KR101074428B1 - The shampoo and rinse comprising hot water extract of Lotus root - Google Patents

Abstract

본 발명의 목적은 연근의 열수추출물을 함유하는 샴푸와 린스용 조성물 및 그 조성물을 함유하는 샴푸와 린스를 실현할 수 있도록 함으로써 연근의 우수성을 화장품에 응용하고 나아가 대구 특산물의 활용도를 극대화하여 이를 이용한 부가가치 창출과 소비 증대를 꾀하는 데 있다.The object of the present invention is to realize the composition for shampoo and rinse containing the hot water extract of lotus root and the shampoo and rinse containing the composition to apply the superiority of the lotus root to cosmetics and further maximize the utilization of specialty products of cod, value added using it It is aimed at creating and increasing consumption.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 샴푸와 린스용 조성물은, 연근의 열수추출물을 포함하는 것을 특징으로 한다.Shampoo and rinse composition of the present invention for achieving the above object is characterized in that it comprises a hot water extract of lotus root.

이때 위에서 연근의 열수추출물은 추출시간 8~12시간, 추출온도 90~96℃, 추출비율 27~32㎖/g의 조건으로 하여 추출되는 것을 특징으로 한다.At this time, the hot water extract of lotus root is extracted under the conditions of extraction time 8 ~ 12 hours, extraction temperature 90 ~ 96 ℃, extraction ratio 27 ~ 32ml / g.

본 발명은 또한 위 각 조성물을 함유하는 샴푸와 린스인 것을 특징으로 한다.The present invention is also characterized in that the shampoo and rinse containing each of the above compositions.

연근, 추출물, 샴푸, 린스 Lotus root, extract, shampoo, rinse

Description

연근의 열수추출물을 함유하는 샴푸와 린스{The shampoo and rinse comprising hot water extract of Lotus root}The shampoo and rinse comprising hot water extract of Lotus root

본 발명은 연근의 열수추출물을 함유하는 샴푸와 린스용 조성물 및 그 조성물을 함유하는 샴푸와 린스에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 연근이 본래 가지고 있는 기능성에 더하여 천연 자연 재료를 이용함으로써 인체의 부작용을 없애는 한편 연근의 활용도를 다변화할 수 있음은 물론 연근 재배 농가 소득의 향상에 일조할 수 있도록 한, 연근의 열수추출물을 함유하는 샴푸와 린스용 조성물 및 그 조성물을 함유하는 샴푸와 린스에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for shampoo and rinse containing the hot water extract of lotus root and shampoo and rinse containing the composition, and more particularly to the side effects of the human body by using a natural natural material in addition to the functionality of the lotus root The present invention relates to a shampoo and rinse composition containing hot water extract of lotus root, and a shampoo and rinse containing the composition, which can be used to remove lotus root and diversify the utilization of lotus root, as well as to improve the income of lotus root cultivated farmers.

연(蓮, Nelumbo nucifera Gaertner)은 수련과(水蓮科, Nymphaeaceae)의 다년생 수초(多年生 水草)로 중국에서는 연을 불로식(不老食)으로 취급하여 잎, 열매, 뿌리의 모든 부분을 약재로 이용해 왔다. 국내에서 식용으로 주로 쓰이는 것은 밑반찬으로 사랑받는 연근이고 연꽃, 씨앗(연밥)은 약용으로 주로 쓰이고 있다. Nelumbo nucifera Gaertner is a perennial herb of the Nymphaeaceae family. In China, lotus is regarded as a Bul-ro-sik, and all parts of leaves, berries, and roots are treated as medicinal herbs. I have used it. In Korea, mainly used for food is lotus root, which is loved as a side dish, and lotus and seeds are used for medicinal purposes.

연에 대한 연구는 주로 연근(Lotus root)에 대한 연구로 hydroxyproline 함량 변화(Fukuda, 1988)와 pectin 질의 특성에 대한 연구(Fuchigami and Okamato, 1984), 유리당, 지방산, 아미노산 및 식이섬유의 조성에 관한 연구(Han and Koo, 1993), 지질조성과 건강개선 기능에 관한 연구(Park et al., 2005), 분말 첨가가 제빵의 적성에 미치는 영향(Kim et al., 2002) 등이 있고, 연의 씨앗에 대한 연구로는 유지와 단백질의 구성에 관한 연구(Shin et al., 1999)가 있으며, 연잎에 대한 연구로는 항산화활성(Wo et al., 2003), 고지방식이를 먹인 흰쥐의 지질 농도에 미치는 영향(Shin and Han, 2006), 백련과 홍련의 부위별 영양성분(Yang et al., 2007)에 관한 보고가 있다.Studies on lotus roots are mainly conducted on the root of lotus roots, including changes in hydroxyproline content (Fukuda, 1988) and characteristics of pectin quality (Fuchigami and Okamato, 1984). Studies (Han and Koo, 1993), studies on lipid composition and function of health improvement (Park et al., 2005), and the effects of powder addition on the adequacy of baking (Kim et al., 2002) . Studies on oil fat and protein composition (Shin et al., 1999), and research on lotus leaf antioxidant activity (Wo et al., 2003), lipid concentration of rats fed high fat diet (Shin and Han, 2006), and the nutritional components of white and red lotus (Yang et al., 2007) have been reported.

옛날부터 연근은 염증을 없애고, 지혈 효과가 있으며, 해소·당뇨·위궤양·빈혈 등의 치료에도 효과가 있다고 보고되어 있다. 또한 연근에는 수용성 섬유질이 많아 변비 완화작용이 있으며 혈압 강하에도 효과적이라고 알려졌다. 연근에는 당단백질인 뮤신이 함유되어 있고 이것은 혈압 강하, 콜레스테롤 저하 작용이 있다고 밝혀졌으며 연근에 함유된 탄닌은 강력한 수렴작용이 있어 지혈 효과가 탁월하고 항산화 작용도 크다고 알려졌다.It has been reported that lotus root has long been effective in eliminating inflammation, hemostatic effect, and treatment of remission, diabetes, gastric ulcer and anemia. In addition, lotus root has a lot of water-soluble fiber has a constipation alleviating effect and is known to be effective in lowering blood pressure. Lotus root contains glycine protein mucin, which has been shown to lower blood pressure and lower cholesterol, and tannin contained in lotus root has strong astringent effect and is known to have excellent hemostatic effect and large antioxidant activity.

연근의 주성분은 탄수화물로 수용성 식이섬유소가 풍부하여 체내 콜레스테롤 함량을 감소시키는 작용과 변비 및 비만 예방효과가 있는 것으로 알려져 있다. 연근에는 인지질인 lecithine이 풍부하게 함유되어 있는데, lecithine은 유화력이 있기 때문에 혈관벽에 콜레스테롤이 침착하는 것을 예방하고, 신경전달물질인 acetylcholine을 생성하여 기억력 감퇴 억제효과가 있으며 치매예방효과도 알려져 있다. 또한 연근을 절단할 때 실과 같은 끈끈한 점액이 나오는데 이는 당단백질의 일종이 뮤신(mucin)으로 콜레스테롤 감소효과, 위벽보호 및 해독작용을 하는 것으로 보고되어 있다. 연근의 생리활성 물질의 효능에 관한 연구로는 연근에탄올 추출물의 고혈압 강하효과, 당뇨병 예방효과, 항암효과 및 신장보호 효과 등이 있으며, 특히 연근에서 분리한 bisbenzylisoquinoline alkaloid 유도체에 속하는 nuciferine은 부정맥을 비롯해서 심혈관계 질환 예방 효과가 있는 것으로 보고되었다.The main component of lotus root is carbohydrate, which is known to be rich in water-soluble dietary fiber, which reduces cholesterol content in the body and prevents constipation and obesity. Lotus root is rich in lecithine, a phospholipid. Because lecithine is emulsifying, it prevents the deposition of cholesterol in the walls of blood vessels. It also produces acetylcholine, a neurotransmitter, which inhibits memory loss and is known to prevent dementia. Also, when cutting the lotus root, sticky mucus comes out like a thread, which is a mucin glycoprotein (mucin) has been reported to reduce cholesterol, protect the stomach wall and detoxify. Studies on the efficacy of physiologically active substances of lotus root include the hypotensive effect of lotus root ethanol extract, the prevention of diabetes, the anticancer effect and the kidney protection effect. It has been reported to be effective in preventing related diseases.

