KR101124968B1 - 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물을 함유하는 미백 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 소루쟁이 (Rumex Crispus L.) 추출물과 스트로브 잣나무피 (Pinus Strobus bark) 추출물을 유효성분으로 함유하여 소루쟁이 추출물은 줄기세포인자(SCF; Stem Cell Factor) 발현을 억제하고, 스트로브 잣나무피는 타이로시나아제 활성을 억제 하여 우수한 피부 미백 효과를 발휘하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

소루쟁이(Rumex Crispus L.), 스트로브 잣나무피(Pinus Strobus bark), SCF (Stem Cell Factor), 미백, 화장료

Description

소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물을 함유하는 미백 화장료 조성물{Cosmetic Composition containing Rumex crispus and Pinus strobus bark extract for whitening}

본 발명은 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 소루쟁이 (Rumex Crispus L.) 추출물과 스트로브 잣나무피 (Pinus Strobus bark) 추출물을 유효성분으로 함유하여 소루쟁이 추출물은 줄기세포인자(SCF; Stem Cell Factor) 발현을 억제하고, 스트로브 잣나무피는 타이로시나아제 활성을 억제 하여 우수한 피부 미백 효과를 발휘하는 피부 미백용 화장료 조성물에 관한 것이다.

사람의 피부색을 결정하는 색소로는 멜라닌, 헤모글로빈, 카로티노이드가 있으며 인간의 피부, 모발, 눈의 다양한 색깔은 이들 색소에 의해 결정된다. 그 중 피부에 있어 색깔을 결정하는 가장 중요한 색소는 멜라닌이며, 멜라닌의 성질 그리고 분포의 정도에 따라 피부색이 결정되어진다.

멜라닌은 표피의 기저 세포층에 존재하는 멜라닌 형성 세포에 의해 합성되며, 단위체는 타이로신(Tyrosine)이다. 이 타이로신은 타이로시나아제(Tyrosinase)효소에 의해 도파로 전환되고 산화 되어 다시 도파 퀴논으로 전환된다. 이렇게 합 성된 멜라닌은 멜라노좀이라는 주머니를 통해 케라티노사이트로 옮겨지게 되고 케라티노사이트에서 28일간의 각화 과정을 거치면서 피부 표면으로 나오게 된다. 멜라닌은 인체의 피부에서 자연적으로 발생하는 활성 산소와 유리기를 소거하거나, 피부에 많은 해로움을 주는 자외선의 투과를 막아주는 유익한 역할을 한다. 그러나, 타이로시나제는 자외선에 의해 더욱 활성화되기 때문에, 자외선에 많이 노출될 경우 피부가 검게 변하게 된다는 것은 이미 잘 알려진 사실이다. 즉, 자외선에 피부가 노출되면 피부 세포의 일종인 멜라노사이트 (melanocyte) 내에서 멜라닌 (melanin)이 합성되고 방출되어 피부 표피가 검게 변하게 된다.

또한, 멜라닌 생성을 촉진하는 요인에 의해서 멜라닌이 과량 생성되고 각화에 의해 멜라닌이 완전히 없어 지지 않으면 색소 침착(Pigmentation)현상이 나타나게 된다.

따라서 피부가 검게 되는 것을 막기 위해서는 상기 멜라닌 생성 과정 중의 일부 반응을 저해함으로서 멜라닌 생성을 감소시켜 주는 방법이 가장 간단하며 일반적이다.

색소 침착을 방지하기 위해 멜라닌 생성 경로에 대한 많은 연구가 진행 되고 있으며, 이의 각 단계별 경로에 작용하여 멜라닌 생성을 억제하는 원료가 개발되고 있다. 그 예로, 멜라닌 색소의 합성과 관련된 타이로시나아제 효소를 억제하는 원료로는 알부틴과 닥나무 추출물이 있으며, 생성된 멜라닌의 환원을 촉진하는 비타민 C 유도체가 있다. 또한 각질의 박리를 촉진하여 표피내 멜라닌의 배설을 촉진시키는 락틱산과 살리실산이 있고, 자외선을 차단하는 무기 자외선 차단제 및 유기 자외선 차단제 등이 있으며, 멜라노사이트에 특이적으로 세포독성을 나타내는 하이드로퀴논 등이 있다. 최근의 미백 관련 연구에서는 멜라닌 합성에 영향을 주는 사이토카인 등의 신호전달 물질을 차단하여 멜라닌 생성을 억제하는 방향으로 진행되고 있다.

