KR101010284B1 - Phsrn-rgd 포함 올리고펩타이드를 유효성분으로 함유하는 골형성 촉진용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 PHSRN-RGD 포함 올리고펩타이드를 유효성분으로 함유하는 골형성 촉진용 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 서열번호 1 및 서열번호 2 사이에 펩타이드 링커(서열번호 3)를 포함하는 골형성 촉진용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 골아세포의 부착 및 분화를 유의하게 증가시키며, 골재생능력을 향상시키므로 골이식재 또는 조직공학용 지지체 등에 상기 조성물을 고정시켜 원하는 국소에 투여하여 골형성을 촉진하는데 유용하게 이용될 수 있다.
Figure R1020070066935
세포부착, 세포외 기질, 피브로넥틴(Fibronectin), 골아세포(Osteoblast)

Description

ＰＨＳＲＮ－ＲＧＤ 포함 올리고펩타이드를 유효성분으로 함유하는 골형성 촉진용 조성물{Composition of bone formation with PHSRN-RGD containing oligopeptide}
본 발명은 PHSRN-RGD 포함 올리고펩타이드를 유효성분으로 함유하는 골형성 촉진용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 서열번호 1 및 서열번호 2 사이에 펩타이드 링커(서열번호 3)를 포함하는 올리고펩티드를 유효성분으로 함유하는 골형성 촉진용 조성물에 관한 것이다.
병리학적 흡수에 기인한 골결손은 여러가지 골이식재(bone graft materials)로 회복될 수 있다. 자가골이식(autogenous bone graft)은 최상의 표준으로서 언급되어 왔다(Misch CE, Implant Dent 2:158-167, 1993). 그러나, 이것의 제한적인 이용성 때문에, 골유도성 재료(osteoinductive material)가 골아세포의 유도 및 분화를 위한 대안적인 후보 물질로 발전해 왔으나, 여전히 이들은 항원성을 일으킬 가능성이 있으며, 빈약한 골형성을 일으킨다(Brugnami et al . J Periodontol 67:821-825, 1996). 이러한 제한점은 단지 골격 기능을 갖는 골유도성 골 대체재의 많은 종류를 발달시켰다(Petrovic et al ., Int J Oral Maxillofac Implants 21:225-231, 2006). 그러나, 확실한 골재생은 골아세포의 분화 및 증식의 증가를 위하여 이식재의 표면에 적당한 생활성 물질의 추가적 적용을 요구한다.
골의 세포외 기질에 존재하는 피브로넥틴(Fibronectin, FN)은 골아세포의 분화 및 증식을 증진시킨다는 것이 잘 알려져 있다(Globus et al ., J Cell Sci ., 111:1385-1393, 1998). 그러나, 효소에 의한 분해에서의 면역원성 및 불안정과 같은 반응 때문에, 골아세포 촉진을 위한 총 FN 단백질 사용은 유용하지 못하다. FN은 인테그린(integrin) 결합을 통하여 다양한 세포의 기능을 행사한다. 상기 인테그린 결합은 10번째 타입 III 도메인 및 시너지 자리로서 9번째 타입 III 모듈에서 PHSRN 모티브 잔기에 위치한 RGD 서열을 포함한 공통 위치에 의해 조정된다(Aota et al. 1994). 최근에, 재조합 FN이 혈장 FN과 비교했을 경우, 골아세포 유착을 유지했다고 보고되었다(Cutler SM and Garcia AJ., Biomaterials 24:1759-1770, 2003).
이에, 본 발명자들은 FN유래의 재조합 올리고펩타이드(F20)를 제조하였고, 이 재조합 올리고펩타이드는 골아세포의 부착 및 분화를 유의하게 증가시키며, 골재생능력을 향상시킴을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 PHSRN-RGD 포함 올리고펩타이드를 유효성분으로 함유하는 골형성 촉진용 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 A-L-B(상기 A는 PHSRN이고, B는 RGD이며, L은 15 ~ 25개의 아미노산으로 구성된 링커 펩타이드이다.)로 구성된 올리고펩타이드를 유효성분으로 함유하는 골형성 촉진용 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 골형성 촉진용 조성물이 표면에 코팅된 골이식재를 제공한다.
