KR101041891B1 - Pharmaceutical composition for preventing or treating inflammatroy diseases containing acrylamide derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof as an active ingredient - Google Patents
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Abstract
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 아크릴아마이드 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것으로, 본 발명에 따른 상기 아크릴아마이드 유도체는 염증성 질환을 유발하는 류코트리엔의 분비 또는 생성을 효과적으로 저해함으로써, 염증, 알레르기, 천식 등의 염증성 질환을 예방 및 치료하는 데 유용하게 사용할 수 있다: The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating an inflammatory disease containing an acrylamide derivative represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, wherein the acrylamide derivative according to the present invention is an inflammatory disease By effectively inhibiting the secretion or production of leukotriene, which can cause it, it can be usefully used to prevent and treat inflammatory diseases such as inflammation, allergies, and asthma:
[화학식 1][Formula 1]
(상기 식에서, R은 명세서에서 정의한 바와 같다).(Wherein R is as defined in the specification).
염증, 알레르기, 천식, 염증성 질환, 류코트리엔, 아크릴아마이드 Inflammation, allergies, asthma, inflammatory diseases, leukotriene, acrylamide
Description
본 발명은 화학식 1로 표시되는 아크릴아마이드 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases containing an acrylamide derivative represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
천식(asthma)이란 여러 가지 자극에 대한 기도의 과민성을 그 특징으로 하는 질환으로 기도의 광범위한 협착에 의해 발생하는 천명(喘鳴), 호흡곤란, 기침 등의 임상 증세들은 자연적으로 또는 인위적 치료에 의해 가역적으로 호전될 수 있다. 대부분의 천식은 알레르기성이며, 만성 기도염증(chronic airway inflammation)과 기도 과민반응성(bronchial hyperresponsiveness)을 나타내는 것이 특징이다(Minoguchi K and Adachi M. Pathophysiology of asthma. In: Cherniack NS, Altose MD, Homma I, editors. Rehabilitation of the patient with respiratory disease. New York: McGraw-Hill, 1999, pp97-104).Asthma is a disease characterized by airway hypersensitivity to various stimuli. Clinical symptoms such as wheezing, dyspnea and cough caused by extensive airway narrowing are reversible by natural or artificial treatment. Can be improved. Most asthma are allergic and characterized by chronic airway inflammation and bronchial hyperresponsiveness (Minoguchi K and Adachi M. Pathophysiology of asthma.In: Cherniack NS, Altose MD, Homma I , editors.Rehabilitation of the patient with respiratory disease.New York: McGraw-Hill, 1999, pp97-104).
알레르기성 천식 환자는 세계인구의 약 10%를 차지하는 것으로 알려져 있으며(2억 7500만 명, 1995년), 미국에만 1700만 명이 천식으로 고생하고 있고, 이 중 500만 명이 청소년이라고 보고되어 있다. 2000년도에 알레르기성 천식 치료제의 미국 시장 규모는 약 64억불로 추산되며, 한국 시장의 규모도 약 10억불에 달하는 것으로 알려져 있다. 이는 전체 한국 의약품 시장의 20% 정도를 차지하는 매우 큰 규모이다. 나아가, 이러한 보고는 우리 주변에서 천식 환자를 접하는 것이 어려운 일이 아님을 말해주며, 천식은 매우 일상화된 질환 중에 하나임을 반증한다. Allergic asthma patients are known to account for about 10% of the world's population (275 million, 1995), and 17 million people in the United States alone suffer from asthma, of which 5 million are reported to be adolescents. In 2000, the US market for allergic asthma drugs is estimated to be about $ 6.4 billion, and the Korean market is known to be about $ 1 billion. This is a very large scale, accounting for about 20% of the Korean pharmaceutical market. Furthermore, these reports indicate that it is not difficult to see asthma patients around us, and that asthma is one of the most common diseases.
천식은 그 원인에 따라 외인성 천식과 내인성 천식으로 나누어질 수 있다. 외인성 천식은 원인 항원에 노출되었을 때 증상이 나타나는 천식을 말한다. 원인 항원에 대한 피부시험이나 기관지 유발시험에 양성반응을 보이며 젊은 층에서 발병하는 것이 보통이다. 주요 원인 항원으로는 집 먼지, 진드기를 들 수 있고, 그 밖에 꽃가루, 동물의 상피, 곰팡이 등이 원인 항원으로 작용한다. 내인성 천식은 상기도 감염, 운동, 정서불안, 한랭 기후, 습도의 변화 등에 의해 유발되거나 악화되는 경우로서 성인형 천식에서 흔히 볼 수 있다. 그 외에도 약물에 의해 유발되는 천식, 운동 유발성 천식, 직업성 천식 등이 있다. 가장 문제가 되는 외인성 천식의 경우 피부시험으로 원인 항원을 찾아낼 수 있으며, 외인성 천식에서는 혈청 중의 총 IgE를 증가되며 항원 특이적 IgE가 검출된다.Asthma can be divided into exogenous and endogenous asthma depending on the cause. Exogenous asthma is asthma that causes symptoms when exposed to the causative antigen. It is common in younger people who are positive for skin tests or bronchial challenge tests for the causative antigen. The main causative antigens include house dust and mites. Pollen, animal epithelium, and fungi act as causative antigens. Endogenous asthma is often caused by upper respiratory tract infections, exercise, emotional instability, cold climate, changes in humidity, etc., and is common in adult-type asthma. Other medications include asthma, exercise-induced asthma and occupational asthma. In the case of the most problematic exogenous asthma, a skin test can identify the causative antigen. In exogenous asthma, the total IgE in the serum is increased and antigen-specific IgE is detected.
