KR101197101B1 - 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물 - Google Patents
미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri), 시네코시스티스 종. PCL 6803(Synechocystis sp . PCC 6803) 및 보트리오코커스 브라우니(Botryococcus braunii)의 헥산, 클로로포름 및 부탄올 추출물을 포함하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 세포 독성이 거의 없고, 항염증 활성 및 멜라닌 합성 저해에 있어 현저한 효과를 나타내므로, 피부 미백용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
Description
본 발명은 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부색을 결정하는 멜라닌(melanin)은 멜라노사이트(melanocyte)라 불리는 피부 세포에서 만들어져 케라티노사이트(keratinocyte)라는 표피 세포로 이동한다. 여기서 멜라닌은 핵주변에 모자와 같은 구조를 형성하여 자외선으로부터 유전자를 보호하고 자유 라디칼(free radical)을 제거하여 세포 내 단백질을 보호하는 등 중요한 역할을 하게 된다. 생체 내에는 멜라닌을 분해하는 효소가 없고, 다만 케라티노사이트가 표피에서 떨어져나갈 때 같이 피부에서 떨어져나가는 것으로 제거된다.
멜라닌 합성 과정을 살펴보면, 멜라노사이트 내의 멜리노좀에서 먼저 티로신을 기질로 하여 티로시나아제라는 효소가 도파(DOPA)를 거쳐 도파퀴논 (DOPAquinone)을 생성시키고, 도파퀴논으로부터 자동 산화 반응과 효소 반응으로 도파크롬 (DOPAchrome)을 거쳐 공중합체인 멜라닌이 생성된다. 이렇게 생성된 멜라닌은 멜라노좀이라는 소포체를 통해 케라티노사이트로 옮겨지고 여기에서 약 28일간의 각화 과정을 거치면서 피부 표면으로 나와 각질과 함께 소실된다. 그러나, 이 과정에서 멜라닌 생성을 촉진하는 요인에 의해 멜라닌이 과다 생성되고 각화작용이 원활히 이루어지지 않아 멜라닌이 완전히 없어지지 않으면 색소 침착 현상이 일어나게 된다. 따라서, 이러한 색소 침착 현상을 방지하기 위해서는 멜라닌 생성 과정의 일부분을 저해하여 멜라닌의 생성을 감소시켜야 한다.
피부미용을 위한 미백제의 개발에 있어서, 종래의 피부 미백효과를 갖는 조성물의 특징은 착색의 주원인인 멜라닌을 타겟으로 하여, 생성된 멜라닌 색소를 환원시켜 탈색하는 방법과 멜라닌 합성을 감소시키기 위한 티로시나제의 활성을 억제하는 방법이 알려져 있다. 멜라닌의 색소 침착을 감소시키기 위해서 사용된 피부 미백성분으로는, 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나제 효소활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민-C(L-Ascorbic acid) 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물이 사용되어 왔다. 그러나 상기 피부 미백성분들은 처방계 중에서 안정성이 나빠 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다. 또한, 멜라닌 색소를 환원시키기 위해 사용되는 토코페롤이나 비타민류 등을 사용한 피부 미백제는 멜라닌 색소의 탈색효과가 미미한 것으로 알려져 있으며, 멜라닌 색소의 생성을 억제하는 저해제에 관한 연구가 다수 진행되고 있다.
또한, 다수의 식물 추출물 및 생약재 추출물 등이 티로시나제에 작용하여 멜라닌 생성을 억제한다는 사실이 밝혀졌으나, 안정성, 변색 가능성 등의 측면에서 의약품에 유효농도 이상으로 사용하는 데는 많은 문제점을 갖고 있으며, 아직 뛰어난 효과를 나타내지도 못하고 있는 실정이다.
최근 건강에 대한 관심이 증가함에 따라 기능성 생물소재에 대한 관심도 점점 증가하고 있다. 이러한 기능성 생물소재는 대부분 미생물을 대상으로 연구가 수행되었으나, 최근 국내외적으로 미세조류에서 다양한 생리활성물질이 발견되어, 이를 자원으로 이용하려는 연구가 활발히 진행되면서 미세조류가 생산하는 고부가가치 생리활성물질에 대한 관심이 매우 증대되고 있다. 미세조류는 광합성을 하여 생장하는 미생물로써 지구의 태고 시절부터 산소의 공급자였으며 많은 유용한 물질의 생산자이기도 하다. 최근 미세조류는 새로운 기능성 생물 소재로 연구되고 있으며, 미세조류의 산업적 이용은 대체에너지원 및 건강보조식품, 수산양식용 사료 및 의약 원료 물질과 더불어 생화학 물질 등의 응용분야에 이용되고 있는 실정이다.
특히, 미세조류 중 여러 가지 기능성으로 주목받고 있는 생물 중 하나로 클로렐라를 꼽을 수 있다.
