KR101067339B1 - Composition for inhibiting MMP-2 production - Google Patents
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Abstract
본 발명은 복숭아 잎 추출물을 유효 성분으로 포함하는 MMP-2(matrix metalloprotease-2) 생성 억제용 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 복숭아 잎 추출물의 MMP-2 생성 억제 용도를 제공한다. 따라서, 복숭아 잎 추출물을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 MMP-2에 의해 매개되는 동맥경화증, 재협착증, MMP-매개 골감소증, 중추신경계의 염증질환, 알츠하이머 질환, 피부노화, 류마티스성 관절염, 골관절염, 폐혈증성 관절염, 각막궤양, 이상창상 유합 골질환, 단백뇨증, 복대동맥류 질환, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골손실, 신경계의 수초탈락 질환, 간경변, 신사구체 질환, 배태막의 미성숙 파열, 염증성 장질환, 치근막 질환, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시, 안과 종양, 각막이식 거부, 혈관신생, 암의 침윤, 암의 전이 등의 다양한 질환을 효과적으로 예방 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다. The present invention relates to a composition for inhibiting the production of matrix metalloprotease-2 (MMP-2) comprising a peach leaf extract as an active ingredient. The present invention provides a use for inhibiting MMP-2 production of peach leaf extract. Therefore, the composition comprising the peach leaf extract as an active ingredient, arteriosclerosis, restenosis, MMP-mediated osteopenia mediated by MMP-2, inflammatory diseases of the central nervous system, Alzheimer's disease, skin aging, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, pneumonia Arthritis, Corneal Ulcer, Wound-union Bone Disease, Proteinuria, Abdominal Aortic Aneurysm, Degenerative Cartilage Loss Due to Traumatic Joint Injury, Myelin Deficiency Disorder, Liver Cirrhosis, Renal Glomerular Disease, Immature Rupture of Intestinal Membrane, Inflammatory Bowel Disease Disease, age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, proliferative vitreoretinopathy, immature retinopathy, ophthalmic inflammation, cone cornea, Sjogren's syndrome, myopia, ocular tumor, corneal transplant rejection, angiogenesis, cancer infiltration, cancer It can be used to effectively prevent or treat various diseases such as metastasis.
복숭아 잎 추출물, MMP-2 Peach Leaf Extract, MMP-2
Description
본 발명은 복숭아 잎 추출물을 유효 성분으로 포함하는 MMP-2(matrix metalloprotease-2) 생성 억제용 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a composition for inhibiting the production of matrix metalloprotease-2 (MMP-2) comprising a peach leaf extract as an active ingredient.
매트릭스 메탈로프로테아제(matrix metalloproteinases, MMPs)는 세포외막의 모든 구성성분들을 총체적으로 분해할 수 있는 아연 (Zn) 의존적 엔도펩티다제 계열 효소의 한 종류이다. MMPs는 처음에 올챙이 꼬리를 분해하는 효소로 알려졌고, 그 이후의 연구를 통해 결합 조직 세포들에 의해 합성되어지는 이러한 효소들이 생리적 변화의 과정에서 일어나는 세포외막의 재구성에 중요한 역할을 한다고 밝혀졌다(Chambers AF et al., J Natl Cancer Inst (1997) 89; 1260-1270, Kahari VM et al., Ann Med (1999) 31; 34-45, Ray JM et al., EMBO J (1995) 14; 908-917, Kleiner DE et al., Cancer Chemother Pharmacol (1999) 43; 42-51).Matrix metalloproteinases (MMPs) are a class of zinc (Zn) dependent endopeptidase family enzymes that can collectively degrade all components of the extracellular membrane. MMPs were initially known as enzymes that degrade tadpole tails, and subsequent studies have shown that these enzymes, which are synthesized by connective tissue cells, play an important role in the reorganization of the extracellular membrane that occurs in the course of physiological changes. AF et al., J Natl Cancer Inst (1997) 89; 1260-1270, Kahari VM et al., Ann Med (1999) 31; 34-45, Ray JM et al., EMBO J (1995) 14; 908- 917, Kleiner DE et al., Cancer Chemother Pharmacol (1999) 43; 42-51).
인간의 MMP 유전자 패밀리는 구조적 연관성을 갖는 최소 18종이 있고, 기질 특이성과 기본 구조에 따라 다음과 같이 총 5종류인 콜라게나아제(MMP-1, MMP-8, MMP-13), 젤라티나아제(MMP-2, MMP-9), 스트로멜라이신(MMP-3, MMP-7, MMP-10, MMP-11, MMP-12), 멤브레인 타입-MMPs (MT1-MMP, MT2-MMP, MT3-MMP, MT4-MMP), 비분류된 MMPs 로 분류된다(Kleiner DE et al., Cancer Chemother Pharmacol (1999) 43; 42-51). MMPs의 일반적인 구조는 신호 펩타이드, 프로펩타이드 도메인, 아연 (Zn) 결합 부위를 가지고 있는 촉매성 도메인(catalytic domain) 그리고 힌지 영역에 의해 촉매성 도메인과 연결되어 있는 헤모펙신-유사 도메인(haemopexin-like domain)으로 이루어져 있다. MMP-2 와 MMP-9 은 이러한 기본 구조에 촉매성 도메인 안에 삽입된 피브로텍틴 타입 II(fibronectin type Ⅱ)를 가지고 있고, MT-MMPs는 헤모펙신-유사 도메인의 C-말단에 막관통 도메인을 가지고 있다. 가장 작은 분자량을 가진 매트리라이신(matrilysin, MMP-7)은 헤모펙신을 가지고 있지 않다(Kahari VM et al., Ann Med (1999) 31; 34-45, Ray JM et al., EMBO J (1995) 14; 908-917). There are at least 18 MMP gene families with structural associations, and there are five types of collagenase (MMP-1, MMP-8, MMP-13) and gelatinase (depending on substrate specificity and basic structure). MMP-2, MMP-9), stromelysine (MMP-3, MMP-7, MMP-10, MMP-11, MMP-12), membrane type-MMPs (MT1-MMP, MT2-MMP, MT3-MMP , MT4-MMP), unclassified MMPs (Kleiner DE et al., Cancer Chemother Pharmacol (1999) 43; 42-51). The general structure of MMPs consists of a signal peptide, a propeptide domain, a catalytic domain with zinc (Zn) binding sites, and a haemopexin-like domain linked to the catalytic domain by a hinge region. ) MMP-2 and MMP-9 have fibroectin type II embedded in the catalytic domain in this basic structure, and MT-MMPs have a transmembrane domain at the C-terminus of the hemopexin-like domain. Have. Matrilysin (MMP-7), the smallest molecular weight, lacks hemopexin (Kahari VM et al., Ann Med (1999) 31; 34-45, Ray JM et al., EMBO J (1995). 14; 908-917).
