KR100804105B1 - Moisture Artificial Tear Including Antimicrobial Mineral - Google Patents
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Abstract
본 발명은 항균성 미네랄을 함유한 보습 인공 눈물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 항균성 미네랄을 다량 함유한 해양 심층수를 용제로 포함함으로써, 항균성, 보습성 및 안전성이 개선된 보습 인공 눈물에 관한 것이다.The present invention relates to a moisturizing artificial tears containing antimicrobial minerals, and more particularly, to a moisturizing artificial tears having improved antimicrobial activity, moisturizing property and safety by including a deep seawater containing a large amount of antimicrobial minerals as a solvent.
해양 심층수, 인공 눈물 Deep ocean water, artificial tears
Description
도 1 및 도 2는 실험예 2의 종래 인공 눈물과 본 발명의 인공 눈물 간의 세포 독성 제거 효과 결과를 도시한 그래프. 1 and 2 are graphs showing the results of cytotoxicity removal between the artificial tears of Experimental Example 2 and the artificial tears of the present invention.
도 3 및 도 4는 실험예 3의 종래 인공 눈물과 본 발명의 인공 눈물 간의 소 망막에 대한 보습력 측정 결과를 도시한 그래프.3 and 4 are graphs showing the results of measuring the moisturizing power of the bovine retina between the conventional artificial tears of Experimental Example 3 and the artificial tears of the present invention.
도 5 및 도 6은 실험예 4의 종래 인공 눈물과 본 발명의 인공 눈물 간의 피부 보습력 측정 결과를 도시한 그래프.5 and 6 are graphs showing the results of skin moisturizing power between the artificial tears of Experimental Example 4 and the artificial tears of the present invention.
본 발명은 항균성 미네랄을 다량 함유한 해양 심층수를 용제로 포함함으로써, 항균성과 보습성 및 안전성이 개선된 보습 인공 눈물에 관한 것이다.The present invention relates to a moisturizing artificial tears having improved antimicrobial properties, moisturizing properties and safety by including deep sea water containing a large amount of antimicrobial minerals as a solvent.
해양 심층수는 햇빛이 도달하지 않는 수심 200m 이하에서 채수한 해수를 의미하며, 표층수와 20oC 이상의 온도 차이가 나기 때문에 물과 기름처럼 서로 섞이지 않는다. 그린란드 심해로부터 흘러온 해양 심층수는 연중 수온 변화가 거의 없어 저온 안전성을 가질 뿐만 아니라, 햇빛이 닿지 않으므로 광합성이 일어나지 않아 무기 영양염을 많이 포함하고 있는데, 특히 나트륨, 칼슘 및 마그네슘과 같은 미네랄은 사람의 혈액, 체액 및 양수와 매우 유사한 농도로 함유되어 있다.Deep sea water refers to seawater that is collected at a depth of less than 200 m without sunlight reaching, and does not mix with water and oil because there is a temperature difference of more than 20 o C from surface water. Deep sea water from the Greenland deep water is not only stable at low temperatures due to little temperature change throughout the year, but also contains a lot of inorganic nutrients because photosynthesis does not occur because sunlight does not reach it. Especially minerals such as sodium, calcium, and magnesium contain human blood, Concentrates very similar to body fluids and amniotic fluid
또한, 해양 심층수는 인공 물질로 오염되지 않아 분해해야 할 유기 물질이나 병원균이 적기 때문에 세균 번식이 적을 뿐만 아니라, 각종 효소들의 작용으로 항산화 물질이 다량 함유되어 있어 고항균성 및 보습력이 우수한 것으로 알려져 있다.In addition, since deep sea water is not contaminated with artificial substances, there are few organic substances or pathogens to be decomposed, and thus, bacteria are less likely to grow, as well as a large amount of antioxidants are known to have high antibacterial and moisturizing properties due to the action of various enzymes.
현재 여러 나라에서 해양 심층수로부터 염화나트륨(NaCl)을 제거한 다음 음료나, 식품 및 화장품 등에 이용하기 위한 다양한 연구가 이루어지고 있다. Currently, various studies have been conducted to remove sodium chloride (NaCl) from deep sea water and to use it in beverages, foods, and cosmetics.
한편, 경제 발전에 따른 급격한 산업 발달로 인하여 공해 물질이 증가하고, 컴퓨터 등의 사용 시간이 증가하면서 눈에 피로도도 따라 증가하고 있다. On the other hand, due to the rapid industrial development due to the economic development, the pollution material increases, and as the use time of the computer, etc. increases, the eye fatigue increases.
눈물은 하루 종일 일정량을 지속적으로 생성되어 안구 전면에 눈물막을 형성함으로써, 눈을 부드럽게 윤활 시켜 눈의 피로도를 낮출 뿐만 아니라, 동시에 살균 작용의 역할을 수행한다. The tears are continuously produced in a certain amount throughout the day to form a tear film on the front of the eye, so as to gently lubricate the eyes to reduce eye fatigue and at the same time play a role of sterilization.
하지만, 공해나, 약물 복용 또는 안구 및 그 주위의 외상 등이 원인이 되어 분비되는 눈물의 양이 부족해 지거나, 눈물 성분이 변동하여 눈물이 빨리 건조되면서 안구 건조증과 같은 증상이 일어난다. 이러한 현상은 10대에서 50%, 20대에서 83%, 30대 이상에서 95.5%로 증가하는 추세이다. 즉, 나이가 들어감에 따라 눈물 생성이 줄어 안구 건조증이 생기는 경우가 다반사고, 폐경기 이후의 여성에게서는 더 빈번하게 발생한다.However, due to pollution, drug use, or eyeballs and trauma around them, the amount of tears secreted is insufficient, or the tear component is rapidly dried, causing symptoms such as dry eye syndrome. This trend is increasing to 50% in the teens, 83% in the twenties, and 95.5% in the thirties and above. In other words, as the age of the tear production decreases dry eye syndrome is a common occurrence, more often in postmenopausal women.
