KR101198192B1

KR101198192B1 - Method for producing dry earthworm powder

Info

Publication number: KR101198192B1
Application number: KR1020127006062A
Authority: KR
Inventors: 가즈유키 이시이
Original assignee: 웰 스톤 유겐가이샤
Priority date: 2011-04-11
Filing date: 2011-10-05
Publication date: 2012-11-12

Abstract

지렁이 체내에 포함되어 있는 유해 물질을 제거하면서, 높은 역가(力價)의 효소를 포함하는 지렁이 건조 분말을 제조할 수 있는 지렁이 건조 분말의 제조 방법을 제공한다.
생 지렁이를 칼륨, 나트륨, 마그네슘 및 칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 금속의 염화물과 접촉시키고,
그 후, 분말상(粉末狀) 하이드록시카르복시산과 생 지렁이를 접촉시키고, 물로 희석하여 pH 2～5로 조정하고, 3～180 분간 유지한 후, 생 지렁이를 수세(水洗)하고, 마쇄(磨碎)하여, 얻어진 마쇄물을 동결 건조하는 것을 특징으로 하는 지렁이 건조 분말의 제조 방법이다.Provided is a method for producing an earthworm dry powder capable of producing an earthworm dry powder containing a high titer enzyme while removing harmful substances contained in the earthworm body.
Contacting the live earthworm with a chloride of at least one metal selected from the group consisting of potassium, sodium, magnesium and calcium,
After that, the powdered hydroxycarboxylic acid and the live earthworm are brought into contact with each other, diluted with water to adjust the pH to 2 to 5, held for 3 to 180 minutes, and the raw earthworm is washed with water and ground. And lyophilization of the obtained ground product.

Description

지렁이 건조 분말의 제조 방법{METHOD FOR PRODUCING DRY EARTHWORM POWDER}Manufacturing method of earthworm dry powder {METHOD FOR PRODUCING DRY EARTHWORM POWDER}

본 발명은, 지렁이 건조 분말의 제조 방법에 관한 것이며, 상세하게는, 지렁이 체내에 포함되어 있는 유해 물질을 제거하면서, 높은 역가(力價)의 효소를 포함하는 지렁이 건조 분말을 제조할 수 있는 지렁이 건조 분말의 제조 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for producing earthworm dry powder, specifically, an earthworm capable of producing earthworm dry powder containing a high titer enzyme while removing harmful substances contained in the earthworm body. It relates to a method for producing a dry powder.

지렁이 추출물이나 지렁이 건조 분말은, 고래로부터 주로 동양의 여러 나라에 있어서, 각종 질병의 예방제, 치료제로서 사용되어 왔으며, 현재까지 방광 내 결석 축소제 및 배출 촉진제, 황달 치료제, 분만 촉진제, 강장제, 육모제(育毛劑), 강정제, 해열제, 경풍(驚風) 치료제, 혈행 촉진제, 반신불수 치료제, 간접 진통제, 배뇨제, 기관지 천식제, 고혈압증 치료제로서의 용도가 알려져 있다.Earthworm extracts and earthworm dry powders have been used by whales in various countries in the East, mainly as preventive and therapeutic agents for various diseases.To date, stones for reducing bladder stones and releasing accelerators, jaundice cures, delivery accelerators, tonics and hair growth agents ( It is known to be used as a medicine for hair loss, jeongjeongje, antipyretics, anti-dyesthesia, blood circulation accelerator, anti-influenza treatment, indirect analgesic, urination agent, bronchial asthma, and hypertension.

그러나, 지렁이는, 양식판에서 사육, 증식되지만, 엄선된 먹이를 주어도, 그 중에는, 수은, 카드뮴, 납, 비소와 같은 유해 원소나 병원성 미생물이 존재하고 있으며, 사육 중에 이들 유해 물질이 지렁이에게 섭취되어 체내에 축적된 결과, 지렁이 생체로부터 제조한 치료약을 음용(飮用)하면, 인체에 악영향을 미칠 우려가 있다.However, earthworms are bred and multiplied in aquaculture, but even if they are carefully selected, there are harmful elements such as mercury, cadmium, lead and arsenic and pathogenic microorganisms, and these harmful substances are ingested by earthworms during breeding. As a result of accumulation in the body, drinking a therapeutic agent prepared from the earthworm body may adversely affect the human body.

따라서, 지렁이 생체를 원료로 하여 경구(經口) 투여를 위한 약제를 조제(調製)할 때는, 이들 유해 물질을 제거할 필요가 있고, 이를 위한 많은 방법이 제안되어 있다. 지금까지, 지렁이 생체를 나트륨염 또는 칼륨염과 같은 알칼리염의 수용액 중에 침지(浸漬)하여, 소화관 내의 분토(糞土)를 배설시킨 후, 습식 분쇄하여, 얻어진 현탁액(懸濁液)을 진공 동결 건조하여 당뇨병 치료제, 항고지혈증제 또는 혈압 조절제로서 유용한 지렁이 건조 분말을 제조하는 방법(특허 문헌 1～4 참조), 지렁이 생체를 6～26 ℃로 유지한 산 수용액 중에 0.1～5 시간 방치하여 소화관 내의 분토를 제거한 후 마쇄(磨碎)하고, 이 마쇄물을 탈기(degassing)한 후, 단계적으로 승온(昇溫)시키면서 진공 건조하여 혈전증 환자 치료약을 제조하는 방법(특허 문헌 5 참조) 등이 제안되어 있다.Therefore, when preparing a medicine for oral administration using the earthworm body as a raw material, it is necessary to remove these harmful substances, and many methods for this have been proposed. Until now, the earthworm body was immersed in an aqueous solution of an alkali salt such as sodium salt or potassium salt to excrete the soil in the digestive tract, and then wet pulverized to vacuum-freeze dry the obtained suspension. Method for producing earthworm dry powder useful as an antidiabetic agent, antihyperlipidemic agent or blood pressure control agent (see Patent Documents 1 to 4), and soils in the digestive tract by leaving the earthworm body in an acid solution maintained at 6 to 26 ° C for 0.1 to 5 hours. The method of grinding | pulverizing after removal, degassing this grinding | pulverization, and vacuum-drying while raising temperature gradually is produced (refer patent document 5), etc. are proposed.

또한, 중금속류나 섬유소용해 활성(fibrinolytic activity) 억제 물질 및 혈소판 활성화 인자의 전구(前驅) 물질을 제거 또는 저감시키기 위하여, 지렁이 건조 분말을 수용액으로 만들고, 그 현탁 성분을 제거하여, 탁도가 파장 700 nm의 흡광도에서 1.5 이하의 지렁이 수용액을 얻는 방법이 제안되어 있다(특허 문헌 6 참조).In addition, in order to remove or reduce the heavy metals, fibrinolytic activity inhibitors and precursors of platelet activator, the earthworm dry powder is made into an aqueous solution, the suspension component is removed, and the turbidity is 700 nm in wavelength. The method of obtaining the earthworm aqueous solution of 1.5 or less by the absorbance of is proposed (refer patent document 6).

일본 특허출원 공개번호 평1-47718호 공보Japanese Patent Application Publication No. Hei 1-47718 일본 특허출원 공개번호 평1-47719호 공보Japanese Patent Application Publication No. Hei 1-47719 일본 특허출원 공개번호 평1-47720호 공보Japanese Patent Application Publication No. Hei 1-47720 일본 특허출원 공개번호 평1-268639호 공보Japanese Patent Application Publication No. Hei 1-268639 일본 특허출원 공개번호 평3-72427호 공보Japanese Patent Application Publication No. Hei 3-72427 일본 특허출원 공개번호 2006-96673호 공보Japanese Patent Application Publication No. 2006-96673

그러나, 지렁이 생체를 민물, 알칼리염 수용액이나 산 수용액에 장시간 침지하면, 지렁이의 체력이 약해지고, 그 결과, 생체 내에 포함되는 단백질이 변성되어, 효소 작용이 저하되므로, 얻어지는 지렁이 분말의 약리 효과가 열화될 우려가 있다. 또한, 지렁이가 물의 존재 하에서 죽으면, 지렁이 중에 존재하는 피브린 용해 활성 효소의 작용에 의해, 지렁이의 생체가 급속히 용해되어 부패하므로, 수용액 중의 처리는, 시간적 제약을 받는 문제가 있었다.However, if the earthworm body is immersed in fresh water, alkaline salt solution or acid solution for a long time, the physical strength of the earthworm is weakened, and as a result, the protein contained in the body is denatured and the enzyme action is lowered. Thus, the pharmacological effect of the earthworm powder obtained is deteriorated. There is a concern. In addition, when an earthworm dies in the presence of water, the living body of the earthworm rapidly dissolves and decays due to the action of the fibrin soluble activating enzyme present in the earthworm, so that the treatment in the aqueous solution is subject to time constraints.

이에, 본 발명의 목적은, 지렁이 체내에 포함되어 있는 유해 물질을 제거하면서, 높은 역가의 효소를 포함하는 지렁이 건조 분말을 제조할 수 있는 지렁이 건조 분말의 제조 방법을 제공하는 것에 있다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a method for producing earthworm dry powder which can produce earthworm dry powder containing a high titer enzyme while removing harmful substances contained in the earthworm body.

