KR101007575B1 - Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes - Google Patents

Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes Download PDF

Info

Publication number
KR101007575B1
KR101007575B1 KR1020100008812A KR20100008812A KR101007575B1 KR 101007575 B1 KR101007575 B1 KR 101007575B1 KR 1020100008812 A KR1020100008812 A KR 1020100008812A KR 20100008812 A KR20100008812 A KR 20100008812A KR 101007575 B1 KR101007575 B1 KR 101007575B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
primers
colon cancer
protein
primer
Prior art date
Application number
KR1020100008812A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR20100018026A (en
Inventor
이희구
송은영
염영일
김선영
김영호
전호경
정경숙
원미선
김재화
윤도영
최은화
강민아
Original Assignee
한국생명공학연구원
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 한국생명공학연구원 filed Critical 한국생명공학연구원
Priority to KR1020100008812A priority Critical patent/KR101007575B1/en
Publication of KR20100018026A publication Critical patent/KR20100018026A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR101007575B1 publication Critical patent/KR101007575B1/en

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57419—Specifically defined cancers of colon
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Abstract

본 발명은 대장암에 특이적인 진단 마커에 관한 것이다. 또한 상기 마커의 존재를 측정하는 제제를 포함하는 조성물, 키트 및 이를 사용하여 대장암을 진단하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to diagnostic markers specific for colorectal cancer. The present invention also relates to compositions, kits, and methods for diagnosing colorectal cancer using the formulations comprising agents for measuring the presence of the marker.

Description

대장암 과발현 유전자를 이용한 대장암 진단 마커{Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes}Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes

본 발명은 대장암에 특이적인 진단 마커를 선별하고, 또한 상기 마커의 존재를 측정하는 제제를 포함하는 조성물, 키트 및 이를 사용하여 대장암을 진단하는 방법에 관한 것이다.The present invention relates to a composition, a kit including an agent for selecting a diagnostic marker specific for colon cancer and measuring the presence of the marker, and a method for diagnosing colon cancer using the same.

대장은 입으로 섭취된 음식물의 소화, 흡수가 이루어지는 곳이며, 잉여 음식물이 머무르는 곳이기도 하다. 또한, 이곳에서 수분을 흡수하여 대변이 만들어 지고, 이와 더불어 여러 종류의 많은 세균이 서식하는 곳이기도 하다. 사람의 경우, 대장의 길이는 약 2m정도이고, 결장과 직장, 항문으로 구성되어 있다. 대장점막이 있는 곳이면 어디서나 암이 생기지만, 암이 생기기 쉬운 부위는 에스결장과 직장이다. The large intestine is a place where food ingested by mouth is digested and absorbed, and is also a place where excess food stays. In addition, it absorbs moisture and makes feces, and it is also a place where many types of bacteria live. In humans, the length of the large intestine is about 2m and consists of a colon, rectum, and anus. Wherever there is the colonic mucosa, cancer can occur, but the areas prone to cancer are the S colon and rectum.

현재 우리나라에서 대장암 발생율은 매우 현저하게 증가하고 있다. 대장암에 의한 사망은, 남성의 경우 위암, 폐암, 간암에 이어 네번째를 차지하고 있으며, 여성의 경우 또한 유사하다. 대장암 빈도는 남성이 여성보다 많은 것으로 조사되어 지고 있다. 연령별로는 50대가 가장 많고, 60대가 그 뒤를 잇고 있다. 우리나라는 유럽이나 미국과 비교했을 때, 발생 연령이 10살 정도 어린 경향이 있다. 5%-10%의 빈도로 30대의 젊은 사람에게서도 발생하며, 이처럼 젊은 층에서 나타나는 대장암은 가족 사이에서 많이 발생하는 경향이 있기도 하다. 대장암의 발생에 영향을 미치는 것으로는 유전인자보다도 환경인자의 비중이 크다고 여겨지고 있는데, 식생활의 급격한 서구화, 특히 동물성지방이나 단백질의 과다섭취가 원인이라고 인식되고 있다. 그러나 5%전후의 대장암은 유전적 소인에 의해 발생한다고 알려져 있다. 이를 종합해보면, 대장암에 걸리기 쉬운 위험인자로서는 1) 대장용종에 걸린 경험이 있는 경우, 2) 가족력이 있는 경우, 3) 장기간 궤양성대장염에 시달리고 있는 경우, 4) 고치기 어려운 치루에 걸린 경우 등이 있다. Currently, the incidence of colorectal cancer in Korea is increasing remarkably. The deaths from colon cancer are the fourth in men after gastric cancer, lung cancer, and liver cancer, and are similar in women. The incidence of colorectal cancer is being investigated for men to be more frequent than women. By age, 50s are the most, followed by 60s. Compared to Europe and the United States, Korea tends to be about 10 years younger than the age of onset. It occurs even in young people in their 30s with a frequency of 5%-10%, and colorectal cancer, which appears in younger people, tends to occur frequently among families. It is believed that environmental factors affect the incidence of colon cancer more than genetic factors, and it is recognized that the rapid westernization of dietary life, especially excessive intake of animal fats and proteins, is the cause. However, it is known that colon cancer around 5% is caused by a genetic predisposition. Taken together, risk factors prone to colorectal cancer include: 1) experience of colon polyps, 2) family history, 3) long-term ulcerative colitis, 4) difficult to cure fistula, etc. There is this.

대장암에는 Dukes분류법과 UICC의 stage 분류법이 대표적이다. 그 기준은 암의 크기에 의해서가 아니라, 대장벽 속으로 암이 들어간 깊이 및 원격전이의 유무에 따라 진행도가 규정되어 있다. 하기의 표 1 및 2는 각각 Dukes분류법 및 stage 분류법의 구분기준을 설명한 것이다.The Dukes classification method and the stage classification method of UICC are typical for colorectal cancer. The standard is not based on the size of the cancer, but the degree of progression is defined according to the depth of the cancer entering the colon wall and the presence or absence of distant metastasis. Tables 1 and 2 below describe the classification criteria of the Dukes classification method and the stage classification method, respectively.

Dukes분류법의 특징Features of the Dukes classification method 명칭designation 수술 후 5년 생존률5-year survival rate after surgery 병리적 양상Pathological aspect Dukes A Dukes A 90%이상over 90 암이 대장벽 내에 머물러 있는 것Cancer staying within the walls of the large intestine Dukes BDukes B 60~80%60~80% 암이 대장벽을 뚫었지만 림프절전이가 일어나지 않은 것Cancer has penetrated the colon wall, but lymph node metastasis has not occurred. Dukes C Dukes C 20~50%20-50% 림프절전이가 일어난 것Lymph node metastasis has occurred Dukes D Dukes D 20%이하Less than 20% 복막, 간, 폐 등으로 원격전이가 일어난 것 Distant metastasis to the peritoneum, liver, lungs, etc.

stage분류법의 특징 Characteristics of stage classification 명칭designation 병리적 양상Pathological aspect 0기Period 0 암이 점막에 머물러 있는 것Cancer staying in the mucous membrane 1기1st 암이 대장벽에 머물러 있는 것Cancer staying in the wall of the large intestine 2기2nd 암이 대장벽을 넘어섰지만 인접장기까지 미치지 않은 것The cancer has crossed the wall of the large intestine but has not reached the adjacent organs. 3기Stage 3 암이 인접장기에 침윤하거나 림프절전이가 일어난 것Cancer infiltrating adjacent organs or lymph node metastasis 4기4th 복막, 간, 폐 등으로 원격전이가 일어난 것 Distant metastasis to the peritoneum, liver, lungs, etc.

두 가지의 분류 방식에는 아주 작은 차이가 있을 뿐이기 때문에, Dukes A는 0기,1기에, Dukes B는 2기에, Dukes C는 3기에, Dukes D는 4기에 해당하는 것이라고 현재 통용되고 있으며, 특히 Dukes분류는 국제적으로 널리 쓰이고 있는 방법이다. Because there is only a very small difference between the two classification methods, it is currently accepted that Dukes A corresponds to the 0 stage, 1 stage, Dukes B stage 2, Dukes C stage 3, and Dukes D stage 4, especially. The Dukes classification is an internationally widely used method.

대장암은 조기발견시 내시경 적절제나 외과요법에 의해 완전히 치유될 수 있으며, 진행되어 간이나 폐로 전이 (원격전이)되었더라도 수술이 가능한 시기라면 외과요법에 의한 완치를 기대할 수 있다. 다시 말하자면, 현재의 치료법 중에서는 외과요법이 가장 효과적이라 하겠다. 그러나 발견이 늦어지면 폐, 간, 림프절이나 복막 등 절제하기 어려운 곳으로의 전이가 일어나기 때문에 상기의 경우처럼 외과요법을 사용할 수 없기 때문에, 궁극적으로는 대장암의 효과적인 치료를 위해서는 조기 진단 및 치료가 필수적이라 하겠다.Colon cancer can be completely cured by appropriate endoscopy or surgical therapy at early detection, and even if it has progressed and metastasized to the liver or lungs (remote metastasis), if the operation is possible, a cure by surgical therapy can be expected. In other words, among the current treatments, surgical treatment is the most effective. However, if the detection is delayed, since the metastasis to the lungs, liver, lymph nodes, or peritoneum, which is difficult to be resected, cannot be used as in the above case, surgery cannot be used. Ultimately, early diagnosis and treatment are required for effective treatment of colon cancer. I would say it is essential.

외과적 요법으로서 수술을 받은 이후에는 재발하는 경우가 종종 있으므로, 수술 후에는 3-4개월 간격으로 재발유무를 점검하기 위한 정기검사를 받아야 한다. 신체 내의 장기들 중에서 간, 폐, 복막 등이 재발하기 쉬운 장기이며, 또 절제한 부위에서 국소적으로 재발하기도 한다. 대장암은 다른 암과 비교할 때 빠른 시기에 재발이 발견되며, 재발한 병소를 절제하여 완전히 치료할 수도 있다. 재발의 80%이상은 수술 후 3년 이내에 발견되므로, 수술 후 5년 이내에 재발하지 않는 것이 완치의 기준이 된다. As a surgical treatment, recurrence often occurs after surgery. After surgery, regular examinations should be taken at intervals of 3-4 months to check for recurrence. Among the organs in the body, the liver, lungs, and peritoneum are organs that are prone to recurrence, and may recur locally at the resected site. Compared to other cancers, colorectal cancer recurs quickly and can be completely cured by resecting the recurrent lesion. Since more than 80% of recurrences are detected within 3 years after surgery, it is the standard of cure that does not recur within 5 years after surgery.

대장암은 조기인 경우라면 거의 100%가까이 완치되지만, 일반적으로 자각증상이 없기 때문에 무증상인 시기에 발견하는 것은 매우 어려우므로, 주기적인 검사가 선행 되어야 한다. 대장암의 선별검사(screening)로서 대표적인 것은 잠혈 검사이나, 이 검사에서 양성반응이 나왔다고 해서 대장암에 걸렸다는 것은 아니며, 또 역으로 음성반응이라고 해서 대장암에 걸리지 않았다라고 말할 수 있는 것도 아니어서 정확한 진단용도로 사용되기에는 무리가 있다. 따라서 현재 사용되고 있는 유효한 결과를 보장하는 대장암 검사법은 아래 표 3과 같다.Colorectal cancer is cured almost 100% if it is early, but it is very difficult to detect when asymptomatic because there are generally no subjective symptoms, so periodic examination should be preceded. The representative screening test for colorectal cancer is the occult blood test, but just because a positive test for this test does not mean that you have colorectal cancer, and conversely, a negative response does not mean that you do not have colorectal cancer. It is unreasonable to be used for accurate diagnosis. Therefore, the colorectal cancer test method that guarantees effective results currently in use is shown in Table 3 below.

