KR100823085B1 - 식물 바이러스 방제용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 다수의 식물 바이러스 감염억제 활성을 나타내는 목질진흙버섯 균사체, 시자(枾子), 상실(像實) 또는 관중(貫衆)의 추출물을 함유하는 식물 바이러스 방제용 조성물에 관한 것으로, 본 발명은 상기 조성물을 이용하여 식물 바이러스 감염을 예방할 수 있다. 또한, 본 발명에 따른 조성물은 천연물 유래의 물질로써 독성이 없으며, 다양한 식물 바이러스에 대하여 탁월한 효과를 나타내므로, 식물 바이러스 감염방제제로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

식물 바이러스 방제용 조성물{Composition for controlling plant viruses}

도 1은 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 및 관중 추출 혼합조성물의 TMV에 대한 감염 억제능을 관찰한 것으로, 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 및 관중 혼합추출물 및 대조구로서 멸균수를 담배 Nicotiana glutinosa의 반엽씩에 접종원 바이러스(TMV)와 혼합접종 또는 혼합추출물처리 24시간 후에 TMV를 감염시키고, 3일 경과 후 담배 N. glutinosa의 잎에 발현된 국부병반의 사진이다.

본 발명은 식물 바이러스 방제용 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 다수의 식물 바이러스에 대해 감염억제 활성을 나타내는 목질진흙버섯 균사체, 시자(枾子), 상실(像實) 또는 관중(貫衆)의 추출물을 함유하는 식물 바이러스 방제용 조성물에 관한 것이다.

바이러스는 숙주세포를 감염시켜 증식하는 생명체로서 숙주와 별도로 그 존재를 생각할 수 없는 생명체이다. 바이러스에는 숙주에 따라 동물바이러스, 식물 바이러스, 세균바이러스(bacteriophage), 곰팡이바이러스 등 여러 가지가 존재한다. 그 중에서 식물 바이러스는 식물 세포를 감염시키는 바이러스를 총칭한다. 전 세계적으로 식물 바이러스는 약 1,000여 종이 분리 보고되었으며, 이들 중 대부분의 종(species)은 식물병을 야기하여 농작물 생산량, 품질저하 및 품종퇴화 유발 등 농업생산 전반에 걸쳐 심각한 경제적 피해를 주고 있다.

지금까지 식물바이러스병의 방제는 주로 식물재배시기의 조절, 무병 식물체 재배 등의 경종적 방법과 바이러스 매개체인 곤충을 구제하는 방법 등을 사용하였으나 이들은 간접적인 방제수단으로서 한계가 있다. 최근에는 직접적인 방제수단을 강구하기 위하여 항식물바이러스 활성물질의 탐색에 대한 연구가 활발한 실정이다.

지금까지 연구 보고된 항식물바이러스 활성물질로 Sodium alginic acid (Tomaru, 1975), Lentinus edodes (Shimomura,1984), Mirabilis jalapa (Kubo,1990), Phytolacca americana (Irvin 등, 1975), Boerhaavia diffusa (Verma 등, 1979), Fomes formentarius (Aoki등, 1993) 유래의 성분이 보고되고 있으나, 낮은 방제가, 독성 등으로 식물바이러스 방제제로 실용성이 낮은 문제점이 있다.

목질진흙버섯(Phellinus Linteus)은 뽕나무, 느릅나무 등 활엽수에 자생하는 버섯으로 소나무비늘버섯과(Hymenochaetaceae)의 진흙버섯속(Phellinus Ouel)으로 분류되며, 일명 "상황버섯"의 자실체 또는 균사체를 의미한다.

목질진흙버섯은 예부터 자궁출혈, 월경불순 등의 부인병치료제로 사용되었으며, 최근에는 항암 약리작용이 입증된 바 있다. 즉 소화기계통의 암인 위암, 식도암, 십이지장암, 결장암, 직장암 및 간암 수술 후 화학요법을 병행 처치 시 면역기 능을 활성화한다는 것이다. 상황버섯의 효능은 다당류 베타글루칸에 의한 것으로, 이 물질은 인체의 면역력을 높임으로써 체내에 침입한 세균이나 이물질에 의한 발병을 억제시키는 역할을 한다. 상황버섯과 관련한 종래의 발명으로는 펠리누스 린테우스 균주 및 이로부터 분리 정제된 항암 면역 활성 다당류(한국특허 2001-0003264), 자연산 상황버섯 추출물을 함유하는 발모제 조성물 및 이의 제조방법(한국 특허 10-0348115)이 있으며, 최근에는 의약품용 소재로서 "아프리카산 상황버섯(Phellinus baumi) 추출물을 함유하는 바이러스질환 예방 및 치료용 조성물"(한국특허 10-0512315)에 대해 개시하고 있다. 이외에도 상황버섯 및 그 추출물을 이용한 의약품 및 건강식품들에 대한 많은 연구가 이루어지고 있다.

시자는 감의 (Diospyros kaki)과실로서, 감은 탄닌(tannin), 트리터페노이드(triterpenoid), 당, 중성지방 등이 함유되어 있으며, 만성기관지염의 진해, 거담작용, 자궁출혈 및 안저 출혈 등에 지혈효과, 감상선 질환에 유효하기 때문에 한방요법에 사용되어 왔다.

상실(像實)은 상수리나무 (Quercus acutissima)열매로서, 한방에서 유선염(乳腺炎), 치주질환(齒柱疾患) 등에 사용하였다.

