본 발명에 따른 화장료 조성물은 텍토리게닌을 함유한다.
사간 등의 식물에 존재하는 플라보노이드 유도체들 중 텍토리게닌은 가장 높은 iNOS 효소(inducible nitric oxide synthase)에 의한 NO 생성 저해능을 갖고 있기 때문에 텍토리게닌을 화장료 조성물에 첨가하면 피부를 청결하게 유지하는 것이 가능하다. 그 외 이리텍토리게닌 A (iritectorigenin A)도 약한 NO 생성 저해능을 보이며, 이리스플로렌틴 (irisflorentin)은 NO 생성 저해능을 보이지 않는다.
본 발명에 따른 화장료 조성물에 있어서, 텍토리게닌의 양은 화장료 중량에 대하여 0.00001 중량% ∼ 0.1 중량%이다.
본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장료 중량에 대하여 비타민 C 0.0001 중량% ∼ 1.0 중량% 또는 비타민 E 0.0001 중량% ∼ 1.0 중량%를 더 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 화장료 중량에 대하여 비타민 C 0.0001 중량% ∼ 1.0 중량% 및 비타민 E 0.0001 중량% ∼ 1.0 중량%를 더 포함할 수도 있다.
비타민 C와 비타민 E는 화장료 조성물에 있어 일반적으로 널리 사용되고 있는 항산화제들로서, 비타민 C는 수용성 항산화제이고, 비타민 E는 유용성 항산화제이다. 이들은 텍토리게닌의 NO 생성 저해능에 대한 상승작용을 한다.
본 발명의 텍토리게닌을 함유하는 화장료는 유연화장수, 영양화장수, 영양크림, 맛사지크림, 엣센스 및 팩 등의 제형을 갖는다.
이하, 본 발명은 몇몇 바람직한 실시예에 의하여 좀 더 구체적으로 기술된다. 그러나, 본 발명은 하기 실시예에 제한되는 것은 아니다.
실시예 1
사간 100g에 80% 에탄올 500ml를 넣고, 90℃에서 3시간 가열한 다음, 실온에서 방치하여 사간의 80% 에탄올 열수추출물을 얻었다. 이 추출물을 감압건조하여 건조물 26.5g을 얻었다.
실시예 2
사간 100g에 80% 에탄올 500ml를 넣고, 90℃에서 3시간 가열한 다음, 50℃에서 3시간 방치하여 사간의 80% 에탄올 열수추출물을 얻었다. 이 추출물을 감압건조하여 건조물 24.0g을 얻었다.
실시예 3
실시예 1 및 2에서 얻은 사간의 80% 에탄올 열수추출물을 물과 클로로포름으로 분획하고, 클로로포름 분획을 감압건조하였다. 소량의 메탄올에 녹인후 실리카겔컬럼에 넣고 클로로포름:메탄올 (97:3-95:5)을 이용하여 텍토리게닌, 이리스텍토리게닌 A 및 이리스플로렌틴을 분리하였다.
텍토리게닌 (4',5,7-트리히드록시-6-메톡시이소플라본): 아세톤으로 재결정, 미황색침상결정, m.p. = 228-230℃, 1H-NMR (DMSO-d6) δ 8.36 (1H, s, H-2), 7.39 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-2' 및 6'), 6.83 (2H, d, J = 8.4 Hz, H-3' 및 5'), 6.52 (1H, s, H-8), 3.76 (3H, s, -OCH3)., 13C-NMR (DMSO-d6) δ154.1 (C-2), 121.7 (C-3), 180.6 (C-4), 152.7 (C-5), 131.5 (C-6), 153.2 (C-7), 93.7 (C-8), 157.4 (C-9), 104.7 (C-10), 121.1 (C-1'), 130.1 (C-2'), 114.9 (C-3'), 157.4 (C-4'), 114.9 (C-5'), 130.1 (C-6'), 59.8 (-OCH3).
