KR100961688B1

KR100961688B1 - Anti-cancer drug Effective for Multidrug resistant cancer cells

Info

Publication number: KR100961688B1
Application number: KR1020080018323A
Authority: KR
Inventors: 김수남; 이석준; 김용기
Original assignee: 한국과학기술연구원
Priority date: 2008-02-28
Filing date: 2008-02-28
Publication date: 2010-06-09
Also published as: KR20090093026A

Abstract

본 발명은 다중약물내성 암세포에 유용한 항암제에 관한 것으로서, 구체적으로 상기 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린[3-(2-Benzoxazolyl)- 7-(diethylamino)Coumarin]을 유효성분으로 함유하는 기존 항암제에 대해 다중약물내성을 나타내는 암세포에 대한 우수한 사멸효과를 제공하는 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 조성물은 항암제에 내성을 나타내는 다중약물내성(Multidrug resistance, MDR) 세포에서 보이는 항암제내성을 극복할 수 있어서 정상암세포는 물론 MDR을 나타내는 세포에서도 항암효과가 있으므로, 약학적으로 유용한 항암제로 사용될 수 있다.The present invention relates to an anticancer agent useful for multi-drug resistant cancer cells, specifically the 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin [3- (2-Benzoxazolyl) -7- (diethylamino) Coumarin The present invention relates to a composition that provides an excellent killing effect on cancer cells exhibiting multi-drug resistance to existing anticancer drugs containing as an active ingredient. The composition of the present invention can overcome the anticancer drug resistance seen in multidrug resistance (MDR) cells that are resistant to anticancer drugs, and thus has an anticancer effect in normal cancer cells as well as MDR cells, which can be used as a pharmaceutically useful anticancer agent. Can be.

3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린, 다중약물내성 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin, multidrug resistance

Description

다중약물내성 암세포에 유용한 항암제{Anti-cancer drug Effective for Multidrug resistant cancer cells}Anti-cancer drug Effective for Multidrug resistant cancer cells

본 발명은 기존 항암제에 대해 다중약물내성을 나타내는 암세포에 대한 우수한 사멸효과를 제공하는 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition that provides an excellent killing effect on cancer cells exhibiting multi-drug resistance to existing anticancer agents.

항암화학요법(Chemotherapy)은 가장 효과적인 암환자 치료 방법 중의 하나로 잘 알려져 있으나, 항암제의 지속적 투여는 항암화학요법의 실패를 초래하는 원인으로 지적되어 오고 있다. 이는 세포가 항암제에 내성을 획득하게 되기 때문이며, 한 항암제에 내성을 획득하면 구조가 서로 다른 항암제에 대해서도 내성을 획득하는 것으로 알려져 있다. 이와 같이 암세포가 항암제 구조에 상관없이 비 특이적인 내성을 획득하는 것을 "다중약물내성(Multidrug Resistance: MDR)"이라 한다(Gottesman et al., Nat Rev Cancer 2:48-58, 2002; Ambudkar et al., Oncogene 22:7468-85, 2003). 이러한 암세포의 MDR 획득은 항암화학요법 실패의 가장 큰 원인 중 하나로 잘 알려져 있다. 항암제 내성은 크게 2가지로 분류될 수 있는데 하 나는 약물에 세포내로 유입이 되지 못해 생기는 것이고, 또 다른 하나는 암세포 자체가 유전적(genetic) 또는 후생유전적(epigenetic) 변화에 의해 항암제에 대한 감수성이 떨어져 나타날 수 있는 것이다. Chemotherapy is well known as one of the most effective cancer treatment methods, but continuous administration of anticancer drugs has been pointed out as a cause of failure of chemotherapy. This is because cells acquire resistance to anticancer drugs, and if the resistance to one anticancer agent is obtained, resistance to anticancer drugs having different structures is known. As such, cancer cells acquire non-specific resistance regardless of the anticancer structure is referred to as " Multidrug Resistance (MDR) " (Gottesman et al. , Nat Rev Cancer 2: 48-58, 2002; Ambudkar et al. ., Oncogene 22: 7468-85, 2003 ). MDR acquisition of these cancer cells is well known as one of the biggest causes of chemotherapy failure. Anticancer drug resistance can be broadly classified into two types, one of which is caused by the inflow of drugs into cells, and the other is that cancer cells themselves are susceptible to anticancer drugs due to genetic or epigenetic changes. This can appear apart.

암세포가 MDR을 획득하는 기전을 자세하게 살펴보면 크게 5가지 정도로 나눌 수 있다. 첫째, ATP-의존적 수송체와 같은 유출 펌프(efflux pump)를 이용하여 세포내 약물을 세포외로 쉽게 유출시켜 세포내 유효약물 농도보다 낮은 농도로 유지하여 내성을 유발할 수 있다(약물의 세포외 유출 증가). 둘째, 약물수송체 또는 엔도사이토시스를 통한 약물 유입 감소로 인하여 세포내 유효약물농도가 유지되지 못해 내성이 발생할 수 있다(약물의 세포내 유입 감소). 셋째, 세포내로 유입된 약물의 대사를 촉진/불활성화 시켜 약물내성을 유도한다(약물대사효소의 활성화). 넷째, 약물에 의한 DNA 손상을 복구할 수 있는 시스템의 활성화로 약물의 작용을 무력화하여 내성을 발현 시킬 수 있다(DNA 복구 시스템 활성화). 다섯째, 약물에 의해 유도되는 세포사멸(Apoptosis)을 억제할 수 있는 방어 체계(NF-kB 신호전달과정 활성화, 세라마이드 농도 감소 등)의 활성화로 인하여 내성을 유발할 수 있다(세포사멸 회피기전 활성화). Looking at the mechanism by which cancer cells acquire MDR in detail can be divided into five categories. First, efflux pumps, such as ATP-dependent transporters, can be used to easily drain intracellular drugs out of the cell and maintain resistance at concentrations lower than intracellular effective drug concentrations ( increasing extracellular outflow of drugs). ). Second, due to the reduction of drug inflow through the drug transporter or endocytosis, the effective drug concentration in the cell may not be maintained and resistance may occur ( reduction of drug inflow into the cell ). Third, it induces drug resistance by promoting / inactivating metabolism of drugs introduced into cells ( activation of drug metabolism enzymes ). Fourth, by activating a system capable of repairing DNA damage caused by drugs, the drug can be neutralized to express resistance ( activation of DNA repair system ). Fifth, resistance may be induced by activation of a defense system (activation of NF-kB signaling process, reduced ceramide concentration, etc.) that can inhibit drug-induced apoptosis (activation of apoptosis avoidance mechanism ).

이중에서 약물 유출 펌프 과발현에 의한 암세포의 MDR 획득은 효과적인 치료를 위해 항암제를 고용량 투여해야 하는 문제를 발생하게 하고, 또한 기존 항암제의 가장 큰 문제인 골수 독성(bone marrow toxicity)을 야기할 수 있다. 즉 항암화학요법제를 투여할 경우 암세포가 유출 펌프 과발현에 의해 내성을 획득하였을 경우 암세포는 항암제를 효과적으로 세포외로 유출시켜 생존할 수 있으나, 골수에 서는 유출 펌프 발현이 적어 항암제에 감수성이 높아져 세포사멸이 일어나고 골수 독성이 증가될 수 있다. 따라서 내성 발현에서 유출 펌프 과발현에 의한 내성이 가장 심각하고, 항암화학요법을 이용하여 암을 성공적으로 극복하기 위해서는 이를 극복할 수 있는 유출 펌프를 효과적으로 제어할 수 있거나, 유출 펌프에 상관없이 항암효과를 나타낼 수 있는 기술의 개발이 반드시 필요하다고 할 수 있다(Gottesman et al., Nat Rev Cancer 2:48-58, 2002; Friedenberg et al., Cancer 106:830-8, 2006; Seiden et al., Gynecol Oncol 86:302-10, 2002). In particular, MDR acquisition of cancer cells by drug outflow pump overexpression may cause a problem of high doses of anticancer drugs for effective treatment, and may also cause bone marrow toxicity, which is the biggest problem of conventional anticancer drugs. In other words, when the anticancer chemotherapeutic agent is administered and the cancer cells acquire resistance by overexpression of the effusion pump, the cancer cells can effectively survive by effluxing the anticancer agent out of the cell. This can occur and bone marrow toxicity can be increased. Therefore, resistance by effusion pump overexpression is most severe in the expression of resistance, and in order to successfully overcome cancer using chemotherapy, it is possible to effectively control the effusion pump that can overcome it, or to have anticancer effects regardless of the effusion pump. It is imperative that the development of techniques that can be demonstrated (Gottesman et al. , Nat Rev Cancer 2: 48-58, 2002; Friedenberg et al. , Cancer 106: 830-8, 2006; Seiden et al. , Gynecol) Oncol 86: 302-10, 2002).