이를 개선하기 위해 개발된 인공 눈물은 눈물 부족 및 점액 부족으로 인한 안구 건조증을 해소하고, 하드 및 가스 투과성 렌즈(RGP lens) 착용 시 눈의 습윤 상태를 유지하여 착용감을 증진시킨다. The artificial tears developed to improve this relieve dry eye due to lack of tears and lack of mucus, and improve the fit by keeping the eyes wet when wearing hard and gas permeable lenses (RGP lenses).
통상의 인공 눈물은 정제수를 용제(base)로 사용하기 때문에, 점안액을 안구에 떨어뜨릴 때 약제를 각막 위에 점착시키기 어렵다. 따라서, 윤활제, 완충제, pH 조절제, 안정화제 또는 보존제등의 화학 성분을 추가로 포함해야 한다.Since conventional tears use purified water as a base, it is difficult to adhere drugs onto the cornea when dropping eye drops. Therefore, it should further comprise chemical components such as lubricants, buffers, pH adjusters, stabilizers or preservatives.
하지만, 상기 화학 성분들은 세포 독성을 가지고 있기 때문에, 사용하는 환자에 따라 찌르는 듯한 통증이나 작열감, 충혈, 유루, 시야 흐림 등의 현상이 종종 발생한다. However, since the chemical components are cytotoxic, the patient often uses a stinging pain, burning sensation, hyperemia, redness, blurred vision, and the like.
더욱이, 일부 시판되고 있는 제품에서 세균의 증식을 막기 위해 사용한 보존제에 의해 세포 증식이 저해되는 경우가 있다고 밝혀진바 있다(인공 누액과 식염수의 세포 증식 억제 효과에 관한 연구: 대한시과학회지 2(1), 2000년). 미국의 경우, 미국 약전 [US Pharmacopoeia(USP)]나 미국 식약청 [Federal Food Drug Administration(FDA)]에서 약품에 사용되는 보존제는 접촉하는 조직에 대해 독성이 없어야 한다고 규정하고 있으며, 연방 등록 제349조에 의하면 처방 없이 판매하는 안과용 약 중에 윤활제는 하기 표 1에 나타낸 물질 중에서 3개 이하의 물질만을 선택하여 조합해야 한다고 규정하고 있다.Furthermore, some commercially available products have been shown to inhibit cell proliferation by preservatives used to prevent bacterial growth. (A study on the effects of artificial tears and saline on cell proliferation: Journal of Korean Ophthalmological Society 2 (1) , 2000). In the United States, the US Pharmacopoeia (USP) or the US Food and Drug Administration (FDA) mandate that preservatives used in medicines must not be toxic to the tissues that come into contact. According to the prescription that ophthalmic drugs are sold without a prescription that the lubricant should be selected from only three or less of the substances shown in Table 1 below.
[표1] 안과용 윤활제 [Table 1] Ophthalmic lubricant
통상의 인공 눈물은 눈에 직접 점안하는 약제이므로 각막이나 결막에 미치는 독성이 없어야 한다. 따라서, 전술한 바와 같은 문제점등을 개선하면서, 항균성과 보습성 및 안전성이 개선된 인공 눈물의 제조가 시급하다.Ordinary artificial tears are direct eye drops, so they should not be toxic to the cornea or conjunctiva. Therefore, while improving the problems as described above, it is urgent to manufacture artificial tears with improved antimicrobial properties, moisturizing properties and safety.
본 발명은 항균성, 보습성 및 안전성이 개선된 인공 눈물을 제조하기 위하여 안출된 것으로서, 항균성 미네랄을 다량 함유한 해양 심층수를 용제로 포함하는 보습 인공 눈물을 제공하는 것을 목적으로 한다.The present invention has been made to produce artificial tears with improved antimicrobial, moisturizing and safety, and an object of the present invention is to provide a moisturizing artificial tear containing a deep seawater containing a large amount of antimicrobial minerals as a solvent.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 정제수 대신 항균성 미네랄을 다량 함유한 해양 심층수를 용제로 포함하는 보습 인공 눈물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a moisturizing artificial tear containing a deep sea water containing a large amount of antimicrobial minerals as a solvent instead of purified water.
상기 해양 심층수는 수심 1,200m에서 직접 채수한 원수로부터 역삼투압법이나 전기 투석법을 이용하여 염화나트륨 또는 다양한 미네랄 성분 함량을 조절한 투과수를 이용하는데, 바람직하게는 염화나트륨의 최종 함량이 전체 해양 심층수 100 중량%에 대하여 0.5~1.0 중량%으로 조절된 투과수를 사용한다. The deep sea water uses permeate obtained by adjusting sodium chloride or various mineral components by reverse osmosis or electrodialysis from raw water directly collected at a depth of 1,200 m. Preferably, the final content of sodium chloride is 100 wt. Permeate adjusted to 0.5% to 1.0% by weight is used.
이때 염화나트륨의 최종 함량이 상기 임계치를 벗어나는 경우, 본 발명의 인공 눈물은 누액(淚液)과 등장성(等張性)을 가질 수 없으므로 안전성이 낮다. At this time, if the final content of sodium chloride is out of the above threshold, the artificial tears of the present invention is low in safety because it can not have tear and isotonicity.