클로렐라는 녹조류로 담수 중에 증식하는 단세포 식물로, 분류학상 Chlorophycea 강, Chlorococcum 목, Chlorella 속에 속한다. 이들은 보통 연못이나 호수 등 담수에서 생육하며, 직경 2 ~ 10 um의 구형 단세포 조류로 하나의 세포는 현미경으로만 볼 수 있는 정도이다. 생식은 무성생식으로 증식하고 물, 공기, 질소와 인산 등의 식물 성장 요소가 있으면 빛과 이산화탄소를 이용한 독립 영양적 성장 증식을 한다는 점이 생물학적으로 가장 큰 특징으로, 이는 산업적 대량 배양 공정에서 가장 중요하게 고려되는 사항이다. 클로렐라는 필수 아미노산 조성이 좋은 고 단백질 식품으로 총 아미노산 함량은 쇠고기에 비하여 월등히 높으며 단백질, 지질, 식이섬유, 비타민류와 무기질에 관하여 다른 식품과 비교할 수 없을 만큼 영양학적으로도 균형 잡힌 식품이다. 클로렐라는 현재 사료과 식품의 1, 2차적 목적으로 사용되어 영양학적 우수성이 확인되었고, 항암 활성 외의 3차적 식품으로서 기능성의 탐색이 활발히 진행 중에 있다. 그 예로 환경 호르몬인 다이옥신의 체내 배출, 체내 중금속의 축적억제 및 배설, 환경 독성 물질의 생물학적 분해, 동맥경화 및 간장 장애의 억제, 항암 활성, 면역기능 강화, 세포의 부활작용과 식품의 풍미 향상 및 보습효과 등의 기능성이 보고된 바 있으며, 식품용 이외에 미세조류를 수산 양식용 사료로 사용하거나, 폐수에 존재하는 수은의 제거를 위한 기능소재로 활용하기 위한 기능소재로 활용하기 위한 연구가 보고된 바 있다.
지금까지 미세조류 배양액에 대한 연구는 클로렐라 배양액이 주름 개선 및 항암 활성 등이 있음이 보고되어 있을 뿐, 미백 효과에 대한 활성은 보고된 바 없다.
이에, 본 발명자들은 3 종류의 미세조류{클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri), 시네코시스티스 종. PCL 6803(Synechocystis sp . PCC 6803), 및 보트리오코커스 브라우니(Botryococcus braunii)}를 배양하고, 이후 수거된 배양액을 원심분리하여 세포를 제거한 상등액을 유기용매를 가하여 추출한 후 얻어진 추출물이 세포 독성이 거의 없고, 항염증 활성을 가지며, 멜라닌 합성 저해에 있어 현저한 효과를 나타냄을 확인하여, 상기 추출물이 피부 미백용 조성물 및 화장료 조성물의 유효성분으로 사용될 수 있음을 밝힘으로써, 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 건강식품을 제공한다.
본 발명의 미세조류 배양액 추출물은 세포 독성이 거의 없고, 항염증 활성 및 멜라닌 합성 저해에 있어서, 일반적인 미백 물질로 알려진 알부틴에 비해 현저한 활성을 나타내므로 피부 미백용 화장료 조성물, 약학적 조성물 또는 건강식품으로 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 미세조류 배양액 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다:
1) 미세조류를 배양하는 단계;
2) 단계 1)의 배양액에서 상등액을 분리하는 단계;
3) 단계 2)의 상등액을 여과하는 단계;
4) 단계 3)의 여과한 상등액에 추출용매를 가하여 추출하는 단계; 및
5) 단계 4)의 추출물을 농축하는 단계.
상기 미세조류는 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri), 시네코시스티스 종. PCL 6803(Synechocystis sp . PCC 6803), 및 보트리오코커스 브라우니(Botryococcus braunii)}로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 미세조류 배양은 광생물반응기를 이용하여 배양함이 바람직하나, 이에 한정되지 않고, 일반적인 미세조류 배양 방법은 모두 사용가능하다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 미세조류 배양은 N-8 배지임이 바람직하나, 미세조류 배양을 위해 사용되는 모든 배지가 가능하고, 20 내지 30℃에서 배양함이 바람직하나, 22 내지 25℃에서 배양함이 더욱 바람직하며, 24℃에서 배양하는 것이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 산소 조건은 0.05 내지 0.5 vvm인 것이 바람직하고, 0.1 내지 0.3 vvm인 것이 더욱 바람직하며, 0.2 vvm 산소 조건하에서 배양됨이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않으며, 1 내지 15일간 배양됨이 바람직하고, 5 내지 12일간 배양됨이 더욱 바람직하며, 10일간 배양됨이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 광량은 50 내지 200 μE/m2/s 임이 바람직하고, 90 내지 150 μE/m2/s임이 더욱 바람직하며, 100 μE/m2/s 세기로 조사되는 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 2)의 상등액의 분리는 배양 후 원심분리를 통하여 분리함이 바람직하나, 이에 한정되지 않고, 일반적인 세포 분리법은 모두 사용가능하다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 여과는 거름종이로 여과함이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 4)의 추출용매로는 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매, 부탄올, 헥산 및 클로로포름으로부터 선택된 용매를 사용하는 것이 바람직하며, 부탄올, 헥산 및 클로로포름을 사용하는 것이 더욱 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출 또는 환류추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 추출용매를 미세조류 배양액 분량에 0.1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 0.5 내지 5 배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 추출온도는 10 내지 50℃인 것이 바람직하고, 20 내지 30℃임이 더욱 바람직하며, 상온임이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 1 내지 10일인 것이 바람직하고, 2 내지 6일인 것이 더욱 바람직하며, 2 내지 3일인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 회수는 1 내지 3회인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 5)의 농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri), 시네코시스티스 종. PCL 6803(Synechocystis sp . PCC 6803) 및 보트리오코커스 브라우니(Botryococcus braunii)의 3 종류의 미세조류를 광생물반응기를 이용하여 배양하고, 수거한 배양액을 원심분리를 통하여 세포를 제거하고 거름종이로 여과하여 상등액을 취하였다. 얻어진 상등액에 각각 부탄올, 헥산, 클로로포름을 첨가하여 추출하고, 용매층을 분리하여 진공증발기로 농축하였고, 이를 통해 미세조류 배양액으로부터 부탄올 추출물, 헥산 추출물 및 클로로포름 추출물을 제조하였다.
