KR100667219B1 - Novel Bacillus sp. Strain and Antifungal Microbial Agent Comprising the Same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 신규한 바실러스 속 균주 및 이를 함유하는 미생물 제제에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 식물병 유발균에 대한 항진균 활성을 가지는 바실러스 속 FF-9 균주(Bacillus sp. FF-9)와 상기 바실러스 속 FF-9 균주 또는 그 배양물을 유효성분으로 하는 진균 방제용 미생물 제제에 대한 것이다. The present invention relates to a novel Bacillus sp. Strain and a microbial agent containing the same, and more particularly, Bacillus sp. FF-9 and Bacillus sp. Which have antifungal activity against phytopathogenic bacteria. The present invention relates to a microbial agent for fungal control using the FF-9 strain or its culture as an active ingredient.
본 발명의 바실러스속 FF-9 균주는 기존의 유기합성 농약과 비교할 때, 독성이 약하여 생태계와 인축에 해를 주지 않고, 또한 넓은 범위의 온도와 pH에서 항진균 활성을 나타내므로 우리나라 경작시기의 기후조건에서 그 항진균 활성 및 생육이 충분히 유지될 수 있어 미생물 제제로 매우 유용하다. Bacillus genus FF-9 strain of the present invention is weak compared to the conventional organic synthetic pesticides, does not harm the ecosystem and shrinkage, and also exhibits antifungal activity at a wide range of temperature and pH, so the climatic conditions of the cultivation period of Korea It is very useful as a microbial agent because its antifungal activity and growth can be maintained sufficiently.
바실러스 속 FF-9, 항진균, 미생물 제제 Bacillus genus FF-9, antifungal, microbial preparation
Description
도 1은 본 발명에 따른 균주(이하, 바실러스 속 FF-9이라 명명함)의 라이족토니아 솔라니 AGII-II에 대한 항진균 활성을 paper disk법으로 측정한 결과를 나타낸 사진이다. a는 상등액(supernatant)을 b는 세포층(cell pellet)을 c는 배양액(culture broth)을 나타낸다. 1 is a photograph showing the results of measuring the antifungal activity of Lysatonia solani AGII-II of the strain (hereinafter referred to as FF-9 Bacillus) according to the present invention by a paper disk method. a represents a supernatant, b represents a cell pellet, and c represents a culture broth.
도 2는 분리된 바실러스 속 FF-9의 전자현미경 사진이다.2 is an electron micrograph of the isolated Bacillus genus FF-9.
도 3은 분리된 바실러스 속 FF-9의 16S rDNA 부분 염기서열 569bp를 나타낸 것이다. 3 shows 569 bp of the 16S rDNA partial sequence of the isolated Bacillus genus FF-9.
도 4는 배양 시간에 따른 바실러스 속 FF-9의 생육과 항진균 활성을 나타낸 그래프이다. Figure 4 is a graph showing the growth and antifungal activity of Bacillus genus FF-9 with incubation time.
도 5는 배양 온도에 따른 바실러스 속 FF-9의 생육과 항진균 활성을 나타낸 그래프이다. 5 is a graph showing the growth and antifungal activity of Bacillus genus FF-9 according to the culture temperature.
도 6은 초기 pH에 따른 바실러스 속 FF-9의 생육과 항진균 활성을 나타낸 그래프이다. Figure 6 is a graph showing the growth and antifungal activity of Bacillus genus FF-9 according to the initial pH.
도 7은 락토오스의 농도에 따른 바실러스 속 FF-9의 생육과 항진균 활성을 타나낸 그래프이다.7 is a graph showing the growth and antifungal activity of the genus FF-9 according to the concentration of lactose.
도 8은 효모 추출물의 농도에 따른 바실러스 속 FF-9의 생육과 항진균 활성을 나타낸 그래프이다. 8 is a graph showing the growth and antifungal activity of Bacillus genus FF-9 according to the concentration of yeast extract.
본 발명은 신규한 바실러스 속 균주 및 이를 함유하는 미생물 제제에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 식물병 유발균에 대한 항진균 활성을 가지는 바실러스 속 FF-9 균주(Bacillus sp. FF-9)와 상기 바실러스 속 FF-9 균주 또는 그 배양물을 유효성분으로 하는 진균 방제용 미생물 제제에 대한 것이다. The present invention relates to a novel Bacillus sp. Strain and a microbial agent containing the same, and more particularly, Bacillus sp. FF-9 and Bacillus sp. Which have antifungal activity against phytopathogenic bacteria. The present invention relates to a microbial agent for fungal control using the FF-9 strain or its culture as an active ingredient.
농작물에 발생하는 각종 병충해는 직접적으로 수확량을 감소시키고, 그 품질에도 영향을 미친다. 특히, 채소 작물에 여러가지 질병을 야기하는 토양 전염 병원균의 경우 작물의 안정적 생산에 제한 요인이 되고 있어, 농가에 많은 피해를 주고 있다.Various pests on crops directly reduce yields and affect their quality. In particular, soil infectious pathogens causing various diseases in vegetable crops have been a limiting factor in the stable production of crops, causing a lot of damage to farms.