아울러, 본 발명은 상기 골형성 촉진용 조성물이 표면에 코팅된 조직공학용 지지체를 제공한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 A-L-B(상기 A는 PHSRN이고, B는 RGD이며, L은 15 ~ 25개의 아미노산으로 구성된 링커 펩타이드이다.)로 구성된 올리고펩타이드를 유효성분으로 함유하는 골형성 촉진용 조성물을 제공한다.
상기 올리고펩타이드는 서열번호 1로 기재되는 PHSRN과 서열번호 2로 기재되는 RGD 사이에 펩타이드 링커가 포함되어 있는 올리고펩타이드이고, 서열번호 4로 기재되는 아미노산 서열을 포함하는 올리고펩타이드이다. 상기 펩타이드 링커는 PHSRN과 RGD를 연결하는 펩타이드라면 어느 것이라도 이용가능하며, 15 ~ 25개의 아미노산인 것이 바람직하며, 16 ~ 24개인 것도 바람직하며, 17 ~ 23인 것이 더욱 바람직하며, 19 ~ 22인 것도 더욱 바람직하며, 서열번호 3으로 기재되는 20개 아미노산인 것이 가장 바람직하다.
골아세포의 기능에 있어서 세포외 기질 단백질과 세포의 상호작용은 인테그린(α1β1, α2β1, α3β1, α4β1, α5β1, α6β1, α8β1 및 αγβ3)에 의해 중재될때, 최고가 된다(Gronthos, et al., Bone 28:174-181, 2001). 특별히 피브로넥틴(Fibronectin; FN)은 골아세포 생존 및 광화(mineralization)에 중요하다(Globus et al ., J Cell Sci ., 111:1385-1393, 1998).
신체의 주요 세포외 기질(Extracellular Matrix)중의 하나인 피브로넥틴은 22만 내지 24만 Da의 크기를 가진 거대분자가 이중 황결합으로 연결된 다이머 형태로 구성되어 있으며, 세포의 부착, 이동, 분화, 및 발생과정에서 주요한 생물학적 기능을 담당한다. 비록 거대분자이기는 하지만 실지 인테그린을 통한 세포와의 부착은 타입 Ⅲ 중 10번째 도메인에 위치한 서열번호 2로 기재되는 Arg-Gly-Asp(RGD) 아미노산이 주요부착기능을 담당하며(Pierschbacher and Ruoslahti, Nature, 309:30-33, 1984), 인접한 타입 Ⅲ 중 9번째 도메인에 위치한 서열번호 1로 기재되는 Pro-His-Ser-Arg-Asn(PHSRN) 아미노산이 시너지효과를 나타내는 것으로 알려져있다(Aota et al., 1994, J Biol Chem, 269:24756-24761). RGD와 PHSRN이 인테그 린 α5β1과 결합하는 모델에 의하면 인테그린의 두개의 머리부분의 폭은 10 - 12 ㎚이며 RGD와 PHSRN은 32-35 Å의 범위내에서 인테그린과 결합하는 것으로 알려져 있다(Carrell et al., 1985, J Biol Chem. 260:1743-1749).
본 발명자들은 피브로넥틴의 주 결합위치인 RGD와 시너지 위치인 PHSRN 사이에 20개의 아미노산(SITGTNLTPGYTITVYAVTG; 서열번호 3)을 링커로 삽입하여 PHSRN-RGD 포함 올리고펩타이드를 제조하였고, 이를 "F20(DPHSRN-SITGTNLTPGYTITVYAVTG-RGD; 서열번호 4)"이라 명명하였다(도 1 참조).
골아세포에서 상기 F20의 세포 부착능을 조사한 결과, F20이 코팅된 플레이트에서 대조군에 비하여 두 배의 증진된 세포 부착능을 나타났다(도 2 참조).
골아세포의 분화에 대한 F20의 효과를 조사하기 위하여, 본 발명자들은 올리고펩타이드(F20)로 코팅된 플레이트에서 인간 골육종 세포주인 MG63 세포의 ALP(alkaline phosphatase) 활성을 측정하였다. 그 결과, 대조군에 비하여 올리고펩타이드(F20)로 코팅된 플레이트에서 MG63 세포의 ALP 활성이 대조군에 비하여 2.5배 높았으며(도 3 참조), 이는 F20이 골아세포 분화를 증진시킴을 의미한다.