연근은 주성분인 전분 이외에도 비타민과 무기질 함량이 높아서 예부터 생채로 먹거나 조리 시 아삭아삭한 입 촉감이 있어 주로 정과나 조림 등으로 식용되어 왔다. 최근에는 주스, 기능성 음료, 선식 등의 다양한 형태로 개발되고 있으며 잎과 꽃은 주로 차로 이용되고 있다.Lotus root has high vitamin and mineral content in addition to starch, which is the main ingredient, and has been eaten as raw vegetables or has a crisp mouth feel when cooked. Recently, it has been developed in various forms, such as juice, functional drinks, wire type, and leaves and flowers are mainly used as tea.

연근은 전국 각지에서 조금씩 재배가 되지만 주로 광주와 전남 나주, 전북 이리, 경남 함안, 경북 구미, 서울 근교 등에서 재배가 많이 이루어진다. 그동안 주로 노지재배에 의존해 왔으나 수요증가에 따라 보통재배, 터널재배, 하우스재배 등의 작형이 개발되었다. 생산량은 1990년대에 들어오면서 재배면적은 크게 늘어났으나 생산량은 크게 증가하지 못했다. 1997년 약 2천2백여 톤이 생산되었고, 10a당 수량은 4,409kg이다. 전국 연근 재배면적 510ha 중 220ha가 대구 및 인근 지역에 집중되어 있으며 대구에서 생산되는 농산물 가운데 전국에서 가장 큰 비중을 차지하는 것은 연근이 유일한 작물로 대구의 대표적인 특산물이라 할 수 있다. Lotus root is cultivated little by little in the whole country, but mainly in Gwangju, Jeonnam Naju, Jeonbuk Iri, Gyeongnam Haman, Gyeongbuk Gumi and Seoul suburbs. In the meantime, they have relied mainly on open land cultivation, but according to the increase in demand, the works such as ordinary cultivation, tunnel cultivation and house cultivation were developed. The production volume increased greatly in the 1990s, but the output did not increase significantly. In 1997, about 2,200 tonnes were produced, yielding 4,409 kg per 10a. Of the 510 hectares of the nation's lotus root cultivation area, 220 hectares are concentrated in Daegu and the neighboring regions, and the largest crop in the nation is the lotus root, which is the representative specialty of Daegu.

한편 전국 각 지역에는 그 지역을 대표하는 특산주가 있으며 최근 농림부의 “전통주 산업 육성 정책” 발표에 따라 각 지방자치단체를 중심으로 1지역 1특산주 개발이 활발하게 진행되고 있다. 그러나 이미 연근에 대한 연구는 각 지자체마다 활발하게 진행이 되어 비슷한 유의 상품이 많이 나오고 있다. 본 발명에서는 연근의 생리활성 중 보습효과 및 미백효과의 기능성을 중시하여 연을 이용한 샴푸와 린스를 산학연 공동으로 연구한 결과를 제시하고자 한다.Meanwhile, there are specialty liquors that represent the region in each region of the country. Recently, according to the Ministry of Agriculture and Forestry's announcement of the "traditional liquor industry promotion policy", the development of one region and one specialty liquor is being actively carried out by each local government. However, research on lotus root has been actively conducted in each municipality, and many similar products are coming out. The present invention intends to present the results of joint research on shampoo and rinse using lotus based on the functionality of moisturizing effect and whitening effect among physiological activities of lotus root.

본 발명은 상기한 취지에서 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 연근의 열수추출물을 함유하는 샴푸와 린스용 조성물 및 그 조성물을 함유하는 샴푸와 린스를 실현할 수 있도록 함으로써 연근의 우수성을 화장품에 응용하고 나아가 대구 특산물의 활용도를 극대화하여 이를 이용한 부가가치 창출과 소비 증대를 꾀하는 데 있다.The present invention has been made in view of the above, and an object of the present invention is to apply the superiority of lotus root to cosmetics by realizing the composition for shampoo and rinse containing hot water extract of lotus root and the shampoo and rinse containing the composition. Furthermore, it is aimed at creating added value and increasing consumption by maximizing the utilization of Daegu specialty products.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 샴푸와 린스용 조성물은, 연근의 열수추출물을 포함하는 것을 특징으로 한다.Shampoo and rinse composition of the present invention for achieving the above object is characterized in that it comprises a hot water extract of lotus root.

이때 위에서 연근의 열수추출물은 추출시간 8~12시간, 추출온도 90~96℃, 추출비율 27~32㎖/g의 조건으로 하여 추출되는 것을 특징으로 한다.At this time, the hot water extract of lotus root is extracted under the conditions of extraction time 8 ~ 12 hours, extraction temperature 90 ~ 96 ℃, extraction ratio 27 ~ 32ml / g.

본 발명은 또한 위 각 조성물을 함유하는 샴푸와 린스인 것을 특징으로 한다.The present invention is also characterized in that the shampoo and rinse containing each of the above compositions.

본 발명에 따른 연수의 열수추출물을 함유하는 샴푸는, 연근의 열수 추출물 3중량%, 이디티에이-이나트륨(EDTA-2Na) 0.03중량%, 폴리쿼터(Polyquaternium) 0.1중량%, 암모니움라우릴설페이트(Ammonium lauryl sulfate) 4.05중량%, 암모니움라우레스설퍼이트(Ammonium laureth sulfate 15.5중량%, 코카이도 프로필 베타인 (Cocamido propyl betaine) 6.0중량%, 프로필렌 글리콜(Propylene glycol) 2.0중 량%, 나트륨크실렌설포네이트(Sodium xylene sulfonate) 2.0중량%, 메틸 파라벤(Methyl paraben) 0.15중량%, 글리콜 다이스테라이트(Glycol distearate) 3.0중량%, 코카마이드 디에탄올아민(Cocamide DEA(diethanolamine)) 1.0중량%, 라우라미드 디에탄올라민(Lauramide DEA(diehtanolamine)) 1.0중량%, 살리실산(Salicylic acid) 0.13중량%, 실리콘에멀젼(Silicon emulsion) 3.0중량%, 카톤 CG(Kathon-CG (Methylchloroisothiazolinone-Meghylisoghiazolinone)) 0.02중량%, 향료 1.0중량% 및 나머지 물로 이루어진 것을 특징으로 한다.Shampoo containing the hot water extract of soft water according to the present invention, 3% by weight of hot water extract of lotus root, 0.03% by weight of EDTA-2Na, polyquaternium 0.1% by weight, ammonium lauryl sulfate ( Ammonium lauryl sulfate 4.05%, Ammonium laureth sulfate 15.5%, Cocado propyl betaine 6.0%, Propylene glycol 2.0%, Sodium xylene 2.0% by weight of sodium xylene sulfonate, 0.15% by weight of methyl paraben, 3.0% by weight of glycol distearate, 1.0% by weight of cocamide DEethanolamine (Laura) Mid weight ethanolamine (Lauramide DEA (diehtanolamine) 1.0% by weight, salicylic acid (0.13% by weight), silicone emulsion (3.0% by weight), carton CG (Kathon-CG (Methylchloroisothiazolinone-Meghylisoghiazolinone) 0.02% by weight, Spices 1.0 % By weight and is characterized in that the rest consisting of water.

또한 본 발명에 따른 연수의 열수추출물을 함유하는 린스는, 연근의 열수 추출물 3중량%, 이디티에-이나트륨(EDTA-2Na) 0.03중량%, 폴리쿼터(Polyquaternium) 0.15중량%, 세트리모늄 클로라이드(Cetrimonium chloride) 4.58중량%, 프로필렌 글리콜(Propylene glycol) 3.0중량%, 메틸 파라벤(Methyl paraben) 0.1중량%, 세토스테아릴 알코올(Cetostearyl alcohol) 4.0중량%, 아라셀 165(Aracel-165) 0.5중량%, 파라핀왁스(Paraffin wax) 1.5중량%, 글리콜 다이스테라이트(Glycol distearate) 1.0중량%, 부틸파라벤(Butyl paraben) 0.05중량%, 실리콘에멀젼(Silicon emulsion) 2.0중량%, 알로에추출물(Aloe extract) 0.1중량%, 카톤 CG (Kathon-CG(Methylchloroisothiazolinone-Meghylisoghiazolinone))0.02중량%, 프라크란스(향료-Fragrance) 0.6중량 및 나머지 물로 이루어진 것을 특징으로 한다.In addition, the rinsing containing the hot water extract of soft water according to the present invention, 3% by weight of hot water extract of lotus root, 0.03% by weight of editie-disodium (EDTA-2Na), 0.15% by weight of polyquaternium, cetrimonium chloride (Cetrimonium chloride) 4.58 wt%, Propylene glycol 3.0 wt%, Methyl paraben 0.1 wt%, Cetostearyl alcohol 4.0 wt%, Aracel 165 (Aracel-165) 0.5 wt% %, Paraffin wax 1.5 wt%, Glycol distearate 1.0 wt%, Butyl paraben 0.05 wt%, Silicone emulsion 2.0 wt%, Aloe extract 0.1 wt%, carton CG (Kathon-CG (Methylchloroisothiazolinone-Meghylisoghiazolinone)) 0.02 wt%, Fragrance (fragrance-Fragrance) is characterized in that consisting of 0.6% and the remaining water.