토양 전염 병원성 진균으로는 탄저병 원인균인 Colletotrichum gloeosporioides, 식물의 상처부위를 통해 감염 또는 전염되어 썩는 부패병균인 Fusarium oxysporum, 근부병균인 Rhizoctonia solani, 흑색썩음균핵병균인 Sclerotium cepivorum, 식물역병균인 Phytophthora capsici, 세균성 병원균으로 연부병인 Erwinia carotovora 등이 있으며, 채소작물의 생산을 급격히 저하시키는 요 인이 되어왔다.Soil infectious pathogens include Colletotrichum gloeosporioides , an anthrax causative agent, Fusarium oxysporum , a decaying rot bacterium that is infected or transmitted through the wounds of plants, Rhizoctonia solani , a root rot bacillus, Sclerotium cepivorum , phytophthora caps , Phytophthora Bacterial pathogens include soft disease, Erwinia carotovora, and have been a factor in sharply reducing the production of vegetable crops.
따라서 상기와 같은 병충해를 방제하기 위한 농약 개발 및 이의 사용에 관한 연구가 계속되어 유기합성 농약과 생물학적 제제가 개발되었다. 유기합성 농약은 1900년대 초에 개발된 것으로, 작물의 보호 수단으로서 매우 유효하며, 작물의 생산 증대, 안정 공급, 농업 종사자의 노동력의 경감 등에 매우 큰 역할을 담당하여 왔다. 그러나 오늘날 화학비료나 농약의 과다 사용으로 인하여 염류의 집적현상 등을 초래하여 농가의 소득저하, 작물의 품성저하 등이 현저히 나타나고 있다. 따라서, 화학비료나 농약의 사용을 줄이거나 대체할 수 있는 생물학적 처리가 대두되고 있으며, 특히 토양 생태계의 변화나 생물학적 방제의 기술이 미생물에 의해 가능하다는 것이 국내ㆍ외 여러 연구자들에 의해 입증되어지고 있다. Therefore, research on the development of pesticides and their use to control such pests continued to develop organic synthetic pesticides and biological agents. Organic synthetic pesticides were developed in the early 1900's and are very effective as a means of protecting crops, and have played an important role in increasing crop production, stable supply, and reducing the labor force of agricultural workers. However, today, excessive use of chemical fertilizers or pesticides causes salt accumulation, resulting in deterioration of incomes of farmers and deterioration of crop quality. Therefore, biological treatments that can reduce or replace the use of chemical fertilizers or pesticides are emerging, and in particular, it has been proved by various researchers at home and abroad that changes in the soil ecosystem and biological control techniques are possible by microorganisms. have.
농업 생산성을 지속하기 위해서는 환경보전형농업을 통한 토양의 건전성 확보가 필수적이다. 무엇보다도 농업의 지속성을 위협하는 큰 요인은 화학비료 및 농약의 과다사용과 장기연용에 따른 토양 악화에 있다. 특히, 화학비료의 연용은 토양을 산성화시킬 뿐 아니라 토양 내 염류집적에 의해 토양의 물리성을 악화시킴으로서 잠재적인 농업 생산성을 감소시킨다. 또한 반복적인 농약의 사용은 약제내성균의 출현과 농산물의 잔류독성 및 환경오염 등을 야기한다. 그 때문에 화학비료의 사용량을 줄이는 저투입농업(LISA)과 화학농약을 대체할 수 있는 생물학적 방제 기술의 개발로 지력을 유지 또는 증진시키는 것이 절실한 시점이다. To sustain agricultural productivity, it is essential to secure the soundness of the soil through environmentally-friendly agriculture. Above all, a major threat to the sustainability of agriculture is the overuse of chemical fertilizers and pesticides and the deterioration of soils due to long-term use. In particular, the use of chemical fertilizers not only acidifies the soil, but also reduces potential agricultural productivity by worsening the physical properties of the soil by salt accumulation in the soil. In addition, repeated use of pesticides causes the emergence of drug-resistant bacteria, residual toxicity of agricultural products, and environmental pollution. For this reason, it is an urgent time to maintain or enhance the intellect by developing low-income agriculture (LISA) that reduces the use of chemical fertilizers and biological control technologies that can replace chemical pesticides.
따라서, 많은 현재 연구자들이 여러 가지 환경으로부터 화학농약을 대체할 수 있는 생물학적 방제 기술의 개발을 위해 많은 길항 미생물을 분리하고 있고, 이 를 사용하기 위한 노력을 하고 있다.Therefore, many current researchers are working to isolate and use many antagonistic microorganisms to develop biological control techniques that can replace chemical pesticides from different environments.
미생물은 생존해 가기 위해서 자신의 생육환경을 확보할 필요가 있고, 이를 위해 다른 미생물의 생육을 억제하는 물질을 생산하여 자신의 생육 환경을 만들어낸다. 이러한 현상을 미생물끼리의 타감작용(알로파티)이라 한다. 특히, 먹이의 경합, 물질의 생산, 기생 등에 의해 병원균을 살균하거나, 억제하는 작용을 “길항”이라고 한다. 이와 같이 모든 미생물은 살아가기 위해 다른 미생물에 대해 영향을 주고 있으며, 이중 각종 병충해 방제에 도움이 되는 것을 “길항 미생물”이라고 한다.Microorganisms need to secure their own growth environment in order to survive. To this end, they produce their own growth environment by producing substances that suppress the growth of other microorganisms. This phenomenon is called sensitization (allopati) between microorganisms. In particular, the action of sterilizing or inhibiting pathogens due to food contention, production of substances, and parasitics is called "antagonism". As such, all microorganisms affect other microorganisms in order to survive, and among them, "antagonist microorganisms" are helpful for controlling various pests.