병태생리학적인 면에서 천식은 TH2 면역세포에서 생성하는 사이토카인에 의해 염증세포가 증식, 분화 및 활성화되어 기도 및 기도주변 조직으로 이동, 침윤하여 나타나는 만성 염증성 질환으로 인식되고 있다(Elias JA, Lee CG, Zheng T, Ma B, Homer RJ, Zhu Z. New insights into the pathogenesis of Asthma., J. Clin. Invest., 111, pp291-297, 2003). 이 경우 활성화된 호산구, 비만세포, 폐포 대식세포 등의 염증세포는 다양한 염증매개인자들을 분비하는데 , 그 중 시스테인 류코트리엔 (cysteinyl leukotrienes; LTC4, LTD4, LTE4)은 가장 강력한 기관지 수축작용과 호산구증가를 유도하는 물질이다(Barnes PJ, Chung KF, Page CP. Inflammatory mediators of asthma: An update., Pharmacol Rev., 50, pp515-596, 1998). 염증세포에서 시스테인 류코트리엔의 생성은, 먼저 세포막의 인산지질(phospholipid)에서 유리된 아라키돈산(arachidonic acid)이 핵막에서 5-리폭시게나제(5-lipoxygenase, 5-LO)와 5-리폭시게나제활성단백질(Five Lipoxygenase Activating Protein, FLAP)의 작용으로 5-HPETE(5-hydroperoxyeicosatetraenoic acid)를 거쳐 류코트리엔 A4(leukotriene A4)으로 전환된 후, LTC4 합성효소(LTC4 synthase)의 작용으로 LTA4에 글루타치온이 결합하여 LTC4가 생성된다(Nicosia S, Capra V, Rovati GE. Leukotrienes as mediators of asthma., Pulm Pharmacol Thr, 14, pp3-19, 2001). 세포질에서 생성된 LTC4는 세포 밖으로 배출되고, 배출된 LTC4는 감마글루타밀트란스펩티다아제(γ-glutamyltranspeptidase)와 디펩티다아제 (dipeptidase)에 의해 글루타민산(glutamic acid)과 글리신(glycine) 잔기가 차례로 가수분해 되어 각각 LTD4와 LTE4로 변환된다(Peters-Golden M. Cell biology of the 5-lipoxygenase pathway., Am. J. Respir Crit Care Med., 157, ppS227-S232,1998; Bisgaard H. Role of leukotrienes in asthma pathophysiology., Pediatr Pulmonol, 30, pp166-176, 2000). In terms of pathophysiology, asthma is recognized as a chronic inflammatory disease caused by the proliferation, differentiation, and activation of inflammatory cells by cytokines produced by TH2 immune cells, which migrate and invade the airways and surrounding airways (Elias JA, Lee CG). , Zheng T, Ma B, Homer RJ, Zhu Z. New insights into the pathogenesis of Asthma., J. Clin. Invest., 111, pp 291-297, 2003). In this case, inflammatory cells such as activated eosinophils, mast cells, and alveolar macrophages secrete various inflammatory mediators, among which cysteinyl leukotrienes (LTC4, LTD4, LTE4) induce the strongest bronchial contraction and eosinophilia. (Barnes PJ, Chung KF, Page CP. Inflammatory mediators of asthma: An update., Pharmacol Rev., 50, pp 515-596, 1998). The production of cysteine leukotriene in inflammatory cells involves the activation of 5-lipoxygenase (5-LO) and 5-lipoxygenase activity in the nuclear membrane by the release of arachidonic acid released from the phospholipids of the cell membrane. It is converted to leukotriene A4 through 5-HPETE (5-hydroperoxyeicosatetraenoic acid) by the action of the protein (Five Lipoxygenase Activating Protein, FLAP), and then glutathione is bound to LTA4 by the action of LTC4 synthase (LTC4 synthase). LTC4 is produced (Nicosia S, Capra V, Rovati GE. Leukotrienes as mediators of asthma., Pulm Pharmacol Thr, 14, pp3-19, 2001). LTC4 produced in the cytoplasm is discharged out of the cell, and the released LTC4 is hydrolyzed by glutamic acid and glycine residues in turn by gamma-glutamyltranspeptidase and dipeptidase. LTD4 and LTE4 (Peters-Golden M. Cell biology of the 5-lipoxygenase pathway., Am. J. Respir Crit Care Med., 157, ppS227-S232,1998; Bisgaard H. Role of leukotrienes in asthma pathophysiology. , Pediatr Pulmonol, 30, pp 166-176, 2000).
알레르기, 찬 공기, 운동, 화학적 자극 등 다양한 자극을 받아 염증세포로부터 분비되는 시스테인 류코트리엔은 호산구의 기도유입 및 집적과 직접적인 관계가 있다(Busse WW. Leukotrienes and inflammation. Am. J. Respir Crit Care Med., 157, ppS210-S213, 1998). 호산구 역시 다량의 시스테인 류코트리엔을 생산하므로 이들의 기도 조직 및 기관지폐포액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)의 증가는 천식을 악화시키는 중요한 요인이 된다(Underwood DC, Osborn RR, Newsholme SJ, Torphy TJ, Hay DWP. Persistent airway eosinophilia after leukotriene (LT) D4 administration in the guinea pig. Am. J. Respir Crit Care Med., 154, pp850-857, 1996).Cysteine leukotrienes secreted from inflammatory cells under various stimuli, such as allergies, cold air, exercise, and chemical stimuli, are directly related to airway influx and accumulation of eosinophils (Busse WW. Leukotrienes and inflammation. Am. J. Respir Crit Care Med. , 157, ppS210-S213, 1998). Eosinophils also produce large amounts of cysteine leukotriene, so their increase in airway tissue and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) is an important factor exacerbating asthma (Underwood DC, Osborn RR, Newsholme SJ, Torphy TJ, Hay DWP). Persistent airway eosinophilia after leukotriene (LT) D4 administration in the guinea pig.Am. J. Respir Crit Care Med., 154, pp 850-857, 1996).
따라서 염증세포 활성화에 관여하는 IL-4, IL-5, IL-13 등의 사이토카인 및 면역글로블린E의 생산과 이들의 작용으로 염증세포에서 분비되는 시스테인 류코트리엔 생합성 등은 염증 및 알레르기 반응과 이로 인한 천식을 유발하는 주요 원인이므로 이들의 생산을 억제하기 위한 약물을 개발하고자 많은 연구가 진행되고 있 다.Therefore, the production of cytokines such as IL-4, IL-5, IL-13, and immunoglobulin E, which are involved in inflammatory cell activation, and the biosynthesis of cysteine leukotrienes secreted from inflammatory cells through their action, are associated with inflammatory and allergic reactions and As a major cause of asthma, many studies are being conducted to develop drugs to suppress their production.
까마중은 가지과 식물로서 저지대의 길가나 밭 주위에 흔하게 분포하는 1년초이다. 예로부터 민간에서 종기나 악성 부스럼을 치료하는 약재로 흔히 사용하여 왔으며, 각종 고문헌에서는 까마중이 열이 내리고 오줌이 잘 나오게 하며 원기를 북돋아 주는 것으로 기재되어 있을 뿐만 아니라, 잠을 적게 자게 하고 종기로 인한 독과 타박상, 어혈 등을 다스리며 갖가지 광석의 독에 대한 해독 작용이 있는 것으로 기재되어 있다. 까마중의 활성은 주로 세포독성에 의한 암 치료에 효과가 있는 것으로 알려져 있으며, 이러한 효과는 동물실험에서 암세포에 뚜렷한 억제 작용이 있다는 보고에 의해서도 뒷받침된다. Camellia is a branched plant, common in early 1st year, distributed along the roadsides and fields of lowlands. Since ancient times, it has been commonly used as a medicine to treat boils and malignant swellings, and in various ancient literature, it is described that the crows have a low heat, urine, and refreshment. It is said to have a detoxifying effect on poisons of various ores by controlling poisons, bruises and fish blood. It is known that the activity in kamera is mainly effective in treating cancer by cytotoxicity, and this effect is supported by the report that there is a clear inhibitory effect on cancer cells in animal experiments.
