KR100603088B1

KR100603088B1 - 식물 병원성 미생물에 대한 살충제

Info

Publication number: KR100603088B1
Application number: KR1020007004902A
Authority: KR
Inventors: 윌렘 야코부스 라벤스버그; 리차드 카렐 반델파스; 클래스 다니엘 쿠센드라줘; 조하네스 안토니우스 마리아 매스
Original assignee: 코퍼트 비.브이.; 캄피나-멜쿠니에 비.브이.
Priority date: 1997-11-05
Filing date: 1998-11-05
Publication date: 2006-07-20
Also published as: IL135946A0; HUP0004393A3; PL193620B1; DK1028628T3; KR20010031831A; JP2001521878A; AU752395B2; JP4545311B2; NL350034I2; RU2224436C2; IL135946A; NL350034I1; BR9813969A; WO1999022597A1; NZ504293A; CA2309500A1; AU1178699A; DE69811709T2; TR200001273T2; EP1028628A1

Abstract

락토퍼옥시다제, 티오시아네이트 및/또는 아이오다이드 및 과산화수소 공여계, 특히 글루코스 옥시다제 및 글루코스를 포함하는 제형은 진균과 세균 같은 식물 병원성 미생물의 구제에 유용하다. 바람직하기는, 제형은 또한 오일을 함유한다.

Description

식물 병원성 미생물에 대한 살충제{PESTICIDE AGAINST PLANT-PATHOGENIC MICRO-ORGANISMS}

본 발명은 식물 병원성 세균과 진균을 구제(control)하기 위한 조성물과 그 조성물을 시용하는 방법에 관한 것이다.

세균과 진균 등의 유기체에 대해서 여러 가지 형태의 살충제가 존재한다. 이것들은 종종 인간이나 동물 그리고 환경에 장애를 가져올 수 있는 합성 약제들이다. 게다가 이러한 약제들은 종종 구제시킬 유기체가 살충제에 대한 내성을 갖는 결점을 갖는다. 그래서 관련 병원체를 구제하기 위한 새로운 약제를 발견해야만 한다.

그 활성이 온도와 연관되어 있거나 소정의 습도에 의존하는 것으로 알려져 있는 몇 가지 살진균제가 있다. 실외에서 자라는 수목과 초목을 치료하기 위해서, 이와 같이 한정된 사용 조건은 큰 결점이다. 그러나, 온실 안에서 재배하는 작물의 경우에 있어서도 비슷한 문제들이 일어날 수 있다.

본 발명의 목적은 상기한 결점을 갖지 않고, 현장에서 수목, 초목 등의 병원성 세균 및 진균을 구제하기 위하여 사용될 수 있는 새로운 살충제를 제공하는 것이다.

이 목적은 본 발명에 의하여 락토퍼옥시다제, 티오시아네이트(SCN^-) 및/또는 아이오다이드(I^-) 및 과산화수소 공여계, 특히 글루코스 옥시다제 및 글루코스로 구성되는 조성물로 성취된다. 글루코스 옥시다제 / 글루코스계 이외에, 과탄산나트륨 또는 안정화된 과산화수소와 같은 기타 수소 공여계도 또한 사용할 수 있다.

본 발명에 의한 이 새로운 약제의 장점은 내성의 위험이 매우 적거나 없다는 것이다. 게다가, 이 약제는 천연물에 기초한 약제이다.

락토퍼옥시다제의 항균 활성은 원래 알려져 있는데, 예를 들면 유럽 특허 제 0514417호와 국제 특허 출원 WO97/26908호에 기재되어 있다. 그러나, 이들은 화장품의 보존과 인간과 동물의 의료 목적을 위한 소위 LP계(락토퍼옥시다제계)의 사용에 관한 것이다. 초목, 수목 및 이들의 부분에서의 미생물 감염 치료는 인간과 동물과는 전혀 다른 (그리고 종종 크게 변화된) 상태에서 행하여지므로, 락토퍼옥시다제에 기초한 공지의 계들이 또한 현장에서 식물 병원체에 대해 동일한 살균 효과를 가질 수 있을 지는 불분명하다.

앞에서 이미 지적한 것처럼, 많은 초목, 특히 농작물과 수목들은 실외에서 자라며, 그 때문에 바람, 비, 햇 볕, 온도 변화 등과 같은 기상 상태에 영향을 받는다. 이러한 요소들은 모두 효소에 기초한 계의 유효성을 감소시킬 수 있는데, 이 계는 화학 살충제에 비하여 비교적 민감하다. 이 때문에, 살충제 분야의 숙련가도 락토퍼옥시다제에 기초한 살충제의 유용성과 폭넓은 적용성을 즉시 알아차리지 못할 것이다.

본 발명의 바람직한 구현예에서는 오일 기재를 조성물에 첨가한다. 조성물 중에 비교적 소량의 오일 기재를 포함시킴으로써, 조성물의 유효성은 놀랍게 향상된다.

오일은 초목의 잎과 다른 부분에 조성물의 양호한 분포성을 보장하고, 실제로 수용성 조성물인 약제의 증발을 방지하는 목적을 갖는다. 조성물의 활성은 특정한 온도나 상대 습도에 의존하지 않는다. 계(system)는 항생제처럼 미생물에 특이 효과를 주지 않기 때문에, 개발 중인 조성물에 대해 내성이 생길 가능성은 적다. 식물, 동물 그리고 인간의 세포는 계에 대해 영향을 받지 않는다.

