KR100993562B1 - 락토바실러스 균주 - Google Patents

Abstract

본 발명은 단독으로 또는 복합하여 선생물제로 사용될 수 있거나 예비생물제와 함께 합성생물제로 사용될 수 있는 신규한 락토바실러스 균주들인, 락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01(DSM 14869), 락토바실러스 람노서스 균주 Lbp PB01(DSM 14870), 락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02(DSM 15525), 락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02(DSM 15524), 락토바실러스 균주 Lbxx EB03(DSM 15527), 락토바실러스 균주 Lbxx PB03(DSM 15526) 및 본질적으로 동일한 성질을 갖는 락토바실러스 균주들을 제공한다. 본 발명은 또한 질 감염증, 비뇨생식기 감염증 및 위장 질환의 예방 또는 치료를 위한 균주의 용도는 물론, 균주를 단독으로 또는 복합하여 포함하는 약학 조성물, 낙농 제품, 기능성 식품, 뉴트라슈티컬 및 개인 건강관리용 제품을 제공한다.

Description

락토바실러스 균주{LACTOBACILLUS STRAINS}

본 발명은 단독으로 또는 복합하여 선생물제(probiotic)로 사용될 수 있거나 예비생물제(prebiotic)와 함께 합성생물제(synbiotic)로 사용될 수 있는 신규한 락토바실러스 균주에 관한 것이다. 본 발명은 또한 질 감염증, 비뇨생식기 감염증 및 위장 질환의 예방 또는 치료를 위한 균주의 용도는 물론, 균주를 단독으로 또는 복합하여 포함하는 약학 조성물, 낙농 제품, 기능성 식품, 뉴트라슈티컬(nutraceutical) 및 개인 건강관리용 제품에 관한 것이다.

발명의 배경

선생물제는 환자의 미생물 균형을 개선하고, 특히, 위장관 및 질의 상황을 개선하기 위해 투여되는 살아있는 미생물 또는 미생물 혼합물이다. 락토바실러스 균주는 비뇨관 감염증의 치료는 물론, 질 감염증의 치료, 설사의 예방에 사용되어 왔다(Am. J. Health Syst. Pharm. 2001, 58(12): p 1101-1109).

정상 질내 미생물총은 병원체의 성장 조절을 돕는 물질을 생산하는 락토바실러스 종이 우위를 차지한다. 질세균증(BV)은 락토바실러스 종의 감소 및 혐기성 및 미코플라즈마 박테리아의 성장 증가에 의해 특징지워지는 임상 질병이다. 질세균증은 골반 감염성 질환 및 조기 분만의 발병과 연관되어 있다. 일부 연구들은 질세균증을 갖는 환자들이 인간 면역결핍 바이러스(HIV)의 감염을 포함한 성병(STD)에 걸릴 위험이 높을 수 있음을 제안하였다(Curr Infect Dis Rep 2001 Apr; 3(2) 152-155; J Infect Dis 2002 Jan 1; 185(1): 69-73).

선생물적 락토바실러스를 투여함으로써, 질세균증의 재발성 에피소드를 갖는 여성의 질내 미생물총을 재생하는 것이 가능하다. 질세균증은 가장 일반적인 부인과 문제 중 하나이다. 또한, 캔디다 알비칸스(Candida albicans)에 의해 초래되는 질 감염증도 가장 일반적인 여성 부인과 문제이다.

락토바실러스의 존재는 장내 미생물 생태계의 유지에 있어 중요하다. 락토바실러스가 리스테리아 모노시토제네스(Listeria monocytogenes), 대장균(Escherichia coli), 살모넬라(Salmonella)종 등과 같은 병원성 박테리아의 성장에 대해 저해 활성을 가짐이 밝혀졌다. 이 저해는 유기산, 과산화수소, 박테리오신 또는 루테린과 같은 저해 화합물의 생산에 의한 것이거나 상피에 대한 경쟁적 부착에 의한 것이다(App. Environ. Microbiol., 1999, 65(11) p 4949-4956).

락토바실러스는 또한 비뇨관 감염증의 치료제로서 연구되어 왔다(Am. J. Health Syst. Pharm. 2001, 58(12): p 1101-1109). 예컨대, 락토바실러스의 안착 및 고유 미생물의 자극은 비뇨관 감염증의 재발을 예방하기 위해 사용되어 왔다(Microecol. Ther.: 32-45). 비뇨생식기 및 장 감염증을 예방하는 데 있어 락토바실러스의 역할 또한 연구되어 왔다(Intl. Dairy J 1998. 8 : 555-562).

관련 기술의 상세한 설명

선생물제로서의 락토바실러스의 중요성은 문헌에 서술되어 있다.

Jacobsen et al, Applied and Environmental Microbiology,(1999) 65, 4949-4956은 47 균주의 락토바실러스 종의 선생물적 활성을 시험관내 기술로 스크리닝하고, 선택된 5 균주의 군집화 활성을 인간에서 평가하였다. 이 균주들에 대해 pH 2.5 및 0.3% 옥스갈에 대한 내성, Caco-2 세포에 대한 부착성 및 장 병원성 박테리아에 대한 항미생물 활성을 시험하였다. 20개의 현미경 영역에서 부착된 락토바실러스의 평균 갯수는 예컨대, 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) LGG의 경우에는 630±275개, 락토바실러스 람노서스 19070-2의 경우에는 713±188개이었다.

US 5,032,399는 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus acidophilus) 균주의 치료적 이점을 공개하며, 특히, 박테리아를 인간 소장 점막 세포와 5분 동안 항온 배양한 후, 적어도 평균 50개의 박테리아가 하나의 인간 소장 점막 세포에 부착하는 것이 발견됨을 특징으로 하는 균주에 대한 것이다. 이 균주는 또한 젖산 생산 및 내구 성장(hardy growth)에 의해서도 특징지워진다.

WO 99/45099는 신규한 균주인 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum) LB 931에 대해 공개한다. 이 균주는 비뇨생식기 감염증을 예방 또는 치료하는 데 사용될 수 있다. 이 균주는 다른 박테리아 균주들의 성장을 저해 또는 예방함은 물론, 질 상피 세포에 잘 부착할 수 있다.

US 5,645,830은 락토바실러스, 탈지유, 락토바실러스 성장 인자(LGF) 및 락토바실러스 조성물 및 비뇨생식기 감염증 예방을 위한 이 조성물의 사용법에 관한 것이다. 더욱 상세하게, 이 발명은 친유성 또는 친수성 락토바실러스 균주가 생체 적합 물질, 장, 질 및 비뇨상피 세포에 부착하는 능력, 일부 항미생물제의 작용을 저해하는 능력, 및 비뇨생식기 미생물총의 우위를 차지하는 능력에 관한 것이다. 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei) 변종 람노서스 GR-1의 경우에는 적어도 평균 64개의 박테리아가 하나의 비뇨상피 세포에 부착하는 반면, 락토바실러스 페르멘텀(Lactobacillus fermentum) B-54의 경우에는 적어도 평균 39개의 박테리아가 하나의 비뇨상피 세포에 부착한다.

US 6,093,394(WO 98/46261)는 질 표본에서 분리한 신규한 균주, 예컨대, 락토바실러스 크리스파터스(Lactobacillus crispatus) CTV-05를 공개한다. 이 균주는 질 상피 세포에 부착하는 능력 및 과산화수소를 생산하는 능력의 증가로 특징지워 진다. 락토바실러스 크리스파터스 CTV-05는 50% 이상의% 질상피 세포(VEC) 부착 값을 가짐이 밝혀졌다. "% VEC 부착 값"은 확인된 그룹내 전체 VEC 수에서 적어도 하나의 락토바실러스 세포에 부착한% VEC로 정의된다. 이들 균주의 재군집화 능력은 이 문서에 공개된 신규함 보존 매트릭스에 기인하는 것으로 보인다.

EP 0956858은 단독으로 또는 복합된 다른 락토바실러스 균주의 용도를 공개한다. 이 균주는 HeLa 세포에 부착하는 능력 및 과산화수소를 생산하는 능력에 기초하여 선택되었다.