상기 얻어진 추출물의 미백 효과를 확인하기 위하여, 추출물을 B16F10 세포에 처리하여, 생성된 멜라닌 양의 변화를 측정하여 비교하였고, 그 결과, 양성 대조군인 알부틴의 경우, 약물 미처리구에 비해 67.2%로 멜라닌 합성 저해 효과를 나타냄을 확인하였고, 미세조류 배양액 추출물의 경우, 그 종과 추출 유기용매의 종류에 관계없이 모두 멜라닌 합성 저해 효과를 나타내었다. 특히 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri) 배양액의 클로로포름 추출물은 미처리구에 비해 41.9%의 저해 효과를 나타내어, 양성 대조군인 알부틴보다 더 월등한 멜라닌 합성 저해 활성을 나타냄을 확인하였다(표 1 참조).
따라서, 미세조류 배양액 및 미세조류 배양액 추출물은 멜라닌 합성의 저해 활성이 있음을 확인하였다.
또한, 본 발명의 실시예에서, 미세조류 배양액 추출물의 세포 독성 여부를 확인하기 위하여, 상기 <실시예 1>에서 얻어진 추출물을 B16F10 멜라닌 세포에 처리하여, 세포 생장율을 측정하였고 그 결과, 미처리구와 비교하였을 때, 추출물의 처리 농도가 200 ug/ml의 높은 농도임에도 불구하고, 클로렐라 케슬러리 배양액을 제외하고 그 종과 추출 유기용매의 종류에 관계없이 살아있는 세포의 수가 90% 이상임을 확인하였다(표 2 참조).
따라서, 미세조류 배양액은 세포 독성이 있는 반면, 미세조류 배양액 추출물은 세포 독성이 거의 없음을 확인하였다.
또한, 본 발명의 실시예에서, 미세조류 배양액 추출물의 멜라닌 생합성의 중요한 효소인 타이로시네이즈(tyrosinase)의 저해 효과 여부를 확인하기 위하여, 인 비트로(in vitro) 타이로시네이즈 실험을 수행하였고, 그 결과, 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri) 배양액 추출물 400 ug/ml을 처리하였을 때, 16.2%로 타이로시네이즈의 활성을 저해하였다(표 3 참조).
따라서, 미세조류 배양액 추출물은 양성 대조군인 코지산에 비해서는 약하지만, 일부 타이로시네이즈 저해 활성을 가짐을 확인하였다.
또한, 본 발명의 실시예에서, 미세조류 배양액 추출물의 항염증 효과를 확인하기 위하여, 산화질소(NO)를 생성하는 대식세포주주(murine macrophage cell line)인 Raw 264.7 세포에 지질다당체(LPS)로 산화질소(NO)의 생성을 유도한 다음, 추출물을 처리하고, 세포에서 LPS에 의해 유도되는 NO의 생성 정도를 측정하여 비교하였다. 그 결과, 항염증 효과가 좋을수록 생성된 NO의 수치가 낮게 나타나므로, 항염증 활성은 카모마일 1 ppm에서 91.9%로 나타났고, 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri) 배양액 추출물 200 ppm을 처리하였을 때, 31.9%로 나타났다(표 4 참조). 특히, 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri) 배양액 추출물은 카모마일에 비해 200 ppm에서도 세포독성이 나타나지 않았다.
따라서, 미세조류 배양액 추출물은 항염증 활성을 나타냄을 확인하였다.
본 발명의 미세조류 배양액과 배양액 추출물 모두에서 미백효과를 나타내었지만, 미세조류 배양액의 경우, 피부 세포 독성 효과가 있음이 확인되어, 이를 화장용 조성물로 이용하기에 부적절한 반면, 미세조류 배양액 추출물은 세포 독성을 거의 나타내지 않아, 미세조류 배양액 추출물은 피부 화장료 조성물의 개발에 유용하게 이용될 수 있다.
