KR100564383B1 - Process for preparing ginsenoside derivatives - Google Patents

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Abstract

본 발명은 진세노사이드 유도체의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 암 치료 및 암 예방 효과를 갖는 신규 구조의 진세노사이드 유도체와 이의 제조방법, 및 상기한 신규 화합물을 유효성분으로 포함하는 약제조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a method for preparing a ginsenoside derivative, and more particularly, a ginsenoside derivative having a novel structure having a cancer treatment and cancer prevention effect, a method for preparing the same, and a drug comprising the above-described novel compound as an active ingredient. It relates to a composition.

인삼사포닌, 진세노사이드, 유도체, 항암, 암 예방, 전이억제 Ginseng saponin, ginsenosides, derivatives, anticancer, cancer prevention, metastasis inhibition

Description

진세노사이드 유도체의 제조방법{Process for preparing ginsenoside derivatives}Process for preparing ginsenoside derivatives

도 1은 참고예 1, 참고예 2 및 비교참고예 2에 따른 산 분해 방법의 결과로 생성된 △20-진세노사이드 혼합물에 대한 고속 액체크로마토그래피로 분석한 결과이다.(P1: 20S-진세노사이드, P2: 20R-진세노사이드, P3: 진세노사이드 Rk1, P4: 진세노사이드 Rg5)Figure 1 shows the results of high-performance liquid chromatography analysis of the △ 20 -ginsenoside mixture produced as a result of the acid decomposition method according to Reference Example 1, Reference Example 2 and Comparative Reference Example 2. (P1: 20S-jin Cenoside, P2: 20R-ginsenoside, P3: ginsenoside Rk1, P4: ginsenoside Rg5)

본 발명은 진세노사이드 유도체의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 암 치료 및 암 예방 효과를 갖는 신규 구조의 진세노사이드 유도체와 이의 제조방법, 및 상기한 신규 화합물을 유효성분으로 포함하는 약제조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a method for preparing a ginsenoside derivative, and more particularly, a ginsenoside derivative having a novel structure having a cancer treatment and cancer prevention effect, a method for preparing the same, and a drug comprising the above-described novel compound as an active ingredient. It relates to a composition.

전 세계적으로 암으로 사망하는 사람의 숫자는 현재 연간 600만 명에서 2020년에는 1000만 명으로 늘어 날 것이며, 매년 암에 걸리는 사람 1000만 명도 2020년 에는 1500만 명으로 증가할 것으로 세계보건기구는 전망하고 있다. 또한, 전 세계 사망자의 12% 이상이 암 환자이며, 선진국들의 경우 암이 심장병에 이어 사망 원인 2위를 차지하고 있다.The number of people dying from cancer worldwide will increase from 6 million per year to 10 million in 2020, and 10 million people with cancer each year will increase to 15 million by 2020. Overlooking. In addition, more than 12% of the world's deaths are cancer patients, and in developed countries, cancer is the second leading cause of death after heart disease.

암은 인류가 극복해야할 최대의 난치병 중의 하나로서 현재 많은 항암제가 개발되어 임상에서 사용되고 있다. 그러나, 기존의 항암제들은 1) 암 세포에 대한 세포독성, DNA나 RNA 합성 저해제, 단백질 합성 저해제 등을 목표로 개발되었기 때문에 선택성이 없어 신장, 심장, 골수 등에 심각한 부작용을 유발하고, 2) 암세포를 공격 목표로 하기 때문에 암세포의 이질성(다른 종류의 유전자로 이루어진 것)이나 유전자적 불안정성으로 인하여 약제 내성세포의 빈번한 출현으로 항암제의 효능이 현저하게 저하되는 등의 단점을 갖고 있다.Cancer is one of the biggest incurable diseases that human beings must overcome, and many anticancer drugs have been developed and used in clinical practice. However, existing anticancer drugs have been developed for the purpose of 1) cytotoxicity against cancer cells, DNA or RNA synthesis inhibitors, protein synthesis inhibitors, etc., and thus have no selectivity, causing serious side effects such as kidney, heart and bone marrow. Because of the aim of the attack, due to the heterogeneity of the cancer cells (consisting of different kinds of genes) or genetic instability, the frequent appearance of drug-resistant cells has a disadvantage that the efficacy of the anticancer agent is significantly reduced.

최근의 진보된 암세포 분자생물학을 이용하여 새로운 개념의 항암제 개발 연구가 진행되고 있으며, 그 중 현재 세계적으로 가장 경쟁적으로 활발하게 진행되고 있는 분야는 혈관신생저해를 이용한 항암제나 암 전이 억제제의 연구개발과 암 특이적으로 발현이 높은 성장인자 수용체의 인산화 반응을 저해하는 물질을 이용한 항암제 개발연구 분야이다.Research on the development of a new concept of anticancer drugs using advanced cancer cell molecular biology is currently underway. Among them, the most competitively active fields in the world are the research and development of anticancer drugs and cancer metastasis inhibitors using angiogenesis. It is a research field for the development of anticancer drugs using a substance that inhibits the phosphorylation reaction of growth factor receptor with high specificity of cancer.

항암제로서 혈관신생 저해제의 장점은 1) 혈관신생은 암의 성장이나 전이에 필수적인 단계이므로 혈관신생 저해제는 암의 성장과 전이를 동시에 차단할 수 있으며, 2) 혈관신생 저해제는 이수배수체(aneuploid)인 암세포가 아니라 이수체(diploid)인 혈관 내피세포를 공격 표적으로 하기 때문에 암세포와는 달리 이질성과 유전자적 불안정성으로 인한 내성 발현 등의 문제점을 일으키지 아니하고, 3) 혈관신생 저해제는 기존의 항암제와는 달리 특정 암 또는 일부의 암 종에만 효능을 나타내는 것이 아니라 혈관신생이 필수 불가결인 모든 암 종에 유효할 것이며, 4) 혈관신생은 정상 성인에게는 특별한 경우, 즉 상처 치유, 여성의 생리 등을 제외하고는 매우 드문 현상으로 알려져 있으므로 기존의 항암제에서 볼 수 있는 부작용이 크게 감소할 것으로 예상되는 것이다.The benefits of angiogenesis inhibitors as anticancer drugs are: 1) angiogenesis is an essential step for cancer growth or metastasis, and therefore, angiogenesis inhibitors can block the growth and metastasis of cancer at the same time. 2) angiogenesis inhibitors are cancer cells that are aneuploid. It does not cause problems such as expression of resistance due to heterogeneity and genetic instability, unlike cancer cells because it targets vascular endothelial cells, which are diploids, and 3) angiogenesis inhibitors, unlike conventional anticancer drugs, It is not only effective for cancer or some carcinomas but will be effective for all carcinomas in which angiogenesis is indispensable. 4) Angiogenesis is very important except for normal adults, ie wound healing, women's physiology, etc. Because it is a rare phenomenon, it is expected that the side effects seen with conventional anticancer drugs will be greatly reduced. will be.

한편, 인삼은 무독한 식물로 수 천년 동안 인체항상성을 유지하는 강장제로, 만병을 치료하는 치료약으로, 생명을 연장하는 약으로 알려져 왔으며, 생명연장효과는 항산화 효과에 의한 노화방지(Korean Biochem. J., 12(1), 33 (1979)), 암 발생의 억제 및 예방 효과로 인하여 이루어질 수 있다는 가설과 실험적 근거가 제시되었다(Ann. NY Acad. Sci., 889, 157 (1999); Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev., 4, 401 (1995); The Lancet Oncology, 2, 49 (2001)). 항암 유효 성분으로 진세노사이드 Rg3, Rh2, Rh1, 진세노사이드의 장내 미생물 대사체인 Compound K 등이 알려져 있다(J. Korean Med. Sci., 16(Suppl), S28 (2001); J. Ginseng Res., 28, 1 (2004)). 최근에는 홍삼에 미량 함유된 진세노사이드 Rg5도 강한 항암 효과가 있으며, 이 효과는 세포주기 G1/S 천이단계를 차단함으로써 이루어짐이 알려졌다(Anticancer Res., 17, 1067 (1997)). 이들 진세노사이드의 암 전이억제 및 항암 기전은 암세포의 침투억제, 접착억제, 신생혈관 생성억제 효과로 설명되었다(Biol. Pharm. Bull., 18, 1197 (1995)). 또한, 진세노사이드 Rg3는 중국에서 간암 및 폐암 전이억제 항암신약 "Rg3 Shenyi Jiaonang"으로 개발되어 시판되고 있다. Ginseng is a nontoxic plant that is known as a tonic that maintains human body condition for thousands of years. It is known as a medicine to cure all kinds of diseases and prolongs life. , 12 (1), 33 (1979)), the hypothesis and experimental evidence that can be made due to the inhibitory and preventive effects of cancer development (Ann. NY Acad. Sci., 889, 157 (1999); Cancer Epidemiol Biomarkers Prev., 4, 401 (1995); The Lancet Oncology, 2, 49 (2001)). Ginsenosides Rg3, Rh2, Rh1, and ginsenoside intestinal microbial metabolites such as Compound K are known as anticancer active ingredients (J. Korean Med. Sci., 16 (Suppl), S28 (2001); J. Ginseng Res) , 28, 1 (2004). Recently, ginsenoside Rg5 contained in trace amounts of red ginseng also has a strong anticancer effect, and this effect is known by blocking the cell cycle G1 / S transition stage (Anticancer Res., 17, 1067 (1997)). The cancer metastasis inhibition and anticancer mechanisms of these ginsenosides have been explained by the inhibition of cancer cell penetration, adhesion, and neovascularization (Biol. Pharm. Bull., 18, 1197 (1995)). In addition, ginsenoside Rg3 has been developed and marketed in China as an anticancer drug "Rg3 Shenyi Jiaonang" for liver and lung cancer metastasis.

본 발명자는 부작용이 없으면서 충분한 치료효과를 나타내는 암 치료제를 개발하기 위하여 연구해 오던 중, 홍삼에 미량으로 존재하는 것으로 알려져 있는 △20-진세노사이드의 이중 결합을 수소화반응하여 신규 진세노사이드 유도체를 합성하였고, 합성된 신규 진세노사이드 유도체는 기존의 진세노사이드와 비교 실험하였을 때 암세포 성장억제 효과, 신생혈관 억제 효과, 암세포 전이억제 효과, 암 치료 효과가 월등히 증가함을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.The present inventors have been studying to develop a cancer therapeutic agent having sufficient therapeutic effect without side effects, and hydrogenated a double bond of Δ 20 -ginsenoside, which is known to be present in trace amounts in red ginseng, to produce a new ginsenoside derivative. The synthesized new ginsenoside derivatives completed the present invention by confirming that cancer cell growth inhibitory effect, angiogenesis inhibitory effect, cancer cell metastasis inhibitory effect, and cancer treatment effect were significantly increased when compared with the existing ginsenoside derivatives. Was done.

따라서, 본 발명은 신규 진세노사이드 유도체를 제공하는데 그 목적이 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a novel ginsenoside derivative.