대장암 검사법Colon cancer test 검사명Inspection name 검사방법 및 특징Inspection method and features 대장조영검사Colonoscopy 식사 제한 후에 장기를 충분히 비운 후 항문으로부터 바륨과 공기를 주입하여 X-ray 사진을 찍어 장의 모양을 검사After eating restriction, the organ is sufficiently emptied, and barium and air are injected from the anus to take an X-ray picture to examine the shape of the intestine. 대장내시경Colonoscopy S-결장까지를 관찰하는 짧은 내시경과, 맹장까지 모든 대장을 관찰할 수 있는 긴 내시경이 있음
검사와 동시 바로 용종을 절제할 수도 있음There are short endoscopes to observe the S-colon, and long endoscopes to observe all the large intestines down to the appendix.
The polyp may be removed immediately at the same time as the test 종양표지자Tumor marker 혈액 검사를 통해 신체 어딘가에 숨어 있는 암을 진단해내는 방법
그러나 현재까지 대장암을 조기에 발견할 수 있는 종양 표지자는 아직 없음
CEA라고 불리는 표지자가 일반적이지만, 대장암이 있어도 약 반수가 양성을 나타낼 뿐임
대장암의 진행도와 치료효과를 판정하는 지표로서 사용How to use blood tests to diagnose cancer that is hiding somewhere in the body
However, to date, there are no tumor markers that can detect colon cancer early.
A marker called CEA is common, but only about half of them are positive in the presence of colon cancer.
Used as an index to determine the progression and treatment effect of colorectal cancer 방사선 진단
(CT, MRI,
초음파 등) Radiation diagnosis
(CT, MRI,
Ultrasound, etc.) 원발 병소의 진전 정도와 간으로의 원격전이 여부를 알아보기 위해 사용Used to determine the degree of progression of the primary lesion and whether it has distant metastases to the liver.

현재까지 대장암을 조기에 발견할 수 있는 대장암 특유의 종양 표지자는 아직 밝혀진 바 없다. 물론, CEA라고 불리는 표지자가 있으나, 상기의 표 3에서도 언급한 바와 같이 대장암에 있어서 약 반수가 양성을 나타낼 뿐이므로, 주로 대장암의 진행도와 치료효과를 판정하는 지표로서 사용되고 있을 뿐, 초기의 진단을 위한 표지자로 사용하기에는 다소 무리가 있다.To date, a tumor marker peculiar to colon cancer that can detect colon cancer at an early stage has not been identified. Of course, there is a marker called CEA, but as mentioned in Table 3 above, only about half of the colon cancer is positive, so it is mainly used as an index to determine the progression and treatment effect of colon cancer. It is somewhat unreasonable to be used as a marker for diagnosis.

이에 본 발명자들은 대장암과 관련이 있다고 예상되는 유전자들을 대상으로 DNA 칩을 제작하여 대장암은 물론 위암, 유방암, 전립선암, 간암 등에서의 발현 정도를 비교하였다. 그 결과, 대장암 조직에서만 특이적으로 과발현되는 유전자들을 선별할 수 있었고, 이러한 대장암 진단마커로서의 가능성 있는 유전자들을 최종 선별하고, 이들을 통하여 대장암을 조기에 정확하게 진단할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors produced DNA chips for genes expected to be related to colon cancer, and compared the expression levels in gastric cancer, breast cancer, prostate cancer, and liver cancer as well as colon cancer. As a result, it was possible to select genes that are specifically overexpressed only in colorectal cancer tissues, and finally select genes that are possible as diagnostic markers for colorectal cancer, and through these, it was confirmed that colorectal cancer can be diagnosed early and accurately, and the present invention Was completed.

본 발명의 하나의 목적은 CHEK1(CHK1 checkpoint homolog(S. pombe), GenBank No. NM_001114121), MAD2L1(MAD2 mitotic arrest deficient-like 1(yeast), GenBank No. NM_002358), KRT23(keratin 23(histone deacetylase inducible), GenBank No. NM_015515), PROX1(prospero homeobox 1, GenBank No. NM_002763), SLC7A11(solute carrier family 7, (cationic amino acid transporter, y+ system) member 11, GenBank No. NM_014331), ASB9(ankyrin repeat and SOCS box-containing 9, GenBank No. NM_001031739), ENC1(ectodermal-neural cortex(with BTB-like domain), GenBank No. NM_003633), PLAU(plasminogen activator, urokinase, GenBank No. NM_001145031), RNF183(ring finger protein 183, GenBank No. NM_145051), CSEIL(CSE1 chromosome segregation 1-like (yeast), GenBank No. NM_001316), ATAD2(ATPase family, AAA domain containing 2, GenBank No. NM_014109), RAD51AP1(RAD51 associated protein 1, GenBank No. NM_001130862), C60RF173(chromosome 6 open reading frame 173, GenBank No. NM_001012507), 및 CCNB1(cyclin B1, GenBank No. NM_031966) 중에서 선택되는 1개 이상의 대장암 진단 마커를 제공하는 것이다.One object of the present invention is CHEK1 (CHK1 checkpoint homolog (S. pombe), GenBank No. NM_001114121), MAD2L1 (MAD2 mitotic arrest deficient-like 1 (yeast), GenBank No. NM_002358), KRT23 (keratin 23 (histone deacetylase) inducible), GenBank No. NM_015515), PROX1 (prospero homeobox 1, GenBank No. NM_002763), SLC7A11 (solute carrier family 7, (cationic amino acid transporter, y+ system) member 11, GenBank No. NM_014331), ASB9 (ankyrin repeat and SOCS box-containing 9, GenBank No. NM_001031739), ENC1 (ectodermal-neural cortex (with BTB-like domain), GenBank No. NM_003633), PLAU (plasminogen activator, urokinase, GenBank No. NM_001145031), RNF183 (ring finger protein 183, GenBank No. NM_145051), CSEIL (CSE1 chromosome segregation 1-like (yeast), GenBank No. NM_001316), ATAD2 (ATPase family, AAA domain containing 2, GenBank No. NM_014109), RAD51AP1 (RAD51 associated protein 1, GenBank No. NM_001130862), C60RF173 (chromosome 6 open reading frame 173, GenBank No. NM_001012507), and CCNB1 (cyclin B1, GenBank No. NM_031966) selected from One or more colon cancer diagnostic markers are provided.

본 발명의 또하나의 목적은 CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1 중에서 선택되는 1개 이상의 유전자의 mRNA 또는 이의 단백질 수준을 측정하는 제제를 포함하는 대장암 진단용 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to measure the mRNA or protein level thereof of one or more genes selected from CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 and CCNB1. It is to provide a composition for diagnosing colorectal cancer comprising an agent.

본 발명의 또다른 목적은 상기한 대장암 진단용 조성물을 포함하는 대장암 진단 키트를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a colon cancer diagnostic kit comprising the composition for diagnosing colon cancer.

본 발명의 또다른 목적은 상기 대장암 진단용 조성물 또는 키트를 이용하여 대장암을 진단하는 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for diagnosing colon cancer using the composition or kit for diagnosing colon cancer.

하나의 양태로서, 본 발명은 CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1 중에서 선택되는 1개 이상의 대장암 진단 마커에 관한 것이다.In one embodiment, the present invention relates to at least one colon cancer diagnostic marker selected from CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 and CCNB1.

본 발명에서 용어, "진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 본 발명의 목적상, 진단은 대장암 발병 여부를 확인하는 것이다.In the present invention, the term "diagnosis" means to confirm the presence or characteristics of a pathological condition. For the purposes of the present invention, the diagnosis is to determine whether the onset of colon cancer.

본 발명에서 용어, “대장암(colon cancer)”은 대장의 가장 안쪽 표면인 점막에서 발생한 암으로, 직장암, 결장암 및 항문암을 통칭한 것을 의미한다.In the present invention, the term "colon cancer" refers to cancer arising from the mucous membrane, which is the innermost surface of the large intestine, and collectively refers to rectal cancer, colon cancer, and anal cancer.

본 발명에서 용어, “진단용 마커, 진단하기 위한 마커 또는 진단 마커(diagnosis marker)”란 대장암 세포를 정상 세포와 구분하여 진단할 수 있는 물질로, 정상 세포에 비하여 대장암을 가진 세포에서 증가양상을 보이는 폴리펩타이드 또는 핵산(예: mRNA 등), 지질 , 당지질, 당단백질, 당(단당류, 이당류, 올리고당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등을 포함한다. 본 발명의 목적상, 대장암 진단 마커는 CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1으로, 대장암 세포에서 발현이 증가하는 유전자들이다. In the present invention, the term “diagnosis marker, diagnostic marker, or diagnostic marker” refers to a substance capable of diagnosing colorectal cancer cells by distinguishing them from normal cells, and is an increase in colorectal cancer cells compared to normal cells. And organic biomolecules such as polypeptides or nucleic acids (eg, mRNA, etc.), lipids, glycolipids, glycoproteins, sugars (monosaccharides, disaccharides, oligosaccharides, etc.). For the purposes of the present invention, colon cancer diagnostic markers are CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 and CCNB1, which are genes whose expression increases in colon cancer cells. .

유의성 있는 진단 마커의 선택과 적용은 진단 결과의 신뢰도를 결정짓는다. 유의성 있는 진단 마커란, 진단하여 얻은 결과가 정확하여 타당도(validity)가 높고 반복 측정시에도 일관된 결과를 나타내도록 신뢰도가(reliability)가 높은 마커를 의미한다. 본 발명의 대장암 진단 마커는, 대장암의 발병과 함께 직접적 또는 간접적 요인으로 발현이 항상 증가하는 유전자들로 반복된 실험에도 동일한 결과를 나타내며, 발현 수준의 차이가 대조군과 비교할 때 매우 커서 잘못된 결과를 내린 확률이 거의 없는 신뢰도가 높은 마커들이다. 그러므로 본 발명의 유의성 있는 진단 마커의 발현 정도를 측정하여 얻은 결과를 토대로 진단된 결과는 타당하게 신뢰할 수 있다. The selection and application of significant diagnostic markers determines the reliability of the diagnostic results. A significant diagnostic marker refers to a marker with high reliability so that the result obtained by diagnosis is accurate and thus has high validity and consistent results even when measured repeatedly. The colon cancer diagnostic marker of the present invention is genes whose expression is always increased due to direct or indirect factors along with the onset of colon cancer, and shows the same result even in repeated experiments, and the difference in expression level is very large compared to the control group, resulting in an incorrect result. These are highly reliable markers with little probability of dropping. Therefore, the diagnosis result based on the result obtained by measuring the expression level of the significant diagnostic marker of the present invention can be reasonably reliable.

이 때, 정상 대장 상피 세포와 대장암 세포에서 거의 동일한 양으로 발현되는 유전자들은 제외하고, 예를 들어 대조군으로 사용한 정상 조직에서 발현되는 유전자들에 비해 대장암 조직에서 발현이 2-9배 이상으로 증가되는 유전자들을 선별하였다.
In this case, except for genes expressed in almost the same amount in normal colon epithelial cells and colon cancer cells, for example, the expression in colon cancer tissues is 2-9 times higher than that of genes expressed in normal tissues used as a control. Genes to be increased were selected.