또한, 식물 추출물을 이용한 화장품 개발시 엽록소의 색깔로 인해 화장품 개발시 심미성에 문제가 되는 경우가 있어, 세포의 성분 및 기능은 변화시키지 않고, 엽록소만을 선택적으로 제거하여 색깔을 없애기 위한 연구도 이루어지고 있는 실정이다. 하지만, 본 발명은 미세조류를 배양하고 원심분리를 통하여 세포를 제거한 배양 상등액 추출물을 이용한 조성물에 대한 것으로, 미세조류를 배양하고 세포를 제거하지 않으면 황녹색을 띄는 반면, 세포를 제거한 배양 상등액의 경우 황색을 띄고 있어, 다른 식물 추출물에 비해 색 제거 과정이 필요하지 않기 때문에, 피부 화장료 조성물 개발시 더욱 효율적으로 이용될 수 있다.
본 발명의 조성물에서 상기 미세조류 배양액 추출물은 조성물 총 중량에 대하여 0.005 내지 90 중량 % 함유되는 것이 바람직하지만, 미백 효과가 있고 독성이 나타나지 않는 범위에서 사용 용도에 따라서 상기 범위 이상 또는 이하로도 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 상기 미세조류 배양액 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 미세조류 배양액 추출물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한, 상기 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
또한, 본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.
또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 미세조류 배양액 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
또한, 본 발명은 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 미세조류 배양액 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다:
1) 미세조류를 배양하는 단계;
2) 단계 1)의 배양액에서 상등액을 분리하는 단계;
3) 단계 2)의 상등액을 여과하는 단계;
4) 단계 3)의 여과한 상등액에 추출용매를 가하여 추출하는 단계; 및
5) 단계 4)의 추출물을 농축하는 단계.
상기 미세조류는 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri), 시네코시스티스 종. PCL 6803(Synechocystis sp. PCC 6803), 및 보트리오코커스 브라우니(Botryococcus braunii)}로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 미세조류 배양은 광생물반응기를 이용하여 배양함이 바람직하나, 이에 한정되지 않고, 일반적인 미세조류 배양 방법은 모두 사용가능하다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 미세조류 배양은 N-8 배지임이 바람직하나, 미세조류 배양을 위해 사용되는 모든 배지가 가능하고, 20 내지 30℃에서 배양함이 바람직하나, 22 내지 25℃에서 배양함이 더욱 바람직하며, 24℃에서 배양하는 것이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 산소 조건은 0.05 내지 0.5 vvm인 것이 바람직하고, 0.1 내지 0.3 vvm인 것이 더욱 바람직하며, 0.2 vvm 산소 조건하에서 배양됨이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않으며, 1 내지 15일간 배양됨이 바람직하고, 5 내지 12일간 배양됨이 더욱 바람직하며, 10일간 배양됨이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 광량은 50 내지 200 μE/m2/s 임이 바람직하고, 90 내지 150 μE/m2/s임이 더욱 바람직하며, 100 μE/m2/s 세기로 조사되는 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 2)의 상등액의 분리는 배양 후 원심분리를 통하여 분리함이 바람직하나, 이에 한정되지 않고, 일반적인 세포 분리법은 모두 사용가능하다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 여과는 거름종이로 여과함이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 4)의 추출용매로는 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매, 부탄올, 헥산 및 클로로포름으로부터 선택된 용매를 사용하는 것이 바람직하며, 부탄올, 헥산 및 클로로포름을 사용하는 것이 더욱 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출 또는 환류추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 추출용매를 미세조류 배양액 분량에 0.1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 0.5 내지 5 배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 추출온도는 50 내지 100℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 1 내지 10일인 것이 바람직하고, 2 내지 5일인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 회수는 1 내지 3회인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 5)의 농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 미세조류 배양액 추출물은 세포 독성이 거의 없고, 항염증 활성을 가지고, 멜라닌 합성 저해에 있어 현저한 효과를 가지므로, 피부 미백을 위한 효과적인 약학적 조성물의 유효성분으로서 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 통상적으로 사용되는 부형제, 붕해제, 감미제, 활택제, 향미제 등을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적인 방법에 의해 정제, 캅셀제, 산제, 과립제, 현탁제, 유제, 시럽제, 기타 액제로 제형화될 수 있다.
구체적으로 본 발명의 약학적 조성물은 경구 투여용 제형, 예를 들면 정체, 트로치제(troches), 로젠지(lozenge), 수용성 또는 우성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제(elixirs)로 제제화된다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀롤로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제, 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제, 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕해제, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캡슐제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유한다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 본 발명의 미세조류 배양액 추출물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제한다.
본 발명에 따른 유효성분의 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증 정도에 따라 적절히 선택되나, 경구 투여제의 경우 일반적으로 성인에게 1일에 체중 1 ㎏당 본 발명의 추출물을 0.0001 ~ 500 ㎎의 양으로 1회 내지 수회 나누어 투여할 수 있으며, 0.001 ~ 100 ㎎의 양으로 투여하는 것이 바람직하다.
또한, 본 발명은 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 건강식품을 제공한다.
