KR100699790B1 - Pharmaceutical composition for the prevention and treatment of liver disease comprising a Lonicera caerulea L. var. edulis extract - Google Patents

Abstract

본 발명은 댕댕이나무(Lonicera caerulea L. var. edulis) 추출물을 포함하는 간 질환 예방 및 치료 효과를 가지는 약제학적 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 간염, 간경화 또는 지방간 등의 질환에 대한 예방 및 치료 효과를 가진다.The present invention relates to a pharmaceutical composition having a liver disease prevention and treatment effect including the extract of Lonicera caerulea L. var. Edulis, the composition has a prophylactic and therapeutic effect against diseases such as hepatitis, cirrhosis or fatty liver Has

간보호제, 간기능회복제, 댕댕이나무, 의약품 Hepatoprotectants, Hepatoprotective agents, Taraxacum, Pharmaceuticals

Description

댕댕이나무 추출물을 포함하는 간 질환 예방 및 치료 효과를 가지는 약제학적 조성물{Pharmaceutical composition for the prevention and treatment of liver disease comprising a Lonicera caerulea L. var. edulis extract}Pharmaceutical composition for the prevention and treatment of liver disease comprising a Lonicera caerulea L. var. edulis extract}

도 1은 HepG2 세포에서 댕댕이나무 열매 추출물 투여에 의한 세포성장에 미치는 영향을 분석한 결과이다.Figure 1 is the result of analyzing the effect on the cell growth by the administration of the Daengberry fruit extract in HepG2 cells.

도 2는 HepG2 세포에서 에틸 알콜 투여에 의한 세포성장에 미치는 영향을 분석한 결과이다.Figure 2 is the result of analyzing the effect on the cell growth by ethyl alcohol administration in HepG2 cells.

도 3은 에틸 알콜과 댕댕이나무 열매 추출물을 처리하지 않은 웰을 대조군으로 하여 에틸 알콜만을 처리한 웰l에서의 흡광도와 에틸 알콜을 처리한 각 웰에서 댕댕이나무 열매 추출물을 가한 웰에서의 흡광도를 비교 측정한 결과이다.Figure 3 compares the absorbance in wells treated with ethyl alcohol only and the absorbance in the wells treated with ethyl alcohol extract in wells treated with ethyl alcohol only, using the wells not treated with ethyl alcohol and daphnia fruit extract. It is a result of a measurement.

도 4는 SPOTCHEM ^TM II strip 상에서 댕댕이나무 열매 추출물 투여에 의한 간기능 회복현상을 살펴본 결과이다.Figure 4 is a result of looking at the recovery of liver function by the administration of the Dagger fruit extract on SPOTCHEM ^TM II strip.

도 5는 급성 간염 유발 마우스에서 댕댕이나무 열매 추출물과 실리마린 투여의 효과를 조직화학적 분석으로 살펴본 결과이다.Figure 5 shows the results of histochemical analysis of the effect of the Daengberry fruit extract and silymarin in acute hepatitis induced mice.

본 발명은 댕댕이나무(Lonicera caerulea L. var. edulis) 추출물을 포함하는 간 질환 예방 및 치료 효과를 가지는 약제학적 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a pharmaceutical composition having the effect of preventing and treating liver disease, including the extract of Lonicera caerulea L. var.edulis.

간은 인체내 소화기계와 전신순환계 사이에 위치하여 외부로부터 들어온 독성 물질로부터 전신을 방어하고 생체외 물질의 대사를 담당하는 중요한 기능을 담당하고 있다. 생체 내로 들어온 생체외 물질은 일단 간을 통과하기 때문에, 간은 영양소 외에도 많은 독성물질에 노출될 위험이 높기 때문에, 다른 장기보다 손상 받을 가능성이 많다.The liver is located between the digestive system and the circulatory system of the human body and plays an important role in protecting the whole body from toxic substances from outside and in metabolizing ex vivo substances. Since the extracellular substance entering the living body once passes through the liver, the liver is more likely to be damaged than other organs because of the high risk of exposure to many toxic substances besides nutrients.

간 질환은 유발 원인에 따라 알콜 등을 과다복용에 의한 독성 간 질환과 바이러스 감염에 의한 바이러스성 간 질환이 있다. 바이러스성 간 질환은 B형, C형 간염 바이러스 등의 감염에 의하여 발생하며 최근에는 음식이나 의약, 한약재, 알콜 등에 의한 독성 간 질환이 증가추세에 있다. 간 질환은 자각증상이 잘 나타나지 않아 조기에 진단하기 어려우며 자각증상이 나타난 경우에는 상당한 간 손상이 일어난 경우이다. 간조직은 다른 조직에 비해 회복기능이 큰 조직이긴 하나 이미 간세포가 변형이 된 경우에는 회복이 어렵다. Liver diseases include toxic liver disease caused by overdose of alcohol and the like, and viral liver disease caused by viral infection, depending on the cause. Viral liver disease is caused by infections such as hepatitis B and hepatitis C virus, and recently, toxic liver disease due to food, medicine, herbal medicine, alcohol, etc. is increasing. Liver disease is difficult to diagnose early due to the lack of subjective symptoms, and significant liver damage occurs when subjective symptoms appear. Liver tissue is a larger recovery function than other tissues, but it is difficult to recover if the liver cells are already modified.

만성 간염이나 간경변의 치료는 현재까지 뚜렷한 치료제가 개발되어 있지 않다. 인터페론과 핵산 아날로그형인 라비뷰딘이 만성간염의 치료제로 사용되고 있 으나, 이들 약품은 바이러스의 활성 억제효능을 발휘하는 약제로 간세포의 기능을 회복시키는 약제는 아니다. 지금까지 간세포의 기능을 회복제로서 전 세계에서 가장 많이 알려진 것으로 가장 것으로 실리마린이 있다. 실리마린은 약용식물인 Carduus marianus Linne Silybum marianum의 학명을 가진 약초에서 추출한 것으로, 기원전부터 고대 그리스를 위시하여 서방 세계에 중요한 약물로서 알려져 왔다. 1970년대에 우리나라에 간장치료제로 소개된 이후 이 성분을 주성분으로 하는 많은 약제가 시판 중에 있다. 실리마린을 주성분으로 함유하는 제제의 경우 이미 임상적으로 간 질환 치료에 널리 응용되고 있지만, 그 주성분인 실리마린은 물에 거의 녹지 않는 난용성 물질로서 경구 투여시 체내 흡수율이 낮은 단점을 가진다. 현재 실리마린 제제는 중독성 간 질환, 만성간염 및 간경화 등의 간 질환 치료의 보조 요법으로 이용되고 있을 뿐이고, 따라서 간세포의 기능을 신속하게 회복시킬 수 있는 약제의 개발은 여전히 요구되고 있는 실정이다.The treatment of chronic hepatitis or cirrhosis has not been developed to date. Although interferon and its nucleic acid analogue, ravividin, are being used for the treatment of chronic hepatitis, these drugs are drugs that exert the effect of inhibiting the activity of viruses, and are not agents that restore the function of hepatocytes. Silymarin is by far the most well known in the world as a rejuvenating agent for hepatocyte function. Silymarin is a medicinal plant Carduus marianus Linne Silybum Extracted from the scientific name of marianum , it has been known as an important drug in the West since ancient times, including ancient Greece. Since it was introduced in Korea in the 1970s as an interstitial agent, many pharmaceuticals based on this ingredient are on the market. Formulations containing silymarin as a main ingredient have already been widely applied in the treatment of liver disease clinically, but its main ingredient, silymarin, is a poorly soluble substance that is almost insoluble in water and has a low absorption rate in the body upon oral administration. Currently, silymarin preparations are only used as adjuvant therapy for the treatment of liver diseases such as addictive liver disease, chronic hepatitis and cirrhosis, and thus, there is still a need for the development of a medicament capable of rapidly restoring the function of hepatocytes.

천연물로부터 유용한 간 기능 개선 효과를 살펴본 연구로는, 한국특허등록 제80759호에서는 간기능 유지 및 개선에 유용한 발효유 및 그 제조방법에 관해 개시하고 있고, 한국특허공개 제2003-0027615 에서는 헛개나무 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 간 기능 개선 효과와 숙취개선 효능을 가진 기능성 식품조성물에 관해 개시하고 있으며, 한국특허공개 제2003-0011818호에서는 가시오갈피 추출물이 코팅된 기능성 쌀서의 용도에 관해 개시하고 있으며, 한국특허공개 제2003-0063308호에서는 진주초 식물의 추출물을 포함하는 B형 간염 치료제 및 그 제조방법에 관 해 개시하고 있으며, 한국특허공개 제 2004-0018733호에서는 고들빼기 추출물을 함유한 바이러스성 간 질환 치료용 조성물에 대하여 개시한다. As a study for examining the effect of improving liver function useful from natural products, Korean Patent Registration No. 80759 discloses fermented milk useful for maintaining and improving liver function, and a method of manufacturing the same. It discloses a functional food composition having a liver function improving effect and a hangover improvement effect containing as an active ingredient, Korean Patent Laid-Open No. 2003-0011818 discloses the use of a functional rice book coated with the extract of P. Korean Patent Laid-Open Publication No. 2003-0063308 discloses a hepatitis B therapeutic agent comprising an extract of a pearl plant and a method for preparing the same. Korean Patent Laid-Open Publication No. 2004-0018733 discloses a viral liver disease containing an extract of Algae. A therapeutic composition is disclosed.