약물 유출 펌프는 아미노산 염기서열 및 구조적 특징 등을 비교해 보면 ATP-결합 카세트(ATP-binding cassette; ABC) 수송체 패밀리에 속하는 막단백질(membrane protein)이다. 지금까지 사람에서 48개의 ABC 유전자가 확인되었고, 7개의 아형(subfamily; ABCA-ABCG)으로 구분되고 있다. 이중에서 약물수송과 관련된 ABC 수송체는 MDR1, MRP1~7, BSEP/SPGP, MXR/BCRP/ABC-P 등이 있다. 상기 약물수송 ABC 수송체는 약물의 구조와 상관없이 비특이적으로 세포내의 약물을 세포외로 유출시키는 역할을 하며, 이는 MDR 발현에 가장 중요하게 작용하는 것으로 잘 알려져 있다(Endicott et al ., Annu Rev Biochem 58:137-71, 1989; Ambudkar et al., Annu Rev Pharmacol Toxicol 39:361-98, 1999; Gottesman et al., Nat Rev Cancer 2:48-58, 2002).The drug outflow pump is a membrane protein belonging to the ATP-binding cassette (ABC) transporter family by comparing amino acid sequences and structural features. To date, 48 ABC genes have been identified in humans and classified into seven subfamily (ABCA-ABCG). Among these, ABC transporters related to drug transport include MDR1, MRP1-7, BSEP / SPGP, MXR / BCRP / ABC-P. The drug transporter ABC transporter is known to play a role in non-specifically outflow of intracellular drugs regardless of the structure of the drug, which is most important for MDR expression (Endicott et al. al . , Annu Rev Biochem 58: 137-71, 1989; Ambudkar et al. , Annu Rev Pharmacol Toxicol 39: 361-98, 1999; Gottesman et al. , Nat Rev Cancer 2: 48-58, 2002).

약물수송 ABC 수송체 중에서 가장 잘 알려져 있는 것은 ABCB1(또는 MDR1) 유전자의 산물인 P-당단백질(P-gp)이다. P-gp는 170 KDa의 12개의 막통과 도메인(transmembrane domain)과 2개의 ATP 결합 부위를 가지고 있는 막단백질로서 대 부분의 항암제[빈카 알카로이드(vinca alkaloids), 택솔(taxol), 에토포시드(etoposide) 등]를 기질로 하여 세포외로 유출하는 기능을 수행한다. P-gp의 막투과 도메인에 소수성의 약물(중성 또는 양이온성 약물)이 결합하면 두 분자의 ATP가 가수분해하면서 P-gp의 형태적 변화가 유도되어 세포외로 약물이 배출되게 된다(Ambudkar et al., Annu Rev Pharmacol Toxicol 39:361-98, 1999). 따라서 P-gp의 넓은 범위의 기질 특이성(broad substrate specificity)은 약물결합부위인 막투과 도메인의 다양한 약물과 결합할 수 있는 다형성 때문인 것으로 생각되어진다. 이와 더불어, MRP1(multidrug-resistance-associated protein 1; ABCC1)도 MDR 발현에 중요하게 작용한다. MRP1은 주로 중성 또는 음이온성의 소수성약물 및 글루타치온과 결합된 약물과 주로 결합하고 이를 배출하는 기능을 하고 있다(Gottesman et al ., Nat Rev Cancer 2:48-58, 2002).The best known among drug transport ABC transporters is P-glycoprotein (P-gp), a product of the ABCB1 (or MDR1 ) gene. P-gp is a membrane protein with 12 transmembrane domains of 170 KDa and two ATP binding sites. Most anti-cancer drugs (vinca alkaloids, taxol, etoposide) )] As a substrate to carry out the function of outflow. Binding of hydrophobic drugs (neutral or cationic drugs) to the transmembrane domain of P-gp causes hydrolysis of the two molecules of ATP, leading to morphological changes of P-gp resulting in the release of the drug extracellularly (Ambudkar et al. ., Annu Rev Pharmacol Toxicol 39: 361-98, 1999). Therefore, the broad substrate specificity of P-gp is thought to be due to the polymorphism that can bind various drugs of the transmembrane domain, which is a drug binding site. In addition, MRP1 (multidrug-resistance-associated protein 1; ABCC1) also plays an important role in MDR expression. MRP1 mainly functions to bind and release neutral or anionic hydrophobic drugs and drugs combined with glutathione (Gottesman et. al . , Nat Rev Cancer 2: 48-58, 2002).

화학요법제 치료 후에 암세포에서의 P-gp 발현 증가는 크게 두 가지 모델로 설명이 된다. 첫 번째로 모델은 "선택 및 과잉증식 모델(selection and expansion model)"로서 약 20년 전에 제안되었다. 즉, 암이 발생하면서 P-gp를 많이 발현하는 세포와 적게 발현하는 세포가 공존하게 되는데 화학요법제 치료과정에서 P-gp를 적게 발현하는 세포는 죽고, 대신 많이 발현하는 세포가 살아남는 "선택(selection)" 과정을 거치게 되고 이후 P-gp 과발현 세포들이 "과잉증식(expansion)"하여 항암제에 내성을 나타내는 과정으로 설명이 된다(Goldie & Coldman, Cancer Res 44:3643-53, 1984). 두 번째 모델은 화학요법제가 직접 MDR1 유전자를 활성화 시켜 P-gp를 과발현시키고 이를 통해 약물내성이 발현된다는 "활 성화 모델(activation model)"이다(Abolhoda et al., Clin Cancer Res 19995:3352-6, 1999). Increased P-gp expression in cancer cells after chemotherapy treatment is largely explained by two models. First, the model was proposed about 20 years ago as a "selection and expansion model." In other words, as cancer develops, cells expressing P-gp and cells expressing less coexist, while cells expressing less P-gp die during chemotherapy treatment. selection) and then P-gp overexpressing cells "expansion" to explain the anti-cancer resistance (Goldie & Coldman, Cancer Res 44: 3643-53, 1984). The second model is a "activation model" in which chemotherapeutic agents directly activate the MDR1 gene to overexpress P-gp and thereby express drug resistance (Abolhoda et al. , Clin Cancer Res 19995: 3352-6 , 1999).

다중약물내성에 대한 특허를 살펴보면, 이미다졸화합물(대한민국 등록특허 제 0330698호, 0349500호), 크로몬화합물(대한민국 등록특허 제0580743호, 대한민국 공개특허 제2005-0034024호), 퀴놀린화합물(대한민국 등록특허 제0639163호, 대한민국 공개특허 제2006-0093554호), 피페라진-2,5-디온화합물(대한민국 공개특허 제1998-7000978, 제1998-700972호), 한국산 자생식물 중 번행초, 조릿대풀, 석송, 큰개불알풀 및 약모밀에 의한 항암제 감수성 증가(대한민국 공개특허 제2006-0124453호), MDR 억제용 P-당단백질 170에 대한 백신(대한민국 공개특허 제2006-0125676호) 및 MDR생성물에 대한 항체(대한민국 공개특허 제1995-7000938호) 등이 있다.Looking at the patent for multi-drug resistance, imidazole compound (Korean Registered Patent No. 0330698, 0349500), Chromone Compound (Korean Registered Patent No. 0580743, Korean Publication No. 2005-0034024), Quinoline Compound (Republic of Korea) Patent No. 0639163, Republic of Korea Patent Publication No. 2006-0093554), Piperazine-2,5-dione compound (Republic of Korea Patent Publication No. 1998-7000978, No. 1998-700972), Haengchocho, Sri Lanka, Suksong among Korean native plants , Anticancer drug susceptibility increase by large open grass and weak hair wheat (Korea Patent Publication No. 2006-0124453), vaccine against P-glycoprotein 170 for MDR inhibition (Korea Patent Publication No. 2006-0125676) and antibodies to MDR products ( Republic of Korea Patent Publication No. 195-7000938).

이에, 본 연구자들은 항암화학요법의 가장 큰 실패요인인 MDR 현상을 극복하고자 쿠마린(coumarin)을 기본 모핵으로 하여 합성한 화합물인 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린이 다중약물내성 암세포주를 월등히 사멸시키는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. In order to overcome the MDR phenomenon, which is the biggest failure of chemotherapy, the present inventors used 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin, a compound synthesized using coumarin as the base mother nucleus. The present invention has been completed by confirming that the multidrug resistant cancer cell line is significantly killed.