WO 97/29762는 유효한 양의 적어도 하나의 에리카세애(Ericaceae)족 식물 종 또는 이의 추출물, 및 락토바실러스, 비피도박테리엄(Bifidobacterium) 및 이들의 혼합물로 구성된 군에서 선택된 적어도 하나의 마이크로캡슐화 박테리아 종의 배양물을 포함하는 조성물을 공개한다. 이 조성물은 비뇨생식기 및 장 장애의 예방 및/ 또는 치료에 유용하다.

Ocana 등, Biocell(2001) 25(3), 265-273에서는, 락토바실러스의 질 상피 세포(VEC)에 부착하는 능력이 연구되었다. 락토바실러스 크리스파터스 CRL 1266, 락토바실러스 살리바리어스(Lactobacillus salivarius) 아종 살리바리어스 CRL 1328, 락토바실러스 아시도필러스 CRL 1259, 및 락토바실러스 아시도필러스 CRL 1294를 인간 질 표본에서 분리하였다.

McLean, N. W. 등, J. Med. Microbiol., 2000, 49(6) pp 543-552에서는, 다른 락토바실러스의 질 상피 세포(VEC)에 부착하는 능력을 조사함으로써, 선생물제로서 이들의 잠재적 용도를 확인하기 위해 특정화되었다. 이 락토바실러스는 인간 질 표본에서 분리하였다.

당업계에 공지된 락토바실러스 약학 조성물은 생체내, 즉, 포유동물 미생물 생태계 내에서의 재군집화에 충분히 효율적이지 않으므로, 약학 조성물, 뉴트라슈티컬, 낙농 제품, 기능성 식품 또는 흡수성 제품의 형태로 락토바실러스 투여시 재군집화하는 고유의 능력을 갖는 락토바실러스를 찾을 필요가 있다. 인간원에서 분리된 락토바실러스는 인간 미생물 생태계에서 생존하는 이들 고유의 능력 때문에 투여시 생체내에서 최상의 재군집화 능력을 가질 것이다. 투여시 강화된 재군집화 능력을 갖는 락토바실러스 균주를 확인하는 것은 종종 성가신 일이므로, 이들의 생체내 재군집화 능력을 예측하는 최상의 시험 시스템을 선택하는 것이 중요하다.

락토바실러스가 질 상피 세포(VEC), 배양된 Caco-2 세포 또는 기타 세포주에 부착하는 능력은 중요한 인자임이 밝혀졌으며, 이는 선생물적 균주의 재군집화 능 력 및 병원성 박테리아의 군집화를 방해하는 장벽 형성에 관여하는 능력을 평가하는 수단을 제공한다.

문헌에서는 보고된 시험관내 선생물적 균주의 부착성에 큰 편차가 있는 것으로 여겨진다. 정말로 이 편차는 균주들 간의 생물학적 차이를 반영하기도 하지만, 또한 실험 조건에도 확실히 의존한다. 더욱이, 부착성 측정 방법에 따라서도 편차가 있는 것으로 여겨진다. US 6,093,394에서는 락토바실러스의 부착성을% 질 상피 세포(VEC) 부착 값을 계산하여 결정하였다. "% VEC 부착 값"은 확인된 그룹내 전체 VEC 수에서 적어도 하나의 락토바실러스 세포에 부착한% VEC로 정의된다. 시험관내 부착성의 다른 측정법은 염색된 제제내 상피 세포의 예측된 수에 대한 부착된 미생물 세포의 평균 수를 계수하는 것이다. 본 발명자에 따르면, 첫번째 방법이 후자의 방법보다 생체내 부착성을 더욱 근접하게 반영하므로 더 좋다. 시험관내 실험은 단지 예컨대, 질의 상피 세포에 대한 부착성에 의해 생체내 군집화 능력을 평가하는 수단으로 제공될 뿐이라고 반박할 수 있다. 따라서, 부착성을 계산하는 수단은 가장 중요한 인자가 아니며, 잠재적인 선생물적 균주들을 점막 막에 부착한다고 알려진 잘 특징화된 선생물적 박테리아 균주와 비교하는 것이 더 중요하다. US 5,032,399는 적어도 평균 50개의 박테리아가 하나의 인간 소장 점막 세포에 부착할 수 있는 것으로 특징지워지는 락토바실러스 균주를 공개하고 있으나, 락토바실러스 균주를 잘 특징지워진 선생물적 박테리아와 비교하지 않았다. 락토바실러스 카세이 GG는 효율적인 선생물적 균주 탐색시 비교를 위해 사용되는 시판중인, 잘 특징지워진 선생물적 균주의 예이다.

박락된 질 상피 세포(VEC), 배양된 Caco-2 세포 또는 기타 유형의 세포주에 대한 락토바실러스의 부착성 연구에 덧붙여, 질세균증, 액체 배양에서 락토바실러스의 성장 후 산의 생산, 및 과산화수소(H₂0₂)의 생산에 포함되는 박테리아 종, 예컨대, 혐기성 및 미코프라즈마 박테리아에 대한 락토바실러스의 시험관내 활성을 특징화하는 것 또한 중요하다. 생체내 과산화수소가 비-과산화수소 생산 박테리아 및 미코프라즈마 박테리아를 제거하는 데 도움을 주기 때문에, 과산화수소 생산의 측정은 중요하다.

요약하면, 선생물적 능력을 갖는 락토바실러스 균주들은 질 상피 세포(VEC), 및 세포주 Caco-2 세포와 같은 기타 적절한 세포에 부착할 수 있어야 한다. 더욱이, 선생물적 능력을 갖는 락토바실러스 균주들은 또한 기타 박테리아 종에 대해 시험관내 저해 활성을 보이며, 액체 배양시 성장 후 산을 생산하고, 및/또는 과산화수소를 생산하는 것이 바람직하다.

발명의 개요

본 발명의 목적은 상기 논의된 바람직한 성질들을 갖는 적절한 선생물적 락토바실러스 균주들의 약학 제제 또는 흡수성 제품을 제공하는 것이다. 더욱 상세하게, 본 발명은 락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01(EB01), 락토바실러스 람노서스 균주 Lbp PB01(PB01), 락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02(EB02), 락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02(PB02), 락토바실러스 균주 Lbxx EB03(EB03), 락토바실러스 균주 Lbxx PB03(PB03), 및 동일한 유리한 성질, 예컨대, 점막 막에 부착하여 군집화하는 능력을 본질적으로 갖는 균주들에 관한 것이므로, 질 감염증, 비뇨관 감염증 및 위장 질환의 치료 또는 예방에 적합하다.

본 발명의 다른 목적은 점액질 부착성 부형제를 사용함으로써, 점막 막에 부착하여 군집화하는 능력이 강화된 약학 제제를 제공하는 것이다.

본 발명의 추가 목적은 캔디다 알비칸스 및 그람 음성 병원성 박테리아의 성장을 억제하는 능력이 증가된 질 제제를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 하나 이상의 선생물적 락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01, 락토바실러스 람노서스 균주 Lbp PB01, 락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02, 락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02, 락토바실러스 균주 Lbxx EB03, 락토바실러스 균주 Lbxx PB03 또는 점막 막을 군집화하는 능력을 갖는 본질적으로 동일한 성질을 갖는 균주들을 포함하는 낙농 제품, 뉴트라슈티컬 제품 및 기능성 식품을 제공함으로써, 질 감염증, 비뇨관 감염증 및 위장 질환의 치료 또는 예방에 응용하는 것이다.

정의

"부형제"는 최종 제제의 일부를 형성하기 위해 첨가되는 비활성 성분을 의미한다.

"선생물제"는 장관, 비뇨관 또는 질관에 영향을 주어 환자에게 유리한 효과를 주는 살아있는 미생물 보충제이다.

"예비생물제"는 본원에서 선생물제에 유리한 효과를 가지므로, 선생물제를 섭취한 개별 환자에게 유리한 효과를 주는 기질로 사용된다.

"환자"는 본원에서 박테리아 제제를 예방적으로 사용하는 사람은 물론 미생물 불균형과 관련하여 임상 질병을 겪고 있는 사람을 나타낸다.

