KR101059282B1

KR101059282B1 - 금은화추출물을 유효성분으로 함유하는 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR101059282B1
Application number: KR1020090000631A
Authority: KR
Inventors: 양재하; 김광중; 장은영; 최형준; 김상찬; 이종록
Original assignee: 대구한의대학교산학협력단
Priority date: 2009-01-06
Filing date: 2009-01-06
Publication date: 2011-08-24
Also published as: KR20100081404A

Abstract

본 발명은 금은화추출물을 유효성분으로 함유하는 조성물에 관한 것으로서, 구체적으로 본 발명의 금은화 추출물은 약물 중독의 지표로 사용되는 보행성 활동량(locomotor activity)의 감소효과뿐만 아니라, 뇌의 측핵과 선조체에서의 신경활성 지표인 c-Fos 발현을 급격히 감소시킴을 확인함으로써, 상기 조성물은 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 치료를 위한 약학조성물 또는 건강기능식품으로 유용하게 이용될 수 있다.

금은화, 보행성 활동량, c-Fos, 코카인, 금단증상

Description

금은화추출물을 유효성분으로 함유하는 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 치료용 조성물{A composition comprising the extract of Lonicera japonica Thunberg for preventing and treating drug intoxication or withdrawal symptoms}

본 발명은 금은화추출물을 유효성분으로 함유하는 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 치료용 약학조성물 또는 건강기능식품에 관한 것이다.

[문헌 1] Einhorn, L.C., et al., Electrophysiological effect of ***e in the mesoaccumbens dopamine system:studies in the ventral tegmental area, J Neurosci., 8(1), pp 100-112, 1988

[문헌 2] Wiechman BE., et al., Pharmacol. Biochem. Behav., 15(3), pp.425-433, 1981

[문헌 3] Parada A., et al., Neuropharmacology, 39(9), pp.1645-1652, 2000

[문헌 4] Pontieri FE., et al., Natl. Acad. Sci. USA., 92, pp.12304-12308, 1995

[문헌 5] Kuczenski R., et al., J. Neurosci., 11(9), pp.2703-2712, 1991

[문헌 6] 박종희 저, 한약백과도감(하), 도서출판 신일상사, p.654-655, 2002

[문헌 7] 문태철 외 7인, 금은화 플라보노이드성분의 항염증작용, 대한약학회, 약학회지, 43(1), pp.117-123, 1999

[문헌 8] 박욱연 외 2인, 한약재 추출물의 항균효과 검색, 한국식품영양과학회, 한국식품영양학회지, 한국영양식량학회지, 21(1), pp.91-96, 1992

[문헌 9] Karasinska JM., et al., Eur Neurosci., 22(7), pp.1741-1750, 2005

[문헌 10] Jang EY, et al., Eur J Pharmacol., 587(1-3), pp.124-128, 2008

[문헌 11] 이형철 외, 동의병리학회지, 15(4), pp543-547, 2001

과학문명의 발달과 급진하는 경제사회에 따른 현대인들의 잇따른 스트레스로 인해 약물 중독의 확산은 가장 중요한 현대 사회문제 중의 하나이다. 약물이란 질병을 예방, 치료하는데 사용되는 물질을 지칭하며, 신체기능의 변화를 일으키는 물질을 말한다. 이러한 약물의 남용은 부정적인 측면에서 신체적, 정신적, 사회적으로 자기 파괴의 문제를 발생시킨다. 약물 중독은 아편이나 신경안정제 또는 알코올과 같은 약물에 대한 신체적인 반응을 지칭한다. 이러한 약물 중독은 내성, 금단증상 및 습관화의 현상을 가지는데, 약물의 사용으로 인한 통제력 상실을 의미하기도 한다. 최근의 약물남용은 청소년, 여성 약물남용자의 증가로 인한 세계적으로 심각한 정신질환중의 하나로서, 중독성 약물에 대한 치료제의 개발은 시급한 현실이다.

이러한 약물 중독의 해결책으로 여러 가지 사회정책 및 치료, 재활을 위한 프로그램이 이루어지고 있지만, 근본적인 치료대책으로서 한계점을 가지고 있다.