본 발명의 목적은 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린[3-(2-Benzoxazolyl)- 7-(diethylamino)Coumarin] 화합물을 유효성분으로 함유하는 항암 제에 대해 다중약물내성을 나타내는 암세포에 대한 우수한 사멸효과를 제공하는 항암제를 제공하는 것이다.An object of the present invention is to provide an anticancer agent containing 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin [3- (2-Benzoxazolyl) -7- (diethylamino) Coumarin] as an active ingredient. It is to provide an anticancer agent that provides an excellent killing effect on cancer cells exhibiting multi-drug resistance.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린[3-(2-Benzoxazolyl)- 7-(diethylamino)Coumarin] 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항암제에 대한 다중약물내성 억제용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention is a 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin [3- (2-Benzoxazolyl) -7- (diethylamino) Coumarin] compound represented by the formula (1) Or it provides a multi-drug resistance inhibiting composition for an anticancer agent comprising a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 포함하는 항암보조제를 제공한다.In addition, the present invention comprises a 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin compound represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, a pharmaceutically acceptable carrier Provided with an anticancer supplement comprising.

또한, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 다중약물내성을 억제하는 유효농도로 항암제에 대한 다중약물내성을 나타내는 개체에 투여하는 단계를 포함하는 암질환 치료 방법을 제공한다.The present invention also provides an anticancer agent with an effective concentration of inhibiting multi-drug resistance of the 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof. It provides a method for treating cancer diseases comprising the step of administering to a subject exhibiting multi-drug resistance.

아울러, 다중약물내성을 억제하는 유효 농도의 제 6항의 항암보조제 및 하나 이상의 항암제를 항암제에 대한 다중약물내성을 나타내는 개체에 병용 투여하는 단계를 포함하는 암질환 치료 방법을 제공한다.In addition, the present invention provides a method for treating cancer disease, comprising the step of concurrently administering an anticancer adjuvant of claim 6 and at least one anticancer agent to a subject exhibiting multidrug resistance to the anticancer agent.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 화학식 1로 표시되는 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린[3-(2-Benzoxazolyl)- 7-(diethylamino)Coumarin] 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항암제에 대한 다중약물내성 억제용 조성물을 제공한다:The present invention provides 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin [3- (2-Benzoxazolyl) -7- (diethylamino) Coumarin] compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable thereof. Provided is a composition for inhibiting multi-drug resistance against an anticancer agent comprising a salt as an active ingredient:

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본 발명의 유효성분인 상기 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린은 Lee 등이 발표한 논문(Lee S et al ., Bioorg Med Chem Lett 16:4596-4599, 2006)에 근거하여 만들어졌다.The 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin, which is an active ingredient of the present invention, is a paper published by Lee et al. (Lee S et. al . , Bioorg Med Chem Lett 16: 4596-4599, 2006).

상기 화합물은 정상암세포 및 다중약물내성 암세포에서 세포독성을 나타내고, 특히 다중약물내성 암세포에서도 정상암세포와 유사하거나 더 낳은 세포사멸 유도효과를 나타냄으로써 다중약물내성 암세포에 대한 항암 조성물로 사용될 수 있다. 상기 다중약물내성 암세포는 항암제 구조에 상관없이 비 특이적인 내성을 획득한 암세포로, 이때, 상기 암세포는 이에 특별히 제한되는 것은 아니나, 대장암(colon cancer), 방광암(bladder cancer), 난소암(ovarian cancer), 위 암(gastric cancer), 폐암(lung cancer), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer) 및 대장직장암(colorectal cancer)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.The compound exhibits cytotoxicity in normal cancer cells and multi-drug resistant cancer cells, and especially in multi-drug resistant cancer cells, it can be used as an anti-cancer composition against multi-drug resistant cancer cells by exhibiting apoptosis-inducing effect similar to or better than that of normal cancer cells. The multi-drug resistant cancer cells are cancer cells that acquire non-specific resistance regardless of the structure of the anticancer agent, wherein the cancer cells are not particularly limited thereto, such as colon cancer, bladder cancer, and ovarian cancer. cancer, gastric cancer, lung cancer, lung cancer, prostate cancer, pancreatic cancer and colorectal cancer.

본 발명의 실시예에서는 정상암세포 및 다중약물내성 암세포에서의 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린의 세포독성을 비교함으로써 상기 화합물이 IC₅₀ 값이 1 μM 이하로 상당히 낮은 농도에서도 다중약물내성 암세포에 대해 세포사멸효과를 보이는 우수한 항암제로서의 가능성이 있음을 확인하였다(도 1 참조). 또한, 다중약물내성 암세포를 대상으로 상기 화합물을 파클리탁셀과 비교한 결과, 상기 화합물이 훨씬 우수한 세포주기멈춤(Cell cycle arrest) 효과(도 2 및 도 3 참조) 및 세포사멸 유도효과(도 4 및 도 5 참조)를 보여주는 것을 확인하였다. 또한, 파클리탁셀은 다중약물내성 암세포에서 세포사멸 과정에서의 카스파제 활성 측정 마커인 PARP 절단효과(poly ADP ribose polymerase cleavage)가 정상암세포보다 낮았지만, 본 발명의 화합물은 정상암세포 및 다중약물내성 암세포에서 유사하거나 다중약물내성 암세포에서 더 좋은 효과를 나타내어, 약물내성과는 상관없이 항암효과를 나타내거나 다중약물내성 암세포에 대해서 더 우수한 항암효과를 나타내는 것으로 보였다. 아울러, in vitro 및 in vivo에서 미세소관(microtubule) 중합반응에 미치는 영향을 파클리탁셀 또는 빈크리스틴 처리군과 비교한 결과, 다중약물내성 암세포에서 파클리탁셀에 의한 미세소관 생성촉진효과 및 빈크리스틴에 의한 미세소관 생성억제효과가 정상암세포에 비해 모두 감소하였고, 3-(2-벤족사졸릴)-7- (디에틸아미노)쿠마린 처리군에서는 정상암세포에서와 유사한 농도 의존적 미세소관 생성억제효과를 그대로 나타내고 있는 것을 보여주었다.In an embodiment of the present invention, by comparing the cytotoxicity of 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin in normal cancer cells and multi-drug resistant cancer cells, the compound has an IC ₅₀ value of 1 μM or less. It was confirmed that there is a potential as an excellent anticancer agent showing an apoptosis effect against multi-drug resistant cancer cells even at a considerably low concentration (see FIG. 1). In addition, as a result of comparing the compound with paclitaxel in multi-drug resistant cancer cells, the compound has a much better cell cycle arrest effect (see FIGS. 2 and 3) and induces apoptosis (FIGS. 4 and FIG. 5). In addition, paclitaxel had a lower PARP cleavage effect (poly ADP ribose polymerase cleavage), a marker for measuring caspase activity during apoptosis in multi-drug resistant cancer cells, but the compound of the present invention was similar in normal and multi-drug resistant cancer cells. It has been shown to have a better effect on multidrug-resistant cancer cells, and to have an anti-cancer effect regardless of drug resistance or to show a better anti-cancer effect on multi-drug resistant cancer cells. In addition, in vitro And the microtubule generation suppressing effect of the microtubules (microtubule) microtubule generation accelerating effect and vincristine by the effect of the polymerization reaction to paclitaxel in the results, the multi-drug resistant cancer cells, as compared to paclitaxel or vincristine-treated group in vivo, Compared to normal cancer cells, all decreased, and the 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin treated group showed the same concentration-dependent microtubule production inhibitory effect as that of normal cancer cells.

상기 화학식 1로 표시되는 본 발명의 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1- 설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.The compound of the present invention represented by Formula 1 may be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and acid salts formed by pharmaceutically acceptable free acid are useful as salts. Acid addition salts include those derived from inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid or phosphorous acid, and aliphatic mono- and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, hydroxyalkanoates, Dioleate, aromatic acid, aliphatic and aromatic sulfonic acids. Such pharmaceutically nontoxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogen phosphate, dihydrogen phosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, and iodide. Id, fluoride, acetate, propionate, decanoate, caprylate, acrylate, formate, isobutyrate, caprate, heptanoate, propiolate, oxalate, malonate, succinate, suverate , Sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitro benzoate, hydroxybenzoate, meth Oxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzenesulfonate, toluenesulfonate, chlorobenzenesul Nate, xylenesulfonate, phenylacetate, phenylpropionate, phenylbutyrate, citrate, lactate, β-hydroxybutyrate, glycolate, malate, tartrate, methanesulfonate, propanesulfonate, naphthalene-1- Sulfonates, naphthalene-2-sulfonates or mandelate.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 화학식 1의 화합물을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다.The acid addition salts according to the invention are dissolved in conventional methods, for example, by dissolving a compound of formula 1 in an excess of aqueous acid solution and using the water miscible organic solvent, such as methanol, ethanol, acetone or acetonitrile. It can be prepared by precipitation.