본 발명에 의한 조성물은 예를 들면, 수용액 리터당 락토퍼옥시다제 10 mg 이상, 글루코스 옥시다제 50 I.U. 이상, 글루코스 0.05 % 이상, 아이오다이드 (I^-) 25 mg 이상, 티오시아네이트 (SCN^-) 5 mg 이상, 그리고 임의로 오일 기재 최대 1 %를 포함한다. 임의로, 상기 조성물에 최대로 살포제 0.2 %를 추가할 수 있다. 바람직하기는, 조성물은 수용액 리터당, 락토퍼옥시다제 50 mg 이상, 글루코스 옥시다제 100 I.U. 이상, 글루코스 0.1 % 이상, 아이오다이드 (I^-) 50 mg 이상, 티오시아네이트 (SCN^-) 10 mg 이상 그리고 임의로 오일 기재 최대 0.1 %를 포함한다. 임의로 상기 조성물에 최대로 살포제 0.1 %를 추가할 수 있다.

조성물의 양호한 활성은, 이 조성물이 수용액 리터당 10 내지 100 mg, 바람직하기는 30 내지 70 mg의 락토퍼옥시다제, 50 내지 1000 I.U. 바람직하기는 100 내지 250 I.U.의 글루코스 옥시다제, 0.05 내지 2 %, 바람직하기는 0.1 내지 1 %의 글루코스, 25 내지 200 mg, 바람직하기는 50 내지 100 mg의 아이오다이드(I^-), 5 내지 50 mg, 바람직하기는 10 내지 20 mg의 티오시아네이트(SCN^-), 임의로 0.01 내지 2 %, 바람직하기는 0.2 내지 1 %의 오일 기재를 포함하는 경우에 얻어진다. 임의로, 첨가할 수 있는 살포제의 양은 0.01 내지 0.2 %, 바람직하기는 0.05 내지 0.07 % 양이다.

오일 기재는 수중유(oil-in-water) 에멀젼을 형성하기 위하여, 적어도 하나의 오일과 수용액 중에서 오일을 유화시키는 약제로 항상 이루어진다. 유화제는 독립된 유화제일 수도 있고, 또한 자체-유화성을 갖는 오일 자체일 수도 있다. 자체- 유화성을 갖는 오일은, 예를 들면, 에톡실화에 의하여 오일을 개질시켜 제조할 수 있다. 당업자는 그의 전문 지식에 기초해서, 정해진 오일에 가장 적합한 유화제를 선택할 수 있다.

오일 기재에 사용되는 오일은 미네랄 오일, 식물성 오일과 동물성 오일, 또는 이러한 군의 한가지 이상의 오일의 혼합물로 부터 선택된다. 추천된 오일은 이미 크고 작은 정도의 항균 활성을 갖는 것으로 알려져온 오일들이다.

식물성 오일의 예는 땅콩 기름, 참깨유, 평지씨 기름, 아마인유, 피마자유, 대두유, 옥수수눈 기름, 목화씨 기름 등이 있다. 이들 중에서, 땅콩 기름이 본 발 명의 목적에 특히 적합한 것으로 밝혀졌다.

동물성 오일의 경우, 예를 들면, 청어 기름이나 고등어 기름과 같은 어유를 선택했다. 적절한 미네랄 오일로는, 예를 들면, 다양한 타입의 파라핀유나 케로신형 오일이 있다.

치료를 위하여 조성물이 표면 상에 분포하도록, 한가지 이상의 살포제를 조성물이나 오일 기재에 더욱 첨가할 수 있다. 당업자는 적당한 살포제를 매우 잘 선택해낼 수 있다. 이러한 살포제는 통상으로 비이온성 표면 장력 감소 물질이다. 예를 들면, Volpo T7^TM등의 에톡실화 알콜 및 Nathin 130^TM 등의 포스파티딜 리피드가 추천된다.

발명에 의한 조성물의 특히 적합한 구현예에서, 오일 기재는 적어도 오일 80 내지 90 부, 바람직하기는 85 부; 유화제 5 내지 15 부, 바람직하기는 10 부; 임의로 레시틴 분획물 1 내지 10부, 바람직하기는 5 부로 구성된다. 임의로, 조성물에 수용액 리터당 살포제 0.01 내지 0.2 %, 바람직하기는 0.05 %를 첨가할 수 있다.

적절한 구현예에서, 본 발명에 의한 조성물은 Volpo T7^TM(CRODA) 등의 에톡실화 알콜로 이루어진 살포제 이외에, 땅콩 기름, 유화제인 Atlas 1086^TM(ICI)등의 폴리옥시에틸렌 솔비톨 헥사올레이트로 이루어진 오일 기재와, Nathin 130^TM(ENR) 등의 포스파티딜 리피드로 구성된 레시틴 분획물로 구성된다.

조성물의 활성을 현장에서 지연시키기 위해서, 한가지 이상의 접착제를 첨가할 수 있다. 접착제는 예를 들어, 비나 기타 상황에 의해 조성물의 성분이 씻겨 나가지 않도록 보장해준다. 당업자는 시판용 공급품으로 부터 접착제를 간단한 방법으로 선택할 수 있다. 예로서, 전분, 크산탄 고무(gum), 아라비아 고무 등의 고무 및 카르복시메틸 셀룰로스(CMCs)가 있다.

조성물은 분무, 살수, 분사, 공중 분무, 관수, 침지, 점적관수의 방법으로 적용할 수 있다. 조성물의 적용을 위해 특히 유리한 방법은, 저 용적법(미스트 시스템; low volume method)과 고 용적법에 의한 두 가지 분무법이다. 점적관수는 암면(rockwool)과 다른 성장 기질에서의 재배 시스템을 위해 또한 사용할 수 있다. 또한 발명에 의한 살충제는 점적관수 시스템을 소독하기 위해 사용할 수 있다. 후자의 두 가지 경우에 오일 기재의 존재가 최적 활성을 위해 꼭 필요하지는 않다. 조성물이 든 용액조 중에 침지하는 것은, 초목의 부분, 특히 구근, 괴경, 과실 등과 같은 수확 가능한 부분의 치료에 적합하다.