이때 알로에 추출은 알로에 동결건조 분말에 증류수를 가하여 60℃에서 24시간 추출한 후 감압여과하고 40℃에서 감압농축하여 사용하였다.At this time, aloe extract was added to the aloe lyophilized powder, and extracted with distilled water at 60 ° C. for 24 hours, followed by filtration under reduced pressure and concentrated under reduced pressure at 40 ° C.

위에서 향료는 널리 공지된 것으로 그 구체적인 성분은 본 발명의 요지가 아 닌바, 시중에서 판매하는 것 중 원하는 향으로 골라서 넣을 수 있다.The above fragrance is well known and its specific components are not the gist of the present invention, and may be selected and added to the desired fragrance among commercially available.

상기한 구성의 본 발명에 따르면, 연근이 본래 가지고 있는 기능성에 더하여 천연 자연 재료를 이용함으로써 인체의 부작용을 없애는 한편 연근의 활용도를 다변화할 수 있음은 물론 연근 재배 농가 소득의 향상에 일조할 수 있다.According to the present invention having the above-described configuration, by using the natural natural materials in addition to the functionality of the lotus root can eliminate the side effects of the human body while diversifying the utilization of the lotus root can also contribute to the improvement of the lotus root cultivated farm income .

이하, 본 발명을 실험예와 함께 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with an experimental example.

Ⅰ. 실험재료 및 방법Ⅰ. Materials and Methods

1. 중심합성계획법에 의한 반응표면분석법을 이용한 연근의 열수 추출 조건의 최적화 1. Optimization of Hot Water Extraction Conditions of Lotus Root Using Response Surface Methodology by Central Synthesis Planning

1) 추출조건의 최적화를 위한 중심합성계획1) Central Synthesis Plan for Optimization of Extraction Conditions

연근의 열수 추출물은 반응표면분석법(response surface methodology, RSM)을 이용하여 최적의 추출조건의 예측과 추출물의 이화학적 특성을 모니터링하였다. 추출조건의 최적화를 위한 실험계획은 중심합성계획법(central composite design)에 의하여 설계하였고, 반응표면분석 회귀분석을 위해서는 SAS(statistical analysis system) 프로그램을 사용하였다(Montgomery 등, 1997; Mead 등, 1975; Haaland 등, 1989; Youn 등. 2002; Kim 등 2001; Yoon 등 1997;박 등, 2005). 중심합성계획에 의한 독립변수(Xi)의 실험계획은 추출공정에서 중요한 변수로 고려되는 인자, 즉 추출시간(boiling time : X1), 추출온도(temperature : X2) 및 추출부피(solvent ratio : X3)를 Table 1에서 보는 바와 같이 -1, 0, 1의 3단계로 부호화하여 중심합성계획에 따라 16구로 설정하여 추출실험을 실시하였다. 추출시간(X1)은 8, 10, 12 시간, 추출온도(X2)는 80, 90, 100℃ 및 추출부피(X3)는 10, 20, 30㎖/g으로 구성하였다(Table 1). 또한 이들 요인변수에 의해 영향을 받는 종속변수(Yn)는 추출물의 품질인자로서 Brix %(Y1), 추출건조중량(Y2), 총당(Y3), 단백질(Y4), 항산화(Y5) 그리고 항암활성(Y6)으로 하였으며, 이들은 3회 반복 측정하여 그 평균값을 회귀분석에 사용하였다. 연근의 열수추출을 최적화하기 위한 중심합성계획은 Table 2에 나타내었다.The hot water extract of lotus root was predicted by the optimum surface methodology (RSM) and the physicochemical characteristics of the extract were monitored. The experimental design for the optimization of the extraction condition was designed by central composite design, and the SAS (statistical analysis system) program was used for the response surface analysis regression analysis (Montgomery et al., 1997; Mead et al., 1975; Haaland et al., 1989; Youn et al. 2002; Kim et al. 2001; Yoon et al. 1997; Park et al., 2005). The experimental design of the independent variable (Xi) by the central synthesis plan is a factor considered as an important variable in the extraction process: extraction time (X1), extraction temperature (X2), and solvent volume (X3). As shown in Table 1, the extraction experiment was conducted by encoding 16 steps according to the central synthesis plan by encoding -3, -1, 0, 1 in three steps. Extraction time (X1) was composed of 8, 10, 12 hours, extraction temperature (X2) was 80, 90, 100 ℃ and extraction volume (X3) was composed of 10, 20, 30mL / g (Table 1). In addition, the dependent variables (Yn) affected by these factor variables were Brix% (Y1), extract dry weight (Y2), total sugar (Y3), protein (Y4), antioxidant (Y5) and anticancer activity. (Y6), and these measurements were repeated three times and the average value was used for the regression analysis. The central synthesis plan to optimize the hot water extraction of lotus root is shown in Table 2.

2) Birx % 측정2) Birx% measurement

연근의 조건별 추출물를 Brix 측정계(Pocket REFRACTOMETER PAL-1, Japan)를 이용하여 측정하였다. 3회 반복 측정하여 평균값을 나타내었다.Condition-specific extracts of lotus root were measured using a Brix meter (Pocket REFRACTOMETER PAL-1, Japan). The measurement was repeated three times to show the average value.

3) 추출건조물(㎎/㎖)3) Extract dried product (mg / ml)

각 조건별로 추출한 시료의 건조중량 측정은 Dry oven을 이용하여 완전히 건조시킨 후 남은 고형물의 양을 ㎖당 ㎎으로 표시하였다.In the dry weight measurement of the sample extracted for each condition, the amount of solids remaining after completely drying using a dry oven was expressed in mg per ml.

4) 총 당 측정4) Measure per total

총 당은 글루코스를 표준물질로 하여 안트론 방법(Anthrone method)으로 측정하였다. 상기 제조한 연근의 조건별 열수 추출물 200㎕를 안트론 시약(0.1g 안트론/76% 황산) 1㎖와 혼합하였다. 혼합물을 12분 동안 90℃에서 가열하고, 실온에서 식힌 후 분광광도계로 620nm에서 흡광도를 측정하였다.Total sugar was measured by the Antrone method using glucose as a standard. Conditional hot water extract of the lotus root of the prepared above 200μl was mixed with 1ml of anthrone reagent (0.1g antron / 76% sulfuric acid). The mixture was heated at 90 ° C. for 12 minutes, cooled at room temperature and the absorbance measured at 620 nm with a spectrophotometer.

5) 단백질량 측정5) Protein amount measurement

단백질량은 BCA assay 방법으로 측정하였다. BCA assay는 단백질에 의해서 Cu²⁺가 Cu⁺로 환원되어 청록색에서 보라색으로 변화하는 것을 이용한 방법이다. 표준물질로 BSA(Bovine serum albumin)을 사용하였다. 연근의 조건별 추출물을 증류수를 이용하여 2배수씩 희석한다. 추출물 25㎕를 BCA working solution 200㎕에 혼합한 후 37℃에서 30분간 반응시킨다. 분광광도계로 562nm에서 흡광도를 측정한다. The amount of protein was measured by the BCA assay method. The BCA assay is a method in which Cu ²⁺ is reduced to Cu ⁺ by the protein and is changed from cyan to purple. BSA (Bovine serum albumin) was used as a standard. Diluted with each condition of lotus root by distilled water two times. 25 μl of the extract is mixed with 200 μl of BCA working solution and reacted at 37 ° C. for 30 minutes. Absorbance is measured at 562 nm with a spectrophotometer.