그러나 상기의 원료들은 세포 침투 능력에 문제가 있으며, 타이로시나아제에 대한 억제 효과가 미미하고, 일부 원료는 피부가 탈색되는 단점이 있다. 또한 화장료에 배합시 안전성 등의 문제로 사용량이 제한 되고 있어 신규한 미백 원료의 개발이 계속하여 연구되고 있다.

대한민국 특허 출원 제 1999-0017810호는 상지 추출물 및 비타민C를 동시에 포함하는 미백 화장료 조성물을 개시 하고 있고, 대한민국 특허출원 제 1999-0063340호는 레티노이드, 비타민 C, 닥나무 추출물, 감초산 유도체 및 보조효소 Q10을 유효 성분으로 함유하는 피부 미백 효과가 뛰어난 피부 외용제 조성물을 개시하고 있다.

이들 미백물질들 외에 천연물 특히 식물 중에서 미백활성성분을 찾기 위한 연구도 계속 이루어져왔고, 그 중 상백피(일본공개특허 소 55-44375호, 소 64-26507호, 소 64-83009호, 평 1-25687호, 평 5-139950호 및 대한민국 공개특허 제92-002109호, 제97-021273호), 감초(일본공개특허 소 60-214721호, 소 60-214728호, 소 63-23809호, 소 64-63506호, 평 1-149706호 및 대한민국 공개특허 제92-002109호, 제97-025601호), 작약(일본공개특허 소 61-246109호 및 대한민국 공개특허 제92-002111호), 계피(일본공개특허 소 63-30403호, 평 5-139954호), 고삼(일본 공개특허 소 64-26507호 및 대한민국 공개특허 제92-002110호), 갈근(일본공개특허 소 60-214727호, 소 64-16709호), 당귀(일본공개특허 소 56-92211호, 평 4-26610호), 목단피(일본공개특허 소 60-214721호, 소 61-50915호, 소 61-246109호), 반하(일본공개특허 평 2-207028호, 대한민국 공개특허 제96-033442호), 알로에(일본공개특허 소52-44375호, 평 2-207030호, 평 5-139950호)등 다수의 식물추출물 및 생약재 추출물 등이 타이로시나아제에 작용하여 멜라닌 생성을 억제한다는 사실이 밝혀졌으나, 이들 역시 안전성, 변색 가능성 등의 측면에서 화장품이나 의약품에 유효농도 이상으로 사용하는 데는 많은 문제점을 갖고 있으며, 아직 뛰어난 효과를 나타내지도 못하고 있는 실정이다.

본 발명에서는 오래 전부터 민간 요법으로 사용되어온 전통 생약 원료를 이용하여 피부 부작용이 없으며 피부 개선 효과가 뛰어난 피부 미백용 화장료 조성물을 개발하고자 하였고, 스트로브잣나무피 추출물 단독으로 이용할 경우 줄기세포인자(SCF)의 발현량의 억제율이 낮아 피부 미백에 효과가 떨어짐을 확인할 수 있었고, 이를 보완하기 위해 줄기세포인자의 발현량의 억제율이 높은 물질을 찾는 결과 소루쟁이 추출물이 줄기세포인자의 발현량의 억제율이 높다는 것을 발견하여, 스트로브잣나무피 추출물에 소루쟁이 추출물을 혼합하여 사용함으로서 피부 미백에 시너지 효과가 있고, 피부 안전성에 우수한 효과를 나타내는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 식물성 추출물인 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물을 혼합하여 줄기세포인자의 발현량의 억제율이 높여 피부미백효과를 극대화 시키고, 더불어 항산화 활성도 증가시킬 수 있는 미백화장료조성물을 제공하는 것이다.

상술한 과제를 해결하기 위하여 본 발명은 다음과 같은 수단을 포함할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 미백화장료 조성물은 스트로브 잣나무피 추출물과 소루쟁이 추출물을 유효성분으로 함유한다.

