KR101131224B1 - Coumarin compounds from Corydalis heterocarpa and Anticancer composition containing the same - Google Patents

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Abstract

본 발명에서는 염주괴불주머니 유래 하기 화학식 1의 쿠마린계화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방, 치료 또는 억제용 약학 조성물을 제공한다.The present invention provides a coumarin-based compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and a pharmaceutical composition for preventing, treating or inhibiting cancer containing the same as an active ingredient.

<화학식 1><Formula 1>

Figure 112009062398887-pat00001
Figure 112009062398887-pat00001

상기 식에서, R은

Figure 112009062398887-pat00002
또는 SO3H이다.Where R is
Figure 112009062398887-pat00002
Or SO 3 H.

염주괴불주머니, 항암, 쿠마린계 화합물 Ingot fire bag, anticancer, coumarin compound

Description

염주괴불주머니 유래 쿠마린계 화합물, 및 이를 함유하는 항암용 조성물{Coumarin compounds from Corydalis heterocarpa and Anticancer composition containing the same}Coumarin compounds derived from beads ingot bag, and anti-cancer composition containing same {Coumarin compounds from Corydalis heterocarpa and Anticancer composition containing the same}

본 발명은 염주괴불주머니 유래 쿠마린계 화합물, 및 이를 함유하는 항암용 조성물에 관한 것으로 보다 구체적으로는 염주괴불주머니 유래 하기 화학식 1의 쿠마린계화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방, 치료 또는 억제용 약학 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a coumarin-based compound derived from ingot fire bag, and an anticancer composition containing the same. More specifically, the coumarin-based compound represented by Formula 1 below or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and the same as an active ingredient It relates to a pharmaceutical composition for the prevention, treatment or inhibition of cancer containing.

<화학식 1><Formula 1>

Figure 112009062398887-pat00003
Figure 112009062398887-pat00003

상기 식에서, R1은

Figure 112009062398887-pat00004
또는 SO3H이다.Wherein R 1 is
Figure 112009062398887-pat00004
Or SO 3 H.

산업 혁명 이후의 빠른 경제 성장은 인간의 삶에 물질적인 풍요로움을 가져다 주었지만 무분별한 개발로 인하여 자연환경의 파괴를 비롯하여 인간의 생활환경에 큰 변화를 가져왔다. 현대인들은 각종 공해에 노출된 환경에서 정신적인 스트레스를 받으며 다양한 질병의 공격 대상이 되었다. 또한 육류와 인스턴트 중심의 서양식 식생활과 각종 화학물질, 식품 첨가물 및 가공식품이 증가된 식습관은 심장병, 고혈압, 암, 당뇨병 등의 각종 성인병의 원인이 되었다. 이와 관련하여 식생활의 변화에 따른 각종 질병에 관한 연구가 활발히 진행되어 특히, 암에 의한 사망률은 1990년 이후 지속적으로 감소되고 있다. Rapid economic growth after the Industrial Revolution brought material abundance to human life, but indiscriminate development has led to major changes in the human living environment, including the destruction of the natural environment. Modern man has been mentally stressed in the environment exposed to various pollution and has been the target of various diseases. In addition, meat and instant-oriented Western diets and diets with increased chemicals, food additives and processed foods contributed to various adult diseases such as heart disease, high blood pressure, cancer and diabetes. In this regard, studies on various diseases caused by changes in diet have been actively conducted, and in particular, the mortality rate from cancer has been continuously decreasing since 1990.

하지만 2008년에 미국 암협회(American Cancer Society)에서 조사한 바에 따르면 2008년 미국 내에서만 약 144만명의 새로운 암환자가 발생되었으며, 암에 인한 사망자 수가 약 57만에 이르렀다. 또한 2005년 미국 내 주요 사망 원인 통계에서 1위가 전체 사망률의 26.6%를 차지하는 심장질환이었으며, 뒤이어 암이 22.8%의 사망률을 보일 정도로 큰 비중을 차지하고 있었다. 우리나라 역시 서구화에 따라 매년 암발병율이 증가하고 있으며 고령화 혹은 아동 성인병 등에 따른 각종 암의 위험에 노출되어 있는 것으로 보인다. However, in 2008, the American Cancer Society found that in 2008 there were about 1.44 million new cancer cases in the United States alone, killing about 570,000 people. In 2005, the number 1 leading cause of death in the United States was heart disease, which accounted for 26.6% of all deaths, followed by cancer, which accounted for 22.8% of deaths. In Korea, the incidence of cancer is increasing every year due to westernization, and it seems to be exposed to various cancer risks due to aging or child adult disease.

최근 들어 이러한 이유에서 암이나 심혈관계 질환을 치료하고 예방하려는 연구가 활발히 진행되고 있으며, 일환으로 치료에 따른 부작용을 줄일 수 있는 천연물 유래의 신규 생리활성물질 개발에 대한 연구가 관심이 되고 있다. 특히, 해양생물자원의 중요성에 대한 인식이 높아짐에 따라 해양생물을 이용한 새로운 생리활성물질의 개발이 증가되고 있으며, 그 가운데 해수와 민물이 섞이는 극한 환경에 서식하는 염생식물이 이에 적합한 적응기작을 발전시켜 독특한 생리활성물질을 지니고 있을 가능성이 기대되고 있다. Recently, researches for treating and preventing cancer and cardiovascular diseases have been actively conducted for these reasons, and as a part, researches on the development of new bioactive substances derived from natural products that can reduce side effects of treatment are of interest. In particular, as the awareness of the importance of marine biological resources increases, the development of new bioactive substances using marine organisms is increasing, and among them, salt plants living in extreme environments where seawater and fresh water are mixed to develop adaptive mechanisms. It is expected to have unique bioactive substances.

염생식물의 일종인 염주괴불주머니(Corydalis heterocarpa)는 한국의 곳곳에서 자생하는 노란 꽃이 피는 두해살이 식물로서, 조간대에서 매우 중요한 생태적 위치를 차지하고 있으나 지금까지 염주괴불주머니로부터 이차 대사산물의 분리나 유용한 생약학적 특성이 보고된 적이 없다. 그러나 염주괴불주머니는 오랫동안 산모의 진통이나 경련의 치료제로 사용되었으며 같은 속의 다른 식물에서는 다양한 이차 대사산물이 보고된 바 있다.Corydalis heterocarpa, a salt plant, is a biennial plant that grows yellow flowers in Korea and occupies a very important ecological location in intertidal zones. No scientific characteristics have been reported. However, ingot bags have long been used for the treatment of maternity pain and cramps, and various secondary metabolites have been reported in other plants of the same genus.

예를 들어, 자주괴불주머니의 지상부에서 6가지의 벤조[c]페난트리딘알칼로이드류인 코리놀린, 아세틸코리놀린, 코리놀록신, 루긴, 6-옥소코리놀린, 및 12-하이드록시코리놀록신이 분리된 바 있다.For example, six benzo [c] phenanthridine alkaloids, corinoline, acetylcholinolin, corinoloxin, lugin, 6-oxocorinoline, and 12-hydroxycorinoroxine, are isolated from the ground portion of the bag. It has been.