관중은 범고사리 (Dryopteris crassirhizoma)의 뿌리줄기로서, 관중의 성분으로는 필마론(filmarone), 아스피딘(aspidin), 알바스피딘(albaspidin), 아스피디놀(aspidinol), 플라보아스피딘산(flavoaspidic acid) 등이 밝혀져 있다. 관중의 약리작용으로 구충효과, 감기바이러스 억제효과, 항균 및 항암효과, 자궁수축작용 및 지혈소염효과 등이 보고되고 있다.

그러나 아직까지 목질진흙버섯(Phellinus Linteus), 시자, 상실 및 관중을 이용하여 식물 바이러스에 대한 억제활성을 살펴본 예는 없다.

본 발명의 목적은 자연 생태계에서 용이하게 확보할 수 있거나 대량 생산되는 식용 및 약용 가능한 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 또는 관중으로부터 식물 바이러스 병 감염억제 활성물질을 추출, 여과하여 식물 바이러스 방제용 조성물을 제공하는데 있다.

상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 및 관중 중에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 함유하는 식물 바이러스 방제용 조성물을 제공한다.

상기에서, 식물 바이러스는 담배 모자이크바이러스(TMV), 오이모자이크바이러스(CMV), 고추마일드모틀바이러스(PMMoV), 쥬키니황반모자이크바이러스(ZYMV), 수박모자이크바이러스(WMV), 호박모자이크바이러스(WMV2), 감자바이러스 Y(PVY), 순무모자이크 바이러스 (TuMV), 메론괴저반점바이러스(MNSV), 오이녹반모자이크바이러스(CGMMV), 쥬키니 녹반 모자이크 바이러스(ZGMMV), 감자엽권바이러스(PLRV), 나리모자이크 바이러스(LMoV), 나리무병징바이러스(LSV), 오돈토그로솜링스포트바이러스(ORSV), 심비디움모자이크바이러스(CyMV), BBWV(잠두 위축바이러스), 토마토 윤점바이러스(TomRSV) 및 토마토황화괴저바이러스(TRSV) 중에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 한다.

이하 본 발명에 대하여 상세히 설명하면 다음과 같다.

본 발명은 자연 생태계에서 용이하게 확보할 수 있거나 대량 생산되는 식용 및 약용 가능한 목질진흙버섯 균사체, 시자(枾子), 상실(像實) 또는 관중(貫衆)으로부터 식물바이러스병 감염억제 활성물질을 추출, 여과하여 식물바이러스병 방제용 조성물을 제공함으로써, 효율적인 방제 및 인축무해 및 친환경적인 방제제를 제공하고자 한다.

본 발명은 목질진흙버섯(Phellinus linteus) 균사체, 감나무(Diospyros kaki) 열매인 시자, 상수리나무(Quercus acutissima) 열매인 상실 및 범고비(Dryopteris crassirhizoma)의 뿌리줄기인 관중 중에서 선택된 1종 혹은 2종 이상의 추출물을 사용하여 식물바이러스병 감염 방제제 조성물을 제조할 수 있다.

본 발명에서 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 및 관중의 추출은 열수, 메탄올, 에탄올, 에틸아세테이트, 부탄올 중에서 선택된 어느 하나 이상으로 추출하는 것이 바람직하다.

상기에서 식물 바이러스는 식물을 숙주로 하는 모든 바이러스를 의미하는데, 예를 들어 담배 모자이크바이러스(TMV), 오이모자이크바이러스(CMV), 고추마일드모틀바이러스(PMMoV), 쥬키니황반모자이크바이러스(ZYMV), 수박모자이크바이러스(WMV), 호박모자이크바이러스(WMV2), 감자바이러스 Y(PVY), 순무모자이크 바이러 스 (TuMV), 메론괴저반점바이러스(MNSV), 오이녹반모자이크바이러스(CGMMV), 쥬키니 녹반 모자이크 바이러스(ZGMMV), 감자엽권바이러스(PLRV), 나리모자이크 바이러스(LMoV), 나리무병징바이러스(LSV), 오돈토그로솜링스포트바이러스(ORSV), 심비디움모자이크바이러스(CyMV) ,BBWV(잠두 위축바이러스), 토마토윤점바이러스(TomRSV), 토마토황화괴저바이러스(TRSV) 등이 포함된다.

본 발명에서 추출물은 식물 또는 버섯균사체로부터 분리된 활성성분, 즉 식물 바이러스 감염 억제활성을 가지는 유효성분을 가지는 물질을 의미하며, 물 또는 알코올 등의 유기용매를 이용하는 추출과정에 의하여 제조된다. 추출물은 물 또는 유기용매 추출액, 이의 건조분말 또는 알코올추출물 및 열수추출물이 바람직하다.

본 발명에서 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 및 관중의 추출은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 극성용매를 사용하여 추출하는 것이 바람직하다.

본 발명에서 식물 바이러스 방제용 조성물은 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 및 관중 중에서 선택된 어느 하나 이상의 추출물을 10중량% 내지 90중량%를 함유하는 것이 바람직하다.

본 발명의 식물 바이러스 방제용 조성물은 액상제, 입상제 또는 분제의 형태로 제형화되는 것이 바람직하다.

본 발명의 식물 바이러스 방제용 조성물은 관수용, 엽면 살포용, 종자소독용 및 농기구 소독용으로 사용될 수 있다.