상기 미세조류 배양액 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다:
1) 미세조류를 배양하는 단계;
2) 단계 1)의 배양액에서 상등액을 분리하는 단계;
3) 단계 2)의 상등액을 여과하는 단계;
4) 단계 3)의 여과한 상등액에 추출용매를 가하여 추출하는 단계; 및
5) 단계 4)의 추출물을 농축하는 단계.
상기 미세조류는 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri), 시네코시스티스 종. PCL 6803(Synechocystis sp. PCC 6803), 및 보트리오코커스 브라우니(Botryococcus braunii)}로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 미세조류 배양은 광생물반응기를 이용하여 배양함이 바람직하나, 이에 한정되지 않고, 일반적인 미세조류 배양 방법은 모두 사용가능하다.
상기 방법에 있어서, 단계 1)의 미세조류 배양은 N-8 배지임이 바람직하나, 미세조류 배양을 위해 사용되는 모든 배지가 가능하고, 20 내지 30℃에서 배양함이 바람직하나, 22 내지 25℃에서 배양함이 더욱 바람직하며, 24℃에서 배양하는 것이 가장 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 산소 조건은 0.05 내지 0.5 vvm인 것이 바람직하고, 0.1 내지 0.3 vvm인 것이 더욱 바람직하며, 0.2 vvm 산소 조건하에서 배양됨이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않으며, 1 내지 15일간 배양됨이 바람직하고, 5 내지 12일간 배양됨이 더욱 바람직하며, 10일간 배양됨이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 광량은 50 내지 200 μE/m2/s 임이 바람직하고, 90 내지 150 μE/m2/s임이 더욱 바람직하며, 100 μE/m2/s 세기로 조사되는 것이 가장 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 2)의 상등액의 분리는 배양 후 원심분리를 통하여 분리함이 바람직하나, 이에 한정되지 않고, 일반적인 세포 분리법은 모두 사용가능하다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 여과는 거름종이로 여과함이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 4)의 추출용매로는 물, C1 내지 C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합 용매, 부탄올, 헥산 및 클로로포름으로부터 선택된 용매를 사용하는 것이 바람직하며, 부탄올, 헥산 및 클로로포름을 사용하는 것이 더욱 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출 또는 환류추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 추출용매를 미세조류 배양액 분량에 0.1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하며, 0.5 내지 5 배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 추출온도는 50 내지 100℃인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 1 내지 10일인 것이 바람직하고, 2 내지 5일인 것이 더욱 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러, 추출 회수는 1 내지 3회인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
상기 방법에 있어서, 단계 5)의 농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 미세조류 배양액 추출물은 세포 독성이 거의 없고, 항염증 활성을 가지고, 멜라닌 합성 저해에 있어 현저한 효과를 가지므로, 피부 미백을 위한 효과적인 건강식품으로서 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 건강식품은 미세조류 배양액 추출물로부터 분리한 활성분획을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 미세조류 배양액 추출물로부터 분리한 활성분획을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하게는 약 0.02 ~ 0.03 g 이다.
상기 외에 본 발명의 미세조류 배양액 추출물로부터 분리한 활성분획은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 미세조류 배양액 추출물로부터 분리한 활성분획은 천연 과일 주스, 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예, 실험예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다.
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실시예
1> 미세조류 배양액 추출물의 제조
본 발명에 사용된 3종류의 미세조류는 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri, 텍사스 대학교), 시네코시스티스 종. PCL 6803(Synechocystis sp . PCC 6803, 파스퇴르 조류 은행), 및 보트리오코커스 브라우니(Botryococcus braunii, 텍사스 대학교)로, 상기 미세조류는 N-8 배지에서 광생물반응기를 이용하여 10일간 배양하였다. 배양 조건으로는 24℃, 산소는 0.2 vvm으로 공급되었고, 광량은 100 μE/m2/s 세기로 조사되었다.
상기 미세조류를 배양하고 수거한 배양액은 원심분리를 통하여 세포를 제거하였고, 거름종이로 여과하여 상등액을 취하였다. 얻어진 상등액은 각각 부탄올, 헥산, 클로로포름을 50% 첨가하여 3일간 추출하였으며, 용매층을 분리하여 진공 증발기를 사용하여 농축하였고, 미세조류 배양액 400ml에 동일한 부피의 부탄올, 헥산과 클로로포름을 각각 첨가한 후, 상온에서 2~3일 간 추출하였으며, 용매층을 분리하여 진공 증발기를 사용하여 농축하였고, 클로렐라 케슬러리의 클로로포름 추출물의 수율은 0.0083%임을 확인하였다.
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실시예
2> B16F10 멜라닌 세포의 배양
B16F10 세포는 멜라닌을 생성하는 세포주로서 일반적으로 미백 물질 스크리닝에 사용되는 세포로, 수원 임업 연구소에서 제공받아 배양하였다. 상기 세포는 10% FBS 및 1% 페니실린 스트렙토마이신이 첨가된 무균 상태의 DMEM 배지에서, 37℃, 5% CO2 환경의 인큐베이터에서 배양하였다. 이후 자라난 세포의 면적이 100 mm 디쉬의 90% 정도 차지했을 때 계대배양을 수행하였다.
