KR101175693B1 - Natural Food Preservatives Containing Paeonia Radix Extract, Cinnamomum Cassia Blume Extract and Gallnut Extract - Google Patents

Natural Food Preservatives Containing Paeonia Radix Extract, Cinnamomum Cassia Blume Extract and Gallnut Extract Download PDF

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Abstract

본 발명의 실시예들은 백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 식품 보존제를 제공한다. 상기 추출물들은 항균, 항산화 및 항암효능이 있어, 인체에 무해한 천연 식품 보존제로 사용할 수 있다.Embodiments of the present invention provide a food preservative consisting of the earl extract, broiler extract and gallant extract. The extracts have antibacterial, antioxidant and anticancer effects, and can be used as natural food preservatives that are harmless to the human body.

Description

백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 천연 식품 보존제 {Natural Food Preservatives Containing Paeonia Radix Extract, Cinnamomum Cassia Blume Extract and Gallnut Extract}Natural Food Preservatives Containing Paeonia Radix Extract, Cinnamomum Cassia Blume Extract and Gallnut Extract}

본 발명의 실시예들은 백작약, 육계 및 오배자를 용매추출, 감압농축 하여 제조된 추출물을 포함하는 인체에 무해한 천연 식품 보존제에 관한 것이다.
Embodiments of the present invention relate to natural food preservatives harmless to the human body, including extract produced by solvent extraction, concentrated concentration under reduced pressure, broiler and broiler.

산업 발달로 인한 경제적 여유가 증가하면서 식품은 양적으로 증대되고, 질적으로 개선되어 왔다. 이에 따라 편리한 식품에 대한 요구가 더욱 커졌다. 이러한 상황에 편승하여 신선 편이 채소 식품류의 수요가 급증하고 있으며, 이는 식품 첨가제의 사용을 동반하고 있다. 그러나 현재 신선 편이 채소 식품류를 보존하기 위한 목적으로 대부분 염소계 화학방부제를 사용하고 있는데, 장기간 이러한 화학방부제를 사용시 그 독성과 자극성으로 인해 인체에 유해한 영향을 미치게 된다. 그러므로 인체에 무해하고 기능성이 풍부한 천연 식품 보존제의 발명이 반드시 필요한 상황이다. As economic margins increase due to industrial development, food has increased in quantity and quality. Accordingly, there is a greater demand for convenient food. In this context, the demand for fresh-sided vegetable foods is skyrocketing, which is accompanied by the use of food additives. However, at present, fresh chlorine-based preservatives are mostly used for the purpose of preserving vegetable foods, and the long-term use of these chemical preservatives has harmful effects on the human body due to their toxicity and irritation. Therefore, the invention of a natural food preservative harmless to the human body and rich in functionality is a must.

천연물로 조성된 제제는 인체에 독성 및 자극성이 적고 그 작용이 일반적으로 온화하고 지속적이며, 생 분해성이 높고 환경 친화적이라고 알려져 있다. 그러나 현재까지 개발된 천연 식품 보존제는 경제성이 낮거나 좁은 항균 스펙트럼 또는 물성에 의한 사용범위의 제한성 등의 문제를 가지고 있다.
Formulations composed of natural products are known to be less toxic and irritating to the human body and their actions are generally mild and persistent, biodegradable and environmentally friendly. However, natural food preservatives developed to date have problems such as low economical or narrow antimicrobial spectrum or limited use range due to physical properties.

따라서 본 발명의 실시예들은 상기 문제점을 해결하기 위하여, 인체에 무해한 천연물 유래의 천연 식품 보존제를 제공하고자 한다.
Therefore, embodiments of the present invention to solve the above problems, to provide a natural food preservative derived from natural products harmless to the human body.

상기 과제의 해결을 위해, 본 발명의 실시예들은 백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 식품 보존제 및 이의 제조방법을 제공한다. In order to solve the above problems, embodiments of the present invention provides a food preservative and a method for preparing the same, which consists of Baekjak extract, broiler extract and galleng extract.

또한 본 발명의 실시예들은 상기 식품 보존제를 식품 제조 공정시 원료와 함께 배합하는 단계 또는 식품에 처리하는 단계를 포함하는 식품 보존 방법을 제공한다.
In addition, embodiments of the present invention provides a food preservation method comprising the step of combining the food preservative with a raw material in the food manufacturing process or processing to food.

본 발명의 실시예들에 따른 백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 식품 보존제는 인체에 무해한 낮은 농도에서 탁월한 감균력을 지닌다. 따라서 염소계 화학방부제가 가지고 있던 독성 및 자극성으로 인한 문제점들을 최소화 할 수 있다.
Food preservatives consisting of Baekjak extract, broiler extract and galleng extract according to the embodiments of the present invention has an excellent bactericidal power at low concentrations harmless to the human body. Therefore, it is possible to minimize the problems caused by toxic and irritant chlorine preservatives.

도 1는 실시예 1의 각 추출물에 대한 항균 실험 결과 사진이다. (A. E. coli에 대한 추출물 항균성, B. B. cereus에 대한 추출물 항균성, C. S. aureus에 대한 추출물 항균성)
도 2은 실험예 1의 혼합추출물(백작약(3번): 육계(1번): 오배자(1번) = 2:1:7)의 항산화 효능에 대한 실험 결과 그래프이다.
도 3는 실험예 1의 혼합추출물(백작약(3번): 육계(1번): 오배자(1번) = 2:1:7)의 세포독성 실험 결과 그래프이다.
도 4는 실험예 1의 혼합추출물(백작약(3번): 육계(1번): 오배자(1번) = 2:1:7)의 항암 효과 실험 결과 그래프이다. Figure 1 is a photograph of the antimicrobial experiment results for each extract of Example 1. (Extract antimicrobial against A. E. coli , extract antimicrobial against B. B. cereus , extract antimicrobial against C. S. aureus )
Figure 2 is a graph of the experimental results for the antioxidant efficacy of the mixed extract of the Experimental Example 1 (Baekjak (No. 3): broiler (No. 1): five times (No. 1) = 2: 1: 7).
Figure 3 is a graph of the cytotoxicity test results of the mixed extract of Experimental Example 1 (Baekjak (No. 3): broiler (No. 1): five times (No. 1) = 2: 1: 7).
Figure 4 is a graph of the anticancer effect test results of the mixed extract of the Experimental Example 1 (Baekjak (No. 3): broiler (No. 1): five times (No. 1) = 2: 1: 7).

본 발명의 실시예들은 백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 식품 보존제를 제공한다. Embodiments of the present invention provide a food preservative consisting of the earl extract, broiler extract and gallant extract.

백작약(白芍藥, Paeonia Radix)은 모란과(Paeoniaceae)의 다년생초인 작약(Paeonia albiflora P. 및 Paeonia lactiflora P.) 및 산작약(Paeonia obovata M.)의 뿌리이다. 백작약은 희고, 보혈제, 진정제, 부인과?외과(外科)의 약재로 쓰이며, 35속 1,500종이 있고 전 세계에 걸쳐 분포하지만 주로 북반구의 온대와 아한대인 한국, 일본, 중국, 사할린섬 등지에 분포하며 한국에는 21속 106종이 자라고 있다. 성분으로는 파이오이플로린(paeoniflorin), 파이오놀(paeonol), 파이오닌(paeonine), 탄닌(tannin), 벤조산(benzoic acid), 안식향산, 정유, 수지, 당 등을 함유한다. Paeonia Radix is the root of Peony (Paeonia albiflora P. and Paeonia lactiflora P.) and Paeonia obovata M., perennial plants of Paeoniaceae. Count is a white, blood, sedative, gynecological and external medicine, with 35 genera and 1,500 species distributed throughout the world. There are 106 genera of 21 genera. Ingredients include paeoniflorin, paeonol, paeonine, tannin, benzoic acid, benzoic acid, essential oils, resins, sugars, and the like.

육계(Cinnamomum cassia Blume)는 녹나무과(Lauraceae)에 속하는 상록교목인 육계나무(Cinnamomum loureirii) 또는 계피나무(Cinnamomum cassia)의 줄기 및 가지 수피로서, 주성분으로는 신남알데하이드(Cinnamic aldehyde), 캄펜(Camphene), 치네올(Cineol), 리날로올(Linalool), 유게놀(Eugenol) 등이 있으며 진정, 항균 등의 효능이 있다고 알려져 있다. Cinnamomum cassia Blume is a stem and branch bark of an evergreen tree, Cinnamomum loureirii or Cinnamomum cassia, belonging to the family Lauraceae. , Cineol, Linalool, Eugenol, etc., are known to have sedative and antibacterial effects.