또다른 양태로서, 본 발명은 CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1 중에서 선택되는 1개 이상의 유전자의 발현 수준 또는 단백질의 수준을 측정하는 제제를 포함하는 대장암 진단용 조성물에 관한 것이다. In another aspect, the present invention is the expression level or protein level of one or more genes selected from CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 and CCNB1. It relates to a composition for diagnosing colorectal cancer comprising an agent to be measured.

생물학적 시료 중의 유전자 발현 수준은 mRNA 또는 단백질의 양을 확인함으로써 확인할 수 있다.The level of gene expression in a biological sample can be ascertained by checking the amount of mRNA or protein.

본 발명에서 “mRNA 발현수준 측정”이란 대장암을 진단하기 위하여 생물학적 시료에서 대장암 마커 유전자들의 mRNA 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로 mRNA의 양을 측정한다. 이를 위한 분석 방법으로는 역전사 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블랏팅(Northern blotting), DNA 칩 등이 있으나 이로 제한되는 것은 아니다. 본 발명에서 “단백질 발현수준 측정”이란 대장암을 진단하기 위하여 생물학적 시료에서 대장암 마커 유전자로부터 발현된 단백질의 존재 여부와 발현 정도를 확인하는 과정으로, 바람직하게는, 상기 유전자의 단백질에 대하여 특이적으로 결합하는 항체를 이용하여 단백질의 양을 확인할 수 있다. 이를 위한 분석 방법으로는 웨스턴 블랏, 엘라이자(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA), 방사선면역분석(RIA: Radioimmunoassay), 방사 면역 확산법(radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트(rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법(Immunoprecipitation Assay), 보체 고정 분석법(Complement Fixation Assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질 칩(protein chip) 등이 있으나 이로 제한되는 것은 아니다. In the present invention, “measurement of mRNA expression level” is a process of determining the presence and expression level of mRNA of colon cancer marker genes in a biological sample in order to diagnose colorectal cancer, and measures the amount of mRNA. Analysis methods for this include reverse transcription polymerase reaction (RT-PCR), competitive reverse transcription polymerase reaction (Competitive RT-PCR), real-time reverse transcription polymerase reaction (Real-time RT-PCR), and RNase protection assay (RPA; RNase protection). assay), Northern blotting, DNA chip, etc., but are not limited thereto. In the present invention, “protein expression level measurement” is a process of determining the presence and expression level of a protein expressed from a colon cancer marker gene in a biological sample in order to diagnose colorectal cancer. The amount of protein can be confirmed by using an antibody that binds to it. Analysis methods for this include western blot, enzyme linked immunosorbent assay (ELISA), radioimmunoassay (RIA), radioimmunodiffusion, Ouchterlony immune diffusion, and rocket. Immunoelectrophoresis, tissue immunostaining, Immunoprecipitation Assay, Complement Fixation Assay, Fluorescence Activated Cell Sorter (FACS), protein chip, etc., but are not limited thereto. .

따라서, 본 발명의 구체적인 일 양태에서는, CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1 중에서 선택되는 1 이상의 유전자에 특이적인 프라이머 서열을 포함하는 대장암 진단 마커 조성물을 제공한다.Accordingly, in a specific aspect of the present invention, a primer sequence specific to one or more genes selected from CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 and CCNB1 is included. It provides a colorectal cancer diagnostic marker composition.

본 발명의 "프라이머"는 짧은 자유 3말단 수산화기를 가지는 핵산 서열로 상보적인 템플레이트(template)와 염기쌍을 형성할 수 있고 템플레이트 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 중합효소 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오사이드 트리포스페이트의 존재하에서 DNA 합성이 개시할 수 있다. 본 발명의 프라이머는, 각 마커 유전자 특이적인 프라이머로 7개 내지 50개의 뉴클레오타이드 서열을 가진 센스 및 안티센스 핵산이다. 프라이머는 DNA 합성의 개시점으로 작용하는 프라이머의 기본 성질을 변화시키지 않는 추가의 특징을 혼입할 수 있다. The term "primer" of the present invention refers to a short nucleic acid sequence having a short free three-terminal hydroxyl group, capable of forming a base pair with a complementary template, and serving as a starting point for template strand copying. Primers can initiate DNA synthesis in the presence of reagents for polymerization (ie, DNA polymerase or reverse transcriptase) and four different nucleoside triphosphates at an appropriate buffer and temperature. The primers of the present invention are sense and antisense nucleic acids having 7 to 50 nucleotide sequences as primers specific for each marker gene. Primers can incorporate additional features that do not change the basic properties of the primers serving as the starting point for DNA synthesis.

본 발명의 프라이머는 포스포르아미다이트 고체 지지체 방법, 또는 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 이러한 핵산 서열은 또한 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 비제한적인 예로는 메틸화, "캡화", 천연 뉴클레오타이드 하나 이상의 동족체로의 치환, 및 뉴클레오타이드 간의 변형, 예를 들면, 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있다. 핵산은 하나 이상의 부가적인 공유 결합된 잔기, 예를 들면, 단백질(예: 뉴클레아제, 독소, 항체, 시그날 펩타이드, 폴리-L-리신 등), 삽입제(예: 아크리딘, 프소랄렌 등), 킬레이트화제(예: 금속, 방사성 금속, 철, 산화성 금속 등), 및 알킬화제를 함유할 수 있다. 본 발명의 핵산 서열은 또한 검출 가능한 시그날을 직접적으로 또는 간접적으로 제공할 수 있는 표지를 이용하여 변형시킬 수 있다. 표지의 예로는 방사성 동위원소, 형광성 분자, 바이오틴 등이 있다. The primers of the present invention can be chemically synthesized using the phosphoramidite solid support method, or other well known methods. Such nucleic acid sequences can also be modified using a number of means known in the art. Non-limiting examples of such modifications include methylation, “encapsulation”, substitution of one or more homologues of natural nucleotides, and modifications between nucleotides, such as uncharged linkers (eg, methyl phosphonate, phosphotriester, phos Poroamidate, carbamate, etc.) or to a charged linker (eg phosphorothioate, phosphorodithioate, etc.). Nucleic acids may be one or more additional covalently linked moieties, such as proteins (e.g., nucleases, toxins, antibodies, signal peptides, poly-L-lysine, etc.), intercalating agents (e.g., acridine, psoralen, etc.). ), chelating agents (eg, metals, radioactive metals, iron, oxidizing metals, etc.), and alkylating agents. The nucleic acid sequence of the present invention can also be modified using a label that can directly or indirectly provide a detectable signal. Examples of labels include radioactive isotopes, fluorescent molecules, and biotin.

본 발명의 구체적인 실시예에 따르면, 상기 대장암 진단 마커 검출용 조성물은, CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1 중에서 선택되는 1 이상의 유전자에 대하여 특이적인 각각의 프라이머 쌍을 포함한다. 구체적으로는, 염기서열 목록의 서열번호 1 내지 28로 표시되는 프라이머들이다.
According to a specific embodiment of the present invention, the composition for detecting a diagnostic marker for colon cancer is 1 selected from CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 and CCNB1. Each primer pair specific for the above genes is included. Specifically, these are the primers represented by SEQ ID NOs: 1 to 28 in the nucleotide sequence list.

또다른 양태로서, 본 발명은 CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1 중에서 선택되는 1 이상의 단백질에 특이적인 항체를 포함하는 대장암 진단 마커 조성물을 제공한다.In another aspect, the present invention is a colorectal cancer comprising an antibody specific for one or more proteins selected from CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 and CCNB1. A diagnostic marker composition is provided.

본 발명에서, “항체”란 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명의 목적상, 항체는 마커 단백질에 대해 특이적으로 결합하는 항체를 의미하며, 다클론 항체, 단클론 항체 및 재조합 항체를 모두 포함한다. In the present invention, "antibody" refers to a specific protein molecule directed against an antigenic site. For the purposes of the present invention, an antibody refers to an antibody that specifically binds to a marker protein, and includes all of polyclonal antibodies, monoclonal antibodies, and recombinant antibodies.

상기한 바와 같이 대장암 마커 단백질이 규명되었으므로, 이를 이용하여 항체를 생성하는 것은 당업계에 널리 공지된 기술을 이용하여 용이하게 제조할 수 있다. Since the colon cancer marker protein has been identified as described above, generating an antibody using it can be easily prepared using techniques well known in the art.

다클론 항체는 상기한 대장암 마커 단백질 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 당업계에 널리 공지된 방법에 의해 생산할 수 있다. 이러한 다클론 항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소 개 등의 임의의 동물 종 숙주로부터 제조 가능하다. The polyclonal antibody can be produced by a method well known in the art by injecting the above-described colon cancer marker protein antigen into an animal and collecting blood from the animal to obtain a serum containing the antibody. Such polyclonal antibodies can be prepared from any animal species host such as goat, rabbit, sheep, monkey, horse, pig, cow and dog.

단클론 항체는 당업계에 널리 공지된 하이브리도마 방법(hybridoma method)(Kohler 및 Milstein (1976) European Jounral of Immunology 6:511-519 참조), 또는 파지 항체 라이브러리(Clackson et al, Nature, 352:624-628, 1991; Marks et al, J. Mol. Biol., 222:58, 1-597, 1991) 기술을 이용하여 제조될 수 있다. 상기 방법으로 제조된 항체는 겔 전지영동, 투석, 염 침전, 이온교환 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피 등의 방법을 이용하여 분리, 정제할 수 있다. Monoclonal antibodies are hybridoma methods well known in the art (see Kohler and Milstein (1976) European Jounral of Immunology 6:511-519), or phage antibody library (Clackson et al, Nature, 352:624 -628, 1991; Marks et al, J. Mol. Biol., 222:58, 1-597, 1991). The antibody prepared by the above method can be separated and purified using methods such as gel electrophoresis, dialysis, salt precipitation, ion exchange chromatography, and affinity chromatography.

또한 본 발명의 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라, 항체 분자의 기능적인 단편을 포함한다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합 기능을 보유하고 있는 단편을 뜻하며, Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등이 있다. 본 발명의 또 다른 양태에서는, 본 발명에 따른 상기 대장암 진단용 조성물을 포함하는 대장암 진단 키트를 제공한다. 바람직하게, 상기 대장암 진단 키트는 분석 방법에 적합한 한 종류 또는 그 이상의 다른 구성성분 조성물, 용액 또는 장치를 더 포함하여 구성될 수 있다. In addition, the antibody of the present invention includes a complete form having two full-length light chains and two full-length heavy chains, as well as functional fragments of antibody molecules. A functional fragment of an antibody molecule refers to a fragment that has at least an antigen-binding function, and includes Fab, F(ab'), F(ab') 2 and Fv. In another aspect of the present invention, it provides a colon cancer diagnostic kit comprising the composition for diagnosing colon cancer according to the present invention. Preferably, the colorectal cancer diagnostic kit may be configured to further include one kind or more other component compositions, solutions, or devices suitable for the analysis method.