합성생물제 제품은 환자에게 유리한 상승 효과를 주는 선생물제 및 예비생물제의 조합을 의미한다.

"내구 성장(hardy growth)"은 박테리아가 뛰어난 성장을 나타냄을 의미한다.

약자 "cfu"는 "콜로니-형성 단위"를 의미한다.

발명의 상세한 설명

인간에서 생체내 미생물 균총을 재생성할 수 있는 선생물적 락토바실러스 균주에 관한 본 발명은 이하 상세한 설명에서 명백할 것이다.

제1 양태에 따라, 본 발명은 락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01, 락토바실러스 람노서스 균주 Lbp PB01, 락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02, 락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02, 락토바실러스 균주 Lbxx EB03 및 락토바실러스 균주 Lbxx PB03 및 본질적으로 동일한 성질을 갖는 선생물적 락토바실러스 균주들을 포함한다.

락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01 및 락토바실러스 람노서스 균주 Lbp PB01의 특정 예들은 DSMZ(Deutsche Sammlung Von Mikroorganismen und Zellkulturen Gmbh, Mascheroder Weg 1b, D-38124 Braunschweig, 독일)에 기탁하였으며, 이하 수탁 번호를 받았다: 락토바실러스 가세리 Lba EB01; DSM 14869 및 락토바실러스 람노서스 Lbp PB01; DSM 14870. 락토바실러스 가세리 균주 EB01 및 락토바실러스 람노서스 균주 PB01의 기탁일은 2002년 3월 18일이었다.

락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02, 락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02, 락토바실러스 균주 Lbxx EB03 및 락토바실러스 균주 Lbxx P803의 특정 예들은 DSMZ(Deutsche Sammlung Von Mikroorganismen und Zellkulturen Gmbh, MascheroderWeg 1b, D-C 38124, 독일)에 기탁하였다. 락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02, 락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02, 락토바실러스 균주 Lbxx EB03 및 락토바실러스 균주 Lbxx P803의 기탁일은 2003년 3월 20일이었다. 이 균주들은 이하 수탁 번호를 받았다:

락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02, DSM 15525

락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02, DSM 15524

락토바실러스 균주 Lbxx EB03, DSM 15527

락토바실러스 균주 Lbxx PB03, DSM 15526

상기 락토바실러스 균주들은 이하의 성질들을 가진다;

락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01

첨가된 이 박테리아의 적어도 20%가 1시간 배양 기간 동안 배양된 Caco-2 세포에 부착한다.

질 상피 세포(VEC)에 대한 부착성은 세포당 적어도 15 박테리아이다.

이 균주는 과산화수소를 생산한다.

이 균주는 시험관내 젖산을 생산하며, 시험관내 내구 성장을 보인다.

이 균주는 담즙 안정성을 보인다.

이 균주는 산 안정성을 보인다.

이 균주는 박테리오신의 형태로 천연 항생 물질을 생산한다.

락토바실러스 람노서스 균주 Lbp PB01

첨가된 이 박테리아의 적어도 30%가 1시간 배양 기간 동안 배양된 Caco-2 세포에 부착한다.

질 상피 세포(VEC)에 대한 부착성은 세포당 적어도 20 박테리아이다.

이 균주는 시험관내 젖산을 생산하며, 시험관내 내구 성장을 보인다.

이 균주는 담즙 안정성을 보인다.

이 균주는 산 안정성을 보인다.

이 균주는 박테리오신의 형태로 천연 항생 물질을 생산한다.

이 균주는 가드네렐라(Gardnerella)에 대한 강한 저해 활성을 나타낸다.

락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02

이 박테리아는 1시간 배양 기간 동안 배양된 Caco-2 세포에 부착한다.

이 박테리아는 질 상피 세포(VEC)에 부착한다.

이 균주는 과산화수소를 생산한다.

이 균주는 시험관내 젖산을 생산하며, 시험관내 내구 성장을 보인다.

이 균주는 담즙 안정성을 보인다.

이 균주는 산 안정성을 보인다.

이 균주는 박테리오신의 형태로 천연 항생 물질을 생산한다.

락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02

이 박테리아는 1시간 배양 기간 동안 배양된 Caco-2 세포에 부착한다.

이 박테리아는 질 상피 세포(VEC)에 부착한다.

이 균주는 과산화수소를 생산한다.

이 균주는 시험관내 젖산을 생산하며, 시험관내 내구 성장을 보인다.

이 균주는 담즙 안정성을 보인다.

이 균주는 산 안정성을 보인다.

이 균주는 박테리오신의 형태로 천연 항생 물질을 생산한다.

락토바실러스 균주 Lbxx EB03

첨가된 이 박테리아의 적어도 12%가 1시간 배양 기간 동안 배양된 Caco-2 세포에 부착한다.

이 박테리아는 질 상피 세포(VEC)에 부착한다.

이 균주는 시험관내 젖산을 생산하며, 시험관내 내구 성장을 보인다.

이 균주는 담즙 안정성을 보인다.

이 균주는 산 안정성을 보인다.

이 균주는 박테리오신의 형태로 천연 항생 물질을 생산한다.

락토바실러스 균주 Lbxx PB03

첨가된 이 박테리아의 적어도 11%가 1시간 배양 기간 동안 배양된 Caco-2 세포에 부착한다.

이 박테리아는 질 상피 세포(VEC)에 부착한다.

이 균주는 시험관내 젖산을 생산하며, 시험관내 내구 성장을 보인다.

이 균주는 담즙 안정성을 보인다.

이 균주는 산 안정성을 보인다.

이 균주는 박테리오신의 형태로 천연 항생 물질을 생산한다.

"본질적으로 동일한 성질을 갖는 선생물적 락토바실러스 균주"는 상기 나열된 바와 같이 동일한 부착성을 갖는 균주를 의미하며, 락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01, 락토바실러스 람노서스 Lbp 균주 PB01, 락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02, 락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02, 락토바실러스 균주 Lbxx EB03 및 락토바실러스 균주 Lbxx PB03이 있으며, 락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01, 락토바실러스 람노서스 Lbp 균주 PB01, 락토바실러스 균주 Lbxx EB03 및 락토바실러스 균주 Lbxx PB03이 바람직하며, 락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01 및 락토바실러스 람노서스 Lbp 균주 PB01이 더욱 바람직하다.

본원에 공개된 균주들의 속 및 종을 결정하기 위해서, 리보프린터 미생물 분석 시스템(Riboprinter^ⓒ Microbial Characterization system)을 사용하였다. 균주의 양 및 조성은 Gaschomatografi로 동정 및 결정하였다. 더욱이, 균주의 API 동정 또한 수행하였다.

분리된 균주들의 부착성을 잘 특징지워진 선생물적 균주 락토바실러스 카세이 GG와 비교하였다. 첨가된 락토바실러스 람노서스 PB01 균주 박테리아의 거의 30%가 1시간 배양 기간 동안 배양된 Caco-2 세포에 부착되었으며, 이는 20%의 락토바실러스 가세리 균주 EB01 및 약 10%의 락토바실러스 GG가 부착되는 것과 비교된다. 락토바실러스 람노서스 균주 PB01은 1시간 배양 후 세포당 약 20 박테리아로 VEC에 가장 강하게 부착한다. 락토바실러스 GG는 부착된 박테리아 수가 가장 낮았으며, 반면 균주 EB01은 중간 값을 가졌다. 이들 3가지 박테리아 균주의 배양된 Caco-2 세포에 대한 부착은 VEC에 대한 부착과 잘 상응된다.

락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02 및 락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02는 1시간 배양 기간 동안 배양된 Caco-2 세포에 부착됨이 밝혀졌다. 첨가된 락토바실러스 균주 Lbxx EB03의 적어도 12%가 1시간의 배양 기간 동안 배양된 Caco-2 세포에 부착하는 반면, 첨가된 락토바실러스 균주 Lbxx EB03의 적어도 11%가 1시간의 배양 기간 동안 배양된 Caco-2 세포에 부착하였다.