코카인 (***e), 암페타민 (amphetamine), 모르핀 (morphine), 니코틴(nicotine), 대마초, 카페인(caffeine) 등과 같은 중독성 약물들은 행동방식 중 행동적 민감화 (Behavioral sensitization)현상을 유발하는데 행동적 민감화란 적은 양의 중독성 약물을 반복적 또는 간헐적으로 투여하면 보행성 활동량(locomotor activity)과 상동적 행동(stereotypy)이 점진적으로 증가하는 현상으로, 활동량의 점차적인 증가가 유도발달되는 상태인 발달 단계(Development = induction of sensitization)와 일단 발달된 활동량이 비교적 장기간 유지되는 상태인 발현 단계 (expression of sensitization)로 나타나게 되는데, 이러한 현상을 담당하는 신경적 근저(neural substrate)는 중추 신경계내 중뇌 변연 도파민계(mesolimbic dopamine pathway)로 도파민 신경세포와 그 표적영역인 측좌핵(NAc, nucleus accumbens)과 선조체(striatum)인 것으로 알려져 있으며(Einhorn, L.C., et al., Electrophysiological effect of ***e in the mesoaccumbens dopamine system:studies in the ventral tegmental area, J Neurosci., 8(1), pp 100-112, 1988), 중독성 약물들은 약물투여에 따른 보행성 활동량을 증가시킨다고 알려져 있어(Wiechman BE., et al., Pharmacol. Biochem. Behav., 15(3), pp.425-433, 1981), 보행성 활동량은 주요한 약물 중독의 지표로 사용되고 있다.

코카인은 약물강화효과를 통하여 탐닉현상이 생기는데, 이러한 행동적 변화에 영향을 주는 요인이 도파민 (Dopamine, DA) 신경전달계의 활성화로서, 특히 코카인 투여로 인한 보상 및 강화작용은 복측 피개 영역 (Ventral tegmental area, VTA)의 A10 신경 (A10 neuron)에서 기시하여 측핵 (Nucleus accumbens)으로 투사되는 중뇌 변연계가 중요한 역할을 맡고 있다고 알려져 있다(Einhorn, L.C., et al., Electrophysiological effect of ***e in the mesoaccumbens dopamine system:studies in the ventral tegmental area, J Neurosci., 8(1), pp 100-112, 1988).

최근의 연구들을 보면 코카인의 투여로 인하여 약물 중독과 관련이 있는 측핵 및 선조체 등의 도파민성 신경세포의 투사부위에서 신경활성의 지표라고 알려진 초기 유전자 c-Fos (Immediate early gene c-Fos)의 단백인 c-Fos발현이 증가되었 다는 보고가 있다. 실험동물에 반복적으로 도파민 D1 수용체 효능제인 SKF-38393를 투여한 경우, 보행성 활동량과 신경활성도의 지표인 c-Fos 의 발현이 증가되었다. 또한 도파민의 길항물질인 SCH 23390을 투여한 결과, 코카인에 의한 보행성 활동량이 줄어들었다 (Parada A., et al., Neuropharmacology, 39(9), pp.1645-1652, 2000). 추가로 생체내 (In vivo) 미세투석법 (Microdialysis)을 이용하여 관찰한 실험에서 약물 중독과 관련있는 부위인 선조체 및 측핵에서 코카인 투여로 인한 도파민의 농도는 현저하게 증가하였으며 (Pontieri FE., et al., Natl. Acad. Sci. USA., 92, pp.12304-12308, 1995), 이는, 보행성 활동량이 증가를 보임으로써, 생화학적인 측면인 도파민과 행동학적인 측면인 보행성 활동량이 상관관계가 있음을 보여주는 실험적인 증거를 제시하였다 (Kuczenski R., et al., J. Neurosci., 11(9), pp.2703-2712, 1991).

따라서 약물의 중독성에 관여하는 신경기전의 규명이야말로 약물중독치료에 궁극적인 해답을 줄 수 있을 것이다.

인동(忍冬, Lonicerae Caulis et Folium)은 인동과의 인동덩굴 (Lonicera japonica Thunberg)의 줄기 또는 엽(葉)이 붙은 줄기를 건조한 것으로 추운 겨울에도 넝쿨이 살아서 시들지 않기 때문에 붙여졌다.