본 발명에 따른 조성물은 상업적으로 유용한 다른 형태로 만들 수 있다. 생산품의 보존 기간을 증가시키는 락토퍼옥시다제 효소의 활성을 가능한 오랫동안 지연시키기 위한 형태가 추천된다. 락토퍼옥시다제 효소의 활성은 과산화수소 공여체가 존재하자마자 시작된다. 이 경우에 있어서, 글루코스 옥시다제 / 글루코스계가 과산화수소 공여체이다. 그러므로, 적어도 정해진 적용을 위해서라도, 개별적으로 락토퍼옥시다제 효소의 과산화수소 공여체를 공급하는 것이 권장된다. 그 외에, 오일 기재와 살포제를, 필요에 따라, 개별적으로 포장할 수 있다.

본 발명의 특별한 구현예에서 조성물을 형성하기 위해 키트가 제공되는데, 이 키트는 적어도 락토퍼옥시다제와 임의 첨가제로 이루어지는 임의로 농축된 효소 조성물과, 적어도 글루코스 옥시다제 및 글루코스, 티오시아네이트 및/또는 아이오다이드 및 임의의 기타 첨가제로 이루어지는 과산화수소 공여 조성물과, 적어도 오일, 임의 유화제, 선택적 살포제 및 임의 기타 첨가제로 이루어지는 오일 조성물로 구성되며, 세 가지 조성물을 사용 전에 비율에 따라 서로 혼합시킴으로써 본 발명에 의한 조성물을 얻을 수 있다.

본 발명에 의한 조성물은 임의로 건조시키거나 또는 건조시키지 않은 농축 형태로 시판될 수 있다. 이어서, 최종 조성물은, 예를 들면, 물로 희석하거나 용해하여 얻을 수 있다.

본 발명에 의한 조성물로 성공적으로 구제될 수 있는 진균은, 특히 비.푸케리아나(B. fuckeliana; 왜상 Botrytis cinerea) 등의 보트료티아나 종 (Botryotinia spp; 회색 진균), 디.브료니아(D. bryonia; 박과의 Mycospherella)나 디.리코퍼시씨(D. lycopersici; 토마토 암) 등의 디디멜라 종(Didymella spp), 피.호리아나(P. horiana; 일본 녹병균) 등의 푸쿠니아 종 (Puccunia spp; 녹병균류), 에스.푸리기네아(S. fuliginea; 오이 백분병균)과 에스.판노스(S. pannose; 장미 백분병균) 등의 스파에로쎄카 종(Sphaerotheca spp; 진성 백분병균류), 에리시페 종(Erysiphe spp)과 오이디움 종(Oidium spp) 및 레베일루라 타우리카 (Leveillula taurica)(또한 진성 백분병균 유형), 푸사리움 종 (Fusarium spp; 부제병균류 및/또는 시들음병균류), 파이토프토라 종(Phytophtora spp; 줄기 및/또는 뿌리병균류), 피티움 종(Pythium spp; 뿌리병균류), 플라스모파라(Plasmopara)와 페로노스포라(Peronospora) 및 스크레로스포라 종(Sclerospora spp; 노균병균류 유형), 리조토니아(Rhizoctonia)와 버티씰리움(Verticillium) 및 스크레로티니아 종(Sclerotinia spp; 반점의 원인균류), 리조푸스(Rhizopus)와 페니실리움 종(Penicillium spp)((저장성) 부패의 원인균류), 그리고 벤투리아 종(Venturia spp; 옴의 원인균)이다.

세균성 감염, 그 중에서도 특히 에르위니아 크리산테미(Erwinia chrysanthemi; 부패병균), 슈도모나스 시린가에(Pseudomonas syringae; 잎마름병균), 잔토모나스 캄페스트리스(Xanthomonas campestris), 쿼토박트리움 프락쿰파씨엔스(Curtobactrium flaccumfaciens)에 의한 감염을 본 발명에 의한 조성물로써 치료할 수 있다.

발명에 의한 조성물과 방법은 광범위한 의미로 농업, 원예, 채소 재배, 관상용 식물 재배, 과수 재배, 구근 재배, 분재 재배, 임업 등에 있어서 식물 보호 및 병원체 구제용 및 실내용 식물의 소비자 제품으로서 사용될 수 있다. 초목 및 수목 자체 이외에, 구근, 괴경, 꽃, 접지(cutting), 과실 등의 수목 부분들도 또한 치료할 수 있다.

초목 보호와 병원체 구제는 본 발명에 있어서 예방과 치유 활성 모두를 의미한다. 그러나, 대부분의 경우에 있어서, 이것은 이미 존재하는 병원체를 죽이는 것과 관련된다. 그러나, 수많은 다른 경우에서, 초목 부분들의 예방적 치료를 또한 관찰할 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 활성화되기 위해 유리수(free water)가 필요하나, 건조시킨 후 물을 첨가함으로서 다시 활성화될 수 있다.

본 발명에 의한 조성물은 천연 살균제이며, 그렇기 때문에 환경 친화적이다.

또한, 본 발명은, 본 발명에 의한 조성물을 수목, 초목 또는 이들의 부분에 적용함으로서 이루어지는, 초목, 수목 및 이들의 부분에서 식물 병원성 세균 및 진균을 구제하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 다음의 실시예로 더욱 자세히 설명되며, 실시예는 단지 예해의 목적으로 제시한 것이다.

실시예 1.