이에 본 발명에서는 염주괴불주머니를 이용하여 생리활성물질에 의한 발암물질의 생성방지 및 생체방어물질로서의 유용성, 또한 항암 생리활성물질 탐색하고 본 발명에 이르게 되었다. Therefore, in the present invention, using the ingot fire bag prevents the generation of carcinogens by the bioactive substance and usefulness as a bio-defense substance, and also explored the anti-cancer bioactive substance and led to the present invention.

따라서 본 발명의 목적은 염주괴불주머니 추출물, 그로부터 유래한 신규 쿠마린계 화합물 및 이들 유효성분으로 함유하는 암의 예방, 치료 또는 억제용 약학 조성물을 제공하는 것이다. Accordingly, it is an object of the present invention to provide an ingot fire bag extract, a novel coumarin-based compound derived therefrom, and a pharmaceutical composition for preventing, treating or inhibiting cancer containing these active ingredients.

상기와 같은 본 발명의 목적은 염주괴불주머니에서 6종의 쿠마린 계열의 화합물을 분리하고, 이를 이용하여 AGS 인체 위암세포, HT-29 인체 결장암세포, HT1080 인체 섬유육종 세포, MCF-7 인체 유방암세포 및 U-937 인체 구성 림프종 세포에 대한 인체암세포 증식 억제 효과를 검토하고, 6종의 화합물을 AGS 인체 위암세포에 각각 처리하여 아폽토시스와 관련된 여러 유전자의 mRNA 발현 정도를 확인함으로써 달성되었다. The object of the present invention as described above is to isolate six coumarin-based compounds in the ingot bag, using the AGS human gastric cancer cells, HT-29 human colon cancer cells, HT1080 human fibrosarcoma cells, MCF-7 human breast cancer cells And the effect of inhibiting human cancer cell proliferation on U-937 human constitutive lymphoma cells, and six compounds were treated with AGS human gastric cancer cells, respectively, to determine the mRNA expression levels of various genes related to apoptosis.

본 발명은 염주괴불주머니(Corydalis heterocarpa) 유래 하기 화학식 1의 쿠마린계 화합물 또는 이의 약제힉적으로 허용가능한 염을 제공한다.The present invention provides a coumarin-based compound of formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof derived from Corydalis heterocarpa.

<화학식 1><Formula 1>

Figure 112009062398887-pat00005
Figure 112009062398887-pat00005

상기 식에서, R은

Figure 112009062398887-pat00006
또는 SO3H이다.Where R is
Figure 112009062398887-pat00006
Or SO 3 H.

본 발명에 따른 상기 화학식 1의 쿠마린 계 화합물은 다음과 같이 제조된다.Coumarin-based compound of Formula 1 according to the present invention is prepared as follows.

우선, 염주괴불주머니를 분쇄하여 메틸렌 클로라이드 용매로 추출하고, 용매를 걸러낸 후 남은 잔사에 MeOH 용매를 넣고 동일과정으로 반복 추출하여 조추출물을 얻는다. 상기 조추출물을 n-헥산, 85% aq.MeOH, n-BuOH, H2O용매로 순차적으로 분획하여 각각의 분획물을 얻는다. 상기 분획물 중 85% aq. MeOH 분획물을 역상크로마토그래피하여 총 6개의 분획을 얻었는다. 이들 중 분획 1로부터 실리카겔 예비 TLC를 이용하여 화합물 1을 분리하고 분획 3을 역상 HPLC하여 화합물 2를 얻었다. 또한 분획 4를 예비 TLC 및 역상 HPLC하여 화합물 3과 4를 획득한다.First, the ingot fire bag is pulverized and extracted with methylene chloride solvent, the solvent is filtered off, MeOH solvent is added to the remaining residue, and the extract is repeatedly extracted in the same process to obtain a crude extract. The crude extract was partitioned sequentially with n -hexane, 85% aq. MeOH, n- BuOH, H 2 O solvent to obtain respective fractions. 85% aq. MeOH fractions were reverse phase chromatographed to give a total of 6 fractions. Compound 1 was isolated from fraction 1 using silica gel preparative TLC, and fraction 3 was subjected to reverse phase HPLC to obtain compound 2 . Fraction 4 was also subjected to preparative TLC and reverse phase HPLC to afford compounds 3 and 4 .

이어서 n-BuOH 분획물을 역상크로마토그래피하여 6개의 분획을 얻고, 분획 1을 Si 겔 컬럼 코로마토그래피하여 총 9개의 하위분획을 얻는다. 이들 중 하위분 획 3을 예비 TLC하여 화합물 5를 분리하고, 하위분획 4를 순차적으로 예비 TLC 및 역상 HPLC하여 화합물 6 (5.7 mg)을 얻는다.The n-BuOH fractions are then reverse phase chromatographed to give six fractions, and fraction 1 is Si gel column chromatography to obtain a total of nine subfractions. Of these, subfraction 3 is preliminarily TLC to separate compound 5 , and subfraction 4 is sequentially preliminary TLC and reverse phase HPLC to give compound 6 (5.7 mg).

상기에서 분리된 화합물 1 내지 6의 구조는 분광학적 데이터와 문헌 조사를 통해 결정하여, 그 결과를 하기에 화학식 2로 나타내었다. The structures of the compounds 1 to 6 isolated above were determined by spectroscopic data and literature studies, and the results are shown by the following formula (2).

<화학식 2> <Formula 2>

Figure 112009062398887-pat00007
Figure 112009062398887-pat00007

상기 식에서, R2는 H,

Figure 112009062398887-pat00008
,
Figure 112009062398887-pat00009
,
Figure 112009062398887-pat00010
, Glu, 또는 SO3H이다.Wherein R2 is H,
Figure 112009062398887-pat00008
,
Figure 112009062398887-pat00009
,
Figure 112009062398887-pat00010
, Glu, or SO 3 H.

이들 중 R2가

Figure 112009062398887-pat00011
또는 SO3H인 화합물이 본 발명에 따른 신규한 쿠마린계 화합물로 확인되었다.R2 of these
Figure 112009062398887-pat00011
Or a compound which is SO 3 H was identified as a novel coumarin compound according to the present invention.

본 발명에 따른 염주괴불주머니 유래 추출물, 상기 화학식 1의 쿠마린 계 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염은 위암, 결장암, 섬유육종, 유방암, 혈구암 등을 포함하는 각종 인체 암의 예방, 치료 또는 억제를 위한 약제 활성 성분으로 사용될 수 있다. Ingot-bulk-derived extract according to the present invention, the coumarin-based compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof may be used for the prevention, treatment or inhibition of various human cancers including gastric cancer, colon cancer, fibrosarcoma, breast cancer, blood cell cancer, etc. It can be used as a pharmaceutical active ingredient for.