한편, 상기 스트로브 잣나무피 추출물과 소루쟁이 추출물은, 각각 조성물 총 중량에 대해서 0.001 ~ 10.0중량%로 함유하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 다른 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 줄기세포인자의 발현 억제용 화장료 조성물은 소루쟁이 추출물을 유효성분으로 함유한다.

또한, 상기 조성물은 유연화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 구성된 군으로부터 선택되는 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 소루쟁이 추출물은 그 자체로는 피부미백효과가 떨어지나 줄기세포인자(SCF : Stem Cell Factor)를 억제시킴을 하기의 실험예에서 확인할 수 있고, 또한, 스트로브 잣나무피는 타이로시나아제 활성을 억제 하여 피부 미백 효과를 발 휘함을 확인할 수 있으나, 줄기세포인자의 발현의 억제율이 낮아 피부 미백 효과를 극대화시킬 수 없음을 확인할 수 있었다. 따라서, 따라서 상기 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물을 동시에 사용함으로써 시너지 효과를 일으켜 피부 미백에 도움을 주는 효과를 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에 따른 미백화장료 조성물은 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물을 이용하여 피부색을 개선하는 미백 화장료에 관한 것이다.

본 발명에서 이용되는 소루쟁이(Rumex cripus L.)는 양재근,솔쟁이, 송구지 등으로 불리며, 한여름이면 줄기가 다 말라 버렸다가 선선하면 다시 자라나는 여뀌과의 다년생 풀이다. 어린 잎은 나물로 먹기도 하며, 백선, 무좀, 습진, 등에 효과가 있다고 한다. 예로부터 민간에서는 개선, 옴, 피부암 등의 피부병에 사용하였으며, 방광염, 대장염 등에서 달여서 사용했다고 한다. 가을에 뿌리를 깨서 둥글개 말아 햇볕에 말린 것을 양재근 이라고 한다.

본 발명에서 이용되는 스트로브 잣나무피(Pinus Strobus)는 북 아메리카가 원산이며 국내 전국 각지에 분포하고 표고 500m이하의 중부 이남에 식재가 가능하다. 스트로브 잣나무는 상록침엽교목으로 높이 30m, 직년 1m까지 자란다. 잎은 5개씩 속생하고 선형이며, 길이는 6~14cm로서 끝이 뾰족하여 송곳처럼 생겼고, 잔톱니가 있으며, 회록색이고 횡단면의 수지구는 2개이며 외위이다. 그리고, 뒷면에는 백색기공조선이 있다. 4월 하순에 황녹색의 꽃이 피며 자용일가화로 암꽃은 장타원 형, 수꽃은 원관형으로 핀다. 열매는 이듬해 10월 상순에 익는다. 구과는 긴 원통형이며 길이 8~2 cm, 지름 2.5cm 로서 밑으로 처지고 흔히 구부러지며 실편은 분두로서 사방으로 퍼지고 끝이 젖혀진다. 종자는 타원형 또는 난형이며 길이 5~7 cm, 폭 3~5cm 로서 자갈색이지만 흑색 점이 있고 날개는 길이 13 ~ 18cm 이다. 줄기는 높이 30m, 지름 1m 까지 자라고 줄기가 통직하며 수피는 녹갈색으로 밋밋하지만 늙으면 세로로 깊이 갈라지고 소지는 녹갈색으로 처음에는 털이 있으나 없어진다. 목부에 포함된 성분으로는 피니톨, 피노실빈, 피노실빈-메틸에스테르, 플라보노이드인 크리신, 피노세릅린, 피노반크신, 크립토스트로빈 등이 있다. 문헌에는 잣나무의 가는 가지는 류머티즘, 통풍, 허리아픔에 효능이 있어 진통 욕탕료로 쓰고, 어린 가지와 잎의 달임약은 괴혈병 치료약으로 쓰며, 수지로는 상처에 쓰는 무른교약을 만들고 껍질의 우리미약은 결핵 치료약으로, 링크는 결핵균이나 포도알균에 의한 감염성 상처의 치료에 쓴다고 기록되어 있다.