버티씰리움 레카니(Verticillium lecanii)에 대한 본 발명의 살충제의 직접 활성

피실험 유기체로서 사용되는 진균, 버티씰리움 레카니의 포자 분말을 약 10 x 10¹⁰ 포자/그램의 농도로 제조했다. 이 포자 분말 10 g을 덜어내어 물 100 ml 중에 현탁시켰다. 이어서, 포자는 최소 반시간 동안 담가둬야한다.

본 발명의 살충제 500 ml을 하기 표 1에 기재한 성분들로 만들었다.

표 1

	양 / 500 ml
락토퍼옥시다제 (LP)	35 mg (1 mg = 1000 ABTS U^*)
글루코스 옥시다제(GO)	12.5 mg (250 u/l^**)
요오드화 칼륨 (KI)	65 mg (100 ppm I^-)
시안산 칼륨(KSCN)	16.5 mg (20 ppm SCN^-)
글루코스	1.25 g (0.25%)
오일 기재	1.3 ml (1 : 375)
살포제	0.25 ml (0.05 %)
물	500 ml까지 보충

^*1 Unit LP : pH 5.0 및 온도 37℃에서 1 mM ABTS와 0.1 mM 과산화수소를

함유하는 50 mM 시트르산염 완충액의 기질 용액 중에서, 412 nm

에서 흡광도를 1 분당 4.41 증가시키는 ml 당 락토퍼옥시다제의
양.

(ABTS = 2, 2 아지노-디-(3-에틸벤조티아졸린)-6-설포네이트)

^**1 Unit GO : 35℃, pH 5.1에서 15분 내에 글루코스 30 mg/l을 산화할 수

있는 효소의 양.

수용액은 시트르산으로 pH 6.5로 조정했다. 이어서 포자 현탁액 10 ml을 살충제 90 ml에 첨가했다. 락토퍼옥시다제계를 포자와 계속적으로 1, 3, 5 및 15 분 동안 반응시키고, 각 시간마다 1 ml씩을 취해, 락토퍼옥시다제계를 수돗물로 1000 배 희석시켰다.

이 희석액으로 부터 30 ㎕을 취해, SDA(Sabouraud Dextrose Agar) 플레이트상에 피펫으로 옮겨 놓았다. 24 시간 및 48 시간 후, 포자 발아율을 측정했다.

이 비율을 블랭크과 비교했다. 블랭크는 물 90 ml로 현탁시킨 포자 현탁액 10 ml를 포함하며, 이 현탁액을 1000 배로 희석해서, 이 희석 현탁액 30 ㎕를 SDA상에 적하했다. 실험은 21℃에서 수행했다.

이 방법에 의해 버티씰리움 레카니는 본 발명에 의한 살충제에 의해 1 분내에 99 %가 사멸되었다.

실시예 2.

활성화 24 시간 경과 후 버티씰리움 레카니에 대한 살충제의 활성

이 실험은 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하되, 예외로 락토퍼옥시다제계를 처음에 500 ml 레토르트(retort) 중에 24 시간 동안 보존하고, 그 후에 포자 현탁액을 첨가했다. 이것은 계가 24 시간 후까지도 여전히 활성화되는지를 보기 위한 것이다.

이 제형으로, 계를 24 시간 동안 활성화시킨 후에도, 버티씰리움 레카니는 여전히 1 분 내에 99 % 이상 사멸되었다.

실시예 3.

버티씰리움 레카니에 대한 I ^- 이 없는 살충제의 활성

실험은 요오드화 칼륨(I^-)이 존재하지 않는 살충제로 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하였다. 여기서는 효소계를 개시한 직후에, 포자의 활성을 시험하였다.

이 조성물과 구현예에 의해 버티씰리움 레카니는 단지 25 %만이 사멸되었다. 이것은 I^-의 첨가가 진균의 살균 활성을 현저하게 증가시키는 것을 나타낸다.

실시예 4.

SCN ^- 이 없는 살충제의 버티씰리움 레카니에 대한 활성

실험은 시안산 칼륨(SCN^-)이 없는 차이 외에는, 상기 실시예 1에 기개된 바와 같이 수행하였다. 포자에 대한 직접 활성을 시험했다.

버티씰리움 레카는 본 발명에 의한 살충제에 의하여 99 %의 사멸을 보였다.

실시예 5.

상이한 온도에서 버티씰리움 레카니에 대한 살충제의 활성

실험은 두 가지의 다른 온도(±10 과 37℃)에서 수행하는 것을 제외하고, 실시예 1에 기재된 바와 같이 수행하였다.

버티씰리움 레카니는 살충제에 의해 두 온도 모두에서 1 분 이내에 99 % 사멸되었다.

실시예 6.

보트리티스 씨네레아(Botrytis Cinerea)에 대한 살충제의 활성

실험은 버티씰리움 레카니 포자 대신 보트리티스 씨네레아 포자를 가지고 실시예 1에 따라 수행하였다. 30 분과 60 분 동안 배양한 후, 생존 포자 수를 측정하였다.

보트리티스 씨네레아 포자의 99 % 이상이 30 분 이내에 본 발명의 살충제에 의해 사멸되었다.

실시예 7.

스파에로테카 푸리기네아(Sphaerotheca fuliginea, 오이 백분병균)에 대한 본 발명에 의한 살충제의 직접 효과

생물검사(bioassay)를 위해 직경 9 cm의 플라스틱 페트리 디쉬를 사용했다. 각 페트리 디쉬에 8 내지 10 mm 두께의 한천층으로 채웠다. 한천은 한천 분말 10 g을 물 1 ℓ에 용해시킨 후, 끓여 제조한다. 그 후에, 한천을 비커에 따른 후, 냉수 욕조 중에 넣었다. 한천 용액이 약 50 ℃로 냉각되어지면, 페트리 접시에 채운다. 고형화가 되기 직전(30 내지 40 ℃에서)에, 둥근 오이잎의 펀치 생검물을 한천 위에 배치했다. 오이잎의 펀치 생검물은 페트리 접시와 같은 직경을 가지며, 잎의 뒷면이 아래로 향하도록 한천 위에 놓았다. 이 방법에서, 잎은 약 14일 동안 신선하게 남아있을 수 있다.