또한, 본 발명은 △20-진세노사이드의 이중 결합을 수소화반응하여 상기한 신규 진세노사이드 유도체를 제조하는 방법을 제공하는데 다른 목적이 있다. The invention also △ 20 - there is a further object to provide a method for producing the novel ginsenoside derivatives by hydrogenation of the double bonds of ginsenosides.

또한, 본 발명은 신규 진세노사이드 유도체가 유효성분으로 함유되어 있어 암 예방, 암전이 억제 및 치료에 유용한 약제조성물을 제공하는데 또 다른 목적이 있다.In addition, the present invention is a new ginsenoside derivative is contained as an active ingredient is another object to provide a pharmaceutical composition useful for cancer prevention, cancer metastasis inhibition and treatment.

본 발명은 다음 화학식 1로 표시되는 진세노사이드 유도체를 그 특징으로 한다.The present invention is characterized by the ginsenoside derivative represented by the following formula (1).

Figure 112005068520022-pat00001
Figure 112005068520022-pat00001

상기 화학식 1에서, R1은 수소원자, C2∼C24의 아실기, 글루코스기, 또는 글루코실(1→2)글루코스기를 나타내고; R2는 수소원자, 히드록시기, C2∼C24의 O-아실기, O-글루코스기, 또는 람노실(1→2)글루코스기를 나타내고; R3은 수소원자, 또는 C2∼C24의 아실기를 나타낸다.In Formula 1, R 1 represents a hydrogen atom, an acyl group, a glucose group, or a glucosyl (1 → 2) glucose group of C 2 to C 24 ; R 2 represents a hydrogen atom, a hydroxy group, a C 2 to C 24 O-acyl group, an O-glucose group, or a rhamnosyl (1 → 2) glucose group; R 3 represents a hydrogen atom or an acyl group of C 2 to C 24 .

또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 하나 또는 그 이상의 비대칭 중심을 가질 수 있고, 이러한 화합물의 경우 거울상 이성질체 또는 부분입체이성질체가 존재할 수 있다. 따라서, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물의 각 이성질체 또는 이들 이성질체 혼합물을 포함한다.In addition, the compound represented by Formula 1 according to the present invention may have one or more asymmetric centers, and in the case of such compounds, enantiomers or diastereomers may be present. Therefore, the present invention includes each isomer of the compound represented by Formula 1 or a mixture of these isomers.

또한, 본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물은 용매화물(예를 들면 수화물)의 형태로도 존재할 수 있다.In addition, the compound represented by Chemical Formula 1 according to the present invention may also exist in the form of a solvate (for example, a hydrate).

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 있어, 특히 바람직한 화합물은 다음과 같다 : In the compound represented by Formula 1 according to the present invention, particularly preferred compounds are as follows:

3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1) ;3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 1);

3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 2) ;3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 2);

6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 3) ;6-O- [α-L-lamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 3);

6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 4) ;6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 4);

담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 5) ;Dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 5);

담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 6) ;Dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 6);

3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 옥타아세테이트 (화합물번호 7) ;3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol octaacetate (Compound No. 7);

3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 옥타팔미테이트 (화합물번호 8) ;3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosil] dammaran-3β, 12β-diol octapalmitate (Compound No. 8);

3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 옥타운데카노에이트 (화합물번호 9) ;3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol oxtown decanoate (Compound No. 9);

3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 옥타부티레이트 (화합물번호 10) ;3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosil] dammaran-3β, 12β-diol octabutyrate (Compound No. 10);

3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 펜타아세테이트 (화합물번호 11) ;3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol pentaacetate (Compound No. 11);

3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 펜타부티레이트 (화합물번호 12) ;3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol pentabutyrate (Compound No. 12);

3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 펜타팔미테이트 (화합물번호 13) ;3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol pentapalmitate (Compound No. 13);

6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 옥타아세테이트 (화합물번호 14) ;6-O- [α-L-lamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol octaacetate (Compound No. 14);

6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 옥타부티레이트 (화합물번호 15) ;6-O- [α-L-lamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol octabutyrate (Compound No. 15);

6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 옥타팔미테이트 (화합물번호 16) ;6-O- [α-L-lamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol octapalmitate (Compound No. 16);

6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 헥사아세테이트 (화합물번호 17) ;6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol hexaacetate (Compound No. 17);

6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 헥사부티레이트 (화합물번호 18) ;6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol hexabutyrate (Compound No. 18);

6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β, 6α,12β-트리올 헥사팔미테이트 (화합물번호 19) ;6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol hexapalmitate (Compound No. 19);

담마란-3β,12β-디올 디팔미테이트 (화합물번호 20) ;Dammaran-3β, 12β-diol dipalmitate (Compound No. 20);

담마란-3β,12β-디올 디아세테이트 (화합물번호 21) ;Dammaran-3β, 12β-diol diacetate (Compound No. 21);

담마란-3β, 12β-디올 디부티레이트 (화합물번호 22) ;Dammaran-3β, 12β-diol dibutyrate (Compound No. 22);

담마란-3β, 6α, 12β-트리올 디팔미테이트 (화합물번호 23) ;Dammaran-3β, 6α, 12β-triol dipalmitate (Compound No. 23);

담마란-3β,6α,12β-트리올 트리부티레이트 (화합물번호 24) ;Dammaran-3β, 6α, 12β-triol tributyrate (Compound No. 24);

담마란-3β,6α,12β-트리올 트리아세테이트 (화합물번호 25).Dammaran-3β, 6α, 12β-triol triacetate (Compound No. 25).

한편, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 진세노사이드 유도체의 제조방법 을 포함한다.On the other hand, the present invention includes a method for producing a ginsenoside derivative represented by the formula (1).

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 진세노사이드 유도체는 다음 반응식 1에 나타낸 바와 같이, 다음 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 화합물, 또는 이들의 혼합물을 수소화반응하여 제조한다.The ginsenoside derivative represented by Chemical Formula 1 according to the present invention is prepared by hydrogenation of a compound represented by Chemical Formula 2a or Chemical Formula 2b, or a mixture thereof, as shown in the following Scheme 1.

Figure 112005068520022-pat00002
Figure 112005068520022-pat00002

상기 반응식 1에서, R1, R2, R3은 각각 상기 화학식 1에서 정의한 바와 같다.In Reaction Scheme 1, R 1 , R 2 , and R 3 are each as defined in Chemical Formula 1.

상기 반응식 1에 따른 화학식 2a 또는 2b로 표시되는 △20-진세노사이드의 이중 결합을 수소화하는 반응에 사용되는 용매는 탄소수 1 내지 6의 저급 알칸올류 및 에틸아세테이트 중에서 선택된 유기용매, 또는 상기한 유기용매와 물의 혼합용매를 사용할 수 있다. 특히 바람직하기로는 용매로서 메탄올, 에탄올 또는 에틸아세테이트 중에서 선택된 유기용매, 또는 물과의 혼합용매를 사용하는 것이다. 반응촉매로는 팔라디움-챠콜(Pd/C)을 사용하며, 타금속 예를 들어 백금(Pt) 또는 로디움(Rd)도 촉매로 사용될 수 있다. 촉매량은 반응물질의 중량대비 1 내지 20 중량% 범위 내에서 사용한다. 수소화반응의 온도와 압력은 사용하는 기구에 따라 결정되지만, 온도는 대략 실온 내지 40 ℃ 범위이고, 수소압력은 상압 내지 50 psi 범위가 바람직하며, 반응시간은 3시간 내지 30시간 범위이다.The solvent used for the hydrogenation of the double bond of Δ 20 -ginsenoside represented by Chemical Formula 2a or 2b according to Scheme 1 is an organic solvent selected from lower alkanols having 1 to 6 carbon atoms and ethyl acetate, or the organic A mixed solvent of a solvent and water can be used. Particularly preferably, an organic solvent selected from methanol, ethanol or ethyl acetate, or a mixed solvent with water is used as the solvent. Palladium-charcoal (Pd / C) is used as the reaction catalyst, and other metals such as platinum (Pt) or rhodium (Rd) may also be used as a catalyst. The amount of catalyst is used in the range of 1 to 20% by weight based on the weight of the reactant. The temperature and pressure of the hydrogenation reaction depend on the mechanism used, but the temperature is in the range of approximately room temperature to 40 ° C., the hydrogen pressure is preferably in the range of normal pressure to 50 psi, and the reaction time is in the range of 3 to 30 hours.

또한, R1, R2 및/또는 R3가 아실기인 화합물은, R1, R2 및/또는 R3가 수소원자 또는 하이드록시기(OH)인 화합물을 염기 존재 하에서 적당한 아실화제와 반응시켜 합성할 수 있다. 염기로는 피리딘, 트리에틸아민 등이 포함되는 유기염기와, 소디움히드록사이드, 포타시움히드록사이드, 소디움카보네이트, 포타시움카보네이트, 포타시움t-부톡사이드 등이 포함되는 무기염기 중에서 선택 사용할 수 있다. 아실화제로는 탄소수 2 내지 24의 카르복실산 무수물, 또는 산 클로라이드 화합물을 사용할 수 있다. 아실화제를 과량 사용하여 별도의 용매를 사용하지 않은 조건에서 반응을 수행할 수도 있겠으나, 보다 바람직하기로는 유기용매를 사용하는 조건에서 반응을 수행하는 것이다.In addition, a compound in which R 1 , R 2 and / or R 3 is an acyl group is prepared by reacting a compound in which R 1 , R 2 and / or R 3 is a hydrogen atom or a hydroxyl group (OH) with an appropriate acylating agent in the presence of a base. Can be synthesized. The base may be selected from organic bases containing pyridine, triethylamine, and the like, and inorganic bases including sodium hydroxide, potassium hydroxide, sodium carbonate, potassium potassium, potassium t-butoxide, and the like. As the acylating agent, a carboxylic anhydride having 2 to 24 carbon atoms or an acid chloride compound can be used. Although the reaction may be carried out under the condition that an excess amount of the acylating agent is not used, more preferably, the reaction is carried out under the conditions using an organic solvent.

또한, R1 및/또는 R2가 수소원자 또는 글루코스기인 화합물은 글루코실(1→2)글루코스기인 화합물을 문헌의 방법(약학회지 35, 432 (1991))을 응용하여 제조하였다. 즉, R1 및/또는 R2가 글루코실(1→2)글루코스기인 화합물을 부탄올 용액에서 소디움하이드록사이드와 가열하고 실리카겔 컬럼크로마토그래피법으로 정제하여 제조하였다.In addition, a compound in which R 1 and / or R 2 is a hydrogen atom or a glucose group was prepared by applying a method of literature (Pharmaceutical Journals 35, 432 (1991)) to a glucosyl (1 → 2) glucose group. That is, a compound in which R 1 and / or R 2 is a glucosyl (1 → 2) glucose group was prepared by heating with sodium hydroxide in a butanol solution and purifying by silica gel column chromatography.