또한 오배자란 매미목[同翅目] 진딧물과의 오배자면충이 옻나무과의 붉나무(오배자나무)의 잎에 기생하여 만든 벌레혹을 말하며, 한방에서는 수렴(收斂), 지혈, 해독, 항균의 효력이 있어, 설사, 탈항, 위궤양, 십이지장궤양, 도한, 유정(遺精), 혈변, 혈뇨, 구내염 등에 처방된다고 알려져 있는 한약재이다. In addition, the gall bladder is an insect lump made by locusts from the cicada aphid and parasitic on the leaves of the Rhododendron spruce. Diarrhea, prolapse, gastric ulcer, duodenal ulcer, dohan, oil well (遺精), blood stool, hematuria, stomatitis is known to be prescribed.

상기 입증된 효과에 따라 백작약, 육계 및 오배자를 이용하여 항균, 항산화 및 항암 효능 평가를 수행하고 이를 실용적으로 이용할 다양한 기술 개발이 되어 왔으나, 이를 천연식품보존제로 개발하기 위한 발명 및 시도는 부족한 실정이다. 천연식품 보존제 개발에는 안전성, 효율성에 관한 문제 등이 존재하였기 때문이다. In accordance with the above-described effects, antibacterial, antioxidant and anti-cancer efficacy evaluations have been conducted using Baekjak, broilers and gallnuts, and various technologies have been developed for practical use, but inventions and attempts to develop them as natural food preservatives are insufficient. . The development of natural food preservatives has been associated with safety and efficiency issues.

이에 본 발명의 발명자들은, 천연물의 항균, 항산화 및 항암 효능을 연구하던 중 인체에 무해한 낮은 농도에서 탁월한 감균력을 지닌 백작약, 육계 및 오배자 추출물을 제조하였고, 각각의 추출조건에 따른 효과를 직접적으로 평가하였으며, 혼합 추출물이 단일 추출물에 비해 보다 더 우수한 효과를 가짐을 확인 함으로써 본 발명을 완성하였다.
Therefore, the inventors of the present invention, while studying the antibacterial, antioxidant and anticancer efficacy of natural products, prepared the extract of Baekjak, broiler, and gallnut at a low concentration harmless to the human body, the effect of each extraction condition directly The present invention was completed by confirming that the mixed extract has a better effect than the single extract.

본 발명의 실시예들에 의하면, 백작약, 육계 및 오배자 추출물은 항균 활성이 우수하다. 이를 포함한 식품 보존제가 항균 활성을 나타내는 균주로는 Escherichia coli (E. coli), Bacillus cereus (B. cereus), Staphylococcus aureus (S. aureus), 살모넬라 티피 (Salmonella typhi), 살모넬라 갈리나리움 (Salmonella gallinarium), 살모넬라 티피뮤리움 (Salmonella typhimurium), 비브리오 콜레라 (Vibrio cholerae), Listeria (식중독균), Staphylococcus epidermidis, Salmonella enteritidis (식중독균), Pseudomonas aruginosa (식중독균) 등이 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
According to the embodiments of the present invention, Baekjak, broiler and Mungja extract have excellent antibacterial activity. As a food preservative containing the same antibacterial activity, Escherichia coli ( E. coli ), Bacillus cereus (B. cereus), Staphylococcus aureus (S. aureus), Salmonella typhimurium (Salmonella typhi ), Salmonella galinarium ( Salmonella gallinarium), Salmonella typhimurium (Salmonella typhimurium ), Vibrio cholerae , Listeria (food poisoning), Staphylococcus epidermidis , Salmonella enteritidis , Pseudomonas aruginosa , but is not limited thereto.

또한 상기 항균 활성은 이들을 적절한 비율로 조합한 혼합추출물 형태로 사용할 경우 단독으로 사용하는 것보다 더욱 우수하게 나타난다. In addition, the antimicrobial activity is better than that used alone when used in the form of a mixed extract combining them in an appropriate ratio.

본 발명의 한 구체예에서, 상기 백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물의 중량비는 각 추출물의 농도가 동일하게 맞춰진 경우 1~2: 1~2: 3~8 일 수 있다. 즉, 본 발명의 식품 보존제는 동일 농도의 백작약 추출물 1 내지 2 중량부, 육계 추출물 1 내지 2 중량부 및 오배자 추출물 3 내지 8 중량부를 포함하는 것을 특징으로 한다.
In one embodiment of the present invention, the weight ratio of the earl extract, broiler extract and gallnut extract may be 1 to 2: 1 to 2: 3 to 8 when the concentration of each extract is equally matched. In other words, the food preservative of the present invention is characterized in that it comprises 1 to 2 parts by weight of Baekjak extract, 1 to 2 parts by weight of broiler extract and 3 to 8 parts by weight of gall extract.

본 발명의 식품 보존제는 유해 병원성 미생물 생육억제 및 사멸효과가 있고 식품을 무처리군에 비해 오래 유지하거나 보존하는 활성을 갖는 조성물을 의미한다. 구체적으로는 이에 제한되는 것은 아니나, 식품의 갈변방지제, 산화방지제, 미생물 생장 억제제, 살균제, 향신료, 조미제, 방부제 등으로 사용될 수 있는 물질을 의미한다.The food preservative of the present invention refers to a composition having an effect of inhibiting harmful pathogenic microbial growth and killing, and having an activity of keeping or preserving food for a long time as compared to the untreated group. Specifically, but not limited to, it means a material that can be used as a browning agent, antioxidant, microbial growth inhibitors, fungicides, spices, seasonings, preservatives and the like of food.

본 발명의 식품 보존제가 적용될 수 있는 식품의 구체적인 예로는 야채, 과일, 야채의 건조제품이나 절단제품, 과일쥬스, 야채쥬스, 야채와 과일의 혼합쥬스, 칩류, 면류, 축산가공식품, 수산가공식품, 유가공식품, 발효유식품, 곡류식품, 미생물발효식품, 제과제빵, 양념류, 육가공류, 산성음료수, 감초류, 허브류 등이 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.
Specific examples of the food to which the food preservative of the present invention may be applied include vegetables, fruits, dried or cut products of vegetables, fruit juices, vegetable juices, mixed juices of vegetables and fruits, chips, noodles, livestock processed foods, fish processed foods , Dairy foods, fermented milk foods, cereal foods, microbial fermented foods, bakery, condiments, meat processing, acidic beverages, licorice, herbs, etc., but are not limited thereto.

본 발명의 실시예들에 의하면, 상기 식품 보존제는 식품 보존제 100 중량부에 대비하여 백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물을 0.001 내지 30 중량부, 0.01 내지 25 중량부 또는 0.1 내지 20중량부 포함할 수 있다. 상기 백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물의 혼합추출물의 함량이 0.001 중량부 미만인 경우에는 식품 보존 효과가 거의 없으며, 30 중량부 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하여 경제적이지 못하기 때문이다.
According to the embodiments of the present invention, the food preservative may include 0.001 to 30 parts by weight, 0.01 to 25 parts by weight or 0.1 to 20 parts by weight of Baekjak extract, broiler extract and gallnut extract relative to 100 parts by weight of the food preservative have. When the content of the mixed extract of the Baekjak extract, broiler extract and gallja extract is less than 0.001 parts by weight, there is almost no food preservation effect, when more than 30 parts by weight is not economical because the degree of increase in the effect of increasing the content is insignificant.

또한 본 발명의 식품 보존제는 상기 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수 있다. 구체적으로 이에 제한되는 것은 아니나, 식품 위생목적의 다른 첨가물, 예컨대 젖산 등의 유기산이나 미생물생육 억제물질 등이 있다. In addition, the food preservative of the present invention may contain, in addition to the above extracts, other ingredients that can give a synergistic effect to the main effect, preferably within the range of not impairing the main effect of the present invention. Specific examples include, but are not limited to, other additives for food hygiene purposes, such as organic acids such as lactic acid and inhibitors for microbial growth.

본 발명의 식품 보존제는 식품 보존 필요성에 맞게 편리하고 적합한 방법으로 액상, 고상, 파우더 형태 등으로 다양하게 제제화 될 수 있다.
Food preservatives of the present invention can be formulated in various forms, such as liquid, solid, powder, etc. in a convenient and suitable manner to meet the food preservation needs.

본 발명의 실시예들은 백작약, 육계 및 오배자 각각과 용매를 혼합하여 50 내지 90℃에서 30분 내지 200분 동안 백작약, 육계 및 오배자를 가열 추출하는 단계; Embodiments of the present invention comprises the steps of mixing and extracting each of the earl, broiler, and gallnut and the solvent for 30 minutes to 200 minutes at 50 to 90 ℃ heat extract;

각각을 여과한 후 20 내지 80℃ 에서 60 내지 200분 동안 감압 농축하는 단계;Filtering each and concentrating under reduced pressure at 20 to 80 ° C. for 60 to 200 minutes;

이를 동결건조 하는 단계; 및Lyophilizing it; And

각각의 추출물의 농도를 동일하게 하고, 이를 혼합하는 단계를 포함하는 백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 식품 보존제의 제조방법을 제공한다.
It provides a method for producing a food preservative consisting of the earl extract, broiler extract and gallnut extract comprising the same concentration of each extract, and mixing them.

