 위배출Stomach discharge 지연 억제 효과 시험 Delayed suppression effect test
실시예 3의 생약 추출물의 추출조건에 따른 위배출 지연 억제 효과를 측정하기 위해, 랫트 모델을 이용하여 하기와 같이 실험을 실시하였다. 실시예 3 및 비교예 3의 현호색과 흑축 혼합물을 대상으로 10℃, 15℃, 20℃, 40℃ 및 80℃에서 48시간 추출 제조한 시료를 시험군으로 하여 위배출률에 대한 약효를 비교하였다. In order to measure the gastric emptying delay inhibitory effect according to the extraction conditions of the herbal extract of Example 3, the experiment was performed as follows using a rat model. The efficacy of the gastric excretion rate was compared with the sample prepared by extracting prepared for 48 hours at 10 ° C., 15 ° C., 20 ° C., 40 ° C., and 80 ° C. in the color and black shaft mixture of Example 3 and Comparative Example 3.
200-250 g의 6주령의 수컷 Sprague-Dawley 랫트를 일주일간 온도 22-24℃, 습도 60-80% 상태에서 표준 식이와 물을 공급하며 순화 사육한 후, 체중을 기준으로 그룹 당 10마리씩 분리하고, 실험 전 24시간 동안 절식시켰다. 절식기간 동안 음수를 공급하였고, 실험 3시간 전부터는 음수 공급도 중단하였다. 상기 실시예 3 및 비교예 3의 추출물을 정해진 용량만큼의 생리식염수에 현탁시켜 마리당 하기 표 4에 나타낸 용량씩 경구 투여하였다. 경구 투여 45분 후에 동물사료를 물에 넣고 분쇄하여 만든 반고형식이(semisolid test meal, 0.05% phenol red solution containing 1.5 % MC)를 마리 당 2 mL 씩 경구 투여하고, 35분 후에 동물을 희생시켜 위를 적출하여 반고형식이가 남아있는 위의 무게를 측정하였다. 측정이 끝난 후 증류수로 위를 세척하여 위 안쪽의 내용물을 제거한 후 건조시켜 다시 위의 무게를 측정하였다. 위 배출율(gastric emptying, %)은 [1-(위에 잔존하는 반고형식이 무게/0-시간의 반고형식이 무게)]×100의 식으로 구하였으며, 0-시간 반고형식이 무게는 반고형식이 투여 즉시 희생하여 위에 잔존하는 반고형식이의 측정값을 대입하였다. 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다. 표 4의 대조군은 생리식염수를 마리당 1mL씩 경구 투여한 음성대조군을 나타낸다.
200-250 g 6-week-old male Sprague-Dawley rats were purified and fed with standard diet and water at a temperature of 22-24 ° C and 60-80% humidity for a week, then separated by 10 per group by weight. And fasted for 24 hours before the experiment. The drinking water was supplied during the fasting period, and the drinking water was also stopped 3 hours before the experiment. The extracts of Example 3 and Comparative Example 3 were suspended in a predetermined amount of physiological saline and administered orally by the doses shown in Table 4 per animal. After 45 minutes of oral administration, 2 mL per animal was orally administered with semi-solid test meal (0.05% phenol red solution containing 1.5% MC). Was extracted and the weight of the stomach where the semi-solid tooth remained was measured. After the measurement, the stomach was washed with distilled water to remove the contents of the stomach and dried, and the weight of the stomach was measured again. The gastric emptying rate (%) was obtained by the formula [1- (the remaining semi-high form weight / 0-hour semi-solid form weight)] × 100, and the 0-hour semi-solid form weighted semi-solid form. Immediately at the expense of dosing, the remaining semisolid diet values were substituted. The results are shown in Table 4 below. The control group of Table 4 represents the negative control group orally administered 1 mL per saline.
상기 표 4에 나타난 결과에 따르면, 추출온도 10 내지 15℃ 범위에서는 상기 독성시험 결과에서 독성이 저감화 되었음에도 오히려 20 내지 80℃ 범위의 추출시료에 비해 최고 2.6배의 우수한 위배출 지연 억제 효과가 있는 것으로 나타났다.