최근 생물학적 방제방법에 대한 연구가 활발히 진행되면서 우수한 항진균 활성을 가지는 미생물의 분리가 많이 이루어지고 있으며 특히, 바실러스 속(Bacillus sp.)과 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.)에서 진균에 대한 강한 항진균 활성을 가진다는 결과가 보고되고 있다. 이 중 바실러스 속 균주는 그람양성 간균으로서 토양 내에서 쉽게 분리될 수 있고, 또한 여러가지 분해 효소를 이용하여 토양 내의 염류집적 현상을 해소 할 뿐만 아니라 세포외로 분비되는 여러가지 독소를 이용하여 항진균 활성을 가지는 장점이 있어 토양 미생물 제제의 개발에 많은 관심의 대상이 되어지고 있다. Recently, as active researches on biological control methods have been conducted, many microorganisms having excellent antifungal activity have been isolated, and particularly, strong antifungal activity against fungi in Bacillus sp. And Streptomyces sp. Results have been reported. Among them, the strains of the genus Bacillus are Gram-positive bacillus that can be easily separated from the soil, and also have the advantage of having antifungal activity using various toxins secreted to the outside as well as resolving salt accumulation in the soil by using various enzymes. This has attracted much attention in the development of soil microbial agents.
또한 바실러스 속 균주는 대부분이 인간에게 비병원성이고, 쉽게 유전자 조작이 가능하며 배양이 용이한 특성을 가지고 있다. 더욱이, 내생포자의 형성으로 오랜기간 유지 및 보존이 용이하고 항생물질 생산과 내생포자 형성 등의 이유로 생물 농약의 재료로서 다른 균에 비해 광범위하게 이용되고 있다.In addition, most of the strains of the genus Bacillus are non-pathogenic to humans, easily genetically engineered, and have easy cultivation characteristics. Furthermore, endogenous spores are easy to maintain and preserve for a long time, and are widely used as biomaterials for pesticides due to antibiotic production and endogenous spore formation.
미생물 제제란 미생물 자체를 직접 이용하거나 미생물이 함유된 제제를 이용하여 농작물에 해를 주는 곤충, 응애, 선충 등의 해충과 각종 식물 병원균 혹은 잡초를 방제하는데 쓰이는 농약이라고 할 수 있다. 이러한 미생물 제제는 유기합성 농약과 비교할 때, 독성이 약하여 생태계와 인축에 해를 주지 않고 인공합성 농약과 화학비료의 양을 줄일 수 있다. Microbial preparations are pesticides used to control insects, mites and nematodes and various plant pathogens or weeds that harm crops by directly using microorganisms or by using microorganisms. Compared to organic synthetic pesticides, these microbial agents are less toxic and can reduce the amount of synthetic pesticides and chemical fertilizers without harming ecosystems and human beings.
특히, 채소 작물에 여러가지 질병을 야기하는 토양 전염 병원균의 경우 눈에 보이지 않는 땅 속의 뿌리 또는 괴경 등이 침입 부위이므로 유기 합성 농약으로는 효과적인 방제가 어렵다. 따라서 당업계에서는 토양 전염 병원균의 방제에 효과적이면서도 자연 친화적인 미생물 제제의 개발이 절실히 요구되고 있다.In particular, in the case of soil infectious pathogens causing various diseases in vegetable crops, it is difficult to effectively control the organic synthetic pesticides because the root or tubers in the ground are invasive sites. Therefore, there is an urgent need in the art for the development of microbial preparations that are effective and effective in controlling soil infectious pathogens.
이에, 본 발명자들은 채소 작물의 모잘록병, 벼 잎집 무늬 마름병, 황색 마름병, 잔디의 갈색화 등 여러 가지의 식물병을 유발하며, 많은 식물병 유발균 중 대부분을 차지하고 있는 라이족토니아 솔라니 AGII-II에 대한 강한 항진균 활성을 가지는 균주를 분리하여, 그 특성을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다. Accordingly, the inventors of the present invention cause various plant diseases such as mozzarella disease, rice leaf blight, yellow blight, and browning of grasses of vegetable crops, and to Raiztonia Solani AGII-II, which accounts for most of many plant disease-causing bacteria. Isolating strains having strong antifungal activity against, confirmed its properties and completed the present invention.
결국 본 발명의 주된 목적은 토양 전염 병원균의 방제에 효과적이면서 자연 친화적인 미생물 제제를 제공하는 데 있다. After all, the main object of the present invention is to provide a microbial preparation that is effective and effective in controlling soil infectious pathogens.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 식물병 유발균에 대한 항진균 활성을 가지고 서열번호 1의 염기서열을 가지는 바실러스 속 FF-9 균주(KACC 91157P)를 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a Bacillus genus FF-9 strain (KACC 91157P) having an antifungal activity against plant disease-causing bacteria and having the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.