본 발명의 미백용 화장료 조성물의 유효성분으로 사용되는 소루쟁이 추출물은 하기 실험예에서 확인할 수 있듯이, 케라티노사이트(Keratinocyte)로부터 유도된 줄기세포인자를 억제 함으로서 멜라노사이트(Melanocyte)의 세포 표면 단백질인 씨-킷트(c-kit) 단백질의 활성을 저해한다. 이로써 멜라노사이트 내 세포 신호 전달을 억제하여 우수한 피부 미백 효과를 나타낸다.

한편, 씨-킷트(c-kit) 단백질은 티로신 키나아제 수용체 타입 III 군(receptor tyrosine kinase type III family)에 속하는 세포 표면 단백질로서 줄기세포 인자(stem cell factor, 'SCF')의 수용체로 알려져 있다. 백색 반점(White spotting)과 스틸 마우스(steel mouse)에서의 연구 결과에 의하면 SCF/c-kit 기능은 세포 유지를 비롯하여 조혈 작용(hematopoiesis), 색소침착(pigmentation), 생식(reproduction) 등에서 중요한 역할을 담당한다. SCF/c-kit 사이의 상호작용 결과, 씨-킷트 단백질은 이량화반응(dimerization)이 일어나고 스스로 인산화되는 활성을 갖는다. 이후 세포 내 신호 전달에서는 Ras-Raf-MAP 키나아제 카스케이드(Ras-Raf-MAP kinase cascade)를 거치게 되고, 최종적으로는 Mitf(Microphthalmia-Associated Transcription Factor)를 활성화 시킴으로써 타이로시나제(tyrosinase) 합성을 촉진시키고, 멜라노사이트에서의 멜라닌 생성을 유도하게 된다.

SCF/c-kit 신호 전달은 자외선 B에 의해 유도되는 색소침착에도 관련되어 있는데, 실제로 각질형성세포와 멜라노사이트의 세포 배양 시에 자외선 B로 자극을 주면 SCF 및 씨-킷트의 유전자와 단백질 발현이 증가함을 확인할 수 있다. 이러한 현상은 사람의 표피(epidermis)에 자외선 B를 처리하였을 때도 마찬가지로, 자외선 B에 노출되지 않은 부위에 비해 노출된 부분은 SCF의 유전자 및 단백질 발현이 현저하게 증가하였음이 확인되었다. 멜라노사이트 기능 연구에 훌륭한 모델인 브라운 기니픽 동물 실험 결과도 이와 같다. 즉, 씨-킷트 단백질에 대한 억제 항체를 상기 실험 동물의 표피하(subepidermal)로 주사하였을 경우, 자외선 B에 의해 유도되는 색소침착이 완벽하게 억제됨을 확인한 것이다. 따라서, SCF/c-kit 상호 작용의 신호 전달이 궁극적으로는 색소침착과 밀접한 관련이 있음을 알 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 위와 같은 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣 나무피 추출물을 유효 성분으로 함유한다. 상기 소루쟁이 추출물은 줄기세포인자 (SCF) 억제를 통해 자외선에 의해 유발된 색소침착을 억제하고 스트로브 잣나무피 추출물은 멜라닌 생성 저해와 타이로시나아제 활성을 억제 하여 상기 두 성분을 혼합하여 함유한 화장료 조성물은 우수한 피부 미백 효과를 발휘함을 하기 실험예에서 확인할 수 있었다.

본 발명에 의한 상기 추출물은 공지된 다양한 방법으로 추출할 수 있으나, 다음과 같이 각각 제조할 수 있다.

소루쟁이 와 스트로브 잣나무피를 각각 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조한다. 건조한 각각의 식물을 추출용기에 넣고, 적당량의 추출 용매에 적절한 온도에서 일정 시간 추출한다. 추출물은 여과되고, 진공회전증발기 등을 이용하여 농축될 수 있다.

상기 추출 용매로는 물(정제수), 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 극성용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 사용한다.

상기 추출 용매의 양은 생약 건조 중량의 2 ~ 10 배로 한다.

상기 추출 방법은 중탕 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 중탕 추출의 추출방법으로 1회 내지 5회 추출될 수 있다.

상기 침적 온도는 30 ~ 70℃ 이며, 보다 바람직하게는 40 ~ 60℃이며, 가장 바람직하게는 50℃ 정도로 유지하는 것이 부패, 변색 및 변취의 예방에 가장 효과 적이다.