본 발명에 따른 상기 화학식 1의 쿠마린 계 화합물은 약제학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 악제학적으로 허용가능한 염은 약제학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염을 포함한다. 상기 유리산으로는 무기산과 유기산을 모두 사용할 수 있으며, 사용되는 무기산은 염산, 브롬산, 황산 및 인산 등이 있으며, 사용되는 유기산은 구연산, 초산, 젖산, 말레인산, 우마린산, 글루콘산, 메탄술폰산, 글리콘산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 트리플루오로아세트산, 갈룩투론산, 엠본산, 글루탐산 및 아스파르트산 등이 있다. The coumarin-based compound of Formula 1 according to the present invention may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and the pharmaceutically acceptable salt includes an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid. . The inorganic acid and organic acid may be used as the free acid, and the inorganic acid used may include hydrochloric acid, bromic acid, sulfuric acid, and phosphoric acid, and the organic acid used may be citric acid, acetic acid, lactic acid, maleic acid, umarin acid, gluconic acid, and methane. Sulfonic acid, glyconic acid, succinic acid, 4-toluenesulfonic acid, trifluoroacetic acid, galluxuronic acid, embonic acid, glutamic acid and aspartic acid.

본 발명에 따른 상기 화학식 1의 쿠마린 계 화합물은 생체 내 흡수를 증진시키거나 용해도를 증가시키기 위한 방편으로 프로드럭의 형태를 만들어 사용할 수 있으며, 또한 수화물, 용매화물의 형태로 사용할 수도 있다. 예를 들어, 생체에 흡수된 후 쉽게 이탈될 수 있는 기를 붙이거나 염의 형태로 만들어 사용할 수 있으며, 이러한 염의 형태는 하나 혹은 하나 이상의 수화물이나 용매화물의 형태가 될 수 있으며, 상기의 프로드럭, 염의 수화물 또는 용매화물 역시 본 발명의 범위에 속한다. The coumarin-based compound of Formula 1 according to the present invention may be used in the form of a prodrug as a means for enhancing absorption in vivo or increasing solubility, and may also be used in the form of a hydrate or a solvate. For example, it may be used to form a group or form a salt that can be easily released after being absorbed by the living body, the salt may be in the form of one or more hydrates or solvates, and the prodrug, salt Hydrates or solvates are also within the scope of the present invention.

본 발명에 따른 치료학적 효과를 달성하는데 사용되는 염주괴불주머니 유래 추출물, 상기 화학식 1의 쿠마린 계 화합물, 그의 수화물, 그의 용매화물 및 그의 약학적으로 허용되는 염의 양은 물론 특정 화합물, 투여 방법, 치료할 대상, 및 치료할 질환에 따라 달라지며, 통상적인 의약의 투여량에 의존하나, 보다 바람직하게는 상기 화학식 1의 쿠마린 계 화합물의 유효투입량은 하루에 0.1 내지 10 ㎎/㎏(몸무게) 범위 내에서 투여된다. 또한 1일 유효투입량 범위 내에서 하루에 한번 또는 하루에 여러 번 나누어 투입한다. 또한, 제형에 따라 경구투여, 비경구투여(주사) 또는 국소 투여용 모두 가능하다. 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 경구투여 경우 기존의 모든 다양한 형태로 제조가능하며 예를 들어 정제, 분말제, 건조시럽, 씹을 수 있는 정제, 과립제, 츄잉정, 캡슐제, 연질캡슐제, 환제, 드링크제, 설하정 등의 여러 가지 형태로 존재할 수 있다. 본 발명에 따른 정제는 유효량으로 생체이용성이 있는 임의의 형태 또는 방식, 즉, 경구경로로 환자에게 투여될 수 있으며, 치료 또는 예방하려는 질병 상태의 특성, 질병의 단계, 및 그 밖의 관련 사정에 따라 적합한 투여 형태 또는 방식을 용이하게 선택할 수 있으며, 본 발명에 따른 조성물이 정제인 경우 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함할 수 있으며, 이러한 부형제의 비율 및 성질은 선택된 정제의 용해도 및 화학적 특성, 선택된 투여경로 및 표준 약제실무에 의해 결정될 수 있다.Ingot-bulk-derived extract, coumarin-based compound of Formula 1, its hydrate, solvate and pharmaceutically acceptable salt thereof, as well as the specific compound, method of administration, and the subject to be used, are used to achieve a therapeutic effect according to the present invention. And, depending on the disease to be treated, and depending on the dosage of a conventional medicine, more preferably the effective dosage of the coumarin-based compound of Formula 1 is administered in the range of 0.1 to 10 mg / kg (weight) per day . In addition, within the effective daily dose range, the dose is divided once a day or several times a day. In addition, depending on the formulation, both oral, parenteral (injection) or topical administration are possible. Oral administration of the pharmaceutical composition according to the present invention can be prepared in any of a variety of existing forms, for example tablets, powders, dry syrups, chewable tablets, granules, chewing tablets, capsules, soft capsules, pills, It can exist in various forms, such as drink, sublingual tablet, and the like. Tablets according to the present invention may be administered to a patient in any form or manner in which an effective amount is bioavailable, ie, by oral route, depending on the nature of the disease state to be treated or prevented, the stage of the disease, and other relevant circumstances. Suitable dosage forms or modes can be readily selected and the compositions according to the invention may comprise one or more pharmaceutically acceptable excipients, wherein the proportions and properties of such excipients may depend upon the solubility and chemical properties of the selected tablet, It can be determined by the route of administration chosen and standard drug practice.

본 발명은 염주괴불주머니 유래 추출물을 유효성분으로 함유하는 암의 예방, 치료 또는 억제용 약학 조성물을 제공한다. The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing, treating or inhibiting cancer containing an ingot fire bag-derived extract as an active ingredient.

본 발명은 상기 화학식 1의 쿠마린계 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방, 치료 또는 억제용 약학 조성물을 제 공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing, treating or inhibiting cancer containing the coumarin-based compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

또한 본 발명은 상기 화학식 2의 쿠마린계 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방, 치료 또는 억제용 약학 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a pharmaceutical composition for the prevention, treatment or inhibition of cancer containing the coumarin-based compound of Formula 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 발명에 있어서, 상기 암은 위암, 결장암, 섬유육종, 유방암 또는 혈구암 인 것을 특징으로 한다.In the present invention, the cancer is characterized in that the stomach cancer, colon cancer, fibrosarcoma, breast cancer or blood cell cancer.

본 발명에 있어서, “유효성분”이라 함은 내재된 약리작용에 의해 그 의약품의 효능?효과를 직접 또는 간접적으로 발현한다고 기대되는 물질 또는 물질군(약리학적 활성성분등이 밝혀지지 않은 생약 등을 포함한다)으로서 주성분을 포함하는 것을 의미한다.In the present invention, the term "active ingredient" refers to a substance or a group of substances (a pharmacologically active ingredient or the like, which is expected to express the efficacy or effect of the drug directly or indirectly by inherent pharmacological action. It means containing a main component).

또한 본 발명은 염주괴불주머니 추출물을 유효성분으로 함유하는 암 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention provides a health functional food composition for preventing or improving cancer containing an ingot fire bag extract as an active ingredient.

본 발명에서 정의되는 "건강기능식품"은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다."Health functional food" as defined in the present invention means a food manufactured and processed using raw materials or ingredients having functional properties useful for the human body according to the Health Functional Food Act No. 6767, and "functional" means a human body It means the ingestion for the purpose of obtaining a useful effect in health use such as nutrient control or physiological action on the structure and function of.