본 발명에 있어서, 상기 식물병 유발균은 라이족토니아 세레아리스(Rhizoctonia cerealis), 라이족토니아 오리제(Rhizoctonia oryzae), 라이족토니아 솔라니 AG1-1A(Rhizoctonia solani AG1-1A), 라이족토니아 솔라니 AGII-II(Rhizoctonia solani AGII-II), 콜레토트리쿰 그래미니코라(Colletotrichum graminicola), 피티움 종(Pythium spp.)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인 것을 특징으로 하는 항진균 활성을 가지는 바실러스 속 FF-9 균주(기탁번호 : KACC 91157P)인 것을 특징으로 할 수 있고, 바람직하게는 라이족토니아 솔라니 AGII-II(Rhizoctonia solani AGII-II)인 것을 특징으로 할 수 있다.In the present invention, the phytopathogenic bacteria are Rhizoctonia cerealis , Rhizoctonia oryzae , Rhizoctonia solani AG1-1A ( Rhizoctonia solani AG1-1A), Ryezotonia Bacillus genus with antifungal activity, characterized in that at least one selected from the group consisting of Rhizoctonia solani AGII-II, Colletotrichum graminicola , Pythium spp. FF-9 strain (Accession Number: KACC 91157P), and may be characterized as preferably Rhizoctonia solani AGII-II ( Rhizoctonia solani AGII-II).
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또한, 본 발명은 바실러스 속 FF-9 균주 배양하는 것을 특징으로 하는 항진균 활성을 가지는 미생물 제제의 배양 방법을 제공한다.The present invention also provides a method for culturing a microbial agent having antifungal activity, characterized by culturing Bacillus genus FF-9 strain.
본 발명에 있어서, 상기 배양시 탄소원으로 락토오스를 사용하는 것을 특징으로 할 수 있고, 질소원으로 효모 추출물을, 무기염류로 K2HPO4를 사용하는 것을 특징으로 할 수 있다. In the present invention, the culture may be characterized by using lactose as a carbon source, yeast extract as a nitrogen source, K 2 HPO 4 as an inorganic salt.
또한, 본 발명은 상기 바실러스 속 FF-9 균주(기탁번호 : KACC 91157P) 또는 그 배양물을 유효성분으로 하는 진균 방제용 미생물 제제를 제공한다. In addition, the present invention provides a microbial agent for controlling fungi, wherein the Bacillus genus FF-9 strain (Accession Number: KACC 91157P) or a culture thereof is used as an active ingredient.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다. Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are only for illustrating the present invention, it will be apparent to those skilled in the art that the scope of the present invention is not to be construed as being limited by these examples.
실시예 1 : 균주의 분리Example 1 Isolation of Strains
토양으로부터 항진균 활성을 가지는 균주를 분리하기 위하여 경상남도 거제시 해금강 일대의 저병해 경작지 토양시료를 채취하였다. 이를 0.85% NaCl 멸균수에 현탁, 희석한 후 LB(Tryptone 1%, Yeast extract 0.5%, NaCl 0.15%) 고체 평판배지에 도말하여, 30℃에서 2일간 배양한 후 순수 독립 콜로니만을 일차적으로 분리하였다. 1차 분리된 균주를 LB 액체배지에서 30℃, 24시간 진탕 배양하고, 잔디 병원균으로 잘 알려진 피검균 Rhizoctonia solani AGⅡ-Ⅱ의 포자 현탁액을 도말한 PDA(Potato Dextrose Agar) 평판배지에 도말하여 30℃, 3~4일간 배양한 후 가장 우수한 포자의 생육억제 활성을 나타내는 균주를 최종적으로 선별하여 본 실험에 사용하였다. 실험에 사용된 균주의 항진균 활성을 유지하기 위해 LB 배지에서 계대 배양하면서 사용하였다.In order to isolate the strains with antifungal activity, soil samples of low diseased arable land in Haegeumgang area of Geoje, Gyeongsangnam-do were collected. It was suspended and diluted in 0.85% NaCl sterilized water, and then plated on a solid plate of LB (
도 1은 본 발명에 따른 바실러스 속 FF-9의 라이족토니아 솔라니 AGII-II에 대한 항진균 활성을 paper disk법으로 측정한 결과를 나타내는 사진으로 a는 상등액(supernatant)을 b는 세포층(cell pellet)을 c는 배양액(culture broth)을 나타 낸다. 1 is a photograph showing the results of measuring the antifungal activity of Lysatonia solani AGII-II of the genus Bacillus FF-9 by the paper disk method, a is a supernatant b cell layer (cell pellet) C represents the culture broth.
실시예 2 : 균주의 동정Example 2 Identification of Strains
선발된 균주의 동정을 위해서 16S rDNA의 부분염기서열을 분석하였다. 그리고 이 균주를 2% glutaraldehyde(0.1% MgSO4함유 0.1 M cacodylate buffer, pH 7.2)로 24시간 동안 실온에서 고정한 다음 0.1 M cacodylate buffer(pH 7.2)로 2시간 동안 세척하고, 0.2 M cacodylate buffer(pH 7.4)에 1% 농도가 되게 녹인 osmic acid(OsO4) 용액으로 4℃에서 24시간 동안 처리하여 고정시켰다. 고정된 sample에서 용액을 제거한 뒤에 50, 70, 80, 90 및 95% 에탄올에서 각각 10분간 2회씩 탈수시킨 후에 sample을 임계점 건조기에서 건조하고 platinum coating 한 다음 주사 전자 현미경(SEM, JSM-6700F, JEOL, Tokyo, JAPAN)으로 형태를 관찰하였다.Partial base sequence of 16S rDNA was analyzed for identification of selected strains. The strain was then fixed with 2% glutaraldehyde (0.1 M cacodylate buffer containing 0.1% MgSO 4 , pH 7.2) at room temperature for 24 hours, washed with 0.1 M cacodylate buffer (pH 7.2) for 2 hours, and 0.2 M cacodylate buffer (pH). 7.4) was fixed by treating with osmic acid (OsO 4 ) solution dissolved at 1% concentration at 4 ° C for 24 hours. After removing the solution from the fixed sample, dehydrating twice in 50, 70, 80, 90, and 95% ethanol for 10 minutes each, the sample was dried in a critical point dryer, platinum coated, and then subjected to scanning electron microscopy (SEM, JSM-6700F, JEOL). , Tokyo, JAPAN).