본 발명자는 상기 과제를 해결하기 위해 검토를 거듭한 결과, 생 지렁이를 금속의 염화물에 접촉시킨 후에, 하이드록시카르복시산에 접촉시킴으로써 상기 과제를 해결할 수 있는 것을 발견하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.MEANS TO SOLVE THE PROBLEM As a result of repeated examination in order to solve the said subject, it discovered that the said subject can be solved by contacting hydroxycarboxylic acid after making a live earthworm contact with a metal chloride, and came to complete this invention.

즉, 본 발명의 지렁이의 건조 분말의 제조 방법은, 생 지렁이를 칼륨, 나트륨, 마그네슘 및 칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 금속의 염화물과 접촉시키고,That is, the manufacturing method of the dry powder of the earthworm of this invention is made to contact a live earthworm with the chloride of at least 1 sort (s) of metal chosen from the group which consists of potassium, sodium, magnesium, and calcium,

그 후, 분말상(粉末狀) 하이드록시카르복시산과 생 지렁이를 접촉시키고, 물로 희석하여 pH 2～5로 조정하고, 3～180 분간 유지한 후, 생 지렁이를 수세(水洗)하고, 마쇄하여, 얻어진 마쇄물을 동결 건조하는 것을 특징으로 하는 것이다.Thereafter, the powdered hydroxycarboxylic acid and the live earthworm are brought into contact with each other, diluted with water to adjust the pH to 2 to 5, held for 3 to 180 minutes, and the raw earthworm is washed with water and ground. It is characterized in that the ground material is freeze-dried.

또한, 본 발명의 지렁이의 건조 분말의 제조 방법은, 생 지렁이를 칼륨, 나트륨, 마그네슘 및 칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 금속의 염화물과 접촉시키고,In addition, the production method of the dry powder of the earthworm of the present invention, the raw earthworm is brought into contact with a chloride of a metal selected from the group consisting of potassium, sodium, magnesium and calcium,

그 후, 생 지렁이를 pH 2～5로 조정된 하이드록시카르복시산 수용액 중에 침지하고, 3～180 분간 유지한 후, 생 지렁이를 수세하고, 마쇄하여, 얻어진 마쇄물을 동결 건조하는 것을 특징으로 하는 것이다.Thereafter, the live earthworm is immersed in an aqueous hydroxycarboxylic acid solution adjusted to pH 2 to 5, and maintained for 3 to 180 minutes, after which the live earthworm is washed with water and ground, and the resulting ground material is lyophilized. .

본 발명의 지렁이의 건조 분말의 제조 방법은, 상기 생 지렁이를, 10～50 시간 명소(明所)에 방치한 후, 체피(體皮)에 부착된 오물을 박리한 후, 상기 금속의 염화물과 접촉시키는 것이 바람직하다.In the method for producing the dry powder of the earthworm, the raw earthworm is left in a spot for 10 to 50 hours, after which the dirt attached to the skin is peeled off, and then the chloride of the metal and It is preferable to make contact.

또한, 본 발명의 지렁이의 건조 분말의 제조 방법은, 상기 동결 건조는, 마쇄물을 -18℃～-35℃에서 20～240 시간 동결시킨 후, 진공하에서 동결 건조함으로써 행해지는 것이 바람직하다.Moreover, in the manufacturing method of the dry powder of the earthworm of this invention, it is preferable that the said freeze drying is performed by freeze-drying under vacuum, after freezing a ground material at -18 degreeC--35 degreeC for 20 to 240 hours.

또한, 본 발명의 지렁이의 건조 분말의 제조 방법에 있어서는, 상기 금속의 염화물이, 염화 나트륨인 것이 바람직하다.Moreover, in the manufacturing method of the dry powder of the earthworm of this invention, it is preferable that the chloride of the said metal is sodium chloride.

또한, 본 발명의 지렁이의 건조 분말의 제조 방법에 있어서는, 상기 하이드록시카르복시산이, 아세트산, 말산, 구연산, 락트산, 말론산 및 숙신산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인 것이 바람직하다.Moreover, in the manufacturing method of the dry powder of the earthworm, it is preferable that the said hydroxycarboxylic acid is at least 1 sort (s) chosen from the group which consists of acetic acid, malic acid, citric acid, lactic acid, malonic acid, and succinic acid.

본 발명에 의해, 지렁이 체내에 포함되어 있는 유해 물질을 제거하면서, 높은 역가의 효소를 포함하는 지렁이 건조 분말을 제조할 수 있는 지렁이 건조 분말의 제조 방법을 제공할 수 있게 된다.According to the present invention, it is possible to provide a method for producing earthworm dry powder which can produce earthworm dry powder containing a high titer enzyme while removing harmful substances contained in the earthworm body.

본 발명의 지렁이의 건조 분말의 제조 방법은, 생 지렁이를 칼륨, 나트륨, 마그네슘 및 칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 금속의 염화물과 접촉시킨 후, 분말상 하이드록시카르복시산과 생 지렁이를 접촉시키고, 물로 희석하여 pH 2～5로 조정하고, 3～180 분간 유지하거나, 또는 생 지렁이를 pH 2～5로 조정된 하이드록시카르복시산 수용액 중에 침지하고, 3～180 분간 유지한 후, 생 지렁이를 수세하고, 마쇄하여, 얻어진 마쇄물을 동결 건조하는 것을 특징으로 하는 것이다.In the method for producing a dry earthworm powder of the present invention, the raw earthworm is contacted with a chloride of at least one metal selected from the group consisting of potassium, sodium, magnesium, and calcium, followed by contacting the powdered hydroxycarboxylic acid with the live earthworm After dilution with water, the pH is adjusted to 2-5 and maintained for 3 to 180 minutes, or the live earthworm is immersed in an aqueous solution of hydroxycarboxylic acid adjusted to pH 2-5 and maintained for 3 to 180 minutes. And crushing the obtained ground product by lyophilization.

생 지렁이를 가공하기에 앞서, 소정의 금속염화물에 접촉시킨 후, 하이드록시카르복시산과 접촉시키면, 지렁이에게 있어서 불쾌한 서식 환경이 형성되고, 결과적으로 그 환경에 순응하기 위해 지렁이는 소화관 내의 소화물을 배설하고, 그것과 함께 체내에 포함되어 있던 수은, 카드뮴, 납 등의 유해 물질이 배출된다.Prior to processing live earthworms, contact with a predetermined metal chloride followed by contact with hydroxycarboxylic acid creates an unpleasant habitat environment for the earthworm, resulting in the excretion of the digestive tract in the digestive tract to conform to the environment. In addition, harmful substances such as mercury, cadmium, and lead are released in the body.

본 발명은, 지금까지, 지렁이의 불쾌 환경을 형성하고, 지렁이의 체내의 유독물을 포함하는 대변 등을 토하도록 한 후 지렁이를 마쇄하는 방법이 알려져 있던 바, 이들 중 특정한 불쾌 환경 형성 방법을 조합하고, 여기에 더하여, 특정한 순서로 행함으로써, 효소 활성이 우수하며 높은 지렁이 건조 분말을 얻을 수 있는 것을 발견하여 행해진 것이다. 즉, 처음에 금속염화물(삼투압 스트레스)을 부여하고, 그 후, 하이드록시카르복시산(pH 스트레스)을 부여한다는 순서가 포인트가 되는 것이다.The present invention has been known so far to form an objectionable environment of the earthworm, and to throw up the stool or the like containing the poisonous substance of the earthworm body, and then ground the earthworm. In addition, by performing in a specific order, it was performed by finding that it is excellent in enzyme activity and a high earthworm dry powder can be obtained. That is, the order which gives a metal chloride (osmotic stress) first, and then gives a hydroxycarboxylic acid (pH stress) becomes a point.

지렁이는 분자 생물학적 해석이 진전되어 있지 않기 때문에, 상세한 메카니즘은 분명하지는 않지만, 효모, 선충, 식물 등의 다른 모델 생물에서의 연구에 있어서, 삼투압 스트레스가, 냉방병 프로테인 유전자 등 다종 다양한 스트레스 응답 유전자의 전사(轉寫)를 활성화시키는 것으로 알려져 있다. 이러한 사실로부터, 본 발명에 의해 얻어지는 효과에 대하여, 고려되는 요인의 하나로서, 최초의 삼투압 스트레스에 의해 HSP 유전자 등이 활성화되고, 그 후, 다른 스트레스인 pH 스트레스를 거침으로써, 스트레스 응답 유전자 발현 경로의 새로운 활성화가 일어나 유용 효소의 생산량이 높아지는 것을 예로 들 수 있다.Because earthworms have not advanced molecular biological interpretations, detailed mechanisms are unclear, but in studies of other model organisms such as yeasts, nematodes, and plants, osmotic stress is the transcription of a variety of stress response genes, including the cooling disease protein gene. It is known to activate (iii). From these facts, as one of the factors considered for the effect obtained by the present invention, the HSP gene and the like are activated by the first osmotic stress, and then the stress response gene expression pathway by undergoing another stress, pH stress. An example is the new activation of, resulting in higher yields of useful enzymes.