일반적으로 젤라티나아제(MMP-2, MMP-9)는 악성의 조직에서 지속적으로 검출되고 종양의 공격성, 전이적 능력과 관계가 있다(Wilson CL et al., Proc Natl Acad Sci USA (1997) 94; 1402-1407, Fingleton BM et al., APMIS (1999) 107; 102-110). MMP-2 와 MMP-9 은 많은 수용체들에 있어서 아주 유사한 효소들이다. 하지만 이들의 발현의 조절, 당화 (glycosylation), 프로엔자임(proenzyme)의 활성화, 기질에 있어서는 분명한 차이점이 있다. 예를 들어, MMP-2 는 72-kDa 의 비당화된 단백질인 반면 92-kDa 의 MMP-9 은 프로도메인(prodomain) 과 촉매성 도메인에 2개의 당화된 부위를 가지고 있다(L.P. Kotra et al., Bioorg Chem (2002) 30; 356-370, P.M. Rudd et al., Biochemistry (1999) 38; 13937-13950, T.S. Mattu et al., Biochemistry (2000) 39; 15695-15704).In general, gelatinases (MMP-2, MMP-9) are persistently detected in malignant tissues and are associated with tumor aggressiveness and metastatic capacity (Wilson CL et al., Proc Natl Acad Sci USA (1997) 94). 1402-1407, Fingleton BM et al., APMIS (1999) 107; 102-110). MMP-2 and MMP-9 are very similar enzymes for many receptors. However, there are obvious differences in the regulation of their expression, glycosylation, activation of proenzymes, and substrates. For example, MMP-2 is a 72-kDa unglycosylated protein while MMP-9 of 92-kDa has two glycosylated sites in the prodomain and the catalytic domain (LP Kotra et al. , Bioorg Chem (2002) 30; 356-370, PM Rudd et al., Biochemistry (1999) 38; 13937-13950, TS Mattu et al., Biochemistry (2000) 39; 15695-15704).
대부분의 MMPs 는 세포외의 환경에서 단백질 가수 분해효소로 활성화 되어질 수 있는 효소원 (zymogen)으로 분비된다. 이러한 pro-MMP 는 촉매작용을 하는 아연 원자 함유 분자의 프로펩타이드 부분에 위치한 시스테인 잔기 사이와 효소의 촉매 자리가 서로 상호작용을 하여 기질들이 접근하는 것을 막음으로써 비활성 형태를 유지한다. 프로펩타이드의 부분적 단백질 가수분해는 시스테인 잔기와 촉매 자리의 공유결합을 해리시켜 기질이 촉매자리에 결합할 수 있게 한다. MMPs는 일반적으로 MMP의 분해, 복합체 형성 그리고 세포외의 환경에서 단백분해효소의 망상조직을 부분적으로 해독하여 활성화 된다(Murphy G et al., AMPIS (1999) 107; 38-44). 널리 알려진 활성화 방법 중의 하나는 MT-MMPs 와 MMP-2 사이의 상호작용에 의한 것이다. MT1-MMP는 푸린-유사 프로테아제(furin-like proteases)와 결합한 골지체에 의해 분비되어지기 전에 활성화 되어진 후 세포외막에 고정되어져 MMP-2 를 활성화한다(Sato H et al., Thromb Haemost (1997) 78; 497-500, Murphy G et al., AMPIS (1999) 107; 38-44).Most MMPs are secreted as an enzyme source (zymogen) that can be activated by proteolytic enzymes in the extracellular environment. This pro-MMP maintains its inactive form by interacting with the cysteine residues located in the propeptide portion of the catalytic zinc atom-containing molecule and the catalytic sites of the enzyme, thereby preventing substrate access. Partial proteolysis of propeptide dissociates covalent bonds between cysteine residues and catalytic sites, allowing the substrate to bind to the catalytic sites. MMPs are generally activated by the degradation of MMPs, complex formation and partial detoxification of the protease network in the extracellular environment (Murphy G et al., AMPIS (1999) 107; 38-44). One well-known method of activation is by interaction between MT-MMPs and MMP-2. MT1-MMP is activated before secretion by the Golgi apparatus in combination with furin-like proteases and then immobilized on the extracellular membrane to activate MMP-2 (Sato H et al., Thromb Haemost (1997) 78 497-500, Murphy G et al., AMPIS (1999) 107; 38-44).