상기 침적 시간은 5 ~ 20 시간이며, 바람직하게는 10 시간이다.

상기 추출물을 수득한 후, 거름종이 등을 이용하여 고형분을 제거하고, 현탁액을 원심분리 시키고, 상층액을 감압여과할 수 있다.

상기 여과된 추출물을 진공회전농축기로 20 ~ 100℃, 바람직하게는 50 ~ 70℃에서 감압농축할 수 있다.

또한, 본 발명의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다.　예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 추출물에 포함되는 것이고, 또한 본 발명의 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있으며, 당업계에 알려진 기술을 이용하여 제조하여 사용하거나, 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용할 수 있다.

본 발명의 상기 추출물은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.001 ~ 10.0 중량 %를 포함하는 것이 적합하다. 본 발명의 추출물이 0.001 중량 % 미만으로 포함 할 경우에는 화장료 조성물의 피부 미백 효과가 미미하며 10.0 중량 %를 초과하여 투입할 경우에는 초과투입에 따른 상승 효과가 적어 경제적이지 못하며, 제품 안정성에 좋지 않은 영향을 미칠 수 있다. 더욱 바람직하기로는 본 발명의 추출물은 0.1 내지 5.0 중량 %를 포함하는 것이 바람직하다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨데 항산화제, 안정화제, 용해화제, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함할 수 있다.

본 발명의 피부 미백용 화장료 조성물은 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물 외에 본 발명이 목적으로 하는 미백 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 상기 미백 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 미백 성분 등을 함유 하는 것도 무방하다. 또한, 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 젤, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정된 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조 될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는 담체 성분으로 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로스 유도체, 폴리에틸렌 글라이콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용 될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이 인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알뤼늄 하이드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아마이드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하이드 로카본, 프로판/부탄 또는 다이메틸 에테르와 같은 추진체를 포함 할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨데 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글라이콜, 1,3-부틸글라이콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글라이콜 또는 소르비탄의 지방족 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오테이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아마이드 에테르설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올 아미드, 식물성유 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤, 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

이하, 실시예와 실험예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 하기, 실시예와 실험예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

[제조예 1] 소루쟁이 추출물의 제조

소루쟁이를 50g 취하여 100% 에탄올 200ml에 침지시켜 50℃ 수욕조에서 10시간 동안 온탕하였다. 얻어진 추출액을 실온으로 냉각시키고 거름종이로 여과하여 여과액을 취하였다. 질소를 사용하여 여과액에서 에탄올을 증발시켜 농축한 다음, 이를 10% 에탄올에 녹여 추출물을 제조하였다.

[제조예 2] 스트로브 잣나무피 추출물의 제조

스트로브 잣나무피를 50 g 취하여 100% 에탄올 200ml에 침지시켜 50℃ 수욕조에서 10시간 동안 온탕하였다. 얻어진 추출액을 실온으로 냉각시키고 거름종이로 여과하여 여과액을 취하였다. 질소를 사용하여 여과액에서 에탄올을 증발시켜 농축한 다음, 이를 10% 에탄올에 녹여 추출물을 제조하였다.

실험예 1: 타이로시나아제 활성 저해 효과

소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물이 타이로신의 효소인 타이로시나아제의 활성 저해에 미치는 영향을 알아보기 위하여 하기 실험을 실시 하였다.

타이로시나아제는 버섯에서 분리 및 정제된 것으로 시그마(SIGMA)사에서 구입하였다. 기질인 타이로신은 0.05M 인산 나트륨 완충용액 (pH 6.8)에 녹여 0.1mg/ml 용액으로 만들어 사용하였다.

상기 제조예 1과 2에서 제조한 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물은 완충용액에 적당한 농도로 조절하여 녹인 후 시료액으로 사용하였다. 또한 상기 추출물의 효과를 알아보기 위해 시료 타이로신 용액 0.5ml을 시험관에 넣고 37℃ 에서 10분간 반응 시켰다. 이때 대조군은 완충용액을 0.5ml 넣은 것이다. 이 반응액이 든 시험관을 얼음 위에 놓아 급냉시켜 반응을 중지시키고 분광광도계(Spectrophotometer)로 파장 475nm 에서의 흡광도를 측정 하였다.