본 발명 방법에 있어서는, 원료로서 생 지렁이, 즉 살아 있는 지렁이가 사용된다. 생 지렁이로서는 특별히 한정되지 않고, 예를 들면, 룸브리쿠스 루벨루스(Lumbricus rubellus), 룸브리쿠스 테레스트리스(Lumbricus terrestris), 아이시니아 페티다(Eisenia foetida), 알롤로보포라 칼리기노사(Allolobophora caliginosa), 덴드로배나 옥태드라(Dendrobaena octaedra), 알롤로보포라 자포니카 미카엘센(Allolobophora japonica Michaelsen), 드라위다 핫타미미즈 핫타이(Drawida hattamimizu Hatai), 페리티마 디버젠스 미카엘센(Pheretima divergens Michaelsen), 페리티마 콤뮨니시마(Pheretima communissima), 페리티마 아그레스티스(Pheretima agrestis), 페리티마 시볼디 호르스트(Pheretima sieboldi Horst), 페리디마 힐겐도르피(Pheretima hilgendorfi), 폰토드릴루스 마쯔시멘시스 이이즈카(Pontodrilus matsushimensis Iizuka), 투비펙스 핫타이 노무라(Tubifex hattai Nomura), 림노드릴루스 고토이 핫타이[Limnodrilus gotoi Hatai=L. Socialis Stephenson] 등을 사용할 수 있다.In the method of this invention, a live earthworm, ie, a live earthworm, is used as a raw material. It is not specifically limited as a live earthworm, For example, Lumbricus rubellus, Lumbricus terrestris, Eisenia foetida, Allolobophora Caliginosa (Allolobophora) caliginosa, Dendrobaena octaedra, Allolobophora japonica Michaelsen, Drawida hattamimizu Hatai, Feritima Diversen Michaelsen, Pheretima perigen Michael Pheretima communissima, Pheretima agrestis, Pheretima sieboldi Horst, Pheretima hilgendorfi, Pontodrillus Matsusimessis Iizuka matsushimensis Iizuka), Tubifex hattai Nomura, Limnodrilus gotoi Hatai = L. Socialis Stephenson].

본 발명의 방법에 있어서는, 생 지렁이를 금속의 염화물에 접촉시키기에 앞서, 생 지렁이를 빵 상자와 같은 평평한 상자로 옮기고, 명소에서 10～50 시간 방치하여, 체피에 부착된 오물을 제거하는 것이 바람직하다. 명소에서의 방치 시간은, 더욱 바람직하게는 12～24 시간이다. 이 때의 수용량으로서는, 지렁이가 30～60 mm, 바람직하게는 40～50 mm의 두께로 중첩될 정도의 양이 바람직하다. 이 평평한 상자 내에는, 모래, 진흙과 같은 이물질이 존재하지 않도록 하고, 또한 지렁이는 야행성이며 암소(暗所)에서는 생활 활동이 활발하게 되어, 체력을 소모할 우려가 있으므로, 야간에는 전기 조명 배양 방식 등에 의해 밝게 유지하는 것이 바람직하다. 이 조치에 의해 생 지렁이는, 자기 방어 본능을 발휘하여, 소화관 내에 잔류하는 소화물을 배설하고, 이 배설물로 전신을 덮어, 수분이 증발하는 것을 막아, 생활 환경을 유지하고자 하므로, 이 덮여있는 오물, 즉 배설물을 적절한 수단에 의해 반복적으로 박리하면, 최종적으로 소화관 내의 소화물 및 체피에 부착된 오물을 제거할 수 있다.In the method of the present invention, prior to bringing the live earthworm into contact with the chloride of the metal, it is preferable to transfer the live earthworm to a flat box such as a bread box, and leave it at the spot for 10 to 50 hours to remove the dirt attached to the body. Do. The leaving time at a sight is more preferably 12 to 24 hours. As capacity | capacitance at this time, the quantity in which an earthworm overlaps in thickness of 30-60 mm, Preferably 40-50 mm is preferable. In this flat box, there is no foreign matter such as sand or mud, and the earthworm is nocturnal, and in the cow, the living activity is active, and there is a risk of losing physical strength. It is preferable to keep bright by, for example. By this measure, the live earthworm exerts its self-defense instinct, excretes the remaining digestion in the digestive tract, covers the whole body with this excrement, prevents water from evaporating, and maintains the living environment. That is, by repeatedly peeling the excrement by appropriate means, it is possible to finally remove the digested matter and the dirt attached to the hulls in the digestive tract.

지렁이의 체피에 부착된 오물의 박리는, 예를 들면, 부직포로 생 지렁이를 피복하고, 오물을 거기에 흡착시켜 행할 수 있다. 이 명소에서의 방치 및 체피에 부착된 오물의 제거와 금속염화물 및 하이드록시카르복시산과의 접촉을 조합함으로써, 지렁이 체내의 유독물의 배출, 제거를 한층 더 기대할 수 있다.Peeling of the dirt adhered to the body of the earthworm can be performed, for example, by covering the live earthworm with a nonwoven fabric and adsorbing the dirt thereon. By combining the contact with the metal chloride and the hydroxycarboxylic acid and the removal of the dirt adhering to the body and the body at this spot, the discharge and removal of toxic substances in the earthworm body can be further expected.

본 발명에서 사용하는 금속의 염화물은, 칼륨, 나트륨, 마그네슘 및 칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 금속의 염화물이다. 즉, 염화 칼륨, 염화 나트륨, 염화 마그네슘 및 염화 칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종이다. 또한, 이들의 혼합물이라도 되고, 이들과, 식품에 첨가 가능한 다른 무해한 성분과의 혼합물이라도 된다. 이와 같은 혼합물로서는, 예를 들면, 식염, 암염, 천일염이 있다. 상기 금속의 염화물은, 분말상으로 된 것을 생 지렁이에 뿌려서 사용할 수 있고, 이로써, 지렁이와 금속의 염화물의 접촉이 일어난다.The chloride of the metal used by this invention is a chloride of at least 1 sort (s) of metal chosen from the group which consists of potassium, sodium, magnesium, and calcium. That is, it is at least 1 sort (s) chosen from the group which consists of potassium chloride, sodium chloride, magnesium chloride, and calcium chloride. Moreover, a mixture of these may be sufficient, and a mixture of these and other harmless components which can be added to a foodstuff may be sufficient. As such a mixture, there exist salt, rock salt, and sun salt, for example. The chloride of the metal can be used by spraying a powdered thing on the live earthworm, whereby contact between the earthworm and the chloride of the metal occurs.

생 지렁이에 금속의 염화물을 접촉시킨 후, 생 지렁이와 하이드록시카르복시산을 접촉시킨다. 하이드록시카르복시산과의 접촉도, 분말상의 하이드록시카르복시산을 생 지렁이에게 뿌려서 행할 수 있다. 하이드록시카르복시산과의 접촉은, 상기 금속의 염화물과의 접촉 후 신속하게 행한다. 또한, 생 지렁이와 하이드록시카르복시산을 접촉시키기 전에, 지렁이를 수세하는 것이 바람직하다. 수세에 의해 상기 금속의 염화물을 제거한 후 지렁이와 하이드록시카르복시산을 접촉시키면 효소 활성이 높은 지렁이 건조 분말을 얻을 수 있다. 하이드록시카르복시산과의 접촉 전에 수세를 행하는 경우에는, 금속의 염화물과의 접촉 개시 후, 바람직하게는 30분, 더욱 바람직하게는 20분 이내에 수세를 행한다. 수세 방법은 특별히 한정되지 않고, 공지의 방법을 채용할 수 있다.After contacting the live earthworm with the chloride of the metal, the live earthworm is brought into contact with the hydroxycarboxylic acid. Contact with hydroxycarboxylic acid can also be performed by spraying a powdery hydroxycarboxylic acid on a live earthworm. Contact with hydroxycarboxylic acid is performed quickly after contact with the chloride of the metal. In addition, it is preferable to wash the earthworm before washing the earthworm with the hydroxycarboxylic acid. After removing the chloride of the metal by washing with water, the earthworm and the hydroxycarboxylic acid are contacted to obtain an earthworm dry powder having high enzyme activity. When washing with water prior to contact with hydroxycarboxylic acid, washing with water is preferably performed within 30 minutes, more preferably 20 minutes after initiation of contact with the chloride of the metal. The water washing method is not specifically limited, A well-known method can be employ | adopted.

생 지렁이를 장시간 하이드록시카르복시산 분말과 접촉시켜 두면 사멸하고, 생활 기능을 소실하고, 소화관 내의 소화물을 배설하지 않게 되므로, 가급적 신속하게, 바람직하게는 30초 이내, 더욱 바람직하게는 20초 이내에 하이드록시카르복시산을 물로 희석하여, pH를 2～5의 범위로 조정할 필요가 있다.If the live earthworm is in contact with the hydroxycarboxylic acid powder for a long time, it kills, loses the function of life, and does not excrete the digestive tract, so it is possible to hydroxy as quickly as possible, preferably within 30 seconds, more preferably within 20 seconds. It is necessary to dilute carboxylic acid with water and adjust pH to the range of 2-5.