MMP에 의해서 매개되는 질환으로는 동맥경화증, 재협착증, MMP-매개 골감소증, 중추신경계의 염증질환,알츠하이머 질환, 피부노화, 류마티스성 관절염, 골관절염, 폐혈증성 관절염, 각막궤양, 이상창상 유합 골질환, 단백뇨증, 복대동맥류 질환, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골손실, 신경계의 수초탈락 질환, 간경변, 신사구체 질환, 배태막의 미성숙 파열, 염증성 장질환, 치근막 질환, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시, 안과 종양, 각막이식 거부, 혈관신생, 암의 침윤과 전이 등과 같은 여러 가지 질환에서 과다하게 발현되는 것으로 알려져 있다[(Wossener Jr., Annals NY Acad. Sci., 732, 11-21 (1994); Warner et al., Am. J. Pathol., 158, 2139-44(2001); Stetler-Stevenson, Surg. Oncol. Clin. N. Am., 10, 383-92 (2001)].Diseases mediated by MMP include arteriosclerosis, restenosis, MMP-mediated osteopenia, inflammatory diseases of the central nervous system, Alzheimer's disease, skin aging, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, pulmonary arthritis, corneal ulcers, abnormal wound coalescing bone disease, Proteinuria, Abdominal aortic aneurysm, Degenerative cartilage loss due to traumatic joint injury, Myelin deprivation disease, Liver cirrhosis, Renal glomeruli, Immature rupture of the embryonic membrane, Inflammatory bowel disease, Periodontal membrane disease, Macular degeneration associated with aging, Diabetic retinopathy , Proliferative vitreoretinopathy, immature retinopathy, ocular inflammation, cone cornea, Sjogren's syndrome, myopia, ophthalmic tumor, corneal graft rejection, angiogenesis, cancer invasion and metastasis. (Wossener Jr., Annals NY Acad. Sci., 732, 11-21 (1994); Warner et al., Am. J. Pathol., 158, 2139-44 (2001); Stetler-Stevenson, Surg. Oncol Cl in N. Am., 10, 383-92 (2001).
한편, 복숭아 잎(Prunus persica)은 위염, 백일해, 기침, 기관지염의 치료와 임신 중 구토, 입덧의 완화 효과가 알려져 있으나, 복숭아 잎 추출물 자체가 MMP-2 생성억제제로 탁월한 효과가 있음이 보고된 바는 없다. Prunus persica is known to treat gastritis, whooping cough, cough, and bronchitis, and to relieve vomiting and morning sickness during pregnancy, but peach leaf extract itself has been reported to be an effective MMP-2 inhibitor. There is no.
본 발명자들은 식용생물자원으로부터 여러 가지 생리활성을 갖는 미량소재에 대해 연구하던 중 복숭아 잎 추출물이 MMP-2 생성 억제능을 나타냄을 본 발명을 완성하였다.The present inventors completed the present invention that the peach leaf extract exhibits the inhibition of MMP-2 production during the study of trace materials having various physiological activities from edible biological resources.
본 발명은 식용생물자원으로부터 MMP-2 생성 억제능을 나타내는 물질을 개발하여, 이를 포함하는 MMP-2 생성 억제용 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다. An object of the present invention is to provide a composition for suppressing MMP-2 production from edible biological resources, and to provide a composition for inhibiting MMP-2 production.
또한, 본 발명은 상기 MMP-2 생성 억제 물질을 식용생물자원으로부터 정제하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. Another object of the present invention is to provide a method for purifying the MMP-2 production inhibitory substance from an edible biological resource.
본 발명은 복숭아 잎 추출물을 유효 성분으로 포함하는 MMP-2(matrix metalloprotease-2) 생성 억제용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for inhibiting the production of matrix metalloprotease-2 (MMP-2) comprising a peach leaf extract as an active ingredient.
또한 본 발명은 상기 복숭아 잎 추출물 분획의 정제 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for purifying the peach leaf extract fraction.
본 발명은 복숭아 잎 추출물의 MMP-2 생성 억제 용도를 제공한다. 따라서, 복숭아 잎 추출물을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 MMP-2에 의해 매개되는 동맥경화증, 재협착증, MMP-매개 골감소증, 중추신경계의 염증질환, 알츠하이머 질환, 피부노화, 류마티스성 관절염, 골관절염, 폐혈증성 관절염, 각막궤양, 이상창상 유합 골질환, 단백뇨증, 복대동맥류 질환, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골손실, 신경계의 수초탈락 질환, 간경변, 신사구체 질환, 배태막의 미성숙 파열, 염증성 장질환, 치근막 질환, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리 체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시, 안과 종양, 각막이식 거부, 혈관신생, 암의 침윤, 암의 전이 등의 다양한 질환을 효과적으로 예방 또는 치료하기 위해 사용될 수 있다. The present invention provides a use for inhibiting MMP-2 production of peach leaf extract. Therefore, the composition comprising the peach leaf extract as an active ingredient, arteriosclerosis, restenosis, MMP-mediated osteopenia mediated by MMP-2, inflammatory diseases of the central nervous system, Alzheimer's disease, skin aging, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, pneumonia Arthritis, Corneal Ulcer, Wound-union Bone Disease, Proteinuria, Abdominal Aortic Aneurysm, Degenerative Cartilage Loss Due to Traumatic Joint Injury, Myelin Deficiency Disorder, Liver Cirrhosis, Renal Glomerular Disease, Immature Rupture of Intestinal Membrane, Inflammatory Bowel Disease Disease, age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, proliferative vitreoretinopathy, immature retinopathy, ocular inflammation, cone cornea, Sjogren's syndrome, myopia, ocular tumor, corneal transplant rejection, angiogenesis, cancer infiltration, cancer It can be used to effectively prevent or treat various diseases such as metastasis.
본 발명은 복숭아 잎 추출물을 유효 성분으로 포함하는 MMP-2(matrix metalloprotease-2) 생성 억제용 조성물을 제공한다.The present invention provides a composition for inhibiting the production of matrix metalloprotease-2 (MMP-2) comprising a peach leaf extract as an active ingredient.
본 발명의 복숭아 잎 추출물의 제조시에는 건조 또는 미건조시킨 복숭아 잎 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있다. 추출의 효율성을 위해 복숭아 잎은 잘게 부수어 사용될 수 있다. 또한, 효과적인 MMP-2 생성 억제용 복숭아 잎 추출물을 얻기 위해, 복숭아 잎의 분쇄 전에 약 100℃의 높은 온도에서 약 5분간 블랜칭(blanching)을 수행하여 생체 세포내 효소를 불활성화시키는 과정을 거칠 수 있다. In the preparation of the peach leaf extract of the present invention, dried or undried peach leaves or mixtures thereof can be used. For the efficiency of extraction the peach leaves can be used by crushing. In addition, in order to obtain an effective MMP-2 production inhibitory peach leaf extract, it can be subjected to a process of incubating for 5 minutes at a high temperature of about 100 ℃ before crushing the peach leaves to inactivate the enzymes in vivo cells have.