또한, 본 발명의 인공 눈물은 역삼투압법 또는 전기투석법을 이용하여 누액과 동일한 미네랄 성분을 포함하면서, pH 6.5~7.5의 값을 유지하도록 조절할 수 있다. 특히, 본 발명의 인공 눈물은 상기 방법에 의해 SiO2의 함량을 조절하여 누액과 동일한 점도를 부여할 수 있다.In addition, the artificial tear of the present invention can be adjusted to maintain a value of pH 6.5 ~ 7.5 while including the same mineral component as the tear fluid by using reverse osmosis or electrodialysis. In particular, the artificial tear of the present invention can give the same viscosity as the tear fluid by adjusting the content of SiO 2 by the above method.
본 발명의 인공 눈물은 따로 규정이 없는 한 일정량을 취하여 기밀 용기에 충전함으로써, 오염을 방지한다.Artificial tears of the present invention, unless otherwise specified, take a certain amount and fill in an airtight container, thereby preventing contamination.
한편, 본 발명의 인공 눈물은 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 인체에 무해한 배합 성분을 더 포함할 수도 있다. On the other hand, artificial tears of the present invention may further comprise a compounding ingredient harmless to the human body within the range that does not impair the purpose and effect.
상기 배합 성분은 특별히 한정되지는 않으나, 예를 들면 안정화제로 공지된 하이드록시프로필메틸셀룰로오스(hydroxyl propyl methyl cellulose)나, 방부제로 통상적으로 공지된 벤잘코늄 클로라이드(benzalkonium chloride)등을 추가로 더 포함하여 제조할 수 있다.The compounding component is not particularly limited, but further includes, for example, hydroxypropyl methyl cellulose known as a stabilizer, and benzalkonium chloride commonly known as a preservative. It can manufacture.
상기 하이드록시프로필메틸셀룰로오스는 해양 심층수 100중량부에 대해 약 0~0.7중량부로 포함된다. 상기 하이드록시프로필메틸셀룰로오스의 함량이 0.7중량부 이상이면 세포 독성을 발생시킨다.The hydroxypropyl methyl cellulose is included in about 0 to 0.7 parts by weight based on 100 parts by weight of deep sea water. When the content of the hydroxypropyl methyl cellulose is 0.7 parts by weight or more, cytotoxicity is generated.
또한, 상기 벤젤코늄 클로라이드는 해양 심층수 100중량부에 대해 약 0~0.02중량부로 포함된다. 상기 벤젤코늄 클로라이드의 함량이 0.02중량부 이상이면 세포 독성을 발생시킨다.In addition, the benzelconium chloride is included in about 0 to 0.02 parts by weight based on 100 parts by weight of deep sea water. If the content of the benzelkonium chloride is 0.02 parts by weight or more, cytotoxicity is generated.
한편, 시중에서 판매되는 인공 눈물은 멸균 정제수에 등장화제인 염화나트륨이나, 윤활제, 완충제, pH 조절제, 안정화제 또는 보존제등의 화학 성분을 다량 포함한 생리식염주사액 등을 용제로 사용하기 때문에, 세포 독성이나, 알러지 등을 발생시킨다. On the other hand, commercially available artificial tears use cytotoxicity because they use sodium chloride, which is an isotonic agent, or a physiological saline injection solution containing a large amount of chemical components such as lubricants, buffers, pH regulators, stabilizers, or preservatives as solvents. Cause allergies, etc.
반면, 본원 발명의 인공 눈물은 정제수 대신 자체적으로 항균력 및 보습력을 가지는 해양 심층수를 용제로 포함하고 있기 때문에, 화학 성분 들의 함량이 감소되어도 종래 제품에 비해 효능이 감소하지 않을 뿐만 아니라, 무독성 및 무자극성 등의 안전성을 개선할 수 있다. On the other hand, since the artificial tears of the present invention contain deep seawater having antibacterial and moisturizing properties as a solvent instead of purified water, even if the content of chemical components is reduced, the efficacy is not reduced compared to conventional products, and it is nontoxic and non-irritating. Etc., the safety can be improved.
본 발명의 인공 눈물의 용법은 통상적으로 공지된 점안액과 동일한 방식, 예를 들면 수용성 점안액은 적합한 점안액 용기로부터 안구에 떨어뜨리거나, 분무 장치를 사용하여 안구에 분무하는 방식으로 사용한다.The application of artificial tears of the present invention is generally used in the same manner as known eye drops, for example, by dropping water soluble eye drops from a suitable eye drop container or spraying the eye with a spray device.
본 발명의 인공 눈물의 용량은 환장의 증상에 따라 적절하게 조절할 수 있는데, 1일 1회~수회, 1적~수적을 사용할 수 있다.The artificial tear dose of the present invention can be appropriately adjusted according to the symptoms of the patient, and can be used once a day-several times, one drop-a drop.