종래, 까마중 추출물의 생리활성에 대한 특허로서, 예를 들면 까마중 열매에서 추출한 당단백질의 항암활성(국내특허 10-0661480), 까마중 전초 및 열매 추출물의 항암활성(CN-101113451, CN-1255342, CN-101007110, CN-1055932), 까마중 열매의 알칼로이드 추출물의 항암활성(CN-101199666, CN-101108872), 까마중 전초추출물의 경간암세포(cervical carcinoma) 및 경간궤양(cervical erosion) 치료효과(CN-10114776), 항균효과 (KR-2007065957), 항산화효과(KR2007023466), 니코틴 및 다이옥신 해독효과(KR2005113091), 항바이러스효과(KR 2004097445), 발병치료효과(KR 200515304), 알칼로이드 화합물(solasodine hydrofluoride 포함)의 항암 및 항천식 조성물(CN 1763074), 살충효과(CN 2002-111915) 등이 보고되어 있다. Conventionally, as a patent for the physiological activity of the extract in the black yam, for example, the anticancer activity of the glycoprotein extracted from the fruit of the black yam (Domestic Patent 10-0661480), the anticancer activity of the extract and the extract of black berry (CN-101113451, CN-1255342, CN) -101007110, CN-1055932), Anticancer Activity of Alkaloid Extracts from Fruits of Crow (CN-101199666, CN-101108872), Treatment Effect of Cervical Carcinoma and Cervical erosion of Cerebral Carcinoma (CN-10114776) , Antibacterial effect (KR-2007065957), antioxidant effect (KR2007023466), nicotine and dioxin detoxification effect (KR2005113091), antiviral effect (KR 2004097445), treatment effect (KR 200515304), anti-cancer of alkaloid compounds (including solasodine hydrofluoride) Anti-asthmatic compositions (CN 1763074), insecticidal effects (CN 2002-111915) and the like have been reported.
이러한 까마중의 주요 활성 성분의 예로는 알칼로이드, 사포닌, 트리테르페노이드, 아크릴아마이드, 플라보노이드, 단백다당체, 페닐프다당체, 펩타이드 등을 들 수 있으며, 이들의 주요한 생리활성으로는 항암, 항균, 항산화 활성이 보고되어 있으나, 이들 중 본 발명의 화학식 1의 아크릴아마이드 유도체의 항염, 항알레르기, 항천식에 대한 활성은 아직까지 보고된바 없다. Examples of the main active ingredient in such a hood include alkaloids, saponins, triterpenoids, acrylamides, flavonoids, protein polysaccharides, phenylf polysaccharides, peptides, and the like, and their main physiological activities include anticancer, antibacterial and antioxidant activities. Although it has been reported, the activity of anti-inflammatory, anti-allergic, anti-asthma of the acrylamide derivative of the formula (1) of the present invention has not been reported yet.
이에, 본 발명자들은 화학식 1로 표시되는 아크릴아마이드 유도체가 염기구성 백혈병세포(RBL-1)의 시스테인 류코트리엔 합성 저해활성과 난백알부민으로 감작된 천식 동물 모델에서 기관지 폐포세척액의 면역글로브린 E(IgE) 및 인터루킨-4 (IL-4), 인터루킨-13 (IL-13)의 생산을 억제하는 활성, 호산구 증가를 억제하는 활성, 카라기난-유도 동물모델에서 부종을 억제하는 활성을 확인함으로써, 본 발명의 아크릴아마이드 유도체가 염증, 알레르기, 천식 등의 염증성 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있음을 알아내고, 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors have found that the acrylamide derivative represented by the formula (1) is immunoglobulin E (IgE) of bronchoalveolar lavage fluid in an asthmatic animal model in which cysteine leukotriene synthesis inhibitory activity of basic leukemia cells (RBL-1) and egg white albumin are sensitized. And by identifying the activity of inhibiting the production of interleukin-4 (IL-4), interleukin-13 (IL-13), the activity of inhibiting eosinophil increase, and the activity of inhibiting edema in a carrageenan-induced animal model. The acrylamide derivative has been found to be useful in the prevention or treatment of inflammatory diseases such as inflammation, allergy, asthma, and completed the present invention.
본 발명의 목적은 화학식 1로 표시되는 아크릴아마이드 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는데 있다.An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of inflammatory diseases containing an acrylamide derivative represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
상기 목적을 달성하기 위하여,In order to achieve the above object,
본 발명은 염증, 알레르기, 천식 등의 염증성 질환을 예방 또는 치료에 유용하게 사용할 수 있는 하기 화학식 1로 표시되는 아크릴아마이드 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 제공한다:The present invention provides a pharmaceutical composition containing an acrylamide derivative represented by the following formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, which can be usefully used for preventing or treating inflammatory diseases such as inflammation, allergy, and asthma. do:
[화학식 1][Formula 1]
(상기 식에서, R은 명세서에서 정의한 바와 같다).(Wherein R is as defined in the specification).
본 발명에 따른 아크릴아마이드 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 염증성 질환을 유발하는 류코트리엔의 분비 또는 생성을 효과적으로 저해함으로써, 염증, 알레르기, 천식 등의 염증성 질환을 예방 및 치료하는 데 유용하게 사용할 수 있다. Acrylamide derivatives or pharmaceutically acceptable salts thereof according to the present invention can be effectively used to prevent and treat inflammatory diseases such as inflammation, allergies and asthma by effectively inhibiting the secretion or production of leukotriene causing inflammatory diseases. have.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 화학식 1로 표시되는 아크릴아마이드 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다:The present invention provides a pharmaceutical composition for the prophylaxis or treatment of an inflammatory disease containing an acrylamide derivative represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient:
상기 화학식 1에서, R은 수소 또는 C1-C4의 알콕시이다.In Formula 1, R is hydrogen or alkoxy of C 1 -C 4 .
바람직하게는 상기 R은 수소, 메톡시 또는 에톡시이고, 더욱 바람직하게는 상기 R은 수소 또는 메톡시이다.Preferably said R is hydrogen, methoxy or ethoxy, more preferably said R is hydrogen or methoxy.
본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 아크릴아마이드 유도체의 구체적인 화합물은 다음과 같다:Specific compounds of the acrylamide derivative represented by Formula 1 according to the present invention are as follows:
(E)-3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-N-(4-하이드록시펜에틸)아크릴아미드; 및(E) -3- (4-hydroxy-3-methoxyphenyl) -N- (4-hydroxyphenethyl) acrylamide; And
(R,E)-3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-N-(2-(4-하이드록시페닐)-2-메톡시에 틸)아크릴아미드.(R, E) -3- (4-hydroxy-3-methoxyphenyl) -N- (2- (4-hydroxyphenyl) -2-methoxyethyl) acrylamide.
본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 아크릴아마이드 유도체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 이의 이성질체 또는 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물 또는 수화물을 모두 포함한다.The present invention includes not only the acrylamide derivative represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof, but also an isomer thereof or a possible solvate or hydrate that can be prepared therefrom.