시자는 감의(Diospyros kaki) 과실을 채취하여 사용하는 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 떫은 감에서 항식물바이러스 활성을 나타내는 성분들이 추출되어 조성물로 이용될 수 있는데, 물 추출이 바람직하다.

상수리나무의 열매인 상실은 식물 바이러스 감염억제활성을 나타내는 성분들은 추출되어 조성물로 이용될 수 있는데 에탄올 추출물이 바람직하다.

본 발명의 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실, 관중의 추출물은 각각 단독으로 사용하거나 하나 이상의 성분을 배합하여 사용할 수 있다. 배합 사용할 경우에는 개개의 성분을 배합하여 추출하거나 개개의 성분들로부터 각각 추출한 후 혼합할 수 있으며, 바람직하게는 최적의 조건하에서 추출한 후 혼합할 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실, 관중은 물 또는 유기용매를 사용하여 추출한 후 바로 사용하거나 더욱 바람직하게는 추출물을 여과하고, 여과액을 건조하여 사용한다.

바람직한 본 발명의 추출물 제조과정은 시료를 분쇄하는 단계, 용매로 추출하는 단계, 추출액을 여과하는 단계 및 여과액을 건조하는 단계를 포함한다.

추출용매로는 물 또는 알코올 등의 유기용매를 사용하며 각 시료의 유효성분이 파괴되지 않도록 최소화된 조건에서 진행하고 열 추출 또는 냉침추출을 한다. 여과는 추출액으로부터 부유하는 고체입자를 제거하는 과정으로, 여과지, 면포 등을 이용하여 입자를 걸러 내거나 원심분리법 등을 사용할 수 있으나 이에 제한하지 않는다. 여과액을 건조하는 단계는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조 등을 포함하나 이에 제한하지 않는다. 건조공정을 통하여 수분함량을 10% 이하로 줄일 수 있으며, 또한 건조 전에 여과액을 농축기를 이용 수분 함량을 줄이는 공정을 추 가할 수 있다. 또한, 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가할 수도 있다.

본 발명은 상기 추출용매에 있어서는 물과 에탄올에 한정하는 것은 아니며, 메탄올, 부탄올, 아세톤, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름, 핵산 등의 유기용매를 사용하여 추출한 경우에도 식물 바이러스 감염억제 활성성분을 추출할 수 있다.

물 추출하는 경우, 본 발명의 조성물들에 물을 가하여 50℃ 내지 70℃에서, 2시간 내지 4시간 정도 가열하여 추출하는 것이 바람직하다. 높은 온도에서 가열하게 되면 유효성분이 파괴될 수 있고, 상기 온도보다 낮은 온도에서 가열하게 되면 혼합물의 유효성분이 완전하게 추출되지 않으므로 온도조절과 시간을 적절하게 조절하는 것이 중요하다. 본 발명에서는 목질진흙버섯, 시자를 각각 70℃에서 2시간 동안 추출하고, 불용성 물질을 원심분리하여 여과하였으며 상등액을 동결건조하여 물 추출물을 제조하였다.

유기용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 부탄올, 헥산, 메틸렌클로라이드, 클로로포름, 에틸아세테이트 등을 이용하여 실온에서 또는 가온하여 유기용매로 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 약제 유효성분의 추출 정도와 손실 정도가 차이가 날 수 있으므로 알맞은 유기용매를 선택하여 사용한다. 바람직하게는 30℃ 내지 40℃에서 12시간 내지 48시간 정도 교반처리 또는 초음파 처리하여 추출한다. 이어서 여과지를 이용하여 불용성 물질을 여과하였으며, 여과액을 감압 건조시켜 추출물을 제조하였다. 본 발명의 구체 예에서는 상실, 관중의 건조분말에 에탄올을 첨가하여 실온에서 초음파 처리하여 추출하였다. 이어서 와트 만(whatman) 여과지를 이용하여 불용성 물질을 여과하여, 여과액을 감압 건조시켜 유기용매를 완전히 증발시킨 후, 동결건조 하여 유기용매추출물을 제조하는 것이 바람직하다.

본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은 다양한 형태로 제제화할 수 있다. 제형으로는 액제, 분제, 입제, 유제, 오일제, 수화제, 도포제 등이 포함된다. 제제화에는 통상 친환경 유기농업에서 허용되는 액체담체, 고체담체, 계면활성제 및 보조제 등을 사용할 수 있다.

액체담체로는 예를 들어, 물, 식물유, 에탄올 등을 사용할 수 있다. 고체담체에는 예를 들어, 양이온점토, 벤토나이트, 카올린, 탈크, 규조토류를 포함하는 광물 분말, 젤라틴, 알긴산을 포함하는 고분자성 천연물을 이용할 수 있다. 이들 액체 담체 및 고체 담체는 1종류 또는 2종류 이상을 혼합하여 사용할 수 있다.

본 발명은 상기 식물 바이러스 방제용 조성물을 원예작물에 경엽처리, 토양처리, 침지처리, 가지절단 등 농작업 시 농기구소독에 활용하여 다수의 식물 바이러스 감염을 예방할 수 있다.