구체적인 일 양태로서, 상기 진단 키트는 역전사 중합효소반응을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 것을 특징으로 하는 진단용 키트일 수 있다. 역전사 중합효소반응 키트는 마커 유전자에 대한 특이적인 각각의 프라이머 쌍을 포함한다. 프라이머는 각 마커 유전자의 핵산서열에 특이적인 서열을 가지는 뉴클레오타이드로서, 약 7 bp 내지 50 bp의 길이, 보다 바람직하게는 약 10 bp 내지 30 bp 의 길이이다. 또한 대조군 유전자의 핵산 서열에 특이적인 프라이머를 포함할 수 있다. 그 외 역전사 중합효소반응 키트는 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액(pH 및 마그네슘 농도는 다양), 데옥시뉴클레오타이드(dNTPs), Taq-폴리머라아제 및 역전사효소와 같은 효소, DNAse, RNAse 억제제 DEPC-수(DEPC-water), 멸균수 등을 포함할 수 있다.
As a specific aspect, the diagnostic kit may be a diagnostic kit comprising essential elements necessary to perform a reverse transcription polymerase reaction. The reverse transcription polymerase reaction kit includes each primer pair specific for a marker gene. The primer is a nucleotide having a sequence specific to the nucleic acid sequence of each marker gene, and is about 7 bp to 50 bp in length, more preferably about 10 bp to 30 bp in length. In addition, a primer specific to the nucleic acid sequence of the control gene may be included. Other reverse transcription polymerase reaction kits include test tubes or other suitable containers, reaction buffers (various pH and magnesium concentrations), deoxynucleotides (dNTPs), enzymes such as Taq-polymerase and reverse transcriptase, DNAse, RNAse inhibitors DEPC. -May include DEPC-water, sterilized water, etc.

또 다른 양태로는, 바람직하게 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 것을 특징으로 하는 진단 키트일 수 있다. DNA 칩 키트는 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드 (oligonucleotide)가 부착되어 있는 기판, 및 형광표식 프로브를 제작하기 위한 시약, 제제, 효소 등을 포함할 수 있다. 또한 기판은 대조군 유전자 또는 그의 단편에 해당하는 cDNA 또는 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. In another aspect, it may be a diagnostic kit characterized in that it preferably contains essential elements necessary to perform a DNA chip. The DNA chip kit may include a substrate to which cDNA or oligonucleotide corresponding to a gene or fragment thereof is attached, and reagents, agents, enzymes, and the like for preparing a fluorescently labeled probe. In addition, the substrate may include a cDNA or oligonucleotide corresponding to a control gene or a fragment thereof.

또한 바람직하게는, ELISA를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 것을 특징으로 하는 진단 키트일 수 있다. ELISA 키트는 마커 단백질에 대한 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 각 마커 단백질에 대한 특이성 및 친화성이 높고 다른 단백질에 대한 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 단클론 항체, 다클론 항체 또는 재조합 항체이다. 또한 ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된 2차 항체, 발색단(chromophores), 효소(예: 항체와 컨주게이트됨) 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 있는 다른 물질 등을 포함할 수 있다.
Also preferably, it may be a diagnostic kit characterized in that it contains the essential elements necessary to perform the ELISA. The ELISA kit contains antibodies specific for the marker protein. Antibodies are antibodies that have high specificity and affinity for each marker protein and have little cross-reactivity with other proteins, and are monoclonal, polyclonal, or recombinant antibodies. In addition, the ELISA kit may contain an antibody specific for a control protein. Other ELISA kits include reagents capable of detecting bound antibodies, such as labeled secondary antibodies, chromophores, enzymes (e.g., conjugated with antibodies) and their substrates or antibodies capable of binding. Other materials may be included.

또다른 양태로서, 본 발명은 상기 대장암 진단용 조성물 또는 상기 대장암 진단 키트를 이용한 대장암 진단 방법을 제공한다. In another aspect, the present invention provides a method for diagnosing colorectal cancer using the composition for diagnosing colorectal cancer or the colorectal cancer diagnosis kit.

구체적인 일 양태로서, 본 발명은 CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1 중에서 선택되는 1개 이상의 유전자에 특이적인 프라이머를 사용하여 대장암 의심 환자의 생물학적 시료로부터 mRNA를 측정하는 단계; 및 상기 mRNA 수준의 증가를 정상 대조구 시료의 mRNA 수준과 비교하는 단계를 포함하는 대장암 진단 방법을 제공한다. As a specific aspect, the present invention uses a primer specific for one or more genes selected from CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 and CCNB1. Measuring mRNA from a biological sample of a patient suspected of cancer; And comparing the increase in the mRNA level with the mRNA level of a normal control sample.

생물학적 시료에서 mRNA를 분리하는 과정은 공지의 공정을 이용하여 수행할 수 있으며 mRNA 수준은 다양한 방법으로 측정할 수 있다. The process of separating mRNA from a biological sample can be performed using a known process, and the level of mRNA can be measured by various methods.

본 발명에서 용어 “생물학적 시료”란 대장암 발병에 의해 대장암 마커의 유전자 발현 수준이 차이나는 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 뇌척수액 또는 뇨와 같은 시료 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. In the present invention, the term "biological sample" includes samples such as tissues, cells, whole blood, serum, plasma, saliva, sputum, cerebrospinal fluid, or urine whose gene expression levels of colon cancer markers differ due to colon cancer, but this Not limited.

mRNA 수준을 측정하기 위한 분석 방법으로는 역전사효소 중합효소반응, 경쟁적 역전사효소 중합효소반응, 실시간 역전사효소 중합효소반응, RNase 보호 분석법, 노던 블랏팅, DNA 칩 등이 있으나 이로 제한되는 것은 아니다. Analysis methods for measuring mRNA levels include reverse transcriptase polymerase reaction, competitive reverse transcriptase polymerase reaction, real-time reverse transcriptase polymerase reaction, RNase protection assay, Northern blotting, DNA chip, etc., but are not limited thereto.

상기 검출 방법들을 통하여, 정상 대조군에서의 mRNA 발현량과 대장암 의심환자에서의 mRNA 발현량을 비교할 수 있고, 대장암 마커 유전자에서 mRNA로의 유의한 발현량의 증가여부를 판단하여 대장암 의심 환자의 실제 대장암 발병 여부를 진단할 수 있다. Through the above detection methods, it is possible to compare the mRNA expression level in the normal control and the mRNA expression level in the suspected colorectal cancer patient, and determine whether a significant increase in the amount of expression from the colorectal cancer marker gene to the mRNA is determined to You can diagnose whether you develop colorectal cancer.

mRNA 발현수준 측정은 바람직하게는, 대장암 마커로 사용되는 유전자에 특이적인 프라이머를 이용하는 역전사효소 중합효소반응법 또는 DNA 칩을 이용하는 것이다. The mRNA expression level is preferably measured using a reverse transcriptase polymerase reaction method or a DNA chip using a primer specific for a gene used as a colon cancer marker.

상기의 역전사효소 중합효소반응은 반응 후 전기영동하여 밴드 패턴과 밴드의 두께를 확인함으로써 대장암 진단 마커로 사용되는 유전자의 mRNA 발현 여부와 정도를 확인 가능하고 이를 대조군과 비교함으로써, 대장암 발생 여부를 간편하게 진단할 수 있다(도 8~11). 한편, DNA 칩은 상기 대장암 마커 유전자 또는 그 단편에 해당하는 핵산이 유리 같은 기판에 고밀도로 부착되어 있는 DNA 칩을 이용하는 것으로서, 시료에서 mRNA를 분리하고, 그 말단 또는 내부를 형광 물질로 표지된 cDNA 프로브를 조제하여, DNA 칩에 혼성화시킨 다음 대장암의 발병 여부를 판독할 수 있다.
In the reverse transcriptase polymerase reaction, by checking the band pattern and the thickness of the band by electrophoresis after the reaction, it is possible to check the mRNA expression and degree of the gene used as a diagnostic marker for colorectal cancer. Can be easily diagnosed (Figs. 8 to 11). Meanwhile, the DNA chip uses a DNA chip in which a nucleic acid corresponding to the colon cancer marker gene or its fragment is attached at high density to a glass-like substrate, and the mRNA is separated from the sample, and the end or the inside thereof is labeled with a fluorescent substance. A cDNA probe is prepared, hybridized to a DNA chip, and then the onset of colon cancer can be read.

또 다른 구체적인 양태로서, 본 발명은 CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1 중에서 선택되는 1개 이상의 단백질에 특이적인 항체를 대장암 의심 환자의 생물학적 시료와 접촉시켜 항원-항체 복합체 형성으로 단백질 수준을 확인하는 단계, 및 상기 단백질 형성량의 증가를 정상 대조구 시료의 단백질 수준과 비교하는 단계를 포함하는 대장암 진단 방법을 제공한다. In another specific embodiment, the present invention uses an antibody specific for one or more proteins selected from CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 and CCNB1 for colon cancer. It provides a method for diagnosing colorectal cancer comprising the steps of confirming the protein level by contacting a biological sample of a suspected patient to form an antigen-antibody complex, and comparing the increase in the amount of protein formation with the protein level of a normal control sample.

생물학적 시료에서 단백질을 분리하는 과정은 공지의 공정을 이용하여 수행할 수 있으며 단백질 수준은 다양한 방법으로 측정할 수 있다.The process of separating a protein from a biological sample can be performed using a known process, and the protein level can be measured by various methods.

단백질 수준을 측정하기 위한 분석 방법으로는, 웨스턴 블랏, ELISA, 방사선면역분석, 방사 면역 확산법, 오우크테로니 면역 확산법, 로케트 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역침전 분석법, 보체 고정 분석법, FACS, 단백질 칩 등이 있으나 이로 제한되는 것은 아니다.Analytical methods for measuring protein levels include Western blot, ELISA, radioimmunoassay, radioimmunoassay, Okteroni immunodiffusion, rocket immunoelectrophoresis, tissue immunostaining, immunoprecipitation assay, complement fixation assay, FACS, Protein chips and the like, but are not limited thereto.

상기 분석 방법들을 통하여, 정상 대조군에서의 항원-항체 복합체의 형성량과 대장암 의심환자에서의 항원-항체 복합체의 형성량을 비교할 수 있고, 대장암 마커 유전자에서 단백질로의 유의한 발현량의 증가여부를 판단하여, 대장암 의심 환자의 실제 대장암 발병 여부를 진단할 수 있다. Through the above analysis methods, it is possible to compare the amount of formation of the antigen-antibody complex in the normal control and the amount of the antigen-antibody complex in the suspected colorectal cancer patient, and a significant increase in the amount of expression from the colon cancer marker gene to the protein. By judging whether or not, it is possible to diagnose whether a patient suspected of colon cancer actually develops colorectal cancer.

본 발명에서 용어 “항원-항체 복합체”란 대장암 마커 단백질과 이에 특이적인 항체의 결합물을 의미하고, 항원-항체 복합체의 형성량은 검출 라벨(detection label)의 시그널의 크기를 통해서 정량적으로 측정 가능하다. In the present invention, the term “antigen-antibody complex” refers to a combination of a colon cancer marker protein and an antibody specific thereto, and the amount of formation of the antigen-antibody complex is quantitatively measured through the size of the signal of the detection label. It is possible.