도 2는 본 발명에서 분리된 균주의 전자현미경 사진이다. 도면에 나타난 바와 같이 분리된 균주는 전형적인 간균의 형태를 취하고 있었으며 세포의 크기는 2.0×0.8 μm이었다. 한편, 도 3은 본 발명에서 분리된 균주의 16S rDNA 부분 염기서열 569bp를 나타낸 그림이며, 이는 Bacillus amyloliquefaciens 99.47%, Bacillus atrophaeus 99.26%, Bacillus vallismortis 99.12%, Bacillus subtilis subsp. subtilis 98.94%의 높은 유사도를 나타내었다. 이로부터 본 발병에서 분리된 균주는 Bacillus sp.로 동정되었고, FF-9으로 명명하였다. 본 발명자들은 상기 Bacillus sp. FF-9를 2005년 03월 22일 농업생명공학연구원 한국농용미생물보존센 터에 기탁번호 : KACC 91157P로 기탁하였다.Figure 2 is an electron micrograph of the strain isolated in the present invention. As shown in the figure, the isolated strain took the form of a typical bacilli and the cell size was 2.0 × 0.8 μm. On the other hand, Figure 3 is a figure showing the 5Sbp 16S rDNA partial sequence of the isolated strain in the present invention, which is Bacillus amyloliquefaciens 99.47 %, Bacillus atrophaeus 99.26%, Bacillus vallismortis 99.12%, Bacillus subtilis subsp. subtilis showed a high similarity of 98.94%. The strain isolated from this outbreak was identified as Bacillus sp. And named FF-9. The present inventors are the Bacillus sp. FF-9 was deposited on March 22, 2005 with the Korea Agricultural Microbiological Conservation Center, Korea Institute of Agricultural Biotechnology.
실시예 3 : 배양시간에 따른 균체 생육 및 항진균 활성 측정Example 3 Measurement of Cell Growth and Antifungal Activity According to Incubation Time
Bacillus sp. FF-9의 배양시간에 따른 균체의 생육과 항진균 활성을 측정하기 위하여 LB 액체배지에서 30℃, 24시간동안 180 rpm으로 진탕 배양한 전배양액을 동일한 배지에 2% 접종하고 3시간 간격으로 36시간 동안 spectrophotometer(UVmini-1240, Shimadzu, Kyoto, JAPAN)로 660 nm에서 균체의 생육을 측정하였다. 선발된 균주의 항진균 활성을 측정하기 위해 피검균인 Rhizoctonia solani AGⅡ-Ⅱ를 28℃에서 7일간 배양하고 배양한 plate에 0.85% NaCl 멸균수 10㎕를 가하여 104~105 spores/㎖로 포자액을 제조하여 4℃에 보관하면서 사용하였다. 조제된 포자액 0.1㎖을 PDA배지에 도말하고 선발된 균주의 배양액을 12,000rpm으로 15분간 원심분리한 상등액 50㎕를 paper disk(8 mm)법으로 측정하였다. Bacillus sp. In order to measure the growth and antifungal activity of the cells according to the incubation time of FF-9, 2% of the preculture solution shaken and cultured at 180 rpm for 30 hours at 30 ° C. in LB liquid medium was inoculated in 2% of the same medium for 36 hours at 3 hours The growth of cells at 660 nm was measured with a spectrophotometer (UVmini-1240, Shimadzu, Kyoto, JAPAN). In order to measure the antifungal activity of the selected strain, Rhizoctonia solani AGII-II, a test bacterium, was incubated at 28 ° C. for 7 days, and 10 μl of 0.85% NaCl sterilized water was added to the cultured plate to prepare spores at 104 to 105 spores / mL . It was used while storing at 4 ℃. 0.1 ml of the prepared spore solution was plated on PDA medium, and 50 µl of the supernatant obtained by centrifuging the culture medium of the selected strain at 12,000 rpm for 15 minutes was measured by a paper disk (8 mm) method.
LB 배지에서 배양시간에 따른 Bacillus sp. FF-9의 생육과 항진균 활성을 조사한 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 균체의 생육은 6시간 이후부터 급격히 증가하여 배양 12시간에서 가장 높은 생육을 나타내었으며, 그 이후부터 점차적으로 감소하다가 일정한 수치를 나타내었다. 항진균 활성은 3시간 이후부터 증가하기 시작하여 배양 18시간째에 최대 활성을 나타내었다. Bacillus sp. According to the incubation time in LB medium. As a result of examining the growth and antifungal activity of FF-9, as shown in Fig. 4, the growth of the cells rapidly increased after 6 hours, showing the highest growth at 12 hours of cultivation, and gradually decreased after that, and then gradually decreased. Indicated. Antifungal activity began to increase after 3 hours and showed maximum activity at 18 hours of culture.