FN은 a5b1 인테그린에 결합되어 있으므로, 본 발명의 조성물이 골아세포 부착 및 분화를 증진시키는 상기 결과는 세포 결합 모티브 부위에 적절하게 위치하고 있음을 의미한다.
또한, 본 발명자들은 생체내(in vivo)에서 F20의 골재생능력을 확인하기 위하여, F20이 코팅된 합성 골이식재를 랫트의 두개골 원형골결손 부위에 이식한 후, 새롭게 형성된 골부분을 측정하였다. 그 결과, F20이 코팅된 합성 골이식재가 이식된 랫트의 두개골 원형골결손 부분에서 대조군에 비하여 신생된 골부분이 유의하게 높았으며(도 4 및 도 5 참조), 이는 F20에 의해 골재생능력이 향상되었음을 의미한다.
FN 분자를 기초로 한, 본 발명의 재조합 올리고펩타이드(DPHSRN-SITGTNLTPGYTITVYAVTG-RGD), F2O은 상기과 같이 골아세포 부착 및 분화를 증진시켜 골형성을 향상시키므로 골이식재에 대한 바이오활성 대체물로 유용하게 이용될 수 있다. 또한 원하는 농도의 올리고펩타이드를 골형성이 필요한 부분에 투여하면 활성을 나타내어 치료효과가 증진될 수 있으므로, 본 발명의 조성물은 골조직 또는 치주조직 등의 재생 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 투여를 위해서 F20 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 주사액제, 환약, 캡슐, 과립, 산제 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 당해 분야의 적정한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science(최근판) 또는 Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바 람직하게 제제화할 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 해당 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다.
또한, 본 발명은 상기 조성물이 표면에 코팅된 골이식재 및 상기 올리고펩타이드가 표면에 코팅된 조직공학용 지지체를 제공한다.
본 발명에서 사용가능한 골이식재 및 지지체에는 당해분야에서 사용하는 모든 종류 및 형태의 골이식재 및 고분자 지지체를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 자가골, 소뼈 및 돼지뼈에서 기인한 생물유래 골미네랄 분말 및 다공성 블록, 합성 수산화아파타이트 분말 및 다공성 블록, 트리칼슘인산 분말 및 다공성 블록, 모노칼슘인산 분말 및 다공성 블럭, 이산화 규소(실리카)로 이루어진 골이식재, 실리카와 고분자의 혼합체로 이루어진 골충진 이식재, 키토산, 폴리락트산을 포함하는 생체적합성 고분자로 이루어진 미립자 및 다공성 지지체, 티타늄 및 3차원적 다공성 지지체 등이 있으나, 특별히 이에 한정되는 것은 아니다. 이때, 상기 골이식재 및 지지체의 표면은 활성 펩타이드의 부착이 용이하도록 표면을 개질하는 것이 바람직하다.
또한, 상기 올리고펩타이드를 골이식재 및 지지체의 표면에 화학적으로 결합시켜 표면에 ㎠당 0.01 ~ 1 μM이 코팅되도록 하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직 하게는 골이식재 및 지지체의 표면 ㎠당 0.05 ~ 0.5 μM을 코팅하는 것이며, 가장 바람직하게는 골이식재 및 지지체의 표면 ㎠당 0.1 μM을 코팅하는 것이지만, 특별히 이에 한정되는 것은 아니다.