따라서, 모든 균주들은 Caco-2 세포에 부착할 수 있다. 균주 EB03 및 PB03은 락토바실러스 카세이 GG보다 더 뛰어난 부착성을 가졌다.

상기 균주들이 산 및 담즙에 대한 안정성은 물론 시험관내 젖산 생산 및 시험관내 내구 성장을 나타냄을 밝혔으며, 양쪽 균주 모두 천연 항생 물질인 박테리오신을 생산할 수 있었다.

균주 EB02 및 PB02는 H₂0₂ 및 젖산을 생산하는 매우 강한 능력을 보였다.

락토바실러스 람노서스, 균주 PB01은 BV-연관된 박테리아 종 가드네렐라 바지날리스(Gardnerella vaginalis)에 대한 강한 저해 활성을 나타내었다. 균주 EB01은 H₂0₂를 생산한다. 이들 2가지 균주의 조합은 이들의 보충적 효과로 인해 질 선생물적 제품에 매우 적합하다. 이는 양쪽 분리체 모두 액체 배지에서 성장 후 높은 산성 환경을 생산하며, VEC 및 배양된 Caco-2 세포에 강하게 부착한다는 발견에 의해 추가 지지된다. 이 결과는 또한 락토바실러스 람노서스, 균주 Lbp PB01 또는 균주 EB01 단독으로, 락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02, 락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02, 락토바실러스 균주 Lbxx EB03 및 락토바실러스 균주 Lbxx PB03와 복합하거나 함께 기타 투여 경로에 적합함을 나타낸다.

제2 양태에 따라, 본 발명의 락토바실러스 균주는 질 감염증, 비뇨생식기 감염증 또는 위장 감염증의 예방 또는 치료의 의학 용도에 적합하다.

바람직한 구체예에서, 질 감염증 치료에 있어 선생물적 락토바실러스 균주의 치료 효과는 리보프린터 미생물 분석 시스템을 사용하여 질내 미생물총을 결정함으로써 평가된다. 리보프린터 미생물 분석 시스템은 미생물의 속과 종을 결정하는 데 사용된다. 환자는 리보프린터 미생물 분석 시스템을 사용하여 질내 미생물총이 정상으로 결정될 때 치료된 것으로 평가된다.

다른 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따라 사용된 하나 이상의 선생물적 락토바실러스 균주를 약학적으로 허용되는 담체 및/또는 희석제와 함께 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 박테리아 균주는 선생물적 균주의 용이한 투여를 위해 본 기술 분야의 당업자에게 공지된 수단에 의해 약학 제제로 제제화된다.

바람직하게, 본 발명에 따른 약학 조성물에 사용된 선생물적 박테리아는 그람당 10⁵ 내지 10¹³ cfu 락토바실러스의 박테리아 농도로 사용되며, 그람당 10⁶ 내지 10¹² cfu 락토바실러스로 사용되는 것이 더욱 바람직하고, 이 때, 약어 "cfu"는 "콜로니-형성 단위"를 의미한다. 이는 균주 하나 또는 이들의 복합체일 수 있다.

바람직하게, 본 발명에 따라 사용된 선생물적 박테리아는 직접 사용되거나, 또는 더욱 바람직하게는 동결건조된 형태로 사용된다.

실제 사용을 위해, 본 발명의 약학 조성물을 본 기술 분야의 당업자에게 공지된 부형제 및 제제화 기술을 사용하여, 현탁액, 스프레이, 젤, 크림, 분말, 캡슐, 세척용 용액, 배주(ovule), 질 삽입제, 정제 또는 마이크로캡슐화 제품의 형태로 제조하였다.

약학 제제의 점막 막에 대한 부착 능력을 증가시키기 위해, 점액질 부착성 부형제를 약학 제제의 약 10% 까지 포함하도록 첨가할 수 있다. 바람직한 점액질 부착성 부형제는 히드로콜로이드이며, 히드로콜로이드가 잔탄 검, 로커스트 콩 검 알지네이트를 포함한 군에서 선택되는 것이 더욱 바람직하며, 히드로콜로이드가 잔탄 검인 것이 가장 바람직하다.

캔디다 알비칸스는 락티톨을 발효할 수 없으며, 이는 또한 대장균이나 기타 그람 음성 박테리아의 경우에도 마찬가지이다. 따라서, 캔디다 알비칸스나 병원성 박테리아에 의해 발효되지 않는 예비생물제 기질이 캔디다 알비칸스의 성장을 억제하기 위해 본 발명에 따라 사용된 선생물적 락토바실러스 균주를 포함하는 질 제제에 사용된다. 예비생물제 기질은 올리고당인 것이 바람직하며, 상기 기질이 락티톨, 올리고프럭토즈 또는 락툴로즈인 것이 더욱 바람직하며, 락티톨인 것이 가장 바람직하다.

본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 하나 이상의 선생물적 락토바실러스 균주를 포함하는 흡수성 제품이 제공된다. 박테리아 균주는 흡수성 제품의 사용시 선생물적 균주의 편리한 투여를 위해 흡수성 제품에 포함된다.

실제 사용을 위해, 본 발명의 흡수성 제품은 하나 이상의 락토바실러스 균주를 포함하는 여성 위생용 기저귀, 생리용 냅킨, 함침 탐폰, 팬티 가드 또는 요실금 가드이다. 바람직하게, 흡수성 제품에 사용된 선생물적 박테리아는 10⁵ 내지 10¹³ cfu 락토바실러스의 박테리아 농도로 사용되며, 10⁶ 내지 10¹² cfu 락토바실러스로 사용되는 것이 더욱 바람직하다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 하나 이상의 선생물적 락토바실러스 균주를 포함하는 낙농 제품이 제공되며, 상기 박테리아 균주는 위장 질환의 예방 치료를 위한 선생물적 균주의 경구 투여를 위해 낙농 제품에 포함된다. 낙농 제품의 비제한적인 예들에는 새로운 선생물적 균주와 함께 특히 적합한 부드러운 요구르트(발효유), 응고 유유 및 전유가 있다.

본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 하나 이상의 선생물적 락토바실러스 균주를 포함하는 뉴트라슈티컬 제품이 제공되며, 박테리아 균주는 위장 질환의 치료 또는 예방을 위한 선생물적 균주의 경구 투여를 위해 뉴트라슈티컬 제품에 포함된다. 뉴트라슈티컬 제품의 비제한적인 예들에는 규정식에 첨가되는 제품 및 건강에 긍정적인 영향을 주는 제품이 있다.

본 발명의 또 다른 바람직한 구체예에서, 하나 이상의 선생물적 락토바실러스 균주를 포함하는 기능성 식품이 제공되며, 박테리아 균주는 위장 질환의 예방 치료를 위한 선생물적 균주의 경구 투여를 위해 기능성 식품에 포함된다. 기능성 식품의 비제한적인 예들에는 식품에 도포를 용이하게 하기 위해 동결 건조된 제품 및 마이크로캡슐화 제품이 있다.

본 발명의 바람직한 추가적 구체예에서, 락토바실러스 균주는 질 감염증, 위장 질환 또는 비뇨관 감염증의 예방 및/또는 치료를 위한 약학 조성물을 제조하는 데 사용된다.

본 발명의 바람직한 또 다른 추가적 구체예에서, 락토바실러스 균주는 질 감염증, 위장 질환 또는 비뇨관 감염증의 예방 및/또는 치료를 위한 여성 위생용 기저귀, 생리용 냅킨, 팬티 가드 또는 요실금 가드와 같은 흡수성 제품을 제조하는 데 사용된다.

본 발명의 다른 바람직한 구체예에서, 락토바실러스 균주는 위장 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 낙농 제품을 제조하는 데 사용된다.

본 발명의 또 다른 바람직한 구체예에서, 락토바실러스 균주는 위장 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 기능성 식품을 제조하는 데 사용된다.

본 발명의 바람직한 추가적 구체예에서, 락토바실러스 균주는 위장 질환의 예방을 위한 뉴트라슈티컬을 제조하는 데 사용된다.