실시예 4 : 배양온도에 따른 균체 생육 및 항진균 활성Example 4 Cell Growth and Antifungal Activity According to Culture Temperature
배양온도의 변화에 따른 영향을 검토하기 위하여 LB 액체배지에 전배양액을 2% 접종한 후 20, 30, 40 및 50℃에서 180 rpm으로 18시간 배양하여 균체의 생육 및 항진균 활성을 측정하였다. In order to examine the effect of the change in the culture temperature was inoculated 2% of the pre-culture in LB liquid medium and incubated at 180 rpm at 20, 30, 40 and 50 ℃ for 18 hours to measure the growth and antifungal activity of the cells.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 균체의 생육과 항진균 활성은 20℃에서 40℃까지 비교적 넓은 범위에서 높게 나타났으며, 30℃에서 항진균 활성이 가장 높게 나타났다. 그러나 40℃ 이상의 온도에서는 균체의 생육과 항진균 활성이 급격하게 감소하였다. 이는 Bacillus sp.의 경우 25~30℃의 배양온도에서 항진균 활성이 높다는 점(Kim, S.S. et al., Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol., 25:527, 1997)과 Bacillus megaterium의 경우 30℃에서 항진균 활성이 높다는점(Jung, H.K. and Kim, S.D., Kor. J. Microbiol. Biotechnol., 31:235, 2003)과 유사한 결과이다. 따라서 본 연구에서 분리된 Bacillus sp. FF-9 균주를 제제화하여 시비시 우리나라 경작시기의 기후조건에서 그 항진균 활성 및 생육을 충분히 유지할 것으로 기대된다. As a result, as shown in Fig. 5, the growth and antifungal activity of the cells appeared high in a relatively wide range from 20 ℃ to 40 ℃, the antifungal activity was the highest at 30 ℃. However, at temperatures above 40 ℃, the growth and antifungal activity of the cells rapidly decreased. This is because Bacillus sp. Has high antifungal activity at the culture temperature of 25 ~ 30 ℃ (Kim, SS et al., Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol., 25 : 527, 1997) and 30 for Bacillus megaterium . The antifungal activity is high at ℃ (Jung, HK and Kim, SD, Kor. J. Microbiol. Biotechnol., 31 : 235, 2003). Therefore, Bacillus sp. It is expected that the antifungal activity and growth of FF-9 should be formulated in climatic conditions during fertilization in Korea.
실시예 5 : 초기 pH에 따른 균체 생육 및 항진균 활성 측정Example 5 Measurement of Cell Growth and Antifungal Activity According to Initial pH
초기 pH의 변화에 따른 영향은 LB 액체배지를 pH 4.0~10.0으로 각각 조정하여 동일한 방법으로 배양한 후 균체의 생육 및 항진균 활성을 측정하였다. 그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이, 균체의 생육과 항진균 활성은 초기 pH 5에서 pH 9까지 비교적 넓은 범위에서 높게 나타났으며, 이는 Bacillus ehimensis에 의한 경우(Joo, G.J. and Kim, J.H., Kor. J. Life Science 12:242, 2002)보다 넓은 범위에 서 항진균 활성을 나타내는 것이다.The effect of the initial pH change was to adjust the LB liquid medium to pH 4.0 ~ 10.0 and then cultured in the same way to measure the growth and antifungal activity of the cells. As a result, as shown in Figure 6, the growth and antifungal activity of the cells appeared to be high in a relatively wide range from the
실시예 6 : 탄소원에 따른 균체 생육 및 항진균 활성 측정Example 6 Measurement of Cell Growth and Antifungal Activity According to Carbon Sources
탄소원 종류에 따른 영향을 검토하기 위하여 LB 배지 즉, 1.0%의 트립톤(tryptone), 0.5%의 효모 추출물, 0.15%의 NaCl과 탄소원으로 글루코오스(glucose), 갈락토오스(galactose), 말토오스(maltose), 락토오스(lactose) 및 수크로오스(sucrose)를 각각 1% 농도로 넣고 배양액 초기 pH를 8.0으로 조정하였다. 전배양액을 2% 접종한 후 30℃에서 180 rpm으로 18시간 배양하여 균체의 생육 및 항진균 활성을 측정하였다(표 1).To examine the effects of different carbon sources, LB medium: 1.0% tryptone, 0.5% yeast extract, 0.15% NaCl and carbon sources with glucose, galactose, maltose, Lactose (lactose) and sucrose (sucrose) were each added at a concentration of 1% and the initial pH of the culture was adjusted to 8.0. After inoculating 2% of the preculture, the cells were incubated at 30 rpm for 18 hours to measure the growth and antifungal activity of the cells (Table 1).
표 1에 나타난 바와 같이, 균체의 생육과 항진균 활성은 탄소원을 첨가한 모든 배양액에서 비교적 양호하게 나타났으며, sucrose를 사용했을 때 균체의 생육이 가장 높게 나타났다. 특히 항진균 활성은 lactose를 사용했을 때 가장 높게 나타났다. As shown in Table 1, the growth and antifungal activity of the cells was relatively good in all cultures containing carbon source, and the growth of cells was the highest when sucrose was used. In particular, antifungal activity was highest when lactose was used.