동량의 화학식 1의 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열하고, 이어서 이 혼합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 흡입 여과시켜 제조할 수도 있다.Equivalent amounts of the compound of formula 1 and the acid or alcohol in water may be heated and then the mixture is evaporated to dryness or prepared by suction filtration of the precipitated salt.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속 염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.In addition, bases can be used to make pharmaceutically acceptable metal salts. Alkali metal or alkaline earth metal salts are obtained, for example, by dissolving a compound in an excess of alkali metal hydroxide or alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is pharmaceutically suitable to prepare sodium, potassium or calcium salt as the metal salt. Corresponding silver salts are also obtained by reacting alkali or alkaline earth metal salts with a suitable negative salt (eg, silver nitrate).

또한, 본 발명의 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 약학적으로 허용되는 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물 및 용매화물을 모두 포함한다.In addition, the compound represented by Formula 1 of the present invention includes not only pharmaceutically acceptable salts, but also all salts, hydrates, and solvates that can be prepared by conventional methods.

본 발명에 따른 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 화학식 1의 화합물을 수혼화성 유기용매, 예를 들면 아세톤, 메탄올, 에탄올, 또는 아세토니트릴 등에 녹이고 과량의 유기산을 가하거나 무기산의 산 수용액을 가한 후 침전시키거나 결정화시켜서 제조할 수 있다. 이어서 이 혼합물에서 용매나 과량 의 산을 증발시킨 후 건조시켜서 부가염을 얻거나 또는 석출된 염을 흡인 여과시켜 제조할 수 있다.The addition salt according to the present invention can be prepared by a conventional method, for example, by dissolving the compound of Formula 1 in a water miscible organic solvent such as acetone, methanol, ethanol, or acetonitrile and adding an excess of an organic acid or an inorganic acid. It can be prepared by adding an acidic aqueous solution of and then precipitating or crystallizing. The solvent or excess acid can then be evaporated and dried in this mixture to yield an addition salt or to precipitate prepared salts by suction filtration.

상기 유효량은 본 발명의 조성물 총 중량에 대하여 상기 유효성분을 0.0001 내지 50 중량%로 포함하는 것을 특징으로 한다. 또한, 본 발명의 조성물은 상기 유효성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 본 발명의 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다.The effective amount is characterized in that it comprises 0.0001 to 50% by weight of the active ingredient based on the total weight of the composition of the present invention. In addition, the composition of the present invention may further contain one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions in addition to the active ingredient. The composition of the present invention may be prepared by including one or more pharmaceutically acceptable carriers in addition to the above-described active ingredients for administration.

상기 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올, 리포좀 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있으며, 표적 기관에 특이적으로 작용할 수 있도록 표적 기관 특이적 항체 또는 기타 리간드를 상기 담체와 결합시켜 사용할 수 있다. 더 나아가 당해 기술분야의 적정한 방법으로 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제제화할 수 있다.The pharmaceutically acceptable carrier may be used in combination with saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol, liposomes and one or more of these components, if necessary, antioxidant Other conventional additives such as agents, buffers, bacteriostatic agents and the like can be added. In addition, diluents, dispersants, surfactants, binders, and lubricants may be additionally added to formulate into injectable formulations, pills, capsules, granules, or tablets, such as aqueous solutions, suspensions, emulsions, and the like, and may act specifically on target organs. Target organ specific antibodies or other ligands may be used in combination with the carriers so as to be used. Furthermore, it may be preferably formulated according to each disease or component by a suitable method in the art or using a method disclosed in Remington's Pharmaceutical Science (Recent Edition, Mack Publishing Company, Easton PA). have.

또한, 본 발명의 조성물은 임상 투여시에 경구 및 비경구용의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있으며, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합 제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.In addition, the composition of the present invention may be administered in various formulations for oral and parenteral administration in clinical administration, and when formulated, diluents such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, surfactants, etc., which are commonly used, or It is prepared using excipients.

경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. Solid form preparations for oral administration include tablets, patients, powders, granules, capsules, troches, and the like, which form at least one excipient such as starch, calcium carbonate, water, or the like. It is prepared by mixing cross, lactose or gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium styrate talc are also used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, solutions, emulsions, or syrups, and include various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. Can be.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories, and the like. As the non-aqueous solvent and the suspension solvent, propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like can be used. As the base of the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerol, gelatin and the like can be used.

상기 화합물은 정상암세포 및 다중약물내성 암세포에서 세포독성을 나타내 고, 특히 다중약물내성 암세포에서도 정상암세포와 유사하거나 더 낳은 세포사멸 유도효과를 나타냄으로써 다중약물내성 암세포에 대한 항암보조제로 사용될 수 있다. 상기 다중약물내성 암세포는 항암제 구조에 상관없이 비 특이적인 내성을 획득한 암세포로, 이때, 상기 암세포는 이에 특별히 제한되는 것은 아니나, 대장암(colon cancer), 방광암(bladder cancer), 난소암(ovarian cancer), 위암(gastric cancer), 폐암(lung cancer), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer) 및 대장직장암(colorectal cancer)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.The compound may be used as an anticancer adjuvant against multi-drug resistant cancer cells by showing cytotoxicity in normal cancer cells and multi-drug resistant cancer cells, and particularly in multi-drug resistant cancer cells, by inducing apoptosis inducing effect similar to or better than that of normal cancer cells. The multi-drug resistant cancer cells are cancer cells that acquire non-specific resistance regardless of the structure of the anticancer agent, wherein the cancer cells are not particularly limited thereto, such as colon cancer, bladder cancer, and ovarian cancer. cancer, gastric cancer, lung cancer, lung cancer, prostate cancer, pancreatic cancer, colorectal cancer and colorectal cancer.

본 발명의 항암보조제는 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다. 상기 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.The anticancer adjuvant of the present invention may further contain one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions. The pharmaceutically acceptable carrier may be used by mixing one or more of saline, sterile water, Ringer's solution, buffered saline, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol and these components.

상기 다중약물내성을 나타내는 개체는 항암제 구조에 상관없이 비 특이적인 내성을 획득한 개체이고, 상기 암질환은 이에 특별히 제한되는 것은 아니나, 대장암(colon cancer), 방광암(bladder cancer), 난소암(ovarian cancer), 위암(gastric cancer), 폐암(lung cancer), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer) 및 대장직장암(colorectal cancer)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 한다.The multi-drug resistant subject is a subject that has acquired non-specific resistance regardless of the anticancer drug structure, and the cancer disease is not particularly limited thereto, such as colon cancer, bladder cancer, and ovarian cancer ( ovarian cancer, gastric cancer, lung cancer, lung cancer, prostate cancer, pancreatic cancer and colorectal cancer.

본 발명의 화합물 또는 항암보조제 및 항암제의 투여방법은 특별히 이에 제한되는 것은 아니나, 목적하는 방법에 따라 비경구 투여(예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)하거나 경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여가 바람직하며, 정맥내 주사에 의한 투여가 더욱 바람직하다.The method of administering the compound of the present invention or the anticancer adjuvant and the anticancer agent is not particularly limited, but may be parenterally administered (for example, intravenous, subcutaneous, intraperitoneal or topical) or oral administration according to a desired method. Parenteral administration is preferred, and administration by intravenous injection is more preferred.

또한, 본 발명의 화합물 또는 항암보조제 및 항암제의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있으며, 몸무게가 70 ㎏인 성인 환자를 기준으로 할 때, 일반적으로 0.1 ~ 1,000 ㎎/일이며, 바람직하게는 1 ~ 500 ㎎/일이며, 단위 제형당 상기 화합물 또는 항암보조제 및 항암제의 1일 용량 또는 이의 1/2, 1/3 또는 1/4의 용량이 함유되도록 하며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 하루 1 내지 6회 분할 투여할 수도 있다.In addition, the dosage of the compound of the present invention or the anticancer adjuvant and the anticancer agent to the human body may vary depending on the age, weight, sex, dosage form, health condition and degree of disease of the patient, and is based on an adult patient having a weight of 70 kg. When used, it is generally 0.1 to 1,000 mg / day, preferably 1 to 500 mg / day, and the daily dose of the compound or anticancer and anticancer agent, or 1/2, 1/3 or 1 / its thereof, per unit dosage form. A dose of 4 may be contained, and may be dividedly administered 1 to 6 times a day at regular intervals according to the judgment of a doctor or a pharmacist.