본 발명의 실시예들에서 사용하는 백작약, 육계 및 오배자는 생으로 또는 건조하여 사용할 수 있고, 또한 이들을 분쇄하여 사용할 수 있다. Baekjak, broiler and gall used in the embodiments of the present invention can be used live or dried, and can also be used by grinding them.

본 발명의 한 구체예에서, 상기 가열 추출 단계의 용매는 물, 탄소수 1 내지 6개의 저급 알코올, 글리세린, 에틸아세테이트, 부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜, 디클로로메탄 및 헥산으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상을 사용할 수 있다. In one embodiment of the present invention, the solvent of the heat extraction step may use at least one selected from the group consisting of water, lower alcohols having 1 to 6 carbon atoms, glycerin, ethyl acetate, butylene glycol, propylene glycol, dichloromethane and hexane Can be.

용매의 사용량에 특별한 제한이 있는 것은 아니나, 추출 효율 및 경제성 등을 고려할 때 추출 대상물질의 중량 대비 1 내지 20배를 사용할 수 있다.The amount of the solvent is not particularly limited, but considering the extraction efficiency and economic efficiency, it may be used 1 to 20 times the weight of the extraction target material.

본 발명의 한 구체예에서, 백작약 추출물 제조시에는 상기 용매로 80 내지 100vol% 또는 90 내지 100vol% 알코올 수용액을 사용하고, 50 내지 75℃, 55 내지 70℃ 또는 55 내지 65℃ 에서 60분 내지 200분, 90분 내지 180분 또는 120분 내지 150분 동안 가열 추출하는 것이 좋다. In one embodiment of the present invention, the preparation of Baekjak extract using 80 to 100 vol% or 90 to 100 vol% alcohol aqueous solution as the solvent, 60 to 200 minutes at 50 to 75 ℃, 55 to 70 ℃ or 55 to 65 ℃ Heat extraction for minutes, 90 minutes to 180 minutes or 120 minutes to 150 minutes is preferred.

본 발명의 다른 구체예에서, 육계 추출물 제조시에는 상기 용매로 0 내지 20vol% 또는 0 내지 10vol% 알코올 수용액을 사용하고, 50 내지 75℃, 55 내지 70℃ 또는 55 내지 65℃ 에서 60분 내지 200분, 90분 내지 180분 또는 120분 내지 150분 동안 가열 추출하는 것이 좋다. In another embodiment of the present invention, when the broiler extract is prepared using an aqueous solution of 0 to 20 vol% or 0 to 10 vol% alcohol as the solvent, 60 to 200 minutes at 50 to 75 ℃, 55 to 70 ℃ or 55 to 65 ℃ Heat extraction for minutes, 90 minutes to 180 minutes or 120 minutes to 150 minutes is preferred.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 오배자 추출물 제조시에는 상기 용매로 물, 알코올 또는 물과 알코올의 혼합 용매를 사용하고, 50 내지 90℃에서 30분 내지 200분 동안 가열 추출하는 것이 좋다.
In another embodiment of the present invention, when the gall bladder extract is prepared, it is preferable to use water, alcohol or a mixed solvent of water and alcohol as the solvent, and heat extraction at 50 to 90 ° C. for 30 to 200 minutes.

본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 알코올은 에탄올일 수 있다.
In another embodiment of the invention, the alcohol may be ethanol.

본 발명의 한 구체예에서, 상기 감압 농축 단계의 온도는 20 내지 80℃, 40 내지 60℃ 또는 45 내지 55℃ 이고, 시간은 60 내지 200분, 80 내지 180분 또는 100 내지 150분 일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the temperature of the vacuum concentration step is 20 to 80 ℃, 40 to 60 ℃ or 45 to 55 ℃, the time may be 60 to 200 minutes, 80 to 180 minutes or 100 to 150 minutes. .

본 발명의 한 구체예에서, 상기 동결 건조 단계의 온도는 -70℃ 내지 -30℃ 또는 -60℃ 내지 -40℃ 이고, 건조 기간은 1일 내지 3일 또는 2일 내지 3일 일 수 있다. In one embodiment of the present invention, the temperature of the freeze drying step is -70 ℃ to -30 ℃ or -60 ℃ to -40 ℃, the drying period may be 1 to 3 days or 2 to 3 days.

그러나 본 발명에 따른 추출물을 제조하는 방법은 이에 제한되는 것은 아니며, 일반적인 추출방법에 의해서 제조할 수 있음은 당업자에게 자명하다.
However, the method of preparing the extract according to the present invention is not limited thereto, and it can be prepared by a general extraction method.

또한 본 발명의 실시예들은 상기 식품 보존제를 식품 제조 공정시 원료와 함께 배합하는 단계를 포함하는 식품 보존 방법을 제공한다. In addition, embodiments of the present invention provides a food preservation method comprising the step of combining the food preservative with the raw material in the food manufacturing process.

또한 본 발명의 실시예들은 상기 식품 보존제를 식품에 처리하는 단계를 포함하는 식품 보존 방법을 제공한다. In addition, embodiments of the present invention provides a food preservation method comprising the step of treating the food preservative to food.

본 발명의 한 구체예에 따르면, 본 발명의 식품 보존제에 식품을 담그거나, 담근 후 휘젓거나, 보존제를 분무하거나, 직접 혼합함으로써 식품 보존제를 식품에 고르게 적용될 수 있도록 처리할 수 있다.
According to one embodiment of the present invention, the food preservative may be processed to be applied to the food evenly by dipping, dipping and stirring the food preservative, spraying the preservative, or directly mixing the food preservative of the present invention.

[실시예][Example]

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the following examples. However, the following examples are intended to illustrate the contents of the present invention, but the scope of the present invention is not limited to the following examples. Embodiments of the present invention are provided to more fully describe the present invention to those skilled in the art.

<< 실시예Example 1> 각각의 추출물 제조 1> each extract manufacturer

건조된 백작약, 육계, 오배자 각각 50g에 70%에탄올(30% 3차 증류수) 500ml를 가한 후, 180분 동안 80 내지 85℃에서 가열추출 하였다. 이 에탄올 추출물을 여과시킨 후, 회전 진공 농축기(RE-111, Buchi Co., Zurich, Switzerland)를 사용하여 40 내지 45℃에서 60 내지 95분 동안 감압농축 하였고, 최종적으로 농축된 추출물을 동결건조기(Ilshin Lab Co., Seoul, Korea)를 사용하여 -50℃에서 48시간 동결건조하여 건조된 백작약, 육계, 오배자 추출물을 제조하였다.500 g of 70% ethanol (30% tertiary distilled water) was added to 50 g of each of the dried Baekjak, broilers, and gallnuts, and then extracted by heating at 80 to 85 ° C. for 180 minutes. The ethanol extract was filtered and concentrated under reduced pressure at 40 to 45 ° C. for 60 to 95 minutes using a rotary vacuum concentrator (RE-111, Buchi Co., Zurich, Switzerland), and finally the concentrated extract was freeze-dried ( Ilshin Lab Co., Seoul, Korea) was used to freeze-dried at -50 ° C for 48 hours to prepare dried Baekjak, broiler, gallnut extract.

그 후 이를 3차 증류수에 용해하여 사용하였다. 각각의 농도는 각각 백작약 123㎍/㎕, 육계 156㎍/㎕, 오배자 198㎍/㎕ 로 나타났는데, 이를 각각 최종 농도가 100㎍/㎕이 되도록 맞추어 이하의 실험에 사용하였다.
Thereafter, it was dissolved in tertiary distilled water and used. Each concentration was shown as 123 μg / μl of broth, 156 μg / μl of broilers, and 198 μg / μl of lattices, respectively, which were used in the following experiments to adjust the final concentration to 100 μg / μl.

<< 실시예Example 2> 추출  2> Extract 조건 별By condition 추출물 제조 Extract manufacturer

항균 및 다른 기능(항산화, 항암) 효과가 우수한 추출조건 확립을 위하여 용매(물 100%, 에탄올 100%, 물 50%/에탄올 50%), 온도(60℃, 70℃, 80℃), 추출시간(1, 2, 3시간) 별로 3가지 범주를 설정하여 중심 합성 계획법에 따라 15가지 백작약, 육계, 오배자 추출물을 각각 제조하였으며, 전반적인 추출물 제조과정은 실시예 1과 동일하다. 각각의 조건은 다음 표 1과 같다.Solvent (100% water, 100% ethanol, 50% water / ethanol 50%), temperature (60 ℃, 70 ℃, 80 ℃), extraction time to establish extraction conditions with excellent antibacterial and other functions (antioxidant, anticancer) Three categories were set for each (1, 2, 3 hours), and 15 earl, broiler, and gallnut extracts were prepared according to the central synthesis scheme, and the overall extract preparation process was the same as in Example 1. Each condition is shown in Table 1 below.