일반적으로, 금은화는 인동과의 인동덩굴 또는 그 변종의 꽃봉오리 부분을 나타내며, 본초강목(本草綱目)에는 경(莖; 줄기), 엽(葉; 잎) 및 화(花; 꽃) 모두 사용한다고 하였으나, 임상적으로 등(藤), 엽(葉) 보다 꽃(금은화)이 효능이 좋기 때문에 지금은 대부분 꽃만을 사용하게 되으며, 금은화란 이름은 처음 피는 꽃이 흰색이지만 차차 노랗게 변해서 붙여진 이름으로 인동화(忍冬花), 이화(二花), 은화(銀花), 쌍화(雙花), 금화(金花), 금등화(金藤花), 금은등(金銀藤), 원앙등(鴛鴦藤), 로사등(鷺藤), 노옹수(老翁須), 좌전등(左纏藤), 금채고(金釵股), 통영초(通靈草) 및 밀통등(蜜桶藤)이라는 다양한 이름으로 불리우며, 특징은 특이한 냄새가 있고 맛은 달고 성질은 차다. 성분으로는 루테올린(luteolin) 및 이노시톨(inositol)이 약 1%가 함유되어 있으며 이외에 사포닌(saponin), 탄닌(tannin) 및 로니세린(lonicerin, =luteolinrhamnoglucoside)을 함유하며(박종희 저, 한약백과도감(하), 도서출판 신일상사, p.654-655, 2002), 효능으로는 이질, 열독으로 인한 피부 조직 괴사, 유선염, 대장염, 위궤양, 방광염, 인후염, 편도선염, 기관지염, 결막염 및 부스럼, 유행성 이하선염으로 인한 고열, 화농성 감염증의 효과가 있으며, 약리작용은 항균작용, 항염증작용, 해열작용, 백혈구 탐식작용 증가, 중추신경 흥분작용, 혈청 콜레스테롤 강하, 궤양 예방효과 등이 보고되어 있으나(문태철 외 7인, 금은화 플라보노이드성분의 항염증작용, 대한약학회, 약학회지, 43(1), pp.117-123, 1999; 박욱연 외 2인, 한약재 추출물의 항균효과 검색, 한국식품영양과학회, 한국식품영양학회지, 한국영양식량학회지, 21(1), pp.91-96, 1992), 상기 문헌 어디에도 금은화추출물이 약물 중독 및 금단증상에 효과적이라는 어떠한 개시도 된 바가 없다.

이에 본 발명자들은 금은화추출물이 약물 중독의 지표로 사용되는 보행성 활동량의 감소효과뿐만 아니라, 뇌의 측핵과 선조체에서의 신경활성 지표인 c-Fos 발현을 급격히 감소시킴을 확인함으로써, 약물 중독 및 금단증상의 치료 효과를 확인 하여 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 금은화추출물을 유효성분으로 함유하는 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

또한 본 발명은, 금은화추출물을 유효성분으로 함유하는 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본원에서 정의되는 금은화추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 용매 또는 이들의 혼합 용매, 바람직하게는 물 및 에탄올 혼합 용매, 보다 바람직하게는 60 내지 100% 에탄올 혼합용매, 가장 바람직하게는 90 내지 100% 에탄올에 가용한 추출물을 포함한다.

본원에서 정의되는 약물은 코카인 (***e), 암페타민 (amphetamine), 모르핀 (morphine), 니코틴(nicotine), 대마초 또는 카페인(caffeine) 등이며, 바람직하게는 코카인임을 특징으로 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 금은화추출물은 하기와 같이 제조될 수 있다.