그 다음에, 잎의 펀치 생검물에 스파에로테카 푸리기네아를 접종하였다. 이 목적을 위해 신선한 백분병균에 감염된 오이 잎을 분무법으로 씻어냈다. 백분병균 포자를 포함하고 있는 씻어낸 물을 비커에 모았다. 잎의 펀치 생검물이 있는 생물검사용 디쉬에 배거 분무기(Badger sprayer) (2바)를 사용하여 이 씻어낸 물을 분무했다. 이 디쉬를 공기 중에서 건조시키고, 75 %의 상대 습도(RH)를 갖는 곳에서 뚜껑을 덮어두었다. 75 %의 RH는 염화나트륨 150 g을 물 100 ml에 용해하여 얻는다. 염화나트륨 용액은 밀폐된 용기 중에 담고, 액체 위에 거즈를 씌워 생물 검사용 디쉬를 놓을 수 있도록 하였다.

백분병균을 잎의 펀치 생검물에 접종한지 1 내지 2 일 후에, 생물검사용 디쉬에 본 발명에 의한 살충제의 다양한 변화물을 분무했다. 물과 화학적 분무물은 참고물로서 포함된다.

생물 검사용 디쉬에 배거 분무기(2바)로 분무하고, 공기 중에서 건조했다. 밀폐된 페트리 디쉬에 75 % RH를 갖는 포화 염용액을 넣었다.

백분병균을 접종한지 6 내지 7 일 후, 생물검사용 디쉬에서 백분병균의 출현과 백분병균으로 덮인 잎의 백분율을 평가했다. 필요하다면, 그리고 가능하다면, 백분균병균 접종 7 일 후에 본 발명에 의한 살충제로 잎의 펀치 생검물에 다시 분무를 했다. 2차 분무 5 일후, 잎의 펀치 생검물을 다시 평가했다.

표 2에 있는 성분들로 살충제 500 ml을 제조했다.

표 2

	양 / 500 ml
락토퍼옥시다제 (LP)	15 mg (1mg = 1000 ABTS U^*)
글루코스 옥시다제 (GO)	25 mg (500 u/l^**)
요오드화 칼륨 (KI)	32.5 mg (50 ppm I^-)
시안산 칼륨 (KSCN)	8.25 mg (10 ppm SCN^-)
글루코스	5.0 g (1.0 %)
물	500 ml까지 보충

함유하는 50 mM 시트르산염 완충액의 기질 용액 중에서, 412 nm

에서 1분당 흡광도를 4.41 증가시키는 ml 당 락토퍼옥시다제의
양.

(ABTS = 2, 2 아지노-디-(3-에틸벤조티아졸린)-6-설포네이트)

^**1 Unit GO : 35℃, pH 5.1에서 15 분 내에 글루코스 30 mg/l을 산화할 수

있는 효소의 양.

이들 농도에서, 본 발명의 살충제는 스파에로테카 푸리기네아에 대해 약 20 내지 25 %의 구제율을 나타냈다.

실시예 8.

다양한 락토퍼옥시다제 농도에서 살충제의 활성

실험은 실시예 7에 기재한 바와 같이 수행하되, 예외로 락토퍼옥시다제를 30 mg/l 대신에 100 mg/ml(50 mg/500 ml) 농도로 사용했다.

이들 농도에서, 본 발명의 살충제는 스파에로테카 푸리기네아에 대해 약 55 내지 65 %의 구제율을 나타냈다.

실시예 9.

다양한 락토퍼옥시다제 농도와 오일 기재에서의 살충제의 활성

실험은 실시예 7에 기재된 바와 같이 행하되, 예외로 실시예 7에 기재된 성분들 이외에, 땅콩 기름, 유화제 Atlas 1086^TM(ICI)와 살포제 Nathin 130^TM+ Volpo T7^TM으로 구성된 오일 기재를 첨가했다. 이 오일 기재는 1 : 250의 농도로 첨가했다.

락토퍼옥시다제 30 mg/l + 오일 기재를 함유하는 본 발명의 살충제는 스파에로테카 푸리기네아에 대해 약 50 내지 55 %의 구제율을 나타냈으며, 락토퍼옥시다 제 100 mg/l + 오일 기재를 함유하는 본 발명의 약제는 스파에로테카 푸리기네아에 대해 약 80 내지 95 %의 구제율을 나타냈다.

화학적 참고물은 스파에로테카 푸리기네아에 대해 약 80 내지 95 %의 구제율을 나타냈다. 물은 스파에로테카 푸리기네아에 대해 주목할만한 구제율을 갖지 못했다.

실시예 10.

오이 작물에서의 스파에로테카 푸리기네아에 대한, 살충제의 활성을 시험하기 위한 세미-필드(semi-field) 실험

10 내지 15개의 어린 오이들을 온실에 있는 밀폐 케이지에 넣었다. 오이들은 백분병균이 분무되지 않은 것들이며, 백분병균에 대한 내성이 없는 것들이다. 오이 작물은 높이가 약 60 cm이고, 4 내지 5개의 오이 잎을 갖는다. 오이 작물 위로 백분병균의 포자 용액을 분무시켜 1일째에 백분병균으로 접종시켰다. (백분병균 포자를 얻기 위해 실시예 7 참조) 7 일째에, 오이 작물을 본 발명의 살충제, 물 또는 화학적 대조물로 처리했다. 이 처리는 분무관을 사용해 약 5바로 오이 작물에 분무했다. 8 일 이후에 오이 작물이 백분병균에 의해 입은 손상율을 평가한다. 필요에 따라, 본 발명에 의한 다양한 살충제로 14 일째에 2차 분무를 실시했다.