이러한 검출 라벨은 효소, 형광물, 리간드, 발광물, 미소입자(microparticle), 레독스 분자 및 방사선 동위원소로 이루어진 그룹중에서 선택할 수 있으며, 반드시 이로 제한되는 것은 아니다. 검출 라벨로서 효소가 사용되는 경우 이용 가능한 효소에는 β-글루쿠로니다제, β-D-글루코시다제, β-D-갈락토시다제, 우레아제, 퍼옥시다아제 또는 알칼라인 포스파타아제, 아세틸콜린에스테라제, 글루코즈 옥시다제, 헥소키나제와 GDPase, RNase, 글루코즈 옥시다제와 루시페라제, 포스포프럭토키나제, 포스포에놀피루베이트 카복실라제, 아스파르테이트 아미노트랜스페라제, 포스페놀피루베이트 데카복실라제, β-라타마제 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 형광물에는 플루오레신, 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리테린, 피코시아닌, 알로피코시아닌, o-프탈데히드, 플루오레스카민 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 리간드에는 바이오틴 유도체 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 발광물에는 아크리디늄 에스테르, 루시페린, 루시퍼라아제 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 미소입자에는 콜로이드 금, 착색된 라텍스 등이 있으며 이로 제한되지 않는다. 레독스 분자에는 페로센, 루테늄 착화합물, 바이올로젠, 퀴논, Ti 이온, Cs 이온, 디이미드, 1,4-벤조퀴논, 하이드로퀴논, K4 W(CN)8 , [Os(bpy) 3 ] 2+ ,[RU(bpy) 3 ] 2+, [MO(CN) 8 ] 4- 등이 포함되며 이로 제한되지 않는다. 방사선동위원소에는 3H, 14C, 32P, 35S, 36Cl, 51Cr, 57Co, 58Co, 59Fe, 90Y, 125I, 131I , 186Re 등이 포함되며 이로 제한되지 않는다.The detection label may be selected from the group consisting of enzymes, fluorescent substances, ligands, luminescent substances, microparticles, redox molecules, and radioactive isotopes, but is not limited thereto. When an enzyme is used as a detection label, available enzymes include β-glucuronidase, β-D-glucosidase, β-D-galactosidase, urease, peroxidase or alkaline phosphatase, acetylcholinese. Therapies, glucose oxidase, hexokinase and GDPase, RNase, glucose oxidase and luciferase, phosphofructokinase, phosphoenolpyruvate carboxylase, aspartate aminotransferase, phospholpyruvate deca But not limited to, but not limited to, boxylase, β-latamase, and the like. Fluorescein includes fluorescein, isothiocyanate, rhodamine, phycoerytherin, phycocyanine, allophycocyanin, o-phthaldehyde, and fluorescarmine, but is not limited thereto. Ligands include biotin derivatives, but are not limited thereto. The luminescent material includes, but is not limited to, acridinium ester, luciferin, and luciferase. The microparticles include colloidal gold and colored latex, but are not limited thereto. Redox molecules include ferrocene, ruthenium complex, viologen, quinone, Ti ion, Cs ion, diimide, 1,4-benzoquinone, hydroquinone, K 4 W(CN) 8 , [Os(bpy) 3 ] 2+ ,[RU(bpy) 3 ] 2+ , [MO(CN) 8 ] 4-, etc. are included, but are not limited thereto. Radioisotopes include, but are not limited to, 3 H, 14 C, 32 P, 35 S, 36 Cl, 51 Cr, 57 Co, 58 Co, 59 Fe, 90 Y, 125 I, 131 I, 186 Re, etc. .

단백질 발현수준 측정은 바람직하게는, ELISA법을 이용하는 것이다. ELISA는 고체 지지체에 부착된 항원을 인지하는 표지된 항체를 이용하는 직접적 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항원을 인지하는 항체의 복합체에서 포획 항체를 인지하는 표지된 항체를 이용하는 간접적 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 표지된 또 다른 항체를 이용하는 직접적 샌드위치 ELISA, 고체 지지체에 부착된 항체와 항원의 복합체에서 항원을 인지하는 또 다른 항체와 반응시킨 후 이 항체를 인지하는 표지된 2차 항체를 이용하는 간접적 샌드위치 ELISA 등 다양한 ELISA 방법을 포함한다. 보다 바람직하게는, 고체 지지체에 항체를 부착시키고 시료를 반응시킨 후 항원-항체 복합체의 항원을 인지하는 표지된 항체를 부착시켜 효소적으로 발색시키거나 항원-항체 복합체의 항원을 인지하는 항체에 대해 표지된 2차 항체를 부착시켜 효소적으로 발색시키는 샌드위치 ELISA 방법에 의해서 검출한다. 대장암 마커 단백질과 항체의 복합체 형성 정도를 확인하여, 대장암 발병 여부를 확인할 수 있다.The protein expression level is preferably measured using an ELISA method. ELISA is a direct ELISA using a labeled antibody that recognizes an antigen attached to a solid support, an indirect ELISA using a labeled antibody that recognizes the capture antibody in a complex of antibodies that recognize an antigen attached to a solid support, and a solid support. Direct sandwich ELISA using another labeled antibody that recognizes an antigen in a complex of antibody and antigen, and a labeled that recognizes this antibody after reacting with another antibody that recognizes the antigen in a complex of an antibody attached to a solid support and an antigen. It includes various ELISA methods such as indirect sandwich ELISA using secondary antibodies. More preferably, after attaching the antibody to a solid support and reacting the sample, a labeled antibody that recognizes the antigen of the antigen-antibody complex is attached to develop enzymatically or against the antibody that recognizes the antigen of the antigen-antibody complex. It is detected by a sandwich ELISA method in which a labeled secondary antibody is attached and colored enzymatically. By checking the degree of formation of a complex between the colon cancer marker protein and the antibody, it is possible to determine whether or not colon cancer has occurred.

또한, 바람직하게는, 상기 대장암 마커에 대한 하나 이상의 항체를 이용한 웨스턴 블랏을 이용하는 것이다. 시료에서 전체 단백질을 분리하고, 이를 전기영동하여, 단백질을 크기에 따라 분리한 다음, 니트로셀루로즈 막으로 이동시켜 항체와 반응시킨다. 생성된 항원-항체 복합체의 양을 표지된 항체를 이용하여 확인하는 방법으로 유전자의 발현에 의해 생성된 단백질의 양을 확인하여, 대장암 발병 여부를 확인할 수 있다. 상기 검출 방법은 대조군에서의 마커 유전자의 발현량과 대장암이 발병한 세포에서의 마커 유전자의 발현량을 조사하는 방법으로 이루어진다. mRNA 또는 단백질 수준은 상기한 마커 단백질의 절대적(예: ㎍/㎖) 또는 상대적(예: 시그널의 상대 강도) 차이로 나타낼 수 있다. In addition, preferably, Western blot using at least one antibody against the colon cancer marker is used. The whole protein is separated from the sample, electrophoresed to separate the protein according to its size, and then transferred to a nitrocellulose membrane to react with the antibody. By confirming the amount of the generated antigen-antibody complex using a labeled antibody, the amount of protein generated by the expression of the gene can be checked to confirm whether or not colon cancer has occurred. The detection method comprises a method of examining the expression level of the marker gene in a control group and the expression level of the marker gene in cells with colon cancer. The mRNA or protein level can be expressed as an absolute (eg, μg/ml) or relative (eg, relative intensity of a signal) difference between the above-described marker protein.

또한, 바람직하게는, 상기 대장암 마커에 대한 하나 이상의 항체를 이용한 면역조직 염색을 실시하는 것이다. 정상 대장 상피 조직 및 대장암으로 의심되는 조직을 채취 및 고정한 후, 당업계에서 널리 공지된 방법으로 파라핀 포매 블록을 제조한다. 이들을 수 um 두께의 절편으로 만들어 유리 슬라이드에 붙인 후, 이와 상기의 항체 중 선택된 1개와 공지의 방법에 의하여 반응시킨다. 이후, 반응하지 못한 항체는 세척하고, 상기에 언급한 검출라벨 중의 하나로 표지하여 현미경 상에서 항체의 표지 여부를 판독한다.In addition, preferably, immunohistochemistry using one or more antibodies against the colon cancer marker is performed. After collecting and fixing normal colon epithelial tissue and tissue suspected of colon cancer, a paraffin-embedded block is prepared by a method well known in the art. These are made into slices several um thick and attached to a glass slide, and then reacted with one selected from the above antibodies by a known method. Thereafter, the unreacted antibody is washed, labeled with one of the above-mentioned detection labels, and whether or not the antibody is labeled is read under a microscope.

또한, 바람직하게는, 상기 대장암 마커에 대한 하나 이상의 항체가 기판 위의 정해진 위치에 배열되어 고밀도로 고정화되어 있는 단백질 칩을 이용하는 것이다. 단백질 칩을 이용하여 시료를 분석하는 방법은, 시료에서 단백질을 분리하고, 분리한 단백질을 단백질 칩과 혼성화시켜서 항원-항체 복합체를 형성시키고, 이를 판독하여, 단백질의 존재 또는 발현 정도를 확인하여, 대장암 발병 여부를 확인할 수 있다.In addition, preferably, at least one antibody against the colon cancer marker is arranged at a predetermined position on a substrate to use a protein chip that is immobilized at high density. The method of analyzing a sample using a protein chip involves separating a protein from the sample, hybridizing the separated protein with a protein chip to form an antigen-antibody complex, reading this, and confirming the presence or expression of the protein, You can check whether you have colon cancer.

본 발명은 대장암의 전이 및 예후를 판단할 수 있는 진단 마커들을 제공함으로써, 대장암의 치료 및 예후관리에 유용한 자료를 제공한다. 또한, 상기 대장암 진단 마커들은 대장암 특이적 항암제 개발연구에 이용될 수 있다.The present invention provides useful data for the treatment and prognosis of colon cancer by providing diagnostic markers that can determine the metastasis and prognosis of colon cancer. In addition, the colon cancer diagnostic markers may be used for research on the development of an anticancer drug specific for colon cancer.