추출조건Extraction condition 추출용매Extraction solvent 추출온도Extraction temperature 추출시간Extraction time 1One 물 100%100% of water 60℃60 ° C 2 시간2 hours 22 물 100%100% of water 80℃80 ℃ 2 시간2 hours 33 에탄올 100%Ethanol 100% 60℃60 ° C 2 시간2 hours 44 에탄올 100%Ethanol 100% 80℃80 ℃ 2 시간2 hours 55 물 100%100% of water 70℃70 ℃ 1 시간1 hours 66 물 100%100% of water 70℃70 ℃ 3 시간3 hours 77 에탄올 100%Ethanol 100% 70℃70 ℃ 1 시간1 hours 88 에탄올 100%Ethanol 100% 70℃70 ℃ 3 시간3 hours 99 물 50% + 에탄올 50%50% water + 50% ethanol 60℃60 ° C 1 시간1 hours 1010 물 50% + 에탄올 50%50% water + 50% ethanol 60℃60 ° C 3 시간3 hours 1111 물 50% + 에탄올 50%50% water + 50% ethanol 80℃80 ℃ 1 시간1 hours 1212 물 50% + 에탄올 50%50% water + 50% ethanol 80℃80 ℃ 3 시간3 hours 1313 물 50% + 에탄올 50%50% water + 50% ethanol 70℃70 ℃ 2 시간2 hours 1414 물 50% + 에탄올 5050% water + 50 ethanol 70℃70 ℃ 2 시간2 hours 1515 물 50% + 에탄올 50%50% water + 50% ethanol 70℃70 ℃ 2 시간2 hours

이하 각각의 조건으로 추출된 조건별 추출물에 각각의 조건이 지칭하는 상기 번호를 부여하여 기재한다.
Hereinafter, by giving the above-mentioned number each condition refers to the extract for each condition extracted under each condition.

<< 실험예Experimental Example 1> 항균 효과 실험 1> antimicrobial effect experiment

항균 실험은 종이 디스크(paper disc)를 이용한 한천 확산(agar diffusion) 방법으로 측정하였다. 사용한 균주 및 대상균을 증식시키기 위한 액체배지는 식품보존제의 억가측정에 일반적으로 사용되는 것을 사용하였으며 표 2와 같다. 특히 Escherichia coli (E. coli)는 대표적인 채소류 오염 지표균이며, Bacillus cereus (B. cereus)와 Staphylococcus aureus (S. aureus)는 대표적인 채소류 식품 병원성 지표균으로 식품의약품안전청에서 간주하고 있다.Antimicrobial experiments were measured by agar diffusion using a paper disc. Liquid medium for propagating the used strain and the target bacteria was used that is commonly used for the measurement of the inhibition of food preservatives are shown in Table 2. Especially Escherichia coli ( E. coli ) is a representative vegetable contamination indicator bacterium, Bacillus cereus ( B. cereus ) and Staphylococcus aureus ( S. aureus ) is a representative vegetable pathogenic indicator considered by the Food and Drug Administration.

구분division 시험균주Test strain 배지badge 배양시간Incubation time 온도Temperature 그람양성세균Gram-positive bacteria BacillusBacillus cereuscereus Trypticase Soy BrothTrypticase Soy Broth 18 시간18 hours 37℃37 ℃ StaphylococcusStaphylococcus aureusaureus 16 시간16 hours 그람음성세균Gram-negative bacteria EscherichiaEsherichia colicoli 15 시간15 hours

배양접시에 종이 디스크 확산 분석(Paper disc diffusion assay) 전용 고체배지인 Mueller Hinton Ⅱ Agar 15~20㎖를 부어 굳힌 후, 측정하고자 하는 대상시료액을 배지에 올려 놓은 Paper disc(지름: 6mm)에 20㎕를 흡수시킨 다음 검정균 배양조건에 따라 일정시간 배양하였다. 이후 형성된 생육 저지환 직경을 측정하는 방법을 통해 항균력을 알아보았다. 실시예 1의 각 추출물에 대한 결과를 도 1에, 실시예 1 및 실시예 2의 조건별 추출물에 대한 결과를 표 3 내지 5에 기재하였다. 카나마이신(1.5㎍/㎕)은 대조군으로 사용되었다.Pour 15-20 ml of Mueller Hinton II Agar, a solid medium dedicated to paper disc diffusion assay, into the culture dish, and harden, and place the sample solution to be measured on the paper disc (diameter: 6 mm). Μl was absorbed and then incubated for a certain time according to the assay culture conditions. Afterwards, the antimicrobial activity was examined through the method of measuring the growth inhibitory ring diameter formed. The results for each extract of Example 1 are shown in Figure 1, the results for the extract according to the conditions of Examples 1 and 2 are shown in Tables 3 to 5. Kanamycin (1.5 μg / μl) was used as a control.

대상시료Target Sample 생육저지환Growth hypocrisy E. coli
(ATCC 25922) E. coli
(ATCC 25922) B. cereus
(ATCC 14579) B. cereus
(ATCC 14579) S. aureus
(ATCC 25923) S. aureus
(ATCC 25923) 카나마이신(1.5㎍/㎕)Kanamycin (1.5 μg / μl) 26.45 ± 0.4626.45 ± 0.46 20.26 ± 0.5420.26 ± 0.54 21.33 ± 0.4821.33 ± 0.48 백작약추출물(실시예 1)Earl extract (Example 1) 8.17 ± 0.348.17 ± 0.34 11.69 ± 0.2511.69 ± 0.25 12.04 ± 0.2912.04 ± 0.29 조건별 백작약추출물 1Earl extract of each condition 1 -- 8.36 ± 0.168.36 ± 0.16 7.71 ± 0.197.71 ± 0.19 조건별 백작약추출물 2Earl extract by condition 2 -- 7.26 ± 0.187.26 ± 0.18 6.80 ± 0.136.80 ± 0.13 조건별 백작약추출물 3Earl extract of each condition 3 13.58 ± 0.1613.58 ± 0.16 12.16 ± 0.2712.16 ± 0.27 11.72 ± 0.0711.72 ± 0.07 조건별 백작약추출물 4Earl extract by condition 4 13.70 ± 0.3113.70 ± 0.31 11.12 ± 0.4611.12 ± 0.46 11.19 ± 0.0711.19 ± 0.07 조건별 백작약추출물 5Earl extract by condition 5 -- 7.14 ± 0.477.14 ± 0.47 6.74 ± 0.166.74 ± 0.16 조건별 백작약추출물 6Earl extract by condition 6 -- 8.97 ± 0.078.97 ± 0.07 7.03 ± 0.127.03 ± 0.12 조건별 백작약추출물 7Earl extract by condition 7 13.72 ± 0.2613.72 ± 0.26 11.44 ± 0.1011.44 ± 0.10 11.09 ± 0.3511.09 ± 0.35 조건별 백작약추출물 8Earl extract by condition 8 13.82 ± 0.1513.82 ± 0.15 11.82 ± 0.4311.82 ± 0.43 11.13 ± 0.0911.13 ± 0.09 조건별 백작약추출물 9Earl extract by condition 9 12.79 ± 0.3812.79 ± 0.38 11.25 ± 0.3011.25 ± 0.30 11.10 ± 0.1711.10 ± 0.17 조건별 백작약추출물 10Earl extract by condition 10 12.77 ± 0.4612.77 ± 0.46 11.55 ± 0.4011.55 ± 0.40 11.55 ± 0.3611.55 ± 0.36 조건별 백작약추출물 11Earl extract by condition 11 12.60 ± 0.5912.60 ± 0.59 11.41 ± 0.3511.41 ± 0.35 11.25 ± 0.1511.25 ± 0.15 조건별 백작약추출물 12Earl extract by condition 12 13.60 ± 0.3813.60 ± 0.38 11.22 ± 0.3211.22 ± 0.32 11.49 ± 0.1411.49 ± 0.14 조건별 백작약추출물 13Earl extract by condition 13 13.37 ± 0.4013.37 ± 0.40 11.57 ± 0.1611.57 ± 0.16 11.52 ± 0.4211.52 ± 0.42 조건별 백작약추출물 14Earl extract by condition 14 13.18 ± 0.3213.18 ± 0.32 11.54 ± 0.2911.54 ± 0.29 11.39 ± 0.2411.39 ± 0.24 조건별 백작약추출물 15Earl extract by condition 15 12.55 ± 0.3112.55 ± 0.31 11.56 ± 0.3211.56 ± 0.32 11.10 ± 0.1811.10 ± 0.18