분무 전의 초기 손상은 본 발명에 의한 살충제로 처리한 오이 작물에 대해서 50 %이었고, 화학적 대조물로 처리한 오이작물에 대해서도 50 %이었다.

살충제 1000 ml을 표 3의 성분들로 만들었다.

표 3

	양 / l
락토퍼옥시다제 (LP)	100 mg (1 mg = 1000 ABTS U^*)
글루코스 옥시다제 (GO)	50 mg (500 u/l^**)
요오드화 칼륨 (KI)	130 mg (100 ppm I^-)
시안산 칼륨 (KSCN)	33 mg (20 ppm SCN^-)
글루코스	10 g (1 %)
오일 제형	1 : 250
물	1000 ml까지 보충

함유하는 50 mM 시트르산염 완충액의 기질 용액 중에서, 412 nm

에서 1 분당 흡광도를 4.41 증가시키는 ml 당 락토퍼옥시다제의
양.

(ABTS = 2, 2 아지노-디-(3-에틸벤조티아졸린)-6-설포네이트)

있는 효소의 양.

이 농도에서, 본 발명의 살충제는 스파에로테카 푸리기네아에 대해 약 80 %의 구제율을 나타냈다.

화학적 대조물은 스파에로테카 푸리기네아에 대해 약 40 %의 구제율을 나타냈다.

실시예 11.

오이 작물에서의 스파에로테카 푸리기네아에 대한, 살포제를 첨가한 살충제의 활성을 시험하기 위한 세미-필드 실험

실험은 실시예 10에 기재된 바와 같이 행하되, 예외로 살포제를 첨가했다. 살포제 Volpo T7^TM의 농도는 0.05 %이다. 분무 전의 백분병균에 의한 초기 손상은 35 내지 40 %이었다.

이 농도에서, 살포제를 함유하지 않은 살충제는 물에 비해 스파에로테카 푸리기네아에 대한 약 85 %의 구제율을 나타냈다. 이 농도에서, 여분의 첨가제로서 살포제를 함유하는 살충제는 스파에로테카 푸리기네아에 대해 약 99 %의 구제율을 나타냈다.

실시예 12.

스파에로테카 푸리기네아에 대한, 살포제를 함유하거나 함유하지 않은 살충제의 활성을 시험하기 위한 필드 실험

필드 실험에 사용된 방법은 실시예 10의 세미-필드 실험에 기재된 방법과 같으며, 차이점은 온실내에서 완전히 성장한 작물을 사용했고, 배낭식 분무기나 손수레식 분무기를 사용해 분무를 수행했다.

표 4의 성분들로 살충제 1000 ℓ를 만들었다.

분무 전의 스파에로테카 푸리기네아에 의한 오이 작물의 초기 손상은 80 내지 90 %이었다. 살포제를 함유하거나 함유하지 않은 살충제로 처리했다.

표 4

	양 / 1000 l
락토퍼옥시다제 (LP)	70 g (1 mg = 1000 ABTS U^*)
요오드화 칼륨 (KI)	130 g (100 ppm I^-)
시안산 칼륨 (KSCN)	33 g (20 ppm SCN^-)
글루코스 옥시다제 (GO)	25 g (250 u/l^**)
글루코스	2500 g (0.25 %)
오일 제형	2666 ml (1:375)
살포제	500 ml (0.05 %)

함유하는 50 mM 시트르산염 완충액의 기질 용액 중에서, 412 nm

(ABTS = 2, 2 아지노-디-(3-에틸벤조티아졸린)-6-설포네이트)

있는 효소의 양.

살포제를 함유한 본 발명의 살충제는 스파에로테카 푸리기네아에 대해 약 90 %의 구제율을 나타냈다. 살포제를 함유하지 않은 살충제는 약 75 %의 구제율을 나타냈다.

실시예 13.

오이 작물에서의 스파에로테카 푸리기네아에 대한 다양한 농도의 락토퍼옥시다제의 살충제의 활성

실험은 실시예 12에 기재된 바와 같이 행하되, 차이점은 락토퍼옥시다제 (LP)의 농도를 다음과 같이 변화시킨 것이다 : 70 mg/l, 60 mg/l 및 50 mg/l.

이 실험에서 락토퍼옥시다제의 다양한 농도 사이에서 어떠한 차이도 발견할 수 없었다. 세 가지 LP 농도 모두에서 구제율은 약 75 내지 80 %이었다.

실시예 14.

파프리카 작물에서의 레베일울라 타우리카(Leveillula taurica)에 대한 살충제의 활성

실험은 배낭식 분무기로 실시예 12에 기재된 바와 같이 행하되, 차이점은 백분병균을 갖는 오이 파프리카 대신에, 레베일울라 타우리카를 갖는 오이 파프리카를 사용한 것이다. 어떤 살포제도 사용하지 않았다.

이 농도에서, 본 발명의 살충제는 파프리카의 백분병(레베일울라 타우리카)에 대해 약 60 내지 70 %의 구제율을 나타냈다.

실시예 15

토마토 작물에서의 오이디움 리코퍼시쿰(Oidium Lycopersicum)에 대한 살충제의 활성

실험은 배낭식 분무기로 실시예 12에 기재된 바와 같이 행하되, 차이점은 백분병균이 있는 오이 파프리카 대신에, 오이디움 리코퍼시쿰을 갖는 오이 파프리카를 사용한 것이다.