본 발명의 조성물은 항암제에 내성을 나타내는 다중약물내성(Multidrug resistance, MDR) 세포에서 보이는 항암제내성을 극복할 수 있어서 정상암세포는 물론 MDR을 나타내는 세포에서도 항암효과가 있으므로, 약학적으로 유용한 항암제로 사용될 수 있다.The composition of the present invention can overcome the anticancer drug resistance seen in multidrug resistance (MDR) cells that are resistant to anticancer drugs, and thus has an anticancer effect in normal cancer cells as well as MDR cells, which can be used as a pharmaceutically useful anticancer agent. Can be.

이하, 본 발명을 실시예, 실험예 및 제제예에 의하여 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by Examples, Experimental Examples and Formulation Examples.

단, 하기 실시예, 실험예 및 제제예는 본 발명을 구체적으로 예시하는 것이며, 본 발명의 내용이 실시예, 실험예 및 제제예에 의해 한정되는 것은 아니다.However, the following Examples, Experimental Examples, and Formulation Examples specifically illustrate the present invention, and the content of the present invention is not limited to Examples, Experimental Examples, and Formulation Examples.

<실시예 1> 화합물의 제조Example 1 Preparation of Compound

본 발명에서 사용된 화합물인 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린은 4-(N,N-디에틸아미노)살리실알데히드와 (3-메톡시프롤릴)벤조옥사졸-2-yl-아세테이트를 동량으로 혼합한 후 이소프로판올을 가하여 12시간동안 환류 반응시켰다. 수율은 33%였으며, 상기 화합물을 NMR(¹H 및 ¹³C-NMR, Varian 500MHz spectrometer, Varian, USA)로 그 구조를 확인하였다.The compound used in the present invention, 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin, is a 4- (N, N-diethylamino) salicylaldehyde and (3-methoxyprolyl) benzooxa After the same amount of sol-2-yl-acetate was mixed, isopropanol was added and refluxed for 12 hours. The yield was 33%, the compound was confirmed by NMR ( ¹ H and ¹³ C-NMR, Varian 500 MHz spectrometer, Varian, USA) to confirm the structure.

<실험예 1> 정상암세포 및 다중약물내성 암세포에서의 세포독성 실험 Experimental Example 1 Cytotoxicity in Normal Cancer Cells and Multidrug-Resistant Cancer Cells

정상암세포주는 구강상피암세포주인 KB 세포(ATCC, CCL-17)를 사용하였고, 다중약물내성 암세포주는 빈크리스틴(vincristine; Sigma, USA)을 배지에 20 nM의 농도로 가한 상태에서 항암제내성을 획득한 KBV20C(Kim et al., Biochem Biophys Res Commun 355(1):136-42, 2007)를 사용하였다. Normal cancer cell lines were KB cells (ATCC, CCL-17), oral epithelial cancer cell lines, and multi-drug resistant cancer cell lines obtained anticancer drug resistance with vincristine (Sigma, USA) added to the medium at a concentration of 20 nM. KBV20C (Kim et al. , Biochem Biophys Res Commun 355 (1): 136-42, 2007) was used.

두 가지 세포를 1 × 10⁴개의 농도로 96-웰(well)형 플레이트에 깐 후 24 시간 배양한 후 실시예 1의 방법으로 제조한 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린을 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3 및 10 μM의 농도로 각 웰에 가하였다. 추가로 48시간동안 배양한 후, CCK-8(Cell Counting Kit-8) 시약(Dojindo Laboratories, Japan)원액을 각 웰에 1/10 부피로 가하였고 1시간 후 450 ㎚에서 흡광도의 변화를 측정하였다. 시료를 처리한 세포의 생존율은 시료를 처리하지 않은 대조군의 세포의 생존 정도를 100으로 한 비교치를 나타내었다.Two cells were plated in a 96-well plate at a concentration of 1 × 10 ^{4 and} incubated for 24 hours, followed by 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethyl prepared by the method of Example 1 Amino) coumarin was added to each well at concentrations of 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3 and 10 μΜ. After an additional 48 hours of incubation, CCK-8 (Cell Counting Kit-8) reagent (Dojindo Laboratories, Japan) was added to each well in 1/10 volume and the change in absorbance at 450 nm was measured after 1 hour. . The survival rate of the cells treated with the sample was a comparison value of 100 survival of the cells of the control group not treated with the sample.

그 결과, 도 1에서 나타난 바와 같이 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린은 정상암세포주와 다중약물내성 암세포주에서 동일하게 세포독성을 나타내었다. 특히 IC₅₀ 값이 1 μM 이하로 상당히 낮은 농도에서도 다중약물내성 암세포주에 대해 세포사멸효과를 보이는 우수한 항암제로서의 가능성을 보여주고 있다.As a result, as shown in Figure 1, 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin showed the same cytotoxicity in the normal cancer cell line and multi-drug resistant cancer cell line. In particular, the IC ₅₀ value of 1 μM or less shows a possibility of being an excellent anticancer agent with apoptosis effect against a multidrug-resistant cancer cell line.

<실험예 2> 다중약물내성 암세포에서의 세포주기 측정 Experimental Example 2 Cell Cycle Measurement in Multidrug Resistant Cancer Cells

다중약물내성 암세포주인 KBV20C를 60파이 배양접시에 1 × 10⁶개의 농도로 깔고, 24시간 배양한 후 대표적인 항암제인 파클리탁셀(Paclitaxel; Sigma, USA)과 실시예 1의 방법으로 제조한 시험물질인 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린을 각각 10, 100 및 300 nM의 세 가지 농도로 세포에 처리하였다. 24시간 동안 배 양한 후 세포를 70% 에탄올로 4℃에서 30분간 고정시켰고 원심분리하여 에탄올을 제거하였다. 0.5 ㎎/㎖의 RNase(New England Biolabs, USA)가 들어 있는 PBS(Phosphate-buffered Saline)로 상온에서 5분간 방치하였고, 추가로 40 ㎍/㎖의 PI(Propodium Iodide; Sigma, USA)로 37℃에서 30분간 염색하였다. 이 후 유속세포 분석기(FACSCalibur, BD, USA)를 이용하여 세포주기를 측정하였다. KBV20C, a multi-drug resistant cancer cell line, was plated at a concentration of 1 × 10 ⁶ in a 60-pie culture dish and cultured for 24 hours, followed by paclitaxel (Sigma, USA), a representative anticancer agent, and a test substance prepared by the method of Example 1. Cells were treated with-(2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin at three concentrations of 10, 100 and 300 nM, respectively. After incubation for 24 hours, the cells were fixed with 70% ethanol at 4 ° C. for 30 minutes and centrifuged to remove ethanol. PBS (Phosphate-buffered Saline) containing 0.5 mg / mL RNase (New England Biolabs, USA) was allowed to stand at room temperature for 5 minutes and additionally 37 ° C. with 40 μg / ml PI (Propodium Iodide; Sigma, USA). Dyeing at 30 minutes. Thereafter, the cell cycle was measured using a flow rate analyzer (FACSCalibur, BD, USA).

그 결과, 도 2와 도 3에서 나타나는 바와 같이 동일 농도에서 파클리탁셀을 처리한 경우보다 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린을 처리한 경우에서 더욱 우수한 세포주기멈춤(Cell cycle arrest)효과를 나타내었으며, 주로 G₂/M 주기에서 멈춤 효과가 발생하였다.As a result, as shown in FIGS. 2 and 3, cell cycle arrest was more excellent when 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin was treated than when paclitaxel was treated at the same concentration. Cell cycle arrest), and the stopping effect occurred mainly in the G ₂ / M cycle.