하이드록시카르복시산은 지렁이에게 있어서 불쾌한 생활 환경을 형성하므로, 생 지렁이는, 자기 보존 본능에 의해 체액, 배설물을 방출하여 생활 환경을 개선하고자 한다. 또한, 하이드록시카르복시산은 살균성을 가지므로, 전술한 바와 같이 소화기 내에 잔류하는 소화물 등의 배설을 촉진하는 역할을 행하고, 또한 지렁이에 부착된 잡균을 살균하는 효과를 기대할 수 있다.Since hydroxycarboxylic acid forms an unpleasant living environment for earthworms, the live earthworms try to improve the living environment by releasing body fluids and excreta by self-preservation instinct. In addition, since hydroxycarboxylic acid has bactericidal properties, as described above, it plays a role of promoting the excretion of digests and the like remaining in the extinguisher, and can also be expected to have an effect of sterilizing various bacteria attached to the earthworm.

본 발명의 방법에 있어서 사용되는 결정상(結晶狀) 하이드록시카르복시산은, 사용 조건 하에서 결정상체를 나타내는 것이면, 그 하이드록시기의 수 또는 카르복실기의 수에는 관계없이 사용할 수 있다. 즉, 모노하이드록시모노카르복시산, 모노하이드록시폴리카르복시산, 폴리하이드록시모노카르복시산, 폴리하이드록시폴리카르복시산 중 어느 것이라도 사용할 수 있다.The crystalline hydroxycarboxylic acid used in the method of the present invention can be used irrespective of the number of the hydroxy groups or the number of the carboxyl groups as long as the crystalline body is represented under the use conditions. That is, any of monohydroxy monocarboxylic acid, monohydroxy polycarboxylic acid, polyhydroxy monocarboxylic acid, and polyhydroxy polycarboxylic acid can be used.

본 발명에서 사용하는 하이드록시카르복시산으로서는, 예를 들면, 글리콜산, 락트산, 아세트산, β-하이드록시프로피온산, α-하이드록시-n-부티르산, β-하이드록시-n-부티르산, α-하이드록시-n-발레르산, β-하이드록시-n-발레르산, 말산,α-메틸말산, α-하이드록시 글루타르산, β-하이드록시글루타르산, 구연산, 말론산 및 숙신산 등이 있다. 그 중에서도 식품에 대하여 사용 가능하며 입수가 용이한 점을 고려하여 락트산, 아세트산, 말산, 구연산, 말론산 및 숙신산이 바람직하다. 하이드록시카르복시산은, 1종을 단독으로 사용해도 되고, 2종 이상을 혼합하여 사용해도 된다.As the hydroxycarboxylic acid used in the present invention, for example, glycolic acid, lactic acid, acetic acid, β-hydroxypropionic acid, α-hydroxy-n-butyric acid, β-hydroxy-n-butyric acid, α-hydroxy- n-valeric acid, β-hydroxy-n- valeric acid, malic acid, α-methylmalic acid, α-hydroxy glutaric acid, β-hydroxyglutaric acid, citric acid, malonic acid and succinic acid. Among them, lactic acid, acetic acid, malic acid, citric acid, malonic acid and succinic acid are preferred in view of the fact that they can be used for food and are readily available. Hydroxycarboxylic acid may be used individually by 1 type, and may mix and use 2 or more types.

생 지렁이의 조직의 65%는 수분이다. 생 지렁이의 보신(保身) 기능이 작용하는 시간으로서는, 어느 정도 여유는 있지만, 생 지렁이가 사멸하면 효소가 작용하므로, 불쾌한 생활 환경 하에 두는 시간의 제어는 신중하게 행할 필요가 있다. 이 시간은, 조건에 의해 좌우되지만, 통상적으로는 3～180 분의 범위이다.65% of the live earthworm's tissue is water. Although there is a certain amount of time for the life function of the live earthworm to function, since the enzyme works when the live earthworm dies, it is necessary to carefully control the time to be placed under an unpleasant living environment. Although this time depends on conditions, it is the range of 3 to 180 minutes normally.

본 발명에 있어서, 하이드록시카르복시산으로 처리된 지렁이 생체는, 물로 세정하고 후, 마쇄하여 액상(液狀) 내지 페이스트상의 마쇄물로 만든다. 세정은 바람직하게는 순수(純水)로 행한다. 세정 방법은 특별히 한정되지 않으며, 공지의 수세 방법을 채용할 수 있다. 또한, 마쇄 전의 처리 공정의 합계 시간, 즉 생 지렁이에 금속의 염화물을 뿌린 후, 물에 의한 하이드록시카르복시산 세정을 종료할 때까지의 시간은, 합계하여 240분 이내가 바람직하다.In the present invention, the earthworm living body treated with hydroxycarboxylic acid is washed with water, and then ground to form a liquid to paste-like ground product. Washing is preferably performed with pure water. The washing method is not particularly limited, and a known washing method can be adopted. In addition, the total time of the treatment step before grinding, that is, the time from spraying the metal chloride to the live earthworm and ending the hydroxycarboxylic acid washing with water is preferably 240 minutes or less in total.

상기 마쇄 방법은 특별히 한정되지 않으며, 예를 들면, 호모지나이저, 블렌더(blender), 호모 믹서, 그라인더, 가압형 세포 파괴 장치 등을 사용하여, 통상 1～25 ℃에서 행해진다. 지렁이 구성 성분의 분해 억제의 관점에서 저온 하에서 행하는 것이 바람직하며, 2～15 ℃의 온도가 바람직하다.The said grinding | pulverization method is not specifically limited, For example, it carries out at 1-25 degreeC normally using a homogenizer, a blender, a homo mixer, a grinder, a pressurized cell disruption apparatus, etc. It is preferable to carry out at low temperature from a viewpoint of suppressing decomposition of an earthworm constituent, and the temperature of 2-15 degreeC is preferable.

지렁이의 마쇄에 의해 얻어진 마쇄물은, 예를 들면, 스테인레스강제 트레이에 수용되어, 동결 건조에 제공된다. 이 때, 지렁이 생체에 포함되는 효소는, 살아있는 세포에는 작용하지 않지만 죽은 세포에 대하여는 순식간에 작용하므로, 부패성 가스가 발생할 우려가 있어, 이것을 방지하기 위해 순간적으로 -18℃～-35℃로 급랭?동결시켜 효소의 작용을 억제한 후에, 동결 건조를 행하는 것이 바람직하다.The ground product obtained by the grounding of the earthworm is, for example, accommodated in a stainless steel tray and provided for freeze drying. At this time, the enzyme contained in the earthworm body does not act on the living cells but acts on the dead cells in an instant. Therefore, there is a risk of decaying gases, which are rapidly quenched to -18 ° C to -35 ° C to prevent this. It is preferable to perform freeze drying after freezing to inhibit the action of the enzyme.

이와 같이, 지렁이 본래의 약리 작용을 손상시키지 않고 분말화하기 위해서는, 신속하게 동결시킬 필요가 있지만, 한편으로는 지나치게 단시간에 동결시키면 지렁이 페이스트의 주성분인 단백질과 함께 존재하는 불순물이 스폿 상태의 부동결 (不凍結) 부분을 형성하여, 분리되지 않는 경우가 있으므로, 과도하게 급속한 동결은 바람직하지 않다. 따라서, 동결은 바람직하게는 -18℃ 내지 -35℃의 저온에서 20～240 시간, 더욱 바람직하게는 50～170 시간 동안 행한다.As described above, in order to powder the earthworms without impairing the original pharmacological action, it is necessary to freeze them quickly, but on the other hand, if they are frozen in a short time, impurities existing together with the protein, which is the main component of the earthworm paste, are spot-free. Excessive rapid freezing is not desirable because it may form part and not separate. Therefore, freezing is preferably performed at a low temperature of -18 ° C to -35 ° C for 20 to 240 hours, more preferably 50 to 170 hours.

동결 건조 시에는, 수분과 함께 불순물이 잔류하지 않도록 제거할 수 있는 조건을 선택하는 것이 중요하다. 이를 위해서는, 압력 50 Pa 이하, -60℃ 내지 +90℃의 온도에 있어서, 온도를 단계적으로 높이면서 10～60 시간의 범위 내에서 제어하여 행하는 것이 바람직하다.In freeze drying, it is important to select conditions that can be removed so that impurities do not remain with water. For this purpose, it is preferable to carry out by controlling in the range of 10 to 60 hours, increasing temperature stepwise at the temperature of -60 degreeC-+90 degreeC of pressure 50 Pa or less.

동결 건조의 방법으로서는, 예를 들면, 전술한 바와 같이 마쇄물을 -18℃ 내지 -35℃의 온도에서 20～240 시간 동안 동결시킨 후, -60℃～+90℃의 온도에 있어서, 수 단계로 나누어 승온하고, 압력 25～40 Pa에 있어서, 수 단계로 나누어 감압하면서, 10～60 시간 동결 진공 건조시킴으로써 무균 상태의 담황색 지렁이 건조 분말을 얻을 수 있다.As a method of freeze-drying, for example, as described above, the ground material is frozen at a temperature of -18 ° C to -35 ° C for 20 to 240 hours, and then at a temperature of -60 ° C to + 90 ° C, and several steps. It is possible to obtain a sterile pale yellow earthworm dry powder by drying by freezing vacuum drying for 10 to 60 hours while dividing the temperature into a plurality of steps, and dividing it into several steps at a pressure of 25 to 40 Pa under reduced pressure.