또한, R1 및/또는 R3가 수소이고, R2가 히드록시기인 화합물은 R2가 O-글루코 스기인 화합물을 문헌의 방법(Chem. Pharm. Bull. 35, 1653 (1987))을 응용하여 제조하였다. 즉, R1 및/또는 R3가 수소이고, R2가 O-글루코스기인 화합물을 부탄올 용액에서 소디움하이드록사이드와 가열하고 실리카겔 컬럼크로마토그래피법으로 정제하여 제조하였다.In addition, a compound in which R 1 and / or R 3 is hydrogen and R 2 is a hydroxy group is applied to a compound in which R 2 is an O-glucose group by applying the method of the literature (Chem. Pharm. Bull. 35, 1653 (1987)). Prepared. That is, a compound in which R 1 and / or R 3 is hydrogen and R 2 is an O-glucose group was prepared by heating with sodium hydroxide in a butanol solution and purifying by silica gel column chromatography.

반응이 종료된 후 정제할 필요가 있을 경우 통상의 분리 정제방법에 의해 분리할 수 있다. 실리카겔 컬럼크로마토그래피로 분리하는 경우, 용매로는 디클로로메탄, 클로르포름, 메탄올, 에탄올, 물, 에틸아세테이트 등 중에서 선택된 단독 용매 또는 2종 이상의 혼합용매를 사용한다. If purification is necessary after the reaction is completed, it can be separated by a conventional separation and purification method. In the case of separation by silica gel column chromatography, a single solvent selected from dichloromethane, chloroform, methanol, ethanol, water, ethyl acetate and the like or two or more mixed solvents are used.

또한, 상기 반응식 1에 따른 제조방법에서 원료 물질로 사용된 상기 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 화합물은 홍삼에 극미량 존재하는 것으로 알려져 있다. 이에, 이미 문헌에 보고된 분리방법에 따라 홍삼으로부터 상기 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 화합물을 분리 회수한 바도 있다(약학회지 39, 85 (1995), Arch. Pharm. Res. 5, 551 (1996), Planta Medica 62, 86 (1996), Phytochemistry 44, 931 (1997)). 그러나, 홍삼에 존재하는 상기 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 화합물의 함량이 극미량이므로, 이를 상업적으로 이용하기에는 한계가 있다.In addition, the compound represented by Chemical Formula 2a or Chemical Formula 2b used as a raw material in the preparation method according to Scheme 1 is known to be present in trace amounts in red ginseng. Therefore, according to the separation method reported in the literature, the compound represented by the formula (2a) or (2b) has been recovered from the red ginseng (Pharmaceutical Journal 39, 85 (1995), Arch. Pharm. Res. 5, 551 (1996) ), Planta Medica 62, 86 (1996), Phytochemistry 44, 931 (1997)). However, since the amount of the compound represented by Formula 2a or Formula 2b present in red ginseng is very small, there is a limit to commercial use thereof.

따라서, 본 발명에서는 인삼으로부터 분리된 천연 진세노사이드로부터 상기 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 화합물을 제조하는 방법을 제공하는데도 또 다른 목적이 있다. Accordingly, another object of the present invention is to provide a method for preparing the compound represented by Formula 2a or Formula 2b from natural ginsenosides isolated from ginseng.

즉, 본 발명에 따른 제조방법에서는 상기 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 화합물을, 인삼에서 분리된 진세노사이드 Ra1, Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rb3, Rc, Rd의 각각 또는 이들 중에서 선택된 2개 이상의 혼합물, 또는 프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물, 진세노사이드 Rg1 또는 Re를 산 분해하여 제조하였다. 각각의 진세노사이드는 인삼의 성분연구가 수행된 문헌에 기술된 방법대로 이 분야에 종사하는 사람이면 누구나 컬럼 크로마토그래피법을 구사하여 분리 정제할 수 있는 것이다. 프로토파낙사디올계 진세노사이드혼합물은 인삼추출물을 알칼리성 수용액에서 부탄올로 추출하여 프로토파낙사트리올계 진세노사이드를 제거하고 수층을 산으로 중화한 후 부탄올로 추출하여 제조하였다. That is, in the preparation method according to the present invention, the compound represented by Chemical Formula 2a or Chemical Formula 2b is selected from each of ginsenosides Ra1, Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rb3, Rc, and Rd separated from ginseng; It was prepared by acid decomposition of more than one mixture, or Protopananaxadiol based ginsenoside mixture, ginsenoside Rg1 or Re. Each ginsenoside can be separated and purified by anyone using the column chromatography method as described in the literature on the composition of ginseng. Protopananaxadiol-based ginsenoside mixtures were prepared by extracting ginseng extract with butanol from an alkaline aqueous solution to remove the protopananax triol-based ginsenosides, neutralizing the aqueous layer with acid, and then extracting with butanol.

상기 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 화합물을 제조하기 위한 산 분해방법으로서, 50% 초산 수용액에서 가열하는 방법이 잘 알려져 있다. 즉, 진세노사이드 Ra1, Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rc, Rd의 각각 또는 이들 중 선택된 2개 이상의 혼합물, 또는 프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물, 진세노사이드 Rg1 또는 Re를 각각 50% 초산 수용액으로 70 ℃에서 가열하면 20번 탄소에 있는 당이 가수분해된 화합물(프로사포게닌)과 탄소 20번 위치의 당의 가수분해와 동시에 탈수반응이 일어난 화합물(△20-진세노사이드)이 동시에 생성한다. 그러나, 상기한 산 분해반응은 프로사포게닌의 제조방법으로서 프로사포게닌이 대부분(70% 이상) 생성되므로 △20-진세노사이드 제조방법으로는 경제적이지 못하다.As an acid decomposition method for preparing the compound represented by Formula 2a or Formula 2b, a method of heating in 50% acetic acid aqueous solution is well known. That is, 50% of each of ginsenosides Ra1, Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rc, Rd, or a mixture of two or more selected from these, or a mixture of protopanaxadiol-based ginsenosides, ginsenosides Rg1 or Re, respectively. When heated at 70 ° C with acetic acid aqueous solution, the compound in which the sugar at carbon 20 was hydrolyzed (prosapogenin) and the compound in which the dehydration reaction occurred simultaneously with the hydrolysis of the sugar at position 20 (△ 20 -ginsenoside) simultaneously Create However, the acid decomposition reaction is a method of producing a sand paper genin Pro Pro sandpaper so genin is produced mostly (70%) △ 20 - is not economical to ginsenoside production method.

이에 반하여, 본 발명에서는 유기산과 저급 지방족 알콜의 혼합용액 내에서 진세노사이드 Ra1, Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rc, Rd의 각각 또는 이들 중 선택된 2개 이상의 혼합물, 또는 프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물, 진세노사이드 Rg1 또는 Re를 각각 가열하였을 때, 90% 이상의 높은 수율로 상기 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 △20-진세노사이드 화합물을 합성할 수 있었다. 저급 지방족 알콜으로는 탄소수가 1 내지 6인 알콜을 사용하며, 바람직하기로는 메탄올, 에탄올, 프로판올 중에서 선택된 단독 또는 혼합용매를 사용한다. 유기산은 구연산, 주석산, 호박산, 락틱산, 사과산, 말레익산, 푸마르산, 개미산 및 초산 등 중에서 선택 사용하며, 유기산의 농도는 0.1 내지 30 부피% 범위로 사용하며 바람직하게는 5 내지 20 부피% 범위로 사용하는 것이다. 반응 온도는 50 내지 100 ℃이며 바람직하게는 반응 혼합물이 끓는 온도가 바람직하고, 반응시간은 10 내지 72시간이다. 반응이 완료되면, 반응 혼합물을 저급 지방족 알콜으로 추출하고 알칼리 수용액으로 세척한 후 농축하였고, 얻어진 잔사는 실리카겔 컬럼 크로마토그래피법을 시행하여 상기 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 화합물 또는 이들의 혼합물을 고순도로 제조할 수 있었다. 크로마토그래피법에 사용하는 용매는 디클로로메탄, 클로르포름, 에탄올, 메탄올 및 물 중에서 선택하여 적절히 혼합하여 사용한다.In contrast, in the present invention, each of ginsenosides Ra1, Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rc, Rd, or a mixture of two or more selected from these, or a protopanaxadiol-based gin in a mixed solution of an organic acid and a lower aliphatic alcohol when ginsenoside mixture, Jean hayeoteul each heating the ginsenoside Rg1 or Re, △ 20 represented by formula 2a or formula 2b by 90% or more high yield - could be synthesized ginsenoside compounds. As the lower aliphatic alcohol, an alcohol having 1 to 6 carbon atoms is used, and preferably, a single or mixed solvent selected from methanol, ethanol and propanol is used. The organic acid is selected from citric acid, tartaric acid, succinic acid, lactic acid, malic acid, maleic acid, fumaric acid, formic acid and acetic acid, etc., and the concentration of the organic acid is used in the range of 0.1 to 30% by volume, preferably in the range of 5 to 20% by volume. Is to use. The reaction temperature is 50 to 100 ° C., preferably the temperature at which the reaction mixture is boiling, and the reaction time is 10 to 72 hours. When the reaction was completed, the reaction mixture was extracted with a lower aliphatic alcohol, washed with an aqueous alkali solution and concentrated, and the obtained residue was subjected to silica gel column chromatography to obtain a compound represented by Chemical Formula 2a or Chemical Formula 2b or a mixture thereof in high purity. Could be prepared as. The solvent used for the chromatography method is selected from dichloromethane, chloroform, ethanol, methanol, and water, and used by mixing appropriately.

한편, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 진세노사이드 유도체는 암세포 성장억제 효과, 신생혈관 억제 효과, 암세포 전이억제 효과, 암 치료 효과가 우수하므로 각종 종양관련 질환의 예방 및 치료제로서 유효하다. 따라서, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 진세노사이드 유도체 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 유효성분으로 하는 약제 조성물을 포함하는 바, 이들 약제 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물에 통상의 무독성 약학적으로 허용 가능한 담체, 보강제 및 부형제를 첨가하여 약학적 분야에서 통상적인 제형화 방법에 의하여 다양한 형태로 적용할 수 있다. 예를 들어 경구적으로 복용 가능한 제제로 제형화하기 위해 통상적으로 사용되는 첨가제, 활탁제, 점착제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 연질캅셀제, 경질캅셀제, 환제, 현탁제, 과립제, 정제 등으로 제조할 수 있다. 주사제는 통상적으로 주사제를 제조하는 데 필요한 유화제, 첨가제, 보존제 등을 사용하여 현탁제 또는 용액 형태로 제조할 수 있다.On the other hand, the present invention ginsenoside derivative represented by the formula (1) is effective in the prevention and treatment of various tumor-related diseases because the ginsenoside derivative is excellent in cancer cell growth inhibitory effect, neovascular inhibitory effect, cancer cell metastasis inhibitory effect, cancer treatment effect. Therefore, the present invention includes a pharmaceutical composition comprising the ginsenoside derivative represented by Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, and these pharmaceutical compositions are generally nontoxic to the compound represented by Formula 1. Pharmaceutically acceptable carriers, adjuvant and excipients may be added to apply in various forms by conventional formulation methods in the pharmaceutical art. For example, additives, suspending agents, pressure-sensitive adhesives, sweetening agents, fragrances, preservatives, etc., which are commonly used for formulating into orally acceptable formulations, may be added to soft capsules, hard capsules, pills, suspensions, granules, and tablets. It can manufacture. Injectables can typically be prepared in the form of suspensions or solutions using emulsifiers, additives, preservatives and the like necessary to prepare the injectables.