6) 항산화(DPPH) 시험6) Antioxidant (DPPH) Test

DPPH assay는 물질의 free radical scavenging activity를 측정하는 방법이다. 본 시험에서는 기존의 시험방법을 변형하여 96 well plate를 이용하여 실시하였다. 표준물질로 ascorbic acid를 사용하였다. 연근의 조건별 추출물을 10㎕를 DPPH solution (100uM in 95% ethanol) 200㎕에 혼합 한 후 37℃에서 30분간 반응시킨 후 분광광도계로 517nm에서 흡광도를 측정하였다.The DPPH assay measures the free radical scavenging activity of a substance. In this test, a 96-well plate was used by modifying the existing test method. Ascorbic acid was used as a standard. 10 μl of the extract of each lotus root condition was mixed with 200 μl of DPPH solution (100 uM in 95% ethanol), and then reacted at 37 ° C. for 30 minutes, and the absorbance was measured at 517 nm with a spectrophotometer.

7) 항암활성 - Microculture Tetrazolium Method7) Anticancer Activity-Microculture Tetrazolium Method

항암활성 측정을 위하여 마우스유래 종양 세포주 암세포주인 sarcoma 180을 한국세포주은행(KOREAN CELL LINE BANK)에서 분양받았다. 종양세포주의 배양 및 유지를 위한 배지는 RPMI 1640을 이용하였으며 fetal bovine serum(FBS) 10%를 첨가하고 penicillin과 streptomycin을 100 units/ml와 100 mg/ml의 농도가 되게 배양액에 첨가하였다. 암세포는 37℃에서 5% CO₂ 세포 배양기에서 배양하여 microculture tetrazolium(MTT)법을 사용하였다. 염색된 세포들은 microplated reader(Molecular Devices, USA)를 이용하여 540nm에서 그 흡광도를 측정하였다. 종양세포들에 대한 시험물질의 효과를 평가하기 위하여 세포수의 측정은 시험물질을 처치한 well의 흡광도를 시험물질을 처치하지 않은 음성대조군 well의 흡광도를 나누어 %로 나타내었다. To determine anticancer activity, sarcoma 180, a mouse-derived tumor cell line cancer cell line, was distributed by KOREAN CELL LINE BANK. RPMI 1640 was used as a culture medium for the maintenance and maintenance of tumor cell lines. 10% fetal bovine serum (FBS) was added, and penicillin and streptomycin were added to the culture medium at 100 units / ml and 100 mg / ml. Cancer cells were cultured in a 5% CO ₂ cell incubator at 37 ℃ using a microculture tetrazolium (MTT) method. Stained cells were measured for absorbance at 540 nm using a microplated reader (Molecular Devices, USA). In order to evaluate the effect of the test substance on the tumor cells, the cell number was measured by expressing the absorbance of the well treated with the test substance in% divided by the absorbance of the negative control well without the test substance.

8) 회귀분석(Analysis of regression)8) Analysis of regression

최적의 연근추출물 생산을 위한 최적화를 위하여 예비실험을 기초로 반응표면분석법을 이용하였다. 중심합성계획에 의하여 18개의 추출조건을 설계하여 나타내었다. 모든 실험의 결과는 SAS (version 9.2, SAS Institute Inc., Cary, NC)를 이용하여 분석하였다. 2차 회귀방정식은 다음과 같다. 종속변수(Yn)는 추출물의 품질인자로서 Brix(Y1), 추출건조중량(Y2), 총당(Y3), 단백질(Y4), 항산화(Y5) 그리고 항암활성(Y6)은 다음과 같다.Response surface methodology was used based on preliminary experiments to optimize the optimum production of lotus root extract. Eighteen extraction conditions were designed and presented by the central synthesis plan. The results of all experiments were analyzed using SAS (version 9.2, SAS Institute Inc., Cary, NC). The quadratic regression equation is Dependent variable (Yn) is the quality factor of extract, Brix (Y1), extract dry weight (Y2), total sugar (Y3), protein (Y4), antioxidant (Y5) and anticancer activity (Y6).

여기에서, 중심합성계획에 의한 독립변수(Xi)의 실험계획은 추출공정에서 중요한 변수로 고려되는 인자, 즉 추출시간(X1), 추출온도(X2) 및 추출부피(X3)를 -1, 0, 1의 3단계로 부호화하여 중심합성계획에 따라 16구로 설정하여 추출실험을 실시하였다. Here, the experimental design of the independent variable (Xi) by the central synthesis plan is a factor considered as an important variable in the extraction process, that is, extraction time (X1), extraction temperature (X2) and extraction volume (X3) -1, 0 The extraction experiment was carried out by encoding 16 steps according to the central synthesis plan.

2. 연근추출물의 피부자극 및 안자극시험2. Skin irritation and eye irritation test of lotus root extract

1) 시험물질1) Test substance

본 연구에 사용한 연근추출물은 본 발명에 따라 최적의 추출조건에서 추출된 원료(KNUVPT-1)로 삼푸 및 린스에 들어갈 원료이다. 추출물은 100ml로 진공농축을 한 후 동결건조를 실시하였다. 동결건조된 연근추출물을 갖고 피부자극 및 안자극시험을 실시하였다.Lotus root extract used in this study is the raw material to be entered into Samfu and rinse as the raw material (KNUVPT-1) extracted under the optimum extraction conditions according to the present invention. The extract was concentrated in vacuo to 100 ml and then lyophilized. Freeze-dried lotus root extracts were tested for skin and eye irritation.

2) 시험동물 및 사육환경 2) Test animal and breeding environment

본 연구에서는 4개월령의 New Zealand White 계통의 수컷토끼를 효창상사 (대구)로부터 구입하여 1주일간의 순화 및 검역을 거친 후 시험에 공시하였다. 본 계통의 토끼는 피부자극시험에 일반적으로 많이 사용되는 종으로서, 동일한 조건하에서 사람 피부보다 예민하게 반응하며 또한 비교적 풍부한 시험 기초자료가 있어 시험결과의 해석 및 평가가 용이하여 선택되었다. 입수 시 8마리(체중, 2.45±0.22kg)를 구입하여 피부에 이상이 없고 건강한 4마리를 선발하여 시험에 이용하였다. 사육조건은 온도 22±3℃, 상대습도 50±20%, 환기횟수 12~15회/시간, 조명 150~300Lux로 12시간(인공조명, 오전 8시~오후 8시)으로 하였으며, 순화, 검역 및 시험기간 동안 3단 4열의 사육상자대에 배열된 스테인레스제 사육상자(420W×500L×300H mm)에 개체별로 수용하였다. 사육상자에는 시험번호와 동물번호를 기재한 개체식별카드를 부착하였다. 사료는 토끼용 고형사료(퓨리나 코리아, 평택)를, 물은 상수도수를 자유섭취 시켰다. In this study, male rabbits of New Zealand White strains, 4 months old, were purchased from Hyochang Corporation (Daegu) and subjected to a week-long purifying and quarantine test. Rabbits of this strain are generally used for skin stimulation tests, and they were selected because they react more sensitively than human skin under the same conditions and have relatively abundant basic data for test. Eight rats (weight, 2.45 ± 0.22 kg) were purchased at the time of purchase, and four healthy healthy rats were selected and used for the test. Breeding conditions were temperature 22 ± 3 ℃, relative humidity 50 ± 20%, ventilation frequency 12 ~ 15 times / hour, lighting 150 ~ 300Lux for 12 hours (artificial lighting, 8:00 am to 8:00 pm). During the test period, individual cages were housed in stainless cages (420W × 500L × 300H mm) arranged in three rows and four rows of cages. The breeding box was affixed with an identification card containing the test number and animal number. For feed, rabbits were fed solid feeds (Purina Korea, Pyeongtaek) and water was freely ingested.