이에 배경하에 상기에서 살펴본 기존의 치료 조성물 외에도 우수한 간 질환 치료 활성을 가지는 물질을 천연물로부터 획득하고자 하는 연구의 일환으로, 본 발명자는 손상된 간 세포주에 댕댕이나무 추출물을 첨가하면 간세포 성장이 촉진되며 이에 의해 손상된 간 기능이 회복되는 것을 간 기능의 생화학적 지표로 사용되는 GOT, GPT 수치가 현저하게 감소되는 것으로 확인하고 댕댕이나무 추출물을 포함하는 조성물이 간염, 간경화 또는 지방간 등의 간 질환에 대한 우수한 예방 및 치료 효과를 가지는 것을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.As a part of the research to obtain a substance having excellent hepatic disease therapeutic activity from natural products in addition to the conventional therapeutic composition described above in the background, the present inventors promote the growth of hepatocytes by adding the extract of daphnia to the damaged liver cell line Restoration of impaired liver function has been shown to significantly reduce GOT and GPT levels, which are used as biochemical indicators of liver function, and compositions containing dagger extracts have excellent protection against liver diseases such as hepatitis, cirrhosis or fatty liver, and The present invention has been completed by revealing that it has a therapeutic effect.

본 발명의 목적은 댕댕이나무 추출물을 포함하는 간 질환 예방 및 치료 효과를 가지는 약제학적 조성물을 제공하기 위함이다.An object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition having a liver disease preventive and therapeutic effect comprising the Daengyi extract.

하나의 양태로서, 본 발명은 댕댕이나무 추출물을 포함하는 간 질환 예방 및 치료 효과를 가지는 약제학적 조성물에 관한 것이다.In one aspect, the present invention relates to a pharmaceutical composition having a liver disease prophylactic and therapeutic effect, including the Dandelion extract.

본 발명에서 용어, “추출물(extract)"은 천연물로부터 분리된 활성성분을 의미하며, 여기서는 댕댕이나무부터 분리된 물질로 간세포 성장 촉진 효과를 가진다. 추출물은 물, 유기 용매, 또는 이들의 혼합용매를 이용하는 추출과정으로 획득할 수 있으며, 추출액, 이의 건조 분말 또는 이를 이용하여 제형화된 모든 형태를 포함한다. In the present invention, the term "extract" refers to an active ingredient separated from natural products, and here, the material is separated from a dendrobium and has a hepatocyte growth promoting effect. The extract is water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof. It can be obtained by the extraction process used, and includes the extract, dry powder thereof or any form formulated using the same.

본 발명에서 용어, “댕댕이나무(Lonicera caerulea L. var. edulis)"란 천연, 잡종 또는 변종 댕댕이나무의 모든 기관, 예를 들어, 뿌리, 가지, 줄기, 잎, 꽃 및 열매를 모두 포함하여 의미하나, 바람직하게는 댕댕이나무의 열매이다. 댕댕이나무 (Lonicera caerulea L. var. edulis)는 꼭두서니목 인동과의 쌍떡잎식물로 높이가 1.5m에 달하는 낙엽관목으로서 가지가 많이 갈라지고 작은 가지의 마디에 방패 모양의 포엽이 있고 나무줄기의 속부분은 흰색이다. 잎은 마주나며 바소꼴이거나 타원형이고 양 끝이 뭉뚝하거나 날카로우며 톱니가 없고 가장자리 및 표면에 짧은 털이 나고 뒷면에 융모가 많다. 꽃은 대개 꽃자루가 짧고 잎겨드랑이에 달리며 꽃부리는 깔때기 모양으로 엷은 황백색이며 여름에 핀다. 꽃받침은 거치처럼 5개로 갈라지며, 화관은 황백색이고 원통상 종형이며 길이 1.2~1.5cm로서 털이 약간 있다. 수술은 암술대보다 짧고 털이 없으며 자방은 2개가 합쳐지고, 열매는 타원형 또는 거의 원형이며, 7~8월에 자흑색으로 익고 백분으로 덮인다. 시베리아, 사할린, 중국 북부, 티베트, 북한 등지에 분포하고 있는 냉대성 식물이다. 본 발명 이전에 댕댕이나무의 간세포의 성장 촉진 및 이에 의한 간기능 개선 효과를 살펴본 바는 없었다.As used herein, the term “Lonicera caerulea L. var. Edulis” is meant to include all organs of natural, hybrid or mutant wood, including all roots, branches, stems, leaves, flowers, and fruits. one, preferably daengdaengyi fruit of the tree. daengdaengyi trees (Lonicera caerulea L. var. edulis ) is a dicotyledonous plant of the locust tree, which is a deciduous shrub reaching 1.5m in height, with many branched branches, a bract of bracts, and the inner part of the tree trunk is white. Leaves are opposite, basal or oval, blunt or sharp at both ends, not sawtoothed, with short hairs on edges and surfaces, with villi on the back. Flowers usually have short peduncles, hang on the axils, and the bees are funnel-like, pale yellowish white, blooming in summer. Calyx is divided into 5 like crabs, corolla is yellowish white, cylindrical bell-shaped, and 1.2 ~ 1.5cm long, with a little hair. The stamen is shorter than the pistil and has no hairs. The lobules are merged into two, the fruit is oval or almost circular, ripened in purple and covered with white powder in July-August. It is a cold plant found in Siberia, Sakhalin, northern China, Tibet, and North Korea. Prior to the present invention, there was no study on the effect of promoting growth of hepatic cells and improving liver function.

간기능 개선 효과는 조성물 투여에 의하여 손상된 간세포에서 세포 성장이 촉진되는 정도와 간효소 수치, 즉 AST(Aspartate Aminotransferase: GOT)와 ALT(Alanine Aminotransferase: GPT)로 객곽적으로 평가할 수 있다. ALT와 AST는 간세포에 있는 효소로, 간세포가 손상되거나 파괴되면 유출되어 혈중 농도가 증가하게 되므로, ALT와 AST 수치는 간세포 손상에 의한 간질환의 생화학적 지표로 사용된다. The effect of improving liver function can be assessed by the extent to which cell growth is promoted in hepatocytes damaged by the administration of the composition, and liver enzyme levels, namely, AST (Aspartate Aminotransferase (GOT) and ALT (Alanine Aminotransferase (GPT)). ALT and AST are enzymes in hepatocytes. When hepatocytes are damaged or destroyed, they leak out to increase blood levels. Therefore, ALT and AST levels are used as biochemical markers of liver disease caused by hepatocyte damage.

본 발명의 구체적인 실시에서, 에틸 알코올에 의해 손상된 사람 간세포인 HepG2 세포주에 댕댕이나무 추출물을 첨가하고 간세포 성장 촉진 정도를 댕댕이나무 추출물을 첨가하지 않은 대조구와 비교한 결과, 농도 비례적으로 성장을 촉진시켰다. 댕댕이나무 추출물을 0.25mg/ml의 농도로 첨가하면 약 27%, 0.5mg/ml의 농도로 첨가하면 약 54%의 세포 성장이 촉진되었다. 또한, 간기능 개선 여부를 ALT와 AST 양 측정으로 살펴본 결과, HepG2 세포주에서 댕댕이나무 추출물 투여에 의하여 ALT, AST 수치가 감소하며 더 나아가, 급성 간염을 유발시킨 마우스에 댕댕이나무 추출물을 투여하면 ALT, AST 수치는 기존의 약제인 실리마린을 투여한 경우보다 25% 이상 회복능이 뛰어난 것으로 나타났다. 상기 결과는 본 발명의 댕댕이나무 추출물의 우수한 간세포 성장 촉진에 의한 간기능 개선 효과를 가지며, 나아가, 간질환 치료 활성을 가진다는 것을 입증하는 것이다.In a specific embodiment of the present invention, as a result of the addition of Daengyi extract to HepG2 cell line, which is human hepatocytes damaged by ethyl alcohol, compared to the control group without adding Daengi extract, it promoted growth proportionally. . Addition of the Taraxacum extract at a concentration of 0.25 mg / ml promoted cell growth of about 27% and at a concentration of 0.5 mg / ml. In addition, the results of ALT and AST measurement to determine whether the liver function is improved, ALT, AST levels are decreased by the administration of Daenggi extract in HepG2 cell line, and further, ALT, The AST level was found to be more than 25% better than the conventional drug silymarin. The above results are to demonstrate that the Daenggi extract of the present invention has an effect of improving liver function by promoting hepatocyte growth, and further, has a therapeutic activity for liver disease.