소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물의 각 농도에서 타이로시나아제 의 활성 저해 효과는 하기의 <수학식 1>의 공식으로 구하였고, 결과는 하기 [표 1]과 같다.

타이로시나아제활성저해율(%)=100-(각농도에서의흡광도/대조군의흡광도×100)

농도 (㎍/ml)	타이로시나아제 활성 저해 효과(%)
	스트로브 잣나무피	소루쟁이 추출물
10	8.5	6.1
20	11.9	7.2
50	27.4	10.4
100	31.0	15.6
200	52.7	24.8

상기 [표 1]의 결과를 볼 때, 스트로브 잣나무피 추출물은 타이로시나아제 활성 저해 효과율이 우수한 반면 소루쟁이 추출물은 스트로브 잣나무피 추출물에 비해 타이로시나아제 활성 저해율이 미미한 것으로 나타났다.

실험예 2: 자외선 자극에 의해 각화 세포막 상에 발현되는 SCF의 측정

10 cm 평판에 150만개의 각화 세포를 파종하고 72시간 배양한 후 배지를 PBS(Phosphate Buffered Saline)로 교환, UVB를 20 mJ/cm² 로 조사하고 즉시 PBS를 배지로 교환한다. 거기에 추출물을 농도별로 첨가하고 24시간 배양 후 세포를 회수하고, 50 mM 인산완충액(pH7.8) + 프로테아제 저해제 용액 200 ㎕에 세포를 확산시킨 다음 초음파 파쇄기에 의해 30초씩 5회 4℃에서 세포를 파쇄했다. 이것을 10,000 g, 20분, 4℃에서 원심 분리하고, 상청을 100,000 g, 60분 4℃에서 추가로 원심 분리했다. 얻어진 팰릿을 25 mM 인산완충액(pH6.8) + 0.1% Triton-X100 용액 100 ㎕에 녹여, 막획분 단백질 추출액으로 했다. 이 용액의 단백질량을 정법에 의해 측정하고, 또한 SCF량을 측정하여, SCF량/단백질량의 값을 얻었다.

그 결과는 하기 [표 2]에서 나타낸 바와 같이, 자외선만을 조사한 미처리 군에서는 줄기세포인자의 수치가 7.540으로 측정 되었으며, 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물의 SCF량을 비교해 보았을 때 소루쟁이 추출물이 스트로브 잣나무피 추출물에 비해 매우 우수한 SCF억제 효과를 나타냄을 알 수 있었다.

	SCF (pg)/단백질(ug)
미처리군	7.540
소루쟁이 추출물 0.01%	2.610
소루쟁이 추출물 0.05%	0.840
스트로브 잣나무피 추출물 0.01%	5.800
스트로브 잣나무피 추출물 0.05%	4.600

그러나 스트로브잣나무피 추출물은 SCF의 발현을 억제할 수 있으나 그 효과는 미미함을 확인할 수 있었고, 소루쟁이 추출물은 자외선으로부터 유발되어 멜라노사이트 내 신호를 전달하게 하는 SCF 의 발현을 아주 크게 억제함을 확인할 수 있었다.

실험예 3: 항산화 작용 시험

소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물에 대한 항산화 효과를 시험하기 위해 일반적으로 항산화 활성을 측정하는 방법인 DPPH 용액을 이용하여 측정 하였다.

소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물 200mg/ml 와 항산화 측정 용액인 DPPH 용액을 100㎕씩 혼합 하여 37℃에서 30분간 반응 시킨 후 ELISA 리더(Reader)를 이용하여 파장 517nm에서 흡광도를 측정하였다.

항산화 활성(%)은 수학식 2에 의하였고, 결과는 하기 [표 3]에 나타내었다.

항산화 활성(%) = (1-처리구 흡광도/미처리구 흡광도) × 100

시료명	항산화 활성(%)
소루쟁이 추출물	29.1%
스트로브 잣나무피 추출물	77.5%

상기 결과에서 알 수 있는 바와 같이 본 발명에서 사용된 소루쟁이 추출물은 항산화 활성이 29.1%으로 그 효과가 떨어지나, 스트로브 잣나무피 추출물은 77.5%로 항산화 활성이 우수한 것을 알 수 있다.