본 발명 화합물의 사람에 대한 1일 투여량은 0.1 내지 10 mg/kg-체중이 적절하며 더욱 바람직하기는 0.3 내지 4 mg/kg-체중이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정시간 간격으로 1일에 1회 내지 6회 분할 투여할 수 있다.The daily dose of the compound of the present invention to human is 0.1 to 10 mg / kg-weight is more appropriate, more preferably 0.3 to 4 mg / kg-weight, at the interval of one day at the discretion of the doctor or pharmacist Can be administered in one to six divided doses.

이와 같은 본 발명은 다음의 실시예에 의거하여 더욱 상세히 설명하겠는 바, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.Such a present invention will be described in more detail based on the following examples, but the present invention is not limited thereto.

실시예 1. 진세노사이드 Rg5와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 제조Example 1 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rg5 and Ginsenoside Rk1

프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 52 g과 구연산 60 g을 99.8% 에탄올 700 mL에 녹이고 90 ℃에서 25시간 가열한 후 에탄올을 감압 하에서 제거하였 다. 농축물을 소디움하이드록사이드 60 g을 물 300 mL에 녹인 용액에 분산시키고 수포화부탄올 600 mL씩 2회 추출하여 부탄올층을 합하고 물 300 mL씩 2회 세척하고 감압 하에 농축하여 21.2 g을 얻었다. 실리카겔 300 g 컬럼에서 2% 물이 함유된 디클로로메탄 : 메탄올(6:1→5:1→4:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 진세노사이드 Rg5와 진세노사이드 Rk1 혼합물 12.2 g을 얻었다.52 g of a protoparanaxadiol ginsenoside mixture and 60 g of citric acid were dissolved in 700 mL of 99.8% ethanol, heated at 90 ° C. for 25 hours, and ethanol was removed under reduced pressure. The concentrate was dispersed in a solution of 60 g of sodium hydroxide in 300 mL of water, extracted twice with 600 mL of saturated butanol, the combined butanol layers were washed twice with 300 mL of water, and concentrated under reduced pressure to obtain 21.2 g. A silica gel 300 g column was chromatographed with a dichloromethane: methanol (6: 1 → 5: 1 → 4: 1) mixed solvent containing 2% water to obtain 12.2 g of a mixture of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1.

실시예 2. 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1)의 제조Example 2. Preparation of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammarane-3β, 12β-diol (Compound No. 1)

상기 실시예 1에서 제조한 진세노사이드 Rg5와 진세노사이드 Rk1 혼합물 12 g을 메탄올 150 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜(Pd-C) 400 mg을 가하고 실온에서 파르 반응기로 35 psi 수소가스 압력 하에서 16시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 200 g 컬럼에서 1% 물이 함유된 클로르포름 : 메탄올((6:1→5:1→4:1)혼합용매로 크로마토그래피하여 목적화합물 11 g을 얻었다. 12 g of the mixture of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1 prepared in Example 1 was dissolved in 150 mL of methanol, 400 mg of 10% palladium-charcoal (Pd-C) was added, and the reactor was pared at room temperature under 35 psi hydrogen gas pressure. The reaction was shaken for 16 hours. Filtration through celite removed the catalyst and concentrated under reduced pressure. The concentrate was chromatographed with a chloroform: methanol ((6: 1 → 5: 1 → 4: 1) mixed solvent containing 1% water in a silica gel 200g column to obtain 11 g of the target compound.

융점 250-253 ℃; 13C-NMR(Pyridine-d5, δppm) 106.0, 105.1, 88.9, 83.4, 78.3, 78.2, 78.0, 77.9, 77.1, 72.7, 72.7, 71.6, 71.6, 62.8, 62.72, 56.4, 51.0, 50.9, 50.8, 49.5(49.2), 44.0, 40.1, 39.7, 39.3, 38.0, 37.0, 35.3, 34.9(34.5), 33.6, 32.6(32.5), 28.1, 28.1, 26.7, 26.8(25.9), 22.9, 22.7, 20.4, 18.4, 17.2, 16.5(16.5), 15.8(15.7), 13.8.Melting point 250-253 ° C .; 13 C-NMR (Pyridine-d 5 , δppm) 106.0, 105.1, 88.9, 83.4, 78.3, 78.2, 78.0, 77.9, 77.1, 72.7, 72.7, 71.6, 71.6, 62.8, 62.72, 56.4, 51.0, 50.9, 50.8, 49.5 (49.2), 44.0, 40.1, 39.7, 39.3, 38.0, 37.0, 35.3, 34.9 (34.5), 33.6, 32.6 (32.5), 28.1, 28.1, 26.7, 26.8 (25.9), 22.9, 22.7, 20.4, 18.4, 17.2, 16.5 (16.5), 15.8 (15.7), 13.8.

실시예 3. 3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 2)과 담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 5)의 제조Example 3 Preparation of 3-O-β-D-glucopyranosyl Dammaran-3β, 12β-Diol (Compound No. 2) and Dhammarane-3β, 12β-Diol (Compound No. 5)

상기 실시예 1에서 제조한 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 2 g을 피리딘 25 mL과 무수초산 25 mL에 녹이고 60 ℃에서 24시간 반응시킨 후 감압 하에서 용매를 제거하였다. 농축물을 부탄올 100 mL에 용해시키고 소디움하이드록사이드 5 g을 가하고 85 ℃에서 12시간 교반하였다. 반응물에 물 100 mL를 넣고 부탄올층을 취하고 물층을 부탄올 100 mL씩 2회 추출하여 부탄올층을 합하고 물 50 mL씩 2회 세척하고 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 100 g으로 컬럼크로마토그래피하여(용매: 디클로로메탄: 메탄올 30:1→20:1→15:1→10:1→5:1→4:1→3:1) 화합물번호 2의 목적화합물 300 mg, 화합물번호 5의 목적화합물 550 mg 및 출발물질인 화합물번호 1의 화합물 210 mg을 각각 회수하였다.2 g of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol prepared in Example 1 was diluted with 25 mL of pyridine and acetic anhydride. After dissolving in 25 mL and reacting at 60 ° C for 24 hours, the solvent was removed under reduced pressure. The concentrate was dissolved in 100 mL of butanol and 5 g of sodium hydroxide were added and stirred at 85 ° C. for 12 hours. 100 mL of water was added to the reaction mixture, and a butanol layer was taken. The water layer was extracted twice with 100 mL of butanol, the butanol layers were combined, washed twice with 50 mL of water, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified by column chromatography with 100 g of silica gel (solvent: dichloromethane: methanol 30: 1 → 20: 1 → 15: 1 → 10: 1 → 5: 1 → 4: 1 → 3: 1). 300 mg of the target compound, 550 mg of the target compound of Compound No. 5 and 210 mg of the compound of Compound No. 1 as starting materials were recovered.

화합물번호 2: 융점 219-221 ℃; 13C-NMR(Pyridine-d5, δppm) 106.8, 88.9, 78.6, 78.2, 75.7, 72.7, 71.6, 62.9, 62.7, 56.4, 51.0, 50.9, 50.9, 49.5(49.3), 44.0, 40.1, 39.8, 39.3, 38.1, 37.1, 35.3, 34.9(34.5), 33.6, 32.6(32.5), 28.2, 28.1, 26.7, 26.4(25.9), 22.9, 22.8, 20.4, 18.51, 17.3, 16.5(16.5), 15.8(15.8), 13.4. Compound number 2 : melting point 219-221 ° C .; 13 C-NMR (Pyridine-d 5 , δ ppm) 106.8, 88.9, 78.6, 78.2, 75.7, 72.7, 71.6, 62.9, 62.7, 56.4, 51.0, 50.9, 50.9, 49.5 (49.3), 44.0, 40.1, 39.8, 39.3 , 38.1, 37.1, 35.3, 34.9 (34.5), 33.6, 32.6 (32.5), 28.2, 28.1, 26.7, 26.4 (25.9), 22.9, 22.8, 20.4, 18.51, 17.3, 16.5 (16.5), 15.8 (15.8), 13.4.

화합물번호 5: 융점 178-180 ℃; 13C-NMR(Pyridine-d5, δppm) 78.9, 78.6, 78.2, 75.7, 72.7, 71.6, 62.9, 62.7, 56.4, 51.0, 50.9, 50.8, 49.50(49.26), 44.0, 40.1, 39.7, 39.3, 38.0, 37.0, 35.3, 34.9(34.5), 33.6, 32.64(32.54), 28.1, 28.1, 26.7, 26.3(25.9), 22.9, 22.7, 20.4, 18.4, 17.2, 16.5(16.52), 15.82(15.7), 14.8. Compound no. 5 : melting point 178-180 ° C .; 13 C-NMR (Pyridine-d 5 , δ ppm) 78.9, 78.6, 78.2, 75.7, 72.7, 71.6, 62.9, 62.7, 56.4, 51.0, 50.9, 50.8, 49.50 (49.26), 44.0, 40.1, 39.7, 39.3, 38.0 , 37.0, 35.3, 34.9 (34.5), 33.6, 32.64 (32.54), 28.1, 28.1, 26.7, 26.3 (25.9), 22.9, 22.7, 20.4, 18.4, 17.2, 16.5 (16.52), 15.82 (15.7), 14.8.

실시예 4. 진세노사이드 F4와 진세노사이드 Rg6의 혼합물 제조 Example 4 Preparation of a Mixture of Ginsenoside F4 and Ginsenoside Rg6

진세노사이드 Re 20 g과 구연산 20 g을 99.8% 에탄올 200 mL에 녹이고 85 ℃에서 24시간 가열한 후 에탄올을 감압 하에서 제거였다. 농축물을 부탄올 500 mL에 분산시키고 소디움하이드록사이드 20 g을 물 150 mL에 녹인 것으로 세척하고 물 150 mL씩 2회 세척하고 감압 하에 농축하여 16.2 g을 얻었다. 실리카겔 340 g 컬럼에서 2% 물이 함유된 디클로로메탄 : 메탄올(8:1→7:1→6:1→5:1→4:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 진세노사이드 F4와 진세노사이드 Rg6의 혼합물 5.8 g을 얻었다.20 g of ginsenoside Re and 20 g of citric acid were dissolved in 200 mL of 99.8% ethanol, heated at 85 ° C. for 24 hours, and ethanol was removed under reduced pressure. The concentrate was dispersed in 500 mL of butanol, washed with 20 g of sodium hydroxide in 150 mL of water, washed twice with 150 mL of water, and concentrated under reduced pressure to give 16.2 g. Dichloromethane containing 2% water in a silica gel 340 g column was chromatographed with a mixed solvent of methanol (8: 1 → 7: 1 → 6: 1 → 5: 1 → 4: 1) to ginsenoside F4 and ginsenoside. 5.8 g of a mixture of Rg6 were obtained.