본 발명에 따른 염주괴불주머니 유래 쿠마린계 화합물은 인체 암세포에서 p53과 p21의 조절을 통해 Bax의 발현 증가 및 Bcl-2의 발현을 감소시킴으로써 아폽토시스를 유도하는 역할을 하여 암세포의 증식능 및 세포 자멸사에 영향을 미치는 효과가 있어, 본 발명은 염주괴불주머니 추출물 및 화합물을 이용한 유전자 단계 혹은 in vivo 단계의 생리활성 검증을 통해 항발암 활성을 가진 건강기능성 식품 및 의약품으로서의 개발할 수 있는 매우 유용한 발명인 것이다.Ingot bulge-derived coumarin-based compounds according to the present invention induces apoptosis by increasing Bax expression and reducing Bcl-2 expression through the regulation of p53 and p21 in human cancer cells, thereby affecting the proliferative capacity and apoptosis of cancer cells. The present invention is a very useful invention that can be developed as a health functional food and a drug having anti-carcinogenic activity through the verification of the biological activity of the genetic or in vivo step using the ingot fire bag extract and the compound.

이하에서 본 발명의 바람직한 실시형태를 실시예를 참고로 보다 구체적으로 설명한다. 하지만 본 발명의 범위가 이러한 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in more detail with reference to Examples. However, the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예 1 : 염주괴불주머니 추출물 및 분획물의 제조Example 1: Preparation of ingot fire bag extract and fractions

본 발명에서 사용한 염주괴불주머니 (Corydalis heterocarpa)는 2006년 7월 전라남도 무안군 현경면 해안가에서 직접 채집하였다. 채집한 시료는 응달에서 자연 건조한 후 추출하기 전까지 -25℃에서 냉동 보관하였다.The rosary ingot bag ( Corydalis heterocarpa ) used in the present invention was directly collected in July 2006 at the coast of Hyunhyeon -myeon, Muan-gun, Jeollanam-do. The collected samples were naturally dried in the shade and stored frozen at -25 ° C until extracted.

염주괴불주머니를 추출 직전 분쇄하여 메틸렌 클로라이드 용매에 충분히 잠기게 한 후 24시간 동안 2회에 걸쳐 추출을 하고, 용매를 걸러낸 후 남은 잔사에 MeOH 용매를 넣고 동일과정으로 반복 추출하여 모두 41.1 g의 조추출물을 얻었다. 얻어진 조추출물은 용매의 극성에 따라 순차적으로 분획하여 n-헥산, 85% aq.MeOH, n-BuOH, H2O용매 분획물을 얻었으며, 진공증발기(EYELA, N-N series)로 농축하여 각 각 7.3 g, 12.0 g, 4.3 g, 20.0 g이 순서대로 얻어졌다. The salt ingot bag was pulverized immediately before extraction to be immersed in a methylene chloride solvent, and then extracted twice for 24 hours. After filtering the solvent, MeOH solvent was added to the remaining residue, and the mixture was repeatedly extracted. A crude extract was obtained. The crude extracts were fractionated sequentially according to the polarity of the solvent to obtain n-hexane, 85% aq.MeOH, n- BuOH, H 2 O solvent fractions, each concentrated by vacuum evaporator (EYELA, NN series) 7.3 g, 12.0 g, 4.3 g, and 20.0 g were obtained in order.

85% aq. MeOH (7.0 g) 분획물은 역상크로마토그래피 (C18reversed-phasevacuumflashchromatography)를 이용하여 총 6개의 분획을 얻었으며, 각각에 사용된 용매는 50, 60, 70, 80, 90% aq. MeOH, 및 100% MeOH 였다. 이들 중 분획 1을 실리카겔 예비 TLC (10% MeOH in CH2Cl2)를 이용하여 화합물 1 (329.1 mg)을 분리하였으며, 분획 3은 65% aq. MeOH과 67% aq. AcCN의 이동상으로 순차적으로 역상 HPLC (YMC ODS-A, 1 cm x 25 cm, S-5 ㎛, 2 mL/min)를 수행하여 화합물 2 (14.9 mg)를 얻었다. 분획 4는 예비 TLC (Si gel, 0.5 mm, 100% CH2Cl2) 및 역상 HPLC (YMC ODS-A, 75%aq. MeOH)를 차례로 수행하여 화합물 3 (63.8 mg)과 4 (146.9 mg)를 획득하였다.85% aq. MeOH (7.0 g) fractions were obtained in total 6 fractions using C 18 reversed-phasevacuum flashchromatography, each solvent was 50, 60, 70, 80, 90% aq. MeOH, and 100% MeOH. Compound 1 (329.1 mg) was isolated from fraction 1 using silica gel preparative TLC (10% MeOH in CH 2 Cl 2 ), and fraction 3 was 65% aq. MeOH and 67% aq. Reverse phase HPLC (YMC ODS-A, 1 cm × 25 cm, S-5 μm, 2 mL / min) was carried out sequentially with the mobile phase of AcCN to give compound 2 (14.9 mg). Fraction 4 was subjected to preparative TLC (Si gel, 0.5 mm, 100% CH 2 Cl 2 ) and reverse phase HPLC (YMC ODS-A, 75% aq. MeOH) in sequence to give Compounds 3 (63.8 mg) and 4 (146.9 mg) Obtained.

n-BuOH (2.2 g) 분획물 또한 85% aq. MeOH 분획물과 동일한 방법으로 역상크로마토그래피를 수행하여 6개의 분획을 얻었으며, 분획 1을 Si 겔 컬럼 코로마토그래피(0, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 70, 및 100% MeOH in CHCl3)하여 총 9개의 하위분획을 얻었다. 이들 중 하위분획 3을 예비 TLC (Si gel, 0.5 mm, EtOAc:MeOH:H2O(30:5:4))를 통해 화합물 5 (4.7mg)를 분리하였으며, 하위분획 4는 순차적으로 예비 TLC (Si gel, 0.5 mm, EtOAc:MeOH:H2O(23:4:3)) 및 역상 HPLC (YMC ODS-A, 30% aq. MeOH)를 통해 화합물 6 (5.7 mg)을 얻었다. n-BuOH (2.2 g) fraction was also 85% aq. Reverse phase chromatography was performed in the same manner as the MeOH fraction to obtain 6 fractions, and fraction 1 was subjected to Si gel column chromatography (0, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 70, and 100% MeOH in CHCl 3 ) to obtain a total of 9 subfractions. Of these, subfraction 3 was separated compound 5 (4.7 mg) by preparative TLC (Si gel, 0.5 mm, EtOAc: MeOH: H 2 O (30: 5: 4)), and subfraction 4 was sequentially prepared by preliminary TLC. (Si gel, 0.5 mm, EtOAc: MeOH: H 2 O (23: 4: 3)) and reverse phase HPLC (YMC ODS-A, 30% aq. MeOH) gave compound 6 (5.7 mg).

상기에서 분리된 화합물 1 내지 6의 구조는 분광학적 데이터와 문헌 조사를 통해 결정하였으며, 그 결과를 하기에 화학식 2로 나타내었다. The structures of the compounds 1 to 6 isolated above were determined by spectroscopic data and literature studies, and the results are shown by the following formula (2).