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실험예
1> 미세조류 배양액 추출물의 멜라닌 저해 활성 확인
미세조류 배양액 추출물의 미백 효과를 확인하기 위하여, 상기 <실시예 1>에서 얻어진 추출물을 B16F10 멜라닌 세포에 처리하여, 생성된 멜라닌 양의 변화를 측정하였다. 구체적으로, 6웰 플레이트에 세포를 시딩(seeding)하고, 200 ug/ml의 양으로 상기 추출물을 처리하고 이틀간 배양한 후, 세포를 회수하였다. 회수한 세포에 10% DMSO가 포함된 1 N 염화나트륨(NaOH)을 가해 90℃에서 한 시간동안 반응시켜 멜라닌이 충분히 녹아나오도록 한 후, ELISA를 수행하여 흡광도의 측정을 통하여 멜라닌의 양을 측정하였다. 양성 대조군으로는 일반적인 미백 물질로 알려진 알부틴을 같은 농도로 처리하였고, 미세조류 배양액 추출물을 처리하지 않은 미처리구의 흡광도를 100%로 하여 상대적 흡광도를 분석하였다.
그 결과, 양성 대조군인 알부틴의 경우, 약물 미처리구에 비해 67.2%로 멜라닌 합성 저해 효과를 나타냄을 확인하였고, 미세조류 배양액 추출물의 경우, 그 종과 추출 유기용매의 종류에 관계없이 모두 멜라닌 합성 저해 효과를 나타내었고, 특히 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri) 배양액의 클로로포름 추출물은 미처리구에 비해 41.9%의 저해 활성을 나타내어, 양성 대조군인 알부틴보다 더 월등한 멜라닌 합성 저해 활성을 나타냄을 확인하였다(표 1).
| 시료명 | 멜라닌 양(%) |
| 미처리구 | 100.00 |
| 알부틴(Arbutin) | 67.21 |
| 클로렐라 케슬러리 배양액의 헥산 추출물 | 57.71 |
| 클로렐라 케슬러리 배양액의 클로로포름 추출물 | 41.94 |
| 클로렐라 케슬러리 배양액의 부탄올 추출물 | 78.16 |
| 클로렐라 케슬러리 배양액 | 52.89 |
| 시네코시스티스 종. PCL 6803 배양액의 헥산 추출물 | 72.14 |
| 시네코시스티스 종. PCL 6803 배양액의 클로로포름 추출물 | 56.20 |
| 시네코시스티스 종. PCL 6803 배양액의 부탄올 추출물 | 78.35 |
| 보트리오코커스 브라우니 배양액의 클로로포름 추출물 | 53.28 |
따라서, 미세조류 배양액 및 미세조류 배양액 추출물은 멜라닌 합성의 저해 활성이 있음을 확인하였다.
<
실험예
2> 미세조류 배양액 추출물의 세포 독성 확인
미세조류 배양액 추출물의 세포 독성 여부를 확인하기 위하여, 상기 <실시예 1>에서 얻어진 추출물을 B16F10 멜라닌 세포에 처리하여, 세포 생장율을 측정하였다. 구체적으로, 96 웰 플레이트에 세포를 시딩(seeding)하고, 200 ug/ml의 양으로 상기 추출물을 처리하고 배양하여 살아있는 세포의 수를 측정하였다. 양성 대조군으로는 일반적인 미백 물질로 알려진 알부틴을 같은 농도로 처리하였고, 미세조류 배양액 추출물을 처리하지 않은 미처리구의 살아있는 세포 수를 100%로 하여 상대적으로 살아있는 세포의 수를 분석하였다.
그 결과, 미처리구와 비교하였을 때, 추출물의 처리 농도가 200 ug/ml의 높은 농도임에도 불구하고, 클로렐라 케슬러리 배양액을 제외하고 그 종과 추출 유기용매의 종류에 관계없이 살아있는 세포의 수가 90% 이상임을 확인하였다(표 2).
| 시료명 | 세포 양(%) |
| 미처리구 | 100.00 |
| 알부틴(Arbutin) | 105.80 |
| 클로렐라 케슬러리 배양액의 헥산 추출물 | 95.10 |
| 클로렐라 케슬러리 배양액의 클로로포름 추출물 | 102.73 |
| 클로렐라 케슬러리 배양액의 부탄올 추출물 | 95.97 |
| 클로렐라 배양액 | 52.47 |
| 시네코시스티스 종. PCL 6803 배양액의 헥산 추출물 | 103.86 |
| 시네코시스티스 종. PCL 6803 배양액의 클로로포름 추출물 | 100.94 |
| 시네코시스티스 종. PCL 6803 배양액의 부탄올 추출물 | 90.45 |
| 보트리오코커스 브라우니 배양액의 클로로포름 추출물 | 91.14 |
따라서, 미세조류 배양액은 세포 독성이 있는 반면, 미세조류 배양액 추출물은 세포 독성이 거의 없음을 확인하였다.