이리스텍토리게닌 A (3',5,7-트리히드록시-4',6-디메톡시이소플라본): 아세톤으로 재결정, 미황색침상결정, m.p. = 234-236℃, 1H-NMR (DMSO-d6) δ13.10 (1H, s, 5-OH), 8.40 (1H, s, H-2), 7.15 (1H, d, J =1.8 Hz, H-2'), 7.0 (1H, dd, J = 1.8 및 8.0 Hz, H-6'), 6.84 (1H, d, J = 8.0 Hz, H-5'), 6.53 (1H, s, H-8), 3.81 및 3.77 (6H, 2s, 2 -OCH3)., 13C-NMR (DMSO-d6) δ154.31 (C-2), 121.60 (C-3), 180.53 (C-4), 152.65 (C-5), 131.32 (C-6), 157.43 (C-7), 93.72 (C-8), 153.25 (C-9), 104.73 (C-10), 121.75 (C-1'), 113.16 (C-2'), 147.19 (C-3'), 146.63 (C-4'), 115.15 (C-5'), 121.56 (C-6'), 59.78 및 55.53 (-OCH3).
이리스플로렌틴(3',4',5,5'-테트라히드록시-6,7-디메틸렌디옥시이소플라본): 아세톤으로 재결정, 미황색침상결정, m.p. = 163-165℃, 1H-NMR (DMSO-d6) δ7.82 (1H, s, H-2), 6.76 (2H, s, H-2' 및 6'), 6.65 (1H, s, H-8), 6.09 (2H, s, -O-CH2-O-), 4.07 (3H), 3.89 (6H), 및 3.87 (3H) (3s, 4 -OCH3)., 13C-NMR (DMSO-d6) δ 153.09 (C-2), 125.80 (C-3), 175.44 (C-4), 141.85 (C-5), 135.77 (C-6), 154.82 (C-7), 93.35 (C-8), 150.92 (C-9), 113.87 (C-10), 127.53 (C-1'), 106.73 (C-2'), 153.26 (C-3'), 138.19 (C-4'), 153.26 (C-5'), 106.73 (C-6'), 102.34 (-O-CH3-O), 61.34, 60.90 및 56.27 (4 -OCH3).
실시예 4
실시예 1 및 2로부터 얻은 사간의 80% 에탄올 열수추출물을 물과 에틸아세테이트로 분획하여 얻은 분획의 텍토리게닌 함량을 HPLC 방법으로 측정하였다. 텍토 리게닌의 함량(%)은 80% 에탄올 열수추출물의 건조중량에 대한 백분율이며, 다음 식에 의하여 표시하였다. 결과는 하기 표 1과 같다.
HPLC 조건 : Reverse phase-C18-column (Shimatzu, 250mm), 1 ml/min flow rate, solvent system A (H2O:HOAc = 99:1), B (AcCN:HOAc = 99:1), A-->B gradient (76min), (82:18-0:100-18:82).
Retention time : 텍토리게닌 42.0 min.
|
텍토리게닌의 함량 (%) |
80% 에탄올 열수추출물 |
1.32 |
에틸아세테이트 분획 |
0.94 |
물 분획 |
0.05 |
실시예 5
RAW 264.7 세포주를 ATCC로부터 구입하여, DMEM 배지에서 10% FCS 존재하에 배양하였다. iNOS 효소를 발현시켜 NO를 생성하기 위하여 LPS 1㎍/㎖를 24시간 처리하였다. 그 후 Griess 시약을 이용하여 NO 생성량을 측정하였다. 그 결과, 2.8 ± 0.1 μM의 NO 생성량이 58.0 ± 4.5 μM로 증가하였다(n=3).
실시예 6
사간추출물에 함유되어 있는 어떤 물질이 활성을 보이는가를 밝히기 위하여 실시예 3에서 분리한 물질들을 대상으로 실시예 5와 동일한 조작을 하여 NO 생성 저해능을 측정하였다. 그 결과는 하기 표 2와 같다.