<화학식 2> <Formula 2>

Figure 112009062398887-pat00012
Figure 112009062398887-pat00012

상기 식에서, R2는 H,

Figure 112009062398887-pat00013
,
Figure 112009062398887-pat00014
,
Figure 112009062398887-pat00015
, Glu, 또는 SO3H이다.Wherein R2 is H,
Figure 112009062398887-pat00013
,
Figure 112009062398887-pat00014
,
Figure 112009062398887-pat00015
, Glu, or SO 3 H.

상기 화학식 2의 화합물에 있어서, R2에 따라 H(화합물 1),

Figure 112009062398887-pat00016
(화합물 2),
Figure 112009062398887-pat00017
(화합물 3),
Figure 112009062398887-pat00018
(화합물 4), Glu(화합물 5) 및 SO3H(화합물 6)이다.In the compound of Formula 2, according to R2 H (Compound 1 ),
Figure 112009062398887-pat00016
(Compound 2 ),
Figure 112009062398887-pat00017
(Compound 3 ),
Figure 112009062398887-pat00018
(Compound 4 ), Glu (Compound 5 ) and SO 3 H (Compound 6 ).

이들 중 R2가

Figure 112009062398887-pat00019
또는 SO3H인 화합물 4 및 6이 본 발명에 따른 신규한 쿠마린계 화합물로 확인되었다.R2 of these
Figure 112009062398887-pat00019
Or compounds 3 and 6 which are SO 3 H were identified as novel coumarin compounds according to the invention.

각 화합물은 디메틸 술폭사이드(DMSO)에 희석하여 실험에 사용하였다. Each compound was diluted in dimethyl sulfoxide (DMSO) and used for the experiment.

실험예 Experimental Example

1. 사용재료1. Material used

세포 배양에 필요한 DMEM 배지(Dulbeco’s modified Eagle medium)는 시그마사(Sigma, USA)에서 구입하였고, RPMI 1640, FBS(Fetal bovine serum), 0.05% Trypsin-0.02% EDTA 그리고 100 units/mL 페니실린-스트렙토마이신과 PBS(phosphate buffered saline)는 깁코사(GIBCO, (USA)로부터 구입하였다. 암세포의 세포 독성 실험에 사용한 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide)시약은 시그마 케미칼사(Sigma Chemical Co.; St Louis, MO, USA)로부터 구입하였으며, 그 외 연구에 사용된 용매 및 시약은 모두 특급 또는 일급을 사용하였다.DMEM medium (Dulbeco's modified Eagle medium) for cell culture was purchased from Sigma, USA, RPMI 1640, Fetal bovine serum (FBS), 0.05% Trypsin-0.02% EDTA and 100 units / mL penicillin-streptomycin And PBS (phosphate buffered saline) were purchased from Gibco, (USA) MTT (3- [4,5-dimethylthiazol-2-yl] -2,5-diphenyl tetrazolium bromide used for cytotoxicity studies of cancer cells. Reagents were purchased from Sigma Chemical Co. (St Louis, MO, USA), and the solvents and reagents used in the other studies were all made by express or first class.

2. 세포배양2. Cell Culture

본 실험예에 사용한 암세포주인 AGS 인체 위암세포 (AGS human gastric cancer cell), HT-29 인체 결장암세포 (HT-29 human colon cancer cell), HT1080 인체 섬유육종 세포 (HT1080 human fibrosarcoma cell), MCF-7 인체 유방암세포 (MCF-7 human breast cancer cell), U-937 인체 혈구암 세포 (U-937 human histocytic lymphoma cell)는 세포주 은행 (서울의대)으로부터 분양 받아 배양하면 서 실험에 사용하였다. AGS, HT-29, U-937 세포의 경우 100 units/mL의 페니실린-스트렙토마이신과 10%의 FBS가 함유된 RPMI 1640을 사용하였고, HT1080와 MCF-7세포는 100 units/mL의 페니실린-스트렙토마이신과 10%의 FBS가 함유된 DMEM 배양액을 사용하였으며, 세포 배양 디쉬를 이용하여 37℃, 5% CO2 배양기(FormaScientific, Japan)에서 배양하였다. 배양된 각각의 암세포는 일주일에 2-3회 재공급(refeeding)하고 6-7일 만에 PBS로 세척한 후 0.05% Trypsin-0.02% EDTA로 부착된 세포를 분리하여 원심분리한 후 집적된 암세포에 배지를 넣고 피펫으로 암세포가 골고루 분산되도록 잘 혼합하여 75 mL 세포 배양 플라스크에 10 mL씩 일정 수 분할하여 주입하고 계속 6-7일마다 계대 배양하면서 실험에 사용하였다.AGS human gastric cancer cell, HT-29 human colon cancer cell, HT1080 human fibrosarcoma cell, MCF-7 Human breast cancer cells (MCF-7) and U-937 human histocytic lymphoma cells (U-937 human breast cancer cells) were used for the experiment while being cultured from the cell line bank (Seoul National University of Medicine). RPMI 1640 containing 100 units / mL penicillin-streptomycin and 10% FBS was used for AGS, HT-29, and U-937 cells, and 100 units / mL penicillin-streptotype was used for HT1080 and MCF-7 cells. DMEM culture medium containing mycin and 10% FBS was used, and cultured in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator (FormaScientific, Japan) using a cell culture dish. Each cultured cancer cell is refeeded 2-3 times a week, washed with PBS in 6-7 days, and then separated and centrifuged with 0.05% Trypsin-0.02% EDTA. Into the medium and mixed well so that the cancer cells are evenly distributed by a pipette, a predetermined number of 10 mL portions were injected into a 75 mL cell culture flask, and then used in experiments while subcultured every 6-7 days.

3. MTT 분석3. MTT Analysis

MTT 분석은 생존 암세포의 미토콘드리아 내의 탈수소효소의 효소작용에 의해 황색의 수용성 물질인 MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide)가 환원되어 암청색 포르마잔 결정을 생성하는 원리를 이용한 실험법으로, 포르마잔 결정이 침전되는 정도를 흡광도로 측정함으로써 항암제에 의해 암세포가 사멸 또는 증식 억제되는 정도를 결정할 수 있다.15)배양된 암세포는 웰 당 5×104cells/mL가 되도록 96-웰 플레이트에 분주하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 24시간 배양 후 전 배양에 사용된 배지를 제거하고 배지 90 μL와 일정농도의 시료 10 μL를 첨가하여 37℃, 5% CO2배양기에서 24시간 배양하였다. 대조군에는 시료 대신 PBS 10 μL를 첨가하였다. 24시간 배양 후 5 ㎎/mL의 농도로 제조한 MTT 용액 10 μL를 첨가하여 동일한 배양 조건에서 4시간 동안 더 배양하였다. 이때 생성된 포르마잔 결정을 DMSO에 녹여서 ELISA 리더기(Bio-Tek instruments, USA)를 이용하여 540 nm에서 흡광도를 측정하여 억제율(%)을 구하였다.MTT assay revealed that dark blue formazan crystals were reduced by the reduction of yellow water-soluble MTT (3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide) by enzymatic action of dehydrogenase in the mitochondria of viable cancer cells. As an experimental method using the principle of generating a, by measuring the degree of absorption of the formazan crystal precipitated by the absorbance can determine the extent to which cancer cells are killed or inhibited by the anticancer agent. 15) Cultured cancer cells were dispensed in 96-well plates to be 5 × 10 4 cells / mL per well, and cultured for 24 hours in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator, followed by removal of the medium used for preculture, and 90 μL of medium. 10 μL of a certain concentration of the sample was added and incubated for 24 hours in a 37 ° C., 5% CO 2 incubator. 10 μL of PBS was added to the control group instead of the sample. After 24 hours of incubation, 10 μL of a MTT solution prepared at a concentration of 5 mg / mL was added thereto, and the cells were further incubated for 4 hours under the same culture conditions. The produced formazan crystal was dissolved in DMSO, and the absorbance was measured at 540 nm using an ELISA reader (Bio-Tek instruments, USA) to obtain the inhibition rate (%).