<실험예 3> 다중약물내성 암세포주에서의 세포사멸 유도효과 측정 Experimental Example 3 Measurement of Apoptosis Inducing Effect in Multidrug-Resistant Cancer Cell Lines

다중약물내성 암세포주인 KBV20C를 60파이 배양접시에 1 × 10⁶개의 농도로 깔고, 24시간 배양한 후 대표적인 항암제인 파클리탁셀 100 nM과 시험물질인 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린을 100 및 300 nM의 두 가지 농도로 세포에 처리하였다. 24, 48 및 72시간 후 상기 세포를 모아 차가운(4℃) PBS로 2회 세척한 후 600 g에서 원심분리 하여 세포를 모았다. 최종 세포 농도 1 × 10⁶ 세포/㎖가 되도록 완충액을 넣어 세포를 현탁 하였고, 그 중 50 ㎕를 취하여 음성 대조군으로 사용하였다. 나머지 세포는 암소에서 Annexin V[세포사멸 유도 직후에 포스파티딜세린(phosphatidylserine; PS)이 세포질에서 세포표면으로 이동하는 현상과 아넥신 V의 PS에 강한 특이적 친화성을 이용하여 초기 세포사멸 측정]-FITC(Fluorescein isothiocyanate) 용액 5 ㎕(Roche, USA), PI 용액(핵 염색) 2 ㎕를 가하고 15분 후에 완충액 400 ㎕를 가해 전체 500 ㎕로 맞추어 유속세포 분석기에서 이색형광 매개변수 프로토콜(dual color parameter protocol; Gero Kramer et al ., Cancer Res 64:1751-1756, 2004)을 사용하여 가로축은 Annexin V(초기 세포사멸) 세로축은 PI(후기 세포사멸)에 대한 형광으로 놓고 그 형광의 강도를 분석하였다.KBV20C, a multi-drug resistant cancer cell line, was plated at a concentration of 1 × 10 ⁶ in a 60-pie culture dish and cultured for 24 hours, followed by 100 nM of paclitaxel, a typical anticancer agent, and 3- (2-benzoxazolyl) -7- (D). Ethylamino) coumarin was treated to cells at two concentrations, 100 and 300 nM. After 24, 48 and 72 hours, the cells were collected, washed twice with cold (4 ° C.) PBS, and then collected by centrifugation at 600 g. The cells were suspended in buffer solution to a final cell concentration of 1 × 10 ⁶ cells / ml, and 50 μl was taken as a negative control. The rest of the cells were treated with Annexin V [measured by early migration of phosphatidylserine (PS) from the cytoplasm to the surface of the cell immediately after induction of apoptosis and the specific affinity of PS of Annexin V for early apoptosis]- 5 μl of Fluorescein isothiocyanate (FITC) solution (Roche, USA), 2 μl of PI solution (nuclear staining) were added, and after 15 minutes, 400 μl of buffer was added to a total of 500 μl. protocol; Gero Kramer et al . , Cancer Res 64 : 1751-1756, 2004), the horizontal axis was Annexin V (early cell death) and the vertical axis was the fluorescence for PI (late cell death), and the intensity of the fluorescence was analyzed.

그 결과, 도 4에서 나타난 바와 같이 파클리탁셀과는 달리 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린은 24시간 때부터 우수한 세포사멸 유도효과를 보였으며, 이를 초기(early) 및 후기(late) 세포사멸 구간인 우하 및 우상 구간을 합하여 그래프로 도식화했을 때, 도 5에서 나타난 바와 같이 파클리탁셀과는 확연히 다른 우수한 세포사멸 효과를 보여주었다.As a result, as shown in Figure 4, unlike paclitaxel, 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin showed an excellent apoptosis induction effect from 24 hours, which is early And when plotting the graph of the lower and upper right sections, which are late cell death sections, as shown in FIG. 5, it showed an excellent apoptosis effect significantly different from paclitaxel.

<실험예 4> 다중약물내성 암세포주에서 세포사멸 유도 단백질의 발현에 미치는 영향 측정Experimental Example 4 Measurement of Effect on Apoptosis Inducing Protein Expression in Multidrug Resistant Cancer Cell Lines

다중약물내성 암세포주인 KBV20C를 100파이 배양접시에 5 × 10⁶개의 농도로 깔고, 24시간 배양한 후 대표적인 항암제인 파클리탁셀과 시험물질인 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린을 0, 10, 30, 100, 300 및 1000 nM의 여섯 가지의 농도로 세포에 처리하였다. 24시간 후 각 세포들은 PBS로 3회 세척한 후 세포파쇄 완충용액[20 mM Tris-HCl(pH6.8), 1 mM MgCl₂, 2 mM EGTA, 20 g/㎖ 아프로티 닌(aprotinin), 20 g/㎖ 류펩틴(leupeptin), 1 mM 페닐메틸설포닐 플루오르화물(phenylmethylsulfonyl fluoride), 1 mM 오르쏘바나데이트(orthovanadate) 및 0.5% 노니데트(Nonidet); Sigma, USA]로 세포를 파쇄한 후 15,000 g, 10 분, 4℃ 조건으로 원심분리하여 파쇄된 세포를 침전하였고, 상기 침전물(pellet)을 웨스턴 블랏 방법으로 분석하였다. 구체적으로 10% SDS-PAGE 겔에서 125 V, 35 ㎃, 90분의 조건으로 전기영동하였고, 겔 상의 단백질을 니트로셀룰로오즈 막(Amersham, USA)으로 30 V, 400 ㎃, 3시간의 조건으로 전기영동 하여 옮긴 후, 상기 막을 Tween20이 0.1% 함유된 PBS로 5분씩 3회 세척하였다. 세포사멸의 마커로서 여러 실험에 이용되고 있는 항-PARP(anti-poly ADP ribose polymerase) 단일항체(Cell Signaling, USA)와 HRP(horseradish peroxidase)-결합 이차항체를 각각 1시간씩 상온에서 붙인 후, Tween20이 0.1% 함유된 PBS로 5분씩 3회 세척하였다. 화학발광(chemiluminescent) 시약(ECL, Amersham, USA)을 사용하여 그 발색 정도를 X-ray 필름에 감광시켜 측정하였다.KBV20C, a multidrug-resistant cancer cell line, was plated at a concentration of 5 × 10 ⁶ in a 100-pi dish and cultured for 24 hours, followed by paclitaxel, a typical anticancer agent, and 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino Coumarins were treated with cells at six concentrations of 0, 10, 30, 100, 300 and 1000 nM. After 24 hours, each cell was washed three times with PBS, followed by cell disruption buffer [20 mM Tris-HCl (pH6.8), 1 mM MgCl ₂ , 2 mM EGTA, 20 g / ml aprotinin, 20 g / ml leupeptin, 1 mM phenylmethylsulfonyl fluoride, 1 mM orthovanadate and 0.5% Nonidet; Sigma, USA] and then the cells were disrupted by centrifugation at 15,000 g, 10 minutes, 4 ℃ conditions to precipitate the crushed cells, the pellet (pellet) was analyzed by Western blot method. Specifically, electrophoresis was performed at 125 V, 35 μs, and 90 minutes on a 10% SDS-PAGE gel, and the protein on the gel was electrophoresed at 30 V, 400 μs, and 3 hours on a nitrocellulose membrane (Amersham, USA). After the transfer, the membrane was washed three times for 5 minutes with PBS containing 0.1% of Tween20. After attaching the anti-poly ADP ribose polymerase (PARP) monoclonal antibody (Cell Signaling, USA) and the HRP (horseradish peroxidase) -binding secondary antibody, which have been used in various experiments as markers of cell death, at room temperature for 1 hour, Tween20 was washed three times for 5 minutes with 0.1% PBS. The degree of color development was measured by photosensitizing the X-ray film using a chemiluminescent reagent (ECL, Amersham, USA).

그 결과, 도 6에서 나타난 바와 같이 파클리탁셀을 처리한 경우 KB 세포에서는 10 nM의 저농도에서도 세포사멸에 의해 발생한 PARP 절단효과를 보였지만, KBV20C에서는 100 nM의 농도로 처리해야만 PARP 절단효과를 나타내었다. 그러나 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린을 처리할 경우 오히려 다중약물내성 암세포주인 KBV20C에서 30 nM로 처리한 경우부터 PARP 절단효과를 나타내고 있고, KB세포에서는 100 nM에서 나타나고 있어서, 다중약물내성 암세포에서 항암효과를 더 잘 나타내거나, 약물내성과는 상관없이 항암효과를 나타내었다. As a result, when treated with paclitaxel as shown in Figure 6, KB cells showed a PARP cleavage effect caused by apoptosis even at a low concentration of 10 nM, but KBV20C showed a PARP cleavage effect only at a concentration of 100 nM. However, treatment with 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin showed PARP cleavage effect from 30 nM treatment in multidrug resistant cancer cell line KBV20C, and 100 nM in KB cells. As shown in, the anti-cancer effect was better expressed in multi-drug resistant cancer cells or anti-cancer effect regardless of drug resistance.