실시예 5. 6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 3)의 제조Example 5 Preparation of 6-O- [α-L-Rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 3)

상기 실시예 4에서 제조한 진세노사이드 F4와 진세노사이드 Rg6의 혼합물 4.2 g을 메탄올 240 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜 800 mg을 가하고 파르 반응기 로 15 psi 수소가스 압력하에서 16시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 200 g 컬럼에서 1% 물이 함유된 클로르포름 : 메탄올(8:1→7:1→6:1→5:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 목적화합물 4.5 g을 얻었다. 4.2 g of the mixture of ginsenoside F4 and ginsenoside Rg6 prepared in Example 4 was dissolved in 240 mL of methanol, 800 mg of 10% palladium-charcoal was added, and the reaction was carried out by shaking the reactor for 15 hours under 15 psi hydrogen gas pressure. . Filter through Celite to remove the catalyst and concentrate under reduced pressure. The concentrate was chromatographed with a solvent of chloroform: methanol (8: 1 → 7: 1 → 6: 1 → 5: 1) containing 1% water in a silica gel 200g column to obtain 4.5 g of the target compound.

융점 182-184 ℃; 13C-NMR(Pyridine-d5, δppm): 102.0, 101.8, 79.5, 78.6, 78.4, 78.3, 74.4, 74.2, 72.6, 72.4, 72.3, 69.6, 63.3, 60.9, 52.0, 51.0, 50.7, 50.1, 46.2, 41.5, 40.1, 40.0, 39.6, 38.8, 37.7(37.1), 35.6, 32.5, 32.2, 30.6, 30.1, 29.8, 29.4, 27.8, 27.1(26.4), 22.7, 22.5, 18.8, 18.4(17.8), 17.7, 17.6, 17.3, 17.0Melting point 182-184 ° C .; 13 C-NMR (Pyridine-d 5 , δ ppm): 102.0, 101.8, 79.5, 78.6, 78.4, 78.3, 74.4, 74.2, 72.6, 72.4, 72.3, 69.6, 63.3, 60.9, 52.0, 51.0, 50.7, 50.1, 46.2 , 41.5, 40.1, 40.0, 39.6, 38.8, 37.7 (37.1), 35.6, 32.5, 32.2, 30.6, 30.1, 29.8, 29.4, 27.8, 27.1 (26.4), 22.7, 22.5, 18.8, 18.4 (17.8), 17.7, 17.6, 17.3, 17.0

실시예 6. 진세노사이드 Rk3와 진세노사이드 Rh4의 혼합물 제조 Example 6 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rk3 and Ginsenoside Rh4

진세노사이드 Rg1 20 g과 구연산 20 g을 99.8% 에탄올 200 mL에 녹이고 85 ℃에서 18시간 가열한 후 에탄올을 감압 하에서 제거였다. 농축물을 부탄올 500 mL에 분산시키고 소디움하이드록사이드 25 g을 물 150 mL에 녹인 것으로 세척하고 물 150 mL씩 2회 세척하고 감압 하에 농축하여 16.1 g을 얻었다. 실리카겔 340 g 컬럼에서 2% 물이 함유된 디클로로메탄 : 메탄올 (8:1→7:1→6:1→5:1→4:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 진세노사이드 Rk3와 진세노사이드 Rh4의 혼합물 8.8 g을 얻었다.20 g of ginsenoside Rg1 and 20 g of citric acid were dissolved in 200 mL of 99.8% ethanol, heated at 85 ° C. for 18 hours, and ethanol was removed under reduced pressure. The concentrate was dispersed in 500 mL of butanol, 25 g of sodium hydroxide was dissolved in 150 mL of water, washed twice with 150 mL of water, and concentrated under reduced pressure to give 16.1 g. Dichloromethane containing 2% water in a silica gel 340 g column: methanol (8: 1 → 7: 1 → 6: 1 → 5: 1 → 4: 1) chromatographed with a mixed solvent of ginsenoside Rk3 and ginsenoside 8.8 g of a mixture of Rh4 were obtained.

실시예 7. 6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 4)의 제조Example 7. Preparation of 6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 4)

상기 실시예 6에서 제조한 진세노사이드 Rk3와 진세노사이드 Rh4의 혼합물 5.7 g을 에탄올 150 mL와 에틸아세테이트 130 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜 800 mg을 가하고 파르 반응기로 25 psi 수소가스 압력 하에서 6시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 120 g 컬럼에서 1% 물이 함유된 클로르포름 : 메탄올 (8:1→7:1→6:1→5:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 목적화합물 5.4 g을 얻었다. 5.7 g of the mixture of ginsenoside Rk3 and ginsenoside Rh4 prepared in Example 6 was dissolved in 150 mL of ethanol and 130 mL of ethyl acetate, and 800 mg of 10% palladium-charcoal was added thereto. The reaction was shaken for time. Filtration through celite removed the catalyst and concentrated under reduced pressure. The concentrate was chromatographed with a solvent of chloroform: methanol (8: 1 → 7: 1 → 6: 1 → 5: 1) containing 1% water in a silica gel 120g column to obtain 5.4 g of the target compound.

융점 168-171 ℃; 13C-NMR(Pyridine-d5, δppm): 105.0, 79.0, 78.3, 77.6, 74.9, 74.4, 72.6, 63.1, 60.9, 52.0, 51.0, 50.7, 50.1, 46.2, 41.5, 40.1, 40.0, 39.6, 38.8, 37.7(37.0), 32.6, 32.5, 32.2, 30.6, 30.1, 29.8, 29.4, 27.8, 27.1(26.6), 22.7, 22.5, 18.4(17.8), 17.7, 17.6, 17.3, 17.0Melting point 168-171 ° C .; 13 C-NMR (Pyridine-d 5 , δ ppm): 105.0, 79.0, 78.3, 77.6, 74.9, 74.4, 72.6, 63.1, 60.9, 52.0, 51.0, 50.7, 50.1, 46.2, 41.5, 40.1, 40.0, 39.6, 38.8 , 37.7 (37.0), 32.6, 32.5, 32.2, 30.6, 30.1, 29.8, 29.4, 27.8, 27.1 (26.6), 22.7, 22.5, 18.4 (17.8), 17.7, 17.6, 17.3, 17.0

실시예 8. 담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 6)의 제조Example 8 Preparation of Dhammarane-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 6)

상기 실시예 7에서 제조한 화합물번호 4의 화합물 0.8 g을 부탄올 80 mL에 용해시키고 소디움하이드록사이드 3.5 g을 가하고 85 ℃에서 32시간 교반하였다. 반응물에 부탄올 30 mL을 추가하고 물 40 mL씩 3회 세척하고 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 30 g으로 컬럼크로마토그래피하여(용매: 디클로로메탄 : 메탄올 = 50:1→40:1→30:1→20:1) 목적화합물 0.53 g을 얻었다.0.8 g of Compound No. 4 prepared in Example 7 was dissolved in 80 mL of butanol, 3.5 g of sodium hydroxide was added thereto, and the mixture was stirred at 85 ° C. for 32 hours. 30 mL of butanol was added to the reaction, washed three times with 40 mL of water, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was column chromatographed with 30 g of silica gel (solvent: dichloromethane: methanol = 50: 1 → 40: 1 → 30: 1 → 20: 1) to give 0.53 g of the target compound.

융점 153-155 ℃; 13C-NMR(Pyridine-d5, δppm) 78.3, 73.6, 60.9, 52.0, 51.0, 50.7, 50.1, 46.2, 41.5, 40.1, 40.0, 39.6, 38.8, 37.7(37.0), 32.6, 32.5, 32.2, 30.6, 30.1, 29.8, 29.4, 27.8, 27.1(26.6), 22.7, 22.5, 18.4(17.8), 17.7, 17.6, 17.3, 17.0Melting point 153-155 ° C .; 13 C-NMR (Pyridine-d 5 , δ ppm) 78.3, 73.6, 60.9, 52.0, 51.0, 50.7, 50.1, 46.2, 41.5, 40.1, 40.0, 39.6, 38.8, 37.7 (37.0), 32.6, 32.5, 32.2, 30.6 , 30.1, 29.8, 29.4, 27.8, 27.1 (26.6), 22.7, 22.5, 18.4 (17.8), 17.7, 17.6, 17.3, 17.0

실시예 9. 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1)의 제조Example 9. Preparation of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 1)

기존 논문(Arch. Pharm. Res. 19, 551 (1996))의 방법에 따라 제조한 진세노사이드 Rg5 0.15 g을 에탄올 15 mL에 녹이고 5% 팔라디움-챠콜 30 mg을 가하고 40 ℃ 방에서 파르 반응기로 45 psi 수소가스 압력 하에서 6시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하여 목적화합물 0.14 g을 얻었다. 0.15 g of ginsenoside Rg5 prepared according to the method of the previous article (Arch. Pharm. Res. 19, 551 (1996)) was dissolved in 15 mL of ethanol, 30 mg of 5% palladium-charcoal was added, The reaction was stirred for 6 hours under 45 psi hydrogen gas pressure. The mixture was filtered through celite to remove the catalyst, and concentrated under reduced pressure to obtain 0.14 g of the target compound.

실시예 10. 3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 2)의 제조Example 10 Preparation of 3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 2)

기존 논문(약학회지 39, 85 (1995))의 방법에 따라 제조한 진세노사이드 Rh3 0.2 g을 에탄올 20 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜 50 mg을 가하고 30 ℃에서 파르 반응기로 40 psi 수소가스 압력 하에서 10시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하여 목적화합물 0.18 g을 얻었다. 0.2 g of ginsenoside Rh3 prepared according to the method of the present paper (Pharmaceutical Journal 39, 85 (1995)) was dissolved in 20 mL of ethanol, 50 mg of 10% palladium-charcoal was added, and 40 psi hydrogen gas pressure into the Parr reactor at 30 ° C. The reaction was shaken under 10 hours. The mixture was filtered through celite to remove the catalyst, and concentrated under reduced pressure to obtain 0.18 g of the target compound.

실시예 11. 6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 3)의 제조Example 11. Preparation of 6-O- [α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 3)

기존 논문(Planta Medica 56, 298 (1990))의 방법에 따라 제조한 진세노사이드 F4 0.11 g을 에탄올 10 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜 20 mg을 가하고 30 ℃에서 파르 반응기로 40 psi 수소가스 압력 하에서 10시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하여 목적화합물 0.1 g을 얻었다. 0.11 g of ginsenoside F4 prepared according to the method of the present paper (Planta Medica 56, 298 (1990)) was dissolved in 10 mL of ethanol, 20 mg of 10% palladium-charcoal was added, and 40 psi hydrogen gas pressure into the Parr reactor at 30 ° C. The reaction was shaken under 10 hours. The mixture was filtered through celite to remove the catalyst, and concentrated under reduced pressure to obtain 0.1 g of the target compound.