본 발명의 조성물은 비선택적 항식물바이러스 활성을 발현하기 때문에 광범위한 식물 바이러스에 적용할 수 있다. 예를 들어 담배 모자이크바이러스(TMV), 오이모자이크바이러스(CMV), 고추마일드모틀바이러스(PMMoV), 쥬키니황반모자이크바이러스(ZYMV), 수박모자이크바이러스(WMV), 호박모자이크바이러스(WMV2), 감자바이러스 Y(PVY), 순무모자이크 바이러스 (TuMV), 메론괴저반점바이러스(MNSV), 오이녹반모자이크바이러스(CGMMV), 쥬키니 녹반 모자이크 바이러스(ZGMMV), 감자엽권바이 러스(PLRV), 나리모자이크 바이러스(LMoV), 나리무병징바이러스(LSV), 오돈토그로솜링스포트바이러스(ORSV), 심비디움모자이크바이러스(CyMV), BBWV(잠두 위축바이러스), 토마토윤점바이러스(TomRSV), 토마토황화괴저바이러스(TRSV) 등이 포함된다.

본 발명은 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 및 관중 각각의 추출물을 단독 혹은 2종 이상의 추출물을 혼합하여 사용할 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시예에 의하면 상기 4종의 추출물을 혼합 제조한 경우에는 각각의 추출물을 단독으로 사용한 경우에 비하여 바이러스 감염 예방효과가 상승되는 것을 알 수 있다.

본 발명에서 식물 바이러스 감염 억제효과가 있는 상기 추출물을 일정 비율로 혼합제조하면 그 효능을 상승시킬 수 있으므로, 혼합비율은 용도에 따라 달리할 수 있다.

본 발명의 식물 바이러스 방제용 조성물은 항식물바이러스 활성을 가지므로, 예를 들어 엽면 살포제, 종자 및 농기구 소독제, 토양처리제 등으로 사용할 수 있으나, 이에 제한하지 않는다.

또한, 작물의 정식 전에 사용하기 위해서는 상기 식물체들의 1종 혹은 2종 이상의 분말을 제조하여 직접 살포하는 방법도 사용될 수 있다.

식물체의 종류, 추출방법, 추출용매, 액상 및 입상제제 등의 제조방법은 작물의 특성 및 사용조건 등에 따라 달리할 수 있으며, 상기 내용에 국한하는 것은 아니다.

또한, 상기 식물 추출성분의 작물체 흡수 및 효과를 증진시키기 위하여 확산제 및 침투제, 혹은 계면활성제와도 혼용이 가능하다. 본 발명은 실시예에 적시된 제조공정에 국한하지 않으며, 다른 방법으로도 제조가 가능하다.

이하, 본 발명의 내용을 실시예를 통하여 더욱 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명의 예시일 뿐 본 발명의 범위가 이에 의하여 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 목질진흙버섯 (Phellinus Linteus, 상황버섯) 균사체의 추출물 제조 및 효능검정

목질진흙버섯(Phellinus Linteus) 균사체는 (주)비아이지에서 대한민국 특허기술(KR225049, KR204982, KR204983, KR225050, KR204984)로 생산한 제품을 구입하여 사용하였다. 추출방법은 건조된 균사체를 분쇄기를 사용하여 분말화 한 후 1kg을 여과주머니에 넣고 7L의 증류수를 첨가하여 70℃에서 2시간 동안 2회 반복 추출한 후, 여과하여 하여 불용성 물질이 제거된 추출액만을 얻었다. 얻어진 추출액은 동결건조하여 분말로 제조하였다. 이 추출물을 다시 물로 농도별로 희석하여 하기 실험과 같이 약해 시험, 담배모자이크바이러스(TMV) 감염저해 활성을 각각 확인하였다.

목질진흙버섯 균사체 추출물의 약해 시험을 수행한 결과는 표 1과 같다. 이때 추출물은 상기에서 얻은 목질진흙버섯 추출물의 건조중량 g당 각각 200배, 400 배 및 600배로 물로 희석한 것을 사용하였다. 상기와 같이 희석한 추출물을 담배, 토마토 및 상추의 유묘에 주당 50㎖씩 관주 및 엽면 처리하였다. 각 추출물은 단회 처리한 후 10일 동안 식물의 생육상태를 무처리구와 비교 관찰하였다. 표 1의 결과에서처럼 목질진흙버섯 균사체 추출물은 농도에 상관없이 각 유묘의 생육에 장해를 주지 않는 것으로 확인되었다.

<표 1> 목질진흙버섯 균사체 열수 추출물의 약해 시험

처리군	작물 및 희석농도(희석배수)
	담배			토마토			상추
	200배	400배	600배	200배	400배	600배	200배	400배	600배
목질진흙버섯 추출물	-	-	-	-	-	-	-	-	-
무 처리	-	-	-	-	-	-	-	-	-