[제조예 3]실시예 및 비교 실시예

하기 [표 4]의 조성비를 가지는 화장료 조성물에 상기의 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물을 함유하는 실시예 및 비교 실시예를 다음의 조성으로 제조하였다.

성분	실시예 (중량%)	비교예1 (중량%	비교예2 (중량%)	비교예3 (중량%)
소루쟁이 추출물	2.0	4.0	-
스트로브 잣나무피 추출물	2.0	-	4.0
글리세린	5.0	5.0	5.0	5.0
유동파라핀	10.0	10.0	10.0	10.0
폴리솔베이트60	2.0	2.0	2.0	2.0
솔비탄세스퀴롤올레이트	1.0	1.0	1.0	1.0
스쿠알란	5.0	5.0	5.0	5.0
밀납	10.0	10.0	10.0	10.0
트리에탄올아민	0.5	0.5	0.5	0.5
프로필렌 글리콜	1.0	1.0	1.0	1.0
카르복실비닐폴리머	1.5	1.5	1.5	1.5
향	미량	미량	미량	미량
방부제	미량	미량	미량	미량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량
계	100	100	100	100

실험예 4: 미백 효과

본 발명의 미백 효과를 측정하기 위해서, 1개월간 30-40대의 건강한 여성 40명을 대상으로 실시예 1과 비교예 1, 2, 3을 10명씩 4조로 나누어 매일 2회씩 한달간 도포하게 하였다. 도포하여 피부의 흑백정도를 색차계(미놀타 CR2002)를 사용하여 효과를 판정하였다. 색을 표시하는 데에는 L*,a*,b*표색계를 쓰며 본실험에서는 주로 L*값(명도)을 지표로 하였다. L*값은 검정색(L*=0)으로부터 흰색(L*=100) 까지를 나타내며 한달 후의 ΔL*를 구하여 다음의 [표 5]에 나타내었다.

시험 물질	ΔL*
실시예	10.1
비교예 1	2.81
비교예 2	4.62
비교예 3	0.34

상기 [표 5]에서 알 수 있듯이, 본 발명의 조성물을 함유한 실시예에서 가장 우수한 미백 효과를 나타냄을 알 수 있다.

즉, 비교예 2 처럼 스트로브잣나무피 추출물 단독으로 화장료에 함유될 경우, 줄기세포인자(SCF)의 발현량의 억제율이 낮아 피부 미백에 효과가 떨어지는 것으로 판단되고,

비교예 1 처럼 소루쟁이 추출물 단독으로 화장료에 함유할 경우, 타이로시나아제 활성저해율이 떨어져 미백효과는 매우 떨어지는 것으로 판단된다.

그러나, 실시예에서 처럼 줄기세포인자의 발현을 억제하는 효과가 낮은 스트로브잣나무피를 보완하여 줄기세포인자의 발현량의 억제율이 높은 소루쟁이 추출물을 혼합하여 이용함으로서 피부 미백에 우수한 시너지 효과가 있는 것으로 판단된다.

또한, 본 발명에서 이용되는 소루쟁이 추출물은 종래의 피부미백화장료 조성물 중에 줄기세포인자의 발현량의 억제율이 낮은 추출물과 혼합하여 사용할 경우에 피부 미백에 우수한 시너지 효과를 낼 수 있을 것이라 예상된다.

실험예 5: 피부 안전성 시험

과거력상 피부자극에 과민반응을 보인 적이 없으며, 현재 피부병 내지 피부 알러지 증상이 없는 20-30대 여성 20명을 대상으로 본 발명의 피부안전성을 확인하기 위하여 상기 [표 4] 에서의 화장료에 대해 인체 피부 첩포시험을 하였다. 우선 시험부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시켰다. 준비된 시험물질을 15㎍씩 핀챔버 (Finn chamber, 100x10, EPITEST, 핀란드) 내에 적하시킨 후 시험대상자의 전박 (forearm) 안쪽 부위에 밀폐 첩포하였다. 24시간 동안 첩포하고 첩포를 제거한 후 펜으로 시험부위를 표시하였다. 표시 후 각각 1시간 및 24시간 후에 확대경 (8MC-150, DAZOR, 미합중국)을 이용하여 시험 부위를 관찰하여 홍반 및 부종 유무를 관찰하였다. 피부반응은 국제접촉피부염연구회 (ICDRG, International Contact Dermaitis Research Group)의 규정에 따라 판정하고, <수학식 3>에 따라 평균피부반응도(mean response rate)를 구하였다. 그 결과는 하기 [표 7]에 나타낸다.