According to the results shown in Table 4, the extraction temperature in the range of 10 to 15 ℃, although the toxicity is reduced in the toxicity test results, compared to the extraction sample in the range of 20 to 80 ℃ range up to 2.6 times better gastric emptying delay inhibition effect appear.
실험예Experimental Example 4. 생약 추출물의 아트로핀 유도로 지연된 위장관 4. The gastrointestinal tract delayed by atropine induction of herbal extracts 수송능에On transport 미치는 효과 Effect
실시예 3 및 비교예 3의 생약 추출물의 추출조건에 따른 위장관 수송능에 미치는 영향을 측정하기 위해, 랫트 모델을 이용하여 하기와 같이 실험을 실시하였다. 실시예 3의 현호색과 흑축 혼합물을 10℃, 15℃, 20℃, 40℃, 및 80℃에서 48시간 추출 제조한 시료를 시험군으로 하여 위장관 수송능에 미치는 영향을 비교하였다. In order to determine the effect on the gastrointestinal transport ability according to the extraction conditions of the herbal extracts of Example 3 and Comparative Example 3, the experiment was carried out as follows using a rat model. The effect of affecting the gastrointestinal tract transportability was obtained by using a sample prepared by extracting the corydale color and black shaft mixture of Example 3 at 10 ° C., 15 ° C., 20 ° C., 40 ° C., and 80 ° C. for 48 hours.
200-250 g의 6주령의 수컷 Sprague-Dawley 랫트를 일주일간 온도 22-24℃, 습도 60-80% 상태에서 표준 식이와 물을 공급하며 순화 사육한 후, 체중을 기준으로 그룹 당 10마리씩 분리하고, 실험 전 24시간 동안 절식시켰다. 24시간 절식한 랫트에 아트로핀 1.5 mg/kg을 복강투여하고, 그 직후 실시예 3 및 비교예 3에서 얻은 추출온도별 시료를 각각 1 mg/kg을 각각 경구 투여하였다. 1시간 후 운반확인물질인 0.05% 페놀 레드(Phenol red) 함유 반고형식이를 마리당 2 ml씩 경구 투여하고, 30분 후 안락사 시켜 장관을 적출한 뒤 총 장관길이 및 유문부로부터의 운반확인물질 이동길이를 측정하여 위장관수송능(Gastrointestinal transit)을 산출하였다. 상기 실험 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
200-250 g 6-week-old male Sprague-Dawley rats were purified and fed with standard diet and water at a temperature of 22-24 ° C and 60-80% humidity for a week, then separated by 10 per group by weight. And fasted for 24 hours before the experiment. Rats fasted for 24 hours were intraperitoneally administered 1.5 mg / kg of atropine, and immediately after that, 1 mg / kg of the samples for each extraction temperature obtained in Example 3 and Comparative Example 3 were orally administered. After 1 hour, oral administration of 2 ml of semi-solid foods containing 0.05% phenol red, a transport confirmation substance per horse, was euthanized after 30 minutes, and the intestines were extracted. Gastrointestinal transit was calculated by measuring. The experimental results are shown in Table 5 below.
상기 표 5에서, 실시예 3에서 얻은 현호색과 흑축 혼합추출물 투여한 경우 아트로핀 유도로 지연된 위장관 수송 증진효과가 대조군에 비해 매우 개선되는 것으로 확인되었다. 특히 추출온도 10 내지 15℃에서 제조한 추출물의 경우 20 내지 80℃에서 제조한 추출물에 비해 30-40% 이상 위장관수송능 증진 효과를 보였으며, 아트로핀으로 위장관 수송능을 지연을 유도하지 않은 정상군 수준으로 회복되는 우수한 효능을 확인할 수 있었다. In Table 5, it was confirmed that the administration of the corpus callosum and black shaft mixed extract obtained in Example 3 significantly improved the gastrointestinal transport enhancement effect by atropine induction compared to the control group. In particular, the extract prepared at the extraction temperature of 10 to 15 ℃ showed more than 30-40% of the gastrointestinal transport capacity enhancement effect compared to the extract prepared at 20 to 80 ℃, normal group did not induce a delay in gastrointestinal transport capacity with atropine Excellent efficacy was recovered to the level was confirmed.