-: 생육장애 없음

목질진흙버섯 균사체의 열수 추출물의 TMV(담배모자이크 바이러스) 감염저해활성은 TMV 감염시 국부병반을 형성하는 담배인 니코티나 글루티노사(Nicotiana glutinosa)를 이용하여 조사하였다. 바이러스 접종원은 TMV에 감염된 삼선(Samsun) 담배의 잎을 건조한 후 중량의 200배 되는 0.1M인산 완충액을 첨가 후, 멸균된 막자사발(乳鉢)로 갈고 그 마쇄액을 여과지(whatman)로 여과하여 최종 4,000배 되도록 희석 후 사용하였다. 바이러스 접종에 앞서 충분한 감염을 유도하기 위해 200메쉬 카보런덤(carborundum)을 니코티나 글루티노사(Nicotiana glutinosa) 잎에 뿌리고, 동일한 양의 바이러스 접종액을 멸균한 면봉에 묻혀서 니코티나 글루티노사(Nicotiana glutinosa) 잎의 반엽(半葉)에 문질러 감염시켰다. 3∼4일이 경과 되면 바이러스가 접종된 반엽에는 TMV 감염에 의한 식물체의 반응으로 접종엽에 갈색 반점(국부병반)이 형성(100∼200개/반엽)된다. 상술한 실험법을 이용하여 목질진흙버섯 균사체 추출물을 농도별로 희석하여, 니코티나 글루티노사 잎의 반엽(半葉)에 담배 모자이크바이러스(TMV) 접종액과 혼합처리하거나, 추출물을 바이러스 접종보다 24시간 먼저 니코티나 글루티노사 잎의 반엽(半葉)에 분무한 후, 그 부위에 TMV를 접종하는 전처리법을 실시하고, 이 추출물의 감염억제율을 평가하기 위한 대조구로서 니코티나 글루티노사 나머지 반엽(半葉)에는 추출물을 분무살포하지 않고 동일한 농도의 TMV접종액 만으로 바이러스를 감염시켜 25℃ 온실에서 3∼4일 배양하게 되면, 추출물이 처리된 니코티나 글루티노사 반엽과 반대쪽의 대조구 반엽에 생성된 국부병반수를 비교하여 감염저해율을 산출하였다. 이 실험을 5 반복으로 수행하며, 그 결과는 표 2와 같이 전처리 시험에서 91.0±1.5%, 혼합처리시험에서 92.0±1.5의 탁월한 TMV 감염을 저해효과가 있는 실험 결과를 얻었다.

<표 2> 목질진흙버섯 균사체 열수 추출물의 TMV 감염 저해율

추출물 처리방법	추출물 희석농도(%)	감염저해율(%)
혼합처리	0.5	92.0±1.5
전 처리	0.5	91.0±1.5
무 처리	-	0.0

<실시 예 2> 시자 추출물 제조 및 효능검정

강원도 강릉지역의 자생종 감(Diospyros kaki)의 미성숙과를 채취, 건조하여 사용하였다. 추출방법은 분쇄기를 사용하여 분말화 한 후 1kg을 여과주머니에 넣고 7L의 증류수를 첨가하여 70℃에서 3시간 추출하는 공정을 2회 반복 수행한 후, 여과 또는 원심분리하여 추출액만을 얻었다. 얻어진 추출액은 동결건조하여 분말로 제조하였다. 이 추출물을 다시 물로 농도별로 희석하여 하기 실험과 같이 약해 시험, 담배모자이크바이러스(TMV) 감염저해 활성을 각각 확인하였다.

시자 추출물의 약해 시험을 수행한 결과는 표 3과 같다. 이때 추출물은 상기에서 얻은 추출물의 건조중량 g당 각각 200배, 400배 및 600배로 물로 희석한 것을 사용하였다. 상기와 같이 희석한 추출물을 담배, 토마토 및 상추의 유묘에 주당 50㎖씩 관주 및 엽면 처리하였다. 각 추출물은 단회 처리한 후 10일 동안 식물의 생육상태를 무처리구와 비교 관찰하였다. 표 3의 결과에서처럼 시자 추출물은 농도에 상관없이 각 유묘의 생육에 장해를 주지 않는 것으로 확인되었다.

<표 3> 시자 열수 추출물의 약해 시험

처리군	작물 및 희석농도(희석배수)
	담배			토마토			상추
	200배	400배	600배	200배	400배	600배	200배	400배	600배
시자 추출물	-	-	-	-	-	-	-	-	-
무 처리	-	-	-	-	-	-	-	-	-

-: 생육장애 없음

시자 열수 추출물의 TMV 감염저해율 평가는 <실시 예 1>과 동일한 방법으로 수행하였으며, 그 결과는 표3에 나타내었다. 담배(N. glutinosa)의 반엽(半葉)에 시자 추출물 분말을 증류수에 0.5%로 희석하여 처리한 경우 85.0±1.4∼89.0±1.5%의 감염억제 효과를 나타냈다.

<표 4> 시자 열수 추출물의 TMV 감염억제율

추출물 처리방법	추출물 희석농도(%)	감염저해율(%)
혼합처리	0.5	89.0±1.5
전 처리	0.5	85.0±1.4
무 처리	-	0.0

<실시 예 3> 상실의 추출물 제조 및 효능검정

강원도 홍천군에서 수집한 상수리나무(Diospyros kaki)의 열매인 상실(像實)을 이용하여 TMV 감염억제활성 검정을 실시하였다. 추출방법은 분쇄기를 사용하여 분말화 한 후 1kg을 7리터의 에탄올을 가한 다음, 40℃에서 3시간 동안 초음파 추출한 후, 액체성분을 완전 증발시킨 추출물을 수득하였다. 얻어진 추출액은 동결건조 하여 분말로 제조하였다. 이 추출물 분말을 다시 물로 농도별로 희석하여 약해 시험, 담배모자이크바이러스(TMV) 감염저해 활성을 확인하였다.