아울러, 본 발명의 인공 눈물은 대한 약전(제5 개정)에 기재된 점안액에 대한 제제 총칙 규정에 따르는 것으로, 백색 광원을 써서 3000~5000룩수(lux)의 밝기 위치에서 육안으로 관찰할 때 맑고, 쉽게 검출되는 불용성 이물질이 없는 것을 그 양태로 한다. 또한, 본 발명의 인공 눈물은 이물을 관찰하는데 지장이 없을 정도의 투명성을 가지는 기밀 용기를 사용하여, 빠른 시간 내에 충전되도록 한다.In addition, the artificial tears of the present invention are in accordance with the formulation rules for the eye drops described in the Korean Pharmacopoeia (5th Amendment), and are clear and easy when visually observed at a brightness position of 3000 to 5000 lux using a white light source. It is set as the aspect that there is no insoluble foreign material detected. In addition, the artificial tears of the present invention can be filled in a short time by using an airtight container having a transparency enough to observe foreign matter.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다. Hereinafter, the present invention will be described in detail by way of examples. However, the following examples are only for illustrating the present invention, and the content of the present invention is not limited by the following examples.
I. 본 발명의 인공 눈물용 조성물의 제조I. Preparation of Artificial Teardrop Composition of the Present Invention
실시예 1. 해양 심층수 제조Example 1 Deep Sea Water Production
대한민국 동해에서 채수한 해양 심층수를 한외여과(Ultra-filter)를 통해 멸균 처리 한 후, 각각 역삼투압 장치 (reverse osmosis) 또는 전기 투석 장치 (electrodialysis)를 이용해 2차 필터링하여 역삼투압 여과수, 역삼투압 농축수, 전기투석 투과수 및 전기투석 농축수 등 고농도의 미네랄을 함유한 투과수를 제조하였다. 상기 각각의 투과수의 pH, 염화나트륨 함량 및 미네랄 함량을 하기 표 2 및 3에 나타내었다.The deep sea water collected from the East Sea of Korea is sterilized by ultra-filter, and then filtered secondly using reverse osmosis or electrodialysis, respectively, to reverse osmosis filtered water and reverse osmosis concentrated water. Permeate containing high concentrations of minerals, such as electrodialysis permeate and electrodialysis concentrate, was prepared. The pH, sodium chloride content and mineral content of each of the permeated water are shown in Tables 2 and 3 below.
[표 2]TABLE 2
[표 3]TABLE 3
실시예 2~4. 본 발명의 인공 눈물용 조성물의 제조Examples 2-4. Preparation of the composition for artificial tears of the present invention
상기 실시예 1로부터 얻어진 역삼투압 여과수(90중량%)와 역삼투압 투과수(10중량%)를 혼합하여 염화나트륨이 전체 해양 심층수 100 중량%에 대하여 0.5 중량%로 포함된 투과수를 제조하였다. 상기 얻어진 투과수를 한외여과를 통해 고압 증기로 121℃에서 15분 동안 멸균하였다. Reverse osmosis filtration water (90 wt%) and reverse osmosis permeation water (10 wt%) obtained in Example 1 were mixed to prepare permeate containing 0.5 wt% of sodium chloride based on 100 wt% of total ocean depth. The obtained permeate was sterilized for 15 minutes at 121 ° C. by high pressure steam through ultrafiltration.
이어서, 하기 표 4에 나타낸 바와 같은 비율로 상기 얻어진 투과수와 화학 성분 들을 혼합하여 본 발명의 인공 눈물용 조성물을 제조하였다. Subsequently, the permeated water and the chemical components obtained were mixed at a ratio as shown in Table 4 to prepare a composition for artificial tears of the present invention.
[표 4] 본 발명의 인공 눈물용 조성물 (100㎖ 당) [Table 4] The composition for artificial tears according to the invention (per 100㎖)
II. 종래 인공 눈물용 조성물의 제조II. Preparation of conventional artificial tear composition
비교예. 종래 인공 눈물 Comparative example. Conventional artificial tears
현재 시중에 널리 유통되고 있는 인공 눈물의 조성을 하기 표 5에 나타내었다. The composition of artificial tears that are currently widely distributed in the market is shown in Table 5 below.
[표 5] 종래 인공 눈물 제품 (100㎖ 당)Table 5 Conventional Artificial Tear Products (per 100ml)
III. 본 발명과 종래 인공 눈물용 조성물의 효과 비교 실험III. Comparative experiment of the effects of the present invention and conventional artificial tear composition
실험예 1. 항균성 비교 실험Experimental Example 1. Antimicrobial Comparative Experiment
상기 실시예 2 내지 4 의 인공 눈물용 조성물과 비교예의 인공 눈물을 각각 10 ㎖씩 취한 후, 1㎖ 당 2x103 개의 대장균을 접종하였다. 37℃, 습도 85%에서 24시간 배양한 후 균수 변화를 측정하여 하기 표 6에 나타내었다.remind After taking 10 ml each of the artificial tear composition of Examples 2 to 4 and the artificial tear of the comparative example, 2x10 3 pieces per ml E. coli was inoculated. After culturing at 37 ° C. and humidity of 85% for 24 hours, bacterial counts were measured and shown in Table 6 below.
[표 6]TABLE 6
상기 표 6으로 알 수 있는 바와 같이, 본 발명의 해양 심층수를 용제로 제조한 인공 눈물용 조성물(실시예 2 내지 4)의 경우 24시간 후 균이 모두 사멸된 반면, 정제수를 용제로 제조한 인공 눈물(비교예)의 경우 균수에 변화가 없는 것으로 나타났다.As can be seen in Table 6, in the case of the artificial tear composition (Examples 2 to 4) prepared in the deep sea water of the present invention as a solvent, all bacteria were killed after 24 hours, while the artificial water prepared as a solvent In the case of tears (comparative), there was no change in the number of bacteria.