상기와 같이 골이식재 및 지지체 또는 차폐막이나 임플란트의 표면에 본 발명의 올리고펩타이드(F20)를 고정하여 술식에 이용하는 경우, 원하는 농도의 올리고펩타이드가 국소에서 존재하면서 활성을 나타내어 치료효과가 증진될 수 있으므로, 본 발명의 올리고펩타이드(F20)는 골조직 및 치주조직 재생 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 올리고 펩타이드는 골아세포의 부착 및 분화를 유의하게 증가시키며, 골재생능력을 향상시키므로 골이식재 또는 조직공학용 지지체에 고정하여 골형성을 촉진하는데 유용하게 이용될 수 있다. 또한 원하는 농도의 올리고펩타이드를 골형성이 필요한 부분에 투여하면 활성을 나타내어 치료효과가 증진될 수 있으므로, 본 발명의 올리고펩타이드(F20)는 골조직 또는 치주조직 등의 재생 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용 이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> PHS R N-RGD 포함 올리고펩타이드의 제조
본 발명자들은 PHSRN-RGD 포함 올리고펩타이드를 제조하기 위하여 우선, 인간 cDNA 라이브러리를 주형으로 사용하여 피브로넥틴 cDNA를 증폭하였다. PCR 프라이머는 타입 PHSRN 부위 및 RGD 부위를 인식하도록 디자인하여 센스 프라이머(20-BF, 5'-TTCATATGATCCCCACTCTT-3'; 서열번호 5) 및 안티센스 프라이머(20-KR, 5'-TTGGATCCTTAGTCTCCACG-3'; 서열번호 6)를 합성하였다. PCR은 50 mM KCl, 10 mM Tris-HCl(pH 8.3), 1.5 mM MgCl2, 100 ㎍/㎖ 젤라틴, 0.2 mM dNTPs, 1.25 유니트 Taq 중합효소(Perkin-Elmer) 및 50 pmol 프라이머를 포함하는 50 ㎕ 반응용액에서 수행하였다. PCR 수행조건은 55℃에서 1분, 72℃에서 2분, 94℃에서 1분으로 하여 30회 반복 수행한 후, 증폭된 cDNA 산물은 Nde I 및 BamH I로 분해하고, PCR 정제 킷트(QIAGEN, Chatsworth, CA)로 정제하였다. 뉴클레오타이드 서열은 자동서열분석기(dideoxy terminator cycle sequencing; Applied Biosystems)을 사용하여 삽입된 부분을 확인하였고, NCBI(National Center for Biotechnology Information, Bethesda, MD)의 BLAST 프로그램을 사용하여 GenBank 데이터베이스의 서열과 비교하였다.
PCR 산물은 C-말단에 6X His 태그가 있는 pET15(Novagen)에 클로닝하였다. 폴리-His 태그를 포함하는 FNPHSRN20RGD 융합단백질을 발현시키고, Ni2 + 친화 컬 럼(Invitrogen, Carlsbad, CA)을 사용하여 변성 조건에서 제조회사의 지침에 따라 정제하였다. 세포 분쇄액 및 정제된 융합 단백질은 SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate-polyacryamide gel electrophoresis)로 분리하고, 쿠마시 블루(Coomassie Blue) 염색으로 관찰하였다.
RGD(서열번호 2)의 세포 부착 및 자연적 FN 구조에서 인접 서열을 포함하는 시너지 PHSRN(서열번호 1) 모티브의 자리를 연결하는 20개 아미노산(SITGTNLTPGYTITVYAVTG; 서열번호 3)을 포함하고 있는 최종 수득물은 DPHSRN-SITGTNLTPGYTITVYAVTG-RGD(서열번호 4)이며 "F20"이라 명명하였다(도 1).
< 실시예 2> 세포 배양
본 발명에서 이용한 인간 골육종 세포주인 MG63(한국세포주은행, KCLB)은 10%(v/v) 및 0.1%(w/v) 젠타마이신을 포함하는 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)에서 37℃, 5% CO2 습한 환경에서 배양하였다.
< 실험예 1> 세포 부착 분석
24 웰 플레이트는 0.1 μM 재조합 올리고펩타이드 또는 폴리-L-리신(poly-L-lysin)으로 4℃에서 하룻밤 동안 주어진 농도로 코팅하고, 1% BSA(bovine serum albumin)을 포함하는 PBS로 30분 동안 블록킹한 후, PBS로 세척하였다.
MG63 세포는 24 시간 동안 혈청 없이 0.02%(w/v) 트립신, 1 mM EDTA에서 배 양하고, 100 ug/㎖ 대두 트립신 저해제 및 1%(w/v) BSA가 포함된 DMEM으로 3번 세척하고, DMEM에 5×104 세포/웰로 플레이트하여 30분 또는 1 시간 동안 37℃에서 배양하였다. 대조군 세포의 현탁은 주어진 시간 동안 BSA 코팅된 플레이트에서 유지하였다. 30분 후에, 37℃에서 부착된 세포는 PBS로 2회 세척하고, 3% 파라포름알데히드(Sigma)로 고정하고, 0.25%(w/v) 크리스탈 바이올렛(Sigma, USA)이 포함된 2%(v/v) 에탄올/물로 염색하였다. 증류수로 세척한 후, 플레이트를 건조시켰다. 흡광도는 570 nm에서 측정하여 평균 ± SD(standard deviation)으로 나타내었다. 비특이 부착은 1% BSA를 음성 대조군으로 사용하여 결정하였다.