상실 추출물의 약해 시험을 수행한 결과는 표 5와 같다. 이때 추출물은 상기에서 얻은 추출물의 건조중량 g당 각각 200배, 400배 및 600배로 물로 희석한 것을 사용하였다. 상기와 같이 희석한 추출물을 담배, 토마토 및 상추의 유묘에 주당 50㎖씩 관주 및 엽면처리하였다. 각 추출물은 단회 처리한 후 10일 동안 식물의 생육상태를 무처리구와 비교 관찰하였다. 표 5의 결과에서처럼 상실 추출물은 농도에 상관없이 각 유묘의 생육에 장해를 주지 않는 것으로 확인되었다.

<표 5> 상실의 에탄올 추출물의 약해 시험

처리군	작물 및 희석농도(희석배수)
	담배			토마토			상추
	200배	400배	600배	200배	400배	600배	200배	400배	600배
상실 추출물	-	-	-	-	-	-	-	-	-
무 처리	-	-	-	-	-	-	-	-	-

-: 생육장애 없음

상실 메탄올 추출물의 TMV(담배모자이크 바이러스) 감염저해율 평가는, <실 시 예 1>과 동일한 방법으로 수행하였으며, 그 결과는 표6 나타내었다. 담배(N. glutinosa)의 반엽(半葉)에 상실 추출물 분말을 0.5%로 희석하여 처리한 경우 혼합처리시험에서는 84.0±2.5% 및 전처리시험에서는 78.0±1.8% 감염 억제효과를 보였다.

<표 6> 상실 메탄올추출물의 TMV 감염 억제 효과

추출물 처리방법	추출물 희석농도(%)	감염저해율(%)
혼합처리	0.5	84.0±2.5
전 처리	0.5	78.0±1.8
무 처리	-	0.0

<실시 예 4> 관중의 추출물 제조 및 효능검정

관중(Diospyros kaki)은 한약상에서 보증된 것을 구입하여 사용하였다. 추출방법은 분쇄기를 사용하여 분말화 한 후 1kg을 6리터의 에탄올을 가한 다음, 40℃에서 3시간 동안 초음파 추출하는 공정을 2회 반복 실시한 후, 액체성분을 완전 증발시킨 추출물을 수득하였다. 얻어진 추출액은 동결건조하여 분말로 제조하였다. 이 추출물 분말을 다시 물로 농도별로 희석하여 하기 실험과 같이 약해 시험, 담배모자이크바이러스 감염저해 활성을 각각 확인하였다.

관중 추출물 분말을 농도별로 희석(200배, 400배, 600배)하여 담배, 토마토 및 상추에 관수 및 엽면살포한 결과는 표 7과 같다. 관중 추출물은 3 작물 모두에서 대조구와 유사한 생육상태를 보였다.

관중 추출물의 약해 시험을 수행한 결과는 표 5와 같다. 이때 추출물은 상기에서 얻은 추출물의 건조중량 g당 각각 200배, 400배 및 600배로 물로 희석한 것 을 사용하였다. 상기와 같이 희석한 추출물을 담배, 토마토 및 상추의 유묘에 주당 50㎖씩 관주 및 엽면처리하였다. 각 추출물은 단회 처리한 후 10일 동안 식물의 생육상태를 무처리구와 비교 관찰하였다. 표 5의 결과에서처럼 관중 추출물은 농도에 상관없이 각 유묘의 생육에 장해를 주지 않는 것으로 확인되었다.

<표 7> 관중 에탄올 추출물의 약해 시험

처리군	작물 및 희석농도(희석배수)
	담배			토마토			상추
	200배	400배	600배	200배	400배	600배	200배	400배	600배
관중 추출물	-	-	-	-	-	-	-	-	-
무 처리	-	-	-	-	-	-	-	-	-

-, 생육장애 없음

관중 에탄올 추출물의 TMV 감염저해율 평가는, 감염저해율 평가는 <실시 예 1>과 동일한 방법으로 수행하였으며, 그 결과는 표8 에 나타내었다. 담배(N. glutinosa)의 반엽(半葉)에 관중 에탄올 추출물을 0.5%로 희석하여 처리한 경우 혼합처리시험에서는 88.0±1.5% 및 전처리시험에서는 85.0±1.8% 감염 억제 효과를 보였다.

<표 8> 관중 에탄올추출물의 TMV 감염 억제 효과

추출물 처리방법	추출물 희석농도(%)	감염저해율(%)
혼합처리	0.5	88.0±1.5
전 처리	0.5	85.0±1.8
무 처리	-	0.0

<실시 예 5> 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 및 관중 추출액의 혼합 조성물 제조 및 그 효능검정

목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 및 관중 추출물을 혼합 제조하여 작물의 약해 시험 및 TMV 감염억제효과 검정을 실시하였다. 즉 각각의 시료 1kg을 분쇄기로 분말화 하였다. 목질진흙버섯 균사체 분말 1kg 및 시자 분말 1kg을 여과주머니에 넣고 15리터의 물을 채운 후 70℃에서 2시간 열수 추출을 2회 반복한 다음 여과하여 불용성 물질을 제거한 여과액 동결건조하여 추출물을 얻었다. 또한, 상실 1kg 및 관중 1kg의 분말에 에탄올 15리터를 가한 다음, 40℃에서 3시간 동안 초음파 추출을 2회 반복한 다음, 여과하고 감압농축하여 액체성분을 완전 증발시킨 추출물을 수득하였다. 얻어진 추출액은 동결건조하여 분말로 제조하였다. 상기 목질진흙버섯 균사체+시자 추출물과 상실+관중 추출물을 각각 7:3 중량비율로 배합하여 혼합조성물을 조제한 후, 물로 농도별로 희석하여 하기 실험과 같이 약해 시험, 담배모자이크바이러스 감염저해 활성을 각각 확인하였다.