<실험예 5> Experimental Example 5 in vitroin vitro 에서 미세소관(Microtubule) 생성에 미치는 영향 Effect on microtubule production in rats

in vitro 미세소관 어셈블리 실험(Kuo CC et al., Cancer Res 64(13):4621-8, 2004)을 통하여 미세소관 생성에 미치는 영향을 측정하였다(BK004 & CDS01, Cytoskeleton, Inc. Denver, CO, USA). In vitro microtubule assembly experiments (Kuo CC et al ., Cancer Res 64 (13): 4621-8, 2004) were used to determine the effect on microtubule formation (BK004 & CDS01, Cytoskeleton, Inc. Denver, CO, USA).

96-웰 플레이트에 100 mM PIPES(pH 6.9)(Sigma, USA), 2 mM MgCl₂, 1 mM GTP(Sigma, USA), 2%(v/v) DMSO를 함유한 완충용액 100 ㎕를 분주하였고, 미세소관-관련 단백질이 풍부한 튜불린을 각 웰에 가한 후, 파클리탁셀과 빈크리스틴은 5 μM씩, 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린은 1, 3 및 10 μM씩 가하였다. 이때 무처리군을 대조군으로 하였다. 이후 PowerWave X Microplate Reader(Bio-Tek Instruments, USA)를 사용하여 355 ㎚에서 37℃를 유지하며 30초 간격으로 흡광도의 변화를 관찰하였다.In a 96-well plate, 100 μL of buffer containing 100 mM PIPES (pH 6.9) (Sigma, USA), 2 mM MgCl ₂ , 1 mM GTP (Sigma, USA), 2% (v / v) DMSO was dispensed. After addition of tubules rich in microtubule-related proteins to each well, paclitaxel and vincristine were 5 μM each, 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin was 1, 3 and 10 μM was added each. At this time, the untreated group was used as a control. Subsequently, changes in absorbance were observed at intervals of 30 seconds while maintaining 37 ° C. at 355 nm using a PowerWave X Microplate Reader (Bio-Tek Instruments, USA).

그 결과, 도 7에서 나타난 바와 같이 파클리탁셀 처리군은 기존에 알려진 대로 미세소관의 중합반응을 촉진시켰고, 빈크리스틴은 미세소관의 중합반응을 억제하였다. 또한, 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린은 농도 의존적으로 미세소관의 중합반응을 억제하였다.As a result, as shown in Figure 7, the paclitaxel treatment group promoted the polymerization of microtubules as known, vincristine inhibited the polymerization of microtubules. In addition, 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin inhibited the polymerization of microtubules in a concentration-dependent manner.

<< 실험예Experimental Example 6> 6> inin vivovivo 에서 in 미세소관Microtubules 생성에 미치는 영향 Impact on generation

도 7의 결과가 in vivo에서도 일어나는지 확인하기 위하여, in vivo 미세소 관 어셈블리 실험을 수행하였다. 즉 세포내에 생성된 불용성인 중합된 미세소관을 용성인 튜불린 다이머(dimer)로부터 분리하여 그 생성정도를 측정하였다. 두 가지 세포주 KB와 KBV20C를 100파이 배양접시에 1 × 10⁶ 개의 농도로 깐 다음 파클리탁셀과 빈크리스틴은 각각 500 nM 씩, 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린은 0.01, 0.1 및 1 μM씩 처리하였다. 24시간 후 각 세포들은 PBS로 3회 세척한 후 세포파쇄 완충용액으로 세포파쇄시킨 후 15,000 g, 10분, 4℃의 조건으로 원심분리하였다. 상등액과 침전물을 실시예 4와 동일한 웨스턴 블랏 방법으로 분석하였다.In order to confirm that the results of Figure 7 occur in vivo , in vivo microtubule assembly experiment was performed. That is, the insoluble polymerized microtubules generated in the cells were separated from the soluble tubulin dimer and the degree of production thereof was measured. Two cell lines, KB and KBV20C, were placed at a concentration of 1 × 10 ⁶ in a 100-Pi dish, followed by 500 nM of paclitaxel and vincristine and 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin 0.01, 0.1 and 1 μM each were treated. After 24 hours, each cell was washed three times with PBS, and then lysed with cell disruption buffer and centrifuged at 15,000 g, 10 minutes, and 4 ° C. The supernatant and precipitate were analyzed by the same Western blot method as in Example 4.

그 결과, 도 8에서 나타난 바와 같이 상등액에 녹아있는 튜불린의 양에는 변화가 없었지만, 항암제에 민감한 KB세포에서는 파클리탁셀(Tx) 처리군은 불용성 미세소관이 많이 생성되었고, 빈크리스틴(Vinc) 처리군은 미세소관 생성이 거의 억제되어 있었다. 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린 처리군도 빈크리스틴 처리군과 비슷하게 미세소관 생성이 억제되어 있었다. KBV20C 세포에서는 파클리탁셀에 의한 미세소관 생성촉진효과 및 빈크리스틴에 의한 미세소관 생성억제효과가 KB세포에 비해 모두 감소하였고, 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린 처리군에서는 KB 세포에서와 유사한 농도 의존적 미세소관 생성억제효과를 그대로 나타내고 있는 것을 보여주어 도 7에 나타난 것과 같은 결과를 확인할 수 있었다.As a result, as shown in Figure 8, the amount of tubulin dissolved in the supernatant did not change, but in insoluble cancer-sensitive KB cells, paclitaxel (Tx) treated group produced a large number of insoluble microtubules, Vincristine (Vinc) treated group Silver microtubule formation was almost suppressed. The 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin treated group also inhibited microtubule formation similarly to the vincristine treated group. In KBV20C cells, the effect of paclitaxel-induced microtubule production and the effect of vincristine-induced microtubule production were reduced compared to those of KB cells, and 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin treated group In the results showed that the concentration-dependent microtubule production inhibitory effect similar to that of KB cells as it is, it was confirmed the results as shown in FIG.

<< 제제예Formulation example 1> 정제(직접 가압) 1> tablet (direct pressure)

화학식 1의 화합물 5.0 ㎎을 체로 친 후, 락토스 14.1 ㎎, 크로스포비돈 USNF 0.8 ㎎ 및 마그네슘 스테아레이트 0.1 ㎎을 혼합하고 가압하여 정제로 제조하였다.After sieving 5.0 mg of the compound of Formula 1, 14.1 mg of lactose, 0.8 mg of crospovidone USNF, and 0.1 mg of magnesium stearate were mixed and pressed to prepare a tablet.

<< 제제예Formulation example 2> 정제(습식 조립) 2> tablets (wet assembly)

화학식 1의 화합물 5.0 ㎎을 체로 친 후, 락토스 16.0 ㎎과 녹말 4.0 ㎎을 섞었다. 폴리솔베이트 80 0.3 ㎎을 순수한 물에 녹인 후 이 용액의 적당량을 첨가한 다음 미립화하였다. 건조 후에 미립을 체질한 후 콜로이달 실리콘 디옥사이드 2.7 ㎎ 및 마그네슘 스테아레이트 2.0 ㎎과 섞었다. 미립을 가압하여 정제로 제조하였다.After sifting 5.0 mg of the compound of Formula 1, 16.0 mg of lactose and 4.0 mg of starch were mixed. 0.3 mg of polysorbate 80 was dissolved in pure water and then an appropriate amount of this solution was added and then atomized. After drying, the fine particles were sieved and mixed with 2.7 mg of colloidal silicon dioxide and 2.0 mg of magnesium stearate. The granules were pressed to make tablets.

<< 제제예Formulation example 3> 분말과 3> with powder 캡슐제Capsule

화학식 1의 화합물 5.0 ㎎을 체로 친 후에, 락토스 14.8 ㎎, 폴리비닐 피롤리돈 10.0 ㎎, 마그네슘 스테아레이트 0.2 ㎎와 함께 혼합하였다. 상기 혼합물을 적당한 장치를 사용하여 단단한 No. 5 젤라틴 캡슐에 채웠다.5.0 mg of the compound of formula 1 was sieved, and then mixed together with 14.8 mg of lactose, 10.0 mg of polyvinyl pyrrolidone, and 0.2 mg of magnesium stearate. The mixture was prepared using a suitable apparatus. Filled in 5 gelatin capsules.

<< 제제예Formulation example 4> 주사제 4> Injection

화학식 1의 화합물 100 ㎎을 함유시키고, 그 밖에도 만니톨 180 ㎎, Na₂HPO₄12H₂O 26 ㎎ 및 증류수 2974 ㎎를 함유시켜 주사제를 제조하였다.Injectables were prepared by containing 100 mg of the compound of Formula 1, and other than 180 mg of mannitol, 26 mg of Na ₂ HPO ₄ 12H ₂ O, and 2974 mg of distilled water.