대조구의 흡광도 - 시료처리구의 흡광도        Absorbance of the Control-Absorbance of the Sample Treatment

증식억제율 (%) = ----------------------------------- X 100Growth inhibition rate (%) = ----------------------------------- X 100

대조구의 흡광도       Absorbance of the control

4. 역전사 중합 연쇄 반응 (Reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR) 분석 4. Reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis

상기 실시예 1에서 분리된 6종의 화합물을 농도별로 각각 처리한 AGS 인체 위암세포를 대상으로 트리아졸 시약(Invitrogen Co., CA, USA)를 이용하여 총l RNA를 분리하였다. 분리된 RNA를 정량한 후, 올리고 dT 프라이머(oligo dT primer; GIBCO, USA)와 AMV 역전사효소를 이용하여 2 ㎍의 RNA에서 ss cDNA를 합성하였다. 이 cDNA를 템플릿으로 사용하여 아폽토시스와 관련된 Bax, Bcl-2, p53 및 p21 유전자를 PCR 방법으로 증폭하였다(표 1 참조). Total RNA was isolated from triglyceride reagents (Invitrogen Co., CA, USA) on AGS human gastric cancer cells treated with each of the six compounds isolated in Example 1 by concentration. After quantifying the isolated RNA, ss cDNA was synthesized from 2 μg of RNA using oligo dT primer (GIBCO, USA) and AMV reverse transcriptase. This cDNA was used as a template to amplify Bax, Bcl-2, p53 and p21 genes related to apoptosis by PCR method (see Table 1).

<표 1>TABLE 1

PCR에 이용된 프라이머의 서열Sequence of primer used for PCR

유전자 명칭Gene name 서열order Bcl-2Bcl-2 forwardforward 5'-CAG-CTG-CAC-CTG-ACG-3'5'-CAG-CTG-CAC-CTG-ACG-3 ' reversereverse 5'-GCT-GGG-TAG-GTG-CAT-3'5'-GCT-GGG-TAG-GTG-CAT-3 ' BaxBax forwardforward 5'-ATG-GAC-GGG-TCC-GGG-GAG-3'5'-ATG-GAC-GGG-TCC-GGG-GAG-3 ' reversereverse 5'-TGG-AAG-AAG-ATG-GGC-TGA-3'5'-TGG-AAG-AAG-ATG-GGC-TGA-3 ' p53p53 forwardforward 5'-GCT-CTG-ACT-GTA-CCA-CCA-TCC-3'5'-GCT-CTG-ACT-GTA-CCA-CCA-TCC-3 ' reversereverse 5'-CTC-TCG-GAA-CAT-CTC-GAA-GCG-3'5'-CTC-TCG-GAA-CAT-CTC-GAA-GCG-3 ' p21p21 forwardforward 5'-CTC-AGA-GGA-GGC-GCC-ATG-3'5'-CTC-AGA-GGA-GGC-GCC-ATG-3 ' reversereverse 5'-GGG-CGG-ATT-AGG-GCT-TCC-3'5'-GGG-CGG-ATT-AGG-GCT-TCC-3 ' GAPDHGAPDH forwardforward 5'-CGG-AGT-CAA-CGG-ATT-TGG-TCG-TAT-3'5'-CGG-AGT-CAA-CGG-ATT-TGG-TCG-TAT-3 ' reversereverse 5'-AGC-CTT-CTC-CAT-GGT-GGT-GAA-GAC-3'5'-AGC-CTT-CTC-CAT-GGT-GGT-GAA-GAC-3 '

이때 하우스키핑(housekeeping) 유전자인 GAPDH 유전자를 내부 대조구로 사용하였다. 각 PCR 산물들을 1% 아가로스겔을 이용하여 전기영동하고 에티디움 브로마이드(EtBr, Sigma)를 이용하여 염색한 후 UV 하에서 확인하였다. The housekeeping gene GAPDH gene was used as the internal control. Each PCR product was electrophoresed using 1% agarose gel, stained with ethidium bromide (EtBr, Sigma), and confirmed under UV light.

5. 통계처리5. Statistical Processing

대조군과 각 시료로부터 얻은 실험 결과들의 유의성을 검정하기 위하여 분산분석 (ANOVA)을 행한 후 p < 0.05 수준에서 던컨 다중 범위 테스트(Duncan's multiple range test)를 실시하였으며, 그 결과는 평균 (Mean)±표준편차 (Standard deviation, SD)로 표시하였다. 모든 통계 분석은 통계 분석 시스템(v8.2 SAS Institute Inc., NC, USA) 통계프로그램을 이용하여 처리하였다. In order to test the significance of the experimental results obtained from the control group and each sample, ANOVA was performed and Duncan's multiple range test was performed at the p <0.05 level. It is expressed as standard deviation (SD). All statistical analyzes were processed using a statistical analysis system (v8.2 SAS Institute Inc., NC, USA) statistical program.

실험예 1 : 염주괴불주머니 화합물의 인체 암세포 증식 억제 효과Experimental Example 1 Inhibitory Effects of Ingot Bullbag Compounds on Human Cancer Cell Proliferation

염생식물인 염주괴불주머니의 항암 생리활성 물질을 탐색하기 위한 기초 연구로서 염주괴불주머니에서 분리한 6종의 쿠마린 계열의 화합물을 이용하여 AGS 인 체 위암세포, HT-29 인체 결장암세포, HT1080 인체 섬유육종 세포, MCF-7 인체 유방암세포 및 U-937 인체 혈구암세포의 증식에 미치는 영향을 관찰하였다 (도 1 참조). 상기 암세포에 6종의 화합물을 10, 50 및 100 μM의 농도로 처리한 결과, 시료 처리 농도의 증가에 따라 농도 의존적으로 암세포의 생존율이 감소하는 경향을 나타내었다. 전반적으로 5종의 인체 암세포주에서 화합물 2, 5 및 6이 증식 억제 효과를 나타내었으며, 특히 신규 화합물 6은 AGS, HT-29, HT-1080, MCF-7 및 U-937에 100 μM의 농도로 처리시 각각 54, 43, 51, 50 및 17 %로 가장 활성이 뛰어난 것을 볼 수 있었다. 또한 5종의 인체 암세포주에 따른 화합물의 선택성은 AGS 인체 위암세포에서 가장 뚜렷하게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. A basic study for the investigation of anti-cancer bioactive substances in saline ingot bags, which are AGS human gastric cancer cells, HT-29 human colon cancer cells, and HT1080 human fibers using six coumarin-based compounds isolated from saline ingot bags. The effects on the proliferation of sarcoma cells, MCF-7 human breast cancer cells and U-937 human hematopoietic cancer cells were observed (see FIG. 1). As a result of treatment of 6 compounds with cancer cells at concentrations of 10, 50, and 100 μM, the survival rate of cancer cells decreased in a concentration-dependent manner as the concentration of the sample was increased. Overall, compounds 2 , 5, and 6 showed proliferative inhibitory effects in five human cancer cell lines. In particular, new compound 6 had a concentration of 100 μM in AGS, HT-29, HT-1080, MCF-7, and U-937. The most active was found to be 54, 43, 51, 50 and 17%, respectively, when treated with. In addition, the selectivity of the compounds according to the five human cancer cell lines was confirmed that the most apparent in AGS human gastric cancer cells.