3) 시험군의 구성 및 시험물질의 적용 3) Composition of test group and application of test substance

시험물질을 적용하기 위해 적용 전날에 동물의 배부(가로세로 약 15cm씩)를 동물용 전기제모기로 제모 하였다. 동물의 척추를 중심으로 좌우 각각 2개소(각각 찰과 및 비찰과 부위, 2.5cm×2.5cm 크기)를 설정하여, 좌측구획은 무처치 대조구획으로, 우측구획은 시험물질을 적용하는 처치구획으로 정하여 시험하였다. 찰과는 주사침을 이용하여 표피만 손상되고 출혈이나 진피에 손상이 가지 않을 정도로 "#" 모양으로 실시하였다. 투여 당일 오전에 연근추출물 500mg/ml를 우측의 찰과 부위 1개소와 비찰과부위 1개소에 각각 0.5ml를 적용하였고, 대조구획에는 처치를 하지 않았다. 적용 후 처치구획 및 대조구획을 거즈로 덮은 후 비자극성 테이프로 잘 고정하여 24시간 동안 적용시켰다. 시험물질을 적용하고, 24시간 경과 후 잔류하는 시험물질을 제거하기 위해 미온수로 적용부위를 부드럽게 세정해 주었다. In order to apply the test substance, the animal's distribution (approximately 15 cm wide) was epilated on the day before application with an animal epilator. The left and right compartments are treated as untreated controls and the right compartment is treated as a treatment compartment to which the test substance is applied. And tested. Abrasions were performed in the shape of a "#" so that only the epidermis was damaged and the bleeding or dermis were not damaged using the needle. On the morning of the day of administration, 500mg / ml of lotus root extract was applied to 0.5 ml of the abrasion site and 1 non-abrasion site on the right side, respectively, and the control compartment was not treated. After application, treatment and control sections were covered with gauze and fixed with non-irritating tape for 24 hours. The test material was applied, and after 24 hours, the application area was gently cleaned with lukewarm water to remove the remaining test material.

4) 일반증상 및 사망의 관찰4) Observation of general symptoms and death

검역 및 순화기간에는 매일 1회씩 모든 동물에 대해 관찰하였고, 시험물질 적용기간에는 투여 전과 후에 1회씩 일반증상 및 사망의 유무에 관하여 관찰하였다. 단, 이상 증상이 발현되면 증상의 종류, 발현일 및 증상의 정도를 개체별로 기록하였다. All animals were observed once daily during the quarantine and purifying periods, and general symptoms and deaths were observed before and after administration during the test substance application period. However, if abnormal symptoms were expressed, the type of symptoms, the date of expression and the degree of symptoms were recorded for each individual.

5) 체중측정 5) weight measurement

동물 입수 시와 시험물질 적용 전, 적용 후 1일 및 3일째에 개체별 체중을 측정하였다. Individual body weights were measured at the time of animal acquisition and before and after application of test substance.

6) 적용부위의 관찰 및 자극성의 평가6) Observation of applied site and evaluation of stimulus

적용부위의 피부반응 평가는 식품의약품안전청의 "의약품등의독성시험기준"에 표시된 피부반응의 평가기준에 따라 실시하였다. 24시간 동안 시험물질을 적용한 후 패치를 제거하여 24시간째(패치 제거 직후) 및 72시간째(패치 제거 후 48시간째)에 유발된 홍반(erythema)과 가피(eschar), 부종(edema) 등의 자극성 반응을 관찰하였다. 모세혈관의 울혈에 의한 피부 발적 등 여러 가지 원인으로 인하여 혈 액에 의해 피부에 나타난 적색반응은 홍반으로 평가하였고, 부식작용 또는 괴저에 의하여 생긴 피부조직의 부육상태는 가피로 하였으며, 체액이 피하조직에 축적되어 부어 오른 것은 부종으로 평가하였다. 결과에 대한 자극성의 정도판정은 일반적으로 많이 이용되는 Draize(1944)의 일차피부자극지수(primary skin irritation index, PII)의 산출방법에 따랐다.The skin reaction evaluation of the applied area was carried out according to the evaluation criteria of the skin reaction indicated in the "Toxicity Test Standards of Drugs, etc." of the Agency. After applying the test material for 24 hours, the patch was removed to cause erythema, eschar, edema, etc. induced at 24 hours (immediately after patch removal) and 72 hours (48 hours after patch removal). The irritant response of was observed. The redness of the skin caused by blood was evaluated by erythema due to various causes such as skin redness due to congestion of capillaries. The swelling state of skin tissue caused by erosion or necrosis was covered by skin. Accumulation and swelling in the eyes was evaluated as edema. The determination of the degree of stimulus for the results was based on the commonly used method of calculating the primary skin irritation index (PII) of Draize (1944).

3. 연근의 열수추출물을 이용한 삼푸 및 린스의 제조3. Preparation of Samfu and Rinse Using Hot Water Extract of Lotus Root

<제조방법><Manufacturing Method>

1) 비이커에 순수를 평량한다.1) Weigh pure water in a beaker.

2) 2, 3의 원료를 넣고 교반 용해한다. 3 원료는 약 30분~1시간 교반하여야 용해된다.2) Add the raw materials of 2 and 3 and dissolve by stirring. 3 The raw materials are dissolved after stirring for about 30 minutes to 1 hour.

3) 온도를 70~75℃로 유지하여 4,5,6,7,8 원료를 투입 용해한다.3) Keep the temperature at 70 ~ 75 ℃ and dissolve 4,5,6,7,8 raw materials.

4) 온도를 유지하며 9,10 원료를 넣고 용해한다.4) Maintain temperature and add 9,10 raw material to dissolve.

5) 11,12,13 원료를 넣어 잘 교반하며 용해한다. 완전히 용해 된 것을 확인한 후 45℃ 정도까지 냉각한다.5) Add 11,12,13 raw materials and stir well to dissolve. After checking that it is completely dissolved, cool it to about 45 ℃.

6) 14, 15 원료를 넣고 혼합 교반한다.6) Add 14 and 15 raw materials and stir with mixing.

7) 마지막으로 향(이 향료는 널리 공지된 것으로 시중에서 판매하는 것 중 원하는 향으로 골라서 넣을 수 있다)과 연근의 열수추출물을 넣고 잘 교반한 후 냉각하여 제품화한다. 7) Finally, incense (this fragrance is well-known and can be added to the desired incense in the market) and hot water extract of lotus root and stirred well, then cooled and commercialized.

<제조방법><Manufacturing Method>

1) 비이커에 순수를 평량한다.1) Weigh pure water in a beaker.

2) 2, 3의 원료를 넣고 교반 용해한다. 3 원료는 약 30분~1시간 교반하여야 용해된다.2) Add the raw materials of 2 and 3 and dissolve by stirring. 3 The raw materials are dissolved after stirring for about 30 minutes to 1 hour.

3) 용해 후 4, 5, 6 원료를 넣고 70℃까지 가열한다.3) After melting, add 4, 5, 6 raw materials and heat to 70 ℃.

4) 다른 비이커에 7, 8, 9, 10, 11 원료를 넣고 70℃까지 가열 용해한다.4) Put 7, 8, 9, 10, 11 raw materials in another beaker and heat it to 70 ℃.

5) 온도를 유지하며 4)의 비이커의 제조물을 메인 비이커에 서서히 첨가하며 유화한다. 약 5~10분 정도 교반 후 서서히 45℃까지 냉각한다.5) Maintain the temperature and slowly emulsify the preparation of beaker 4) into the main beaker. After stirring for about 5-10 minutes, it is slowly cooled to 45 ℃.

6) 12, 13, 14 원료를 넣고 혼합 교반한다.6) Add 12, 13, 14 raw materials and stir with mixing.

7) 마지막으로 향(이 향료는 널리 공지된 것으로 시중에서 판매하는 것 중 원하는 향으로 골라서 넣을 수 있다)과 연근의 열수추출물을 넣고 잘 교반한 후 냉각하여 제품화한다.7) Finally, incense (this fragrance is well-known and can be added to the desired incense in the market) and hot water extract of lotus root and stirred well, then cooled and commercialized.

위와 같이 제조한 샴푸와 린스를 마우스에서 접촉성 피부염에 대한 효과를 알아보기 위하여 실험을 수행하였다. Balb/c 마우스를 대상으로 DNCB(2,4-dinitrochlorobenzene)를 도포하여 접촉성 피부염을 유발시킨 다음, 샴푸와 린스를 100mg/ml로 희석시킨 후 피부에 1일 3회 반복 적용하여 접촉성 피부염의 감소 및 염증의 회복효과 등을 확인하였다.The shampoo and rinse prepared as described above were tested to determine the effect on contact dermatitis in mice. Induced contact dermatitis by applying DNCB (2,4-dinitrochlorobenzene) to Balb / c mice, and then dilute shampoo and rinse to 100mg / ml and apply to skin three times a day. The reduction and restorative effect of inflammation were confirmed.