위와 같은 결과를 종합하여 보면, 실시예 1 내지 3의 현호색과 흑축 혼합추출물의 제조 시 독성을 저감시키고 효능을 극대화 할 수 있는 최적의 추출온도 및 추출시간을 확인하였으며, 이로부터 추출된 추출물은 위장관 운동장애 질환 치료제의 독성 또는 부작용의 위험성으로부터 벗어남으로써 보다 안전한 치료 및 예방 효능을 극대화할 수 있을 것으로 보인다.
In summary, the results confirm the optimum extraction temperature and extraction time to reduce the toxicity and maximize the efficacy in the preparation of the mixed color of chorus and black shaft of Examples 1 to 3, the extract extracted from the gastrointestinal tract It is possible to maximize the safer treatment and prevention efficacy by deviating from the risk of toxicity or side effects of the movement disorder disease treatment.
제형예Formulation Example 1. 정제의 제조 1. Preparation of tablets
실시예 3의 독성을 저감화한 현호색과 흑축 혼합추출물 20 g을 락토오스 50 g, 감자전분 30 g 및 콜로이드성 규산 5 g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 20 g, 활석 5 g 및 스테아린산 마그네슘 1 g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다.
20 g of Hyunho color and black shaft extract, which reduced the toxicity of Example 3, were mixed with 50 g of lactose, 30 g of potato starch, and 5 g of colloidal silicic acid. To this mixture was added a 10% gelatin solution, which was pulverized and passed through a 14-mesh sieve. It was dried and the mixture obtained by adding 20 g of potato starch, 5 g of talc and 1 g of magnesium stearate was made into a tablet.
제형예Formulation Example 2. 주사액제의 제조 2. Preparation of Injection
실시예 3의 독성을 저감화한 현호색과 흑축 혼합추출물 2 g을 증류수에 용해시켜서 100 ㎖를 만들었다. 이 용액을 병에 넣고 20℃에서 30분간 가열하여 멸균시켰다.
2 g of Hyunho color and black shaft mixed extract, which reduced the toxicity of Example 3, were dissolved in distilled water to make 100 ml. The solution was bottled and sterilized by heating at 20 ° C. for 30 minutes.
제형예Formulation Example 3. 밀가루 식품의 제조 3. Manufacture of flour food
실시예 3의 독성을 저감화한 현호색과 흑축 혼합추출물을 0.1-5.0 중량%로 하여 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 밀가루 식품을 제조하였다.
Flour foods were prepared by adding Hyunho color and black shaft mixed extract of Example 3 to 0.1-5.0% by weight to flour, and using this mixture to prepare bread, cake, cookies, crackers and noodles.
제형예Formulation Example 4. 유제품( 4. Dairy products ( dairydairy productsproducts )의 제조Manufacturing
실시예 3의 독성을 저감화한 현호색과 흑축 혼합추출물을 0.1-1.0 중량%로 하여 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
Toxic color and black shaft mixed extract reduced the toxicity of Example 3 to 0.1-1.0% by weight was added to the milk, using the milk to prepare a variety of dairy products such as butter and ice cream.
제형예Formulation Example 5. 음료 제조 5. Beverage Manufacturing
실시예 3의 독성을 저감화한 현호색과 흑축 혼합추출물 0.5 g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000 ㎖에 가하여 야채 음료를 제조하였다.0.5 g of Hyunho color and black shaft mixed extract which reduced the toxicity of Example 3 were added to 1,000 ml of tomato or carrot juice to prepare a vegetable beverage.
Claims (6)
Reduction of toxic redness and black shaft, including extracting water and black axis alone or mixing them with water, lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent thereof for 24 to 72 hours at a temperature of 10 to 15 ° C. Or a method of preparing a mixed extract thereof.
The method according to claim 1, wherein the mixed solvent is 30-70% ethanol aqueous solution.
The method of claim 1, wherein the solvent extraction is extracted using a reflux condenser chilled color, black shaft or mixed extract thereof.
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