본 발명의 본 발명의 금은화를 음건하여 마쇄한 후, 금은화 중량의 약 1 내지 25배, 바람직하게는 약 5 내지 20배 분량의 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 용매 및 이들의 혼합 용매, 바람직하게는 물 및 에탄올 혼합 용매, 보다 바람직하게는 60 내지 100% 에탄올 혼합용매로, 실온에서 약 10 내지 96시간, 바람직하게는 60 내지 80시간 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법을 사용하여, 바람직하게는 냉침 추출한 후 수득한 추출액을 여과, 감압 농축 또는 건조하여 본 발명의 금은화추출물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기 제조방법으로 수득한 금은화추출물을 유효성분으로 함유하는 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 치료용 약학조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.02 내지 50% 중량으로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 금은화추출물을 포함하는 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤 조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서, 본 발명의 추출물은 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/kg으로, 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서 상기 투여량 은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(Intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

또한, 본 발명은 금은화추출물을 유효성분으로 함유하는 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본원에서 정의되는 “건강기능식품”은 건강기능식품에 관한 법률 제6727호에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, “기능성”이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.

본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 금은화추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 시럽제 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 금은화추출물 자체는 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다.

본 발명의 상기 추출물은 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 치료를 위한 목 적으로 식품 또는 음료에 첨가될 수 있다. 이 때, 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 10 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 것 외에 액체성분에는 특별한 제한점은 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등의 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등의 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴, 스테비아 추출물(예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물들은 천연 과일 쥬스 및 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합 하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 금은화추출물은 약물 중독의 지표로 사용되는 보행성 활동량의 감소효과뿐만 아니라, 뇌의 측핵과 선조체에서의 신경활성 지표인 c-Fos 발현을 급격히 감소시키는 효과를 나타내는 바, 약물 중독 및 금단증상의 예방 및 치료용 약학조성물 또는 건강기능식품으로 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 하기 참고예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 참고예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 참고예, 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

참고예 1. 실험동물의 준비

실험동물은 체중 250-260 g의 스프라그-다우리(Sprague-Dawley)계 수컷 랫트(효창사이언스)를 사용하였고, 대구한의대학교 동물사육실에서 일정한 조건(온도: 21± 2℃, 명암: 12시간 명암주기)에서, 사료와 음수의 자유로운 섭취가 가능하도록 하였으며, 실험시작 전까지 물과 먹이를 충분히 제공하며 실험시작 전에 실험동물을 3일 동안 하루에 10분씩 사전취급(Handling)한다.

참고예 2. 통계처리

보행성 활동량은 박스 내에서 수평이동거리(㎝)로 측정하였으며, 통계적 유의성은 SPSS 프로그램(Version 11.01)의 포스트 훅 터키 테스트(post hoc Turkey test)로 검정하여 p값이 0.05이하인 경우에 유의한 것으로 인정하였다.

실시예 1. 금은화추출물의 제조

대구광역시에 위치한 대원약업사에서 구입하여 음건 세절한 금은화 3kg을 15ℓ용량의 95% 에탄올을 가하고, 상온(24℃)에서 72시간 동안 추출하여 수득한 추출액을 여과한 후, 감압농축기 (EYELA Co., Japan)로 감압 농축하여 금은화추출물 290g을 수득하였다(이하 “LJ"라 함).

실험예 1. 약물 투여 후 행동적 민감성에 대한 금은화추출물의 효과

급성 및 만성 약물 투여로 의한 행동적 민감성에 대한 상기 실시예 1의 금은화추출물의 효과를 확인하기 위하여 하기와 같이 코카인 투여 후 랫트의 보행성 활동량 변화에 대한 실험을 문헌에 기재된 방법을 응용하여 하기와 같은 방법으로 수행하였다(Karasinska JM., et al., Eur Neurosci., 22(7), pp.1741-1750, 2005).

1-1. 보행성 활동량의 측정 방법

실험동물의 활동량은 비디오트랙킹(videotracking)을 이용하여 에토비젼 프 로그램(Ethovision program, Noldus Information Technology BV, Wageningen, Netherlands)으로 측정하였다. 상세하게는 가로, 세로, 높이가 40cm x 40cm x 45cm 인 검은색 무광택 아크릴 상자를 이용하여 실험동물의 수평 움직임을 추적하였으며, 9개 상자의 약 2.5 m 위에 디지털 카메라를 설치하여 이로부터 얻어진 화상을 컴퓨터에 전달하여 검은 배경에 흰색 피사체의 대조 원리를 이용함으로써 흰색 실험동물 상(Image)의 중심점을 초당 수 번 인식하는 방식으로 실험동물의 움직임을 따라 추적하여 실험동물의 움직임의 궤적을 데이터화하여 움직인 거리를 정량화하였다.