실험동물은 실험동물 수를 최소화하여 4-5주령의 웅성 Balb/c마우스 20두를 이용하였다. 실험동물은 오리엔트(성남, 경기)에서 구입하여, 7일간 순화한 후에 이용하였다. 동물실의 실내환경은 온도 21±2℃, 습도 50±5%, 명암주기 12시간으로 유지하였으며 사료(#5057, 퓨리나코리아, 서울)와 음수(여과살균정제수)는 자유공급하였다.Experimental animals were used with 20 male Balb / c mice, 4-5 weeks old, to minimize the number of experimental animals. Experimental animals were purchased from Orient (Seongnam, Gyeonggi) and used after 7 days of purification. The indoor environment of the animal room was maintained at a temperature of 21 ± 2 ℃, a humidity of 50 ± 5%, and a contrast cycle of 12 hours. The feed (# 5057, Purina Korea, Seoul) and the negative water (filter sterilization water) were freely supplied.

실험군은 정상 마우스군(5마리), 접촉성 피부염 + 멸균수의 대조군(5마리), 접촉성 피부염 + 샴푸 실험군(5마리) 그리고 접촉성 피부염 + 린스 실험군(5마리)의 총 4개 실험군으로 분류하였고 각 군당 5두의 마우스를 임의 배치하였다.The experimental group consisted of four groups: normal mouse group (5 animals), contact dermatitis + control group of sterile water (5 animals), contact dermatitis + shampoo experiment group (5 animals), and contact dermatitis + rinse test group (5 animals). Five mice were randomly placed in each group.

DNCB로 유발된 알러지성 접촉성 피부염은 T 림프구와 대식세포 등에 의한 세포 매개성 과민반응, 정상 피부보다 부풀어 오르며 발적 현상을 발생하며 상부 진 피층에 염증세포의 침윤, 부종 발생, 피부의 두께를 증가시킨다. DNCB를 acetone과 olive 혼합액(4:1 비율)에 5%가 되게 용해하여 정상군을 제외하고 대조군과 샴푸 및 린스투여군의 모든 마우스의 오른쪽 샅바위쪽 복부에 2㎠ 도포하여 1차 면역을 유도하였다. 1차 면역 후 매일 대조군에는 멸균수를, 실험군에는 샴푸와 린스를 오른쪽 귀 부위에 도포하였고, 7일째에 2.5% DNCB 4㎕를 오른쪽 귀에 도포하여 2차 감작을 일으켰다. 2차 감작 후 24, 48, 72시간 간격으로 vernical calipers를 사용하여 오른쪽 귀의 두께 측정하였고 ear swelling의 평균값을 구하여 각각의 차이를 비교하였다.Allergic contact dermatitis caused by DNCB causes cell-mediated hypersensitivity reactions such as T lymphocytes and macrophages, swelling and redness than normal skin, and infiltration of inflammatory cells in the upper dermis, the development of edema, and increased skin thickness. Let's do it. DNCB was dissolved in 5% acetone and olive mixture (4: 1 ratio), and 2 cm was applied to the right upper abdomen of all mice of the control group, the shampoo and the rinse group except the normal group to induce primary immunity. After the first immunization, sterile water was applied to the control group daily, and shampoo and rinse to the right ear area were applied to the control group, and on the 7th day, 4 μl of 2.5% DNCB was applied to the right ear to induce secondary sensitization. After the second sensitization, the thickness of the right ear was measured using vernical calipers at 24, 48, and 72 hours intervals. The average value of ear swelling was calculated and compared.

Ⅱ. 결과 및 고찰II. Results and Discussion

1. 중심합성계획법에 의한 반응표면분석법을 이용한 연근의 열수 추출 조건의 최적화1. Optimization of Hot Water Extraction Conditions of Lotus Root Using Response Surface Methodology by Central Synthesis Planning

연근의 조건별 추출물을 Brix 측정계를 이용하여 측정하였다. 그 결과 100℃에서 연근과 물을 1:10으로 한 경우에 Brix %가 일정하게 높은 수준을 보였고, 다 른 온도와 시간에서는 유의성 있는 변화를 보여주지 못했다. 건조중량을 추출비율로 봤을 경우 추출온도, 추출시간과 큰 영향 없이 연근과 물을 1:10에서 가장 많이 추출되는 것을 보여주고 있다. 당단백질의 개념에서 단백질 양을 측정한 결과 1:10의 비율로 12시간에서 추출이 잘되는 것으로 나타났다. 총당의 함량을 추출온도로 보면 100℃, 1:10의 비율로 12시간에서 추출이 잘되는 것으로 나타났다. 조건별 연근 추출물의 항산화 활성은 1:10의 비율의 조건에서 다른 조건과 상관없이 높은 경향을 보였고, 항암활성의 경우 1:10의 비율과 1:20 비율에 90℃의 조건에서 시간이 길수록 높은 결과를 보였다(Fig 1-1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6). Brix%, 건조중량, 총당, 단백질량, 항산화 활성 및 항암활성의 결과를 Table 3-1에 나타내었다. Brix%는 추출비율에서 유의성이 있었으며(p<0.0001), 건조중량은 추출비율(p<0.01), 추출온도(p<0.01) 그리고 추출비율(p<0.0001) 모두에서 유의성이 나타났다. 총당과 단백질의 경우는 추출비율에서 유의성이 나타났으며(p<0.01), 항산화활성과 항암활성의 경우 어느 조건에서 유의성 있는 결과를 보이지 않았다.Conditional extract of lotus root was measured using a Brix measuring system. As a result, Brix% showed a constant high level when lotus root and water were set at 1:10 at 100 ℃, and there was no significant change at other temperatures and times. When the dry weight was used as the extraction ratio, it showed that lotus root and water were most extracted at 1:10 without significant influence on extraction temperature and extraction time. In the concept of glycoprotein, the protein amount was measured and it was found that the extraction was good at 12 hours at a ratio of 1:10. The total sugar content was extracted at 12 ℃ for 100 ℃ and 1:10 ratio. Antioxidant activity of lotus root extract by condition showed a high tendency regardless of other conditions at the ratio of 1:10, and in the case of anticancer activity, the higher the time was at 90 ° C at the ratio of 1:10 and 1:20 Results were shown (Fig. 1-1, 1-2, 1-3, 1-4, 1-5, 1-6). The results of Brix%, dry weight, total sugar, protein amount, antioxidant activity and anticancer activity are shown in Table 3-1. Brix% was significant in extraction ratio (p <0.0001) and dry weight was significant in both extraction ratio (p <0.01), extraction temperature (p <0.01) and extraction ratio (p <0.0001). In the case of total sugar and protein, the extraction ratio was significant (p <0.01). Antioxidant and anticancer activity did not show significant results under any conditions.

측정된 Brix%, 건조중량, 총당, 단백질량, 항산화 활성 및 항암활성의 평균값을 이용하여 표면반응곡선에 대한 회귀분석을 수행하였다. 회귀분석의 결과는 Table 3-2에 나타내었다. Regression analysis was performed on the surface response curve using the average values of Brix%, dry weight, total sugar, protein amount, antioxidant activity and anticancer activity. The results of the regression analysis are shown in Table 3-2.