전술한 바와 같이 하여 얻어진 지렁이 건조 분말은, 지렁이의 종류, 채취 장소, 채취 시기에 따라 다르지만, 분말 100g 중에, 예를 들면, 아르기닌 70～120 mg, 리신 110～150 mg, 히스티딘 35～60 mg, 페닐알라닌 55～80 mg, 티로신 50～75 mg, 루이신 100～150 mg, 이소루이신 60～90 mg, 메티오닌 25～40 mg, 발린 70～105 mg, 알라닌 85～135 mg, 글리신 75～105 mg, 프롤린 60～85 mg, 글루타민산 210～300 mg, 세린 80～110 mg, 트레오닌 75～110 mg, 아스파라긴산 150～220 mg, 트립토판 15～30 mg 및 시스틴 20～35 mg을 함유한다.The earthworm dry powder obtained as described above varies depending on the type of earthworm, the collecting place, and the harvesting time, but in 100 g of powder, for example, arginine 70 to 120 mg, lysine 110 to 150 mg, histidine 35 to 60 mg, Phenylalanine 55-80 mg, tyrosine 50-75 mg, leucine 100-150 mg, isoleucine 60-90 mg, methionine 25-40 mg, valine 70-105 mg, alanine 85-135 mg, glycine 75-105 mg , 60 to 85 mg of proline, 210 to 300 mg of glutamic acid, 80 to 110 mg of serine, 75 to 110 mg of threonine, 150 to 220 mg of aspartic acid, 15 to 30 mg of tryptophan and 20 to 35 mg of cystine.

[실시예][Example]

다음으로, 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 본 발명은 이하의 실시로 한정되는 것은 아니다.Next, an Example demonstrates this invention further in detail. This invention is not limited to the following practice.

[지렁이 건조 분말의 조제][Preparation of Earthworm Dry Powder]

(실시예 1)(Example 1)

24시간 명소에 방치한 후, 체피에 부착된 오물을 박리한 살아있는 붉은 지렁이 30 kg을 평평한 접시에 약 5 cm의 두께로 펼쳐놓고, 그 위에 염화 나트륨 250 g을 균일하게 뿌렸다. 20분 후, 지렁이를 수세했다.After standing at the spot for 24 hours, 30 kg of live red earthworms peeled off the dirt attached to the husk were spread out on a flat plate with a thickness of about 5 cm, and 250 g of sodium chloride was evenly sprayed thereon. After 20 minutes, I washed the earthworm.

그 후, 구연산 250 g을 마찬가지로 뿌린 후 15초에 걸쳐서 순수 30리터를 부가하여 희석했다. 이 때, 물을 부가한 직후의 pH는 2.25이며, 완전하게 희석했을 때의 pH는 2.74였다.Thereafter, 250 g of citric acid was sprinkled in the same manner, and then 30 liters of pure water was added and diluted over 15 seconds. At this time, the pH immediately after adding water was 2.25, and the pH when completely diluted was 2.74.

구연산 분말을 뿌리면, 지렁이는 단번에 노란 체액을 방출했다. 물로 희석한 후, 그 상태로 20분간 유지하였다.When sprinkled with citric acid powder, the earthworms released yellow body fluids at once. After dilution with water, it was kept for 20 minutes.

이어서, 오염 구연산 수용액으로부터 생 지렁이를 인출하고, 수세한 후, 호모지나이저를 사용하여 10℃에서 마쇄하여, 지렁이 페이스트를 조제했다. 다음으로, 이 지렁이 페이스트를 흡인에 의해 탈기하여, 그 중에 포함되어 있는 가스를 제거한 후, 스테인레스강제 트레이로 옮겨, 순간적으로 -35℃까지 급랭하고, 이 온도로 50시간 유지하여 서서히 동결했다.Subsequently, the live earthworm was taken out from the contaminated citric acid aqueous solution, washed with water, and ground at 10 ° C using a homogenizer to prepare an earthworm paste. Next, this earthworm paste was degassed by suction, the gas contained in it was removed, and it moved to the stainless steel tray, and it quenched instantaneously to -35 degreeC, hold | maintained at this temperature for 50 hours, and frozen slowly.

동결된 지렁이 페이스트를 -35℃에서 압력 0 Pa를 2시간 유지한 후, 온도 25℃까지 승온하고, 40 Pa에서 10시간, 이어서, 40℃, 압력 35 Pa에서 14시간, 이어서, 65℃, 압력 35 Pa에서 12시간 건조하고, 마지막에 온도를 80℃로 하고, 압력 25 Pa에서 6시간 유지함으로써 진공 동결 건조를 행하였다. 이 처리에 의해 함수량(含水量) 8 질량%의 담황색의 지렁이 건조 분말을 얻었다.The frozen earthworm paste was kept at -35 ° C. at 0 Pa for 2 hours, then heated up to a temperature of 25 ° C. and then at 40 Pa for 10 hours, then at 40 ° C., at a pressure of 35 Pa for 14 hours, then at 65 ° C., pressure It dried at 35 Pa for 12 hours, the temperature was made into 80 degreeC at the end, and vacuum freeze drying was performed by keeping pressure at 25 Pa for 6 hours. By this treatment, light yellow earthworm dry powder having a water content of 8% by mass was obtained.

(비교예 1)(Comparative Example 1)

24시간 명소에 방치한 후, 체피에 부착된 오물을 박리한 살아있는 붉은 지렁이 30 kg을 평평한 접시에 약 5 cm의 두께로 펼쳐놓고, 그 위에 물 30리터를 부가하였다. 물을 부가한 후에, 그 상태로 20분간 유지하였다.After standing at the spot for 24 hours, 30 kg of live red earthworms peeled off the dirt attached to the body were spread out on a flat plate with a thickness of about 5 cm, and 30 liters of water was added thereto. After adding water, it was kept in that state for 20 minutes.

이어서, 물로부터 생 지렁이를 인출하고, 수세한 후, 호모지나이저를 사용하여 10℃에서 마쇄하여, 지렁이 페이스트를 조제했다. 다음으로, 이 지렁이 페이스트를 흡인에 의해 탈기하여, 그 중에 포함되어 있는 가스를 제거한 후, 스테인레스강제 트레이로 옮겨, 순간적으로 -35℃까지 급랭하고, 이 온도로 50시간 유지하여 서서히 동결했다.Subsequently, the live earthworm was taken out from water, washed with water, and ground at 10 ° C using a homogenizer to prepare an earthworm paste. Next, this earthworm paste was degassed by suction, the gas contained in it was removed, and it moved to the stainless steel tray, and it quenched instantaneously to -35 degreeC, hold | maintained at this temperature for 50 hours, and frozen slowly.

동결된 지렁이 페이스트를 -35℃에서 압력 0 Pa를 2시간 유지한 후, 온도 25℃까지 승온하고, 40 Pa에서 10시간, 이어서, 40℃, 압력 35 Pa에서 14시간, 이어서, 65℃, 압력 35 Pa에서 12시간 건조하고, 마지막에 온도를 80℃로 하고, 압력 25 Pa에서 6시간 유지함으로써 진공 동결 건조를 행하였다. 이 처리에 의해 함수량 8 질량%의 담황색의 지렁이 건조 분말을 얻었다.The frozen earthworm paste was kept at -35 ° C. at 0 Pa for 2 hours, then heated up to a temperature of 25 ° C. and then at 40 Pa for 10 hours, then at 40 ° C., at a pressure of 35 Pa for 14 hours, then at 65 ° C., pressure It dried at 35 Pa for 12 hours, the temperature was made into 80 degreeC at the end, and vacuum freeze drying was performed by keeping pressure at 25 Pa for 6 hours. This treatment yielded a pale yellow earthworm dry powder having a water content of 8% by mass.

(비교예 2)(Comparative Example 2)

24시간 명소에 방치한 후, 체피에 부착된 오물을 박리한 살아있는 붉은 지렁이 30 kg을 평평한 접시에 약 5 cm의 두께로 펼쳐놓고, 그 위에 구연산 250 g을 뿌린 후 15초에 걸쳐 순수 30리터를 부가하여 희석했다.After standing at the spot for 24 hours, spread 30 kg of live red earthworms with peeling dirt attached to the body of blood on a flat plate, about 5 cm thick, sprinkle 250 g of citric acid on it, and then apply 30 liters of pure water for 15 seconds. And diluted.

구연산 분말을 뿌리면, 지렁이는 단번에 노란 체액을 방출했다. 물로 희석한 후에, 그 상태로 20분간 유지하였다.When sprinkled with citric acid powder, the earthworms released yellow body fluids at once. After dilution with water, it was kept for 20 minutes.