대상시료Target Sample 생육저지환Growth hypocrisy E. coli
(ATCC 25922) E. coli
(ATCC 25922) B. cereus
(ATCC 14579) B. cereus
(ATCC 14579) S. aureus
(ATCC 25923) S. aureus
(ATCC 25923) 카나마이신(1.5㎍/㎕)Kanamycin (1.5 μg / μl) 27.49 ± 0.4327.49 ± 0.43 23.41 ± 0.6123.41 ± 0.61 22.58 ± 0.7122.58 ± 0.71 육계추출물(실시예 1)Broiler extract (Example 1) 8.18 ± 0.658.18 ± 0.65 11.10 ± 0.9911.10 ± 0.99 9.49 ± 0.289.49 ± 0.28 조건별 육계추출물 1Broiler extracts by condition 1 -- 12.51 ± 0.0912.51 ± 0.09 10.85 ± 0.2310.85 ± 0.23 조건별 육계추출물 2Broiler extracts by condition 2 -- 10.41 ± 0.3110.41 ± 0.31 9.23 ± 0.16 9.23 ± 0.16 조건별 육계추출물 3Broiler extracts by condition 3 -- 10.56 ± 0.4110.56 ± 0.41 -- 조건별 육계추출물 4Broiler extracts by condition 4 -- 10.08 ± 0.5110.08 ± 0.51 -- 조건별 육계추출물 5Broiler extracts by condition 5 -- 11.36 ± 0.1011.36 ± 0.10 10.64 ± 0.3210.64 ± 0.32 조건별 육계추출물 6Broiler Extracts by Condition 6 -- 11.28 ± 0.3211.28 ± 0.32 10.32 ± 0.1810.32 ± 0.18 조건별 육계추출물 7Broiler Extracts by Condition 7 -- 9.66 ± 0.149.66 ± 0.14 -- 조건별 육계추출물 8Broiler extracts by condition 8 -- 9.68 ± 0.169.68 ± 0.16 -- 조건별 육계추출물 9Broiler Extracts by Condition 9 -- 11.65 ± 0.3311.65 ± 0.33 11.39 ± 0.3711.39 ± 0.37 조건별 육계추출물 10Broiler Extracts by Condition 10 -- 11.87 ± 0.1811.87 ± 0.18 11.21 ± 0.3011.21 ± 0.30 조건별 육계추출물 11Broiler Extracts by Condition 11 -- 11.88 ± 0.3911.88 ± 0.39 10.16 ± 0.1310.16 ± 0.13 조건별 육계추출물 12Broiler Extracts by Condition 12 -- 11.71 ± 0.4911.71 ± 0.49 10.22 ± 0.3210.22 ± 0.32 조건별 육계추출물 13Broiler Extracts by Condition 13 -- 12.19 ± 0.3412.19 ± 0.34 10.48 ± 0.3110.48 ± 0.31 조건별 육계추출물 14Broiler Extracts by Condition 14 -- 10.90 ± 0.6310.90 ± 0.63 10.67 ± 0.4310.67 ± 0.43 조건별 육계추출물 15Conditional Broiler Extracts 15 -- 11.87 ± 0.3511.87 ± 0.35 10.23 ± 0.3510.23 ± 0.35

대상시료Target Sample 생육저지환Growth hypocrisy E. coli
(ATCC 25922) E. coli
(ATCC 25922) B. cereus
(ATCC 14579) B. cereus
(ATCC 14579) S. aureus
(ATCC 25923) S. aureus
(ATCC 25923) 카나마이신(1.5㎍/㎕)Kanamycin (1.5 μg / μl) 27.00 ± 0.4127.00 ± 0.41 21.00 ± 0.6021.00 ± 0.60 21.26 ± 0.7521.26 ± 0.75 오배자추출물(실시예 1)Gall bladder extract (Example 1) 20.38 ± 1.0720.38 ± 1.07 14.69 ± 0.4114.69 ± 0.41 15.89 ± 0.5015.89 ± 0.50 조건별 오배자추출물 1Glutinous extract by condition 1 19.95 ± 0.8519.95 ± 0.85 16.52 ± 0.6016.52 ± 0.60 16.95 ± 0.1216.95 ± 0.12 조건별 오배자추출물 2Glutinous Extract by Condition 2 20.28 ± 0.6620.28 ± 0.66 16.25 ± 0.6216.25 ± 0.62 16.86 ± 0.6016.86 ± 0.60 조건별 오배자추출물 3Glutinous Extract by Condition 3 19.21 ± 1.0719.21 ± 1.07 16.33 ± 0.3516.33 ± 0.35 16.12 ± 0.8716.12 ± 0.87 조건별 오배자추출물 4Glutinous Extract by Condition 4 19.89 ± 0.9219.89 ± 0.92 16.14 ± 0.7216.14 ± 0.72 16.66 ± 0.3016.66 ± 0.30 조건별 오배자추출물 5Gall bladder extract by condition 5 18.78 ± 0.2318.78 ± 0.23 16.86 ± 0.4216.86 ± 0.42 16.97 ± 0.3816.97 ± 0.38 조건별 오배자추출물 6Glutinous Extract by Condition 6 18.26 ± 0.8518.26 ± 0.85 16.58 ± 0.1616.58 ± 0.16 16.10 ± 0.2516.10 ± 0.25 조건별 오배자추출물 7Glutinous Extract by Condition 7 19.96 ± 0.2419.96 ± 0.24 16.48 ± 0.1816.48 ± 0.18 16.21 ± 0.1816.21 ± 0.18 조건별 오배자추출물 8Glutinous Extract by Condition 8 19.95 ± 0.5819.95 ± 0.58 16.62 ± 0.1916.62 ± 0.19 16.42 ± 0.1316.42 ± 0.13 조건별 오배자추출물 9Glutinous Extract by Condition 9 19.87 ± 0.4719.87 ± 0.47 16.18 ± 0.6516.18 ± 0.65 16.54 ± 0.3616.54 ± 0.36 조건별 오배자추출물 10Gall bladder extract by condition 10 20.01 ± 0.2220.01 ± 0.22 15.87 ± 0.4915.87 ± 0.49 17.29 ± 1.4617.29 ± 1.46 조건별 오배자추출물 11Malnutrition extract by condition 11 18.90 ± 1.0418.90 ± 1.04 15.76 ± 0.5715.76 ± 0.57 17.00 ± 0.1117.00 ± 0.11 조건별 오배자추출물 12Malnutrition extract by condition 12 20.21 ± 0.3320.21 ± 0.33 15.48 ± 0.5215.48 ± 0.52 17.01 ± 0.1417.01 ± 0.14 조건별 오배자추출물 13Malnutrition extract by condition 13 18.86 ± 0.7218.86 ± 0.72 15.84 ± 0.0815.84 ± 0.08 16.38 ± 0.2116.38 ± 0.21 조건별 오배자추출물 14Glutinous Extract by Condition 14 19.36 ± 0.4419.36 ± 0.44 16.07 ± 0.3116.07 ± 0.31 16.29 ± 0.1916.29 ± 0.19 조건별 오배자추출물 15Malnutrition extract by condition 15 19.55 ± 0.7319.55 ± 0.73 15.77 ± 0.1315.77 ± 0.13 16.55 ± 0.8216.55 ± 0.82

백작약추출물(실시예 1)의 경우 그람음성균인 E. coli에 대해서는 다소 약한 항균력을 보이는 반면, 그람양성균인 B. cereus와 S. aureus에 대해서는 생육저지환의 직경이 크게 나타나 이를 통해 탁월한 항균력을 나타낸다는 것을 알 수 있다. 반면 조건별 백작약추출물(실시예 2의 1 내지 15번 조건으로 추출된 백작약추출물)의 경우 그람양성균인 B. cereus와 S. aureus보다 그람음성균인 E. coli에 대해서 탁월한 항균력을 나타내는 것을 알 수 있었으며, E. coli에 대해서는 실시예 1의 백작약추출물보다 뛰어난 항균력을 보였다. 또한 조건별 백작약추출물의 향균력을 종합하여 평가한 결과, 에탄올 혼합 및 에탄올 100%로 추출한 추출물이 물 100% 추출물보다 항균력이 뛰어남을 알 수 있었다.The earl extract (Example 1) showed slightly weaker antimicrobial activity against Gram-negative bacteria E. coli , while the diameter of growth-lowering ring was larger for Gram-positive bacteria B. cereus and S. aureus . It can be seen that. On the other hand, it was found that the earl extract of each condition (the earl extract extracted under the conditions 1 to 15 of Example 2) showed superior antimicrobial activity against Gram-negative bacteria E. coli than Gram-positive bacteria B. cereus and S. aureus . , E. coli showed better antibacterial activity than the earl extract of Example 1. In addition, as a result of evaluating the antibacterial activity of the earl extract according to the conditions, it was found that the extract extracted with ethanol mixture and ethanol 100% was superior to the 100% water extract.