1-2. 보행성 활동량의 측정

상기 참고예 1에서 준비된 실험동물을 사육장에서 외부소음이 차단된 실험실로 옮겨 각각 무게를 측정한 후, 9개의 활동량 측정상자에 개별적으로 넣었다. 상자 내에서 60분간 적응시간을 거쳐 60분간 기저 활동량(baseline)을 측정한 후, 금은화추출물 25, 50, 및 100 mg/kg을 각각 1회 경구 투여하였으며, 대조군으로 2 ml/kg의 vehicle(70% PEG+1% Tween 80+10% EtOH)를 경구 투여하였다. Vehicle 또는 금은화 추출물을 경구투여하고, 60분 후 생리식염수 또는 코카인 20 mg/kg를 단회투여하고, 추가적으로 60분 동안 보행하여 박스 내에서 수평이동거리(cm)로 보행성 활동량을 측정하였다.

그 실험결과, 표 1 및 도 1에서 나타내는 바와 같이, 정상군(vehicle투여 후 생리식염수 처치군)에선 1101.10 ± 305.47cm로, 대조군(vehicle 투여 후 코카인 처치군)에서 최고 20671.56 ± 1876.09cm 까지 증가한데 반하여, 금은화추출물 25, 50, 100 mg/kg 투여군의 경우 각각 9547.57 ± 1692.65cm, 11808.75 ± 2154.74cm, 5884.67 ± 1227.53cm로 증가하여 대조군에 비해 보행성 활동량이 감소하였으며, 특히, 금은화추출물 25, 100 mg/kg 투여군은 대조군에 비해 유의하게 감소되었음을 확인하였다(표 1 및 도 1 참조).

또한, 도 2 또는 표 1에서 나타내는 바와 같이 정상적인 상태에서 금은화추출물을 투여한 후의 행동학적 변화가 일어나는지를 확인하기 위하여, 금은화추출물(금은화 단독투여군) 100 mg/kg를 경구투여 한 후, 생리식염수를 처치하고 추가적으로 60분 동안 보행성 활동량을 측정한 결과, 1419.03± 609.38 cm로 정상군과 비슷한 양상을 보여 정상상태에서는 별 다른 영향을 미치지 않은 것으로 확인되었다.

실험군	처리내용	코카인 투여 후 1시간 보행성 활동량(cm)
정상군	vehicle 투여 후 생리식염수 처리	1101.10 ± 305.47
대조군	vehicle 투여 후 코카인 처리	20671.56 ± 1876.09
금은화 25 mg/kg	금은화 25 mg/kg 투여 후 코카인 처리	9547.57 ± 1692.65
금은화 50 mg/kg	금은화 50 mg/kg 투여 후 코카인 처리	11808.75 ± 2154.74
금은화 100 mg/kg	금은화 100 mg/kg 투여 후 코카인 처리	5884.67 ± 1227.53
금은화 단독투여군	금은화 100 mg/kg투여 후 생리식염수 처리	1419.03± 609.38

실험예 2. 약물 투여에 의한 면역조직화학분석법을 이용한 c-Fos 발현에 대한 금은화추출물의 효과

상기 실시예 1에서 얻은 금은화추출물의 약물 투여에 의한 초기유전자 c-fos 발현을 확인하기 위하여 기존문헌에 기재된 방법을 응용하여 하기와 같은 실험을 하였다(Jang EY, et al., Eur J Pharmacol., 587(1-3), pp.124-128, 2008)

실험당일 검사단계에서 금은화추출물 100 mg/kg 경구투여하고, 1시간 후 코카인 20 mg/kg을 복강 투여하여 그로부터 2 시간 뒤 소듐펜토바르비탈(sodium phentobarbital, 100 mg/kg)로 마취시킨 후, 심장을 통해 500 ml의 4% 파라포름알데하이드(paraformaldehyde, PFA)로 혈액을 관류시켜 뇌 조직을 고정시켰다. 뇌 조직을 꺼낸 후 10% 수크로스(sucrose)/4% PFA에 약 2시간 동안 고정시킨 다음, 20% 수크로스(sucrose)/PBS(phosphate buffer solution) 용액에 담근 후 하루 동안 4℃ 냉장 상태로 유지하였다. 그런 다음 -20℃상태에서 크라이오톰(cryotome; Shandon Cryotome, Thermo Fisher Scientific)으로 30 um두께로 뇌 조직을 절편하여 측핵 부위를 취하여 0.1% 아지드나트륨/완충용액(soduim azide/PBS)에 넣어 4℃에 보관하였다.