<
실험예
3>
미세조류 배양액 추출물의 인 비트로(
In
vitro
)
타이로시네이즈
(
tyrosinase
) 저해 효과 확인
미세조류 배양액 추출물의 멜라닌 생합성의 중요한 효소인 타이로시네이즈(tyrosinase)의 저해 효과 여부를 확인하기 위하여, 인 비트로(in vitro) 타이로시네이즈 실험을 수행하였다. 구체적으로, 타이로시네이즈 활성 측정시 기질은 L-3,4-다이하이록시페닐알라닌(L-3,4-dihydroxyphenylalanine, L-DOPA)를 사용하였고, L-DOPA는 1 mg/ml을 인산 완충 용액(0.1 M, pH 6.8)에 완전히 녹여 사용했으며, 타이로시네이즈는 1250 units/ml의 농도로 준비하였다. 상기 <실시예 1>에서 제조된 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri) 배양액 추출물은 400 ug/ml의 농도로 준비하였고, 준비된 추출물에 타이로시네이즈 또는 인산 완충 용액을 첨가하고, 최종적으로 L-DOPA를 첨가한 후, 37℃에서 10 분간 반응시킨 다음 475 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로는 타이로시네이즈 저해제로 알려진 코지산(kojic acid)을 100 ug/ml로 처리하였고, 음성대조군으로는 타이로시네이즈 대신 인산 완충 용액(0.1 M, pH 6.8)을 동량 분주하였다. 타이로시나아제(tyrosinase) 저해 활성은 추출물 처리군과 미처리군의 흡광도 감소율로 나타내고, 미처리군의 흡광도를 100%로 하여 상대적 흡광도를 비교분석하였다.
그 결과, 코지산의 경우에는 100ug/ml의 농도로 처리하였을 때, 타이로시네이즈 활성을 87.5% 저해하였고, 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri) 배양액 추출물의 경우에는, 400 ug/ml로 처리하였을 때, 16.2%로 타이로시네이즈의 활성을 저해하였다(표 3).
| 시료명 | 코지산(Kojic acid) |
클로렐라 케슬러리 (Chlorella kessleri) 배양액 추출물 |
| 티로시네이즈 저해율(%) | 87.5% | 16.2% |
따라서, 미세조류 배양액 추출물은 양성대조군인 코지산에 비해서는 약하지만, 일부 타이로시네이즈 저해 활성을 가짐을 확인하였다.
<
실험예
4> 미세조류 배양액 추출물의 항염증 효과 확인
미세조류 배양액 추출물의 항염증 효과를 확인하기 위하여, 대식세포주인 Raw 264.7 세포를 이용하였다. 구체적으로, 산화질소(NO)를 생성하는 대식세포주(murine macrophage cell line)인 Raw 264.7 세포에 지질다당체(LPS)로 산화질소(NO) 생성을 유도한 다음, 상기 <실시예 1>에서 제조된 추출물을 200 ppm 처리하고, 세포에서 LPS에 의해 유도되는 NO의 생성 정도를 측정하였다. 양성대조군으로는 항염증제로 알려진 카모마일을 처리하였다.
그 결과, 항염증 효과가 좋을수록 생성된 NO의 수치가 낮게 나타나므로, 항염증 활성은 카모마일 1 ppm에서 91.9%로 나타났고, 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri) 배양액 추출물 200 ppm을 처리하였을 때, 31.9%로 나타났다(표 4). 특히, 클로렐라 케슬러리(Chlorella kessleri) 배양액 추출물은 카모마일에 비해 200 ppm에서도 세포독성이 나타나지 않았다.
| 시료명 | 카모마일(Chamomile) (1 ppm) |
클로렐라 케슬러리Chlorella kessleri ) 배양액 추출물 (200 ppm) |
| 항염증 활성 | 91.9% | 31.9% |
따라서, 미세조류 배양액 추출물은 항염증 활성을 나타냄을 확인하였다.
하기에 본 발명의 조성물을 위한 제조예를 예시한다.
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제조예
1> 피부 미백용
화장료의
제조
<1-1> 유연 화장수의 제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 유연 화정수는 하기 [표 5]와 같이 제조하였다.
| 원료 | 함량(중량부) |
| 미세조류 배양액 추출물 | 10.00 |
| 1,3-부틸렌글리콜 | 1.00 |
| 디소듐이디티에이 | 0.05 |
| 알란토인 | 0.10 |
| 디포타슘글리시리제이트 | 0.05 |
| 시트릭애씨드 | 0.01 |
| 소듐시트레이트 | 0.02 |
| 글리세레스-26 | 1.00 |
| 알부틴 | 2.00 |
| 하이드로제네이티드캐스터오일 | 1.00 |
| 에탄올 | 30.00 |
| 보존제 | 미량 |
| 착색제 | 미량 |
| 착향제 | 미량 |
| 정제수 | 잔량 |
<1-2> 영양 크림의 제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물 유효성분으로 함유한 영양크림은 하기 [표 6]의 조성과 같이 제조하였다.