육계추출물(실시예 1)의 경우 또한 그람음성균인 E. coli에 대해서는 다소 약한 항균력을 보이는 반면, 그람양성균인 B. cereus와 S. aureus에 대해서는 생육저지환의 직경이 크게 나타나 이를 통해 탁월한 항균력을 나타낸다는 것을 알 수 있었다. 반면 조건별 육계추출물(실시예 2의 1 내지 15번 조건으로 추출된 육계추출물)의 경우 B. cereus와 S. aureus에 대해서는 본래 육계 추출물에 버금가는 항균력을 나타내지만 E. coli에 대해서는 항균력이 없음을 알 수 있었다.Broiler extracts (Example 1) also showed slightly weaker antimicrobial activity against Gram-negative bacteria E. coli , while the diameter of growth-lowering ring showed greater antimicrobial activity against Gram-positive bacteria B. cereus and S. aureus . Could know. On the other hand, broiler extracts according to the conditions (broil extracts extracted under conditions 1 to 15 of Example 2) showed antibacterial activity comparable to that of the original broiler extract for B. cereus and S. aureus , but no antimicrobial activity against E. coli . And it was found.

오배자추출물(실시예 1)의 경우 B. cereus와 S. aureus에 비해 E. coli에 대해서 뛰어난 항균력을 나타내지만, 세가지 모두에 대해 전반적으로 우수한 항균력을 가지고 있음을 알 수 있었고, 조건별 오배자 추출물(실시예 2의 1 내지 15번 조건으로 추출된 오배자추출물)의 경우 또한 모든 검정균에 대해서 실시예 1의 오배자추출물에 버금가거나 더욱 우수한 항균력을 보였다.
In the case of gall bladder extract (Example 1), it showed excellent antimicrobial activity against E. coli compared to B. cereus and S. aureus , but it was found that it had excellent antimicrobial activity for all three types. In the case of the gall bladder extract extracted under conditions 1 to 15 of Example 2, the gall bladder extract of Example 1 showed better or better antibacterial activity for all assay bacteria.

종합하면, 실시예 2의 조건별 추출물에서 백작약은 3번 조건별 추출물의 활성이 가장 우수하게 나타났고, 육계와 오배자는 1번 조건별 추출물의 활성이 가장 우수하게 나타났다.
In summary, in the extract according to the condition of Example 2, the earl of the extract was the most excellent activity of the third condition, the broiler and the gall showed the best activity of the first condition.

또한 실시예 1의 추출물에 대해 조성 비율 별로 항균 실험을 수행하여, 조성비 별 항균 활성을 동일한 방법으로 측정하였다. 농도가 동일하게 100㎍/㎕로 맞추어진 세가지 용매추출물을 아래 각각의 조성비로 혼합한 후, 디스크당 20㎕를 로딩하였다.In addition, by performing an antimicrobial experiment for each composition ratio for the extract of Example 1, the antimicrobial activity of each composition ratio was measured by the same method. Three solvent extracts with the same concentrations of 100 μg / μl were mixed at the respective composition ratios below, followed by loading 20 μl per disc.

결과는 표 6과 같다.The results are shown in Table 6.

대상시료Target Sample 생육저지환Growth hypocrisy E. coli
(ATCC 25922) E. coli
(ATCC 25922) B. cereus
(ATCC 14579) B. cereus
(ATCC 14579) S. aureus
(ATCC 25923) S. aureus
(ATCC 25923) 카나마이신Kanamycin 20.74 ± 0.2520.74 ± 0.25 21.48 ± 0.7021.48 ± 0.70 21.78 ± 0.3321.78 ± 0.33 백작약 (33.3 ㎍/㎕) + 육계 (33.3 ㎍/㎕) + 오배자 (33.3 ㎍/㎕)
[조성비=1:1:1]Earl (33.3 μg / μl) + Broiler (33.3 μg / μl) + Mellitus (33.3 μg / μl)
[Composition ratio = 1: 1: 1] 14.25 ± 0.0114.25 ± 0.01 13.74 ± 0.2713.74 ± 0.27 14.10 ± 0.1214.10 ± 0.12 백작약 (60 ㎍/㎕) + 육계 (20 ㎍/㎕) + 오배자 (20 ㎍/㎕)
[조성비=3:1:1]Earl (60 μg / μl) + Broiler (20 μg / μl) + Mellitus (20 μg / μl)
[Composition ratio = 3: 1: 1] 13.57 ± 0.1613.57 ± 0.16 13.43 ± 0.6113.43 ± 0.61 13.36 ± 0.2213.36 ± 0.22 백작약 (20 ㎍/㎕) + 육계 (20 ㎍/㎕) + 오배자 (60 ㎍/㎕)
[조성비=1:1:3]Earl (20 μg / μl) + Broiler (20 μg / μl) + Mellitus (60 μg / μl)
[Composition ratio = 1: 1: 3] 18.33 ± 0.2918.33 ± 0.29 15.32 ± 0.2615.32 ± 0.26 15.58 ± 0.4415.58 ± 0.44 백작약 (20 ㎍/㎕) + 육계 (60 ㎍/㎕) + 오배자 (20 ㎍/㎕)
[조성비=1:3:1]Earl (20 μg / μl) + Broiler (60 μg / μl) + Mellitus (20 μg / μl)
[Composition ratio = 1: 3: 1] 13.62 ± 0.3713.62 ± 0.37 13.25 ± 0.1213.25 ± 0.12 13.12 ± 0.4013.12 ± 0.40 백작약 (70 ㎍/㎕) + 육계 (10 ㎍/㎕) + 오배자 (20 ㎍/㎕)
[조성비=7:1:2]Earl (70 μg / μl) + Broiler (10 μg / μl) + Mellitus (20 μg / μl)
[Composition ratio = 7: 1: 2] 13.78 ± 0.5513.78 ± 0.55 13.46 ± 0.2513.46 ± 0.25 13.31 ± 0.2413.31 ± 0.24 백작약 (70 ㎍/㎕) + 육계 (20 ㎍/㎕) + 오배자 (10 ㎍/㎕)
[조성비=7:2:1]Earl (70 μg / μl) + Broiler (20 μg / μl) + Mellitus (10 μg / μl)
[Composition ratio = 7: 2: 1] 13.38 ± 0.2713.38 ± 0.27 11.74 ± 0.4511.74 ± 0.45 12.44 ± 0.4212.44 ± 0.42 백작약 (20 ㎍/㎕) + 육계 (10 ㎍/㎕) + 오배자 (70 ㎍/㎕)
[조성비=2:1:7]Earl (20 μg / μl) + Broiler (10 μg / μl) + Mellitus (70 μg / μl)
[Composition ratio = 2: 1: 7] 18.80 ± 0.2418.80 ± 0.24 15.80 ± 0.4415.80 ± 0.44 16.20 ± 0.5316.20 ± 0.53 백작약 (10 ㎍/㎕) + 육계 (20 ㎍/㎕) + 오배자 (70 ㎍/㎕)
[조성비=1:2:7]Earl (10 μg / μl) + Broiler (20 μg / μl) + Mellitus (70 μg / μl)
[Composition ratio = 1: 2: 7] 17.59 ± 0.5517.59 ± 0.55 15.76 ± 0.4015.76 ± 0.40 16.13 ± 0.8216.13 ± 0.82 백작약 (20 ㎍/㎕) + 육계 (70 ㎍/㎕) + 오배자 (10 ㎍/㎕)
[조성비=2:7:1]Earl (20 μg / μl) + Broiler (70 μg / μl) + Gallnut (10 μg / μl)
[Composition ratio = 2: 7: 1] 12.35 ± 0.2512.35 ± 0.25 12.09 ± 0.3312.09 ± 0.33 12.50 ± 0.2112.50 ± 0.21 백작약 (10 ㎍/㎕) + 육계 (70 ㎍/㎕) + 오배자 (20 ㎍/㎕)
[조성비=1:7:2]Earl (10 μg / μl) + Broiler (70 μg / μl) + Mellitus (20 μg / μl)
[Composition ratio = 1: 7: 2] 13.65 ± 0.2213.65 ± 0.22 12.74 ± 0.1212.74 ± 0.12 13.72 ± 0.2313.72 ± 0.23

또한, 실시예 2의 추출물 중 가장 활성이 우수한 조건별 추출물(백작약 3, 육계 1, 오배자 1)에 대해 조성비율 별로 항균 실험을 수행하여, 조성비 별 항균 활성을 동일한 방법으로 측정하였다. 농도가 동일하게 100㎍/㎕로 맞추어진 세가지 용매추출물을 아래 각각의 조성비로 혼합한 후, 디스크당 20㎕를 로딩하였다.In addition, the antibacterial experiment was carried out for each composition ratio of the extracts according to the condition (Bakjak 3, broiler 1, 5 gall 1), the most excellent activity of the extract of Example 2, the antimicrobial activity of each composition ratio was measured by the same method. Three solvent extracts with the same concentrations of 100 μg / μl were mixed at the respective composition ratios below, followed by loading 20 μl per disc.