이들 상이한 제품들의 치료 계획은 본 기술 분야 당업자에게 공지된 문제의 제품 및 환자에 의존할 것이다. 질 캡슐에 대한 치료 계획의 비제한적인 예는 하나 의 질캡슐을 하루에 2번 7일 동안 치료하는 것이다.

초기에 박테리아에게 최적의 성장 조건을 부여하여 박테리아가 생체내에서 부착하여 재집단화되도록 하기 위해, 기질, 즉, 박테리아용 특정 영양 성장 배지를 제제에 포함시키는 것이 중요하다. 기질은 기능적 예비생물제로 제공될 것이며, 이는 선생물제와 함께 환자에게 상승적인 유리한 효과를 주는데, 즉, 예비생물제와 선생물제는 공생제(symbiotic)로 작용한다. 락토즈는 이러한 기질의 한 예이나, 락토즈는 또한 병원체인 캔디다 알비칸스와 그람 음성 병원성 박테리아의 기질로도 작용한다. 따라서, 캔디다 알비칸스의 기질이 아닌 기질을 갖는 박테리아 제제를 제공해야 할 것이다. 그러므로, 본 발명의 제3 양태에서, 질에서 군집화 능력을 갖으며 박테리아 균주 및 캔디다 알비칸스에 의해 발효되지 않는 기질을 포함하는 질 제제가 제공된다. 상기 기질은 올리고당인 것이 바람직하며, 락티톨, 올리고프럭토즈 및/또는 락툴로즈인 것이 더욱 바람직하며, 락티톨인 것이 가장 바람직하다.

락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01 및 락토바실러스 람노서스 균주 Lbp PB01의 HEp-2 세포주 및 WEHI 세포주에 대한 시험관내 부착성에 대한 락티톨의 영향을 연구하였다. 락티톨이 상기 세포들에 부착하는 박테리아 균주의 총체적인 능력에 영향을 주지 않음이 밝혀졌으며, 따라서 생체내 부착성에도 영향을 주지 않을 것이다.

본 발명의 바람직한 구체예에서, 캔디다 알비칸스나 그람 음성 병원성 박테리아에 의해 발효되지 않거나 쉽게 발효되지 않는 기질은 캔디다 알비칸스의 성장을 억제하기 위해 박테리아를 포함하는 질 제제의 제조에 사용되며, 상기 기질은 올리고당인 것이 바람직하며, 락티톨, 올리고프럭토즈 및/또는 락툴로즈인 것이 더욱 바람직하며, 락티톨인 것이 가장 바람직하다.

본 발명의 바람직한 또 다른 구체예에서, 예컨대 캡슐 형태인 박테리아 균주는 생체내 적절한 포유동물 미생물 생태계를 얻기 위한 의학 장치로 사용된다.

도 1. 락토바실러스 가세리 균주 EB01, 락토바실러스 람노서스 균주 PB01 및 락토바실러스 카세이 GG의 배양된 Caco-2 세포에 대한 부착성. 결합된 박테리아의 수를 계산하고 평균% 부착성±SD로 나타내었다.

도 2. 락토바실러스 가세리 균주 EB01, 락토바실러스 람노서스 균주 PB01 및 락토바실러스 카세이 GG의 분리된 질 상피 세포(VEC)에 대한 부착성. 결합된 박테리아의 수를 계산하고 VEC 세포당 결합된 박테리아의 수±SD로 나타내었다.

도 3. VEC 및 Caco-2 세포에 대한 부착성 간의 상관관계. 이 도는 도 1 및 도 2의 데이타에 기초한다.

실시예 1

박테리아 균주의 분리

락토바실러스 가세리 Lba EB01 및 락토바실러스 람노서스 Lbp PB01의 유형인 2가지의 락토바실러스 균주들을 건강한 인간 기증자에게서 얻은 질 상피 세포에서 분리하여, DSMZ에 기탁하였다. 락토바실러스 가세리 Lba EB01은 DSM 14869의 수탁 번호를 얻었으며, 락토바실러스 람노서스 Lbp PB01는 DSM 14870의 수탁 번호를 얻었다. 기탁일은 2002년 3월 18일이었다.

락토바실러스 아시도필러스 균주 Lba EB02, 락토바실러스 플란타럼 균주 Lbpl PB02, 락토바실러스 균주 Lbxx EB03 및 락토바실러스 균주 Lbxx PB03의 유형인 4가지의 락토바실러스 균주들은 건강한 인간 기증자에게서 얻은 질 상피 세포에서 분리하여, DSMZ에 기탁하였다. 기탁일은 2003년 3월 20일이었다.

상업적 선생물제인 락토바실러스 카세이 GG는 발리오(Valio, 필란드)에서 구매하였다. 이들 균주들은 만, 로고자 및 샤르페 브로쓰(Man, Rogosa & Sharpe broth, Merck)에서 37℃에서 혐기적으로 배양하였다.

방사 표지를 위해, 40 ㎕의 ³H-아데닌을 20 ml의 브로쓰에 첨가하고, 16-18시간 동안 배양하였으며, 과다한 방사 표지를 세척으로 제거하고 박테리아를 2번 원심분리 하였다. VEC-분석에 사용된 박테리아는 방사 표지되지 않았을 뿐, 다른 것들은 상기 서술한 바와 같이 처리하였다. 박테리아 배양액의 600 nm에서의 최적 밀도는 다른 경우와 마찬가지로 박테리아 농도를 조절하는 데 사용하였다.

실시예 2

선생물적 균주들의 VEC에 대한 부착성

이 시험에 의해, 선생물적 락토바실러스 균주들의 VEC에 대한 부착성을 조사하였다.

부인과 조사시, VEC를 멸균 인산 완충액 살린(PBS) pH 7.2에 회수하였다. 약 20시간 후, 젠타미신과 태아 소 혈청을 세포에 첨가하였다. 최종 농도는 100 ㎍/ml 젠타미신 및 2% 혈청이었다. 그 후, 상기 세포를 추가 24 시간 동안 4℃에 저장하였다. 부착성 분석 이전, 상기 세포를 2% 혈청이 첨가된 PBS-완충액을 사용하여 2번 세척하였다.

세척된 선생물적 균주를 10 mM 락테이트 및 150 mM NaCl pH 4.5 완충액에 첨가하고, 최적 밀도를 1.00±0.03으로 조정하였다. 박테리아 현탁액을 VEC-현탁액과 1:1로 혼합하고, 2시간 동안 37℃에서 항온 처리하였다. 항온 처리 후, 세포를 2% 태아 소 혈청이 첨가된 PBS-완충액을 사용하여 4번 세척하였다. 최종 원심분리 후, 세포 펠렛을 몇 ㎕의 완충액에 현탁하고, 현미경 슬라이드로 옮겼다. 그 후, 세포를 90℃에서 건조하였다. 건조된 스팟을 메탄올로 고정하고, 0.1% 크리스탈 바이올렛으로 염색하였다. 염색된 표본을 오일 이머젼으로 광현미경을 사용하여 100 x에서 관찰하였다. 박테리아의 수는 30-70 무작위적으로 선택된 세포/기증자로 계수되었다.

도 2에 나타낸 결과는 3가지 균주들의 VEC에 대한 부착성을 보여준다. 값은 5명의 기증자의 평균±SD이다. 균주 PB01은 1 시간 배양 후 세포당 거의 20 박테리아로 가장 강력하게 부착하였다. 락토바실러스 GG는 부착된 박테리아 수가 가장 적었으며, 균주 EB01은 중간 값을 가졌다.

실시예 3

선생물적 균주들의 Caco-2 세포 배양물에 대한 부착성

이 시험에 의해, 선생물적 락토바실러스 균주들의 Caco-2에 대한 부착성을 조사하였다.