복숭아 잎 추출물의 제조를 위해서는 복숭아 잎의 3 내지 10 배의 추출 용매를 사용하여 통상적인 추출 방법에 따라 추출할 수 있다. For the preparation of the peach leaf extract can be extracted according to a conventional extraction method using 3 to 10 times the extraction solvent of the peach leaf.
추출 용매로는 천연물 추출에서 널리 이용되고 있는 물, 유기 용매 또는 이들의 혼합 용매를 이용하여 추출될 수 있다. 상기 유기 용매로는 메탄올 또는 에탄올이 포함된다. 이 경우 메탄올 또는 에탄올은 물과 혼합하여 사용할 수 있으나, 활성 성분의 용이한 용출을 위해서는 물과 혼합하지 않고 사용할 수도 있다. 한 구체예에서, 상기 복숭아 잎 추출물은 메탄올 추출물일 수 있다.The extraction solvent may be extracted using water, an organic solvent or a mixed solvent thereof which is widely used in natural product extraction. The organic solvent includes methanol or ethanol. In this case, methanol or ethanol may be mixed with water, but may be used without mixing with water for easy elution of the active ingredient. In one embodiment, the peach leaf extract may be a methanol extract.
상기 복숭아 잎 추출물은 1차 추출에서 사용된 유기 용매와는 극성이 다른 유기 용매를 사용하여 추가로 분획할 수 있다. 또한, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography), 박층 크로마토그래피(thin layer chromatography), 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography) 등과 같은 다양한 크로마토그래피를 이용하여 추가로 정제된 분획을 얻을 수도 있다. 본 발명에 있어서, '복숭아 잎 추출물'에는 이와 같이 추출, 분획 또는 정제의 각 단계에서 얻어지는 모든 추출액, 분획 및 정제물, 그들의 희석액, 농축액 또는 건조물을 포함한다. The peach leaf extract may be further fractionated using an organic solvent that is different in polarity from the organic solvent used in the first extraction. In addition, fractions further purified may be obtained using various chromatography such as silica gel column chromatography, thin layer chromatography, high performance liquid chromatography, and the like. In the present invention, the peach leaf extract includes all the extracts, fractions and purified products obtained in each step of extraction, fractionation or purification as described above, their dilutions, concentrates or dried products.
따라서, 본 발명의 한 구체예에서, 상기 복숭아 잎 추출물은 복숭아 잎을 물, 유기 용매 또는 이들의 혼합용매로 추출하고, 그 잔사를 헥산, 클로로포럼 및 에틸아세테이트을 이용하여 순차적으로 분획하고 남은 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 얻은 복숭아 잎 추출물 분획일 수 있다.Therefore, in one embodiment of the present invention, the peach leaf extract extracts the peach leaves with water, an organic solvent or a mixed solvent thereof, and fractions the residues sequentially using hexane, chloroforum and ethyl acetate. It may be a peach leaf extract fraction obtained by concentration under reduced pressure and dried.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 복숭아 잎 추출물은 복숭아 잎을 메탄올로 추출하고, 그 잔사를 헥산, 클로로포럼 및 에틸아세테이트을 이용하여 순차적으로 분획하고 감압농축한 후 건조하여 얻은 복숭아 잎 메탄올 추출물의 메탄올 분획일 수 있다.In another embodiment of the present invention, the peach leaf extract extracts the peach leaf with methanol, and the residue is sequentially fractionated using hexane, chloroforum and ethyl acetate, concentrated under reduced pressure and dried to obtain methanol of the peach leaf methanol extract. Fractions.
본 발명의 또다른 구체예에서, 상기 복숭아 잎 추출물은 복숭아 잎을 물, 유기 용매 또는 이들의 혼합용매로 추출하고, 그 잔사를 헥산, 클로로포럼 및 에틸아세테이트을 이용하여 순차적으로 분획하고 남은 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 얻은 복숭아 잎 추출물 분획에 대해 클로로포름과 메탄올의 혼합 용매를 전개용매 로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 수행하여 얻은 분획 중 클로로포름 : 메탄올 = 70:30 ~ 30:70의 전개용매조건에서 얻은 복숭아 잎 추출물 분획일 수 있다. In another embodiment of the present invention, the peach leaf extract extracts the peach leaves with water, an organic solvent or a mixed solvent thereof, fractions the residues sequentially using hexane, chloroforum and ethyl acetate and decompresses the remaining residues. Concentrated and dried peach leaf extract fractions were subjected to silica gel column chromatography using a mixed solvent of chloroform and methanol as a developing solvent. Chloroform in the fraction obtained: methanol = 70:30 to 30: It may be a peach leaf extract fraction obtained at 70 developing solvent conditions.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 복숭아 잎 추출물은 복숭아 잎을 물, 유기 용매 또는 이들의 혼합용매로 추출하고, 그 잔사를 헥산, 클로로포럼 및 에틸아세테이트을 이용하여 순차적으로 분획하고 남은 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 얻은 복숭아 잎 추출물 분획에 대해 클로로포름과 메탄올의 혼합 용매를 전개용매로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 수행하여 얻은 분획 중 클로로포름 : 메탄올 = 70:30 ~ 30:70의 전개용매조건에서 복숭아 잎 추출물 분획을 얻고, 상기 수득한 복숭아 잎 추출물 분획에 대해 TLC(thin layer chromatography) 또는 HPLC(high performance liquid chromatography)를 수행하여 추가로 정제된 복숭아 잎 추출물 분획일 수 있다.In another embodiment of the present invention, the peach leaf extract extracts the peach leaves with water, an organic solvent or a mixed solvent thereof, fractions the residues sequentially using hexane, chloroforum and ethyl acetate and decompresses the remaining residues. Concentrated and dried peach leaf extract fractions were subjected to silica gel column chromatography using a mixed solvent of chloroform and methanol as a developing solvent. Chloroform in the fraction obtained: methanol = 70:30 to 30: The peach leaf extract fraction may be obtained under a developing solvent of 70, and the peach leaf extract fraction may be further purified by performing thin layer chromatography (TLC) or high performance liquid chromatography (HPLC). .