본 발명에서 용어, “간 질환”은 간의 기능 저하를 유발하는 모든 질환을 의미하고, 바이러스(예를 들어, A. B, C, D, 또는 E형 바이러스), 알코올, 약물(결핵약, 아스피린, 항생제, 마취제, 고혈압 치료제, 경구피임제 등), 선천적 대사이상 등에 의해 유발된다. 간 질환의 구체적인 예로는 간염, 간경화 및 지방간 등이 있다. 간염은 만성 및 급성 간염을 모두 포함한다. As used herein, the term “liver disease” refers to any disease that causes liver failure, including viruses (eg, A. B, C, D, or E viruses), alcohols, drugs (tuberculosis drugs, aspirin, Antibiotics, anesthetics, hypertension, oral contraceptives), and congenital metabolic disorders. Specific examples of liver disease include hepatitis, cirrhosis and fatty liver. Hepatitis includes both chronic and acute hepatitis.

본 발명에서 용어, "예방"이란 조성물의 투여로 간 기능 저하를 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 본 발명에서 용어, "치료"란 조성물의 투여로 간 기능 및 성장이 회복되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다. As used herein, the term "prevention" refers to any action that inhibits or delays a decrease in liver function by administration of a composition. As used herein, the term "treatment" means any action in which liver function and growth is restored or beneficially altered by administration of the composition.

본 발명의 조성물 투여에 의하여 간염, 간경화 및 지방간 등의 질환 뿐만 아니라 이에 의해 유발되는 증상(symptom) 또는 합병증(complication)을 예방 및 치료할 수 있다. 예를 들어, 댕댕이나무 추출물로 예방 및 치료할 수 있는 간질환 증상에는 피로, 구토, 식욕 감퇴, 복통, 황달 등을 포함하고, 합병증에는 부종, 복수, 위장관 출혈, 식도정맥류 출혈, 간성뇌증(간성혼수) 등을 포함한다. By administering the composition of the present invention it is possible to prevent and treat diseases such as hepatitis, cirrhosis and fatty liver as well as symptoms (symptom) or complications caused by it. For example, symptoms of liver disease that can be prevented and treated with daphnia extract include fatigue, vomiting, loss of appetite, abdominal pain, jaundice, etc. Complications include edema, ascites, gastrointestinal bleeding, esophageal variceal bleeding, hepatic encephalopathy (hepatic coma) ), And the like.

본 발명에서 댕댕이나무 추출물은 물, 유기 용매, 또는 이의 혼합 용매를 사용하여 추출하는 방법으로 제조된다. 추출한 액은 바로 사용하거나 또는 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. Taraxacum extract in the present invention is prepared by the extraction method using water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof. The extracted solution can be used directly or can be concentrated and / or dried.

유기용매를 사용하여 추출하는 경우, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올, 에틸렌, 아세톤, 헥산, 에테르, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 디클로로메탄, N, N-디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭사이드(DMSO), 1,3-부틸렌글리콜, 프로필렌글리콜 또는 이들의 혼합용매인 유기용매를 사용하며 생약의 유효 성분이 파괴되지 않거나 최소화된 조건에서 실온 또는 가온하여 추출할 수 있다. 추출하는 유기용매에 따라 약제의 유효성분의 추출정도와 손실정도가 차이가 날 수 있으므로, 알맞은 유기용매를 선택하여 사용하도록 한다. 추출 방법은 특별히 제한되지 않고, 예를 들어 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 추출 등이 있다.When extracted with an organic solvent, methanol, ethanol, isopropanol, butanol, ethylene, acetone, hexane, ether, chloroform, ethyl acetate, butyl acetate, dichloromethane, N, N-dimethylformamide (DMF), dimethyl sulfoxide (DMSO), 1,3-butylene glycol, propylene glycol, or a mixed solvent thereof may be used and extracted by room temperature or warming under conditions where the active ingredient of the herbal medicine is not destroyed or minimized. Depending on the organic solvent to be extracted, the degree of extraction and loss of the active ingredient of the drug may vary, so select an appropriate organic solvent. The extraction method is not particularly limited, and examples thereof include cold needle extraction, ultrasonic extraction, and reflux extraction.

상기 용매 추출물은 부유하는 고체 입자를 제거하기 위하여 추출물을 여과시키는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 면, 나일론 등을 이용하여 입자를 걸러내거나 한외여과, 냉동여과법, 원심분리법 등을 사용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. The solvent extract may further comprise filtering the extract to remove suspended solid particles. Particles may be filtered using cotton, nylon, or the like, or ultrafiltration, freezing, centrifugation, or the like may be used, but is not limited thereto.

추출액의 농축에는 감압농축, 역삼투압 농축 등의 방법이 사용될 수 있다. 농축 후 건조 단계는 동결건조, 진공건조, 열풍건조, 분무건조, 감압건조, 포말건조, 고주파건조, 적외선건조 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 경우에 따라, 최종 건조된 추출물을 분쇄하는 공정을 추가로 포함할 수 있다.Concentration of the extract may be used, such as concentrated under reduced pressure, reverse osmosis concentration. The drying step after concentration includes freeze drying, vacuum drying, hot air drying, spray drying, reduced pressure drying, foam drying, high frequency drying, infrared drying, and the like. In some cases, the method may further include grinding the final dried extract.

또한, 상기 추출물은 추가의 분획 공정을 수행할 수 있다. 예들 들어, 상기 추출물을 증류수에 현탁시켜 비극성 유기 용매, 예를 들어, 헥산, 에테로, 디클로로메탄, 클로로포름, 에틸아세테이드 또는 이들의 혼합 용매로 비극성용매 가용층을 추출, 분리하여 수득하도록 하고, 이를 농축 및/또는 건조하여 사용할 수 있다. In addition, the extract can perform an additional fractionation process. For example, the extract may be suspended in distilled water to extract and separate a nonpolar solvent soluble layer with a nonpolar organic solvent such as hexane, ether, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, or a mixed solvent thereof. It can be used by concentrating and / or drying it.

하나의 구체적 실시에서, 본 발명의 댕댕이나무 추출물은 댕댕이나무, 보다 바람직하게는 나무 열매의 건조 중량(㎏)의 5배 내지 25배, 바람직하게는 7배 내지 15배의 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알코올 또는 이의 혼합용매, 바람직하게는 물 또는 물과 에틸 알코올의 혼합용매로; 20 내지 100℃, 바람직하게는 60 내지 100℃ 추출온도에서; 0.5시간 내지 2일, 바람직하게는 1 시간 내지 1일간; 열수 추출, 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 추출, 바람직하게는 환류 추출 방법으로; 1회 내지 5회, 바람직하게는 2회 내지 3회 연속 추출하여 수득하였다. 또한, 상기 추출물을 여지 로 여과하고 여액을 회전진공농축기로 20 내지 100℃, 바람직하게는 50 내지 70℃에서 감압농축한 후 건조하여 분말 형태의 본 발명의 댕댕이나무 추출물을 제조하였다. 분말 형태의 댕댕이나무 추출물은 그대로 사용되거나 용매에 일정농도로 용해시켜 사용될 수 있다.In one specific embodiment, the dagger extract of the present invention is 5 to 25 times, preferably 7 to 15 times, water, C ₁ to C, the dry weight (kg) of the dagger, more preferably tree fruit. ₄ lower alcohol or a mixed solvent thereof, preferably water or a mixed solvent of water and ethyl alcohol; At an extraction temperature of 20 to 100 ° C., preferably 60 to 100 ° C .; 0.5 hour to 2 days, preferably 1 hour to 1 day; By hydrothermal extraction, cold extraction, ultrasonic extraction, reflux extraction, preferably reflux extraction method; Obtained by successive extractions from 1 to 5 times, preferably 2 to 3 times. In addition, the extract was filtered and filtered and the filtrate was concentrated under reduced pressure at 20 to 100 ℃, preferably 50 to 70 ℃ with a rotary vacuum concentrator, and dried to prepare the powder of the present invention in the powder form. The powder of the powder of the wood is used as it is or may be used by dissolving it in a certain concentration in a solvent.

상기의 댕댕이나무 추출물은 천연물로부터 획득한 성분을 유효 성분으로 함유하므로 안전하고 독성, 부작용 및 내성을 초래하지 않으므로 장기간의 복용이 가능하다는 장점을 가진다. 실제, 마우스 급성 실험결과 독성을 유발하지 않는 것으로 밝혀졌다. 또한, 상기 조성물은 인간뿐만 아니라 간 질환이 발생될 수 있는 소, 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개 등의 가축에게 사용될 수 있다. Since the above-mentioned Daugung extract contains a component obtained from natural products as an active ingredient, it is safe and does not cause toxicity, side effects and resistance, and thus has an advantage of being able to be taken for a long time. Indeed, mouse acute experiments have shown no toxicity. In addition, the composition can be used not only in humans, but also in cattle, horses, sheep, pigs, goats, camels, antelope, dogs, and the like, in which liver disease may occur.