본 발명의 화학식 1의 유도체는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조 에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.The derivative of formula 1 of the present invention may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and as the salt, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful. Acid addition salts include those derived from inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid, and aliphatic mono- and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxyalkanoates, Dioleate, aromatic acid, aliphatic and aromatic sulfonic acids. Such pharmaceutically nontoxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, and iodide. Id, fluoride, acetate, propionate, decanoate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, suverate , Sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitro benzoate, hydroxybenzoate, meth Oxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzenesulfonate, toluenesulfonate, chlorobenzenesul Nate, xylenesulfonate, phenylacetate, phenylpropionate, phenylbutyrate, citrate, lactate, β-hydroxybutyrate, glycolate, malate, tartrate, methanesulfonate, propanesulfonate, naphthalene-1- Sulfonates, naphthalene-2-sulfonates or mandelate.
본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1의 유도체를 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. 또한 이 혼합물에서 용매나 과량의 산을 증발시킨 후 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.The acid addition salts according to the invention are dissolved in conventional methods, for example, by dissolving a derivative of formula 1 in an excess of aqueous acid solution and using the water miscible organic solvent, such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile. It can be prepared by precipitation. It may also be prepared by evaporating the solvent or excess acid from the mixture and then drying or by suction filtration of the precipitated salt.
또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속 염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.In addition, bases can be used to make pharmaceutically acceptable metal salts. Alkali metal or alkaline earth metal salts are obtained, for example, by dissolving a compound in an excess of alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium or calcium salt as the metal salt. Corresponding silver salts are also obtained by reacting alkali or alkaline earth metal salts with a suitable negative salt (eg, silver nitrate).
또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 1의 유도체는 유기합성분야에서 알려진 통상의 합성방법을 이용하여 합성될 수 있거나, 까마중 열매로부터 하기에 설명된 방법에 의해 분리된 것을 사용할 수 있다. 이를 구체적으로 살펴보면 다음과 같다.In addition, the derivative of Formula 1 according to the present invention may be synthesized using conventional synthetic methods known in the art of organic synthesis, or may be used that is separated from the fruit of the crow by the method described below. Specifically, it is as follows.
까마중 열매를 물, C1-C4의 알콜 또는 이의 혼합용매로 추출하는 단계(단계 1); 상기 단계 1에서 얻은 추출물을 물에 현탁시킨 후, 동량의 에틸아세테이트를 가하여 에틸아세테이트 분획물(제1분획물)을 얻는 단계(단계 2); 상기 단계 2에서 얻은 에틸아세테이트 분획물을 헥산/에틸아세테이트 혼합용매의 극성을 순차적으로 높이면서 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 수행하여 제2분획물(1 내지 6)을 얻는 단계(단계 3); 상기 단계 3의 제2분획물 중 5번째 분획물을 클로로포름/메탄올/물 혼합액으로 실리카겔 컬럼크로마토그래피를 재수행하여 제3분획물(5-1 내지 5-7)을 얻는 단계(단계 4); 및 상기 단계 4에서 얻은 제3분획물을 선별하여 메탄올/물 혼합용매로 역상-18 컬럼크로마토그래피를 수행하여 화학식 1의 아크릴아마이드 유도체를 얻는 단계(단계 5)를 포함한다. Extracting the fruit of the black yam with water, C 1 -C 4 alcohol or a mixed solvent thereof (step 1); Suspending the extract obtained in step 1 in water, and then adding the same amount of ethyl acetate to obtain an ethyl acetate fraction (first fraction) (step 2); Obtaining the second fraction (1 to 6) by performing silica gel column chromatography on the ethyl acetate fraction obtained in step 2 while sequentially increasing the polarity of the hexane / ethyl acetate mixed solvent (step 3); Performing a silica gel column chromatography on the fifth fraction of the second fraction of step 3 with a chloroform / methanol / water mixture to obtain third fractions (5-1 to 5-7) (step 4); And screening the third fraction obtained in step 4 to perform reverse phase-18 column chromatography with a methanol / water mixed solvent to obtain an acrylamide derivative of Formula 1 (step 5).
상기 단계 1에서, 혼합용매로는 에탄올 50%가 바람직하고, 상기 단계 3에서, 헥산/에틸아세테이트의 혼합용매의 극성의 증가는 이들 혼합용매의 농도구배를 100:0으로부터 0:100까지 조절함으로써 수행될 수 있다. 또한, 상기 단계 4에서, 클로로포름/메탄올/물 혼합액의 비율은 부피비로 70:30:4인 것이 바람직하고, 상기 단계 4에서, 선별되는 제3분획물의 분획은 5-4 또는 5-6 분획이 바람직하며, 이때 메탄올/물 혼합용매의 혼합비율은 1:2~3인 것이 바람직하다. 이후, 당업계에서 알려진 통상의 정제방법을 통해 본 발명에 따른 화학식 1의 유도체를 얻을 수 있다. In step 1, ethanol 50% is preferable as the mixed solvent, and in step 3, the polarity of the mixed solvent of hexane / ethyl acetate is increased by adjusting the concentration gradient of these mixed solvents from 100: 0 to 0: 100. Can be performed. In addition, in step 4, the ratio of the chloroform / methanol / water mixture is preferably 70: 30: 4 in volume ratio, and in step 4, the fraction of the third fraction to be selected is 5-4 or 5-6 fractions. In this case, the mixing ratio of the methanol / water mixed solvent is preferably 1: 2 to 3. Thereafter, a derivative of Chemical Formula 1 according to the present invention may be obtained through a conventional purification method known in the art.
본 발명에 따른 상기 화학식 1의 아크릴아마이드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물은 염증, 알레르기, 천식 등의 염증성 질환을 유발하는 류코트리엔 분비를 억제하는 활성을 나타냄으로써, 이들 질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. The pharmaceutical composition containing acrylamide of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention as an active ingredient exhibits an activity of inhibiting leukotriene secretion causing inflammatory diseases such as inflammation, allergy, asthma, It can be usefully used for the prevention or treatment of these diseases.
병태생리학적인 면에서 천식은 TH2 면역세포에서 생성하는 사이토카인에 의해 염증세포가 증식, 분화 및 활성화되어 기도 및 기도주변 조직으로 이동, 침윤하여 나타나는 만성 염증성 질환으로 인식되고 있다(Elias JA, Lee CG, Zheng T, Ma B, Homer RJ, Zhu Z. New insights into the pathogenesis of Asthma., J. Clin. Invest., 111, pp291-297, 2003). 이 경우 활성화된 호산구, 비만세포, 폐포 대식세포 등의 염증세포는 다양한 염증매개인자들을 분비하는데, 그 중 시스테인 류코트리엔 (cysteinyl leukotrienes; LTC4, LTD4, LTE4)은 가장 강력한 기관지 수축작용과 호산구증가를 유도하는 물질이다(Barnes PJ, Chung KF, Page CP. Inflammatory mediators of asthma: An update., Pharmacol Rev., 50, pp515-596, 1998). In terms of pathophysiology, asthma is recognized as a chronic inflammatory disease caused by the proliferation, differentiation, and activation of inflammatory cells by cytokines produced by TH2 immune cells, which migrate and invade the airways and surrounding airways (Elias JA, Lee CG). , Zheng T, Ma B, Homer RJ, Zhu Z. New insights into the pathogenesis of Asthma., J. Clin. Invest., 111, pp 291-297, 2003). In this case, inflammatory cells such as activated eosinophils, mast cells, and alveolar macrophages secrete various inflammatory mediators, among which cysteinyl leukotrienes (LTC4, LTD4, LTE4) induce the strongest bronchial contraction and eosinophilia. (Barnes PJ, Chung KF, Page CP. Inflammatory mediators of asthma: An update., Pharmacol Rev., 50, pp 515-596, 1998).