도 1은 48K 인간 마이크로 어레이 칩(Illumina사)을 사용하여 정상 대장 조직과 대장암조직에서 2,230개의 유전자 발현을 비교한 결과이다(p value <0.05). 도면 상단의 DF는 Disease-free를 RC는 Recurrent를 의미한다.
도 2 는 48K 인간 마이크로 어레이 칩(Illumina사) 분석 결과를 토대로 대장암조직에서 특이적으로 과발현되는 유전자를 도표화한 것이다.
도 3 내지 6은 대장암 특이적인 유전자의 마이크로어레이 결과를 바탕으로 공개되어 있는 여러 마이크로어레이 데이터를 비교분석(data mining)한 예들로서, 도 3은 CHEK1 유전자, 도 4는 MAD2L1 유전자, 도 5는 KRT23 유전자, 그리고 도 6은 PROX1 유전자의 비교분석 결과이다.
도 7은 대장암, 위암, 유방암, 전립선암, 간암에서 동일한 유전자들을 대상으로 DNA 칩을 이용하여 유전자의 과발현을 비교한 결과이다.
도 8은 역전사 중합효소반응을 이용한 정상조직과 대장암 조직에서의 CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1 및 SLC7A11 진단 마커의 발현 정도를 확인한 전기영동 사진이다(홀수 레인은 정상조직, 짝수 레인은 암조직).
도 9는 역전사 중합효소반응을 이용한 정상조직과 대장암 조직에서의 ASB9, ENC1, PLAU 및 RNF183 진단 마커의 발현 정도를 확인한 전기영동 사진이다(홀수 레인은 정상조직, 짝수 레인은 암조직).
도 10은 역전사 중합효소반응을 이용한 정상조직과 대장암 조직에서의 CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1 진단 마커의 발현 정도를 확인한 전기영동 사진이다(홀수 레인은 정상조직, 짝수 레인은 암조직).
도 11은 역전사 중합효소반응을 이용하여 10종의 대장암 세포주(Lane 1, DLD-1; Lane 2, HT29; Lane 3, HCT116; Lane 4, colo205; Lane 5, SW480;
Lane 6, SW620; Lane 7, SNU C1; Lane 8, SNU C2A; Lane 9,KM 12C; Lane 10, KM 12SM)에서 CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1, SLC7A11, ASB9, ENC1, PLAU, RNF183, CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 및 CCNB1 진단 마커들의 발현 정도를 확인한 전기영동 사진이다.1 is a result of comparing the expression of 2,230 genes in normal colon tissue and colon cancer tissue using a 48K human microarray chip (Illumina) (p value <0.05). DF at the top of the figure means Disease-free and RC means Recurrent.
2 is a diagram of genes specifically overexpressed in colon cancer tissues based on the analysis results of a 48K human microarray chip (Illumina).
3 to 6 are examples of comparative analysis (data mining) of various microarray data published based on the microarray results of a colorectal cancer-specific gene.FIG. 3 is a CHEK1 gene, FIG. 4 is a MAD2L1 gene, and FIG. 5 is KRT23 gene, and Figure 6 is a comparative analysis result of the PROX1 gene.
7 is a result of comparing gene overexpression using a DNA chip targeting the same genes in colorectal cancer, gastric cancer, breast cancer, prostate cancer, and liver cancer.
8 is an electrophoresis picture confirming the expression levels of CHEK1, MAD2L1, KRT23, PROX1 and SLC7A11 diagnostic markers in normal tissues and colon cancer tissues using reverse transcription polymerase reaction (odd lanes are normal tissues, even lanes are cancer tissues) .
9 is an electrophoresis picture confirming the expression levels of ASB9, ENC1, PLAU and RNF183 diagnostic markers in normal tissues and colon cancer tissues using reverse transcription polymerase reaction (odd lanes are normal tissues, even lanes are cancer tissues).
Figure 10 is an electrophoresis picture confirming the expression levels of CSEIL, ATAD2, RAD51AP1, C60RF173 and CCNB1 diagnostic markers in normal tissues and colon cancer tissues using reverse transcription polymerase reaction (odd lanes are normal tissues, even lanes are cancer tissues) .
11 shows 10 colon cancer cell lines (Lane 1, DLD-1; Lane 2, HT29; Lane 3, HCT116; Lane 4, colo205; Lane 5, SW480;
Lane 6, SW620; Lane 7, SNU C1; Lane 8, SNU C2A; Lane 9, KM 12C; Lane 10, KM 12SM).

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail through examples. However, these examples are for illustrative purposes only, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

실시예Example 1. One. DNADNA 칩을 이용한 대장암 과발현 유전자 발굴 Discovery of overexpressing genes for colon cancer using chips

정상 대장 상피세포에 비하여 대장암 세포에서만 특이적으로 과발현하는 유전자를 1차적으로 추출하고자 DNA 칩(48K 인간 마이크로어레이, Illumina사)을 이용하여 2,230개의 유전자에 대하여 그 발현도를 조사하였다.Compared to normal colon epithelial cells, in order to primarily extract genes that are specifically overexpressed only in colon cancer cells, the expression level of 2,230 genes was investigated using a DNA chip (48K human microarray, Illumina).

우선, 정상 대장 상피세포 및 대장암 세포에서 total RNA를 추출하였다. total RNA의 추출은 RNeasy Mini Kit (QIAGEN사)를 이용하였고, Experion RNA StdSens(Bio-Rad사) 칩을 이용하여 정량하였다. 하이브리드화를 위해 상기 추출된 total RNA를 Illumina TotalPrep RNA Amplification Kit (Ambion사)을 이용하였다. T7 Oligo(dT) primer를 이용하여 cDNA를 합성하고, biotin-UTP를 이용하여 in vitro transcription을 실시하여 biotin-labeled cRNA를 제조하였다. 제조된 cRNA는 NanoDrop을 이용하여 정량하였다. 정상 대장 상피세포 및 대장암 세포에서 제조된 cRNA를 Human-6 V2 (Illumina사) 칩에 하이브리드화 하였다. 하이브리드화 후 비특이적 하이브리드화를 제거하기 위하여 Illumina Gene Expression System Wash Buffer (Illumina사)를 이용하여 DNA 칩을 세척하였고 세척된 DNA 칩은 streptavidin-Cy3(Amersham사) 형광 염색약으로 표지하였다. 형광 표지된 DNA 칩은 공촛점(confocal) 레이저 스캐너 (Illumina사)를 이용하여 스캐닝하여 각 스팟에 존재하는 형광의 데이터를 얻어서 TIFF 형태의 이미지 파일로 저장하였다. TIFF 이미지 파일을 BeadStudio version 3(Illumina사)으로 정량하여 각 스팟의 형광값을 정량하였다. 정량된 결과는 Avadis Prophetic version 3.3(Strand Genomics사) 프로그램으로 ‘quantile’ 기능을 이용하여 보정하였다.First, total RNA was extracted from normal colon epithelial cells and colon cancer cells. Total RNA was extracted using the RNeasy Mini Kit (QIAGEN), and quantified using an Experion RNA StdSens (Bio-Rad) chip. For hybridization, the extracted total RNA was used as an Illumina TotalPrep RNA Amplification Kit (Ambion). CDNA was synthesized using T7 Oligo (dT) primer, and in vitro transcription was performed using biotin-UTP to prepare biotin-labeled cRNA. The prepared cRNA was quantified using NanoDrop. The cRNA prepared from normal colon epithelial cells and colon cancer cells was hybridized to a Human-6 V2 (Illumina) chip. After hybridization, in order to remove non-specific hybridization, the DNA chip was washed using Illumina Gene Expression System Wash Buffer (Illumina), and the washed DNA chip was labeled with streptavidin-Cy3 (Amersham) fluorescent dye. The fluorescence-labeled DNA chip was scanned using a confocal laser scanner (Illumina) to obtain fluorescence data present in each spot, and stored as a TIFF image file. The TIFF image file was quantified with BeadStudio version 3 (Illumina) to quantify the fluorescence value of each spot. The quantified result was corrected using the'quantile' function with the Avadis Prophetic version 3.3 (Strand Genomics) program.

상기의 과정으로 얻어진 1,601개의 유전자 발현 정도 분석을 통하여 정상 대장 상피세포와 대장암 세포의 유전자 발현 양상을 비교 분석하였다. 이 때 군집화 분석(hierarchical clustering analysis)를 이용하였으며, 그 결과, 정상 대장 상피세포와 대장암 세포는 크게 두 개의 군집으로 나누어지는 것을 알 수 있었다(도 1).Through the analysis of the expression level of 1,601 genes obtained by the above process, the gene expression patterns of normal colon epithelial cells and colon cancer cells were compared and analyzed. At this time, a hierarchical clustering analysis was used, and as a result, it was found that normal colon epithelial cells and colon cancer cells are largely divided into two clusters (FIG. 1).

또한, 정상 및 대장 상피세포와 비교하여 60% 이상의 환자에서 2배 이상의 발현차이를 나타내는 유전자들을 발견할 수 있었는데(표 4), 이중 과발현과 저발현이 각각 281 개 및 605 개였으며, 위암, 유방암, 췌장암에서도 동일한 유전자들의 발현을 비교한 결과(도7) 대장암에서만 특이적으로 발현되는 유전자들을 최종 선발할 수 있었다(도 3~6 및 도 8~11).In addition, compared to normal and colonic epithelial cells, genes showing a difference in expression of more than twofold in more than 60% of patients were found (Table 4), of which 281 and 605 overexpression and underexpression were respectively, gastric cancer and breast cancer. , As a result of comparing the expression of the same genes in pancreatic cancer (Fig. 7), genes that are specifically expressed only in colon cancer were finally selected (Figs. 3 to 6 and Figs. 8 to 11).

대장암에서 과발현된 유전자들Genes overexpressed in colorectal cancer GeneGene symbolsymbol UnigeneUnigene ClusterCluster Log2(Log2( FCFC )) P P valuevalue MMP7MMP7 HsHs .2256.2256 9.2689.268 7.74E-087.74E-08 CST1CST1 HsHs .123114.123114 7.6867.686 6.19E-046.19E-04 CDH3CDH3 HsHs .461074.461074 5.8745.874 0.0250.025 CLDN1CLDN1 HsHs .439060.439060 5.7485.748 2.29E-052.29E-05 ESM1ESM1 HsHs .129944.129944 5.7015.701 0.0220.022 DPEP1DPEP1 HsHs .109.109 5.3795.379 0.0020.002 CLDN2CLDN2 HsHs .522746.522746 5.2625.262 2.14E-062.14E-06 HS6ST2HS6ST2 HsHs .385956.385956 4.2014.201 1.47E-061.47E-06 ABHD7ABHD7 HsHs .201555.201555 3.7433.743 4.05E-084.05E-08 SLC35D3SLC35D3 HsHs .369703.369703 3.6923.692 0.0040.004 CXCL1CXCL1 HsHs .789.789 3.6243.624 3.84E-093.84E-09 CDCA1CDCA1 -- 1.761.76 5.37e-065.37e-06 CA9CA9 HsHs .63287.63287 3.473.47 0.0010.001 VSNL1VSNL1 HsHs .444212.444212 3.1593.159 3.28E-043.28E-04 MMP1MMP1 HsHs .83169.83169 3.1163.116 0.0320.032 ANLNANLN HsHs .62180.62180 3.0913.091 0.0210.021 LCN2LCN2 HsHs .204238.204238 3.0593.059 0.0010.001 TPX2TPX2 HsHs .244580.244580 3.0293.029 0.0350.035 EGFL6EGFL6 HsHs .12844.12844 2.9742.974 0.0090.009 LGR5LGR5 HsHs .658889.658889 2.8992.899 6.75E-076.75E-07 KLK6KLK6 HsHs .79361.79361 2.8422.842 1.68E-051.68E-05 COMPCOMP HsHs .1584.1584 2.8182.818 2.98E-062.98E-06 NLF1NLF1 HsHs .202656.202656 2.7992.799 3.92E-063.92E-06 MAD2L1MAD2L1 HsHs .591697.591697 2.7872.787 0.0020.002 PROX1PROX1 HsHs .585369.585369 2.7312.731 1.46E-091.46E-09 CKS2CKS2 HsHs .83758.83758 2.5222.522 0.0010.001 MELKMELK HsHs .184339.184339 2.5172.517 0.0030.003 HCAPHCAP -G-G -- 2.5092.509 0.0450.045 OLR1OLR1 HsHs .412484.412484 2.5032.503 0.0020.002 ATAD2ATAD2 HsHs .370834.370834 2.4672.467 0.0050.005 PROSAPIP1PROSAPIP1 HsHs .90232.90232 2.352.35 1.53E-071.53E-07 SOX9SOX9 HsHs .694731.694731 2.3182.318 8.75E-088.75E-08 MMP12MMP12 HsHs .1695.1695 2.3062.306 0.0220.022 CCNB1CCNB1 HsHs .23960.23960 2.2932.293 0.0460.046 KRT23KRT23 HsHs .9029.9029 2.2412.241 1.14E-041.14E-04 ASB9ASB9 HsHs .19404.19404 2.2092.209 2.44E-052.44E-05 CHEK1CHEK1 HsHs .24529.24529 2.2012.201 2.94E-092.94E-09 CSE1LCSE1L HsHs .90073.90073 2.1852.185 6.10E-066.10E-06 SLC7A11SLC7A11 HsHs .390594.390594 2.1052.105 3.05E-053.05E-05 ENC1ENC1 HsHs .104925.104925 2.0592.059 0.0040.004 PLAUPLAU HsHs .77274.77274 2.0012.001 0.0030.003 HIG2HIG2 HsHs .433213.433213 1.9951.995 2.96E-042.96E-04 RNF183RNF183 HsHs .211374.211374 1.971.97 7.35E-077.35E-07 RAD51AP1RAD51AP1 HsHs .591046.591046 1.9321.932 0.0210.021 RRM2RRM2 HsHs .226390.226390 1.8181.818 0.0440.044 UBE2SUBE2S -- 1.8181.818 3.66E-093.66E-09 PCSK9PCSK9 HsHs .18844.18844 1.771.77 9.31E-079.31E-07 C6ORF173C6ORF173 HsHs .486401.486401 1.7341.734 5.45E-095.45E-09 SLC12A2SLC12A2 -- 1.7281.728 0.0030.003 TSTA3TSTA3 HsHs .404119.404119 1.7161.716 0.0060.006 TGFBITGFBI HsHs .369397.369397 1.7111.711 1.02E-041.02E-04 PRDX4PRDX4 HsHs .83383.83383 1.2811.281 0.0380.038