사간에 존재하는 플라보노이드 유도체들의 NO 생성 저해능
조성 |
% 저해능 |
LPS 대조군 |
- |
텍토리게닌 (100 μM) |
74.1*
|
이리스텍토리게닌 A (100 μM) |
55.6*
|
이리스플로렌틴 (100 μM) |
- |
텍토리게닌 (100 μM) + Vit.C (100 μM) |
76.4*
|
텍토리게닌 (100 μM) + Vit.E (100 μM) |
78.1*
|
텍토리게닌 (200 μM) + Vit.C (100 μM) + Vit.E (100 μM) |
80.4*
|
* P < 0.001, LPS 대조군과 비교하여 유의적으로 다름 (n=3)
상기 표 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 사간에 존재하는 플라보노이드 유도체들 중 텍토리게닌의 활성이 가장 높았다. 또한 텍토리게닌에 텍토리게닌:비타민 C 또는 E = 1:1 이상 또는, 텍토리게닌:비타민 C:비타민 E = 2:1:1 이상의 비율로 비타민 C 또는 E를 첨가하면 더욱 높은 활성을 보였다.
실시예 7
텍토리게닌의 NO 생성 저해기전을 밝히기 위하여, 기질로 [3H]아르기닌을 사용하여 iNOS 효소의 직접적인 효소억제작용을 측정하였다. 그 결과, 도 1에서 볼 수 있는 바와 같이 100 μM의 농도까지 유의성 있는 저해능을 보이지 않았다.
실시예 8
가장 강한 NO 생성저해능을 보이는 텍토리게닌의 iNOS 효소 발현에 대한 저해능을 측정하기 위하여 선택적인 iNOS 항체를 이용하여 전기영동 후 웨스턴 블로팅 (western blotting)을 하였다. 그 결과, 도 2에서 볼 수 있는 바와 같이 텍토리게닌은 LPS에 의한 iNOS 효소의 발현을 용량 의존적으로 저해하였다. 그러므로 텍토리게닌의 NO 생성 저해능은 iNOS 효소 발현을 선택적으로 저해함으로서 행해짐을 알 수 있었다.
실시예 9
ICR 마우스를 이용하여, 본 발명에 따른 화장료 조성물의 피부적용 및 경구투여시의 급성독성을 측정하였다. 그 결과, 본 발명에 따른 화장료 조성물들은 피부적용에서는 100 mg/cm2까지, 경구투여시에는 1g/kg까지 급성독성을 보이지 않았다.
처방예 1
텍토리게닌을 함유한 화장료 중 유연화장수(스킨)의 처방예는 다음과 같다.
성분 |
함량(단위 : 중량%) |
텍토리게닌 |
0.001 |
1,3-부틸렌글리콜 |
5.0 |
글리세린 |
5.0 |
에탄올 |
10.0 |
올레일 알코올 |
0.1 |
폴리 소베이트 20 |
0.5 |
방부제 |
미량 |
향 |
미량 |
색소 |
미량 |
정제수 |
잔량 |
계 |
100 |
처방예 2
텍토리게닌을 함유한 화장료중 영양 화장수(로션)의 처방예는 다음과 같다.
성분 |
함량(단위:중량%) |
텍토리게닌 |
0.002 |
1,3-부틸렌글리콜 |
5.0 |
글리세린 |
5.0 |
트리에탄올아민 |
1.2 |
유동파라핀 |
5.0 |
스쿠알란 |
3.0 |
마카다미아너트오일 |
2.0 |
폴리소베이트 60 |
1.5 |
솔비탄 세스퀴 올레이트 |
1.0 |
카르복시 비닐 폴리머 |
1.0 |
방부제 |
미량 |
향 |
미량 |
색소 |
미량 |
정제수 |
잔량 |
계 |
100 |
처방예 3
텍토리게닌을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 다음과 같다.
성분 |
함량(단위:중량%) |
텍토리게닌 |
0.005 |
프로필렌글리콜 |
5.0 |
글리세린 |
5.0 |
트리에탄올아민 |
0.5 |
유동파라핀 |
10.0 |
스쿠알란 |
3.0 |
바셀린 |
7.0 |
밀납 |
2.0 |
폴리소베이트 60 |
2.0 |
솔비탄 세스퀴 올레이트 |
2.5 |
카르복시 비닐 폴리머 |
0.5 |
방부제 |
미량 |
향 |
미량 |
색소 |
미량 |
정제수 |
잔량 |
계 |
100 |