따라서 염주괴불주머니로부터 분리된 6종의 화합물을 이용하여 아폽토시스 관련 인자인 Bax, Bcl-2, p53 및 p21의 mRNA 발현에 미치는 영향을 RNA 추출과 RT-PCR을 이용하여 AGS 인체 위암세포에서 검토하였다 (도 2 및 3 참조). Therefore, the effects of apoptosis-related factors Bax, Bcl-2, p53, and p21 on mRNA expression using six compounds isolated from ingot bags were investigated in AGS human gastric cancer cells using RNA extraction and RT-PCR. (See Figures 2 and 3).

Bcl-2 군은 아폽토시스를 조절하는 중요한 인자로써, 크게 Bcl-2와 같은 항-아폽토시스 군과 Bax와 같은 프로-아폽토시스 군으로 나뉜다. 따라서 Bcl-2 군의 발현량 변화와 관련된 연구 결과는 아폽토시스 메카니즘을 확인하기에 유용하다. AGS 인체 위암세포에 100 μM의 농도로 6종의 화합물을 각각 처리했을 때, 항-아폽토시스 프라이머인 Bcl-2의 mRNA 발현이 감소하였으며, 프로-아폽토시스 프라이머인 Bax의 mRNA 발현이 증가하는 것으로 관찰되었다. The Bcl-2 group is an important factor regulating apoptosis, and is largely divided into anti-apoptotic groups such as Bcl-2 and pro-apoptotic groups such as Bax. Therefore, the findings related to the change in the expression level of the Bcl-2 group are useful to confirm the apoptosis mechanism. When AGS human gastric cancer cells were treated with each of six compounds at a concentration of 100 μM, mRNA expression of Bcl-2, an anti-apoptotic primer, was decreased, and mRNA expression of Bax, a pro-apoptotic primer, was increased. .

그 가운데 Bax의 발현량 증가는 화합물 1, 4, 5 및 6에서 뚜렷하게 확인되었으며, Bcl-2의 발현량 감소는 화합물 5에서 두드러지게 나타났다. 신규 화합물 6의 경우, 100 μM의 농도에서 Bcl-2와 Bax의 두 가지 인자에서 모두 발현이 증가되는 것이 확인되었다. Among them, an increase in the expression level of Bax was clearly observed in compounds 1 , 4 , 5 and 6 , and a decrease in the expression level of Bcl-2 was noticeable in compound 5. In the case of novel compound 6 , it was confirmed that expression was increased in both factors of Bcl-2 and Bax at a concentration of 100 μM.

프로-아폽토시스와 항-아폽토시스 단백질의 균형은 아폽토시스의 발생 여부에 따라 결정된다. p53은 종양 억제 유전자로써 여러가지 세포사 혹은 아폽토시스와 관련하여 중요한 역할을 한다. p53은 프로-아폽토시스 Bax의 증가 및 항-아폽토시스 Bcl-2의 감소를 조절하며, 미토콘드리아 멤브레인의 분열에도 관여한다. p21의 유도는 세포 사이클의 진행을 변화시키고 세포 성장을 중지시키며 아폽토시스를 유도하는 역할을 한다.The balance of pro-apoptosis and anti-apoptotic proteins is determined by the occurrence of apoptosis. p53 is a tumor suppressor gene and plays an important role in connection with various cell death or apoptosis. p53 regulates an increase in pro-apoptotic Bax and a decrease in anti-apoptotic Bcl-2 and is also involved in the cleavage of the mitochondrial membrane. Induction of p21 changes the progress of the cell cycle, stops cell growth and induces apoptosis.

염주괴불주머니에서 분리된 6종의 화합물을 각각 AGS 인체 위암세포에 처리하여 p53과 p21의 발현량의 변화를 확인한 결과, 100 μM의 화합물 처리 농도에서 대부분의 화합물이 p53과 p21의 발현 증가를 나타냈다. 특히, 신규 화합물 4와 6의 처리 결과에서 농도의존적으로 p53과 p21의 활성이 두드러지게 증가되는 것을 확인할 수 있다. 화합물 5의 경우 10 μM의 농도에서도 p53의 발현 증가가 두드러지게 나타났으나 p21의 활성은 관찰되지 않았다 (도 3 참조). 화합물 1-3의 결과에서도 p53과 p21의 발현량이 증가하였으며 특히, 10 μM 농도에서 화합물 1과 2를 처리한 p21의 증가가 뚜렷하게 나타나는 것이 관찰되었다. p53은 p21의 상위 유전자로, p21의 유도는 대부분 p53에 의해 이루어진다. 따라서 화합물의 처리에 따른 암세포증식 억제 효과는 p53의 발현 증가와 관련이 있으며, 아폽토시스 유도는 Bax 및 Bcl-2의 조절에 의한 것으로 생각된다. Six compounds isolated from the ingot bag were treated with AGS human gastric cancer cells, respectively, and the expression levels of p53 and p21 were confirmed. As a result, most of the compounds showed increased expression of p53 and p21 at the concentration of 100 μM. . In particular, it can be seen that the activity of p53 and p21 is significantly increased in the result of treatment with novel compounds 4 and 6 . In the case of compound 5 , the expression of p53 was significantly increased even at the concentration of 10 μM, but the activity of p21 was not observed (see FIG. 3). The expression levels of p53 and p21 were also increased in the results of Compounds 1 to 3 , and in particular, an increase of p21 treated with Compounds 1 and 2 was observed at 10 μM. p53 is the parent gene of p21, and the induction of p21 is mostly by p53. Therefore, the effect of inhibiting cancer cell proliferation following the treatment of the compound is associated with the increased expression of p53 and induction of apoptosis is thought to be due to the regulation of Bax and Bcl-2.