실시예Example 2. 조직 및 세포에서의 2. In tissues and cells mRNAmRNA 분리 Separation

역전사 중합효소 반응을 위하여 20명의 대장암 환자로부터 대장 정상 상피세포 조직과 대장암 세포조직을 적출하여 총 40개의 조직에서 mRNA를 분리하였다. 우선, 외과적 절제술로 적출된 조직들은 적출 즉시 멸균된 인산완충 식염수에서 혈액을 제거한후, 액화질소로 동결하였다. 이후, 구아니디움 법(Guanidinium Method)에 의하여 총 RNA를 분리, 싱글-스탭 RNA 분리(Single-Step RNA Isolation)를 수행하였다. 상기와 같이 분리한 총 RNA는 스팩트로포토메터를 사용하여 정량한 후, 사용전까지 -70℃ 냉동고에 보관하였다.For reverse transcription polymerase reaction, normal colonic epithelial tissue and colon cancer tissue were extracted from 20 colon cancer patients, and mRNA was isolated from a total of 40 tissues. First, tissues removed by surgical resection were removed from sterilized phosphate-buffered saline immediately after removal, and then frozen with liquid nitrogen. Thereafter, total RNA was isolated by the Guanidinium Method, and single-step RNA isolation was performed. Total RNA isolated as described above was quantified using a spectrophotometer, and then stored in a -70°C freezer until use.

대장암 세포주들은 총 10개를 선정하여(DLD-1, HT29. HCT116, colo205, SW480, SW620, SNU C1, SNU C2A, KM 12C, KM 12SM), 대한민국 서울시 종로구 연건동 28번지 소재 한국세포주은행(Korean Cell Line Bank, KCLB)에서 분양받았다. 각각의 최적 배양배지인 DMEM(Invitrogen 사) 또는 RPMI1640(Invitrogen 사) 배지에 10%의 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS, Hyclon사) 및 페니실린/스트렙토마이신(1mg/ml Penicillin/ Streptomycin, Sigma사)를 첨가하여 5-6 일간 배양시킨 후, 상기의 조직에서와 동일한 방법으로 구아니디움(Guanidinium Method)에 의해 총 RNA를 분리, 싱글-스탭 RNA 분리를 수행하였다. 분리된 RNA는 상기와 같이 스팩트로포토메터를 사용하여 정량하였고, 사용 전까지 -70℃ 냉동고에서 보관하였다.
A total of 10 colon cancer cell lines were selected (DLD-1, HT29. HCT116, colo205, SW480, SW620, SNU C1, SNU C2A, KM 12C, KM 12SM), and the Korea Cell Line Bank at 28 Yeongeon-dong, Jongno-gu, Seoul, Korea (Korean Cell Line Bank, KCLB). 10% fetal bovine serum (Fetal Bovine Serum, FBS, Hyclon) and penicillin/streptomycin (1mg/ml Penicillin/ Streptomycin, Sigma) in each of the optimal culture media, DMEM (Invitrogen) or RPMI1640 (Invitrogen) medium. ) Was added and cultured for 5-6 days, and then total RNA was isolated by the Guanidinium Method in the same manner as in the above tissues, and single-step RNA separation was performed. The isolated RNA was quantified using a spectrophotometer as described above, and stored in a -70°C freezer until use.

실시예Example 3. 3. 역전사Reverse transcription 중합효소반응을 이용한 유전자 발현 비교 Comparison of gene expression using polymerase reaction

상기 실시예 1의 결과 선발된 대장암 특이 과발현 유전자들 중에서 14 개를 선정하여(데이터 마이닝) 중합효소 반응을 실시하였다.Among the selected colon cancer-specific overexpression genes as a result of Example 1, 14 were selected (data mining) and subjected to a polymerase reaction.

프라이머의 제작을 위하여 각 유전자들의 전체 DNA 염기 서열을 NCBI의 CoreNucleotide(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)에서 얻었으며, Primer3 프로그램을 통하여 이들 유전자들의 프라이머 서열을 디자인 하였다. 상기와 같이 디자인된 프라이머를 이용하여, 중합효소 반응을 실시하여 각각의 유전자들의 발현정도를 확인하였다(도 8~10). 각각의 프라이머 서열은 표 5와 같다.For the preparation of primers, the entire DNA nucleotide sequence of each gene was obtained from NCBI's CoreNucleotide (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/), and primer sequences of these genes were designed through the Primer3 program. Using the primers designed as described above, a polymerase reaction was performed to confirm the expression level of each gene (FIGS. 8-10). Each primer sequence is shown in Table 5.

프라이머 서열Primer sequence 　 OligoOligo namename ProductProduct sizesize SeqencesSeqences 1One CHEK1CHEK1 (L)(L) 301301 bpbp AGCAGC GGTGGT TGGTGG TCATCA AAAAAA GAAGAA TGTG (서열번호 1) (SEQ ID NO: 1) CHEK1CHEK1 (R)(R) 　 ACCACC TTCTTC TGGTGG CTGCTG CTCCTC ACAACA ATAT (서열번호 2) (SEQ ID NO: 2) 22 MAD2L1MAD2L1 (L)(L) 326326 bpbp GTGGTG GTGGTG AGGAGG TCCTCC TGGTGG AAAAAA GAGA (서열번호 3) (SEQ ID NO: 3) MAD2L1MAD2L1 (R)(R) 　 AATAAT TTTTTT GTAGTA GGCGGC CACCAC CATCAT GCGC (서열번호 4) (SEQ ID NO: 4) 33 KRT23KRT23 (L)(L) 309309 bpbp GTCGTC TCGTCG GTAGTA CTCCTC CTGCTG CAACAA GCGC (서열번호 5) (SEQ ID NO: 5) KRT23KRT23 (R)(R) 　 GCGGCG TGCTGC TTTTTT TGGTGG ATTATT TCATCA TTTT (서열번호 6) (SEQ ID NO: 6) 44 PROX1PROX1 (L)(L) 355355 bpbp CAGCAG CCCCCC GAAGAA AAGAAG AACAAC AGAAGA AGAG (서열번호 7) (SEQ ID NO: 7) PROX1PROX1 (R)(R) 　 TCCTCC GGTGGT TGTTGT AAGAAG GAGGAG TTTTTT GGGG (서열번호 8) (SEQ ID NO: 8) 55 SLC7A11SLC7A11 (L)(L) 304304 bpbp GGCGGC AGTAGT GACGAC CTTCTT TTCTTC TGATGA GCGC (서열번호 9) (SEQ ID NO: 9) SLC7A11SLC7A11 (R)(R) 　 AACAAC TGCTGC CAGCAG CCCCCC AATAAT AAAAAA AAAA (서열번호 10) (SEQ ID NO: 10) 66 ASB9ASB9 (L)(L) 303303 bpbp CATCAT CATCAT GGAGGA TGGTGG CAACAA ACAACA AGAG (서열번호 11) (SEQ ID NO: 11) ASB9ASB9 (R)(R) 　 GCTGCT GTCGTC ACAACA CCACCA TTCTTC ACCACC TGTG (서열번호 12) (SEQ ID NO: 12) 77 ENC1ENC1 (L)(L) 302302 bpbp ATGATG CATCAT GTGGTG CAGCAG AGTAGT TCCTCC TGTG (서열번호 13) (SEQ ID NO: 13) ENC1ENC1 (R)(R) 　 CTGCTG CAACAA CAGCAG TTCTTC TGGTGG GAGGAG GTGT (서열번호 14) (SEQ ID NO: 14) 88 PLAUPLAU (L)(L) 301301 bpbp GTGGTG GCCGCC AAAAAA AGAAGA CTCCTC TGATGA GGGG (서열번호 15) (SEQ ID NO: 15) PLAUPLAU (R)(R) 　 TCATCA GCGGCG CTGCTG TAGTAG TCCTCC TTGTTG TGTG (서열번호 16) (SEQ ID NO: 16) 99 RNF183RNF183 (L)(L) 307307 bpbp ACCACC TCATCA GCCGCC TTGTTG TGATGA CTCCTC CACA (서열번호 17) (SEQ ID NO: 17) RNF183RNF183 (R)(R) 　 ATGATG AGGAGG ATGATG GGCGGC GTAGTA GACGAC ACAC (서열번호 18) (SEQ ID NO: 18) 1010 CSE1LCSE1L (L)(L) 300300 bpbp CTGCTG CAGCAG TACTAC CCACCA TGCTGC AAAAAA TGTG (서열번호 19) (SEQ ID NO: 19) CSE1LCSE1L (R)(R) 　 ACAACA AAAAAA CGACGA GGCGGC AGGAGG TATTAT CGCG (서열번호 20) (SEQ ID NO: 20) 1111 ATAD2ATAD2 (L)(L) 302302 bpbp TATTAT GGAGGA TGGTGG ATTATT GGAGGA CAGCAG CACA (서열번호 21) (SEQ ID NO: 21) ATAD2ATAD2 (R)(R) 　 AGAAGA TCTTCT GTGGTG GGTGGT AGCAGC GTCGTC GTGT (서열번호 22) (SEQ ID NO: 22) 1212 RAD51AP1RAD51AP1 (L)(L) 304304 bpbp GGTGGT GGTGGT GTTGTT CAACAA GGGGGG AAAAAA AGAG (서열번호 23) (SEQ ID NO: 23) RAD51AP1RAD51AP1 (R)(R) 　 GAGGAG CAGCAG AGTAGT CCACCA CCGCCG AAGAAG TCTC (서열번호 24) (SEQ ID NO: 24) 1313 C6ORF173C6ORF173 (L)(L) 318318 bpbp TCGTCG GACGAC TGATGA GGTGGT TTTTTT TCTTCT GCGC (서열번호 25) (SEQ ID NO: 25) C6ORF173C6ORF173 (R)(R) 　 GCGGCG TTTTTT GTCGTC CTGCTG GACGAC TCTTCT TCTC (서열번호 26) (SEQ ID NO: 26) 1414 CCNB1CCNB1 (L)(L) 306306 bpbp TACTAC CTACTA TGCTGC TGGTGG TGCTGC CAGCAG TGTG (서열번호 27) (SEQ ID NO: 27) CCNB1CCNB1 (R)(R) 　 TGATGA CTGCTG CTTCTT GCTGCT CTTCTT CCTCCT CACA (서열번호 28) (SEQ ID NO: 28)

역전사 효소반응을 위하여 상기 실시예 2의 조직 및 세포주에서 추출한 mRNA로부터 역전사 반응을 통해 만든 cDNA를 제작하였다. cDNA제작은 AccuAcript High Fielity 1st Stand cDNA Synthesis Kit(STRATAGENE)를 이용하여 수행하였고, 상기의 반응 결과로 얻은 cDNA와 표 5의 프라이머들을 사용하여 역전사효소 반응을 사용하였다. 그 결과 도 8 내지 10과 같이 정상 대장 세포와 대장암 세포 간의 발현의 차이를 확인할 수 있었고, 도 11에서와 같이 대장암 세포주에서의 발현도 확인할 수 있었다.For reverse transcription enzyme reaction, cDNA made through reverse transcription reaction was prepared from mRNA extracted from the tissues and cell lines of Example 2 above. cDNA production was performed using the AccuAcript High Fielity 1st Stand cDNA Synthesis Kit (STRATAGENE), and a reverse transcriptase reaction was used using the cDNA obtained as a result of the above reaction and the primers in Table 5. As a result, it was possible to confirm the difference in expression between normal colon cells and colon cancer cells as shown in FIGS. 8 to 10, and expression in colon cancer cell lines as shown in FIG.