이어서, 오염 구연산 수용액으로부터 생 지렁이를 인출하고, 수세한 후, 호모지나이저를 사용하여 10℃에서 마쇄하여, 지렁이 페이스트를 조제했다. 다음으로, 이 지렁이 페이스트를 흡인에 의해 탈기하여, 그 중에 포함되어 있는 가스를 제거한 후, 스테인레스강제 트레이로 옮겨, 순간적으로 -35℃까지 급랭하고, 이 온도로 50시간 유지하여 서서히 동결했다. 동결된 지렁이 페이스트를 -35℃에서 압력 0 Pa를 2시간 유지한 후, 온도 25℃까지 승온하고, 40 Pa에서 10시간, 이어서, 40℃, 압력 35 Pa에서 14시간, 이어서, 65℃, 압력 35 Pa에서 12시간 건조하고, 마지막으로 온도를 80℃로 하고, 압력 25 Pa에서 6시간 유지함으로써 진공 동결 건조를 행하였다. 이 처리에 의해 함수량 8 질량%의 담황색의 지렁이 건조 분말을 얻었다.Subsequently, the live earthworm was taken out from the contaminated citric acid aqueous solution, washed with water, and ground at 10 ° C using a homogenizer to prepare an earthworm paste. Next, this earthworm paste was degassed by suction, the gas contained in it was removed, and it moved to the stainless steel tray, and it quenched instantaneously to -35 degreeC, hold | maintained at this temperature for 50 hours, and frozen slowly. The frozen earthworm paste was kept at -35 ° C. at 0 Pa for 2 hours, then heated up to a temperature of 25 ° C. and then at 40 Pa for 10 hours, then at 40 ° C., at a pressure of 35 Pa for 14 hours, then at 65 ° C., pressure It dried at 35 Pa for 12 hours, the temperature was made into 80 degreeC, and vacuum freeze drying was performed by maintaining at pressure 25 Pa for 6 hours. This treatment yielded a pale yellow earthworm dry powder having a water content of 8% by mass.

(비교예 3)(Comparative Example 3)

24시간 명소에 방치한 후, 체피에 부착된 오물을 박리한 살아있는 붉은 지렁이 30 kg을 평평한 접시에 약 5 cm의 두께로 펼쳐놓고, 그 위에 구연산 250 g을 균일하게 뿌렸다. 그 후, 물 30리터를 부가하여 희석했다. 구연산 분말을 뿌리면, 지렁이는 단번에 노란 체액을 방출했다. 물로 희석한 후에, 그 상태로 20분간 유지하였다. 이어서, 오염된 구연산 수용액으로부터 생 지렁이를 인출하고, 수세한 후, 염화 나트륨 250 g을 뿌리고, 그 상태로 20분간 유지하였다.After standing at the spot for 24 hours, 30 kg of live red earthworms peeled off the dirt attached to the husks were spread out on a flat plate at a thickness of about 5 cm, and 250 g of citric acid was evenly sprayed thereon. Thereafter, 30 liters of water was added and diluted. When sprinkled with citric acid powder, the earthworms released yellow body fluids at once. After dilution with water, it was kept for 20 minutes. Subsequently, the live earthworm was taken out from the contaminated aqueous citric acid solution, washed with water, and then sprayed with 250 g of sodium chloride, and maintained for 20 minutes.

이어서, 생 지렁이를 수세하고, 호모지나이저를 사용하여 10℃에서 마쇄하여, 지렁이 페이스트를 조제했다. 다음으로, 이 지렁이 페이스트를 흡인에 의해 탈기하여, 그 중에 포함되어 있는 가스를 제거한 후, 스테인레스강제 트레이로 옮겨, 순간적으로 -35℃까지 급랭하고, 이 온도로 50시간 유지하여 서서히 동결했다.Subsequently, the live earthworms were washed with water, and ground at 10 ° C using a homogenizer to prepare an earthworm paste. Next, this earthworm paste was degassed by suction, the gas contained in it was removed, and it moved to the stainless steel tray, and it quenched instantaneously to -35 degreeC, hold | maintained at this temperature for 50 hours, and frozen slowly.

동결된 지렁이 페이스트를 -35℃에서 압력 0 Pa를 2시간 유지한 후, 온도 25℃까지 승온하고, 40 Pa에서 10시간, 이어서, 40℃, 압력 35 Pa에서 14시간, 이어서, 65℃, 압력 35 Pa에서 12시간 건조하고, 마지막으로 온도를 80℃로 하고, 압력 25 Pa에서 6시간 유지함으로써 진공 동결 건조를 행하였다. 이 처리에 의해 함수량 8 질량%의 담황색의 지렁이 건조 분말을 얻었다.The frozen earthworm paste was kept at -35 ° C. at 0 Pa for 2 hours, then heated up to a temperature of 25 ° C. and then at 40 Pa for 10 hours, then at 40 ° C., at a pressure of 35 Pa for 14 hours, then at 65 ° C., pressure It dried at 35 Pa for 12 hours, the temperature was made into 80 degreeC, and vacuum freeze drying was performed by maintaining at pressure 25 Pa for 6 hours. This treatment yielded a pale yellow earthworm dry powder having a water content of 8% by mass.

(비교예 4)(Comparative Example 4)

24시간 명소에 방치한 후, 체피에 부착된 오물을 박리한 살아있는 붉은 지렁이 30 kg을 평평한 접시에 약 5 cm의 두께로 펼쳐놓고, 그 위에 구연산 250 g 및 염화 나트륨 250 g을 혼합하여 균일하게 뿌렸다. 그 후, 구연산 250 g 및 염화 나트륨 250 g을 뿌린 후 15초에 걸쳐 순수 30리터를 부가하여 희석했다.After standing at the spot for 24 hours, 30 kg of live red earthworms peeled off the dirt attached to the husk were spread out on a flat plate with a thickness of about 5 cm, and the mixture was evenly sprayed with 250 g of citric acid and 250 g of sodium chloride. . Thereafter, 250 g of citric acid and 250 g of sodium chloride were sprinkled, and 30 liters of pure water was added and diluted over 15 seconds.

구연산 분말 및 염화 나트륨을 뿌리면, 지렁이는 단번에 노란 체액을 방출했다. 물로 희석한 후에, 그 상태로 20분간 유지하였다.When sprinkled with citric acid powder and sodium chloride, the earthworms at once released yellow body fluids. After dilution with water, it was kept for 20 minutes.

[지렁이 건조 분말의 역가 검정][Titer Black of Earthworm Dry Powder]

<측정 시료의 조제><Preparation of measurement sample>

상기에서 얻어진 각 지렁이 건조 분말 1 g에 생리 식염수 20 ml를 부가하여, 1500 rpm으로 1시간 진탕(shaking)을 행하였다. 이것을 10000×g, 4℃에서, 15분 원심분리하여 상청(上淸)을 측정 시료로 하였다.20 ml of physiological saline was added to 1 g of each earthworm dry powder obtained above, and shaking was carried out at 1500 rpm for 1 hour. This was centrifuged at 10000 * g and 4 degreeC for 15 minutes, and the supernatant was used as the measurement sample.

<단백질 정량법(定量法)><Protein Quantitation>

단백질 정량은, 브래드포드법(M. Bradford, Anal. Biochem., 72: 248-254, 1976)에 따라 산출하였다.Protein quantification was calculated according to the Bradford method (M. Bradford, Anal. Biochem., 72: 248-254, 1976).

상기 측정 시료에 대하여, 단백질 분석 키트(Protein assay kit)(Bio-Rad Laboratories, Inc.)를 사용하여 단백질량 측정용 시료 조제를 행하고, 595 nm의 흡광도를 측정하였다. 별도로 소 혈청 알부민(Bovine, Sigma-Aldrich Co.)을 사용하여 제작한 검량선에 의해 단백질량의 환산을 행하였다.The measurement sample was prepared using a protein assay kit (Bio-Rad Laboratories, Inc.) to prepare a sample for protein amount measurement, and absorbance at 595 nm was measured. Separately, the amount of protein was converted by a calibration curve prepared using bovine serum albumin (Bovine, Sigma-Aldrich Co.).

[표 1][Table 1]

<합성 아미드 기질 분해법>Synthetic Amide Substrate Decomposition

비특허 문헌[스미 히로유키, 오카모토 타케시, 이시이 요이치, 룸브로키나아제(지렁이 효소)의 역가 검정법-피브린 및 합성 아미드 분해능-, 약리와 임상, 20: 347-351, 2010]에 기재된 방법에 준하여, 합성 아미드 기질 분해 활성을 측정하였다.Synthesis according to the method described in non-patent literature (Sumi Hiroyuki, Takeshi Okamoto, Yoshi Ishii, Lubrication Assay of Lumbrokinase (earthworm enzyme)-Fibrin and Synthetic Amide Resolution, Pharmacology and Clinical, 20: 347-351, 2010) Amide substrate degradation activity was measured.

합성 아미드 기질은, 우로키나아제의 합성 기질인 pyroGlu-Gly-Arg-pNA[BIOPHEN CS-61(44), 코스모바이오(주)]를 디메틸설폭시드(DMSO)로 5×10^-3 M이 되도록 용해시켜 조제했다.The synthetic amide substrate is dissolved in pyroGlu-Gly-Arg-pNA [BIOPHEN CS-61 (44), Cosmo Bio Co., Ltd.], which is a synthetic substrate of urokinase, to 5 × 10 ⁻³ M with dimethyl sulfoxide (DMSO). I made it.

전술한 바와 같이 하여 얻어진 측정 시료 0.1 ml에, 붕산 완충액(BSB)을 0.8 ml 부가하여 2분간 인큐베이션한 후, 합성 아미드 기질 0.1 ml를 부가하여, 37℃에서 5분간 반응시킨 후, 405 nm의 흡광도를 측정하고, 1분당의 최대 경사(최초 속도)로부터, 흡광 계수 10.79 mM^-1?cm^- ¹으로 방출된 pNA의 양을 산출하였다. 얻어진 결과를 하기 표 2에 나타낸다.After 0.1 ml of boric acid buffer (BSB) was added to 0.1 ml of the measurement sample obtained as described above and incubated for 2 minutes, 0.1 ml of synthetic amide substrate was added and reacted at 37 ° C for 5 minutes, followed by absorbance at 405 nm. the measurements, one per minute from the maximum slope (first speed), the extinction coefficient of 10.79 mM ^-1 cm ^- was calculated the amount of pNA released by ¹ ?. The results obtained are shown in Table 2 below.