상기 댕댕이나무 추출물은 간 질환 예방 및 치료용 약학조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 100 중량%, 보다 바람직하게는 1 내지 80 중량 %로 포함한다. 또한, 상기 조성물은 약효를 증가시키지는 않으나 약재 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 비타민B₁, B₂, B₆, C, E, 니아신, 카르니친, 베타인, 엽산 판토텐산, 비오틴, 아연, 철, 칼슘, 크롬, 마그네슘, 이들의 혼합물 등의 무기, 유기 첨가물들을 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 조성물은 단독 사용하거나 기존 사용되어진 간 질환에 치료 활성을 가지는 물질을 추가로 포함할 수 있다. The dandelion extract is contained in an amount of 0.01 to 100% by weight, more preferably 1 to 80% by weight based on the total weight of the pharmaceutical composition for preventing and treating liver disease. In addition, the composition does not increase the efficacy, but may include additional ingredients that are commonly used in the pharmaceutical composition to improve the smell, taste, time and the like. In addition, the composition is inorganic, organic, such as vitamins B ₁ , B ₂ , B ₆ , C, E, niacin, carnitine, betaine, folate pantothenic acid, biotin, zinc, iron, calcium, chromium, magnesium, mixtures thereof Additives may further be included. In addition, the composition may further comprise a substance having a therapeutic activity against liver disease used alone or used previously.

상기 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하고 인체 또는 수의용으 로 제형화될 수 있다. 목적에 따라 약제학적 분야에서 통상적인 경구용, 비경구용, 국소투여용 등에 적합한 다양한 형태의 제제로 제형화될 수 있다. 분말, 과립, 정제, 캡슐제 등의 경구투여를 위한 고형제제에는 결합제, 활탁제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소, 향료 등을 사용할 수 있다. 경구용 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물 및 리퀴드 파라핀 이외에 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등을 포함할 수 있다. 주사제의 경우에는 완충제, 보존제, 무통화제, 가용화제, 등장제, 안정화제 등을 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 조성물은 단위-용량(1회분) 또는 다중-용량(수 회분) 용기, 예를 들면, 밀봉된 앰풀 및 바이알에 제시될 수 있고, 사용 직전에 멸균성 액상 담체, 예를 들면, 주사용 수의 부가 만을 요구하는 동결-건조 조건 하에 저장할 수 있다. 즉석의 주사 용제 및 현탁제는 멸균성 산제, 과립제 및 정제로부터 제조할 수 있다.The composition may comprise a pharmaceutically acceptable carrier and be formulated for human or veterinary use. Depending on the purpose, it may be formulated into various types of preparations suitable for oral, parenteral, topical administration, etc. which are conventional in the pharmaceutical field. Solid agents for oral administration of powders, granules, tablets, capsules and the like can be used binders, suspending agents, disintegrants, excipients, solubilizers, dispersants, stabilizers, suspending agents, pigments, flavorings and the like. Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents, water and liquid paraffin. In the case of injections, buffers, preservatives, analgesics, solubilizers, isotonic agents, stabilizers and the like can be used in combination. Such compositions may be presented in unit-dose (single) or multi-dose (several) containers, such as sealed ampoules and vials, and immediately before use, sterile liquid carriers such as injectable water. Can be stored under freeze-drying conditions requiring only the addition of. Immediate injection solutions and suspensions can be prepared from sterile powders, granules and tablets.

또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 댕댕이나무 추출물을 포함하는 조성물을 환자에게 투여하여 간 질환을 예방 및 치료하는 방법에 관한 것이다. As another aspect, the present invention relates to a method for preventing and treating liver disease by administering to a patient a composition comprising a powder of the poison.

본 발명에서 용어, "환자"는 간의 기능이 저하되거나 손상된 질환, 예들 들어 간염, 간경화 또는 지방간 등의 질환을 가지는 인간과 말, 양, 돼지, 염소, 낙타, 영양, 개 등의 동물을 의미하고 본 발명의 조성물을 투여에 의하여 증상이 호전될 수 있다. 본 발명의 댕댕이나무 추출물을 포함하는 조성물을 환자에게 투여함으로써, 상기에서 언급한 질환을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있다. 본 발명 의 조성물을 기존의 간 질환 치료제와 병행하여 투여할 수 있다. As used herein, the term "patient" refers to humans and animals having diseases such as hepatitis, liver cirrhosis or fatty liver, and horses, sheep, pigs, goats, camels, antelopes, dogs, and the like, which have reduced or impaired liver function. Symptoms may be ameliorated by administering the composition of the present invention. By administering to the patient a composition comprising the poison wood extract of the present invention, it is possible to effectively prevent and treat the above-mentioned diseases. The composition of the present invention can be administered in parallel with existing liver disease treatments.

본 발명에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 도입하는 것을 의미하며, 본 발명의 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다. As used herein, the term "administration" means introducing a predetermined substance into a patient by any suitable method, and the route of administration of the composition of the present invention is oral or parenteral via any general route as long as the target tissue can be reached. May be administered. In addition, the composition may be administered by any device in which the active agent may migrate to the target cell.

본 발명의 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. The composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount.

본 발명에서 용어, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 성병, 연령, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 본 발명의 제조 방법에 따라 제조된 추출물의 투여방법은 경구투여 또는 정맥투여가 바람직하고, 일반적으로 그 유효용량은 경구투여인 경우에는 보통 성인을 기준으로 1회에 1 내지 20㎎/㎏이 바람직하며, 정맥투여인 경우에는 1 내지 20 ㎎/㎏이 바람직하다. 특정 환자에 대한 투여용량 수준은 성별, 연령, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 약제혼합 및 질환의 중증도에 따라 변화될 수 있다.As used herein, the term “pharmaceutically effective amount” means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and an effective dose level refers to a patient's sexually transmitted disease, age, severity, and drug activity. , Drug sensitivity, time of administration, route of administration and rate of release, duration of treatment, factors including concurrently used drugs, and other factors well known in the medical arts. The compositions of the present invention may be administered as individual therapeutic agents or in combination with other therapeutic agents and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. It may be single or multiple doses. Taking all of the above factors into consideration, it is important to administer an amount that can obtain the maximum effect in a minimum amount without side effects, and can be easily determined by those skilled in the art. The method of administering the extract prepared according to the preparation method of the present invention is preferably oral administration or intravenous administration, and in general, the effective dose is preferably 1 to 20 mg / kg once per adult based on oral administration. In the case of intravenous administration, 1 to 20 mg / kg is preferable. Dosage levels for a particular patient may vary depending on gender, age, health condition, diet, time of administration, method of administration, drug mixture and severity of disease.

이하, 본 발명을 실시 예 및 실험 예에 의해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail by Examples and Experimental Examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited to the following examples.

실시예Example 1 :  One : 댕댕이나무Wood 열매 추출물의 제조 Preparation of Fruit Extract

(1-1) 물 용매를 이용한 열수추출법(1-1) Hot Water Extraction Method Using Water Solvent

중국의 연변지역 및 백두산에서 직접 수확한 야생 댕댕이나무 열매를 건조시켜 실험에 사용하였다. 분쇄한 상태의 댕댕이나무 열매 100 g을 1 리터의 증류수에 가하여 잘 교반한 다음 90 내지 95℃를 유지하는 추출온도에서 3시간 동안 환류 추출한 후 여액을 분리하였고 55~65℃로 생약추출물을 감압농축한 후, 동결 건조시켜 생약조성물 분말 엑스 21.2g을 얻었다.The wild daggers harvested directly from Yanbian and Mt. Baidu were dried and used in the experiment. 100 g of ground pulverized tree fruit was added to 1 liter of distilled water and stirred well. The mixture was extracted under reflux for 3 hours at an extraction temperature of 90 to 95 ° C., the filtrate was separated, and the herbal extract was concentrated under reduced pressure at 55 to 65 ° C. After freeze drying, the herbal composition powder x 21.2 g was obtained.

(1-2) 물-알콜 혼합용매를 이용한 열수추출법(1-2) Hot Water Extraction Method Using Water-Alcohol Mixed Solvent

상기 실시 예 1-1과 같이 분쇄된 댕댕이나무 열매 100 g에 1 리터의 25% 에틸 알콜을 가해 잘 교반한 다음, 열을 가해 80 내지 90℃를 유지하는 추출온도에서 3시간 동안 환류 추출한 후 여액을 분리하였고 55~65℃에서 생약추출물을 감압농축한 후, 동결 건조시켜 생약조성물 분말 엑스 19.5g을 얻었다.1 g of 25% ethyl alcohol was added to 100 g of the pulverized sapling tree fruit as in Example 1-1, followed by stirring, followed by heating to reflux for 3 hours at an extraction temperature maintaining 80 to 90 ° C. The extract was concentrated under reduced pressure at 55-65 ° C., and then freeze-dried to obtain 19.5 g of the herbal composition powder.