이 농도에서, 본 발명에 의한 살충제는 토마토의 백분병(오이디움 리코퍼시쿰)에 대해 약 80 내지 85 %의 구제율을 나타냈다.

실시예 16.

잔토모나스 캄페스트리스(Xanthomonas campestris)에 대한 살충제의 활성

뉴트리엔트 육즙으로 약 10⁸포자/ml의 세균 용액을 만들었다. 표 5의 성분들로 살충제 500 ml를 만들었다.

표 5

	양 / 500 ml
락토퍼옥시다제 (LP)	35 mg (1 mg = 1000 ABTS U^*)
글루코스 옥시다제 (GO)	12.5 mg (250 u/l^**)
요오드화 칼륨 (KI)	65 mg (100 ppm I^-)
시안산 칼륨 (KSCN)	16.5 mg (20 ppm SCN^-)
글루코스	1.25 g (0.25 %)
뉴트리엔트 육즙	500 ml까지 보충

함유하는 50 mM 시트르산염 완충액의 기질 용액 중에서, 412 nm

(ABTS = 2, 2 아지노-디-(3-에틸벤조티아졸린)-6-설포네이트)

있는 효소의 양.

세균 현탁액 10 ml을 살충제 90 ml에 첨가했다. 이어서 살충제를 5, 10, 15 및 30 분 동안 세균과 작용시키고, 각 시간마다 1 ml을 취하고, 살충제를 희석하기 위해 뉴트리엔트 육즙으로 1000 배 희석시켰다.

이 희석 용액으로 부터 0.1 ml을 취하여 NUA(Nutrient Agar) 플레이트에 피펫으로 옮겼다. 72 시간 후, 플레이트의 세균 성장을 평가했다. 이것을 블랭크와 비교했다.

이 실험은 약 21℃의 온도와 약 7.5의 pH에서 수행했다.

이 실험에서는 잔토모나스 캄페스트리스 세균을 사용했다.

이 방법으로 잔토모나스 캄페스트리스는 본 발명에 의한 살충제에 의해 5 분 내에 100 % 사멸되었다.

실시예 17.

슈도모나스 시린가에(Pseudomonas syringae)에 대한 살충제의 활성

실험은 실시예 16에 기재된 바와 같이 행하되, 차이점은 잔토모나스 캄페스트리스 대신에 슈도모나스 시린가에 세균으로 시험했다.

슈도모나스 시린가에는 이 제형과 이 방법에 의해 5 분내에 100 % 사멸되었다.

Claims

락토퍼옥시다제, 티오시아네이트(SCN^-) 또는 아이오다이드(I^-), 과산화수소 공여계, 및 오일 기재를 포함하는 식물 병원성 유기체 구제용 조성물.
제 1항에 있어서, 과산화수소 공여계는 글루코스 옥시다제와 글루코스를 포함하는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 식물 병원성 유기체는 진균 또는 세균으로부터 선택되는 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 티오시아네이트(SCN^-) 및 아이오다이드(I^-)을 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항 또는 제 4항에 있어서, 수용액 리터당,

락토퍼옥시다제 10 mg 이상;

글루코스 옥시다제 50 I.U. 이상;

글루코스 0.05 % 이상;

아이오다이드 (I^-) 25mg 이상;

티오시아네이트 (SCN^-) 5 mg 이상;

임의로 오일 기재 최대 1 %를 포함하는 조성물.
제 1항 또는 4항에 있어서, 수용액 리터당

락토퍼옥시다제 50 mg 이상 ;

글루코스 옥시다제 100 I.U. 이상 ;

글루코스 0.1 % 이상 ;

아이오다이드 (I^-) 50 mg 이상 ;

티오시아네이트 (SCN^-) 10 mg 이상;

임의로 오일 기재 최대 0.4 %를 포함하는 조성물.
제 1항 또는 제 4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 수용액 리터당,

락토퍼옥시다제 10 내지 100 mg;

글루코스 옥시다제 50 내지 1000 I.U.;

글루코스 0.05 내지 2 %;

아이오다이드 (I^-) 25 내지 200 mg;

티오시아네이트 (SCN^-) 5 내지 50 mg;

오일 기재 0.01 내지 2 %를 포함하는 조성물.
제 1항 또는 제 4항 중 어느 하나의 항에 있어서, 수용액 리터당,

락토퍼옥시다제 30 내지 70 mg;

글루코스 옥시다제 100 내지 250 I.U.;

글루코스 0.1 내지 1 %;

아이오다이드 (I^-) 50 내지 100 mg;

티오시아네이트 (SCN^-) 10 내지 20 mg;