또한, 첨가한 탄소원 중 균체의 생육 및 항진균 활성이 가장 우수한 탄소원인 락토오스를 각각 1, 2, 3, 4 및 5% 농도로 첨가하여 균체의 생육 및 항진균 활성에 미치는 탄소원 농도를 결정하였다. 그 결과 도 7에 나타난 바와 같이, lactose의 농도를 1%로 첨가하였을 때 균체의 생육과 항진균 활성이 가장 높게 나타났고, 그 이상의 농도에서는 catabolite repression으로 인해 항생물질 생산성이 오히려 감소하였다. In addition, the concentration of carbon source on the growth and antifungal activity of the cells was determined by adding lactose, a carbon source having the best growth and antifungal activity of the cells, at 1, 2, 3, 4 and 5% concentrations, respectively. As a result, as shown in Figure 7, the addition of lactose concentration of 1% showed the highest growth and antifungal activity of the cells, and at higher concentrations, the antibiotic productivity decreased due to catabolite repression.
실시예 7 : 질소원에 따른 균체 생육 및 항진균 활성 측정Example 7 Measurement of Cell Growth and Antifungal Activity According to Nitrogen Sources
질소원 종류에 따른 영향을 검토하기 위하여 앞의 결과에서 선택된 탄소원을 최적 농도로 넣어주고 LB 배지 즉, 1.0%의 락토오스, 0.5%의 효모 추출물, 0.15%의 NaCl과 질소원으로 LB 배지의 조성 중 트립톤 대신에 펩톤(peptone), 소이톤(soytone), 효모 추출물(yeast extract), 맥아 추출물(malt extract), 쇠고기 추출물(beef extract) 등의 유기 질소원과 (NH4)2SO4, NH4Cl 등의 무기 질소원을 각각 1% 농도로 넣고 배양액 초기 pH를 8.0으로 조정하였다. 전배양액을 2% 접종한 후 30℃에서 180 rpm으로 18시간 배양하여 균체의 생육 및 항진균 활성을 측정하였다(표 2). In order to examine the effects of different nitrogen sources, try to put the carbon source selected from the previous results in the optimum concentration and tryptone in the composition of LB medium with LB medium, 1.0% lactose, 0.5% yeast extract, 0.15% NaCl and nitrogen source. instead of such a peptone (peptone), soy tone (soytone), yeast extract (yeast extract), malt extract (malt extract), beef extract (beef extract) an organic nitrogen source, and (NH4) 2 SO 4, NH 4 Cl , such as the Inorganic nitrogen sources were each added at a concentration of 1% and the initial pH of the culture was adjusted to 8.0. After inoculating 2% of the preculture, the cells were cultured at 180 rpm for 18 hours at 30 ° C. to measure the growth and antifungal activity of the cells (Table 2).
표 2에 나타난 바와 같이, 균체의 생육은 유기 질소원인 soytone에서 가장 높게 나타났으며, 무기 질소원인 NH4Cl에서는 가장 낮았다. 항진균 활성도 대체적으로 유기 질소원이 무기 질소원 보다 높게 나타났으며, 특히 yeast extract에서 가장 높게 나타났다. As shown in Table 2, the growth of cells was the highest in soytone, an organic nitrogen source, and the lowest in NH 4 Cl, an inorganic nitrogen source. Antifungal activity was also higher in organic nitrogen sources than inorganic nitrogen sources, especially in yeast extracts.
측정한 질소원 중 균체의 생육 및 항진균 활성이 가장 우수한 질소원인 효모추출물을 각각 1, 2, 3, 4 및 5% 농도로 첨가하여 균체의 생육 및 항진균 활성이 가장 우수한 질소원의 농도를 결정하였다(도 8).Among the measured nitrogen sources, yeast extract, the nitrogen source with the highest growth and antifungal activity, was added at 1, 2, 3, 4 and 5% concentrations, respectively, to determine the concentration of the nitrogen source with the highest growth and antifungal activity. 8).
도 8에 나타난 바와 같이, 균체의 생육은 yeast extract의 농도가 증가함에 따라 약간 증가하는 경향을 나타내었지만, 항진균 활성은 1% 농도에서 가장 높게 나타내어 탄소원에서와 같이 적정 농도 이상에서는 저해를 받는 경향을 나타내었다. As shown in FIG. 8, the growth of the cells showed a tendency to increase slightly as the concentration of yeast extract was increased, but the antifungal activity was the highest at 1% concentration, indicating a tendency to be inhibited at an appropriate concentration or higher as in the carbon source. Indicated.
실시예 8 : 무기염류에 따른 균체 생육 및 항진균 활성 측정Example 8 Measurement of Cell Growth and Antifungal Activity According to Inorganic Salts
무기염류에 따른 영향을 검토하기 위하여 앞서 결정된 탄소원과 질소원을 최적의 농도로 첨가하고 LB 배지 조성 중 NaCl 대신에 MgSO4, K2HPO4, KH2PO4, FeSO4 및 CaCl2을 각각 0.15% 농도로 첨가하고 배양액 초기 pH를 8.0으로 조정하였다. 전배양액을 2% 접종한 후 30℃에서 180 rpm으로 18시간 배양하여 균체의 생육 및 항진균 활성을 측정하였다(표 3).In order to examine the effects of inorganic salts, the carbon and nitrogen sources determined above were added at the optimum concentrations, and 0.15% MgSO 4 , K 2 HPO 4 , KH 2 PO 4 , FeSO 4 and CaCl 2 were respectively substituted for NaCl in the LB medium composition. Concentration was added and the culture initial pH was adjusted to 8.0. After inoculating 2% of the preculture, the cells were cultured at 180 rpm for 18 hours at 30 ° C. to measure the growth and antifungal activity of the cells (Table 3).