Caco-2 세포주(CRL-2102, ATCC, USA)는 4.5 g/L 글루코즈, 1.5 g/L 중탄산 나트륨, 1.0 mM 소디엄 피루베이트(Sigma-Aldrich), 10% 태아 소 혈청(FBS)(Merck) 및 1% 페니실린/스트렙토마이신(Merck)을 함유하도록 조정된, 4 mM L-글루타민이 첨가된 둘베코스 변형 이글스 배지(Dulbecco's modified Eagle's medium, Sigma-Aldrich)에서, 37℃, 5% CO₂/95% 공기 대기에서 배양하였다. 부착성 분석을 위해, Caco-2 세포를 1.5x10⁵ 농도로 96-웰 마이크로타이터 플레이트에 접종하였다. 세포 배양은 사용 전 2주 동안 유지하였다. 세포 배양 배지는 2일 마다 교환하고, 부착성 분석 2시간 전에 교환하였다.

박테리아 균주들의 Caco-2 세포 배양물에 대한 부착성은 200 ㎕의 방사 표지된 박테리아 현탁액을 웰에 첨가하여 시험하였다. 박테리아의 첨가 전, 웰은 0.5% FBS, 1% L-글루타민 및 0.1% 비필수 아미노산이 첨가된 MEM-이글(MEM-Eagle, Sigma-Aldrich)로 2번 세척하였다. 1시간 동안 항온 처리 후, 세포 배양물을 250 ㎕의 완충된 살린 용액으로 멀티와시 플러스 AR(Multiwash Plus AR, Labsystems)에서 4번 세척하고, 박테리아를 융해하기 위해 0.01 M NaOH 내 2% SDS 150 ㎕로 20분 동안 처리하여, 액체 섬광 계수로 측정하였다. 부착성 비(%)는 최초 박테리아 현탁액의 방사활성과 비교하여 계산하였다.

도 1에 나타낸 결과는 3가지 선생물적 균주들의 Caco-2 세포에 대한 부착성을 보여준다. 첨가된 락토바실러스 람노서스 Lbp PB01 균주 박테리아의 거의 30%가 1시간의 배양 기간 동안 배양된 세포에 부착하였으며, 이는 락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01의 약 20% 및 락토바실러스 GG의 약 10%와 비교된다.

실시예 4

배양된 Caco-2 세포와 VEC에 대한 부착성간의 상관관계

도 3에 나타낸 바와 같이, 배양된 Caco-2 세포와 VEC에 대한 부착성 간에는 좋은 상관관계가 있다.

실시예 5

질 캡슐 조성

성분: mg/캡슐:

락티톨 328.00

글루코즈 20.00

잔탄 검 25.00

락토바실러스 가세리 Lba EB01 12.50

락토바실러스 람노서스 Lbp PB01 12.50

마그네슘 스테아레이트 2.00

동결 건조된 젖산 배양물은 사용시까지 외부 오염에 노출하지 않는다. 무수 글루코즈, 무수 락티톨 및 잔탄 검으로 구성된 영양 성장 배지가 젖산 박테리아에게 최적임을 밝혔다. 마그네슘 스테아레이트는 캡슐로 충진시 분말 흐름을 가능케하는 친유성 항-부착 윤활제이다.

모든 부형제는 프레위트(Frewitt) 체를 사용하여 체를 치고, 쿠버스(Cubus) 혼합기를 사용하여 혼합하였다. 그 후, 균일한 분말을 캡슐에 충진하였다.

모든 과정들은 일반적 약학 관례에 따라 수행하였다.

원재료 배양물, 부형제 및 최종 제품은 확인, 정제, 오염 및 분석을 위한 허가된 분석 방법을 사용하여 완전히 조절된다.

실시예 6

추어블 정제 조성

성분: mg/정제:

락티톨 330.50

자일리톨 90.00

만다린 아로마 3.50

젖산 9.00

이중 코팅된 락토바실러스 Lbp 람노서스 6.25

이중 코팅된 락토바실러스 Lba 아시도필러스 6.25

마그네슘 스테아레이트 4.50

동결 건조된 젖산 배양물은 사용시까지 외부 오염에 노출하지 않는다. 영양 성장 배지, 락티톨이 젖산 박테리아에게 최적임을 밝혔다.

마그네슘 스테아레이트는 정제 압축 동안 분말 흐름을 가능케하는 친유성 항-부착 윤활제이다. 만다린 아로마 분말 및 젖산 분말은 향미를 위해 첨가하였다.

모든 부형제는 프레위트 체를 사용하여 체를 치고, 쿠버스 혼합기를 사용하여 혼합하였다. 그 후, 균일한 분말을 450 mg의 정제 중량으로 정제로 제조하였다.

모든 과정들은 일반적 약학 관례에 따라 수행하였다.

원재료 배양물, 부형제 및 최종 제품은 확인, 정제, 오염 및 분석을 위한 허가된 분석 방법을 사용하여 완전히 조절된다.

실시예 7

낙농 제품 조성

선생물적 락토바실러스 가세리 균주 Lba EB01 및 요구르트 배양물의 제조:

탈지유를 과고온, 거의 98℃에서 적어도 3분 동안 살균하였다. 분말 탈지유나 분말 유청을 건조물%의 증가를 위해 이 과정중에 제공할 수 있다.

그 후, 고온-살균된 탈지유를 최종 지방 3.5-4.0%로, 최종 단백질 3.8-4.0%로 지방 및 단백질을 표준화 하였다.

그 후, 표준화된 우유를 60-70℃의 온도 및 200-220 bar(20-22 Mpa)의 압력에서 균질화 하였다. 그 후, 표준화되고 균질화된 우유를 90-98℃에서 3-5분 동안 살균하였다. 그 후, 상기 우유를 발효기로 펌프하여 발효 과정 동안 35-40℃의 일정한 발효 온도에서 배양하였다.

단독 발효균인 선생물적 락토바실러스 균주 Lba EB01는 물론 요구르트 단독 발효균을 강력하게 교반하면서 직접 우유에 부었다. 발효 배양물의 단독 발효균은 예컨대, 냉동 배양물로 제공되었으며(사용 전 -40℃에 저장된 펠렛), 직접 발효기에 충진하였다.

발효 과정은 pH 값이 4.6-4.4일 때까지 진행한다.

그 후, 요구르트를 교반하고 20-25℃까지 냉각하였다.

그 후, 요구르트를 약 20-24℃까지 냉각하고, 직접 완충액 탱크로 펌프하고, 최종 포장 재료로 충진될 때까지 20℃에서 유지하고(과일 잼의 존재 또는 부존재), 2-5℃에서 냉장 보관하였다.

실시예 8

질 캡슐 파일롯 연구

임상 시험: 환자 만족도의 효과 및 수치

파일롯 연구의 목표:

1. 질세균증(BV)으로 진단된 여성에서 질 캡슐의 임상적 효과를 시험하기 위함.

2. 질 캡슐이 환자-지향적인지 여부를 조사하기 위함.

환자군:

BV로 진단된 21명의 여성.

의사는 이하 기준에 따라 BV를 진단한다:

악취성 질 분비물을 갖는 여성

● 과다한 회색 및 소양증의 분비물

● pH 4.5 이상

● 양성 악취 시험

제형:

실시예 5에 따라 제조된 질 캡슐은 인간 젖산 박테리아(Lba EB01 및 Lbp PB01)를 함유한다.

치료:

진단 이후, 여성들을 1주일간 질 캡슐로 치료하였다. 임상적으로 시험된 여성들은 처리 2-3주 후 "환자" 질문서를 작성하였다.

연구 장소:

본 연구는 드람멘(Drammen, 노르웨이)의 부인과 클리닉에서 수행하였다.

결과:

모든 환자들은 악취성 질 분비물을 겪었으며, 추가적으로, 12명은 과다 분비물을, 5명은 미소한 출혈을 겪고 있었으며, 3명은 소양증을 겪고 있었다. 이 환자들의 2/3는 수년 동안 고생해 왔다. 13명(62%)은 자가-치료를 시도했으며, 이 중 8명은 항진균 카네스텐으로, 3명은 젖산 좌제로, 1명은 항생제 치료를 하였다. 이 환자들 중 12명은 의사와 상담하였으며, 50%는 진균제거제(fungicide), 25%는 항 BV 델라신을 투여 받았고, 반면 25%는 아무런 치료도 받지 않았다.