결과는 표 7과 같다.The results are shown in Table 7.

대상시료Target Sample 생육저지환Growth hypocrisy E. coli
(ATCC 25922) E. coli
(ATCC 25922) B. cereus (ATCC 14579) B. cereus (ATCC 14579) S. aureus (ATCC 25923) S. aureus (ATCC 25923) 카나마이신Kanamycin 20.81 ± 0.6020.81 ± 0.60 21.31 ± 0.3321.31 ± 0.33 21.81 ± 0.2721.81 ± 0.27 백작약 (33.3 ㎍/㎕) + 육계 (33.3 ㎍/㎕) + 오배자 (33.3 ㎍/㎕)
[조성비=1:1:1]Earl (33.3 μg / μl) + Broiler (33.3 μg / μl) + Mellitus (33.3 μg / μl)
[Composition ratio = 1: 1: 1] 16.34 ± 0.7216.34 ± 0.72 14.35 ± 0.2214.35 ± 0.22 13.90 ± 0.3313.90 ± 0.33 백작약 (60 ㎍/㎕) + 육계 (20 ㎍/㎕) + 오배자 (20 ㎍/㎕)
[조성비=3:1:1]Earl (60 μg / μl) + Broiler (20 μg / μl) + Mellitus (20 μg / μl)
[Composition ratio = 3: 1: 1] 15.72 ± 0.0915.72 ± 0.09 13.80 ± 0.1913.80 ± 0.19 13.31 ± 0.0813.31 ± 0.08 백작약 (20 ㎍/㎕) + 육계 (20 ㎍/㎕) + 오배자 (60 ㎍/㎕)
[조성비=1:1:3]Earl (20 μg / μl) + Broiler (20 μg / μl) + Mellitus (60 μg / μl)
[Composition ratio = 1: 1: 3] 19.06 ± 0.3519.06 ± 0.35 15.07 ± 0.2315.07 ± 0.23 15.02 ± 0.3015.02 ± 0.30 백작약 (20 ㎍/㎕) + 육계 (60 ㎍/㎕) + 오배자 (20 ㎍/㎕)
[조성비=1:3:1]Earl (20 μg / μl) + Broiler (60 μg / μl) + Mellitus (20 μg / μl)
[Composition ratio = 1: 3: 1] 16.20 ± 0.2816.20 ± 0.28 13.60 ± 0.2313.60 ± 0.23 13.24 ± 0.6013.24 ± 0.60 백작약 (70 ㎍/㎕) + 육계 (10 ㎍/㎕) + 오배자 (20 ㎍/㎕)
[조성비=7:1:2]Earl (70 μg / μl) + Broiler (10 μg / μl) + Mellitus (20 μg / μl)
[Composition ratio = 7: 1: 2] 16.26 ± 0.4316.26 ± 0.43 13.73 ± 0.1113.73 ± 0.11 13.57 ± 0.0813.57 ± 0.08 백작약 (70 ㎍/㎕) + 육계 (20 ㎍/㎕) + 오배자 (10 ㎍/㎕)
[조성비=7:2:1]Earl (70 μg / μl) + Broiler (20 μg / μl) + Mellitus (10 μg / μl)
[Composition ratio = 7: 2: 1] 15.08 ± 0.7615.08 ± 0.76 13.49 ± 0.2913.49 ± 0.29 13.06 ± 0.3513.06 ± 0.35 백작약 (20 ㎍/㎕) + 육계 (10 ㎍/㎕) + 오배자 (70 ㎍/㎕)
[조성비=2:1:7]Earl (20 μg / μl) + Broiler (10 μg / μl) + Mellitus (70 μg / μl)
[Composition ratio = 2: 1: 7] 19.09 ± 0.2719.09 ± 0.27 16.14 ± 0.3016.14 ± 0.30 15.80 ± 0.3815.80 ± 0.38 백작약 (10 ㎍/㎕) + 육계 (20 ㎍/㎕) + 오배자 (70 ㎍/㎕)
[조성비=1:2:7]Earl (10 μg / μl) + Broiler (20 μg / μl) + Mellitus (70 μg / μl)
[Composition ratio = 1: 2: 7] 19.16 ± 0.6319.16 ± 0.63 15.49 ± 0.5515.49 ± 0.55 15.84 ± 0.1815.84 ± 0.18 백작약 (20 ㎍/㎕) + 육계 (70 ㎍/㎕) + 오배자 (10 ㎍/㎕)
[조성비=2:7:1]Earl (20 μg / μl) + Broiler (70 μg / μl) + Gallnut (10 μg / μl)
[Composition ratio = 2: 7: 1] 14.23 ± 0.5014.23 ± 0.50 12.94 ± 0.1912.94 ± 0.19 13.00 ± 0.3213.00 ± 0.32 백작약 (10 ㎍/㎕) + 육계 (70 ㎍/㎕) + 오배자 (20 ㎍/㎕)
[조성비=1:7:2]Earl (10 μg / μl) + Broiler (70 μg / μl) + Mellitus (20 μg / μl)
[Composition ratio = 1: 7: 2] 14.60 ± 0.2514.60 ± 0.25 13.35 ± 0.3013.35 ± 0.30 13.64 ± 0.5513.64 ± 0.55

상기 표 6 및 7은 세 추출물을 혼합하여 사용하는 것이 단독 추출물보다 모든 검정균에 대해 탁월한 항균력을 가지고, 특히 조성비가 백작약 : 육계 : 오배자 = 1:1:3, 2:1:7, 또는 1:2:7 일 때, 항균 활성이 더욱 우수함을 보여준다. 특히 조건별 혼합추출물 중 백작약(3번): 육계(1번): 오배자(1번) = 2:1:7 일 때 항균 활성이 더욱 뛰어나 추후 실험은 이와 같은 조건으로 진행하였다.
Tables 6 and 7 above have a superior antimicrobial activity against all assays compared to the use of three extracts in combination, in particular the composition ratio of Baekjak: broiler: fivefold: 1: 1: 3, 2: 1: 7, or 1 At 2: 2, the antimicrobial activity is better. Particularly, among the mixed extracts according to the condition, Baekjak (No. 3): Broiler (No. 1): Ginseng (No. 1) = 2: 1: 7 when the antibacterial activity was more excellent, further experiments were conducted under these conditions.

<< 실험예Experimental Example 2> 최소저해농도( 2> minimum inhibitory concentration ( MinimumMinimum InhibitoryInhibitory Concentration,  Concentration, MICMIC ) 측정) Measure

실험예 1의 백작약, 육계, 오배자 혼합추출물(백작약(3번): 육계(1번): 오배자(1번) = 2:1:7)의 최소저해농도(Minimum Inhibitory Concentration, MIC)를 2배 희석법으로 평가하였다. 시험균이 생장하지 않은 상태에서 추출물이 함유하고 있는 고유의 색상을 스탠다드로 설정하여 OD 값을 측정하고, 시험균이 생장한 이후의 OD값을 측정하여 차감함으로써 정확한 최소억제농도를 설정하였다 [최종 OD값 - 스탠다드 OD값]. 최종적으로 측정된 OD 600 값을 One-way ANOVA(Dunnett법)로 통계 처리하여 비교분석 하였다. 실험 결과를 표 8에 나타내었다.Two times the minimum Inhibitory Concentration (MIC) of Baekjak, Broiler, and Ginseng Mixture Extract (Baekak (No. 3): Broiler (No. 1): Growja (No. 1) = 2: 1: 7) Evaluation was by dilution method. When the test bacteria were not grown, the OD value was measured by setting the intrinsic color of the extract as a standard, and the exact minimum inhibitory concentration was set by measuring and subtracting the OD value after the test bacteria were grown. OD value-standard OD value]. Finally, the measured OD 600 values were analyzed by statistical analysis with One-way ANOVA (Dunnett method). The experimental results are shown in Table 8.