본 발명은 또한 The invention also
1) 복숭아 잎을 물, 유기 용매 또는 이들의 혼합용매로 추출하고, 그 잔사를 헥산, 클로로포럼 및 에틸아세테이트을 이용하여 순차적으로 분획하고 남은 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 복숭아 잎 추출물 분획을 얻는 단계;1) extracting the peach leaves with water, an organic solvent or a mixed solvent thereof, and fractions were extracted sequentially using hexane, chloroforum and ethyl acetate, and the remaining residues were concentrated under reduced pressure and dried to obtain a peach leaf extract fraction. ;
2) 상기 단계 1로부터 얻은 복숭아 잎 추출물 분획에 대해 클로로포름과 메탄올의 혼합 용매를 전개용매로 사용하는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(silica gel column chromatography)를 수행하여 얻은 분획 중 클로로포름 : 메탄올 = 70:30 ~ 30:70의 전개용매조건에서 복숭아 잎 추출물 분획을 얻는 단계; 및2) Chloroform in the fraction obtained by performing silica gel column chromatography using a mixed solvent of chloroform and methanol as a developing solvent for the peach leaf extract fraction obtained in step 1: methanol = 70:30 ~ 30 Obtaining a peach leaf extract fraction under a developing solvent condition of: 70; And
3) 상기 단계 2로부터 수득한 복숭아 잎 추출물 분획에 대해 TLC(thin layer chromatography) 및 HPLC(high performance liquid chromatography)를 수행하여 MMP-2 생성 억제 활성을 나타내는 복숭아 잎 추출물 분획을 얻는 단계를 포함하는3) performing a thin layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC) on the peach leaf extract fraction obtained from
MMP-2 생성 억제용 복숭아 잎 추출물 분획의 정제 방법을 제공한다.Provided is a method for purifying the peach leaf extract fraction for inhibiting MMP-2 production.
본 발명의 하기 실시예에서는, 복숭아 잎을 100% 메탄올로 추출하여 얻은 잔사를, 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트의 순으로 분획하고 그 결과 남은 잔사를 감압 건조하여 복숭아 잎 메탄올 추출물 분획(이하 실시예에서 'CM-M'로 표현됨)을 제조하였다. 또한, 상기 복숭아 잎 메탄올 추출물 분획(CM-M)을 추가로 분획하고 정제하였다. 이러한 과정을 통해 얻은 본 발명의 복숭아 잎 추출물은 MMP-2의 생성을 대조군과 비교할 때 70% 미만으로 억제하는 효과를 나타낸다. In the following example of the present invention, the residue obtained by extracting the peach leaf with 100% methanol, fractions in the order of hexane, chloroform, ethyl acetate and the resultant residue is dried under reduced pressure to extract the peach leaf methanol extract fraction (in the following Examples (Expressed as 'CM-M'). In addition, the peach leaf methanol extract fraction (CM-M) was further fractionated and purified. The peach leaf extract of the present invention obtained through this process has an effect of inhibiting the production of MMP-2 to less than 70% compared to the control.
따라서 본 발명의 복숭아 잎 추출물은 MMP-2 생성 억제용 조성물의 유효 성분으로 포함될 수 있다. Therefore, the peach leaf extract of the present invention may be included as an active ingredient of the composition for inhibiting MMP-2 production.
본 발명의 MMP-2 생성 억제용 조성물은 MMP-2와 매개된 질환의 예방 또는 치료용 조성물로서 사용될 수 있다. MMP-2와 매개된 질환은 이에 제한되는 것은 아니나, 예를 들어, 동맥경화증, 재협착증, MMP-매개 골감소증, 중추신경계의 염증질환,알츠하이머 질환, 피부노화, 류마티스성 관절염, 골관절염, 폐혈증성 관절염, 각막궤양, 이상창상 유합 골질환, 단백뇨증, 복대동맥류 질환, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골손실, 신경계의 수초탈락 질환, 간경변, 신사구체 질환, 배태막의 미성숙 파열, 염증성 장질환, 치근막 질환, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시, 안과 종양, 각막이식 거부, 혈관신생, 암의 침윤 및 암의 전이로 구성되는 군으로부터 선택되는 질환일 수 있다. The composition for inhibiting MMP-2 production of the present invention can be used as a composition for preventing or treating diseases mediated with MMP-2. Diseases mediated with MMP-2 include, but are not limited to, arteriosclerosis, restenosis, MMP-mediated osteopenia, inflammatory diseases of the central nervous system, Alzheimer's disease, skin aging, rheumatoid arthritis, osteoarthritis, pulmonary arthritis , Corneal ulcer, abnormal wound union bone disease, proteinuria, abdominal aortic aneurysm, degenerative cartilage loss due to traumatic joint injury, demyelination of the nervous system, cirrhosis, renal glomerular disease, immature rupture of the embryonic membrane, inflammatory bowel disease, fascia membrane disease, With age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, proliferative vitreoretinopathy, immature retinopathy, ophthalmic inflammation, cone cornea, Sjogren's syndrome, myopia, ophthalmic tumors, corneal graft rejection, angiogenesis, cancer infiltration and cancer metastasis It may be a disease selected from the group consisting of.
상기 조성물은 본 발명의 복숭아 잎 추출물 뿐만 아니라 기존에 공지된 MMP 활성 억제제와 함께 사용될 수 있다. The composition can be used with the peach leaf extract of the present invention as well as with previously known MMP activity inhibitors.
본 발명에 따른 MMP-2 생성 억제용 조성물은 약제학적 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다. The composition for inhibiting MMP-2 production according to the present invention may be a pharmaceutical composition or a food composition.