따라서, 종래 정제수를 용제로 하는 인공 눈물의 경우 항균성 화학 성분을 추가로 더 포함해야 하는 반면, 해양 심층수를 용제로 하는 본 발명의 조성물은 해양 심층수의 자체 항균력이 우수하기 때문에 세포 독성이나, 알러지 등을 발생시킬 수 있는 또 다른 항균성 화학 물질의 사용이 불필요하다. 따라서, 인공 눈물로 사용되기 위한 안전성이 높다.Therefore, in the case of artificial tears using a conventional purified water as a solvent, the antimicrobial chemical component should be further included, whereas the composition of the present invention using the deep sea water as a solvent has excellent self-antibacterial effect of deep sea water, such as cytotoxicity or allergy. There is no need for the use of another antimicrobial chemical that can cause it. Therefore, the safety for use as artificial tears is high.
실험예 2. 세포 독성 제거 비교 실험Experimental Example 2. Comparison of Cytotoxicity Removal
(i) 실험예 2-1(i) Experimental Example 2-1
미토콘드리아 탈수소 활성도(mitochondrial dehydrogenase activity)의 색인을 나타내는 MTT(microculture tetrazolium) 비색계 환원 분석(colorimetric reduction assay)을 수행하여 소듐 라우릴 설페이트(sodium lauryl sulfate; 이하 “SLS”라 칭함)를 처리한 후, 실시예 2 내지 4의 조성물과 비교예의 조성물로 각각 세포를 처리하여 생존률을 비교하였다.After treatment with sodium lauryl sulfate (hereinafter referred to as "SLS") by performing a microculture tetrazolium (MTT) colorimetric reduction assay indicating the index of mitochondrial dehydrogenase activity. Cells were treated with the compositions of Examples 2 to 4 and the compositions of Comparative Examples to compare survival rates.
우선, 트립신(trypsinization)에 의해 회수한 Detroit 551를 2% BCS (bovine calf serum)가 함유된 DMEM(Dulbeco’s modified eagle’s medium)으로 현탁(suspension)시킨 후, 96 웰 조직 배양 플레이트(96 well tissue culture plate)의 각각의 웰에 세포 현탁액(5000~1000 cells/well)(100㎕)을 접종하고, 37℃에서 5% CO2조건으로 1일간 배양하였다. First, Detroit 551 recovered by trypsinization was suspended in Dulbeco's modified eagle's medium (DMEM) containing 2% bovine calf serum (BCS), and then 96 well tissue culture plate Cell suspensions (5000-1000 cells / well) (100 μl) were inoculated into each well of the) and incubated at 37 ° C. under 5% CO 2 conditions for 1 day.
배양 후, 세럼 프리 배지(serum free medium) 90㎕로 교체하고, 각각의 웰을 0.01 및 0.02%의 SLS로 처리한 후(대조군(control)), 실시예 2 내지 4의 조성물과 비교예의 조성물 10㎕로 각각 처리하였다. After incubation, 90 μl of serum free medium was replaced, and each well was treated with 0.01 and 0.02% SLS (control), followed by the compositions of Examples 2-4 and Comparative Example 10 Each was treated with μl.
다시 1일간 배양한 후, 각 웰에 100㎕ 의 MTT 용액(1mg/㎖)을 첨가하여 4시간 동안 반응시켰다. MTT가 세포의 환원력에 따라 미토콘드리아 탈수소 효소에 의해 포르마잔(formazan)으로 결정화되면 이소프로판올(isopropanol)로 추출하여 포르마잔 결정체를 얻었다, 상기 결정체를 540nm 에서 흡광도를 측정하였다.After incubation for another day, 100 μl of MTT solution (1 mg / ml) was added to each well and allowed to react for 4 hours. When MTT was crystallized to formazan by mitochondrial dehydrogenase according to the reducing power of the cells, it was extracted with isopropanol to obtain formazan crystals. The crystals were absorbed at 540 nm.
그 결과, 도 1 및 2에 도시한 바와 같이 본 발명의 인공 눈물용 조성물의 세포 독성 제거 효과(실시예 2 내지 4)가 종래 인공 눈물용 조성물(비교예) 보다 우수한 것을 알 수 있었다.As a result, as shown in Figures 1 and 2 it was found that the cytotoxicity removal effect (Examples 2 to 4) of the artificial tear composition of the present invention is superior to the conventional artificial tear composition (comparative example).
(ii) 실험예 2-2(ii) Experimental Example 2-2
상기 실험예 2-1에서 Detroit 551 세포 대신 소 망막 상피세포(retinal pigment epithelium)를 사용하는 것을 제외하면, 상기 실험예 2-1과 동일한 방법으로 세포 독성 제거 효과를 실험하였다. 이때, 상기 소 망막 상피 세포는 도살된 소로부터 얻은 소의 안구를 수 차례 세척한 다음, 소독된 솜 위에서 적도 부위를 절개하여 망막색소 상피층이 노출되게 초자체와 망막을 분리하여 얻었다.Except for using the retinal pigment epithelium instead of Detroit 551 cells in Experimental Example 2-1, the cytotoxic effect was tested in the same manner as in Experimental Example 2-1. At this time, the bovine retinal epithelial cells were obtained by washing the eyeball of the bovine cow obtained from the slaughtered several times, and then cutting the equatorial region on the sterilized cotton to separate the vitreous and the retina to expose the retinal pigment epithelial layer.
그 결과, 도 1 및 2에 도시한 바와 같이 본 발명의 인공 눈물용 조성물의 세포 독성 제거 효과(실시예 2 내지 4)가 종래 인공 눈물용 조성물(비교예) 보다 우수한 것을 알 수 있었다.As a result, as shown in Figures 1 and 2 it was found that the cytotoxicity removal effect (Examples 2 to 4) of the artificial tear composition of the present invention is superior to the conventional artificial tear composition (comparative example).