상기 시스테인 류코트리엔은 알레르기, 찬 공기, 운동, 화학적 자극 등 다양한 자극을 받아 염증세포로부터 분비되는데, 이는 호산구의 기도유입 및 집적과 직접적인 관계가 있다(Busse WW. Leukotrienes and inflammation. Am. J. Respir Crit Care Med., 157, ppS210-S213, 1998). 호산구 역시 다량의 시스테인 류코트리 엔을 생산하므로 이들의 기도 조직 및 기관지폐포액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF)의 증가는 천식을 악화시키는 중요한 요인이 된다(Underwood DC, Osborn RR, Newsholme SJ, Torphy TJ, Hay DWP. Persistent airway eosinophilia after leukotriene (LT) D4 administration in the guinea pig. Am. J. Respir Crit Care Med., 154, pp850-857, 1996).The cysteine leukotrienes are secreted from inflammatory cells under various stimuli, such as allergies, cold air, exercise, and chemical stimuli, which are directly related to airway inflow and accumulation of eosinophils (Busse WW. Leukotrienes and inflammation. Am. J. Respir Crit Care Med., 157, pp S210-S213, 1998). Eosinophils also produce large amounts of cysteine leukotriene, so their increased airway tissue and bronchoalveolar lavage fluid (BALF) are important factors that exacerbate asthma (Underwood DC, Osborn RR, Newsholme SJ, Torphy TJ , Hay DWP.Persistent airway eosinophilia after leukotriene (LT) D4 administration in the guinea pig.Am. J. Respir Crit Care Med., 154, pp 850-857, 1996).
따라서 염증세포 활성화에 관여하는 IL-4, IL-5, IL-13 등의 사이토카인 및 면역글로블린E의 생산과 이들의 작용으로 염증세포에서 분비되는 시스테인 류코트리엔의 생성은 염증 및 알레르기 반응과 이로 인한 천식을 유발하는 주요 원인이므로 류코트리엔의 분비 또는 생성을 억제하는 물질은 이들 염증성 질환을 예방 및 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다. Therefore, the production of cytokines and immunoglobulins such as IL-4, IL-5, and IL-13, which are involved in inflammatory cell activation, and the production of cysteine leukotriene secreted from inflammatory cells by their action, are associated with inflammatory and allergic reactions and As a major cause of asthma, substances that inhibit the secretion or production of leukotriene can be usefully used to prevent and treat these inflammatory diseases.
본 발명에 따른 화학식 1의 아크릴아마이드 유도체는 RBL-1 세포주에서의 류코트리엔 생성 저해효과 실험에서, 화학식 1의 유도체의 일종인 실시예 화합물 1 및 2는 LTC4의 분비 억제활성이 각각 16.6±1.2 μM, 22.6±1.3 μM로 나타났다(실험예 1 및 표 1 참조). 이로부터 본 발명에 따른 아크릴아마이드 유도체는 염증세포에서 분비되는 시스테인 류코트리엔의 분비 또는 생성을 효과적으로 저해할 수 있음을 알 수 있다. 따라서, 본 발명에 따른 화학식 1의 아크릴아마이드 유도체는 류코트리엔의 분비 또는 생성으로 인해 유발되는 염증, 알레르기 반응과 이로 인한 천식을 포함하는 염증성 질환의 예방 및 치료에 유용하게 사용할 수 있다.In acrylamide derivatives of the formula (1) according to the present invention in the inhibitory effect of leukotriene production in the RBL-1 cell line, Example compounds 1 and 2 of the derivative of the formula (1) are 16.6 ± 1.2 μM, respectively, the secretion inhibitory activity of LTC4, 22.6 ± 1.3 μM (see Experimental Example 1 and Table 1). From this it can be seen that the acrylamide derivative according to the present invention can effectively inhibit the secretion or production of cysteine leukotrienes secreted from inflammatory cells. Therefore, the acrylamide derivative of Formula 1 according to the present invention can be usefully used for the prevention and treatment of inflammatory diseases including inflammation, allergic reactions and asthma caused by the secretion or production of leukotriene.
본 발명에 따른 상기 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하는 염증성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 하기의 다양한 경구 또는 비경구 투여 형태로 제형화할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. The pharmaceutical composition for preventing or treating an inflammatory disease containing the derivative of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof according to the present invention as an active ingredient may be formulated in various oral or parenteral dosage forms as follows. It is not limited.
경구 투여용 제형으로는 예를 들면 정제, 환제, 경/연질 캅셀제, 액제, 현탁제, 유화제, 시럽제, 과립제, 엘릭시르제(elixirs) 등이 있는데, 이들 제형은 상기 유효성분 이외에 통상적으로 사용되는 충진제, 증량제, 습윤제, 붕해제, 활택제, 결합제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 1종 이상 사용할 수 있다. 붕해제로는 한천, 전분, 알긴산 또는 이의 나트륨염, 무수인산일수소 칼슘염 등이 사용될 수 있고, 활택제로는 실리카, 탈크, 스테아르산 또는 이의 마그네슘염 또는 칼슘염, 폴리에틸렌 글리콜 등이 사용될 수 있으며, 결합제로는 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트라가칸스, 메틸셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 폴리비닐피롤리딘, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스 등이 사용될 수 있다. 이외에도 락토즈, 덱스트로오스, 수크로오스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로오스, 글리신 등을 희석제로 사용할 수 있으며, 경우에 따라서는 일반적으로 알려진 비등 혼합물, 흡수제, 착색제, 향미제, 감미제 등을 함께 사용할 수 있다.Formulations for oral administration include, for example, tablets, pills, hard / soft capsules, solutions, suspensions, emulsifiers, syrups, granules, elixirs, and the like. One or more diluents or excipients, such as extenders, wetting agents, disintegrating agents, lubricants, binders, and surfactants may be used. As a disintegrant, agar, starch, alginic acid or its sodium salt, calcium monohydrogen phosphate anhydride, etc. may be used, and as lubricant, silica, talc, stearic acid or its magnesium salt or calcium salt, polyethylene glycol, etc. may be used. As the binder, magnesium aluminum silicate, starch paste, gelatin, tragacanth, methyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose, polyvinylpyrrolidine, low-substituted hydroxypropyl cellulose, and the like may be used. In addition, lactose, dextrose, sucrose, mannitol, sorbitol, cellulose, glycine, and the like may be used as diluents, and in some cases, commonly known boiling mixtures, absorbents, colorants, flavoring agents, sweeteners, and the like may be used together.