본 발명의 복숭아 잎 추출물을 유효 성분으로 포함하는 약제학적 조성물은 상기 유효 성분 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등을 사용할 수 있다.A pharmaceutical composition comprising the peach leaf extract of the present invention as an active ingredient may be prepared using a pharmaceutically acceptable and physiologically acceptable adjuvant in addition to the active ingredient, and the adjuvant may include excipients, disintegrants, sweeteners, Binders, coatings, swelling agents, lubricants, lubricants, flavoring agents, and the like can be used.
상기 약제학적 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다. The pharmaceutical composition may be preferably formulated into a pharmaceutical composition comprising one or more pharmaceutically acceptable carriers in addition to the active ingredient described above for administration.
상기 약제학적 조성물의 제제 형태는 과립제, 산제, 정제, 피복정, 캡슐제, 좌제, 액제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 등이 될 수 있다. 예를 들어, 정제 또는 캡슐제의 형태로의 제제화를 위해, 유효 성분은 에탄올, 글리세롤, 물 등과 같은 경구, 무독성의 약제학적으로 허용 가능한 불활성 담체와 결합될 수 있다. 또한, 원하거나 필요한 경우, 적합한 결합제, 윤활제, 붕해제 및 발색제 또한 혼합물로 포함될 수 있다. 적합한 결합제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 젤라틴, 글루코스 또는 베타-락토오스와 같은 천연 당, 옥수수 감미 제, 아카시아, 트래커캔스 또는 소듐올레이트와 같은 천연 및 합성 검, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트, 소듐 클로라이드 등을 포함한다. 붕해제는 이에 제한되는 것은 아니나, 녹말, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토니트, 잔탄 검 등을 포함한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화 할 수 있다. Formulation forms of the pharmaceutical composition may be granules, powders, tablets, coated tablets, capsules, suppositories, solutions, syrups, juices, suspensions, emulsions, drops or injectable solutions. For example, for formulation into tablets or capsules, the active ingredient may be combined with an oral, non-toxic pharmaceutically acceptable inert carrier such as ethanol, glycerol, water, and the like. Also, if desired or necessary, suitable binders, lubricants, disintegrants and coloring agents may also be included as a mixture. Suitable binders include but are not limited to natural sugars such as starch, gelatin, glucose or beta-lactose, natural and synthetic gums such as corn sweeteners, acacia, trackercance or sodium oleate, sodium stearate, magnesium stearate, Sodium benzoate, sodium acetate, sodium chloride, and the like. Disintegrants include, but are not limited to, starch, methyl cellulose, agar, bentonite, xanthan gum, and the like. Acceptable pharmaceutical carriers in compositions formulated in liquid solutions are sterile and physiologically compatible, including saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, albumin injectable solutions, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and One or more of these components may be mixed and used, and other conventional additives such as antioxidants, buffers and bacteriostatic agents may be added as necessary. In addition, diluents, dispersants, surfactants, binders, and lubricants may be additionally added to formulate into injectable solutions, pills, capsules, granules or tablets such as aqueous solutions, suspensions, emulsions and the like. Furthermore, the method disclosed in Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA can be formulated according to each disease or component, as appropriate in the art.
또한, 본 발명은 상기 복숭아 잎 추출물을 포함하는 MMP-2 생성 억제용 식품 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides a food composition for inhibiting MMP-2 production comprising the peach leaf extract.
본 발명에 따른 식품 조성물은 상기 약제학적 조성물과 동일한 방식으로 제제화되어 기능성 식품으로 이용하거나, 각종 식품에 첨가할 수 있다. 본 발명의 조성물을 첨가할 수 있는 식품으로는 예를 들어, 음료류, 육류, 초코렛, 식품류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류, 알코올 음료류, 비타민 복합제, 건강보조식품류 등이 있다.The food composition according to the present invention may be formulated in the same manner as the pharmaceutical composition, used as a functional food, or added to various foods. Foods to which the composition of the present invention can be added include, for example, beverages, meat, chocolate, foods, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, ice creams, alcoholic beverages, vitamin complexes, and health supplements. .
본 발명은 상기 MMP-2 생성 억제용 조성물을 포함하는 건강기능식품을 제공한다.The present invention provides a health functional food comprising the composition for inhibiting MMP-2 production.
본 발명은 또한 MMP-2 생성 억제용 의약 또는 식품의 제조를 위한 상기 복숭아 잎 추출물을 유효 성분으로 포함하는 조성물의 용도를 제공한다. 상기한 복숭아 잎 추출물을 유효 성분으로 포함하는 본 발명의 조성물은 MMP-2와 매개된 질환의 예방 또는 치료용 의약 또는 식품의 제조를 위한 용도로 이용될 수 있다.The present invention also provides the use of a composition comprising the peach leaf extract as an active ingredient for the manufacture of a medicament or food for inhibiting MMP-2 production. The composition of the present invention comprising the peach leaf extract as an active ingredient can be used for the manufacture of a medicament or food for the prevention or treatment of diseases mediated with MMP-2.
또한 본 발명은 포유동물에게 치료상 유효량의 복숭아 잎 추출물을 투여하는 것을 포함하는 MMP-2 생성 억제 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for inhibiting MMP-2 production comprising administering to a mammal a therapeutically effective amount of a peach leaf extract.
여기에서 사용된 용어 "포유동물"은 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 인간을 말한다. As used herein, the term "mammal" refers to a mammal that is the subject of treatment, observation or experimentation, preferably human.