조직절편은 완충용액(PBS)에 3회 세척하여 2% Triton-X-100/PBS 용액에서 5분간 세포막의 지질을 제거하는 과정을 거친 후 3% BSA/PBS 용액으로 블록킹(blocking)하였다. 그리고 0.1% BSA/PBS 용액에 1:1000으로 희석된 1차 rabbit anti-Fos antibody (Santa cruz, CA, USA)를 이용하여 4℃에서 20시간 동안 반응시킨 후, 발색제로 DAB를 사용하여 c-Fos 단백질을 발현시켰다.

실험결과, 도 3에서 나타내는 바와 같이 대조군에 비해 금은화추출물 100 mg/kg 투여군이 측핵과 선조체에서 신경활성지표인 c-Fos 유전자의 발현을 급격히 감소시켜 약물중독의 효과가 있음을 알 수 있다(도 3 참조).

실험예 3. 급성독성실험

상기 실시예 1에서 얻은 금은화추출물의 투여에 의한 독성을 확인하기 위하여 기존문헌에 기재된 방법을 응용하여 하기와 같은 실험을 하였다 (이형철 외, 동의병리학회지, 15(4), pp543-547, 2001).

6 주령의 특정병원체부재 (Specific pathogen-free, SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 각 그룹당 2마리씩의 동물에 본 발명의 금은화추출물을 500 ㎎/㎏의 용량으로 1회 경구투여 하였다. 실험물질 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상 및 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 강장기와 흉강 장기의 이상여부를 관찰하였다.

그 결과, 실험 물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사 및 부검 소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.

또한, 본 발명의 금은화추출물은 랫트에서 각각 500 ㎎/㎏ 까지도 독성변화를 나타내지 않았으며, 경구투여 최소치사량 (LD₅₀)은 500 ㎎/㎏ 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

하기에 본 발명의 금은화추출물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예 1. 산제의 제조

금은화추출물(LJ) 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 2. 정제의 제조

금은화추출물(LJ) 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 3. 캅셀제의 제조

금은화추출물(LJ) 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 4. 주사제의 제조

금은화추출물(LJ) 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na2HPO4,12H2O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 5. 액제의 제조

금은화추출물(LJ) 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 6. 건강 식품의 제조

금은화추출물(LJ) 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 7. 건강 음료의 제조

금은화추출물(LJ) 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

[이 발명을 지원한 국가연구개발사업]

[과제고유번호]

515-82-06593

[부처명]

지식경제부

[연구사업명]

지역혁신센터 사업

[연구과제명]

뇌질환 치료를 위한 한방제제 및 천연물 신약개발

[주관기관]

대구한의대학교 산학협력단

[연구기간]

2008년 03월 01일 ~ 2009년 02월 28일

도 1은 코카인 투여로 유도된 금은화 추출물의 보행성 활동량에 대한 효과를 나타낸 도이고,

도 2은 금은화추출물(100 mg/kg)의 단독 투여 시 보행성 활동량에 대한 효과를 나타낸 도이며,

도 3은 코카인 투여로 유도한 금은화추출물의 뇌의 측핵과 선조체 내 c-Fos 발현에 대한 효과를 나타내는 도이다.

Claims

금은화 60 내지 100% 물 및 에탄올 혼합용매 추출물을 유효성분으로 함유하는 코카인 중독의 예방 및 치료용 약학조성물.
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금은화 60 내지 100% 물 및 에탄올 혼합용매 추출물을 유효성분으로 함유하는 코카인 중독의 예방 및 개선용 건강기능식품.
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