실험예 3. 보습성 비교 실험(1)Experimental Example 3. Moisturizing Comparative Experiment (1)
(i) 실험예 3-1(i) Experimental Example 3-1
수분 증발량 측정기(TEWAMETER TM 210)를 이용하여 본 발명의 인공 눈물용 조성물(실시예 2 내지 4)과 종래 인공 눈물용 조성물(비교예)에 대한 소 망막색소 상피세포의 수분 손실 정도(TEWL)를 측정하였다.The degree of water loss (TEWL) of bovine retinal pigment epithelial cells of the artificial tear composition (Examples 2 to 4) and the conventional artificial tear composition (comparative example) of the present invention was measured using a water evaporation measuring instrument (TEWAMETER TM 210). Measured.
우선, 소 망막의 수분 정도를 측정한 다음, 소 망막을 상기 실시예 2 내지 4및 비교예의 조성물(각각 60㎕)으로 처리한 다음, 공기의 이동이 없고 직사광선이 없는 공간에 노출시켰다가, 다시 30분 동안 안정화하였다.First, the moisture level of the bovine retina was measured, and then the bovine retina was treated with the compositions of Examples 2 to 4 and Comparative Examples (60 μl each), and then exposed to a space free of air movement and no direct sunlight, and then again. It stabilized for 30 minutes.
실내 온도 19~25℃ 및 상대 습도는 34~53%인 곳에서 수분 증발량 측정기의 프로브(probe)를 망막 상에 수직으로 올려놓고, 약간의 압력을 가하여 가볍게 밀착시킨 후, 30~40초 동안 보습 정도를 측정을 실시하였다. 30분 후, 1일 후, 2일 후, 1주 후, 2주 후, 3주 후, 총 6회에 걸쳐서 망막의 수분 손실 정도(TEWL)를 측정하였다.Place the probe of moisture evaporation meter on the retina vertically at room temperature of 19 ~ 25 ℃ and relative humidity of 34 ~ 53%, apply lightly with slight pressure, and moisturize for 30 ~ 40 seconds. The degree was measured. After 30 minutes, after 1 day, after 2 days, after 1 week, after 2 weeks, and after 3 weeks, the total loss of the retinal water (TEWL) was measured six times.
측정 결과, 정제수를 용제로 한 인공 눈물(비교예)로 처리한 망막의 수분 손실 정도(TEWL)가 해양 심층수를 용제로 한 본 발명의 인공 눈물용 조성물(실시예 2 내지 4)로 처리한 망막보다 수분 손실 정도보다 높으므로, 해양 심층수를 포함한 본 발명의 인공 눈물용 조성물의 보습력이 우수한 것을 확인할 수 있었다(도 3 참조).As a result of the measurement, the water loss degree (TEWL) of the retina treated with artificial tears (Comparative Example) using purified water as a solvent was treated with the artificial tear composition (Examples 2 to 4) of the present invention using deep sea water as a solvent. Since it is higher than the degree of water loss, it was confirmed that the moisturizing power of the composition for artificial tears of the present invention including deep sea water was excellent (see FIG. 3).
(ii) 실험예 3-2(ii) Experimental Example 3-2
피부장벽(손실)측정기(Corneomenter)를 이용하여 소 망막의 수분 손실 정도를 측정하였다. 이때, 상기 피부장벽(손실)측정기는 표피층의 전기용량을 측정하여 피부 보습 상태를 확인할 수 있으며, 망막의 보습 상태를 AV(arbituay unit)라는 단위로 표시한다.The loss of water in the bovine retina was measured by using a corneomenter. At this time, the skin barrier (loss) measuring device to determine the skin moisturizing state by measuring the capacitance of the epidermal layer, and displays the moisturizing state of the retina in units called AV (arbituay unit).
우선, 소 망막을 시험 전 물로 가볍게 세정한 후, 항온 항습실에서 최소 30분간 대기시켜 안정화하였다. 소 망막을 피부장벽(손실)측정기로 3회씩 측정하여 그 평균값을 검사 전의 소 망막 수분 정도 측정 값으로 설정하였다.First, the bovine retina was lightly washed with water before testing, and then stabilized by waiting at least 30 minutes in a constant temperature and humidity chamber. The bovine retina was measured three times with a skin barrier (loss) meter and the average value was set to the bovine retinal moisture level measured before the test.
이어서, 소 망막을 상기 실시예 2 내지 4 및 비교예의 조성물(각각 100㎕)로 처리하였다. 나머지 한 부위는 도포하지 않은 상태로 두어, 측정 시간대 별로 피부 상태를 확인하기 위한 대조군(control)으로 사용하였다. The bovine retina was then treated with the compositions of Examples 2-4 and Comparative Examples (100 μl each). The other part was left uncoated and used as a control for checking the skin condition at each measurement time.
측정 결과, 시간이 경과함에 따라 해양 심층수를 용제로 한 본 발명이 인공 눈물용 조성물(실시예 2 내지 4)로 처리한 소 망막의 보습 증가율이 정제수를 용제로 한 인공 눈물(비교예)을 도포한 부위의 표피보다 높아, 본 발명의 인공 눈물용 조성물이 종래 인공 눈물보다 높은 보습 증가율을 보였다(도 4 참조).As a result of the measurement, as time passed, the present invention using the deep sea water as a solvent applied the artificial tears (Comparative Example) in which the moisturizing increase rate of the bovine retina treated with the composition for artificial tears (Examples 2 to 4) was used as the purified water solvent. Higher than the epidermis of one site, the artificial tear composition of the present invention showed a higher moisturizing increase rate than the conventional artificial tears (see FIG. 4).