여기에서 사용된 용어 "치료상 유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 기타 임상의에 의해 생각되는 조직계, 동물 또는 인간에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 유효 성분 또는 약학적 조성물의 양을 의미하는 것으로, 이는 치료되는 질환 또는 장애의 증상의 완화를 유도하는 양을 포함한다. 본 발명의 유효 성분에 대한 치료상 유효 투여량 및 투여횟수는 원하는 효과에 따라 변화될 것임은 당업자에게 자명하다. 그러므로, 투여될 최적의 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있으며, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효성분 및 다른 성분의 함량, 제형의 종류, 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다 양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 본 발명의 치료방법에 있어서, 성인의 경우, 본 발명의 복숭아 잎 추출물을 1일 1회 내지 수회 투여시, 1㎎/kg~250㎎/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다. As used herein, the term “therapeutically effective amount” means an amount of an active ingredient or pharmaceutical composition that induces a biological or medical response in a tissue system, animal or human, as contemplated by a researcher, veterinarian, doctor or other clinician, This includes amounts that induce alleviation of the symptoms of the disease or disorder being treated. It will be apparent to those skilled in the art that the therapeutically effective dosages and frequency of administrations for the active ingredients of the present invention will vary depending on the desired effect. Therefore, the optimal dosage to be administered can be readily determined by one skilled in the art and includes the type of disease, the severity of the disease, the amount of active ingredients and other ingredients contained in the composition, the type of formulation, and the age, weight, general health of the patient. It may be adjusted according to various factors, including the condition, sex and diet, time of administration, route of administration and rate of composition, duration of treatment, and drugs used simultaneously. In the treatment method of the present invention, for adults, when the peach leaf extract of the present invention is administered once to several times a day, it is preferable to administer at a dose of 1 mg / kg to 250 mg / kg.
본 발명의 치료방법에서 본 발명의 복숭아 잎 추출물을 유효 성분으로 포함하는 조성물은 경구, 직장, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 흉골내, 경피, 국소, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다. In the treatment method of the present invention, the composition comprising the peach leaf extract of the present invention as an active ingredient may be administered by oral, rectal, intravenous, intraarterial, intraperitoneal, intramuscular, intrasternal, transdermal, topical, intraocular or intradermal routes. It may be administered in a conventional manner.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.Advantages and features of the present invention and methods for achieving them will be apparent with reference to the embodiments described below in detail. However, the present invention is not limited to the embodiments disclosed below, but may be implemented in various forms. It is provided to fully convey the scope of the invention to those skilled in the art, and the present invention is defined only by the scope of the claims.
[실시예][Example]
실시예 1 : 복숭아 잎 추출물 및 복숭아잎 추출물 분획의 제조 및 이들의 MMP-2 생성 억제 활성 확인Example 1 Preparation of Peach Leaf Extract and Peach Leaf Extract Fraction and Confirmation of MMP-2 Production Inhibitory Activity
복숭아 잎을 100℃에서 5분간 블랜칭(blanching)하여 생체세포내 효소를 불활성화시키고 핸드 믹서로 곱게 분쇄한 후, 실온에서 시료의 배의 100% 메탄올(v/v)로 추출하고, 그 추출물을 감압농축하여 건조시켰다('CM'). 그 결과 생성된 잔사를 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 순으로 분획하고('CM-H', 'CM-C', 'CM- E' ) 남은 것을 메탄올 분획으로 하여 각각을 여과포로 여과하고 잔사를 감압 농축한 후 건조하여 추출물을 얻었다('CM-M'). 도 1은 본 발명의 실시예에 따른 복숭아 잎의 메탄올 추출 및 추출물의 유기용매 분획 단계를 보여주는 과정도이다.The peach leaves were blanched at 100 ° C. for 5 minutes to inactivate enzymes in living cells and finely pulverized with a hand mixer, followed by extraction with 100% methanol (v / v) of the sample at room temperature and extracts thereof. Was concentrated under reduced pressure and dried ('CM'). The resulting residue was partitioned into hexane, chloroform and ethyl acetate in the order ('CM-H', 'CM-C', 'CM-E'). The remaining residues were methanol fractions and each was filtered through a filter cloth and the residue was filtered under reduced pressure. Concentrated and dried to obtain an extract ('CM-M'). 1 is a process chart showing the methanol extraction of the peach leaf and the organic solvent fraction step of the extract according to an embodiment of the present invention.
복숭아 잎 추출물과 각 분획물의 MMP-2 생성 억제 활성을 검토하기 위해, 간암세포인 Hep G2(human liver cancer cell line)을 8x104 cells/well의 농도로 12 웰-플레이트에 배양하고, 약 80%의 컨플루언시(confluency)에 도달할 때 원배지를 제거한 후 PBS로 세척하여 배지내 혈청 성분을 제거시킨 다음 새로운 무혈청 DMEM에 시료 0.1 mg/ml을 첨가하여 37℃, CO2 인큐베이터에서 24시간 배양시켰다. 대조구는 무혈청 DMEM에 시료를 용해시킬 때 사용한 용매만을 동량 처리하고 인큐베이터에서 동일한 시간을 방치하였다. 24시간 배양 후, 상징액인 배지를 취하여 ELISA 방법을 이용하여 다음과 같이 측정하였다. Immuno-well plate에 글루타알데히드를 200 ㎕ (10 ㎕ /ml D.W)씩 웰에 분주하여 37℃, 1시간 반응시킨 후 증류수로 웰-플레이트를 세척하고 물기를 제거하였다. 상기의 배지 상징액을 100 ㎕ 분주하고 37℃, 1시간 반응시킨 후 MMP-2 항체(rabbit)를 1 : 1,000으로 washing solution(0.5% Tween 20 in PBS)에 희석하여 100 ㎕ 씩 분주하고 37℃, 1시간 반응시켰다. 항-래빗 IgG peroxidase conjugated를 1 : 12,000으로 washing solution에 희석하여 37℃, 1시간 반응시킨 후 기질[TMB 10 mg/mL DMSO, 3% H2O2, 50 mM sodium acetate buffer(pH 5.1)]을 웰 당 200 ㎕ 씩 넣어 20 분간 빛을 차단한 채 반응시켰다. 1 M H2SO4 50 ㎕를 첨가하여 반응을 완전히 중지시킨 후 마이크로 플레이트 리더(Model 550, BIO-RAD Laboratories, USA)을 사용하여 450 nm에서 흡광도를 측정하였다. 시료에 의한 MMP-2 생성 억제 활성은 아래 식에 따라 환산하였다.To examine MMP-2 production inhibitory activity of the peach leaf extract and each fraction, Hep G2 (human liver cancer cell line), which is a liver cancer cell, was cultured in 12 well-plates at a concentration of 8x10 4 cells / well, about 80% at confluency during which the extract was washed with PBS to remove the source medium to reach the (confluency) to remove the serum components medium following 37 ℃ to the sample 0.1 mg / ml was added to fresh serum-free DMEM, CO 2 incubator 24 Time incubated. The control group was treated with the same amount of the solvent used to dissolve the sample in serum-free DMEM and left for the same time in the incubator. After incubation for 24 hours, the supernatant medium was taken and measured as follows using the ELISA method. 200 μl (10 μl / ml DW) of glutaaldehyde was dispensed into the wells on an immuno-well plate and allowed to react at 37 ° C. for 1 hour, followed by washing the well-plate with distilled water and removing water. Dispense 100 μl of the culture supernatant, react at 37 ° C. for 1 hour, and then dilute the MMP-2 antibody (rabbit) in a washing solution (0.5
그 결과, 도 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 복숭아 잎의 메탄올 추출물(CM)이 조군에 비해 MMP-2 생성을 70% 미만으로 감소시키며, 메탄올 분획(CM-M)에서 높은 활성을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. As a result, as can be seen in Figure 2, the methanol extract (CM) of the peach leaf reduces MMP-2 production to less than 70% compared to the control group, confirming that the methanol fraction (CM-M) shows a high activity Could.