통계적 분석은 Student' t-test(95% 신뢰구간)를 이용하여 3번 수행하였으며, 독립적으로 4번 반복하였으며 하기 통계적 분석은 이와 같이 하였다.
그 결과, 올리고펩타이드로 코팅된 플레이트에서 대조군에 비하여 두배의 흡광도가 나타났다(*: P < 0.05, 도 2).
< 실험예 2> ALP ( Alkaline phosphatase ) 분석
골아세포의 분화를 결정하기 위하여, 본 발명자들은 시험관 내 실험(in vitro)에서 골형성을 나타내는 ALP(alkaline phosphatase) 활성을 측정하였다.
0.1 μM 재조합 올리고펩타이드 또는 폴리-L-리신(poly-L-lysin)으로 코팅된 6웰 플레이트에서 5×104 MG63 세포를 7일 동안 배양하였다. 다음으로 PBS로 세척하고, pH 10.2, 1 mM ZnCl2, 1 mM MgCl2 및 Triton X-100을 포함한 1.5 M Tris/HCl 로 4℃에서 10분 동안 용해시켰다. 원심분리에 의해 세포융해체를 정화시킨 후에, ALP 활성을 ALP assay kit(Sigma, USA)의 프로토콜에 따라 수행하여 분석하였다.
그 결과, 올리고펩타이드(F20)로 코팅된 플레이트에서 MG63 세포의 ALP 활성이 대조군에 비하여 2.5배 높았다(n=3, *: P < 0.05, 도 3).
< 실시예 3> F2O이 코팅된 골이식재의 제조
에틸렌 옥사이드와 자외선으로 멸균처리된 합성 골이식재(Bio-oss, ostehealth, USA) 입자에 0.1 μM 농도로 F20이 용해되어 있는 인산완충액 100 ㎕를 가하여 24 시간 동안 반응시킨 후 건조하여 0.1 μM F20으로 코팅된 합성 골이식재를 수득하였다.
< 실험예 3> 골형성 평가
250 g의 8마리 Spague-Dawley 랫트(오리엔트바이오, 한국)를 선별하여 두개골 부위에 직경 8 mm 원형골결손부를 형성시키고(Hong et al ., Biomaterials , 27:3810-3816, 2006), 상기 원형골결손부에 골이식재를 이식하여 골재생력을 확인하였다.
합성 골이식재를 상기 실시예 3에서 제조된 0.1 μM F20으로 코팅된 합성 골이식재 그룹과 코팅되지 않은 대조군의 두개의 그룹으로 나누어, 상기 랫트 두개골의 원형골결손 부분에 50 ㎎씩 이식한 후, 골막과 피부를 이중봉합하였다. 3주 후, 동물을 CO2로 질식시켰다. 회복된 수술 자리를 포르말린 용액으로 고정시켰고, 원형골결손 중심으로 두께 20 ㎛의 절편을 제작하였다. 제작된 절편을 각각 MT(Masson trichrome) 염색하였고, 컴퓨터 이미지 분석 시스템(Media cybernetics, USA)을 이용하여 골조직학적으로 신생된 골을 측정하였다.
그 결과, F20이 코팅된 합성 이식재에서 새롭게 형성된 골부분이 대조군에 비하여 많았고(도 4, *: 생성된 신생골 부분), 대조군에서 새롭게 형성된 골부부은 약 1 ㎟이었던 반면, F20이 코팅된 합성골에서 새롭게 형성된 골부부은 약 4.5 ㎟로 통계적으로 유의하게 F20이 코팅된 합성골에서 신생된 골부분이 많았다(도 5, *: P < 0.05; n=8).
도 1은 인테그린에 결합하는 재조합 올리고펩타이드(F20)의 모식도이다:
FN: 피브로넥틴(Fibronectin).