또한, 본 발명에 따른 상기 약학적 조성물은 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사제, 정맥주사제, 근육 내 주사제 또는 흉부 내 주사제를 주입하 는 방법에 의한다. 이때, 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위하여 상기 화학식 1의 유도체 또는 약학적으로 허용되는 이의 염을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고, 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제조할 수 있다.In addition, the pharmaceutical composition according to the present invention can be administered parenterally, parenteral administration is by a method of injecting subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intramuscular injection. At this time, the derivative of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof is mixed in water with a stabilizer or buffer to prepare a parenteral formulation, and then prepared as a solution or suspension, which is a unit dosage form of ampoules or vials. It can manufacture.
상기 조성물은 멸균되거나 또는 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염, 완충제 등의 보조제, 및 기타 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있으며, 통상적인 방법인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제제화할 수 있다. 필요한 경우, 본 발명에 따른 상기 조성물은 기타의 약제, 예를 들면, 다른 당뇨 치료제와 조합하여 투여할 수도 있다. The composition may be sterile or contain preservatives, stabilizers, hydrating or emulsifiers, salts for controlling osmotic pressure, adjuvants such as buffers, and other therapeutically useful substances, and conventional methods of mixing, granulating or coating. It can be formulated according to the method. If necessary, the composition according to the present invention may be administered in combination with other drugs, for example, other antidiabetic agents.
본 발명의 상기 조성물을 단위 용량 형태로 제형화하는 경우, 유효성분으로서 화학식 1의 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 약 0.1 ~ 1,500 mg의 단위 용량으로 함유되는 것이 바람직하다. 투여량은 환자의 체중, 나이 및 질병의 특수한 성질과 심각성과 같은 요인에 따라 의사의 처방에 따른다. 그러나, 성인 치료에 필요한 투여량은 투여의 빈도와 강도에 따라 하루에 약 1 ~ 500 mg 범위가 보통이다. 성인에게 근육 내 또는 정맥 내 투여 시 일 회 투여량으로 분리하여 하루에 보통 약 5 ~ 300 mg의 전체 투여량이면 충분할 것이나, 일부 환자의 경우 더 높은 일일 투여량이 바람직할 수 있다.When the composition of the present invention is formulated in unit dose form, it is preferable that the active ingredient contains a derivative of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof in a unit dose of about 0.1 to 1,500 mg. Dosage depends on the doctor's prescription depending on factors such as the patient's weight, age and the particular nature and severity of the disease. However, the dosage required for adult treatment typically ranges from about 1 to 500 mg per day, depending on the frequency and intensity of administration. A total dosage of about 5 to 300 mg per day, usually separated by a single dose for intramuscular or intravenous administration to adults, will be sufficient, but for some patients a higher daily dosage may be desirable.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 상세히 설명한다. 단, 하기의 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples. However, the following Examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited by the following Examples.
<제조예 1> (E)-3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-N-(4-하이드록시펜에틸)아크릴아미드의 제조Preparation Example 1 Preparation of (E) -3- (4-hydroxy-3-methoxyphenyl) -N- (4-hydroxyphenethyl) acrylamide
신선한 까마중 열매 15 kg을 50% 에탄올로 실온에서 24시간 간격으로 3회 추출하여 50% 에탄올 추출물 2 kg을 얻었다. 상기 추출물을 물 10 L로 현탁시키고, 동량의 에틸아세테이트를 가하여 진탕 방치하여 에틸아세테이트 분획 95 g을 얻었다. 상기 에틸아세테이트 분획을 실리카겔에 흡착시킨 후, 헥산-에틸아세테이트 혼합용매를 농도구배(100:0→0:100)하여 극성을 순차적으로 높이면서 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(230-400 mesh, 7×56 cm)를 수행하여 6개의 분획물을 얻었다. 이 중 5번째 분획물(8 g)을 클로로포름-메탄올-물 혼합액(70/30/4, 부피비)으로 실리카겔 컬럼크로마토그래피(230-400 mesh, 7×56 cm)를 재수행하여 7개의 분획(5-1 내지 5-7)을 얻었다. 이 중 5-6 분획물(0.25 g)에 대하여 메탄올과 물의 혼합용매(1:2)로 역상-18 컬럼크로마토그래피를 수행하여 목적화합물(노란색, 비정질 분말, 15 mg)을 얻었다.15 kg of fresh black berries were extracted three times at room temperature with 50% ethanol three times to obtain 2 kg of 50% ethanol extract. The extract was suspended in 10 L of water, and the same amount of ethyl acetate was added to the mixture to stand for shaking to obtain 95 g of an ethyl acetate fraction. After adsorbing the ethyl acetate fraction on silica gel, silica gel column chromatography (230-400 mesh, 7 × 56 cm, increasing the polarity sequentially by increasing the concentration gradient (100: 0 → 0: 100) of hexane-ethyl acetate mixed solvent. 6 fractions were obtained. The fifth fraction (8 g) was re-run silica gel column chromatography (230-400 mesh, 7 × 56 cm) with a chloroform-methanol-water mixture (70/30/4, volume ratio) to obtain 7 fractions (5- 1 to 5-7) were obtained. Reverse phase-18 column chromatography was performed on 5-6 fractions (0.25 g) with a mixed solvent of methanol and water (1: 2) to obtain the title compound (yellow, amorphous powder, 15 mg).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 2.75 (2H, t, J=7.4 Hz), 3.46 (2H, t, J=7.4 Hz), 3.88 (3H, s), 6.41 (H, d, J=15.7 Hz), 6.71 (2H, d, J=8.4 Hz), 6.79 (H, d, J=8.2 Hz), 7.04 (H, dd, J=8.2, 1.8 Hz), 7.05 (2H, d, J=8.4 Hz), 7.11 (H, d, J=1.8 Hz), 7.44 (1H, d, J=15.7); 1 H NMR (400 MHz, CD 3 OD) δ 2.75 (2H, t, J = 7.4 Hz), 3.46 (2H, t, J = 7.4 Hz), 3.88 (3H, s), 6.41 (H, d, J = 15.7 Hz), 6.71 (2H, d, J = 8.4 Hz), 6.79 (H, d, J = 8.2 Hz), 7.04 (H, dd, J = 8.2, 1.8 Hz), 7.05 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.11 (H, d, J = 1.8 Hz), 7.44 (1H, d, J = 15.7);
13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 169.3, 157.0, 149.9, 149.4, 142.1, 131.4, 130.8, 128.4, 123.3, 116.5, 118.8, 116.4, 111.6, 56.5, 42.6, 35.9; 13 C NMR (100 MHz, CD 3 OD) δ 169.3, 157.0, 149.9, 149.4, 142.1, 131.4, 130.8, 128.4, 123.3, 116.5, 118.8, 116.4, 111.6, 56.5, 42.6, 35.9;
m.p. 75-76 ℃; [α]19D : -1.0°(c 0.1, MeOH); UV(MeOH) λmax (log ε): 203 (4.37), 288 (3.99), 317 (4.03) nm; HR-ESIMS m/z :314.1377 [M+H]+(calcd. for C18H20NO4, 314.1392).mp 75-76 ° C; [α] 19 D: −1.0 ° (c 0.1, MeOH); UV (MeOH) λ max (log ε): 203 (4.37), 288 (3.99), 317 (4.03) nm; HR-ESIMS m / z: 314.1377 [M + H] + (calcd. For C 18 H 2 0NO 4 , 314.1392).