Table 3-2. 연근의 Brix%, 건조중량, 총 당, 단백질량, 항산화 활성 및 항암활성에 대한 회귀분석(Response surface model for extraction of Brix %, dry weight, total glucose, protein, antioxidant activity, and anti-tumor activity from Lotus roots) Table 3-2. Response surface model for extraction of Brix%, dry weight, total glucose, protein, antioxidant activity, and anti-tumor activity from Lotus roots)

Table 3-2에 나타난 바와 같이 Brix%의 회귀계수는 0.9875로 추출비율이 높을수록(p<0.0001) 높은 값을 나타내었다(Fig 1-7). 건조중량의 경우 회귀계수가 0.9970으로 추출온도가 높을수록(p<0.01), 추출시간이 길수록(p<0.01), 그리고 추출비율이 높을수록(P<0.0001) 수율이 높았다(Fig 1-8). 총당과 단백질의 회귀계수는 각각 0.9021과 0.9147로 추출비율이 높을수록(p<0.01) 함량이 높았다(Fig 1-9, 1-10). 그러나 항산화활성과 항암활성의 경우 회귀계수가 각각 0.7784와 0.7318로 추출조건에 대하여 유의성이 인정되지 않았다. 반응표면의 분석법은 그래프로서 최적화를 이루는 한 방법으로 등고선도를 이용하여 최적조건을 결정할 수 있다. 그러나 각 반응변수들의 반응표면은 정확하게 일치하지 않으므로, 적절한 제한조건을 필요로 하였다(Montgomery 등, 1997; Mead 등, 1975; Haaland 등, 1989). 따라서 주어진 실험조건 내에서 예비실험을 통해 얻어진 결과를 바탕으로 제한영역을 설정하고, 각 조건이 일치하는 지역이 중첩되는 등고선도(contour map)를 구하였다. 연근의 열수추출물의 최적수율조건을 Table 3-3에 나타내었다.As shown in Table 3-2, the regression coefficient of Brix% was 0.9875, which was higher as the extraction ratio was higher (p <0.0001) (Fig. 1-7). For dry weight, the regression coefficient was 0.9970 and the extraction temperature was higher (p <0.01), the extraction time was longer (p <0.01), and the extraction ratio was higher (P <0.0001), and the yield was higher (Fig. 1-8). . The regression coefficients of total sugar and protein were 0.9021 and 0.9147, respectively, and the higher the extraction ratio (p <0.01), the higher the contents (Fig. 1-9, 1-10). However, the regression coefficients were 0.7784 and 0.7318 for antioxidant activity and anticancer activity, respectively. Analysis of the response surface is one way of optimizing the graph, using contour plots to determine optimal conditions. However, the response surface of each response variable did not exactly match, so appropriate constraints were required (Montgomery et al., 1997; Mead et al., 1975; Haaland et al., 1989). Therefore, based on the results obtained through the preliminary experiments within the given experimental conditions, the limit region was set, and the contour map of overlapping regions matching each condition was obtained. The optimum yield condition of lotus root hot water extract is shown in Table 3-3.

위 표 3-3에서 보는 바와 같이 Brix(%)에 대한 연근의 열수추출물의 최적조건은 추출시간 10.66시간, 추출온도 90.34℃, 추출비율 27.76㎖/g이며, 3.8 Brix(%)에서 최대로 나타났다. 건조중량에 대한 연근의 열수추출물의 최적조건은 추출시간 10.57시간, 추출온도 91.13℃, 추출비율 27.24㎖/g이며 34.9㎎/㎖에서 최대로 나타났다. 당량에 대해서는 추출시간 8.28시간, 추출온도 79.83℃, 추출비율 31.77㎖/g 이며, 3.82㎎/㎖에서 최대로 나타났다. 단백질에 대한 연근의 열수추출물의 최적조건은 11.49시간, 추출온도 95.91℃, 추출비율 29.40㎖/g이며 4.37㎎/㎖에서 최대로 나타났다. 따라서 연근의 열수 추출물의 최적의 추출조건은 Brix(%), 건조중량, 총당, 단백질량을 기준으로 할 경우 추출시간 8~12시간, 추출온도 90~96 ℃, 추출비율 27~32㎖/g으로 결정할 수 있었다.As shown in Table 3-3 above, the optimum conditions of hot water extract of lotus root for Brix (%) were 10.66 hours extraction time, 90.34 ℃ extraction temperature, 27.76ml / g extraction ratio, and the maximum at 3.8 Brix (%). . The optimum conditions of hot water extract of lotus root for dry weight were extraction time of 10.57 hours, extraction temperature of 91.13 ℃, extraction ratio of 27.24ml / g and the maximum at 34.9mg / ml. As for the equivalent, the extraction time was 8.28 hours, the extraction temperature was 79.83 ° C, the extraction ratio was 31.77 ml / g, and the maximum was found at 3.82 mg / ml. The optimum conditions of hot water extract of lotus root for protein were 11.49 hours, extraction temperature of 95.91 ℃, extraction ratio of 29.40ml / g and the maximum at 4.37mg / ml. Therefore, the optimal extraction condition of hot water extract of lotus root was 8 ~ 12 hours extraction time, 90 ~ 96 ℃ extraction rate, and extraction ratio 27 ~ 32ml / g based on Brix (%), dry weight, total sugar and protein amount. Could decide.

Fig 1-7. 연근뿌리 추출조건의 추출물의 Brix %에 대한 효과를 나타낸 반응표면 곡선(위)과 등고선도(아래).Fig 1-7. Response surface curves (top) and contour plots (bottom) showing the effect of Brix% of extracts from lotus root extract conditions.

Fig 1-8. 연근뿌리 추출조건의 추출물의 건조중량(㎎/㎖)에 대한 효과를 나타낸 반응표면 곡선(위)과 등고선도(아래).Fig 1-8. Response surface curves (top) and contour plots (bottom) showing the effect on dry weight (mg / ml) of extracts of lotus root root extraction conditions.

Fig 1-9. 연근뿌리 추출조건의 추출물의 총당(㎎/㎖)에 대한 효과를 나타낸 반응표면 곡선(위)과 등고선도(아래).Fig 1-9. Response surface curves (top) and contour plots (bottom) showing the effect on total sugar (mg / ml) of extracts from lotus root extract conditions.

Fig 1-10. 연근뿌리 추출조건의 추출물의 단백질량(㎎/㎖)에 대한 효과를 나타낸 반응표면 곡선(위)과 등고선도(아래).Fig 1-10. Response surface curves (top) and contour plots (bottom) showing the effect on the amount of protein (mg / ml) of the extract of lotus root root extract conditions.

2. 연근추출물의 피부자극 및 안자극시험2. Skin irritation and eye irritation test of lotus root extract

1) 일반증상 및 사망률 1) General symptoms and mortality

토끼에서 시험물질의 1회 피부적용에 의한 일반증상 변화를 관찰한 결과 (Table 4-1), 시험물질의적용에 의한 이상증상이나 사망동물은 관찰되지 않았다. 시험물질 적용 후 식욕부진(anorexia) 그리고 운동성감소(decreased locomotor activity)는 관찰되지 않았으며, 실험기간 동안 사망한 동물은 관찰되지 않았으며. 시험물질의 투여에 기인된 일반증상은 인정되지 않았다. 시험기간 중 수컷토끼의 체중변화는 Table 4-1에서 보는 바와 같이 시험물질 적용 후 1일째의 체중과 시험 종료일인 3일째 체중을 비교한 결과 평균 0.29kg이 증가하여 정상적인 체중증가를 나타내었다.As a result of observing changes in general symptoms by one-time application of test substances in rabbits (Table 4-1), no abnormal symptoms or deaths caused by application of test substances were observed. Anorexia and decreased locomotor activity were not observed after application of the test substance, and no animals died during the study. General symptoms due to administration of the test substance were not recognized. As shown in Table 4-1, the weight change of male rabbits during the test period was 0.29kg on average after increasing the weight on the 1st day after the application of the test substance and on the 3rd day of the test.

2) 피부자극성의 평가 2) Evaluation of skin irritation

시험물질 적용 후 24시간 및 72시간째에 적용부위의 자극성을 평가한 결과는 Table 4-2, 4-3.에 요약하였다. 모든 동물의 대조구 및 처치구의 비찰과 구획에서는 어떠한 이상소견도 관찰되지 않았으며 찰과 구획에서도 어떠한 이상소견이 관찰되지 않았다(Fig 2). 상기 결과를 이용하여 Draize 법(1944)에 따라 일차피부자극성 정도를 평가한 결과, 연근추출물의 피부자극지수는 0으로써 비자극성 물질로 평 가되었다. The results of the evaluation of the irritation of the applied site at 24 hours and 72 hours after application of the test substance are summarized in Table 4-2 and 4-3. No abnormalities were observed in the control and treatment of the control and treatment of all animals and no abnormalities were observed in the friction and the compartment (Fig. 2). As a result of evaluating the degree of primary skin irritation according to the Draize method (1944) using the above results, the skin irritation index of lotus root extract was evaluated as a non-irritant substance.