도 1은 정상암세포주인 KB 세포와 다중약물내성세포주인 KBV20C에 대한 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린의 세포독성을 세포생존율로 나타낸 그래프이다.1 is a graph showing the cell viability of the cytotoxicity of 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin against KB cells, which are normal cancer cell lines, and KBV20C, which is a multidrug resistant cell line.

도 2는 파클리탁셀과 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린의 KBV20C에 대한 세포주기에 미친 효과를 300 nM에서 측정한 결과를 나타낸 그림이다.Figure 2 shows the results of measuring the effect of paclitaxel and 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin on the cell cycle for KBV20C at 300 nM.

도 3은 파클리탁셀과 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린의 KBV20C에 대한 세포주기에 대한 효과를 10, 100 및 300 nM에서 측정하여 각 주기별 비율을 나타낸 그래프이다.Figure 3 is a graph showing the ratio of each cycle by measuring the effect on the cell cycle of paclitaxel and 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin on KBV20C at 10, 100 and 300 nM .

도 4는 파클리탁셀과 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린의 KBV20C에 대한 24, 48 및 72시간 후의 세포사멸 유도 정도를 나타낸 그림이다.Figure 4 shows the degree of apoptosis induction after 24, 48 and 72 hours for paclitaxel and 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin in KBV20C.

도 5는 도 4를 수치화한 그래프이다.FIG. 5 is a graph illustrating the numerical value of FIG. 4.

도 6은 파클리탁셀과 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린의 KB와 KBV20C에 대한 세포사멸 유도를 PARP 절단효과를 웨스턴 블랏 방법으로 나타낸 그림이다.FIG. 6 is a diagram showing the effect of PARP cleavage on Western blot analysis of apoptosis induction of paclitaxel and 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin for KB and KBV20C.

도 7은 in vitro 미세소관 어셈블리 정도에 대해 나타낸 그래프이다.7 is a graph showing the degree of in vitro microtubule assembly.

도 8은 in vivo 미세소관 어셈블리 정도에 대해 나타낸 그림이다.8 is a diagram showing the degree of assembly of microtubules in vivo .

Claims

화학식 1로 표시되는 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 항암제에 대한 다중약물내성 억제용 조성물:A composition for inhibiting multi-drug resistance to an anticancer agent comprising 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient:

<화학식 1><Formula 1>

.

제 1항에 있어서, 상기 화합물은 정상암세포 및 다중약물내성 암세포에서 세포독성을 나타내는 것을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1, wherein the compound exhibits cytotoxicity in normal cancer cells and multi-drug resistant cancer cells.

제 1항에 있어서, 상기 화합물은 다중약물내성 암세포에서 정상암세포와 유사하거나 더 향상된 세포사멸 유도효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1, wherein the compound exhibits apoptosis-inducing effect similar to or better than that of normal cancer cells in multi-drug resistant cancer cells.

제 2항에 있어서, 다중약물내성 암세포는 항암제 구조에 상관없이 비 특이적인 내성을 획득한 암세포인 것을 특징으로 하는 조성물.3. The composition of claim 2, wherein the multidrug resistant cancer cells are cancer cells that acquire non-specific resistance regardless of the anticancer structure.

제 2항에 있어서, 상기 암세포는 대장암(colon cancer), 방광암(bladder cancer), 난소암(ovarian cancer), 위암(gastric cancer), 폐암(lung cancer), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer) 및 대장직장암(colorectal cancer)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.According to claim 2, wherein the cancer cells (colon cancer), bladder cancer (bladder cancer), ovarian cancer (ovarian cancer), gastric cancer (lung cancer), lung cancer (lung cancer), prostate cancer (prostate cancer), pancreatic cancer ( pancreatic cancer) and colorectal cancer.

화학식 1로 표시되는 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하고, 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 포함하는 정상 암세포 및 다중약물내성 암세포에서 세포독성을 나타내는 항암보조제.A normal containing a 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin compound represented by the formula (1) or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, together with a pharmaceutically acceptable carrier Anticancer adjuvant that shows cytotoxicity in cancer cells and multi-drug resistant cancer cells.

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제 6항에 있어서, 상기 화합물은 다중약물내성 암세포에서 정상암세포와 유사하거나 더 향상된 세포사멸 유도효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 항암보조제.7. The anticancer adjuvant of claim 6, wherein the compound exhibits apoptosis-inducing effect similar to or better than that of normal cancer cells in multi-drug resistant cancer cells.

제 6항에 있어서, 다중약물내성 암세포는 항암제 구조에 상관없이 비 특이적인 내성을 획득한 암세포인 것을 특징으로 하는 항암보조제.7. The anticancer adjuvant of claim 6, wherein the multidrug resistant cancer cell is a cancer cell obtained with non-specific resistance regardless of the anticancer structure.

제 6항에 있어서, 상기 암세포는 대장암(colon cancer), 방광암(bladder cancer), 난소암(ovarian cancer), 위암(gastric cancer), 폐암(lung cancer), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer) 및 대장직장암(colorectal cancer)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항암보조제.According to claim 6, wherein the cancer cells (colon cancer), bladder cancer (bladder cancer), ovarian cancer (ovarian cancer), gastric cancer (lung cancer), lung cancer (lung cancer), prostate cancer (prostate cancer), pancreatic cancer ( anticancer adjuvant, characterized in that it is selected from the group consisting of pancreatic cancer and colorectal cancer.

화학식 1로 표시되는 3-(2-벤족사졸릴)-7-(디에틸아미노)쿠마린 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 다중약물내성을 억제하는 유효농도로 항암제에 대한 다중약물내성을 나타내는 인간을 제외한 동물인 개체에 투여하는 단계를 포함하는 인간을 제외한 동물인 개체의 암질환 치료 방법.A 3- (2-benzoxazolyl) -7- (diethylamino) coumarin compound represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof exhibits multi-drug resistance to an anticancer agent at an effective concentration that inhibits multi-drug resistance A method of treating cancer disease in an individual other than a human, comprising administering to an individual other than a human.

제 11항에 있어서, 다중약물내성을 나타내는 개체는 항암제 구조에 상관없이 비 특이적인 내성을 획득한 개체인 것을 특징으로 하는 암질환 치료 방법.12. The method of claim 11, wherein the individual exhibiting multi-drug resistance is an individual that acquires non-specific resistance regardless of the anticancer drug structure.

제 11항에 있어서, 상기 암질환은 대장암(colon cancer), 방광암(bladder cancer), 난소암(ovarian cancer), 위암(gastric cancer), 폐암(lung cancer), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer) 및 대장직장암(colorectal cancer)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암질환 치료 방법.The method of claim 11, wherein the cancer disease is colon cancer, bladder cancer, ovarian cancer, gastric cancer, lung cancer, prostate cancer, pancreatic cancer (pancreatic cancer) and colorectal cancer (colorectal cancer) cancer treatment method characterized in that it is selected from the group consisting of.

다중약물내성을 억제하는 유효 농도의 제 6항의 항암보조제 및 하나 이상의 항암제를 항암제에 대한 다중약물내성을 나타내는 인간을 제외한 동물인 개체에 병용 투여하는 단계를 포함하는 인간을 제외한 동물인 개체의 암질환 치료 방법.Cancer disease of an individual other than an animal, including co-administration of an effective concentration of the anticancer adjuvant of claim 6 and at least one anticancer agent to inhibit the multidrug resistance to an individual other than an animal exhibiting multidrug resistance to the anticancer agent Method of treatment.

제 14항에 있어서, 다중약물내성을 나타내는 개체는 항암제 구조에 상관없이 비 특이적인 내성을 획득한 개체인 것을 특징으로 하는 암질환 치료 방법.15. The method of claim 14, wherein the individual exhibiting multidrug resistance is an individual that has acquired non-specific resistance regardless of the anticancer drug structure.

제 14항에 있어서, 상기 암질환은 대장암(colon cancer), 방광암(bladder cancer), 난소암(ovarian cancer), 위암(gastric cancer), 폐암(lung cancer), 전립선암(prostate cancer), 췌장암(pancreatic cancer) 및 대장직장암(colorectal cancer)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 암질환 치료 방법.The method of claim 14, wherein the cancer disease is colon cancer, bladder cancer, ovarian cancer, gastric cancer, lung cancer, prostate cancer, pancreatic cancer (pancreatic cancer) and colorectal cancer (colorectal cancer) cancer treatment method characterized in that it is selected from the group consisting of.