또한, 합성 아미드 기질 분해 활성을, 단백질 총량으로 나눗셈하여 얻어지는 비활성(比活性)을 하기 표 3에 나타낸다.In addition, inactivation obtained by dividing the synthetic amide substrate decomposition activity by the total protein amount is shown in Table 3 below.

[표 2][Table 2]

[표 3][Table 3]

<피브린 평판법>Fibrin Reputation Method

비특허 문헌(T.Astrup & S.Mullertz, The fibrin plate method for estimating fibrinolytic activity., Arch. Biochem. Biophys., 40: 346-351, 1952)에 기재된 방법에 준하여, 피브린 평판을 작성하고, 피브린 평판법에 의한 용해 활성의 비교를 행하였다.Fibrin plates were prepared according to the method described in the non-patent literature (T.Astrup & S. Mullertz, The fibrin plate method for estimating fibrinolytic activity., Arch. Biochem. Biophys., 40: 346-351, 1952) The dissolution activity by the plate method was compared.

피브리노겐(Bovine Fraction I-S, Sigma-Aldrich Co.)을 최종 농도 0.5%가 되도록 붕산 완충액(pH 7.8: BSB)으로 용해시켰다. 이 용액 10 ml에 트롬빈[임상용, 후지 제약 공업(주)]을 0.5 ml 부가하여 피브린 평판을 제작하였다.Fibrinogen (Bovine Fraction I-S, Sigma-Aldrich Co.) was dissolved in boric acid buffer (pH 7.8: BSB) to a final concentration of 0.5%. To 10 ml of this solution, 0.5 ml of thrombin (clinical, Fuji Pharmaceutical Industries, Ltd.) was added to form a fibrin plate.

용해 면적의 측정은, 각 측정 시료 30㎕를 상기 평판에 로딩하여 37℃에서 4시간 인큐베이션했을 때 생기는 용해 영역(dissolved zone)의 면적을 측정함으로써 행하였다. 또한, 단백 분해 효소인 트립신(Bovine, Sigma-Aldrich Co.)의 검량선을 작성하여, 단위 환산을 행하고, 각 측정 시료 중의 단백질량으로부터, 비활성을 구하였다. 결과를 하기 표 4에 나타낸다.The measurement of the dissolution area was carried out by loading 30 μl of each measurement sample onto the plate and measuring the area of the dissolved zone generated when incubated at 37 ° C. for 4 hours. In addition, a calibration curve of trypsin (Bovine, Sigma-Aldrich Co.), a protease was prepared, and the unit conversion was performed to determine the inactivity from the amount of protein in each measurement sample. The results are shown in Table 4 below.

[표 4][Table 4]

본 발명의 방법에 의하면, 유독 물질이 제거된, 양질의 지렁이 건조 분말을 얻을 수 있다. 또한, 실시예 1로부터 밝혀진 바와 같이, 본 발명의 제조 방법에 의해 제조된 지렁이 건조 분말은, 높은 역가의 효소를 포함한다.According to the method of the present invention, it is possible to obtain a high quality earthworm dry powder from which toxic substances have been removed. Also, as is clear from Example 1, the earthworm dry powder produced by the production method of the present invention contains a high titer enzyme.

한편, 비교예 1 및 2로부터 밝혀진 바와 같이, 구연산 처리만 행해진 것은 수(水) 처리만 행해진 것과 비교하여 효소 활성이, 2배 내지 4배 정도였다. 또한, 비교예 2 및 3의 결과로부터 밝혀진 바와 같이, 구연산 처리를 먼저 행하고, 그 후 금속의 염화물로 처리한 경우에는, 구연산 처리만 행해진 것에 비해 효소 활성은 별로 변하지 않았다.On the other hand, as is clear from Comparative Examples 1 and 2, only citric acid treatment was about 2 to 4 times higher in enzyme activity as compared to only water treatment. As is clear from the results of Comparative Examples 2 and 3, when citric acid treatment was first performed and then treated with a chloride of metal, the enzyme activity did not change much compared with only citric acid treatment.

(실시예 2)(Example 2)

24시간 명소에 방치한 후, 체피에 부착된 오물을 박리한 살아있는 붉은 지렁이 30 kg을 평평한 접시에 5 cm의 두께로 펼쳐놓고, 그 위에 염화 마그네슘 250 g을 균일하게 뿌렸다. 20분 후, 지렁이를 수세했다.After standing at the spot for 24 hours, 30 kg of live red earthworms peeled off the dirt attached to the husk were spread out to a flat plate with a thickness of 5 cm, and 250 g of magnesium chloride was evenly sprayed thereon. After 20 minutes, I washed the earthworm.

그 후, 락트산 250 ml를 마찬가지로 뿌린 후 15초에 걸쳐 순수 30리터를 부가하여 희석했다. 락트산을 뿌리면, 지렁이는 단번에 노란 체액을 방출했다. 물로 희석한 후에, 그 상태로 20분간 유지하였다.Thereafter, 250 ml of lactic acid was sprayed in the same manner, and then 30 liters of pure water was added and diluted over 15 seconds. When lactic acid was sprayed, the earthworms released yellow fluids at once. After dilution with water, it was kept for 20 minutes.

이어서, 오염된 락트산 수용액으로부터 생 지렁이를 인출하고, 수세한 후, 호모지나이저를 사용하여 10℃에서 마쇄하여, 지렁이 페이스트를 조제했다. 다음으로, 이 지렁이 페이스트를 흡인에 의해 탈기하여, 그 중에 포함되어 있는 가스를 제거한 후, 스테인레스강제 트레이로 옮겨, 순간적으로 -35℃까지 급랭하고, 이 온도로 50시간 유지하여 서서히 동결했다.Subsequently, the live earthworm was taken out from the contaminated lactic acid aqueous solution, washed with water, and ground at 10 ° C. using a homogenizer to prepare an earthworm paste. Next, this earthworm paste was degassed by suction, the gas contained in it was removed, and it moved to the stainless steel tray, and it quenched instantaneously to -35 degreeC, hold | maintained at this temperature for 50 hours, and frozen slowly.

(비교예 5)(Comparative Example 5)

24시간 명소에 방치한 후, 체피에 부착된 오물을 박리한 살아있는 붉은 지렁이 30 kg을 평평한 접시에 5 cm의 두께로 펼쳐놓고, 그 위에 락트산 250 ml를 마찬가지로 뿌린 후 15초에 걸쳐 순수 30리터를 부가하여 희석했다. 락트산을 뿌리면, 지렁이는 단번에 노란 체액을 방출했다. 물로 희석한 후에, 그 상태로 20분간 유지하였다.After standing at the spot for 24 hours, spread 30 kg of live red earthworms, stripped of filth attached to the body, 5 cm thick on a flat plate, and sprinkle 250 ml of lactic acid on top of it, and then 30 liters of pure water over 15 seconds. And diluted. When lactic acid was sprayed, the earthworms released yellow fluids at once. After dilution with water, it was kept for 20 minutes.

이어서, 생 지렁이를 인출하여 수세한 후, 염화 마그네슘 250 g을 균일하게 뿌렸다. 그 상태로 20분간 유지하였다.Subsequently, the raw earthworms were taken out and washed with water, and then 250 g of magnesium chloride was uniformly sprayed. The state was maintained for 20 minutes.

이어서, 생 지렁이를 인출하고, 수세한 후, 호모지나이저를 사용하여 10℃에서 마쇄하여, 지렁이 페이스트를 조제했다. 다음으로, 이 지렁이 페이스트를 흡인에 의해 탈기하여, 그 중에 포함되어 있는 가스를 제거한 후, 스테인레스강제 트레이로 옮겨, 순간적으로 -35℃까지 급랭하고, 이 온도로 50시간 유지하여 서서히 동결했다.Subsequently, the raw earthworms were taken out, washed with water, and ground at 10 ° C. using a homogenizer to prepare earthworm pastes. Next, this earthworm paste was degassed by suction, the gas contained in it was removed, and it moved to the stainless steel tray, and it quenched instantaneously to -35 degreeC, hold | maintained at this temperature for 50 hours, and frozen slowly.

[지렁이 건조 분말의 역가 검정][Titer Black of Earthworm Dry Powder]

<측정 시료의 조제><Preparation of measurement sample>

상기에서 얻어진 실시예 2 및 비교예 5의 각 지렁이 건조 분말 1 g에 생리 식염수 20 ml를 부가하여, 1500 rpm으로 1시간 진탕을 행하였다. 이것을 10000×g, 4℃에서, 15분 원심분리하여 상청을 측정 시료로 하였다.20 ml of physiological saline was added to 1 g of the earthworm dry powders of Example 2 and Comparative Example 5 obtained above, and shaking was performed at 1500 rpm for 1 hour. This was centrifuged at 10000 * g and 4 degreeC for 15 minutes, and the supernatant was used as the measurement sample.