따라서 염생식물의 일종인 염주괴불주머니 (C.heterocarpa)가 다수의 인체암 세포 특히, AGS 인체 위암세포의 증식 억제에 효과가 있는 것으로 확인되었다. 특히 염주괴불주머니에서 분리된 6종의 쿠마린 계열의 화합물 중에서 화합물 2, 5 및 6이 암세포 증식 억제 효과가 뛰어난 것으로 나타났다. 화합물 2의 암세포 증식 억제 효과는 Bax와 Bcl-2의 조절에 의한 아폽토시스 유도에 의한 것이며, 이러한 결과는 종양 억제 유전자 p53과 p21의 조절과 연관된 것으로 사료된다. 화합물 5의 강한 암세포 증식 억제 효과 역시 아폽토시스에 의한 것으로 p53의 조절에 의한 뚜렷한 Bcl-2의 감소 및 Bax의 증가에 의한 것으로 판단된다. 또한 신규 화합물 6의 뛰어난 암세포 증식 억제 효과는 프로-아폽토시스c Bax의 증가에 의한 아폽토시스의 결과로 p53과 p21의 증가량과 큰 관련성이 있는 것으로 여겨진다.Therefore, it was confirmed that the saline plant ingot ( C. heterocarpa ) is effective in inhibiting the proliferation of many human cancer cells, especially AGS human gastric cancer cells. In particular, the compounds 2 , 5 and 6 were found to be excellent in inhibiting cancer cell proliferation among the six coumarin-based compounds isolated from the ingot bag. The cancer cell proliferation inhibitory effect of Compound 2 is due to apoptosis induction by the regulation of Bax and Bcl-2, and this result is considered to be related to the regulation of tumor suppressor genes p53 and p21. The strong cancer cell proliferation inhibitory effect of Compound 5 was also caused by apoptosis, which is thought to be due to a marked decrease in Bcl-2 and an increase in Bax by regulation of p53. In addition, the superior cancer cell proliferation inhibitory effect of the new compound 6 seems to be highly correlated with the increase of p53 and p21 as a result of apoptosis by the increase of pro-apoptotic c Bax.

이 결과로부터 염주괴불주머니에서 분리된 6종의 화합물들이 p53과 p21의 조절을 통해 Bax의 발현 증가 및 Bcl-2의 발현을 감소시킴으로써 아폽토시스를 유도하는 역할을 하여 암세포의 증식능 및 세포 자멸사에 영향을 미치는 것으로 사료된다. From these results, the six compounds isolated from the ingot bag act to induce apoptosis by increasing Bax expression and decreasing Bcl-2 expression through the regulation of p53 and p21, thereby affecting the proliferative capacity and apoptosis of cancer cells. It is considered to be mad.

추후 염주괴불주머니 추출물 및 화합물을 이용한 유전자 단계 혹은 in vivo 단계의 생리활성 검증을 통해 항발암 활성을 가진 건강기능성 식품 및 의약품으로서의 개발이 기대되어진다. 또한, 염생식물 중에서 식용 및 약용으로의 가치성을 인정받고 있는 함초, 나문재, 갯방풍 등과 함께 새로운 생리활성물질 소재군으로서의 가치를 기대해본다. In the future, it is expected to be developed as health functional foods and medicines with anti-carcinogenic activity through verification of physiological activity at the genetic stage or in vivo phase using ingot fire bag extract and compounds. In addition, we expect the value as a new bioactive material material group along with hamcho, Namunjae, Gaetbangpung, etc., which are recognized for its value as edible and medicinal among salt plants.

도 1은 AGS(a), HT-29(b), HT-1080(c), MCF-7(d), 및 U-937(e) 세포에서 염주괴불주머니 유래 화합물 1 내지 6의 증식저해 효과를 나타낸 그래프이다.1 is a proliferation inhibitory effect of ingot bag-derived compounds 1 to 6 in AGS (a), HT-29 (b), HT-1080 (c), MCF-7 (d), and U-937 (e) cells Is a graph.

도 2는 AGS 인체 위암 세포에서 Bax 및 Bcl-2의 mRNA 수준에 대한 염주괴불주머니 유래 화합물 1 내지 6의 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 2 is a graph showing the effect of ingot bag-derived compounds 1 to 6 on the mRNA levels of Bax and Bcl-2 in AGS human gastric cancer cells.

도 3은 AGS 인체 위암 세포에서 p53 및 p52의 mRNA 수준에 대한 염주괴불주머니 유래 화합물 1 내지 6의 효과를 나타낸 그래프이다.Figure 3 is a graph showing the effect of ingot bag-derived compounds 1 to 6 on the mRNA levels of p53 and p52 in AGS human gastric cancer cells.

Claims (6)

염주괴불주머니(Corydalis heterocarpa) 유래 하기 화학식 1의 쿠마린계 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염.A coumarin-based compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof derived from Corydalis heterocarpa. <화학식 1><Formula 1>
Figure 112009062398887-pat00020
Figure 112009062398887-pat00020
 상기 식에서, R은
Figure 112009062398887-pat00021
또는 SO3H이다.Where R is
Figure 112009062398887-pat00021
Or SO 3 H. 제1항에 따른 화학식 1의 쿠마린계 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방, 치료 또는 억제용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for preventing, treating or inhibiting cancer comprising the coumarin-based compound of formula 1 according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. 제2항에 있어서, 상기 암이 위암, 결장암, 섬유육종, 유방암 또는 혈구암인 것을 특징으로 하는 암의 예방, 치료 또는 억제용 약학 조성물.The pharmaceutical composition for preventing, treating or inhibiting cancer according to claim 2, wherein the cancer is gastric cancer, colon cancer, fibrosarcoma, breast cancer or hematopoietic cancer. 염주괴불주머니 유래 하기 화학식 3의 쿠마린계 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 암의 예방, 치료 또는 억제용 약학 조성물.A pharmaceutical composition for preventing, treating or inhibiting cancer containing a coumarin-based compound of Formula 3 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient. <화학식 3> <Formula 3>
Figure 112011065531916-pat00022
Figure 112011065531916-pat00022
 상기 식에서, R2는
Figure 112011065531916-pat00023
,
Figure 112011065531916-pat00024
Glu, 또는 SO3H 이다.Wherein R2 is
Figure 112011065531916-pat00023
,
Figure 112011065531916-pat00024
Glu, or SO 3 H. 삭제delete 삭제delete
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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KR20220077359A (en) 2020-12-02 2022-06-09 대한민국(환경부 국립생물자원관장) Anticancer composition comprising Corydalis pauciovulata extract
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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KR101302038B1 (en) * 2011-06-14 2013-09-06 부경대학교 산학협력단 (2's)-columbianetin isolated from corydalis heterocarpa and composition containing the same
CN103254207B (en) * 2013-05-10 2015-04-29 西安交通大学 Compound with antihypertensive activity and preparation method thereof

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chem. Pharm. Bull. Vol. 56(9), pp. 1338-1341, 2008.*
KSBB Journal, vol. 24(2), pp. 201-206, 2009.04.*

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102824614A (en) * 2012-09-20 2012-12-19 南京正亮医药科技有限公司 Application of Wujin tablets for preparing medicines for suppressing PC-3 cell proliferation
KR20220077359A (en) 2020-12-02 2022-06-09 대한민국(환경부 국립생물자원관장) Anticancer composition comprising Corydalis pauciovulata extract
KR102541096B1 (en) 2020-12-02 2023-06-12 대한민국 Anticancer composition comprising Corydalis pauciovulata extract
KR20220096683A (en) * 2020-12-31 2022-07-07 경희대학교 산학협력단 Composition for preventing and treating a cancer comprising corydalis yanhusuo extract
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