실시예Example 2 :  2 : 댕댕이나무Wood 열매 추출물에 의한  Caused by fruit extract 간세포주Hepatocytes 성장에 미치는 영향 측정  Measure impact on growth

HepG2 세포를 96 웰 플레이트의 각 웰에 세포수가 1×10⁴개가 되도록 넣고 소아태아혈청(fetal bovine serum)이 10% 포함된 세포배양액으로 16시간 배양하였다. 96 웰 플레이트를 생리식염수로 세척하고 0, 0.125mg, 0.25mg, 0.5mg, 1mg/ml의 농도로 새로운 세포배양액에 댕댕이나무 열매 추출물을 희석한 용액을 각 웰에 가하였다. 48시간을 배양한 후 각 웰에 있는 세포수를 SRB 방법으로 측정하였다. HepG2 cells were placed in each well of a 96 well plate so that the number of cells was 1 × 10 ⁴ , and the cells were incubated for 16 hours in a cell culture solution containing 10% of pediatric serum (fetal bovine serum). The 96 well plate was washed with saline and a solution of diluent fruit extract diluted in fresh cell culture at a concentration of 0, 0.125 mg, 0.25 mg, 0.5 mg, 1 mg / ml was added to each well. After 48 hours of incubation, the number of cells in each well was measured by the SRB method.

48시간 후 96 웰 플레이트에서 댕댕이나무 열매 추출물이 포함된 배양액을 제거하고 생리식염수로 96 웰 플레이트를 세척하고 70% 아세톤으로 각 웰의 세포를 20분간 고정하였다. 고정된 세포는 건조시킨 후에 SRB 용액으로 30분간 염색시키고 염색되지 않은 용액은 1% 초산용액으로 5회 세척하였다. 세척이 끝나면 다시 건조시키고 10mM tris 용액을 가하여 세포단백질과 결합된 SRB를 용해시키고 분광측정기에서 562nm에서의 흡광도를 측정하였다. 결과는 댕댕이나무 열매 추출물을 처리하지 않은 웰을 대조군으로 하여 댕댕이나무 열매 추출물을 처리한 각 웰의 흡광도를 비교하여 백분율로 표시하였다 (도 1). 이 결과에서 보면 댕댕이나무 열매 추출물은 0.5mg/ml의 농도까지는 댕댕이나무 열매 추출물을 처리하지 않은 웰과 비교하여 세포수가 같거나 약간 증가하거나 세포성장에 영향이 거의 없음을 보여주고 있다. After 48 hours, the culture medium containing the Root fruit extract was removed from the 96 well plate, the 96 well plate was washed with saline, and the cells of each well were fixed for 20 minutes with 70% acetone. The fixed cells were dried and then stained with SRB solution for 30 minutes and the unstained solution was washed 5 times with 1% acetic acid solution. After washing, the resultant was dried again, and 10 mM tris solution was added to dissolve SRB bound to the cell protein, and the absorbance at 562 nm was measured on a spectrometer. The results were expressed as a percentage by comparing the absorbance of each well treated with a dagger fruit extract was treated as a control not treated with a dagger fruit extract (Fig. 1). These results show that the Root bark fruit extract has the same or slightly increased cell number or little effect on cell growth compared to the wells without the Rope bark fruit extract up to 0.5mg / ml.

실시예Example 3.  3. 에틸알콜이Ethyl alcohol 간세포주Hepatocytes 성장에 미치는 영향 측정  Measure impact on growth

HepG2 세포를 96 웰 플레이트의 각 웰에 세포수가 1×10⁴개가 되도록 넣고 소아태아혈청(fetal bovine serum)이 10% 포함된 세포배양액으로 16시간 배양하였다. 96 웰 플레이트를 생리식염수로 세척하고 에틸 알콜을 0, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0% (v/v)의 농도가 되도록 세포배양액에 희석하고 HepG2가 배양되어 있는 96 웰 플레이트의 각 웰에 투여하였다. 24시간 동안 에틸 알콜로 세포손상을 유도한 후 에틸 알콜이 포함된 배양액을 제거하고 새로운 배양액을 가하고 48시간을 배양한 후 각 웰에 있는 세포수를 SRB 방법으로 측정하였다. HepG2 cells were placed in each well of a 96 well plate so that the number of cells was 1 × 10 ⁴ , and the cells were incubated for 16 hours in a cell culture solution containing 10% of pediatric serum (fetal bovine serum). 96 well plates were washed with physiological saline and ethyl alcohol was diluted in cell culture to a concentration of 0, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0% (v / v) and administered to each well of a 96 well plate in which HepG2 was incubated. . After inducing cell damage with ethyl alcohol for 24 hours, the culture medium containing ethyl alcohol was removed, fresh culture medium was added, and after 48 hours of incubation, the number of cells in each well was measured by the SRB method.

배양액을 제거하고 생리식염수로 96 웰 플레이트를 세척하고 70% 아세톤으로 각 웰의 세포를 20분간 고정하였다. 고정된 세포는 건조시킨 후에 SRB 용액으로 30분간 염색시키고 염색되지 않은 용액은 1% 초산용액으로 5회 세척하였다. 세척이 끝나면 다시 건조시키고 10mM tris 용액을 가하여 세포단백질과 결합된 SRB를 용해시키고 분광측정기에서 562nm에서의 흡광도를 측정하였다. 결과는 에틸 알콜 을 처리하지 않은 웰을 대조군으로 하여 에틸 알콜를 처리한 각 웰의 흡광도를 비교하여 백분율로 표시하였다(도 2). 이 결과에서 보면 댕댕이나무 열매 추출물은 1%의 농도까지는 오히려 에틸 알콜이 세포성장을 촉진하였으나 1.5% 이상의 농도에서는 에틸 알콜에 의하여 세포 수가 감소되는 것을 알 수 있었다.The cultures were removed, the 96 well plates were washed with physiological saline, and the cells of each well were fixed for 20 minutes with 70% acetone. The fixed cells were dried and then stained with SRB solution for 30 minutes and the unstained solution was washed 5 times with 1% acetic acid solution. After washing, the resultant was dried again, and 10 mM tris solution was added to dissolve SRB bound to the cell protein, and the absorbance at 562 nm was measured on a spectrometer. The results were expressed as a percentage comparing the absorbance of each well treated with ethyl alcohol with the well not treated with ethyl alcohol as a control (Fig. 2). The results showed that the extracts of the Taraxacum alba fruit promoted cell growth up to a concentration of 1%, but the cell number was reduced by ethyl alcohol at a concentration of 1.5% or more.

실시예Example 4 :  4 : 에틸알콜에Ethyl alcohol 의한 세포성장이 억제유도된 세포에서  Induced Cell Growth-inhibited Cells 댕댕이나무Wood 열매 추출물 투여에 의한  By administration of fruit extract 성장회복능Growth recovery ability 측정  Measure

HepG2 세포를 96 웰 플레이트의 각 웰에 세포수가 1×10⁴개가 되도록 넣고 소아태아혈청(fetal bovine serum)이 10% 포함된 세포배양액으로 16시간 배양하였다. 96 웰 플레이트를 생리식염수로 세척하고 에틸 알콜을 1.5% (v/v)의 농도가 되도록 세포배양액에 희석하고 HepG2가 배양되어 있는 96 웰 플레이트의 각 웰에 투여하였다. 24시간 동안 에틸 알콜로 세포손상을 유도한 후 에틸 알콜이 포함된 배양액을 제거하고 0mg, 0.125mg, 0.25mg, 0.5mg, 1mg/ml의 농도로 새로운 세포배양액에 댕댕이나무 열매 추출물을 희석한 용액을 각 웰에 가하였다. 48시간을 배양한 후 배양액을 제거하고 생리식염수로 96 웰 플레이트를 세척하고 70% 아세톤으로 각 웰의 세포를 20분간 고정하였다. 고정된 세포는 건조시킨 후에 SRB 용액으로 30분간 염색시키고 염색되지 않은 용액은 1% 초산용액으로 5회 세척하였다. 세척이 끝나면 다시 건조시키고 10mM tris 용액을 가하여 세포단백질과 결합된 SRB 를 용해시키고 분광측정기에서 562nm에서의 흡광도를 측정하였다. 결과는 에틸 알콜과 댕댕이나무 열매 추출물을 처리하지 않은 웰을 대조군으로 하여 에틸 알콜만을 처리한 웰에서의 흡광도와 에틸알콜을 처리한 각 웰에서 댕댕이나무 열매 추출물을 가한 웰에서의 흡광도를 비교 측정하였다 (도 3).HepG2 cells were placed in each well of a 96 well plate so that the number of cells was 1 × 10 ⁴ , and the cells were incubated for 16 hours in a cell culture solution containing 10% of pediatric serum (fetal bovine serum). 96 well plates were washed with physiological saline and ethyl alcohol was diluted in cell culture to a concentration of 1.5% (v / v) and administered to each well of a 96 well plate in which HepG2 was incubated. Induce cell damage with ethyl alcohol for 24 hours, remove the culture medium containing ethyl alcohol, and dilute Root fruit extract in fresh cell culture at the concentration of 0mg, 0.125mg, 0.25mg, 0.5mg, 1mg / ml Was added to each well. After incubation for 48 hours, the culture medium was removed, the 96 well plates were washed with saline, and the cells of each well were fixed for 20 minutes with 70% acetone. The fixed cells were dried and then stained with SRB solution for 30 minutes and the unstained solution was washed 5 times with 1% acetic acid solution. After washing, the resultant was dried again, and 10 mM tris solution was added to dissolve SRB bound to the cell protein, and the absorbance at 562 nm was measured on a spectrometer. The results were compared and measured the absorbance in the wells treated with ethyl alcohol only and the absorbance in the wells in which the dahl fruit extract was added in each well treated with ethyl alcohol. (FIG. 3).