연근추출물을 상품화로 응용을 하기 이전에 연근추출물의 일차피부자극성 잠재력과 안자극성 잠재력을 평가하였다. 피부자극성 시험결과 시험물질을 적용한 부위의 피부반응 관찰 시 시험물질 적용 후 24시간째에는 모든 동물의 대조구 및 처치구의 비찰과 구획에서는 어떠한 이상소견도 관찰되지 않았으며 찰과 구획에서도 어떠한 이상소견이 관찰되지 않았다. 상기 결과를 이용하여 Draize 법(1944)에 따라 일차피부자극성 정도를 평가한 결과, 연근추출물의 피부자극지수는 0으로써 비자극성 물질로 평가되어 의학적 응용이 가능한 것으로 생각된다. 안자극시험의 결과 시험물질 처치 후 처리구와 대조구 모두에서 7일간 아무런 이상증상을 보이지 않았다. 실험 결과 연근 추출물의 안자극성 지수는 0으로써 비자극성 물질로 평가되어 의학적 응용이 가능한 것으로 생각된다.Prior to application of lotus root extract as a commercial product, the primary skin irritation potential and ocular irritation potential of lotus root extract were evaluated. As a result of skin irritation test, no abnormalities were observed in the control and treatment of the control and treatment of all animals at 24 hours after application of the test substance. It wasn't. As a result of evaluating the degree of primary skin irritation according to the Draize method (1944) using the above results, the skin irritation index of the lotus root extract is 0, which is considered to be a non-irritating substance, which is considered to be possible for medical application. The eye irritation test showed no abnormalities for 7 days in both treatment and control groups after treatment with the test substance. As a result, the eye irritant index of lotus root extract was 0, which is evaluated as a non-irritant.

Fig 2. 연근 추출물 처치 후 피부 및 눈 자극성 평가를 한 사진[Photograph of skin and eye irritation test after treatment of lotus root extract in the rabbits]Fig 2. Photograph of skin and eye irritation test after treatment of lotus root extract in the rabbits

3. 샴푸와 린스의 피부 효과[Ear swelling(귀의 부종)에 대한 변화]3. Skin Effects of Shampoo and Conditioner [Changes on Ear Swelling]

지연형 과민반응에 관한 항원으로서 DNCB를 마우스의 오른쪽 샅바위 복부에 도포하여 인위적인 접촉성 과민반응을 유발시킨 후 마우스의 오른쪽 귀 피부의 swelling 정도를 측정하여 접촉성 과민반응을 측정한 결과는 Table 5와 같다. DNCB만을 처리하고 멸균증류수만을 도포한 대조군의 귀의 부종 두께는 정상군의 두께에 비하여 전 시간대에서 증가되었다. 이에 비하여 샴푸와 린스를 도포한 실험군은 대 조군에 비하여 48과 72시간에서 유의할 만한 감소를 나타내어 정상치에 가까운 수치를 나타내었다. 따라서 연근 원료가 첨가된 샴푸와 린스는 접촉성피부염의 증상을 완화시키는 효과가 있는 것으로 동물시험에서 나타났다. DNCB was applied to the right upper abdomen of the mouse as an antigen for delayed-type hypersensitivity reactions to induce artificial contact hypersensitivity, and then the contact sensitivity was measured by measuring the swelling degree of the skin of the right ear of the mouse. Same as Edema thickness of the control group treated with DNCB only and sterile distilled water only increased at all times compared to that of the normal group. In comparison, the experimental group coated with shampoo and rinse showed a significant decrease at 48 and 72 hours compared to the control group, showing a near-normal value. Thus, shampoos and rinses with added lotus root ingredients have been shown to reduce the symptoms of contact dermatitis in animal studies.

4. 연근추출물을 이용한 삼푸 및 린스의 상품화4. Commercialization of Sampu and Rinse Using Lotus Root Extract

디자인까지 완료한, 연근추출물을 이용한 샴푸와 린스의 완제품 사진이다.This is a finished product of shampoo and rinse using lotus root extract, which was completed by design.

Fig. 3. 상품화된 샴푸의 사진 Fig. 4. 상품화된 린스의 사진Fig. 3. Photo of commercialized shampoo 4. Photo of commercialized rinse

Claims (6)

삭제delete 삭제delete 삭제delete 연근의 열수 추출물 3중량%, 이디티에이-이나트륨(EDTA-2Na) 0.03중량%, 폴리쿼터(Polyquaternium) 0.1중량%, 암모니움라우릴설페이트(Ammonium lauryl sulfate) 4.05중량%, 암모니움라우레스설퍼이트(Ammonium laureth sulfate 15.5중량%, 코카이도 프로필 베타인 (Cocamido propyl betaine) 6.0중량%, 프로필렌 글리콜(Propylene glycol) 2.0중량%, 나트륨크실렌설포네이트(Sodium xylene sulfonate) 2.0중량%, 메틸 파라벤(Methyl paraben) 0.15중량%, 글리콜 다이스테라이트(Glycol distearate) 3.0중량%, 코카마이드 디에탄올아민(Cocamide DEA(diethanolamine)) 1.0중량%, 라우라미드 디에탄올라민(Lauramide DEA(diehtanolamine)) 1.0중량%, 살리실산(Salicylic acid) 0.13중량%, 실리콘에멀젼(Silicon emulsion) 3.0중량%, 카톤 CG(Kathon-CG (Methylchloroisothiazolinone - Meghylisoghiazolinone)) 0.02중량%, 향료 1.0중량% 및 나머지 물로 이루어진 것을 특징으로 하는,3% by weight of hot water extract of lotus root, 0.03% by weight of EDTA-2Na, 0.1% by weight of polyquaternium, 4.05% by weight of ammonium lauryl sulfate, ammonium laures sulfate (Ammonium laureth sulfate 15.5 wt%, Cocado propyl betaine 6.0 wt%, Propylene glycol 2.0 wt%, Sodium xylene sulfonate 2.0 wt%, Methyl paraben (Methyl paraben) 0.15% by weight, glycol distearate 3.0% by weight, 1.0% by weight of cocamide diethanolamine, 1.0% by weight of lauramide DEH (diehtanolamine), Salicylic acid (0.13% by weight), silicone emulsion (Silicon emulsion) 3.0% by weight, carton CG (Kathon-CG (Methylchloroisothiazolinone-Meghylisoghiazolinone)), characterized in that consisting of 1.0% by weight and the remaining water, 연수의 열수추출물을 함유하는 샴푸.Shampoo containing soft water hot water extract. 연근의 열수 추출물 3중량%, 이디티에이-이나트륨(EDTA-2Na) 0.03중량%, 폴리쿼터(Polyquaternium) 0.15중량%, 세트리모늄 클로라이드(Cetrimonium chloride) 4.58중량%, 프로필렌 글리콜(Propylene glycol) 3.0중량%, 메틸 파라벤(Methyl paraben) 0.1중량%, 세토스테아릴 알코올(Cetostearyl alcohol) 4.0중량%, 아라셀 165(Aracel-165) 0.5중량%, 파라핀왁스(Paraffin wax) 1.5중량%, 글리콜 다이스테라이트(Glycol distearate) 1.0중량%, 부틸파라벤(Butyl paraben) 0.05중량%, 실리콘에멀젼(Silicon emulsion) 2.0중량%, 알로에추출물(Aloe extract) 0.1중량%, 카톤 CG(Kathon-CG(Methylchloroisothiazolinone-Meghylisoghiazolinone))0.02중량%, 향료 0.6중량% 및 나머지 물로 이루어진 것을 특징으로 하는,3% by weight of hot water extract of lotus root, 0.03% by weight of EDTA-2Na, 0.15% by weight of polyquaternium, 4.58% by weight of tritrimonium chloride, Propylene glycol 3.0 % By weight, 0.1% by weight of methyl paraben, 4.0% by weight of cetostearyl alcohol, 0.5% by weight of Aracel-165, 1.5% by weight of paraffin wax, glycol diester 1.0% by weight of Glycol distearate, 0.05% by weight of Butyl paraben, 2.0% by weight of Silicone emulsion, 0.1% by weight of Aloe extract, Methylchloroisothiazolinone-Meghylisoghiazolinone (Kathon-CG) ) 0.02% by weight, flavor 0.6%, and the remaining water, characterized in that 연수의 열수추출물을 함유하는 린스.Rinse containing soft water hot water extract. 제5항에 있어서,The method of claim 5, 알로에 추출물은 알로에 동결건조 분말에 증류수를 가하여 60℃에서 24시간 추출한 후 감압여과하고 40℃에서 감압농축하여 얻어지는 것을 특징으로 하는,The aloe extract is obtained by adding distilled water to the aloe lyophilized powder and extracting at 60 ° C. for 24 hours, followed by filtration under reduced pressure and concentrating at 40 ° C. under reduced pressure. 연수의 열수추출물을 함유하는 린스.Rinse containing soft water hot water extract.