<제조예 2> (R,E)-3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)-N-(2-(4-하이드록시페닐)-2-메톡시에틸)아크릴아미드의 제조Preparation Example 2 Preparation of (R, E) -3- (4-hydroxy-3-methoxyphenyl) -N- (2- (4-hydroxyphenyl) -2-methoxyethyl) acrylamide
상기 실시예 1에서 얻은 7개의 분획 중 5-4의 분획물(2.7 g)에 대하여 메탄올:물(1:3) 혼합용매로 역상-18 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 목적화합물(노란색, 비정질 분말, 15 mg)을 얻었다. 5-4 fractions (2.7 g) of the seven fractions obtained in Example 1 were subjected to reverse phase-18 column chromatography with a methanol: water (1: 3) mixed solvent to obtain a target compound (yellow, amorphous powder, 15). mg).
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3.21 (3H, s), 3.40 (1H, dd, J=8.3, 13.7), 3.50 (1H, dd, J=4.5, 13.7), 3.88 (3H, s), 4.25 (H, dd, J= 4.5, 8.3), 6.41 (H, d, J=15.7 Hz), 6.77 (H, d, J=8.2 Hz), 7.03 (2H, d, J=8.2, 1.6 Hz), 7.11 (H, d, J=1.6 Hz), 7.17 (2H, d, J=8.4 Hz), 7.44 (1H, d, J=15.7); 1 H NMR (400 MHz, CD 3 OD) δ 3.21 (3H, s), 3.40 (1H, dd, J = 8.3, 13.7), 3.50 (1H, dd, J = 4.5, 13.7), 3.88 (3H, s ), 4.25 (H, dd, J = 4.5, 8.3), 6.41 (H, d, J = 15.7 Hz), 6.77 (H, d, J = 8.2 Hz), 7.03 (2H, d, J = 8.2, 1.6 Hz), 7.11 (H, d, J = 1.6 Hz), 7.17 (2H, d, J = 8.4 Hz), 7.44 (1H, d, J = 15.7);
13C NMR (100 MHz, CD3OD) δ 169.5, 158.6, 149.9, 149.4, 142.3, 131.5, 129.3, 128.0,123.4, 118.8, 116.5, 116.4, 111.6, 83.4, 56.9, 56.5, 47.1; 13 C NMR (100 MHz, CD 3 OD) δ 169.5, 158.6, 149.9, 149.4, 142.3, 131.5, 129.3, 128.0, 123.4, 118.8, 116.5, 116.4, 111.6, 83.4, 56.9, 56.5, 47.1;
m.p. 68-69 ℃; [α]19D : -5.8 (c 0.1, MeOH); UV(MeOH) λmax (log ε): 204 (4.37), 285 (3.90), 316 (3.91) nm; HR-ESIMS m/z 344.1491 [M+H]+ (calcd. for C19H22NO5, 344.1498).mp 68-69 ° C; [α] 19 D: -5.8 (c 0.1, MeOH); UV (MeOH) λ max (log ε): 204 (4.37), 285 (3.90), 316 (3.91) nm; HR-ESIMS m / z 344.1491 [M + H] + (calcd. For C 19 H 22 NO 5 , 344.1498).
<실시예 1> RBL-1세포에서의 류코트리엔 생성 저해효과Example 1 Inhibitory Effect of Leucotriene Production in RBL-1 Cells
본 발명에 따른 아크릴아마이드 유도체의 류코트리엔 생성 저해 활성을 알아보기 위해, 하기와 같은 실험을 수행하였다.In order to determine the leukotriene production inhibitory activity of the acrylamide derivative according to the present invention, the following experiment was performed.
ATCC(American Type Culture Collection)사에서 구입한 RBL-1 세포를 100 units/㎖ 페니실린, 100 ㎎/㎖ 스트렙토마이신, 10 ㎎/㎖ 겐타마이신, 2 mM L-글루타민, 0.1 mM 비필수아미노산을 함유한 RPMI 1640 배지에서 배양하였으며, 실험을 위해 세포를 5×105 cells/㎖의 농도로 96-웰 플레이트(96-well plate)에 200 ㎕ 씩 분주하였다. 각 웰에 음성대조군으로는 DMSO를 0.1%로, 양성대조군으로는 질루톤(Zileuton)을 1 uM 농도로, 실험군으로는 본 발명의 제조예 1 및 2의 화합물을 각각 10, 20, 40, 80 uM 의 농도로 혼합하여 37 ℃의 CO2 배양기 내에서 10분 동안 배양하였다. 이후, 이온운반체인 A23187을 10 uM 농도로 처리한 후, 다시 37 ℃의 CO2 배양기 내에서 20분 동안 배양하였다. 상기 반응물을 원심분리기에서 4 ℃에서 250 g 속도로 5분간 원심분리하였다. 이렇게 분리된 상층액으로부터 유리된 류코트리엔 결과를 하기 표 1에 나타내었다. RBL-1 cells purchased from the American Type Culture Collection (ATCC) contain 100 units / ml penicillin, 100 mg / ml streptomycin, 10 mg / ml gentamicin, 2 mM L-glutamine, 0.1 mM non-essential amino acids. The cells were cultured in RPMI 1640 medium, and 200 μl of the cells were dispensed into 96-well plates at a concentration of 5 × 10 5 cells / ml for the experiment. In each well, 0.1% of DMSO as a negative control group, 1 uM concentration of Zileuton as a positive control group, and 10, 20, 40, and 80 compounds of Preparation Examples 1 and 2 of the present invention, respectively. Mixed at a concentration of uM and incubated for 10 minutes in a CO 2 incubator at 37 ℃. Thereafter, the ion carrier A23187 was treated with a concentration of 10 uM, and then incubated for 20 minutes in a CO 2 incubator at 37 ° C. The reaction was centrifuged for 5 min at 250 g at 4 ° C. in a centrifuge. The leukotriene results liberated from the supernatant thus separated are shown in Table 1 below.
표 1을 참조하면, 본 발명에 따른 제조예 1 및 2의 화합물의 RBL-1 세포주에서 LTC4의 분비 억제활성이 각각 16.6±1.2 μM, 22.6±1.3 μM로서 매우 우수한 류코트리엔 생성 저해효과를 갖는 것을 알 수 있다.Referring to Table 1, LTC4 secretion inhibitory activity of the compounds of Preparation Examples 1 and 2 according to the present invention is 16.6 ± 1.2 μM and 22.6 ± 1.3 μM, respectively. Can be.