<단백질 정량법>Protein Assay

상기 측정 시료에 대하여, 단백질 분석 키트(Bio-Rad Laboratories, Inc.)를 사용하여 단백질량 측정용 시료 조제를 행하고, 595 nm의 흡광도를 측정하였다. 별도로 소 혈청 알부민(Bovine, Sigma-Aldrich Co.)을 사용하여 작성한 검량선에 의해 단백질량의 환산을 행하였다.About the said measurement sample, the sample preparation for protein amount measurement was performed using the protein analysis kit (Bio-Rad Laboratories, Inc.), and the absorbance of 595 nm was measured. Separately, the amount of protein was converted by a calibration curve prepared using bovine serum albumin (Bovine, Sigma-Aldrich Co.).

[표 5][Table 5]

<합성 아미드 기질 분해법>Synthetic Amide Substrate Decomposition

합성 아미드 기질은, 유로키나아제의 합성 기질인 pyroGlu-Gly-Arg-pNA[BIOPHEN CS-61(44), 코스모바이오(주)]를 디메틸설폭시드(DMSO)로 5×10^-3 M이 되도록 용해시켜 조제했다.The synthetic amide substrate dissolves pyroGlu-Gly-Arg-pNA (BIOPHEN CS-61 (44), Cosmo Bio Co., Ltd.), which is a synthetic substrate of urokinase, to 5 × 10 ⁻³ M with dimethyl sulfoxide (DMSO). I made it.

상기에서 얻어진 측정 시료 0.1 ml에, 붕산 완충액(BSB)을 0.8 ml 부가하여 2분간 인큐베이션한 후, 합성 아미드 기질 0.1 ml를 부가하여, 37℃에서 5분간 반응시킨 후, 405 nm의 흡광도를 측정하고, 1분당의 최대 경사(최초 속도)로부터, 흡광 계수 10.79 mM^-1?cm^- ¹으로 방출된 pNA의 양을 산출하였다. 얻어진 결과를 하기 표 6에 나타낸다.To 0.1 ml of the measurement sample obtained above, 0.8 ml of boric acid buffer (BSB) was added and incubated for 2 minutes, and then 0.1 ml of synthetic amide substrate was added and reacted at 37 ° C for 5 minutes, and the absorbance at 405 nm was measured. was calculated the amount of pNA released by ¹ ^-?, the extinction coefficient of 10.79 mM ^-1 cm per minute from the maximum slope (first speed). The obtained results are shown in Table 6 below.

또한, 합성 아미드 기질 분해 활성을, 단백질 총량으로 나눗셈하여 얻어지는 비활성을 하기 표 7에 나타낸다.In addition, the inactivation obtained by dividing the synthetic amide substrate decomposition activity by the total protein amount is shown in Table 7 below.

[표 6]TABLE 6

[표 7][Table 7]

<피브린 평판법(Fibrin Plate Method)>Fibrin Plate Method

용해 면적의 측정은, 각 측정 시료 30㎕를 상기 평판에 로딩하여 37℃에서 4시간 인큐베이션할 때 생기는 용해 영역의 면적을 측정함으로써 행하였다. 또한, 단백 분해 효소인 트립신(Bovine, Sigma-Aldrich Co.)의 검량선을 작성하여, 단위 환산을 행하고, 각 측정 시료 중의 단백질량으로부터, 비활성을 구하였다. 결과를 하기 표 8에 나타낸다.The measurement of the dissolution area was carried out by loading 30 µl of each measurement sample onto the plate and measuring the area of the dissolution region generated when incubating at 37 ° C for 4 hours. In addition, a calibration curve of trypsin (Bovine, Sigma-Aldrich Co.), a protease was prepared, and the unit conversion was performed to determine the inactivity from the amount of protein in each measurement sample. The results are shown in Table 8 below.

[표 8][Table 8]

상기 표 7 및 표 8로부터 밝혀진 바와 같이, 합성 아미드 기질 분해법과 피브린 평판법의 모두에 있어서, 염화 마그네슘(금속염화물)-락트산(하이드록시카르복시산)의 순서로 지렁이의 불쾌 환경을 형성한 편이, 그 반대의 순서로 행한 것보다 효소의 비활성이 2배 정도로 높았다. 이로써, 염화 나트륨 이외의 금속염화물이나 구연산 이외의 하이드록시카르복시산을 사용한 경우라도, 금속염화물-하이드록시카르복시산의 순서이면 높은 효소 활성을 가지는 지렁이 분말을 얻을 수 있는 것을 확인할 수 있었다.As is clear from Table 7 and Table 8, in both the synthetic amide matrix decomposition method and the fibrin plate method, the unpleasant environment of the earthworm was formed in the order of magnesium chloride (metal chloride) -lactic acid (hydroxycarboxylic acid), and vice versa. The activity of the enzyme was about 2 times higher than that in the order of. Thereby, even when metal chlorides other than sodium chloride and hydroxycarboxylic acids other than citric acid were used, it was confirmed that an earthworm powder having high enzymatic activity can be obtained in the order of metal chloride-hydroxycarboxylic acid.

[산업상 이용가능성][Industrial applicability]

본 발명 방법에 의해 제조한 지렁이 건조 분말은, 종래 방법에 의해 제조한 지렁이 건조 분말과 마찬가지로, 혈압 조절제, 항고지혈증제, 당뇨병 치료제, 혈전 용해제 등으로서 유용하다. 또한, 이 분말을 순수, 알코올 등에 의해 추출된 용액을 원심분리하고, 분자량별로 분획(分劃)함으로써, 의약품, 화장품, 보조 식품의 유효 성분으로서 이용할 수 있다.The earthworm dry powder produced by the method of the present invention is useful as a blood pressure regulator, an antihyperlipidemic agent, a diabetes therapeutic agent, a thrombolytic agent, and the like, similarly to the earthworm dry powder produced by the conventional method. In addition, this powder can be used as an active ingredient of medicines, cosmetics and supplements by centrifuging the solution extracted with pure water, alcohol, etc., and fractionating it by molecular weight.

Claims

생 지렁이를 칼륨, 나트륨, 마그네슘 및 칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종의 금속의 염화물과 접촉시키고, 그 후, 분말상(粉末狀) 하이드록시카르복시산과 상기 생 지렁이를 접촉시키고, 물로 희석하여 pH 2～5로 조정하고, 3～180 분간 유지한 후, 상기 생 지렁이를 수세(水洗)하고, 마쇄(磨碎)하여, 얻어진 마쇄물을 동결 건조하는, 지렁이 건조 분말의 제조 방법.The live earthworm is contacted with a chloride of at least one metal selected from the group consisting of potassium, sodium, magnesium and calcium, and then the powdered hydroxycarboxylic acid is brought into contact with the live earthworm, diluted with water, and the pH is reduced. The manufacturing method of the earthworm dried powder which adjusts to 2-5, hold | maintains for 3 to 180 minutes, wash | cleans the said raw earthworm, grinds, and freeze-dries the obtained ground material.

생 지렁이를 칼륨, 나트륨, 마그네슘 및 칼슘으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 금속의 염화물과 접촉시키고, 그 후, 상기 생 지렁이를 pH 2～5로 조정된 하이드록시카르복시산 수용액 중에 침지(浸漬)하고, 3～180 분간 유지한 후, 상기 생 지렁이를 수세하고, 마쇄하여, 얻어진 마쇄물을 동결 건조하는, 지렁이 건조 분말의 제조 방법.The live earthworm is brought into contact with a chloride of a metal selected from the group consisting of potassium, sodium, magnesium and calcium, and then the live earthworm is immersed in an aqueous hydroxycarboxylic acid solution adjusted to pH 2-5, After holding for 180 minutes, the raw earthworms are washed with water, ground, and the obtained ground material is lyophilized.

제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 생 지렁이를, 10～50시간 명소(明所)에 방치한 후, 체피에 부착된 오물을 박리한 후, 상기 금속의 염화물과 접촉시키는, 지렁이 건조 분말의 제조 방법.The method according to claim 1 or 2,
A method for producing an earthworm dry powder, wherein the raw earthworm is left at a spot for 10 to 50 hours, and then the dirt attached to the body is peeled off and then contacted with a chloride of the metal.

제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 동결 건조는, 상기 마쇄물을 -18℃～-35℃에서 20～240 시간 동결시킨 후, 진공 하에서 동결 건조함으로써 행해지는, 지렁이 건조 분말의 제조 방법.The method according to claim 1 or 2,
The said freeze-drying is a manufacturing method of the earthworm dried powder performed by freeze-drying under vacuum after freezing the said grinding | pulverization at -18 degreeC-35 degreeC for 20 to 240 hours.

제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 금속의 염화물이 염화 나트륨인, 지렁이 건조 분말의 제조 방법.The method according to claim 1 or 2,
A method for producing earthworm dry powder, wherein the chloride of the metal is sodium chloride.

제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 하이드록시카르복시산이, 아세트산, 말산, 구연산, 락트산, 말론산 및 숙신산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 적어도 1종인, 지렁이 건조 분말의 제조 방법.The method according to claim 1 or 2,
The said hydroxycarboxylic acid is at least 1 sort (s) chosen from the group which consists of acetic acid, malic acid, citric acid, lactic acid, malonic acid, and succinic acid, The manufacturing method of the earthworm dry powder.

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