(1) 약해 시험

4종 추출물 혼합조성물을 농도별로 건조중량 g당 200배, 400배, 600배 물에 희석하여 담배, 토마토 및 상추에 관수 및 엽면살포한 결과는 표 9와 같다. 혼합조성물은 3 작물(담배, 토마토, 상추) 모두에서 무처리구와 유사한 생육상태를 보여, 약해가 없음이 확인되었다.

<표 9> 4종 추출물 혼합조성물의 약해 시험

처리군	작물 및 희석농도(희석배수)
	담배			토마토			상추
	200배	400배	600배	200배	400배	600배	200배	400배	600배
4종 추출물 혼합 조성물	-	-	-	-	-	-	-	-	-
무 처리	-	-	-	-	-	-	-	-	-

-: 생육장애 없음

2. TMV 국부 병반 억제 효과

4종 추출물 혼합조성물의 TMV 감염저해율 평가는, 전술한 <실시 예 1>과 동일한 방법으로 실시하여 방제효과를 확인하였으며, 그 결과는 <표 10>에 나타내었다. 담배(N. glutinosa)의 반엽(半葉)에 4종 추출물 혼합조성물을 0.5%로 희석하여 처리한 경우 혼합처리시험에서 98.0±2.0% 및 전처리시험에서 98.0±2.0%로 탁월한 감염억제효과를 보였다 (도 1).

<표 10> 4종 추출물 혼합조성물의 TMV 감염 억제 효과

추출물 처리방법	추출물 희석농도(%)	감염 저해율(%)
혼합처리	0.5	98.0±2.0
전 처리	0.5	98.0±2.0
무 처리	-	0.0

3. TMV 전신병징 억제 효과

TMV에 대해 전신에서 모자이크 병징을 보이는 담배품종인 samsun 유묘에서 4종 추출물의 혼합조성물의 감염저해 효과를 조사하였다. 즉 4-5 엽기의 유묘 1주당 5㎖(시험구 당 20주)의 0.5% 혹은 0.2% 혼합조성물 희석액을 잎 표면에 살포하고 온실조건에서 24시간 방치한 후 200메쉬 카보런덤(carborundum)을 첨가한 바이러스액에 오염된 손으로 담뱃잎의 이면을 감염시키거나 또는 면봉에 바이러스액을 흡수 시켜 담뱃잎 표면을 감염시켰다. 음성대조구로는 증류수액을 사용하였다. 바이러스접종 2주 후부터 3주까지 모자이크 병징을 보이는 개체를 조사하고 음성대조구와 비교하여 방제효과를 산정하였다. 그 결과 표 11과 같이 표면접종시 3주 후의 90%의 감염 예방효과를 보였으며, 이면 접종 시 55%의 발병 저해효과를 나타냈다.

<표 11> 4종 추출물 혼합조성물의 TMV 전신감염 기주식물(Samsun 담배)에서 TMV 발병 저해 효과

처리액	추출물 희석농도(%)	접종 3주 후 발병저해효과 (%)
		표면 접종시	이면 접종시
4종 추출물 혼합조성물	0.5	95.0	65.0
	0.2	85.0	50.0
대조구	-	0.0	0.0

4. ZYMV 전신병징 억제효과

쥬키니 황화 모자이크 바이러스(ZYMV)에 대해 전신에서 모자이크 병징을 보이는 호박유묘에서 4종 추출물의 혼합조성물의 감염저해효과를 조사하였다. 즉 4-5 엽기의 유묘 1주당 5㎖(시험구 당 20주)의 0.5% 혹은 0.2% 혼합조성물 희석액을 잎 표면에 살포하고 온실조건에서 24시간 방치한 후 200메쉬 카보런덤(carborundum)을 첨가한 바이러스액에 오염된 손으로 호박잎의 이면을 감염시키거나 또는 면봉에 바이러스액을 흡수시켜 호박잎 표면을 감염시켰다. 음성대조구로는 증류수액을 사용하였다. 바이러스접종 2주 후부터 3주까지 모자이크 병징을 보이는 개체를 조사하고 음성대조구와 비교하여 방제효과를 산정하였다. 그 결과 표 12과 같이 표면접종시 3주 후의 100%의 감염 예방효과를 보였으며 이면접종시 70%의 매우 우수한 효과가 있음이 입증되었다.

<표 12> 4종 추출물 혼합조성물의 TMV 전신감염 기주식물(Samsun 담배)에서 TMV 발병 저해 효과

처리액	추출물 희석농도(%)	접종 3주 후 발병저해효과 (%)
		표면 접종 시	이면 접종 시
4종 추출물 혼합조성물	0.5	100.0	70.0
	0.2	90.0	55.0
대조구	-	0.0	0.0

5. 오이재배 포장에서 CGMMV 방제효과

오이, 수박 등 박과류 재배포장에서 오이녹반 모자이크 바이러스병(CGMMV) 감염은 이식 작업시에 발생하는 경우가 많다. 이 시기에 있어 4종 추출물 혼합조성물의 CGMMV 감염 예방효과를 조사하였다. 4종 추출물 혼합조성물은 0.5% 희석액을 분무살포 또는 침지 처리하였으며 CGMMV접종은 이식 작업자의 손으로 실시하였다. 분무살포는 이식 작업 1일 전 오이 유묘 20주에 0.5% 혼합조성물을 모종 전체에 고르게 분무살포 하였으며, 침지처리는 이식 작업 당일 0.5% 혼합조성물에 유묘를 담근 후 이식 작업을 실시하였다. CGMMV접종은 이식 작업 후 실시하였으며 CGMMV 접종액에 작업자의 손을 담근 후 오염된 손으로 오이의 잎을 접종하였다. 음성대조구로는 증류수액을 처리하였다. 각 시험구는 오이 유묘 20주를 3회 반복으로 실시하였다. 그 결과 표 13에서처럼 엽면 살포시 2주 후 96.7%, 4주 후 93.3%, 침지 처리 시 2주 후 96.7%, 4주 후 95.0%의 방제효과를 나타냈다.