실시예 12. 6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 3)의 제조Example 12 Preparation of 6-O- [α-L-Rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 3)

기존 논문(Phytochemistry 44, 931 (1997))의 방법에 따라 제조한 진세노사이드 Rg6 0.11 g을 메탄올 10 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜 20 mg을 가하고 30 ℃에서 파르 반응기로 40 psi 수소가스 압력 하에서 10시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하여 목적화합물 0.1 g을 얻었다. 0.11 g of ginsenoside Rg6 prepared according to the method of the previous paper (Phytochemistry 44, 931 (1997)) was dissolved in 10 mL of methanol, 20 mg of 10% palladium-charcoal was added, and the reactor at 30 ° C. under 40 psi hydrogen gas pressure. The reaction was shaken for 10 hours. The mixture was filtered through celite to remove the catalyst, and concentrated under reduced pressure to obtain 0.1 g of the target compound.

실시예 13. 6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 4)의 제조Example 13. Preparation of 6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 4)

기존 논문(Planta Medica 62, 86 (1996))의 방법에 따라 제조한 진세노사이 드 Rh4 0.16 g을 메탄올 15 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜 20 mg을 가하고 30 ℃에서 파르 반응기로 30 psi 수소가스 압력하에서 10시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압하에서 농축하여 목적화합물 0.13 g을 얻었다. 0.16 g of ginsenoside Rh4 prepared according to the method of the previous paper (Planta Medica 62, 86 (1996)) was dissolved in 15 mL of methanol, 20 mg of 10% palladium-charcoal was added, and 30 psi hydrogen gas pressure into the Parr reactor at 30 ° C. The reaction was shaken under 10 hours. The mixture was filtered through celite to remove the catalyst, and concentrated under reduced pressure to obtain 0.13 g of the target compound.

실시예 14. 진세노사이드 Rg5 와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 제조Example 14 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rg5 and Ginsenoside Rk1

프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 10 g과 주석산 10 g을 99.8% 에탄올 100 mL에 녹이고 90 ℃에서 12시간 가열한 후 에탄올을 감압 하에서 제거였다. 농축물을 부탄올 300 mL에 분산시키고 소디움하이드록사이드 10 g을 물 150 mL에 녹인 것으로 세척하고 물 150 mL씩 2회 세척하고 감압 하에 농축하여 3.94 g을 얻었다. 실리카겔 100 g 컬럼에서 2% 물이 함유된 디클로로메탄 : 메탄올 (6:1→5:1→4:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 진세노사이드 Rg5와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 2.25 g을 얻었다.10 g of the protoparnaxadiol-based ginsenoside mixture and 10 g of tartaric acid were dissolved in 100 mL of 99.8% ethanol, heated at 90 ° C. for 12 hours, and ethanol was removed under reduced pressure. The concentrate was dispersed in 300 mL of butanol, washed with 10 g of sodium hydroxide in 150 mL of water, washed twice with 150 mL of water, and concentrated under reduced pressure to obtain 3.94 g. 2.25 g of a mixture of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1 was chromatographed with a dichloromethane: methanol (6: 1 → 5: 1 → 4: 1) mixed solvent containing 2% water in a silica gel 100 g column.

실시예 15. 진세노사이드 Rg5 와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 제조Example 15 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rg5 and Ginsenoside Rk1

프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 10 g과 푸마릭산 20 g을 99.8% 메탄올 100 mL에 녹이고 90 ℃에서 72시간 가열한 후 메탄올을 감압 하에서 제거였다. 농축물을 부탄올 300 mL에 분산시키고 소디움하이드록사이드 15 g을 물 150 mL에 녹인 것으로 세척하고 물 150 mL씩 2회 세척하고 감압 하에 농축하여 3.84 g을 얻었다. 실리카겔 100 g 컬럼에서 2% 물이 함유된 디클로로메탄 : 메 탄올(6:1→5:1→4:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 진세노사이드 Rg5와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 2.2 g을 얻었다.10 g of the protopanaxadiol ginsenoside mixture and 20 g of fumaric acid were dissolved in 100 mL of 99.8% methanol, heated at 90 ° C. for 72 hours, and methanol was removed under reduced pressure. The concentrate was dispersed in 300 mL of butanol, 15 g of sodium hydroxide was dissolved in 150 mL of water, washed twice with 150 mL of water, and concentrated under reduced pressure to obtain 3.84 g. Chromatography with dichloromethane: methanol (6: 1 → 5: 1 → 4: 1) containing 2% water in a silica gel 100 g column gave 2.2 g of a mixture of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1. .

실시예 16. 진세노사이드 Rg5 와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 제조Example 16 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rg5 and Ginsenoside Rk1

프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 10 g과 말레익산 25 g을 99.8% 메탄올 100 mL에 녹이고 90 ℃에서 72시간 가열한 후 메탄올을 감압 하에서 제거였다. 농축물을 부탄올 300 mL에 분산시키고 소디움하이드록사이드 15 g을 물 150 mL에 녹인 것으로 세척하고 물 150 mL씩 2회 세척하고 감압 하에 농축하여 3.8 g을 얻었다. 실리카겔 100 g 컬럼에서 2% 물이 함유된 디클로로메탄 : 메탄올 (6:1→5:1→4:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 진세노사이드 Rg5와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 2.28 g을 얻었다.10 g of the protopanaxadiol ginsenoside mixture and 25 g of maleic acid were dissolved in 100 mL of 99.8% methanol, heated at 90 ° C. for 72 hours, and methanol was removed under reduced pressure. The concentrate was dispersed in 300 mL of butanol, 15 g of sodium hydroxide was dissolved in 150 mL of water, washed twice with 150 mL of water, and concentrated under reduced pressure to obtain 3.8 g. 2.28 g of a mixture of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1 was obtained by chromatography on a silica gel 100 g column with a dichloromethane: methanol (6: 1 → 5: 1 → 4: 1) mixed solvent containing 2% water.

실시예 17. 진세노사이드 Rg5 와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 제조Example 17 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rg5 and Ginsenoside Rk1

프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 10 g과 락틱에시드 5 g을 99.8% 에탄올 100 mL에 녹이고 90 ℃에서 48시간 가열한 후 에탄올을 감압하에서 제거였다. 농축물을 부탄올 300 mL에 분산시키고 소디움하이드록사이드 5 g을 물 150 mL에 녹인 것으로 세척하고 물 150 mL씩 2회 세척하고 감압하에 농축하여 4.1 g을 얻었다. 실리카겔 100 g 컬럼에서 2% 물이 함유된 디클로로메탄 : 메탄올(6:1→5:1→4:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 진세노사이드 Rg5와 진세노사이드 Rk1 혼합물 2.38 g을 얻었다.10 g of the protopanaxadiol ginsenoside mixture and 5 g of lactic acid were dissolved in 100 mL of 99.8% ethanol, heated at 90 ° C. for 48 hours, and ethanol was removed under reduced pressure. The concentrate was dispersed in 300 mL of butanol, washed with 5 g of sodium hydroxide in 150 mL of water, washed twice with 150 mL of water, and concentrated under reduced pressure to obtain 4.1 g. 2.38 g of a mixture of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1 was obtained by chromatography on a silica gel 100 g column with a dichloromethane: methanol (6: 1 → 5: 1 → 4: 1) mixed solvent containing 2% water.

실시예 18. 진세노사이드 Rg5 와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 제조Example 18 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rg5 and Ginsenoside Rk1

프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 10 g과 빙초산 30 g을 99.8% 에탄올 100 mL에 녹이고 90 ℃에서 24시간 가열한 후 에탄올을 감압 하에서 제거였다. 농축물을 실리카겔 100 g 컬럼에서 2% 물이 함유된 디클로로메탄 : 메탄올 (6:1→5:1→4:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 진세노사이드 Rg5와 진세노사이드 Rk1 혼합물 2.48 g을 얻었다.10 g of a protoparanaxadiol ginsenoside mixture and 30 g of glacial acetic acid were dissolved in 100 mL of 99.8% ethanol, heated at 90 ° C. for 24 hours, and ethanol was removed under reduced pressure. The concentrate was chromatographed on a silica gel 100 g column with a dichloromethane: methanol (6: 1 → 5: 1 → 4: 1) mixed solvent containing 2% water to give 2.48 g of a mixture of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1. Got it.

실시예 19. 진세노사이드 Rg5 와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 제조Example 19 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rg5 and Ginsenoside Rk1

프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 10 g과 개미산 20 g을 99.8% 에탄올 100 mL에 녹이고 90 ℃에서 22시간 가열한 후 소디움하이드록사이드 20 g을 가하고 에탄올을 감압 하에서 제거였다. 농축물을 부탄올 300 mL에 분산시키고 물 150 mL씩 2회 세척하고 감압 하에 농축하여 3.88 g을 얻었다. 실리카겔 100 g 컬럼에서 2% 물이 함유된 디클로로메탄 : 메탄올(6:1→5:1→4:1) 혼합용매로 크로마토그래피하여 진세노사이드 Rg5와 진세노사이드 Rk1 혼합물 2.24 g을 얻었다.10 g of the protopanaxadiol ginsenoside mixture and 20 g of formic acid were dissolved in 100 mL of 99.8% ethanol, heated at 90 ° C. for 22 hours, 20 g of sodium hydroxide was added, and ethanol was removed under reduced pressure. The concentrate was dispersed in 300 mL of butanol, washed twice with 150 mL of water, and concentrated under reduced pressure to give 3.88 g. 2.24 g of a mixture of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1 was obtained by chromatography on a silica gel 100 g column using a dichloromethane: methanol (6: 1 → 5: 1 → 4: 1) mixed solvent containing 2% water.

실시예 20. 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실] 담마란-3β,12β-디올 옥타아세테이트 (화합물번호 7) 제조Example 20. Preparation of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosil] dammaran-3β, 12β-diol octaacetate (Compound No. 7)

상기 실시예 2에서 제조한 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 무 수초산 2 mL를 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 1) prepared in Example 2 was pyridine. It was dissolved in 2 mL, 2 mL of acetic anhydride was added thereto, left at room temperature for 24 hours, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified by dichloromethane and ethyl acetate mixed solvent on a column of silica gel 20 g to obtain the target compound.

1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ 4.70(1H, d, J=8.0 Hz), 4.45(1H, d, J=7.6Hz), 3.80(1H, dd, J=8.5, 7.6Hz), 3.77(1H, br. s.), 3.08(1H, dd, J=11.4, 4.0Hz), 2.10, 2.07(3H×2, s), 2.02(3H×2, s), 2.01, 1.98(3H×2, s), 1.03(3H, s), 1.02(3H, s), 0.96(3H, d), 0.95(3H, d), 0,90(3H, d), 0.87(3H, s), 0.81(3H, s). 1 H-NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 4.70 (1H, d, J = 8.0 Hz), 4.45 (1H, d, J = 7.6 Hz), 3.80 (1H, dd, J = 8.5, 7.6 Hz), 3.77 (1H, br.s.), 3.08 (1H, dd, J = 11.4, 4.0 Hz), 2.10, 2.07 (3H × 2, s), 2.02 (3H × 2, s), 2.01, 1.98 (3H × 2, s), 1.03 (3H, s), 1.02 (3H, s), 0.96 (3H, d), 0.95 (3H, d), 0,90 (3H, d), 0.87 (3H, s), 0.81 (3H, s).