상기 여성들의 90%(21명 중 19명)는 치료동안 증상이 사라졌으며, 이들 대부분은 몇일만에 증상이 사라졌음을 발견하였다:

2일 이내: 6명의 여성

5일 이내: 9명의 여성

8일 이내: 4명의 여성

1명의 여성은 질 캡슐이 적용되기 곤란하였으나, 20명의 여성은 매우 용이함이 밝혀졌다. 1명(치료가 효과적이지 않음이 밝혀진 2명 중 1명)을 제외한 모든 여 성들은 재발하는 경우 질 캡슐의 사용을 다시 원하였다. 부작용은 보고되지 않았다.

결론:

본 발명에 따라 박테리아 균주를 함유한 질 캡슐은 BV와 연관된 증상을 겪고 있는 여성들에게 긍정적인 임상 효과를 주는 듯 하며, 10명 중 9명이 치료되었다. 환자들 대부분은 자가 치료를 시도하였고, 의사와 상담하였다. 그들의 대부분은 고통을 완화하기 위해 진균 제거제를 시도하였다.

질 캡슐은 매우 사용자-친화적이라고 여겨진다.

실시예 9

본 발명에 따른 예비생물제 제제에서 락티톨의 여성 생체내 효과를 시험하기 위해, 상이한 질 제제들을 제조하였다.

질 캡슐 조성(락티톨 함유)

성분: mg/캡슐:

락티톨 328.0

글루코즈 20.0

잔탄 검 25.0

락토바실러스 가세리 Lba EB01 12.5

락토바실러스 람노서스 Lbp PB01 12.5

마그네슘 스테아레이트 2.0

질 캡슐 조성(락토즈 함유)

성분: mg/캡슐:

락토즈 328.0

글루코즈 20.0

잔탄 검 25.0

락토바실러스 가세리 Lba EB01 12.5

락토바실러스 람노서스 Lbp PB01 12.5

마그네슘 스테아레이트 2.0

질 캡슐 조성(박테리아 균주 비함유)

성분: mg/캡슐:

락티톨 353.0

글루코즈 20.0

잔탄 검 25.0

마그네슘 스테아레이트 2.0

박테리아 균주 및 락티톨을 함유하는 질 캡슐이 부인과 문제를 갖는 여성의 치료에 바람직한 제형이다.

실시예 10

락토바실러스 가세리 Lba EB01(=1702 BBB 락토바실러스 가세리) 및 락토바실러스 람노서스 Lbp PB01(=1704 BBB 락토바실러스 람노서스)의 리보프린트

실시예 11

락토바실러스 가세리 Lba EB01 및 락토바실러스 람노서스 Lbp PB01의 지방산 조성

참조 데이타베이스		참조 데이타베이스		시험		시험
락토바실러스 아시도필러스		락토바실러스 파라카세이		락토바실러스 가세리 Lba EB01		락토바실러스 람노서스 Lbp PB01
지방산	%	지방산	%	지방산	%	지방산	%
14:0	4.09	14:0	5.25	14:0	9.79	14:0	6.22
16:0	7.91	16:0	16.17	16:0	34.64	16:0	37.32
17:1 w8c	1.24	17:1 w8c	0.6	17:1 w8c	0	17:1 w8c	0
18:1 w9c	63.03	18:1 w9c	44.07	18:1 w9c	32.79	18:1 w9c	37.45
18:1 w7c	6.17	18:1 w7c	13.18	18:1 w7c	0	18:1 w7c	5.56
18:0	0.9	18:0	1.05	18:0	8.17	18:0	7.04
특징 3에 요약	5.71	특징 3에 요약	9.47	특징 3에 요약	0	특징 3에 요약	0
특징 5에 요약	2.16	특징 5에 요약	0.56	특징 5에 요약	14.6	특징 5에 요약	6.41
특징 7에 요약	7.09	특징 7에 요약	8.3	특징 7에 요약	0	특징 7에 요약	0
전체%	98.3		98.65		99.99		100

실시예 12

상이한 당들을 발효하는 균주들의 능력을 보여주는 락토바실러스 가세리 Lba EB01 및 락토바실러스 람노서스 Lbp PB01의 API

숫자 1 = 락토바실러스 가세리 Lba EB01(DSM 14869)

숫자 2 = 락토바실러스 람노서스 Lbp PB01(DSM 14870)

총체적인 결론: 숫자 1 = 락토바실러스 가세리 Lba EB01(DSM 14869)

API 50 CHL 결과는 종에 대해 매우 믿을 만한 결과를 보이므로, 이 균주의 속이(락토바실러스 종)임을 확인하였고, 반면 종에 관한 동정은(락토바실러스 아시도필러스) 확실하지 않다.

결과:

API5OCHL	1..:~
글리세롤	음성
에리트리톨	음성
D-아라비노즈	음성
L-아라비노즈	음성
리보즈	음성
D-자일로즈	음성
L-자일로즈	음성
아도니톨	음성
β메틸-D-자일로시드	음성
갈락토즈	양성
글루코즈	양성
프럭토즈	양성
만노즈	음성
소르보즈	음성

API5OCHL	1.
람노즈	음성
두이시톨	음성
이노시톨	음성
만니톨	음성
소르비톨	음성
α메틸-D-만노시드	음성
α메틸-D-글루코시드	음성
N 아세틸 글루코자민	음성
아미그달린	음성
아르부틴	음성
에스쿨린	양성
살리신	음성
셀로비오즈	양성
말토즈	양성
락토즈	음성
멜리비오즈	음성
수크로즈	양성
트레할로즈	음성
이눌린	음성
멜레지토즈	음성
D-라피노즈	음성
스티벨즈	음성
글리코겐	음성
자일리톨	음성
젠티오비오즈	양성
D-투라노즈	음성
D-라소즈	음성
D-타가토즈	음성
D-푸코즈	음성
L-푸코즈	음성
D-아라비톨	음성
L-아라비톨	음성
글루코낫	음성
2-케토-글루코낫	음성
5-케토-글루코낫	음성

결론	ID%	T-값 (균주 타입에 완전히 일치 = 1.00)
락토바실러스 아시도필러스	60,7	0,74
락토바실러스 델브. 델브.	36,5	0,64
락토바실러스 아시도필러스	2,5	0,59

총체적인 결론: 숫자 2 = 락토바실러스 람노서스 Lbp PB01(DSM 14870)

API 50 CHL 결과는 종은 물론 속에 대해 매우 믿을 만한 결과를 보이므로, 이 균주가 락토바실러스 람노서스 아종. 람노서스임을 확신한다.

API5OCHL	2. ~
글리세롤	음성
에리트리톨	음성
D-아라비노즈	음성
L-아라비노즈	음성
리보즈	양성
D-자일로즈	음성
L-자일로즈	음성
아도니톨	음성
β메틸-D-자일로시드	음성
갈락토즈	양성
글루코즈	양성
프럭토즈	양성
만노즈	양성
소르보즈	양성
람노즈	음성
두이시톨	양성
이노시톨	음성
만니톨	양성
소르비톨	양성
α메틸-D-만노시드	음성
α메틸-D-글루코시드	양성
N 아세틸 글루코자민	양성
아미그달린	양성

API5OCHL	2.~
아르부틴	양성
에스쿨린	양성
살리신	양성
셀로비오즈	양성
말토즈	음성
락토즈	양성
멜리비오즈	음성
수크로즈	음성
트레할로즈	양성
이눌린	음성
멜레지토즈	양성
D-라피노즈	음성
스티벨즈	음성
글리코겐	음성
자일리톨	음성
젠티오비오즈	음성
D-투라노즈	음성
D-라소즈	음성
D-타가토즈	양성
D-푸코즈	음성
L-푸코즈	음성
D-아라비톨	음성
L-아라비톨	음성
글루코낫	양성
2-케토-글루코낫	음성
5-케토-글루코낫	음성
결론	(균주 타입에 완전히 일치 = 1.00): 0.52
락토.파라.파라카세이	ID%=97.8