<표 13> 4종 식물 추출 혼합조성물의 오이 이식작업시 CGMMV 방제효과

처리내용	방제효과(%)
	접종 2주 후	3주 후	4주 후
4종 추출물 혼합조성물 엽면 살포	96.7	95.0	93.3
4종 추출물 혼합조성물 침지	96.7	96.7	95.0
대조구	0	0	0

6. 오이재배 포장에서 CGMMV 뿌리 감염 저해효과

CGMMV의 또다른 주요한 감염은 토양 내 잔존하는 CGMMV 전염원에 의하여 이루어진다. 따라서 4종 추출물 혼합조성물를 이용한 CGMMV의 뿌리 감염저해효과를 조사하였다. 0.5% 혼합조성물 희석액에 오이 유묘의 뿌리를 담근 후 CGMMV 이병엽 분말이 처리된 포트에 이식하여 CGMMV감염을 유도하였다. 오이에서 증식된 CGMMV 이병엽 분말은 1 포트(직경 10cm, 높이 9cm) 1 식혈에 0.5g를 처리하였으며, 접종 4주 후 발병저해효과를 조사하였다. 음성대조구로는 증류수액을 처리하였다. 그 결과 표14와 같이 4종 추출물 혼합조성물 처리구에서 접종 4주 후 조사된 20주의 유묘 중 3주에서만 발병하여 85.0%의 CGMMV 뿌리감염 저해효과를 보였다.

<표 14> 4종 추출물 혼합조성물의 오이 이식 작업시 CGMMV 방제효과

처리	4주 후 발병주수	조사주수	감염 예방효과
4종 식물 추출물의 혼합조성물	3	20	85.0
대조구	18	20	10.0

이상에서 살펴본 바와 같이 4종의 추출물을 혼합 제조한 경우에는 각각의 추출물을 단독으로 사용한 경우에 비하여 바이러스 감염 예방효과가 상승되는 것을 알 수 있었다.

이상에서 살펴본 바와 같이 본 발명의 목질진흙버섯 균사체, 시자, 상실 및 관중의 추출물을 유효성분으로 함유하는 식물바이러스 방제용 조성물은 다양한 식물 바이러스에 대하여 탁월한 항바이러스효과를 갖는다. 이러한 효과는 상기의 혼합 조성물을 제형화하여 사용할 때 여러 식물 바이러스에 대한 감염 억제효과가 더욱 상승하여 식물 바이러스 예방이 가능하다. 또한, 본 발명에 따른 조성물은 천연물 유래의 물질로써 독성이 없으며, 다양한 식물 바이러스에 대하여 탁월한 효과를 나타내므로, 식물 바이러스 감염방제제로 유용하게 이용될 수 있다.

Claims (5)

1. 목질진흙버섯 균사체 추출물, 시자 추출물, 상실 추출물 및 관중 추출물을 함유하는 식물 바이러스 방제용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 식물 바이러스는 담배 모자이크바이러스(TMV), 오이모자이크바이러스(CMV), 고추마일드모틀바이러스(PMMoV), 쥬키니황반모자이크바이러스(ZYMV), 수박모자이크바이러스(WMV), 호박모자이크바이러스(WMV2), 감자바이러스 Y(PVY), 순무모자이크 바이러스 (TuMV), 메론괴저반점바이러스(MNSV), 오이녹반모자이크바이러스(CGMMV), 쥬키니 녹반 모자이크 바이러스(ZGMMV), 감자엽권바이러스(PLRV), 나리모자이크 바이러스(LMoV), 나리무병징바이러스(LSV), 오돈토그로솜링스포트바이러스(ORSV), 심비디움모자이크바이러스(CyMV), BBWV(잠두 위축바이러스), 토마토윤점바이러스(TomRSV) 및 토마토황화괴저바이러스(TRSV) 중에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 식물 바이러스 방제용 조성물.
3. 제1항에 있어서, 목질진흙버섯 균사체 추출물, 시자 추출물, 상실 추출물 및 관중 추출물은 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올, 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 극성용매에 가용한 추출물인 것을 특징으로 하는 식물 바이러스 방제용 조성물.
4. 제1항에 있어서, 식물 바이러스 방제용 조성물은 목질진흙버섯 균사체 추출물, 시자 추출물, 상실 추출물 및 관중 추출물을 10중량％ 내지 90중량％를 함유한 것을 특징으로 하는 식물 바이러스 방제용 조성물.
5. 제1항에 있어서, 식물 바이러스 방제용 조성물은 액상제, 입상제 또는 분제의 형태로 제형화되는 것을 특징으로 하는 식물 바이러스 방제용 조성물.

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