도 2는 재조합 올리고펩타이드(F20)로 코팅된 플레이트에서 인간 골육종 세포주인 MG63의 세포부착도를 정량적으로 나타낸 그래프이다:
*:P < 0.05;
F20: 재조합 올리고펩타이드(F20)로 코팅된 플레이트; 및
대조군: 폴리-L-라이신(Poly-L-lysine)으로 코팅된 플레이트.
도 3은 재조합 올리고펩타이드(F20)로 코팅된 플레이트에서 MG63 세포의 ALP(alkaline phosphatase) 활성을 나타낸 그래프이다:
*: P < 0.05;
F20: 재조합 올리고펩타이드(F20)로 코팅된 플레이트; 및
대조군: 폴리-L-라이신(Poly-L-lysine)으로 코팅된 플레이트.
도 4는 랫트의 두개골 결손부에서의 골재생력을 나탄낸 사진이다:
A: 무코팅 합성 골이식재가 삽입된 골결손 랫트;
B: 0.1 μM 재조합 올리고펩타이드(F20)로 코팅된 합성 골이식재가 삽입된 골결손 랫트;
막대기: 100 ㎛; 및
*: 생성된 신생골 부분.
도 5는 F20으로 코팅된 골이식재가 삽입된 두개골 결손 랫트에서 생성된 신 생골 부분을 정량적으로 나타낸 그래프이다:
*: P < 0.05;
대조군: 무코팅 합성 골이식재가 삽입된 골결손 랫트; 및
F20: 0.1 μM 재조합 올리고펩타이드(F20)로 코팅된 합성 골이식재가 삽입된 골결손 랫트;
<110> SEOUL NATIONAL UNIVERSITY INDUSTRY FOUNDATION <120> Compsition of bone formation whit RGD--PHSRN containing oligopeptide <130> 7p-06-36 <160> 6 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Pro His Ser Arg Asn 1 5 <210> 2 <211> 3 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Arg Gly Asp 1 <210> 3 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Ser Ile Thr Gly Thr Asn Leu Thr Pro Gly Tyr Thr Ile Thr Val Tyr 1 5 10 15 Ala Val Thr Gly 20 <210> 4 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Asp Pro His Ser Arg Asn Ser Ile Thr Gly Thr Asn Leu Thr Pro Gly 1 5 10 15 Tyr Thr Ile Thr Val Tyr Ala Val Thr Gly Arg Gly Asp 20 25 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 20-BF primer <400> 5 ttcatatgat ccccactctt 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 20-KR primer <400> 6 ttggatcctt agtctccacg 20

Claims (9)

  1. A-L-B(상기 A는 PHSRN이고, B는 RGD이며, L은 서열번호 3으로 기재되는 아미노산으로 구성된 링커 펩타이드이다.)로 구성된 올리고펩타이드를 유효성분으로 함유하는 골형성 촉진용 조성물.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 제 1항의 조성물이 표면에 코팅된 골형성 촉진용 골이식재.
  7. 제 6항에 있어서, 상기 골이식재는 생물유래 골미네랄의 분말 및 다공성 블록, 합성 수산화아파타이트의 분말 및 다공성 블록, 트리칼슘인산의 분말 및 다공성 블록, 모노칼슘인산의 분말 및 다공성 블럭, 이산화 규소(실리카)로 이루어진 골이식재, 실리카와 고분자의 혼합체로 이루어진 골충진 이식재, 키토산, 폴리락트산을 포함하는 생체적합성 고분자로 이루어진 미립자 및 다공성 지지체, 티타늄 및 3차원적 다공성 지지체로 구성된 군으로부터 선택되어지는 것을 특징으로 하는 골이식재.
  8. 제 1항의 조성물이 표면에 코팅된 골형성 촉진용 조직공학용 지지체.
  9. 제 8항에 있어서, 상기 지지체는 실리카와 고분자의 혼합체로 이루어진 골충 진 이식재, 키토산, 폴리락트산을 포함하는 생체적합성 고분자로 이루어진 미립자 및 다공성 지지체, 티타늄 및 3차원적 다공성 지지체로 구성된 군으로부터 선택되어지는 것을 특징으로 하는 조직공학용 지지체.
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