| 원료 | 함량(중량부) |
| 미세조류 배양액 추출물 | 10.0 |
| 1,3-부틸렌 글리콜 | 7.0 |
| 글리세린 | 1.0 |
| D-판테놀 | 0.1 |
| 식물 추출물 | 3.2 |
| 마그네슘알루미늄실리케이트 | 0.3 |
| PEG-40 스테아레이트 | 1.2 |
| 스테아릭애씨드 | 2.0 |
| 폴리소르베이트 60 | 1.5 |
| 친유형글리세릴스테아레이트 | 2.0 |
| 소르비탄세스퀴올리에이트 | 1.5 |
| 세테아릴알코올 | 3.0 |
| 미네랄오일 | 4.0 |
| 스쿠알란 | 3.8 |
| 카르릴릭/카프릭트리글리세라이드 | 2.8 |
| 식물성 오일 | 1.8 |
| 디메치콘 | 0.4 |
| 디포타슘글리시리제이트 | 미량 |
| 알란토인 | 미량 |
| 소듐 히아루로네이트 | 미량 |
| 토코페릴아세테이트 | 적량 |
| 트리에탄올아민 | 적량 |
| 보존제 | 적량 |
| 착향제 | 적량 |
| 정제수 | 잔량 |
<
제조예
2> 피부 미백용 약제의 제조
<2-1> 시럽제의 제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 시럽제는 하기 [표 7]의 조성과 같이 제조하였다.
| 구성성분 | 함량(중량부) |
| 미세조류 배양액 추출물 | 2 |
| 사카린 | 0.8 |
| 당 | 25.4 |
| 글리세린 | 8 |
| 향미료 | 0.04 |
| 에탄올 | 4 |
| 소르브산 | 0.4 |
| 증류수 | 60 |
<2-2> 정제의 제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 정제는 하기 [표 8]의 조성과 같이 제조하였다.
| 구성성분 | 함량(중량부) |
| 미세조류 배양액 추출물 | 250 |
| 락토오스 | 175.9 |
| 감자전분 | 180 |
| 콜롱드성 규산 | 32 |
| 10% 젤라틴 용액 | 5 |
| 감자전분 | 160 |
| 활석 | 50 |
| 스테아르산 마그네슘 | 5 |
본 발명의 미세조류 배양액 추출물을 250 중량부, 락토오스 175.9 중량부, 감자전분 180 중량부 및 콜로이드성 규산 32 중량부와 혼합하였다. 상기 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄하여 14 매쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조하고 여기에 감자전분 160 중량부, 활석 50 중량부 및 스테아린산 마그네슘 5 중량부를 첨가하여 얻은 혼합물을 정제로 제조하였다.
<
제조예
3> 피부 미백용 건강식품의 제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물을 유효성분으로 함유하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.
<3-1> 밀가루 식품의 제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
<3-2>
스프
및 육즙(
gravies
)의 제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물 0.1~5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.
<3-3> 그라운드
비프(ground beef)의
제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
<3-4> 유제품(
dairy
products
)의 제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<3-5>
선식의
제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 미세조류 배양액 추출물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 본 발명의 미세조류 배양액 추출물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다:
곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부);
종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부);
본 발명의 미세조류 배양액 추출물(3 중량부);
영지(0.5 중량부); 및
지황(0.5 중량부).
<
제조예
4> 피부 미백용 음료의 제조
<4-1>
건강음료의
제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 미세조류 배양액 추출물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
<4-2> 야채 주스의 제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물 5 g을 토마토 또는 당근 주스 1,000 ㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
<4-3> 과일 주스의 제조
본 발명의 미세조류 배양액 추출물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 ㎖ 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.
상기와 같이, 본 발명의 미세조류 배양액 추출물은 세포 독성이 거의 없고, 항염증 활성 및 멜라닌 합성 저해에 있어 현저한 효과를 나타내어 피부 미백에 탁월한 효과가 있으므로, 피부 미백을 위한 화장품, 피부 외용제, 약제 또는 기능성 식품의 개발 및 제품 생산에 유용하게 이용될 수 있다.
Claims (6)
- 시네코시스티스 종. PCL 6803(Synechocystis sp. PCC 6803) 또는 보트리오코커스 브라우니(Botryococcus braunii)중 어느 하나의 미세조류 배양액의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 화장료 조성물.
- 삭제
- 제 1항에 있어서, 상기 배양액은
1) 24℃, 0.2 vvm 산소조건, 100 μE/m2/s 광량조건에서 10일간 배양하여 배양액을 획득하는 단계;
2) 획득한 배양액을 원심분리하여 세포를 제거하는 단계; 및
3) 세포가 제거된 배양액을 여과하여 상등액을 분리하는 단계를 포함하는 상기 방법에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
- 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 헥산, 클로로포름 또는 부탄올로 추출되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.
- 시네코시스티스 종. PCL 6803 또는 보트리오코커스 브라우니 중 어느 하나의 미세조류 배양액의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 약학적 조성물.
- 시네코시스티스 종. PCL 6803 또는 보트리오코커스 브라우니 중 어느 하나의 미세조류 배양액의 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 건강식품.
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