서열목록 전자파일 첨부Attach electronic file of sequence list

Claims (9)

RNF183(ring finger protein 183, NCBI GenBank Acession No. NM_145051) 유전자 mRNA 또는 이의 단백질의 수준을 측정하는 제제를 포함하는 대장암 진단용 조성물.RNF183 (ring finger protein 183, NCBI GenBank Acession No. NM_145051) Genetic composition for diagnosing colorectal cancer comprising an agent for measuring the level of mRNA or a protein thereof. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 CHEK1(CHK1 checkpoint homolog(S. pombe), NCBI GenBank Acession No. NM_001114121), MAD2L1(MAD2 mitotic arrest deficient-like 1(yeast), NCBI GenBank Acession No. NM_002358), KRT23(keratin 23(histone deacetylase inducible), NCBI GenBank Acession No. NM_015515), ASB9(ankyrin repeat and SOCS box-containing 9, NCBI GenBank Acession No. NM_001031739), ENC1(ectodermal-neural cortex(with BTB-like domain), NCBI GenBank Acession No. NM_003633), PLAU(plasminogen activator, urokinase, NCBI GenBank Acession No. NM_001145031), CSEIL(CSE1 chromosome segregation 1-like (yeast), NCBI GenBank Acession No. NM_001316), RAD51AP1(RAD51 associated protein 1, NCBI GenBank Acession No. NM_001130862), C60RF173(chromosome 6 open reading frame 173, NCBI GenBank Acession No. NM_001012507), SLC7A11(solute carrier family 7, (cationic amino acid transporter, y+ system) member 11, GenBank No. NM_014331) 및 CCNB1(cyclin B1, NCBI GenBank Acession No. NM_031966) 중에서 선택되는 1개 이상의 유전자 mRNA 또는 이의 단백질의 수준을 측정하는 제제를 포함하는 대장암 진단용 조성물.According to claim 1, wherein the composition is CHEK1 (CHK1 checkpoint homolog (S. pombe), NCBI GenBank Acession No. NM_001114121), MAD2L1 (MAD2 mitotic arrest deficient-like 1 (yeast), NCBI GenBank Acession No. NM_002358), KRT23 (keratin 23 (histone deacetylase inducible), NCBI GenBank Acession No. NM_015515), ASB9 (ankyrin repeat and SOCS box-containing 9, NCBI GenBank Acession No. NM_001031739), ENC1 (ectodermal-neural cortex (with BTB-like domain), NCBI GenBank Acession No.NM_003633), PLAU (plasminogen activator, urokinase, NCBI GenBank Acession No. NM_001145031), CSEIL (CSE1 chromosome segregation 1-like (yeast), NCBI GenBank Acession No. NM_001316), RAD51AP protein1 (RAD51AP1 protein1) NCBI GenBank Acession No. NM_001130862), C60RF173 (chromosome 6 open reading frame 173, NCBI GenBank Acession No. NM_001012507), SLC7A11 (solute carrier family 7, (cationic amino acid transporter, y + system) member 11, GenBank No. NM_014331) and Choose from CCNB1 (cyclin B1, NCBI GenBank Acession No. NM_031966) The colon cancer diagnostic composition containing an agent for measuring the level of one or more gene mRNA or a protein. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 유전자 mRNA의 수준을 측정하는 제제는 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머를 포함하는 것인 대장암 진단용 조성물.According to claim 1 or claim 2, wherein the agent for measuring the level of the gene mRNA composition for diagnosing colorectal cancer comprising a primer that specifically binds to the gene. 제3항에 있어서, 상기 유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머 중 SLC7A11에 대한 프라이머는 서열번호 9 및 10인 프라이머 쌍, RNF183에 대한 프라이머는 서열번호 17 및 18인 프라이머 쌍, CHEK1에 대한 프라이머는 서열번호 1 및 2인 프라이머 쌍, MAD2L1에 대한 프라이머는 서열번호 3 및 4인 프라이머 쌍, KRT23에 대한 프라이머는 서열번호 5 및 6인 프라이머 쌍, ASB9에 대한 프라이머는 서열번호 11 및 12인 프라이머 쌍, ENC1에 대한 프라이머는 서열번호 13 및 14인 프라이머 쌍, PLAU에 대한 프라이머는 서열번호 15 및 16인 프라이머 쌍, CSEIL에 대한 프라이머는 서열번호 19 및 20인 프라이머 쌍, RAD51AP1에 대한 프라이머는 서열번호 23 및 24인 프라이머 쌍, C60RF173에 대한 프라이머는 서열번호 25 및 26인 프라이머 쌍, 및 CCNB1에 대한 프라이머는 서열번호 27 및 28인 프라이머 쌍인 대장암 진단용 조성물.According to claim 3, Among the primers specifically binding to the gene primers for SLC7A11 is a primer pair of SEQ ID NO: 9 and 10, primers for RNF183 is a primer pair of SEQ ID NO: 17 and 18, primers for CHEK1 is a sequence Primer pairs 1 and 2, primers for MAD2L1 are primer pairs SEQ ID NO: 3 and 4, primers for KRT23 are primer pairs SEQ ID NO: 5 and 6, primers for ASB9 are primer pairs SEQ ID NOs: 11 and 12, Primer for ENC1 is a pair of primers SEQ ID NO: 13 and 14, primer pair for SEQA is SEQ ID NO: 15 and 16, primer pair for CSEIL is pair of primers SEQ ID NO: 19 and 20, primer for RAD51AP1 is SEQ ID NO: 23 And a primer pair of 24, a primer pair for C60RF173 for SEQ ID NOs: 25 and 26, and a primer for CCNB1 for primers SEQ ID NOs: 27 and 28 A diagnostic composition for colon cancer. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 단백질의 수준을 측정하는 제제는 상기 단백질에 특이적인 항체를 포함하는 것인 대장암 진단용 조성물.The composition for diagnosing colorectal cancer according to claim 1 or 2, wherein the agent for measuring the level of the protein comprises an antibody specific for the protein. 제1항 또는 제2항의 조성물을 포함하는 대장암 진단용 키트.A kit for diagnosing colorectal cancer, comprising the composition of claim 1. 제6항에 있어서, RT-PCR 키트, DNA 칩 키트 또는 단백질 칩 키트인 것을 특징으로 하는 대장암 진단용 키트.The kit for diagnosing colorectal cancer according to claim 6, which is an RT-PCR kit, a DNA chip kit or a protein chip kit. RNF183(ring finger protein 183, NCBI GenBank Acession No. NM_145051)유전자에 특이적으로 결합하는 프라이머를 사용하여 대장암 의심 환자의 생물학적 시료로부터 mRNA을 측정하는 단계; 및
상기 mRNA 수준의 증가를 정상 대조구 시료의 mRNA 수준과 비교하는 단계를 포함하는 대장암 진단을 위한 정보의 제공 방법.Measuring mRNA from biological samples of suspected colorectal cancer patients using primers that specifically bind to RNF183 (ring finger protein 183, NCBI GenBank Acession No. NM_145051) gene; And
Comparing the increase of the mRNA level with the mRNA level of a normal control sample. 제8항에 있어서, CHEK1, MAD2L1, KRT23, ASB9, ENC1, PLAU, CSEIL, RAD51AP1, C60RF173, SLC7A11 및 CCNB1 중에서 선택되는 1개 이상의 유전자의 mRNA 수준을 추가로 측정 및 비교하는 단계를 포함하는 대장암 진단을 위한 정보의 제공 방법.
The colorectal cancer of claim 8, further comprising measuring and comparing mRNA levels of at least one gene selected from CHEK1, MAD2L1, KRT23, ASB9, ENC1, PLAU, CSEIL, RAD51AP1, C60RF173, SLC7A11, and CCNB1. How to provide information for diagnosis.
KR1020100008812A 2010-01-29 2010-01-29 Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes KR101007575B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020100008812A KR101007575B1 (en) 2010-01-29 2010-01-29 Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020100008812A KR101007575B1 (en) 2010-01-29 2010-01-29 Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020070131457A Division KR101029881B1 (en) 2007-12-14 2007-12-14 Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20100018026A KR20100018026A (en) 2010-02-16
KR101007575B1 true KR101007575B1 (en) 2011-01-14

Family

ID=42088902

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020100008812A KR101007575B1 (en) 2010-01-29 2010-01-29 Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101007575B1 (en)

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
J. Clin. Pathol., Vol. 58, No. 5, pp509-514(2005.05) 1부.*

Also Published As

Publication number Publication date
KR20100018026A (en) 2010-02-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7871774B2 (en) Markers for the diagnosis of lung cancer
US20110251097A1 (en) Diagnostic kit of colon cancer using colon cancer related marker and diagnostic method thereof
KR101007567B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
US9102706B2 (en) Newly identified colon cancer marker and diagnostic kit using the same
KR101029881B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
US9075066B2 (en) CST1, DCC1, IFITM1 or MELK as markers for diagnosing stomach cancer
KR101007573B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
KR101007574B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
KR100958086B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
KR100969692B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
KR101007575B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
KR101065027B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
KR101007576B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
KR101060193B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
KR101060192B1 (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
KR20090097138A (en) Colon cancer diagnostic markers using up-regulated genes
KR101007571B1 (en) IFITM1 as a marker for the diagnosis of gastric cancer
KR101007569B1 (en) CST1 as a marker for the diagnosis of gastric cancer
KR101093212B1 (en) CEACAM6 as a marker for the diagnosis of gastric cancer
KR101007572B1 (en) NUSAP1 as a marker for the diagnosis of gastric cancer
KR101007570B1 (en) DCC1 as a marker for the diagnosis of gastric cancer
KR100980004B1 (en) MELK as a marker for the diagnosis of gastric cancer
KR101007568B1 (en) CKS2 as a marker for the diagnosis of gastric cancer
KR100931997B1 (en) ＫＬＫ-5 gene as a hepatocellular carcinoma tumor marker and method for diagnosing hepatocellular carcinoma using the same
WO2009131288A1 (en) Ceacam6 as a marker for the diagnosis of gastric cancer

Legal Events

Date Code Title Description
A107 Divisional application of patent
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20131218

Year of fee payment: 4

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20141231

Year of fee payment: 5

LAPS Lapse due to unpaid annual fee