1.5% 에틸 알콜의 농도에서는 에틸 알콜을 투여하지 않은 웰에 비해 흡광도 비율이 22%가 감소하였으나 댕댕이나무 열매 추출물을 에틸알콜을 투여하였던 웰에 처리하면 0.5mg/ml의 농도까지는 댕댕이나무 열매 추출물의 농도 증가에 비례하여 흡광도도 증가하였다. 따라서 댕댕이나무 열매 추출물을 처리한 웰에서는 에틸 알콜에 의한 손상에서 세포성장이 회복되고 있음을 알 수 있다. At the concentration of 1.5% ethyl alcohol, the absorbance ratio was reduced by 22% compared with the well without ethyl alcohol. However, when the Dandelion fruit extract was treated with the well that was administered with ethyl alcohol, the concentration of the Dandelion fruit extract was increased to 0.5 mg / ml. The absorbance increased with increasing concentration. Therefore, it can be seen that the cell growth is recovered from the damage caused by the ethyl alcohol in the wells treated with the Taraxacum fruit extract.

따라서 에틸 알콜에 의하여 세포손상이 유도된 세포에서 댕댕이나무 열매 추출물 투여에 의해 세포성장이 회복된 정도를 수학식 1에 따라 구하여 표 1로 나타내었다.Therefore, the extent to which cell growth was recovered by the administration of the Root fruit extract in the cells induced by cell damage by ethyl alcohol was obtained according to Equation 1, and is shown in Table 1 below.

표 1의 결과에서 에틸 알콜 투여(1.5%의 농도 조건)에 의하여 세포손상이 유도된 세포에서 댕댕이나무 열매 추출물 농도 0.125mg/ml에서는 20.45±7.72%, 0.25mg/ml 농도에서는 27.14±8.14%, 0.5mg/ml 농도에서는 54.77±3.37%의 손상된 세포가 회복되었다. 따라서 간세포 손상에서 댕댕이나무 열매 추출물은 간세포 성장을 촉진함으로써 간 조직의 기능을 회복시키는 약제로 작용함을 알 수 있었다.In the results of Table 1, the cell damage induced by ethyl alcohol administration (1.5% concentration condition) was 20.45 ± 7.72% at 0.125mg / ml, 27.14 ± 8.14% at 0.25mg / ml, At 0.5 mg / ml, 54.77 ± 3.37% of damaged cells were recovered. Therefore, it was found that the R. alba extract acts as an agent to restore the function of liver tissue by promoting the growth of hepatocytes.

실시예Example 5 :  5: 에틸알콜Ethyl alcohol 투여에 의해 손상된  Impaired by administration 간세포주에서In hepatocytes 댕댕이나무Wood 열매 추출물에 의한 간기능 회복  Recovery of liver function by fruit extract

사람 간세포의 일종인 Hep3B 세포를 96 웰 플레이트 의 각 웰에 2×10⁴개로 넣고 12시간 동안 배양하여 세포들을 플레이트의 바닥에 부착시킨 후에 배양상등액을 제거하고 인산완충용액으로 세척하였다. 새로운 배양액에 에틸 알콜을 가하여 에틸 알콜의 최종 농도가 5% 되게 한 배양액을 각 웰에 넣고 12시간 배양하여 세포의 손상을 유도하였다. 각 웰에서 배양액을 제거하고 댕댕이나무 열매 추출물을 포함한 배양액(0.3mg/ml)과 포함하지 않은 배양액을 각각 에틸 알콜을 가하여 세포의 손상을 유도한 웰에 가하였다. 에틸 알콜을 가한 웰과 가하지 않은 웰에서의 ALT, AST를 측정하기 위하여 일본 Array 사로부터 SPOTCHEM ^TM II strip을 구입하여 본 실험에 사용하였다. SPOTCHEM ^TM II strip 은 ALT(GOT), AST(GPT), blood urea nitrogen, glucose total cholesterol, total bilirubin 의 량을 하나의 스트립(strip)에서 모두 측정이 가능하다. 이 스트립에서는 ALT와 AST의 량를 측정하는 부분이 미색의 존으로 되어 있으나 시료 내에 ALT와 AST 량이 증가하면 짙은 파란색으로 변하게 된다. 48시간이 지난 후에 각 웰의 배양상등액을 취하여 SPOTCHEM ^TM II 스트립에 떨어뜨리고 발색을 확인하였다 (도 4). Hep3B cells, which are a kind of human hepatocytes, were placed in each well of a 96 well plate in 2 × 10 ⁴ cells and cultured for 12 hours to attach the cells to the bottom of the plate, and then the culture supernatant was removed and washed with phosphate buffer solution. Ethyl alcohol was added to the new culture solution, and the culture solution in which the final concentration of ethyl alcohol was 5% was added to each well and cultured for 12 hours to induce cell damage. The culture medium was removed from each well, and the culture medium containing 0.3 ml / ml and the non-culture medium were added to wells which induced cell damage by adding ethyl alcohol. In order to measure ALT and AST in wells with and without ethyl alcohol, SPOTCHEM ^™ II strips were purchased from Japan Array and used in this experiment. SPOTCHEM ^™ II strip can measure ALT (GOT), AST (GPT), blood urea nitrogen, glucose total cholesterol and total bilirubin in one strip. In this strip, the area for measuring ALT and AST is in off-white zone, but when the amount of ALT and AST increases in the sample, it turns dark blue. After 48 hours, the culture supernatant of each well was taken and dropped on the SPOTCHEM ^™ II strip and color development was observed (FIG. 4).

도 4에서 대조군은 Hep3B 세포에 에틸 알콜과 댕댕이나무 열매 추출물도 모두 처리하지 않은 웰의 배양액에 의한 발색결과이다. 혈청 내에 있는 미량의 ALT, AST로 인하여 미색에서 옅은 파란색으로 변하였다. 그러나 에틸 알콜을 5%의 농도로 투여한 웰의 배양액에서는 색의 변화가 짙은 파란색으로 나타나 AST와 ALT 활성이 급격히 증가한 것으로 나타났다. 옅은 파란색을 나타낸 대조구의 ALT, AST 값과 유사하였다. 에틸 알콜로 세포손상을 유도한 후에 댕댕이나무 열매 추출물 (0.3mg/ml)을 처리한 결과는 댕댕이나무 열매 추출물 (0.3mg/ml 만을 가한 결과와 같이 옅은 파란색으로 발색되어 에틸 알콜을 처리하고 댕댕이나무 열매 추출물을 처리하지 않은 웰의 배양액과 비교할 때 ALT, AST 값이 감소하였음을 알 수 있다. In FIG. 4, the control group is a color development result by the culture of the wells not treated with both the ethyl alcohol and the Daeng fruit extract in Hep3B cells. Traces of ALT and AST in serum changed from off-white to light blue. However, the color change was dark blue in the well cultured with 5% ethyl alcohol, indicating a rapid increase in AST and ALT activity. It was similar to the ALT and AST values of the light blue control. After inducing cell damage with ethyl alcohol, the result of the treatment with the Rootberry Extract (0.3mg / ml) is the same as the result of the Rootberry Extract (0.3mg / ml). It can be seen that the ALT and AST values were reduced compared to the culture of the wells that were not treated with the fruit extract.

실시예Example 6 : 독성시험 6: Toxicity Test

상기 실시예 1에서 제조한 열수 추출물 또는 열수 주정 혼합추출물을 증류수에 용해하고 이를 마우스 (군당 10마리)에 각각 500mg/kg을 투여한 다음 7일간 관찰하였으나, 사망하는 마우스가 없는 것으로 보아 세포 독성은 없는 것으로 나타났다.The hot water extract prepared in Example 1 or the hot water spirit mixed extract was dissolved in distilled water and administered to the mice (10 mice per group) 500 mg / kg, respectively, and observed for 7 days. Turned out to be absent.