실시예 2 : 복숭아 잎으로부터 분리한 MMP-2 생성억제활성물질의 정제Example 2 Purification of MMP-2 Inhibitory Active Substances Isolated from Peach Leaves
클로로포름으로 활성화된 실리카겔 60 컬럼에 실시예 2를 통해 얻은 복숭아 잎 메탄올 분획(CM-M)을 로딩하고 클로로포름과 메탄올(CHCl3 : MeOH = 100 : 0 ～ 0 : 100) 혼합용액으로 3 bed volume씩 전개하여 MMP-2 억제활성을 검토하여 억제활성이 40:60(17th fraction)에서 가장 높음을 확인하였다(도 3). 예비실험을 통하여 활성획분의 최적 분리되는 조건이었던 butanol : acetic acid : H2O = 4 : 1 : 2의 전개용매로 Prep.TLC를 실시하여 5개의 획분(CM-MS 1~5)으로 분리하고, MMP-2 억제활성을 검토하여 CM-MS-5에서 가장 높음을 확인하였다. CM-MS-5를 Waters apparatus (USA) C18 - atlantis column (reverse phase type)에 주입하고 500 mM K2HPO4 (pH 7.0)의 전개용매를 사용하여 0.5 ml/min의 유속으로 용출하여 활성획분만을 농축하고 MMP-2 억제활성을 보이는 단일 피크를 얻었다.Peach leaf methanol fraction (CM-M) obtained in Example 2 was loaded onto a silica gel 60 column activated with chloroform, and 3 bed volumes of chloroform and methanol (CHCl 3 : MeOH = 100: 0 ~ 0: 100) were mixed. The expansion was examined to examine the MMP-2 inhibitory activity and confirmed that the inhibitory activity was the highest at 40:60 (17th fraction) (FIG. 3). Prep.TLC was carried out with the developing solvent of butanol: acetic acid: H 2 O = 4: 1: 2, which was the optimal separation condition of active fraction through preliminary experiments, and separated into 5 fractions (CM-
실시예 3 : 정제 단계별 MMP-2 생성 억제 활성 평가Example 3 Evaluation of MMP-2 Production Inhibition Activity According to Purification
실시예 1의 방법으로 복숭아 잎으로부터 분리한 정제물질의 정제 단계별 MMP-2 생성억제활성을 측정하였다. 0.1 mg/ml의 농도에서 정제 단계별 MMP-2 생성억제활성을 검토한 결과 정제 과정을 통해 MMP-2 생성억제활성이 높아짐을 확인하였다(도 4).MMP-2 production inhibitory activity of the purified material separated from the peach leaf by the method of Example 1 was measured. Examination of the MMP-2 production inhibitory activity for each step of purification at a concentration of 0.1 mg / ml confirmed that the MMP-2 production inhibitory activity was increased through the purification process (FIG. 4).
도 1은 본 발명의 실시예에 따른 복숭아 잎의 메탄올 추출 및 추출물의 유기용매 분획 단계를 보여주는 과정도이다.1 is a process chart showing the methanol extraction of the peach leaf and the organic solvent fraction step of the extract according to an embodiment of the present invention.
도 2은 복숭아 잎의 메탄올 추출물(CM)을 유기 용매를 이용하여 추가로 정제하여 얻은 복숭아 잎 메탄올 추출물-메탄올 분획(CM-M)의 MMP-2 생성 억제 활성을 보여주는 그래프이다.Figure 2 is a graph showing the MMP-2 production inhibitory activity of the peach leaf methanol extract (CM-M) obtained by further purification of the methanol extract (CM) of the peach leaf using an organic solvent.
도 3은 크로마토그래피를 이용한 복숭아 잎 메탄올 추출물-메탄올 분획(CM-M)의 추가 정제 단계를 보여주는 도표이다.3 is a diagram showing further purification steps of the peach leaf methanol extract-methanol fraction (CM-M) using chromatography.
도 4는 복숭아 잎 추출물 분획의 정제 단계별 MMP-2 생성 억제 활성을 보여주는 그래프이다.Figure 4 is a graph showing the MMP-2 production inhibitory activity of the peach leaf extract fraction step.
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| JP2007326827A (en) * | 2006-06-09 | 2007-12-20 | Uha Mikakuto Co Ltd | Cyclooxygenase activity inhibitor |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 논문1; Biochemical and biophysical research communications |
| 논문2; Japanese journal of clinical oncology |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR20100060940A (en) | 2010-06-07 |
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