실시예 21. 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실] 담마란-3β,12β-디올 옥타팔미테이트 (화합물번호 8) 제조Example 21. Preparation of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosil] dammaran-3β, 12β-diol octapalmitate (Compound No. 8)

상기 실시예 2에서 제조한 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 1 mL를 가하고 냉각한 후 팔미틱에시드 클로라이드 1 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 30 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 1) prepared in Example 2 was pyridine. After dissolving in 2 mL, 1 mL of triethylamine was added and cooled, 1 g of palmitic chloride was added thereto and left at room temperature for 24 hours. Then, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified by dichloromethane and ethyl acetate mixed solvent on a column of silica gel 30 g to obtain the target compound.

실시예 22. 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실] 담마란-3β,12β-디올 옥타운데카노에이트 (화합물번호 9) 제조Example 22. Preparation of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosil] dammaran-3β, 12β-diol oxtown decanoate (Compound No. 9)

상기 실시예 2에서 제조한 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 1 mL를 가하고 냉각한 후 운데카노익에시드 클로라이드 1 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 30 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(3:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 1) prepared in Example 2 was pyridine. After dissolving in 2 mL, 1 mL of triethylamine was added and cooled, 1 g of undecanoic acid chloride was added thereto, and the mixture was left at room temperature for 24 hours. Then, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified by dichloromethane and ethyl acetate (3: 1) mixed solvent on a column of silica gel 30 g to obtain the target compound.

실시예 23. 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실] 담마란-3β,12β-디올 옥타부티레이트 (화합물번호 10) 제조Example 23 Preparation of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol octabutyrate (Compound No. 10)

상기 실시예 2에서 제조한 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 1 mL를 가하고 냉각한 후 부티릭에시드 클로라이드 0.5 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 30 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(3:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 1) prepared in Example 2 was pyridine. After dissolving in 2 mL, 1 mL of triethylamine was added and cooled, 0.5 g of butyric acid chloride was added thereto, and the mixture was left at room temperature for 24 hours. Then, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified by dichloromethane and ethyl acetate (3: 1) mixed solvent on a column of silica gel 30 g to obtain the target compound.

실시예 24. 3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 펜타아세테이트 (화합물번호 11) 제조Example 24. Preparation of 3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol pentaacetate (Compound No. 11)

상기 실시예 3에서 제조한 3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 2) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 무수초산 2 mL를 가하여 실온에 서 24시간 방치한 후 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20g 의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(3:1)혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of 3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 2) prepared in Example 3 was dissolved in 2 mL of pyridine and 2 mL of acetic anhydride was added thereto at room temperature. After leaving for time, it was concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified on a column of silica gel 20g with dichloromethane and ethyl acetate (3: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

1H-NMR(400 MHz, CDCl3) δ 4.45(1H, d, J=7.6Hz), 3.77(1H, br.s.), 3.08(1H, dd, J=11.4, 4.0Hz), 2.10(3H, s), 2.08(3H, s), 2.03(3H, s), 2.01(3H, s), 1.99(3H, s), 1.03(3H, s), 1.02(3H, s), 0.96(3H, d), 0.95(3H, d), 0,90(3H, d), 0.87(3H, s), 0.81(3H, s). 1 H-NMR (400 MHz, CDCl 3 ) δ 4.45 (1H, d, J = 7.6 Hz), 3.77 (1H, br.s.), 3.08 (1H, dd, J = 11.4, 4.0 Hz), 2.10 ( 3H, s), 2.08 (3H, s), 2.03 (3H, s), 2.01 (3H, s), 1.99 (3H, s), 1.03 (3H, s), 1.02 (3H, s), 0.96 (3H , d), 0.95 (3H, d), 0,90 (3H, d), 0.87 (3H, s), 0.81 (3H, s).

실시예 25. 3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 펜타부티레이트 (화합물번호 12) 제조Example 25. Preparation of 3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol pentabutyrate (Compound No. 12)

상기 실시예 3에서 제조한 3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 2) 150 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 0.5 mL를 가하고 냉각한 후 부티릭에시드 클로라이드 0.3 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(5:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.150 mg of 3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 2) prepared in Example 3 was dissolved in 2 mL of pyridine, 0.5 mL of triethylamine was added, and cooled. 0.3 g of butyric acid chloride was added thereto, and the mixture was left at room temperature for 24 hours. Then, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified on a column of silica gel 20 g with dichloromethane and ethyl acetate (5: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

실시예 26. 3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 펜타팔미테이트 (화합물번호 13) 제조Example 26. Preparation of 3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol pentapalmitate (Compound No. 13)

상기 실시예 3에서 제조한 3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 2) 150 mg을 피리딘 3 mL에 용해시키고 트리에틸아민 0.5 mL를 가하고 냉각한 후 팔미틱에시드 클로라이드 0.4 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(5:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.150 mg of 3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 2) prepared in Example 3 was dissolved in 3 mL of pyridine, 0.5 mL of triethylamine was added thereto, and cooled. 0.4 g of palmitic acid chloride was added thereto, and the mixture was left at room temperature for 24 hours. Then, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified on a column of silica gel 20 g with dichloromethane and ethyl acetate (5: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

실시예 27. 6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 옥타아세테이트 (화합물번호 14)의 제조Example 27 Preparation of 6-O- [α-L-Rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol octaacetate (Compound No. 14)

상기 실시예 5에서 제조한 6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 3) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 무수초산 2 mL를 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(3:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다. 6-O- [α-L-lamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol prepared in Example 5 (Compound No. 3) 200 The mg was dissolved in 2 mL of pyridine, 2 mL of acetic anhydride was added and left at room temperature for 24 hours, followed by concentration under reduced pressure. The concentrate was purified on a column of silica gel 20 g with dichloromethane and ethyl acetate (3: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

실시예 28. 6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 옥타부티레이트 (화합물번호 15)의 제조Example 28. Preparation of 6-O- [α-L-lamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol octabutyrate (Compound No. 15)

상기 실시예 5에서 제조한 6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 3) 150 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 0.5 mL를 가하고 냉각한 후 부티릭에시드 클로라이드 0.3 g을 가 하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(5:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.6-O- [α-L-lamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol prepared in Example 5 (Compound No. 3) 150 mg was dissolved in 2 mL of pyridine, 0.5 mL of triethylamine was added, cooled, and 0.3 g of butyric acid chloride was added thereto, and left at room temperature for 24 hours. Then, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and the resultant was extracted under reduced pressure. Concentrated. The concentrate was purified on a column of silica gel 20 g with dichloromethane and ethyl acetate (5: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

실시예 29. 6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 옥타팔미테이트 (화합물번호 16)의 제조Example 29. of 6-O- [α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol octapalmitate (Compound No. 16) Produce

상기 실시예 5에서 제조한 6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 3) 150 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 0.5 mL를 가하고 냉각한 후 팔미틱에시드 클로라이드 0.5 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(5:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.6-O- [α-L-lamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol prepared in Example 5 (Compound No. 3) 150 Mg was dissolved in 2 mL of pyridine, 0.5 mL of triethylamine was added, cooled, and 0.5 g of palmitic chloride was added thereto and left at room temperature for 24 hours. Then, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. It was. The concentrate was purified on a column of silica gel 20 g with dichloromethane and ethyl acetate (5: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

실시예 30. 6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 헥사아세테이트 (화합물번호 17)의 제조Example 30. Preparation of 6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol hexaacetate (Compound No. 17)

상기 실시예 7에서 제조한 6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 4) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 무수초산 2 mL를 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20g 의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(3:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다. 200 mg of 6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 4) prepared in Example 7 was dissolved in 2 mL of pyridine, and 2 mL of acetic anhydride was added to room temperature. It was left at 24 hours and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified on a column of silica gel 20 g with dichloromethane and ethyl acetate (3: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

실시예 31. 6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 헥사부티레이트 (화합물번호 18)의 제조Example 31. Preparation of 6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol hexabutyrate (Compound No. 18)

상기 실시예 7에서 제조한 6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 4) 150 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 0.5 mL를 가하고 냉각한 후 부티릭에시드 클로라이드 0.3 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트 (5:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.150 mg of 6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 4) prepared in Example 7 was dissolved in 2 mL of pyridine and 0.5 mL of triethylamine was added thereto. After cooling, 0.3 g of butyric acid chloride was added thereto, and the mixture was left at room temperature for 24 hours. Then, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified by dichloromethane and ethyl acetate (5: 1) mixed solvent on a column of silica gel 20 g to obtain the target compound.

실시예 32. 6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β, 6α,12β-트리올 헥사팔미테이트 (화합물번호 19)의 제조Example 32. Preparation of 6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol hexapalmitate (Compound No. 19)

상기 실시예 7에서 제조한 6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 4) 150 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 0.5 mL를 가하고 냉각한 후 팔미틱에시드 클로라이드 0.45 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트 (5:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.150 mg of 6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 4) prepared in Example 7 was dissolved in 2 mL of pyridine and 0.5 mL of triethylamine was added thereto. After cooling, 0.45 g of palmitic chloride was added thereto, and the mixture was left at room temperature for 24 hours. Then, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified by dichloromethane and ethyl acetate (5: 1) mixed solvent on a column of silica gel 20 g to obtain the target compound.

실시예 33. 담마란-3β,12β-디올 디팔미테이트 (화합물번호 20)의 제조Example 33. Preparation of Dhammarane-3β, 12β-Diol Dipalmitate (Compound No. 20)

상기 실시예 3에서 제조한 담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 5) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 1 mL를 가하고 냉각한 후 팔미틱에시드 클로라이드 1 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 30 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(6:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of dhammarane-3β, 12β-diol (Compound No. 5) prepared in Example 3 was dissolved in 2 mL of pyridine, 1 mL of triethylamine was added thereto, cooled, and 1 g of palmitic acid chloride was added thereto. After leaving for 50 hours, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified by dichloromethane and ethyl acetate (6: 1) mixed solvent on a column of silica gel 30 g to obtain the target compound.