실시예Example 7 : 급성 간염 유발 마우스에서  7: in acute hepatitis-induced mice 댕댕이나무Wood 열매 추출물의 투여효과 Dosing Effect of Fruit Extract

급성 간염을 유발시킨 마우스에서 댕댕이나무 열매 추출물 투여에 의한 간기능 회복능을 분석하고자 다음과 같은 실험을 하였다. 마우스 (ICR 종) 40마리를 각 군당 10마리씩 가, 나, 다, 라 4군으로 나누었다. 가군은 아무런 약제를 투여하지 않았으며, 나군은 올리브오일만을 먹인 군이고, 다군은 시그마사에서 구입한 실리마린을 올리브오일에 20mg/ml이 되도록 녹여서 마우스 한 마리당 100ul을 3일동안 구강 투여하였으며, 라군은 실시예 1에서 얻은 댕댕이나무 열매 추출물을 500mg/ml이 되도록 증류수에 녹이고 이용액을 마우스 한 마리당 100ul을 3일 동안 구강투여하였다. 약제를 투여하는 기간동안은 가, 나, 다, 라군 모두 사료를 투여하지 않고 물만을 공급하였다. 사염화탄소를 올리브 오일에 1%가 되도록 혼합한 다음 100ul를 나, 다, 라군의 마우스들의 복강에 주사하였다. 그리고 18시간이 지난 후에 가, 나, 다, 라 군의 마우스에서 채혈하여 마우스 혈액 내의 AST, ALT의 활성을 실시예 5와 같은 방법으로 측정하고 각 군의 평균 AST, ALT의 활성값을 비교하였다. 이 결과에서 사염화탄소를 주입하지 않은 가군의 AST, ALT 평균활성값은 23유니트, 37유니트 이었으며, 사염화탄소만을 주입한 나군은 AST, ALT의 수치가 1,023 유니트와 1,129유니트로 급성 간염이 유발된 현상을 나타내었다. 반면 실리마린을 사전에 복용시킨 다군의 AST, ALT 수치는 337유니트, 446유니트이고 댕댕이나무 추출물을 사전에 복용시킨 라군의 AST, ALT 평균활성값은 107유니트, 130유니트로서, 댕댕이나무 추출물의 AST, ALT 값이 실리마린을 투여한 마우스에 비해 평균 230유니트, 207유니트가 각각 감소하였다. AST, ALT 회복비율로 보면 실리마린의 간기능 회복능은 63.8%이었으며 댕댕이나무 열매 추출물의 간기능 회복능은 89.0%로서 댕댕이나무 열매 추출물이 25% 이상 회복능이 뛰어난 것으로 나타났다. The following experiments were performed to analyze the liver function recovery ability by the administration of Daengduberry fruit extract in mice with acute hepatitis. Forty mice (ICR species) were divided into four groups: 10, each, and four groups in each group. Gagun did not receive any medication, Nabe was fed only olive oil, and Dagun dissolved silymarin purchased from Sigma to 20mg / ml in olive oil, and orally administered 100ul per mouse for 3 days. The disintegrated Root Fruit Extract obtained in Example 1 was dissolved in distilled water to 500 mg / ml, and 100 μl per mouse was used orally for 3 days. During the period of drug administration, a, b, c, and lagoon were all fed with no water but with feed. Carbon tetrachloride was mixed in olive oil to 1% and then 100ul was injected into the abdominal cavity of mice in the lagoon. After 18 hours, A, B, C, and L groups were collected from the mice, and the activity of AST and ALT in the blood of the mouse was measured in the same manner as in Example 5, and the average AST and ALT of each group were compared. . The results showed that AST and ALT average activity values of 23 units and 37 units of the group not injected with carbon tetrachloride were acute hepatitis induced with AST and ALT levels of 1,023 units and 1,129 units. It was. On the other hand, AST and ALT levels of multi-groups in which silymarin was pre-administered were 337 units and 446 units, and AST and ALT activities of the lagoon in which Lai-Tung extract was previously taken were 107 units and 130 units. The average ALT value of 230 and 207 units decreased compared to silymarin-treated mice. According to the recovery rate of AST and ALT, silymarin was found to recover 63.8% of liver function, and its function was 89.0%, and its extract was more than 25%.

실시예Example 8 : 급성 간염 유발 마우스에서  8: in acute hepatitis-induced mice 댕댕이나무Wood 열매 추출물과  Fruit extract 실리마린의Silymarin 조직화학적 결과 비교  Comparison of Histochemical Results

실시예 7에서 각 실험군 가, 나, 다, 라에서 AST, ALT 의 평균값을 나타낸 마우스의 간조직에 대하여 조직화학적인 분석을 하였다. 각 군의 마우스로부터 간조직을 절편한 후에 10% 포르말린에 고정하였으며 각각 다른 농도의 에틸알콜에 담가 탈수과정을 수행하였으며 최종적으로 파린핀에 포매하였다. 파라핀 포매조직은 4-5um로 절편하여 슬라이드 글래스에 접착시킨 후에 헤마탁실린와 에오신으로 염색하여 광학현미경 하에서 관찰하였다 (도 5). 사염화탄소를 주입한 마우스의 간조직에서는 괴사가 일어나 헤마탁실린과 에오신에 염색되지 않은 부분들이 많이 산재하여 있으나(도 5-A), 실리마린과 댕댕이나무 추출물을 투여하고 사염화탄소를 주입한 마우스의 간조직들은 (도 5-B, 도 5-C) 정상 간조직 (도 5-D)와 비교하여 볼 때 괴사반응이 거의 일어나지 않았음을 볼 수 있다. 특히 댕댕이나무 추출물을 투여한 마우스와 실리마린을 투여한 마우스의 간조직을 비교하여 볼 때는 댕댕이나무 추출물을 투여한 마우스에서 실리마린보다 괴사세포가 더 적음을 확인할 수 있었다.In Example 7, histochemical analysis was performed on liver tissues of mice that showed average values of AST and ALT in each experimental group A, B, C, and D. Hepatic tissues from each group were sectioned, fixed in 10% formalin, dehydrated in different concentrations of ethyl alcohol, and finally embedded in parinpin. Paraffin embedded tissue was sliced into 4-5um and adhered to slide glass and stained with hematoxylin and eosin and observed under an optical microscope (FIG. 5). Necrosis occurred in the liver tissues of mice injected with carbon tetrachloride, but there were many parts that were not stained with hematoxylin and eosin (Fig. 5-A), but the liver tissues of mice injected with carbon tetrachloride and administered with silymarin and daphnia extract In comparison with normal liver tissue (Fig. 5-B, Fig. 5-C) (Fig. 5-D), it can be seen that the necrosis reaction hardly occurred. In particular, when comparing the liver tissues of mice treated with Daengim extract and silymarin, it was confirmed that the mice treated with Daengim extract had fewer necrotic cells than silymarin.

실시예Example 9 :  9: 댕댕이나무Wood 열매 추출물에 의한 간기능 회복 효과 임상실험 Clinical trial of liver function recovery effect by fruit extract

평소에 간염 증세를 가지고 있는 세 명의 자원자를 대상으로 실시예 1에서 제조한 댕댕이나무 열매 추출물 (1g)을 10일 또는 20일간 매일 2회 복용하도록 하고 간세포 내에 있는 효소인 ALT와 AST를 조사하였다. 시험에 참여한 세 사람 모두 10일 또는 20일 복용 후 간 수치가 감소하였음을 보고하였다.Three volunteers with hepatitis usually had two doses of the Daeng fruit extract (1 g) prepared in Example 1 every 10 days or 20 days, and the enzymes ALT and AST in hepatocytes were examined. All three participants reported a decrease in liver levels after taking 10 or 20 days.

지원자 1: 남, 40세Volunteer 1: Male, 40 years old

복용전 증상 : 8년전부터 B형 간염으로 고생함.Symptoms before taking: Hepatitis B suffered from 8 years ago.

복용 후 : 10일간 복용 후 AST 32에서 11.1, ALT 73에서 14.3으로 감소하였음.After dosing: Decrease to 11.1 in AST 32 and 14.3 in ALT 73 after taking 10 days.

이후 복용하지 않은 상태에서 20일후 AST 10.3, ALT 10.6으로 감소하였음.After 20 days without taking it, it decreased to AST 10.3, ALT 10.6.

지원자 2: 남, 35세Volunteer 2: Male, 35 years old

복용전 증상 : 간 질환을 앓고 있었으며 신체검사때마다 간 수치가 높았음.Pre-dose symptoms: He had liver disease and had high liver levels with every physical examination.