오일 기재 0.2 내지 1 %를 포함하는 조성물.
제 1항에 있어서, 오일 기재가 최소한, 오일 및 수중유 에멀젼을 형성하기 위해 수용액 중에서 오일을 유화시키기 위한 약제로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 9항에 있어서, 수용액 중에서 오일을 유화시키기 위한 약제는 유화제인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 9항에 있어서, 수용액 중에서 오일을 유화시키기 위한 약제가 자체-유화 특성을 갖는 오일 그 자체로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 11항에 있어서, 오일이 미네랄 오일, 식물성 오일 및 동물성 오일로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 12항에 있어서, 식물성 오일이 땅콩 기름, 참깨유 , 평지씨 기름, 아마인 유, 피마자유, 대두유, 옥수수눈 기름, 목화씨 기름으로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 12항에 있어서, 동물성 오일이 청어 기름, 고등어 기름으로 이루어진 군에서 선택된 어유인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 12항에 있어서, 미네랄 오일이 파라핀유와 케로신형 오일로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 조성물이 하나 이상의 살포제를 더 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 16항에 있어서, 살포제가 에톡실화 알콜 및 포스파티딜 리피드에서 선택된 비이온성 표면-장력 감소 물질인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 16항에 있어서, 살포제의 농도가 수용액 1 리터당 0.01 내지 0.2 %인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 18항에 있어서, 살포제의 농도가 수용액 1 리터당 0.05 %인 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 오일 기재가 최소한, 오일 80 내지 90 부; 유화제 5 내지 15 부; 임의로 레시틴 분획물 1 내지 10 부로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 20항에 있어서, 오일 기재가 최소한, 오일 85 부; 유화제 10 부; 임의로 레시틴 분획물 5 부로 이루어지는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 17항에 있어서, 오일 기재가 땅콩 기름, 폴리옥시에틸렌 솔비톨 헥사올레이트, 포스파티딜 리피드로 구성되는 레시틴 분획물, 및 에톡실화 알콜로 구성되는 살포제를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항에 있어서, 조성물이 하나 이상의 접착제를 더 함유하는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 23항에 있어서, 접착제가 전분과 고무에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 24항에 있어서, 고무는 크산탄 고무, 아라비아 고무, 카르복시메틸 셀룰로오스(CMCs)에서 선택되는 것을 특징으로 하는 조성물.
제 1항 또는 제 4항에 있어서, 수용액의 리터당,

락토퍼옥시다제 70 mg;

글루코스 옥시다제 250 I.U.;

글루코스 0.25 %;

아이오다이드 (I^-) 100 mg;

티오시아네이트 (SCN^-) 20 mg;

땅콩 기름 85 부, 유화제 10 부, 레시틴 분획물 5 부로 이루어진 오일 기재 0.4 %;

임의로 살포제 0.5 %를 포함하는 조성물.
제 1항 또는 제 4항에 있어서, 초목, 수목 및 이들의 부분의 식물 병원성 세균 구제용 조성물.
제 27항에 있어서, 상기 부분은 꽃, 구근, 괴경, 과실 등에서 선택되는 수확 가능한 부분인 병원성 세균 구제용 조성물.
제 1항 또는 제 4항에 있어서, 초목, 수목 및 이들의 부분의 식물 병원성 진균 구제용 조성물.
제 29항에 있어서, 상기 부분은 꽃, 구근, 괴경, 과실 등에서 선택되는 수확 가능한 부분인 병원성 진균 구제용 조성물.
초목, 수목 및 이들의 부분에 제 1항 또는 제 4항에 따른 조성물을 적용하는 것으로 이루어지는, 초목, 수목, 및 그들의 부분의 식물 병원성 세균을 구제하기 위한 방법.
초목, 수목 및 이들의 부분에 제 1항 또는 제 4항에 따른 조성물을 적용하는 것으로 이루어지는, 초목, 수목, 및 그들의 부분의 식물 병원성 진균을 구제하기 위한 방법.
제 31항 또는 제 32항에 있어서, 상기 조성물을 분무, 살포, 분사, 공중 분무, 관수, 침지, 점적 관수에 의해 적용하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 1항 또는 제 4항에 따른 조성물의 농축물 (concentrated form).
제 1항 또는 제 4항에 따른 조성물을 형성하기 위한 키트로서,

락토퍼옥시다제 및 임의의 첨가제로 이루어지는 임의로 농축시킨 효소 조성물과, 글루코스 옥시다제 및 글루코스, 티오시아네이트 또는 아이오다이드 및 임의의 기타 첨가제로 이루어지는 과산화수소 공여 조성물과, 오일, 임의의 유화제, 임의의 살포제 및 임의의 기타 첨가제로 이루어진 오일 조성물을 포함하며, 상기 세 가지 조성물이 사용 전에 제 1항 또는 제 4항에 따른 조성물을 얻기 위해 혼합되어져야 하는 키트.
제 1항 또는 제 4항에 따른 조성물을 형성하기 위한 키트로서,

락토퍼옥시다제 및 임의의 첨가제로 이루어지는 선택적으로 농축시킨 효소 조성물과, 글루코스 옥시다제 및 글루코스, 티오시아네이트 및 아이오다이드 및 임의의 기타 첨가제로 이루어지는 과산화수소 공여 조성물과, 오일, 임의의 유화제, 임의의 살포제 및 임의의 기타 첨가제로 이루어진 오일 조성물을 포함하며, 상기 세 가지 조성물이 사용 전에 제 1항 또는 제 4항에 따른 조성물을 얻기 위해 혼합되어져야 하는 키트.
제 5항에 따른 조성물을 형성하기 위한 키트로서,

락토퍼옥시다제 및 임의의 첨가제로 이루어지는 선택적으로 농축시킨 효소 조성물과, 글루코스 옥시다제 및 글루코스, 티오시아네이트 또는 아이오다이드 및 임의의 기타 첨가제로 이루어지는 과산화수소 공여 조성물과, 오일, 임의의 유화제, 임의의 살포제 및 임의의 기타 첨가제로 이루어진 오일 조성물을 포함하며, 상기 세 가지 조성물이 사용 전에 제 5항에 따른 조성물을 얻기 위해 혼합되어져야 하는 키트.
제 5항에 따른 조성물을 형성하기 위한 키트로서,

락토퍼옥시다제 및 임의의 첨가제로 이루어지는 선택적으로 농축시킨 효소 조성물과, 글루코스 옥시다제 및 글루코스, 티오시아네이트 및 아이오다이드 및 임의의 기타 첨가제로 이루어지는 과산화수소 공여 조성물과, 오일, 임의의 유화제, 임의의 살포제 및 임의의 기타 첨가제로 이루어진 오일 조성물을 포함하며, 상기 세 가지 조성물이 사용 전에 제 5항에 따른 조성물을 얻기 위해 혼합되어져야 하는 키트.