0-1 0-1-1	형식 - PCT/RO/134(EASY) 기탁된 미생물(들) 또는 기타 생물학적 물질에 대한 지시(PCT 규칙 13bis) 사용 준비	PCT-EASY Version 2.92 (2003년 1월 1일 업데이트됨)
0-2	국제 출원 번호
0-3	출원인 또는 대리인의 제출 레퍼런스	P200101852WO

1 1-1 1-2	이하 지시는 명세서에서 언급된 기탁된 미생물(들) 또는 기타 생물학적 물질에 대한 것이다: 페이지 줄	8 19
1-3 1-3-1 1-3-2 1-3-3 1-3-4	기탁 확인 기탁 기관명 기탁 기관의 주소 기탁일 수탁 번호	DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH Mascheroder Weg lb, D-38124 Braunschweig, Germany 2002년 3월 18일 DSMZ 14869
1-4	부수적 지시	없음
1-5	지시된 지정 주	모든 지정 주
1-6	지시의 분리 제공 이 지시는 이후 국제 팜플렛에 제출될 것이다	없음

2 2-1 2-2	이하 지시는 명세서에서 언급된 기탁된 미생물(들) 또는 기타 생물학적 물질에 대한 것이다: 페이지 줄	8 20
2-3 2-3-1 2-3-2 2-3-3 2-3-4	기탁 확인 기탁 기관명 기탁 기관의 주소 기탁일 수탁 번호	DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH Mascheroder Weg lb, D-38124 Braunschweig, Germany 2002년 3월 18일 DSMZ 14870
2-4	부수적 지시	없음
2-5	지시된 지정 주	모든 지정된 주
2-6	지시의 분리 제공 이 지시는 이후 국제 팜플렛에 제출될 것이다	없음

3 3-1 3-2	이하 지시는 명세서에서 언급된 기탁된 미생물(들) 또는 기타 생물학적 물질에 대한 것이다: 페이지 줄	8 23
3-2 3-3-1 3-3-2 3-3-3 3-3-4	기탁 확인 기탁 기관명 기탁 기관의 주소 기탁일 수탁 번호	DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH Mascheroder Weg lb, D-38124 Braunschweig, Germany 2002년 3월 20일 DSMZ 15525
3-4	부수적 지시	없음
3-5	지시된 지정 주	모든 지정된 주
3-6	지시의 분리 제공 이 지시는 이후 국제 팜플렛에 제출될 것이다	기탁의 수탁 번호

4 4-1 4-2	이하 지시는 명세서에서 언급된 기탁된 미생물(들) 또는 기타 생물학적 물질에 대한 것이다: 페이지 줄	8 24
4-3 4-3-1 4-3-2 4-3-3 4-3-4	기탁 확인 기탁 기관명 기탁 기관의 주소 기탁일 수탁 번호	DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH Mascheroder Weg lb, D-38124 Braunschweig, Germany 2002년 3월 20일 DSMZ 15524
4-4	부수적 지시	없음
4-5	지시된 지정 주	모든 지정된 주
4-6	지시의 분리 제공 이 지시는 이후 국제 팜플렛에 제출될 것이다	기탁의 수탁 번호

5 5-1 5-2	이하 지시는 명세서에서 언급된 기탁된 미생물(들) 또는 기타 생물학적 물질에 대한 것이다: 페이지 줄	8 24
5-3 5-3-1 5-3-2 5-3-3 5-3-4	기탁 확인 기탁 기관명 기탁 기관의 주소 기탁일 수탁 번호	DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH Mascheroder Weg lb, D-38124 Braunschweig, Germany 2002년 3월 20일 DSMZ 15527
5-4	부수적 지시	없음
5-5	지시된 지정 주	모든 지정된 주
5-6	지시의 분리 제공 이 지시는 이후 국제 팜플렛에 제출될 것이다	기탁의 수탁 번호

6 6-1 6-2	이하 지시는 명세서에서 언급된 기탁된 미생물(들) 또는 기타 생물학적 물질에 대한 것이다: 페이지 줄	8 25
6-3 6-3-1 6-3-2 6-3-3 6-3-4	기탁 확인 기탁 기관명 기탁 기관의 주소 기탁일 수탁 번호	DSMZ-Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH Mascheroder Weg lb, D-38124 Braunschweig, Germany 2002년 3월 20일 DSMZ 15526
6-4	부수적 지시	없음
6-5	지시된 지정 주	모든 지정된 주
6-6	지시의 분리 제공 이 지시는 이후 국제 팜플렛에 제출될 것이다	기탁의 수탁 번호

수취 사무소용

0-4	이 형식은 국제 출원으로 수취하였다: (예 또는 아니오)
0-4-1	공인 사무관

국제 팜플렛용

0-5	이 형식은 국제 팜플렛으로 수취하였다:
0-5-1	공인 사무관

Claims (42)

1. 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) 균주 Lbp PB01(DSM 14870) 및 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 희석제를 포함하는, 질 감염증 예방 또는 치료용 약학 조성물.
2. 제1항에 있어서, 추가의 락토바실러스(Lactobacillus) 균주를 더 포함하는 것인 약학 조성물.
3. 제2항에 있어서, 상기 추가의 균주가 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri) 균주 Lba EB01(DSM 14869)인 약학 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 약학 조성물 그람(gram) 당 10⁵ 내지 10¹³ cfu의 락토바실러스를 포함하는 약학 조성물.
5. 제4항에 있어서, 약학 조성물 그람 당 10⁶ 내지 10¹² cfu의 락토바실러스를 포함하는 약학 조성물.
6. 제4항에 있어서, 약학 조성물 그람 당 상기 균주들 중 임의의 락토바실러스를 10⁵ cfu 이상 포함하는 약학 조성물.
7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 현탁액, 스프레이, 젤, 크림, 분말, 캡슐, 세척용 용액, 배주(ovule), 질 삽입제, 정제 또는 마이크로캡슐화 제품의 형태인 약학 조성물.
8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 10%까지의 점액질 부착성 부형제를 포함하는 약학 조성물.
9. 제8항에 있어서, 상기 점액질 부착성 부형제가 히드로콜로이드인 약학 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 히드로콜로이드가 잔탄 검, 로커스트 콩 또는 알지네이트를 포함하는 군에서 선택되는 약학 조성물.
11. 제10항에 있어서, 상기 히드로콜로이드가 잔탄 검인 약학 조성물.
12. 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) 균주 Lbp PB01(DSM 14870).
13. 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus) 균주 Lbp PB01(DSM 14870)와 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri) 균주 Lba EB01(DSM 14869)의 혼합물.
14. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 락토바실러스 균주용 기질을 더 포함하고, 질 조성물 형태인 약학 조성물.
15. 제14항에 있어서, 상기 기질은 칸디다 알비칸스(Candida albicans) 또는 그람 음성 병원성 박테리아에 의해 발효되지 않는 것인 약학 조성물.
16. 제15항에 있어서, 상기 기질은 올리고당인 약학 조성물.
17. 제16항에 있어서, 상기 기질은 락티톨, 올리고프럭토즈 및 락툴로즈로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 기질인 약학 조성물.
18. 제17항에 있어서, 상기 기질은 락티톨인 약학 조성물.
19. 제1항 내지 제3항의 약학 조성물을 포함하는 흡수성 제품으로서, 상기 흡수성 제품이 여성 위생용 기저귀, 생리용 냅킨, 함침 탐폰, 팬티 가드 또는 요실금 가드인 흡수성 제품.
20. 제12항에 따른 락토바실러스 균주 또는 제13항에 따른 락토바실러스 균주의 혼합물을 포함하는 낙농 제품.
21. 제12항에 따른 락토바실러스 균주 또는 제13항에 따른 락토바실러스 균주의 혼합물을 포함하는 뉴트라슈티컬(nutraceutical) 제품.
22. 제12항에 따른 락토바실러스 균주 또는 제13항에 따른 락토바실러스 균주의 혼합물을 포함하는 기능성 식품.
23. 삭제
24. 삭제
25. 삭제
26. 삭제
27. 삭제
28. 삭제
29. 삭제
30. 삭제
31. 삭제
32. 삭제
33. 삭제
34. 삭제
35. 삭제
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41. 삭제
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