복용 후 : 20일간 복용 후 AST 53에서 2.25, ALT 96에서 35로 감소하였음.After dosing: decreased to 2.25 in AST 53 and 35 in ALT 96 after 20 days.

이후 복용하지 않은 상태에서 60일후 AST 2.25, ALT 5.75로 감소하였음.After 60 days of no administration, AST decreased to 2.25 and ALT 5.75.

지원자 3: 여, 35세Volunteer 3: Female, 35 years old

복용전 증상 : 집안이 모두 간염 환자임Pre-dose symptoms: The family is all hepatitis

복용 후 : 20일간 복용 후 AST 69에서 26, ALT 72에서 29로 감소하였음.After dosing: Decrease from 26 in AST 69 and 29 in ALT 72 after 20 days.

실시예Example 10 : 의약품 조성물의 제조 10: Preparation of pharmaceutical composition

제조예Production Example 1 - 분말 및 캅셀제의 제조 1-Preparation of powders and capsules

상기 실시예 1에서 얻은 열수 추출물 100mg을 락토오스 14.8mg, 결정성 셀룰로오스 3mg, 마그네슘 스테아레이트 0.2mg과 함께 섞었다. 혼합물을 적당한 장치를 사용하여 No.5 젤라틴 캅셀에 채웠다.100 mg of the hydrothermal extract obtained in Example 1 was mixed with 14.8 mg of lactose, 3 mg of crystalline cellulose, and 0.2 mg of magnesium stearate. The mixture was filled into No. 5 gelatin capsules using a suitable apparatus.

상시 분말 및 캅슐제의 구성성분은 다음과 같다.The components of the powder and capsules are always as follows.

유효성분 100 mg100 mg of active ingredient

락토오스 14.8 mgLactose 14.8 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg3 mg of crystalline cellulose

마그네슘 스테아레이트 0.2 mgMagnesium Stearate 0.2 mg

제조예Production Example 2 - 주사액제의 제조  2-Preparation of Injection

상기 실시예 1에서 얻은 열수추출물 100mg을 함유하는 주사액제는 다음과 같은 방법으로 제조하였다. Injection solution containing 100mg of hot water extract obtained in Example 1 was prepared by the following method.

상기 실시예 1에서 얻은 열수추출물 100mg, 염화나트륨 600mg 및 아스코르빈산 100mg을 중류수에 용해시켜서 100ml을 만들었다. 이 용액을 병에 넣고 120℃에서 30분간 가열하여 멸균시켰다.100 mg of 100 g of hot water extract obtained in Example 1, 600 mg of sodium chloride, and 100 mg of ascorbic acid were dissolved in mid-water. The solution was bottled and sterilized by heating at 120 ° C for 30 minutes.

상기 주사액제의 구성성분은 다음과 같다.The components of the injection solution are as follows.

유효성분 1000mg1000mg active ingredient

염화나트륨 6000mgSodium Chloride 6000mg

아스코르빈산 1000mgAscorbic Acid 1000mg

증류수 정량Distilled Water Determination

제조예Production Example 3 -  3- 산제의Powder 제조 Produce

대한 약전 제제 총칙 중 산제의 제조방법에 따라 하기의 성분 함량으로 제조한다.According to the preparation method of powder in the pharmacopeia formulation general formula for the following component content.

1) 1포 중1) In 1 package

유효성분 추출물 (건조분말) 100 밀리그램Active Ingredient Extract (Dry Powder) 100 mg

유당 100 밀리그램100 mg lactose

탈크 10밀리그램10 mg talc

2) 1포 중2) In 1 package

유효성분의 수용성 분획 100 밀리그램100 mg of water soluble fraction of active ingredient

유당 100 밀리그램100 mg lactose

탈크 10밀리그램10 mg talc

제조예Production Example 4 - 정제의 제조 4-Preparation of Tablets

대한 약전 제제 총칙 중 정제의 제조방법에 따라 하기의 성분 함량으로 제조한다.According to the method for preparing tablets in the general pharmacopeia formulation, it is prepared in the following component contents.

1) 1정 중1) In 1 tablet

유효성분 추출물 (건조분말) 100 밀리그램Active Ingredient Extract (Dry Powder) 100 mg

옥수수전분 100 밀리그램100 mg corn starch

유당 100 밀리그램100 mg lactose

스테아린산 마그네슘 2 밀리그램2 mg magnesium stearate

2) 1정 중2) In 1 tablet

유효성분의 수용성 분획 100 밀리그램100 mg of water soluble fraction of active ingredient

옥수수전분 100 밀리그램100 mg corn starch

유당 100 밀리그램100 mg lactose

스테아린산 마그네슘 2 밀리그램2 mg magnesium stearate

제조예Production Example 5 - 캅셀제의 제조 5-Preparation of capsule

대한 약전 제제 총칙 중 캅셀제의 제조방법에 따라 하기의 성분 함량으로 제조한다.According to the method for preparing a capsule in the general pharmaceutical preparations of the Korean Pharmacopoeia according to the following component content.

1) 1캅셀 중1) In 1 capsule

유효성분 추출물 (건조분말) 100 밀리그램Active Ingredient Extract (Dry Powder) 100 mg

옥수수전분 100 밀리그램100 mg corn starch

유당 100 밀리그램100 mg lactose

스테아린산 마그네슘 2 밀리그램2 mg magnesium stearate

2) 1캅셀 중2) 1 capsule

유효성분의 수용성 분획 100 밀리그램100 mg of water soluble fraction of active ingredient

옥수수전분 100 밀리그램100 mg corn starch

유당 100 밀리그램100 mg lactose

스테아린산 마그네슘 2 밀리그램2 mg magnesium stearate

제조 예 6 - 주사제의 제조Preparation Example 6-Preparation of Injection

대한 약전 제제 총칙 중 주사제의 제조방법에 따라 하기의 성분 함량으로 제조한다.It is prepared in the following component contents according to the preparation method of injectables in the general pharmacopeia formulation.

1) 1 앰플 중 (2 ml)1) in 1 ampoule (2 ml)

유효성분 추출물 (건조분말) 50 밀리그램Active Ingredient Extract (Dry Powder) 50 mg

주사용 멸균 증류수 적량Appropriate sterile distilled water for injection

pH 조절제 적량pH adjuster

2) 1 앰플 중 (2 ml)2) in 1 ampoule (2 ml)

유효성분의 수용성 분획 50 밀리그램50 mg water-soluble fraction of active ingredient

주사용 멸균 증류수 적량Appropriate sterile distilled water for injection

pH 조절제 적량pH adjuster

제조예Production Example 7 -  7- 액제의Liquid 제조 Produce

대한 약전 제제 총칙 중 액제제의 제조방법에 따라 하기의 성분 함량으로 제조한다.According to the manufacturing method of the liquid formulation in the general pharmacopeia formulation general formula to the following component content.

1) 100 ml 중1) in 100 ml

유효성분 추출물 (건조분말) 1 밀리그램Active Ingredient Extract (Dry Powder) 1 mg

이성화당 10그램10 grams of sugar

만니톨 5그램5 grams of mannitol

정제수 적량Purified water

2) 100 ml 중2) in 100 ml

유효성분의 수용성 분획 100 밀리그램100 mg of water soluble fraction of active ingredient

이성화당 10그램10 grams of sugar

만니톨 5그램5 grams of mannitol

정제수 적량Purified water

이상에서 설명한 바와 같이 본 발명에 따른 댕댕이나무 추출물을 포함하는 조성물은 독성 등의 부작용이 없으면서 우수한 간기능 회복 및 성장 회복능을 가지므로 간 질환의 예방 및 치료에 효과적으로 이용될 수 있다.As described above, the composition containing the dagger extract according to the present invention can be effectively used for the prevention and treatment of liver disease because it has excellent liver function recovery and growth recovery ability without side effects such as toxicity.

Claims (6)

댕댕이나무(Lonicera caerulea L. var. edulis) 열매 추출물을 포함하는 간염, 간경화 또는 지방간의 예방 또는 치료 효과를 가지는 약제학적 조성물. A pharmaceutical composition having a prophylactic or therapeutic effect of hepatitis, cirrhosis or fatty liver, comprising an extract of Lonicera caerulea L. var.edulis fruit. 삭제delete 제 1항에 있어서, 물, C1 내지 C4의 저급 알코올, 또는 이의 혼합용매를 이용하여 추출한 약제학적 조성물. The pharmaceutical composition according to claim 1, which is extracted using water, C1 to C4 lower alcohol, or a mixed solvent thereof. 삭제delete 제1항에 있어서, 댕댕이나무 추출물이 전체 조성물의 0.01 내지 100% 중량비를 갖는 약제학적 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the powder of the Taraxacum extract has a weight ratio of 0.01 to 100% of the total composition. 제1항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 주사제 제형으로 제조되는 약제학적 조성물.A pharmaceutical composition according to claim 1 which is prepared in powder, granule, tablet, capsule or injectable formulation.

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