[피부반응의 평가 기준 및 점수]

기 호	점수	평가 기준
-	0	무반응
±	0.5	희미한 또는 가벼운 홍반
+	1	경계가 뚜렷하나 약한 홍반, 부종 및 구진
++	2	뚜렷한 홍반, 구진 및 소수포
+++	3	심한 홍반 및 대수포, 가피형성

평균피부반응도(%)=(점수*반응수*100*1/2)/[3(최대점수)*총피검자수(n)]

시험물질	1 시간 후			24 시간 후			반응도 (%) (n=20)
	±	+	++	±	+	++
실시예	-	-	-	-	-	-	0.00
비교예 1	-	-	-	-	-	-	0.00
비교예 2	-	-	-	-	-	-	0.00
비교예 3	-	-	-	-	-	-	0.00

상기 [표 7]에서 알 수 있듯이, 피부 첩포 실험에서 상기 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물은 피부 자극이 없는 안전성이 매우 우수한 물질 임을 알 수 있다.

이하, 본 발명의 화장료 제형예로서 본 발명의 소루쟁이 추출물과 스트로브 잣나무피 추출물을 함유하는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양크림 및 마사지 크림 등을 예시하고 있으나, 본 발명의 화장료의 제형이 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.

제형예 1: 유연화장수(스킨로션)

하기 표에 나타난 바와 같이 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
소루쟁이 추출물	2.0
스트로브 잣나무피 추출물	2.0
1.3-부틸렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
올레일알코올	0.1
폴리솔베이트 20	0.5
에탄올	15.0
벤조페논-9	0.05
향,방부제	미량
정제수	to 100

제형예 2. 영양화장수(밀크로션)

하기 표에 나타난 바와 같이 영양화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
소루쟁이 추출물	2.0
스트로브 잣나무피 추출물	2.0
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	1.2
토코페닐아세테이트	3.0
유동파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다이아너트오일	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.0
카르복시비닐 폴리머	1.0
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향,방부제	미량
정제수	to 100

제형예 3. 영양크림

하기 표에 나타난 바와 같이 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
소루쟁이 추출물	2.0
스트로브 잣나무피 추출물	2.0
세토스테아릴알콜	2.0
글리세릴스테아레이트	1.5
트리옥타노인	5.0
폴리솔베이트 60	1.2
솔비탄스테아레이트	0.5
스쿠알란	5.0
유동 파라핀	3.0
싸이클로메치콘	3.0
비에이치티이	0.05
델타-토코페롤	0.2
농글리세린	4.0
1,3-부틸렌글리콜	2.0
산타검	0.1
EDTA-2Na	0.05
향, 방부제	미량
정제수	to 100

제형예 4. 마사지크림

하기 표에 나타난 바와 같이 마사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
소루쟁이 추출물	2.0
스트로브 잣나무피 추출물	2.0
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	0.5
밀납	2.0
토코페릴아세테이트	0.1
폴리솔베이트 60	3.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5
세테아릴알코올	2.0
유동파라핀	30.0
카르복시비닐폴리머	0.5
향, 방부제	미량
정제수	to 100

제형예 5. 팩

하기 표에 나타난 바와 같이 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
소루쟁이 추출물	2.0
스트로브 잣나무피 추출물	2.0
프로필렌글리콜	2.0
글리세린	4.0
카르복시비닐 폴리머	0.3
에탄올	7.0
피이지-40 히드로게네이티드 캐스터 오일	0.8
트리에탄올아민	0.3
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향, 방부제	미량
정제수	to 100

Claims (4)

1. 스트로브 잣나무피 추출물과 소루쟁이 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백 화장료 조성물.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 스트로브 잣나무피 추출물과 소루쟁이 추출물은,

   각각 조성물 총 중량에 대해서 0.001 ~ 10.0중량%로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물
3. 삭제
4. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 조성물은 유연화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 및 파우더로 구성된 군으로부터 선택되는 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장료 조성물.