표 3에 나타난 바와 같이, 균체의 생육과 항진균 활성은 MgSO4, K2HPO4 그리고 FeSO4가 가장 좋은 효과를 보였다. 특히, K2HPO4를 첨가한 경우 다른 무기염류에 비해 균체의 생육은 그리 높지 않았지만 항진균 활성은 가장 높게 나타났다. As shown in Table 3, MgSO 4 , K 2 HPO 4 and FeSO 4 showed the most effective growth and antifungal activity. In particular, when K 2 HPO 4 was added, the growth of cells was not very high compared to other inorganic salts, but the antifungal activity was the highest.
실시예 9 : 항진균 spectrumExample 9 Antifungal Spectrum
선발된 Bacillus sp. FF-9 균주의 항진균 활성 및 항균 활성을 측정하기 위하여 잔디 병원균으로 잘 알려진 Rhizoctonia cerealis(잎마름병), Rhizoctonia oryzae(흰마름병), Rhizoctonia solani AG1-1A(갈색마름병), Rhizoctonia solani AGⅡ-Ⅱ(갈색퍼짐병), Colletotrichum graminicola(탄저병), Pythium spp.(피시움 클라이트병), Erwinia carotovora KCCM32003(연부병), Salmonella typhimurium KCTC 2514 총 8종을 한국잔디연구소와 유전자원센터(KCTC)로부터 분양받아 계대 배양 후 사용하였다. 항균 실험은 paper disk법을 이용하여 disk 주변의 저지환의 생성유무와 지름을 반복 측정하여 각 피검균에 대한 항균 spectrum을 실시하였다(표 4).Selected Bacillus sp. Rhizoctonia cerealis (leaf blight), Rhizoctonia oryzae (white blight), Rhizoctonia solani AG1-1A (brown blight), Rhizoctonia solani AGII-II (brown) Spread disease), Colletotrichum graminicola (anthrax), Pythium spp. ( Psidium celite), Erwinia carotovora KCCM32003 (middle disease), Salmonella typhimurium KCTC 2514
- : 항진균 활성 없음-: No antifungal activity
+ : 0<X≤20mm 직경의 억제대+: 0 <X≤20mm diameter restraining band
++ : 20mm<X≤20mm 직경의 억제대++: 20mm <X≤20mm diameter restraining band
+++ : 40mm<X 직경의 억제대+++: 40mm <X diameter restrainer
표 4에 나타난 바와 같이, Bacillus sp. FF-9 균주는 피검균으로 사용했던 진균들에 모두 억제력을 나타내었고, 특히 Rhizoctonia solani AGⅡ-Ⅱ에 대하여 높은 항진균 활성을 나타내었다. 그러나 세균병(Erwinia carotovora, Salmonella typhimurium KCTC 2514)에는 항균 활성을 나타내지 않았다. As shown in Table 4, Bacillus sp. The FF-9 strain showed inhibitory activity against all fungi used, especially high antifungal activity against Rhizoctonia solani AGII-II. However , it did not show antimicrobial activity against bacterial diseases ( Erwinia carotovora, Salmonella typhimurium KCTC 2514).
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의 된다고 할 것이다. As described above in detail the specific parts of the present invention, for those of ordinary skill in the art, these specific descriptions are only preferred embodiments, which are not intended to limit the scope of the present invention. Will be obvious. Therefore, the substantial scope of the present invention will be defined by the appended claims and their equivalents.
이상 상세히 기술한 바와 같이, 본 발명의 바실러스속 FF-9 균주는 기존의 유기합성 농약과 비교할 때, 독성이 약하여 생태계와 인축에 해를 주지 않고, 또한 기존의 미생물 제제에 비하여 넓은 범위의 온도와 pH에서 항진균 활성을 나타내므로 우리나라 경작시기의 기후조건에서 그 항진균 활성 및 생육이 충분히 유지 될 수 있어 미생물 제제로 매우 유용하다. 또한 피검균으로 사용했던 진균들에 모두 억제력을 나타낸 것으로 보아 방제범위가 넓은 진균성 병원균의 방제균으로 활용될 수 있다.As described in detail above, the Bacillus genus FF-9 strain of the present invention is weak in toxicity compared to conventional organic synthetic pesticides, does not harm the ecosystem and shrinkage, and also has a wide range of temperature and As it shows antifungal activity at pH, it is very useful as a microbial agent because its antifungal activity and growth can be maintained sufficiently in the climatic conditions of Korea's cultivation period. In addition, all of the fungi used as a test bacterium exhibited inhibitory power, and thus can be used as a control bacterium of a broad range of fungal pathogens.
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR19990081459A (en) * | 1998-04-29 | 1999-11-15 | 김홍기 | Biological Control Method of Ginseng Serial Injury and Novel Antagonistic Bacteria |
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR19990081459A (en) * | 1998-04-29 | 1999-11-15 | 김홍기 | Biological Control Method of Ginseng Serial Injury and Novel Antagonistic Bacteria |
| KR20020076719A (en) * | 2001-03-30 | 2002-10-11 | 주길재 | Antagonistic bacillus ehimensis against vegetables damping-off |
| KR20020090251A (en) * | 2001-05-26 | 2002-12-02 | 이기성 | THE NOVEL ANTIFUNGAL BACTERIA Bacillus subtilis EBM 13 AND THE BIOPESTICIDES CONTAINING THEREOF |
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