실험예 4. 보습성 비교 실험(2)Experimental Example 4. Moisturizing Comparative Experiment (2)
(i) 실험예 4-1(i) Experimental Example 4-1
수분 증발량 측정기(TEWAMETER TM 210)를 이용하여 정제수 또는 해양 심층수를 포함하는 인공 눈물용 조성물에 대한 피검자의 경표피 수분 손실 정도(TEWL)를 측정하였다.A water evaporation rate meter (TEWAMETER ™ 210) was used to measure the degree of epidermal moisture loss (TEWL) of the subject for the composition for artificial tears including purified water or deep sea water.
우선, 피검자의 좌우 전완부 내측에 조성물을 도포할 부위를 표기한 다음, 각각의 부위에서 검사 전의 경표피 수분 정도를 측정하였다.First, the site to which the composition is to be applied is indicated inside the left and right forearms of the subject, and then the degree of transdermal moisture before the test was measured at each site.
이어서, 각각의 부위에 여과지를 이용하여 상기 실시예 2 내지 4및 비교예의 조성물(60㎕)을 각각 붙인 후, 24시간 동안 첩포 검사를 수행하였다. 첩포를 제거하고 30분 후, 1일 후, 2일 후, 1주 후, 2주 후, 3주 후, 총 6회에 걸쳐서 경표피 수분 손실을 측정하였다. 이때 경표피 수분 손실(TEWL)의 측정은 공기의 이동이 없고 직사광선이 없는 공간에서 노출 시킨 후, 30분 동안 피부를 안정화한 다음, 실내 온도 19~25℃ 및 상대 습도는 34~53%인 곳에서 수분 증발량 측정기의 프로브(probe)를 각 부분별 검사 부위에 수직으로 올려놓고 약간의 압력을 가하여 가볍게 밀착시킨 후, 30~40초 동안 피부 보습 정도를 측정을 실시하였다.Subsequently, after attaching the composition (60 [mu] l) of Examples 2 to 4 and Comparative Example to each site using filter paper, a patch test was performed for 24 hours. Thirty minutes after the patch was removed, one day, two days later, one week later, two weeks later, and three weeks later, the transdermal moisture loss was measured six times. The epidermal moisture loss (TEWL) is measured in a place without air movement and in direct sunlight, and after stabilizing the skin for 30 minutes, where the room temperature is 19-25 ℃ and the relative humidity is 34-53%. The probe of the moisture evaporation meter at each part was placed vertically on the inspection site for each part, lightly adhered by applying a little pressure, and the skin moisturizing degree was measured for 30 to 40 seconds.
측정 결과 정제수를 용제로 한 인공 눈물(비교예)을 도포한 부위의 표피 수분 손실 정도(TEWL)가 해양 심층수를 용제로 한 본 발명의 인공 눈물용 조성물(실시예 2 내지 4)을 도포한 부위의 표피 수분 손실 정도보다 높으므로, 해양 심층수를 포함한 본 발명의 인공 눈물용 조성물의 보습력이 우수한 것을 확인할 수 있었다(도 5 참조).As a result of measurement, the epidermal water loss degree (TEWL) of the site where artificial tears (comparative example) coated with purified water solvent was applied to the artificial tear composition (Examples 2 to 4) of the present invention using deep sea water solvent. Since it is higher than the epidermal moisture loss, it was confirmed that the moisturizing power of the composition for artificial tears of the present invention, including deep sea water (see Fig. 5).
(ii) 실험예 4-2(ii) Experimental Example 4-2
피부장벽(손실)측정기(Corneomenter)를 이용하여 피검자의 경표피 수분 손실 정도를 측정하였다. 이때, 상기 피부장벽(손실)측정기는 표피층의 전기용량을 측정하여 피부 보습 상태를 확인할 수 있으며, 피부 보습 상태를 AU(arbitrary unit)라는 단위로 표시한다.The skin epidermal moisture loss was measured using a corneomenter. At this time, the skin barrier (loss) measuring device to determine the skin moisturizing state by measuring the capacitance of the epidermal layer, and displays the skin moisturizing state in units of an AU (arbitrary unit).
우선, 피검자의 좌우 하박 내측면을 시험 전 물로 가볍게 세정한 후, 항온 항습실에서 최소 30분간 대기시켜 피부 상태를 안정화하였다. 피검자 좌우 하박에 각각 지름 2.2cm 크기의 원 3개씩을 검사 범위로 지정한 다음, 피부장벽(손실)측정기로 각각의 부위를 3회씩 측정하여 그 평균값을 검사 전의 경표피 수분 정도 측정 값으로 설정하였다. First, the left and right lower back inner surfaces of the subjects were lightly washed with water before the test, and the skin condition was stabilized by waiting for at least 30 minutes in a constant temperature and humidity chamber. Three circles each having a diameter of 2.2 cm in the left and right lower chests of the subjects were designated as the test ranges, and then each area was measured three times with a skin barrier (loss) meter, and the average value was set to the measured value of the transdermal moisture level before the test.