이로부터, 본 발명에 따른 아크릴아마이드 유도체는 염증세포에서 분비되는 시스테인 류코트리엔의 분비 또는 생성을 효과적으로 저해함으로써, 이로부터 유발되는 염증, 알레르기 반응과 이로 인한 천식을 예방 및 치료하는 데 유용하게 사용할 수 있음을 알 수 있다. From this, the acrylamide derivative according to the present invention effectively inhibits the secretion or production of cysteine leukotrienes secreted from inflammatory cells, and thus can be useful for preventing and treating inflammation, allergic reactions and asthma caused therefrom. It can be seen.
<실시예 2> 세포 생존도 실험Example 2 Cell Viability Experiment
본 발명에 따른 아크릴아마이드 유도체의 세포 생존력을 알아보기 위해, 하기의 실험을 수행하였다. In order to determine the cell viability of the acrylamide derivative according to the present invention, the following experiment was performed.
실험을 위해 상기 실시예 1과 동일하게 세포를 96-웰 플레이트(96-well plate)에 200 ㎕ 씩 분주하였다. 각 웰에 음성대조군으로는 DMSO를 0.1% 농도로, 실험군으로는 화합물을 각각 10 μM, 50 μM 의 농도로 분주하고 CO2 배양기에서 37 ℃의 조건으로 24시간 배양하였다. 배양 후 PBS에 용해한 MTT(5 mg/㎖) 10 ㎕를 가하여 동일한 배양조건에서 4시간 동안 배양하고, 반응용액 중 포마잔(formazan) 침전물을 얻기 위해 3,000 rpm으로 5분 동안 원심분리를 하였다. 원심분리 후 얻은 침전물을 DMSO 100 ㎕에 용해시키고 마이크로플레이트 리더(microplate reader, BIO-RAD사, USA)를 사용하여 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. 상기 흡광도 측정 결과를 세포 생존율(%)로서 하기 표 2에 나타내었다. In the same manner as in Example 1 above, the cells were divided into 200 μl into a 96-well plate. Each well was dispensed at a concentration of 0.1% DMSO for the negative control group and 10 μM and 50 μM for the experimental group, respectively, and incubated for 24 hours at 37 ° C. in a CO 2 incubator. After incubation, 10 μl of MTT (5 mg / ml) dissolved in PBS was added thereto, followed by incubation for 4 hours under the same culture conditions, and centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes to obtain a forazan precipitate in the reaction solution. The precipitate obtained after centrifugation was dissolved in 100 μl of DMSO and the absorbance was measured at 570 nm using a microplate reader (BIO-RAD, USA). The absorbance measurement results are shown in Table 2 as cell viability (%).
Preparation Compound
표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 아크릴아마이드 유도체 화합물에 대한 세포생존율은 각각 50μM에서 제조예 화합물 1 및 2는 각각 90.0 ± 1.3%, 92.8 ± 0.0%로 측정되었다. 따라서, 본 발명에 따른 아크릴아마이드 유도체는 세포독성이 거의 없음을 알 수 있다.As shown in Table 2, the cell viability of the acrylamide derivative compound according to the present invention was measured in 90.0 ± 1.3%, 92.8 ± 0.0% of Preparation Compounds 1 and 2 at 50 μM, respectively. Therefore, it can be seen that the acrylamide derivative according to the present invention has little cytotoxicity.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 목적에 따라 여러 형태로 제제화가 가능하다. 하기에는 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 유도체 화합물을 활성성분으로 함유하는 제제를 예시한 것으로 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.The pharmaceutical composition according to the present invention can be formulated in various forms according to the purpose. Hereinafter, the preparation containing the derivative compound represented by Chemical Formula 1 according to the present invention as an active ingredient is not limited thereto.
<제제예 1> 정제의 제조(직접 가압)Preparation Example 1 Preparation of Tablet (Direct Pressing)
활성성분 5.0 ㎎Active ingredient 5.0 mg
락토오스 14.1 ㎎Lactose 14.1 mg
크로스포비돈 USNF 0.8 ㎎Crospovidone USNF 0.8 mg
마그네슘 스테아레이트 0.1 ㎎Magnesium Stearate 0.1mg
통상적인 정제의 제조 방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 첨가하여 균일하게 혼합하고 가압하여 정제를 제조하였다.According to a conventional method for preparing tablets, the tablets were prepared by adding the above ingredients in the contents indicated, mixing them uniformly and pressing.
<제제예 2> 정제의 제조(습식 조립)Preparation Example 2 Preparation of Tablet (Wet Granulation)
활성성분 5.0 ㎎Active ingredient 5.0 mg
락토오스 16.0 ㎎Lactose 16.0 mg
녹말 4.0 mgStarch 4.0 mg
프리솔베이트 80 0.3 mgPresorbate 80 0.3 mg
실리콘 다이옥사이드 2.7 ㎎Silicon dioxide 2.7 mg
마그네슘 스테아레이트 2.0 ㎎Magnesium Stearate 2.0mg
활성성분을 체로 친 후, 락토오스와 녹말을 혼합하였다. 이후, 폴리솔베이트를 순수한 물에 녹인 녹인 후, 적당량을 활성성분, 락토오스 및 녹말 혼합물에 첨가한 다음 미립화하였다. 건조 후에 미립을 제질한 후, 콜로이달 실리콘 다이옥사이드 및 마그네슘 스타아레이트와 혼합하였다. 미립을 가압하여 정제를 제조하였다.After sifting the active ingredient, lactose and starch were mixed. Thereafter, the polysorbate was dissolved in pure water, and then an appropriate amount was added to the active ingredient, lactose and starch mixture, followed by atomization. After drying, the granules were granulated and then mixed with colloidal silicon dioxide and magnesium stearate. Tablets were prepared by pressing the granules.
<제제예 3> 캅셀제의 제조Preparation Example 3 Preparation of Capsule
활성성분 5.0 ㎎Active ingredient 5.0 mg
락토오스 14.8 ㎎Lactose 14.8 mg
폴리비닐피롤리돈 10.0 ㎎Polyvinylpyrrolidone 10.0 mg
마그네슘 스테아레이트 0.2 ㎎Magnesium Stearate 0.2mg
통상적인 캅셀제의 제조 방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 첨가하여 균일하게 혼합한 후 적절한 크기의 젤라틴 캅셀에 충진하여 목적하는 캅셀제를 제조하였다.According to a conventional method for preparing a capsule, the desired components were prepared by adding the above components in the amounts shown in the present invention, mixing them uniformly, and filling the gelatine capsules with an appropriate size.
<제제예 4> 주사제의 제조Preparation Example 4 Preparation of Injection
활성성분 100 ㎎Active ingredient 100 mg
만니톨 180 mgMannitol 180 mg
Na2HPO4·12H2O 26 mg Na 2 HPO 4 · 12H 2 O 26 mg
증류수 2974 mgDistilled water 2974 mg
통상적인 주사제의 제조 방법에 따라, 상기 성분들을 제시된 함량으로 함유시켜 주사제를 제조하였다.According to a conventional method of preparing an injection, an injection was prepared by containing the above components in the contents shown.
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