대상시료Target Sample 최소억제농도 (μg/Inhibitory concentration (μg / mLmL )) E. coli
(ATCC 25922) E. coli
(ATCC 25922) B. cereus
(ATCC 14579) B. cereus
(ATCC 14579) S. aureus
(ATCC 25923) S. aureus
(ATCC 25923) 백작약, 육계, 오배자 혼합추출물

Count, broiler, gall bladder extract

< 100<100 < 50<50 < 50<50

혼합추출물의 그람음성균인 E. coli 에 대한 최소억제농도는 100 μg/mL, 그람양성균인 B. cereus 와 S. aureus 에 대한 최소억제농도는 50 μg/mL로 평가되었다.
The minimum inhibitory concentration for the gram-negative bacteria E. coli was 100 μg / mL and the minimum inhibitory concentration for the gram-positive bacteria B. cereus and S. aureus was 50 μg / mL.

<< 실험예Experimental Example 3> 3> 항산화 효능 시험Antioxidant efficacy test

실험예 1의 혼합추출물(백작약(3번): 육계(1번): 오배자(1번) = 2:1:7)의 항산화 효능을 DPPH assay를 이용한 라디칼 소거능력으로 평가하였다. 결과를 도 2에 나타내었다. 0.05 mg/mL의 농도에서 라디컬 소거능력이 포화상태를 보였고, 대체적으로 저농도에서 라디컬 소거능력이 탁월함을 알 수 있었다.Antioxidant efficacy of the mixed extract of the Experimental Example 1 (Baekjak (No. 3): Broiler (No. 1): Ginseng (No. 1) = 2: 1: 7) was evaluated by radical scavenging ability using DPPH assay. The results are shown in FIG. The radical scavenging ability was saturated at the concentration of 0.05 mg / mL, and the radical scavenging ability was excellent at low concentration.

추가적으로 혼합추출물의 항산화 능력을 확인하기 위해 세포실험을 수행하였다. 하이드로퍼옥사이드(H2O2)를 이용하여 세포 내 직접적인 산화적 손상을 야기한 후, 혼합추출물의 산화적 손상 회복 능력을 MTT assay를 이용한 세포생존율 비교를 통해 평가하였다. 그 결과는 도 2에 나타낸 바와 같다. 하이드로퍼옥사이드 처리군의 세포생존율이 약 17%인데 비해, 하이드로퍼옥사이드 전처리 후 혼합추출물 처리군의 세포생존율은 최대 45%로 약 28%정도 세포생존율이 증가함을 보였다.
In addition, a cell experiment was performed to confirm the antioxidant capacity of the mixed extract. After inducing direct oxidative damage in cells using hydroperoxide (H 2 O 2 ), the oxidative damage recovery ability of the mixed extract was evaluated by comparing cell viability using MTT assay. The result is as shown in FIG. The cell viability of the hydroperoxide treatment group was about 17%, whereas the cell viability of the mixed extract treatment group after hydroperoxide pretreatment was up to 45%, increasing cell survival by 28%.

<< 실험예Experimental Example 4> 4> 세포독성 실험Cytotoxicity Experiment

실험예 1의 혼합추출물(백작약(3번): 육계(1번): 오배자(1번) = 2:1:7)의 세포독성효과를 정상세포인 Mouse Embryonic Fibroblast (MEF) cells을 이용한 세포 생존능력 분석법(cell viability assay)으로 평가하였다. Cytotoxic Effects of Experimental Example 1 Mixed Extracts (Early Root (No. 3): Broiler (No. 1): Broiler (No. 1) = 2: 1: 7) Cell Survival Using Mouse Embryonic Fibroblast (MEF) Cells It was evaluated by the cell viability assay.

그 결과를 도 3에 나타내었다. 대조군과 비교했을 때, 농도의존적으로 약간의 독성을 나타내지만 그 효과가 미약함을 확인할 수 있다.
The results are shown in Fig. Compared with the control group, it shows a slight toxicity depending on the concentration, but the effect is weak.

<< 실험예Experimental Example 5> 5> 항암 효과 실험Anticancer effect experiment

　실험예 1의 혼합추출물(백작약(3번): 육계(1번): 오배자(1번) = 2:1:7)의 항암효능을 2가지 암세포 (HepG2 cells: 간암, AGS cells: 위암)를 이용하여 MTT assay로 평가하였다. The anticancer efficacy of the mixed extract of Experimental Example 1 (counter (No. 3): broiler (No. 1): fivefold (No. 1) = 2: 1: 7) was investigated. Was evaluated by MTT assay.

그 결과를 도 4에 나타내었다. 혼합추출물이 2가지 암세포 모두에 대해서 농도의존적으로 생존율을 감소시키며, 항암효능이 탁월함을 확인할 수 있었다. 특히 간암세포에서는 1.0 mg/mL의 농도로, 위암세포에서는 0.5 mg/mL의 농도로 70% 이상 암세포의 생존율을 감소시키는 것을 확인하였다.The results are shown in FIG. The mixed extract reduced the survival rate of both cancer cells in a concentration-dependent manner, and the anticancer efficacy was confirmed to be excellent. In particular, it was confirmed that at the concentration of 1.0 mg / mL in liver cancer cells and 0.5 mg / mL in gastric cancer cells, the survival rate of cancer cells was reduced by 70% or more.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시예일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
Having described the specific parts of the present invention in detail, it will be apparent to those skilled in the art that such specific descriptions are merely preferred embodiments, and thus the scope of the present invention is not limited thereto. will be. Accordingly, the actual scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.

Claims (9)

백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물로 이루어진 식품 보존제.
Food preservative consisting of earl extract, broiler extract and gall bladder extract.
제1항에 있어서,
상기 식품 보존제는 동일 농도의 백작약 추출물 1 내지 2 중량부, 육계 추출물 1 내지 2 중량부 및 오배자 추출물 3 내지 8 중량부를 포함하는 것인 식품 보존제.
The method of claim 1,
The food preservative is a food preservative comprising 1 to 2 parts by weight of Baekjak extract, 1 to 2 parts by weight of broiler extract and 3 to 8 parts by weight of gall bladder extract.
제1항에 있어서,
상기 백작약 추출물, 육계 추출물 및 오배자 추출물은 식품 보존제 100 중량부 대비 0.001 내지 30 중량부로 포함된 것인 식품 보존제.
The method of claim 1,
Wherein the earl extract, broiler extract and gallja extract is contained in 0.001 to 30 parts by weight relative to 100 parts by weight of food preservatives.
백작약, 육계 및 오배자 각각과 용매를 혼합하여 50 내지 90℃에서 30분 내지 200분 동안 백작약, 육계 및 오배자를 가열 추출하는 단계;
각각을 여과한 후 20 내지 80℃ 에서 60 내지 200분 동안 감압 농축하는 단계;
이를 동결건조 하는 단계; 및
각각의 추출물의 농도를 동일하게 하고, 이를 혼합하는 단계를 포함하는 제1항의 식품 보존제의 제조방법.
Mixing each of the white peony, broiler, and gallnut with a solvent to heat-extract the white peony, broiler and alleggella at 50 to 90 ° C. for 30 to 200 minutes;
Filtering each and concentrating under reduced pressure at 20 to 80 ° C. for 60 to 200 minutes;
Lyophilizing it; And
The method of preparing a food preservative of claim 1 comprising the step of equalizing the concentration of each extract, and mixing them.
제4항에 있어서,
상기 백작약 가열 추출단계의 용매는 80 내지 100vol% 알코올 수용액이고, 온도는 50 내지 75℃, 시간은 60분 내지 200분인 것을 특징으로 하는 식품 보존제의 제조방법.
The method of claim 4, wherein
The solvent of the Baekjak heat extraction step is an aqueous solution of 80 to 100 vol% alcohol, the temperature is 50 to 75 ℃, the time is 60 minutes to 200 minutes.
제4항에 있어서,
상기 육계 가열 추출단계의 용매는 알코올 수용액이고, 온도는 50 내지 75℃, 시간은 60분 내지 200분인 것을 특징으로 하는 식품 보존제의 제조방법.
The method of claim 4, wherein
The solvent of the broiler heat extraction step is an aqueous alcohol solution, the temperature is 50 to 75 ℃, the time is 60 minutes to 200 minutes.
제4항에 있어서,
상기 오배자 가열 추출단계의 용매는 물, 알코올 또는 물과 알코올의 혼합 용매인 것을 특징으로 하는 식품 보존제의 제조방법.
The method of claim 4, wherein
The solvent of the heating step 5 extraction step is a method of producing a food preservative, characterized in that water, alcohol or a mixed solvent of water and alcohol.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 식품 보존제를 식품 제조 공정시 원료와 함께 배합하는 단계를 포함하는 식품 보존 방법.
A food preservation method comprising the step of combining the food preservative of any one of claims 1 to 3 with the raw material in the food manufacturing process.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 식품 보존제를 식품에 처리하는 단계를 포함하는 식품 보존 방법.A food preservation method comprising the step of treating the food preservative of any one of claims 1 to 3.
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