이어서, 측정 부위 중 4 부위에 각각 60㎖씩 상기 실시예 2 내지 4 및 비교예의 조성물을 도포하였다. 나머지 한 부위는 도포하지 않은 상태로 두어, 측정 시간대 별로 피부 상태를 확인하기 위한 대조군(control)으로 사용하였다. Subsequently, the compositions of Examples 2 to 4 and Comparative Examples were applied to each of 4 parts of the measurement sites by 60 ml. The other part was left uncoated and used as a control for checking the skin condition at each measurement time.
측정 결과, 시간이 경과함에 따라 해양 심층수를 용제로 한 본 발명이 인공 눈 물용 조성물(실시예 2 내지 4)을 도포한 부위의 표피의 보습 증가율이 정제수를 용제로 한 인공 눈물(비교예)을 도포한 부위의 표피보다 높아, 본 발명의 인공 눈물용 조성물이 종래 인공 눈물보다 높은 보습 증가율을 보였다(도 6 참조).As a result of the measurement, according to the present invention, the rate of increase in moisturization of the epidermis at the site where the deep seawater was used as the solvent was applied to the composition for artificial eye water (Examples 2 to 4) was increased. Higher than the epidermis of the applied site, the artificial tear composition of the present invention showed a higher moisturizing increase rate than the conventional artificial tears (see FIG. 6).
실험예 5. 안점막 자극성 실험(Draize 법)Experimental Example 5. Eye mucosal irritation test (Draize method)
해양 심층수를 포함하는 인공 눈물용 조성물에 대한 안점막 자극성 실험은 식품의약품안정청 고시(식품의약품 안정청, “의약품등의 독성시험 기준해설서, 1999년)에 따라 Draize 법을 이용하여 그 자극성 정도를 평가하였다.The mucosal irritation test of artificial tears containing deep seawater was evaluated using the Draize method according to the Korea Food & Drug Administration Notice (Korea Food and Drug Administration, “Toxicological Standards for Drugs, 1999,”). .
이때, 안점막 자극 평가는 Draize scoring을 근거로 한 의약품 등의 독성 시험기준 상의 안구병변의 등급을 이용하여 판정하였으며, 자극성의 정도 평가는 공지의 안구병변등급표(표 7)을 따랐다.At this time, the ocular mucosa stimulation evaluation was determined using the grade of the ocular lesion on the toxicity test criteria, such as drugs based on Draize scoring, the evaluation of the degree of irritation was in accordance with the known ocular lesion grade table (Table 7).
[표 7]TABLE 7
실험 방법 및 결과Experiment method and result
시험토끼 10 마리를 택하여 실시예 4의 조성물 0.1㎖를 왼쪽 눈에 점안하고, 오른쪽 눈에는 0.9%(w/v) 생리식염수(saline)를 동일량으로 점안하였다. 이때 투여 방법은 동물의 아래 눈꺼풀을 안구로부터 당겨 컵모양으로 만든 다음, 검체를 0.1㎖점안하고 약 1초간 눈을 감은 상태로 유지시켜서 검체의 손실을 최소화 하였다. Ten test rabbits were selected, 0.1 ml of the composition of Example 4 was applied to the left eye, and 0.9% (w / v) saline was added to the right eye in the same amount. At this time, the lower eyelid of the animal was pulled from the eyeball to make a cup shape, and then 0.1 ml of the sample was placed in the eyelid and the eyes were closed for about 1 second to minimize the loss of the sample.
본 발명의 조성물을 투여하지 않은 오른쪽 눈을 대조군으로 하여, 조성물 투여한 일로부터 1, 2, 3, 4일째 및 7일째에 각막의 혼탁과 혼탁 범위, 홍채의 반응, 결막의 발적, 부종 및 배출물의 정도 등의 자극성 유무를 관찰하여 표 8에 나타내 었다.The right eye, which was not administered the composition of the present invention, as a control, on the 1st, 2nd, 3rd, 4th and 7th day from the administration of the composition, the cloudiness and turbidity of the cornea, the reaction of the iris, redness of the conjunctiva, edema and discharge The presence or absence of irritation such as the degree is shown in Table 8.
[표 8] TABLE 8
상기 표 8의 결과로 알 수 있듯이, 투여 후 1, 2, 3, 4일째 및 7일째에 본 발명의 인공 눈물용 조성물을 점안한 눈은 대조군인 오른쪽 눈에 비하여 특이한 이상은 관찰되지 않았다. 이와 같은 결과에 따라, 본 발명의 인공 눈물용 조성물은 토 끼의 안점막에 어떠한 안구 병변도 유발하지 않는 무독성, 무자극 물질로 판단되었다. As can be seen from the results of Table 8, the eye dropping the artificial tear composition of the present invention on the 1st, 2nd, 3rd, 4th and 7th day after administration did not have any unusual abnormalities compared to the right eye as a control group. Based on these results, the artificial tear composition of the present invention was determined to be a non-toxic, non-irritating substance that does not cause any ocular lesions on the rabbit's eye mucosa.
상술한 바와 같이, 본 발명에서는 정제수 대신 다량이 미네랄을 함유한 해양 심층수를 용제로 포함함으로써, 종래 제품보다 항균성, 보습성 및 안전성이 개선된 인공 눈물용 조성물을 제조할 수 있다. As described above, in the present invention, by including the deep sea water containing a large amount of minerals as a solvent instead of purified water, it is possible to manufacture a composition for artificial tears improved antimicrobial, moisturizing and safety than conventional products.
Claims (9)
Priority Applications (1)
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Citations (1)
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-
2006
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Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0930072A1 (en) | 1998-01-13 | 1999-07-21 | Kartar Dr. Lalvani | Vitamin and mineral containing compositions for the treatment of dry eye |
Also Published As
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