실시예 34. 담마란-3β,12β-디올 디아세테이트 (화합물번호 21)의 제조Example 34 Preparation of Dhammarane-3β, 12β-Diol Diacetate (Compound No. 21)

상기 실시예 3에서 제조한 담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 5) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 무수초산 2 mL를 가하고 실온에서 24시간 방치한 후 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(6:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 5) prepared in Example 3 was dissolved in 2 mL of pyridine, 2 mL of acetic anhydride was added thereto, and the mixture was left at room temperature for 24 hours, and then concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified on a column of silica gel 20 g with dichloromethane and ethyl acetate (6: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

실시예 35. 담마란-3β, 12β-디올 디부티레이트 (화합물번호 22)의 제조Example 35 Preparation of Dhammarane-3β, 12β-Diol Dibutyrate (Compound No. 22)

상기 실시예 3에서 제조한 담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 5) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 1 mL를 가하고 냉각한 후 부티릭에시드 클로라이드 1 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(6:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of dhammarane-3β, 12β-diol (Compound No. 5) prepared in Example 3 was dissolved in 2 mL of pyridine, 1 mL of triethylamine was added thereto, cooled, and 1 g of butyric acid chloride was added thereto. After leaving for 50 hours, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified on a column of silica gel 20 g with dichloromethane and ethyl acetate (6: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

실시예 36. 담마란-3β, 6α, 12β-트리올 트리팔미테이트 (화합물번호 23)의 제조Example 36 Preparation of Dhammarane-3β, 6α, 12β-Triol Tripalmitate (Compound No. 23)

상기 실시예 8에서 제조한 담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 6) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 1 mL를 가하고 냉각한 후 팔미틱에시드 클로라이드 1 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 30 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(6:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 6) prepared in Example 8 was dissolved in 2 mL of pyridine, 1 mL of triethylamine was added thereto, cooled, and then 1 g of palmiside chloride was added thereto. After standing at room temperature for 24 hours, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified by dichloromethane and ethyl acetate (6: 1) mixed solvent on a column of silica gel 30 g to obtain the target compound.

실시예 37. 담마란-3β,6α,12β-트리올 트리부티레이트 (화합물번호 24)의 제조Example 37 Preparation of Dhammarane-3β, 6α, 12β-Triol Tributyrate (Compound No. 24)

상기 실시예 8에서 제조한 담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 6) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 트리에틸아민 1 mL를 가하고 냉각한 후 부티릭에시드 클로라이드 0.5 g을 가하여 실온에서 24시간 방치한 후 물 50 mL를 가하고 디클로로메탄 50 mL씩 2회 추출하여 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(6:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of dhammarane-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 6) prepared in Example 8 was dissolved in 2 mL of pyridine, 1 mL of triethylamine was added thereto, cooled, and 0.5 g of butyric acid chloride was added thereto. After standing at room temperature for 24 hours, 50 mL of water was added, 50 mL of dichloromethane was extracted twice, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was purified on a column of silica gel 20 g with dichloromethane and ethyl acetate (6: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

실시예 38. 담마란-3β,6α,12β-트리올 트리아세테이트 (화합물번호 25)의 제조Example 38 Preparation of Dhammarane-3β, 6α, 12β-Triol Triacetate (Compound No. 25)

상기 실시예 8에서 제조한 담마란-3β,6α,12β-트리올 (화합물번호 6) 200 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 무수초산 2 mL를 가하고 실온에서 24시간 방치한 후 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g의 컬럼에서 디클로로메탄과 에틸아세테이트(6:1) 혼합용매로 정제하여 목적화합물을 얻었다.200 mg of dammaran-3β, 6α, 12β-triol (Compound No. 6) prepared in Example 8 was dissolved in 2 mL of pyridine, 2 mL of acetic anhydride was added thereto, and left at room temperature for 24 hours, followed by concentration under reduced pressure. The concentrate was purified on a column of silica gel 20 g with dichloromethane and ethyl acetate (6: 1) mixed solvent to obtain the target compound.

실시예 39. 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실] 담마란-3β,12β-디올 옥타아세테이트 (화합물번호 7) 제조Example 39. Preparation of 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosil] dammaran-3β, 12β-diol octaacetate (Compound No. 7)

상기 실시예 1에서 제조한 진세노사이드 Rg5와 진세노사이드 Rk1 혼합물 0.3 g을 피리딘 3 mL에 녹이고 무수초산 3 mL을 가하고 실온에서 24시간 교반하여 반응시키고 감압하에서 농축하여 진세노사이드 Rg5 와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 옥타아세테이트를 제조하였다. 이 농축물을 에틸아세테이트 15 mL과 에탄올 10 mL에 녹이고 5% 팔라디움-챠콜 100 mg을 가하고 실온에서 수소압력 30 psi 파르 반응기에서 16시간 진탕하고 셀라이트를 통해 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하였다. 농축물을 실리카겔 20 g으로 칼람크로마토그래피하여 목적화합물을 얻었다. 0.3 g of the mixture of ginsenoside Rg5 and ginsenoside Rk1 prepared in Example 1 was dissolved in 3 mL of pyridine, 3 mL of acetic anhydride was added, the mixture was stirred at room temperature for 24 hours, and concentrated under reduced pressure to react with ginsenoside Rg5 and ginsenoside. A mixture of side Rk1 octaacetate was prepared. The concentrate was dissolved in 15 mL of ethyl acetate and 10 mL of ethanol, 100 mg of 5% palladium-charcoal was added, shaken in a 30 psi Parr reactor at room temperature for 16 hours, filtered through celite to remove the catalyst, and concentrated under reduced pressure. . The concentrate was chromatographed with 20 g of silica gel to obtain the target compound.

실시예 40. 3-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,12β-디올 펜타아세테이트 (화합물번호 11) 제조Example 40. Preparation of 3-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 12β-diol pentaacetate (Compound No. 11)

기존 논문(약학회지 39, 85 (1995))의 방법에 따라 제조한 진세노사이드 Rh3 0.15 g을 피리딘 2 mL과 무수초산 2 mL에 녹이고 실온에 16시간 교반하고, 감압하에서 농축하여 진세노사이드 Rh3 펜타아세테이트를 제조하였다. 이 진세노사이드 Rh3 펜타아세테이트를 에탄올 10 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜 50 mg을 가하 고 30 ℃에서 파르 반응기로 40 psi 수소가스 압력 하에서 10시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하여 시리카겔 20 g으로 칼람크로마토그래피(용매: 디클로로메탄 : 에틸아세테이트 = 3 : 1)하여 목적화합물을 얻었다. 0.15 g of ginsenoside Rh3 prepared according to the method of the existing paper (Pharmaceutical Journal 39, 85 (1995)) was dissolved in 2 mL of pyridine and 2 mL of acetic anhydride, stirred at room temperature for 16 hours, concentrated under reduced pressure, and concentrated under reduced pressure. Pentaacetate was prepared. This ginsenoside Rh3 pentaacetate was dissolved in 10 mL of ethanol, 50 mg of 10% palladium-charcoal was added, and the reaction was carried out by shaking at 30 ° C. with a Parr reactor under 40 psi hydrogen gas pressure for 10 hours. The mixture was filtered through celite to remove the catalyst, concentrated under reduced pressure, and purified by column chromatography with 20 g of silica gel (solvent: dichloromethane: ethyl acetate = 3: 1) to obtain the target compound.

실시예 42. 6-O-[α-L-람노피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,6α,12β-트리올 옥타아세테이트 (화합물번호 14)의 제조Example 42. Preparation of 6-O- [α-L-lamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 6α, 12β-triol octaacetate (Compound No. 14)

기존 논문(Planta Medica 56, 298 (1990))의 방법에 따라 제조한 진세노사이드 F4 0.1 g을 피리딘 2 mL과 무수초산 2 mL에 녹이고 실온에 16시간 교반하고, 감압하에서 농축하여 진세노사이드 F4 옥타아세테이트를 제조하였다. 이 진세노사이드 F4 옥타아세테이트를 에탄올 5 mL과 에틸아세테이트 5 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜 20 mg을 가하고 30 ℃에서 파르 반응기로 40 psi 수소가스 압력 하에서 10시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하여 실리카겔 20 g으로 칼람크로마토그래피(용매: 디클로로메탄 : 에틸아세테이트 = 4 : 1)하여 목적화합물을 얻었다. 0.1 g of ginsenoside F4 prepared according to the method of the existing paper (Planta Medica 56, 298 (1990)) was dissolved in 2 mL of pyridine and 2 mL of acetic anhydride, stirred at room temperature for 16 hours, concentrated under reduced pressure, and concentrated under reduced pressure. Octaacetate was prepared. This ginsenoside F4 octaacetate was dissolved in 5 mL of ethanol and 5 mL of ethyl acetate, 20 mg of 10% palladium-charcoal was added, and the reaction was carried out by shaking at 40C for 10 hours in a Parr reactor at 30 ° C. The mixture was filtered through celite to remove the catalyst, concentrated under reduced pressure, and purified by column chromatography with 20 g of silica gel (solvent: dichloromethane: ethyl acetate = 4: 1) to obtain the target compound.

실시예 43. 6-O-β-D-글루코피라노실 담마란-3β,6α,12β-트리올 헥사아세테이트 (화합물번호 17)의 제조Example 43. Preparation of 6-O-β-D-glucopyranosyl dammaran-3β, 6α, 12β-triol hexaacetate (Compound No. 17)

기존 논문(Planta Medica 62, 86 (1996))의 방법에 따라 제조한 진세노사이드 Rh4 0.1 g을 피리딘 2 mL과 무수초산 2 mL에 녹이고 실온에 16시간 교반하고, 감압하에서 농축하여 진세노사이드 Rh4 헥사아세테이트를 제조하였다. 이 진세노사이드 Rh4 헥사아세테이트를 에탄올 5 mL과 에틸아세테이트 5 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜 20 mg을 가하고 30 ℃에서 파르 반응기로 30 psi 수소가스 압력 하에서 10시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하여 실리카겔 20 g으로 칼람크로마토그래피(용매: 디클로로메탄 : 에틸아세테이트 = 4 : 1)하여 목적화합물을 얻었다. 0.1 g of ginsenoside Rh4 prepared according to the method of the present paper (Planta Medica 62, 86 (1996)) was dissolved in 2 mL of pyridine and 2 mL of acetic anhydride, stirred at room temperature for 16 hours, concentrated under reduced pressure, and concentrated to reduced ginsenoside Rh4. Hexaacetate was prepared. This ginsenoside Rh4 hexaacetate was dissolved in 5 mL of ethanol and 5 mL of ethyl acetate, 20 mg of 10% palladium-charcoal was added, and the reaction was carried out by shaking at 30 ° C. with a Parr reactor under 30 psi hydrogen gas pressure for 10 hours. The mixture was filtered through celite to remove the catalyst, concentrated under reduced pressure, and purified by column chromatography with 20 g of silica gel (solvent: dichloromethane: ethyl acetate = 4: 1) to obtain the target compound.

실시예 44. 담마란-3β,6α,12β-트리올 트리아세테이트 (화합물번호 25)의 제조Example 44. Preparation of Dammaran-3β, 6α, 12β-triol triacetate (Compound No. 25)

기존 문헌(Planta Medica 62, 86 (1996))의 방법에 따라 제조한 담마란-20(22), 24-디엔-3β,6α,12β-트리올 150 mg을 피리딘 2 mL에 용해시키고 무수초산 2 mL를 가하고 실온에서 24시간 방치한 후 감압 하에서 농축하여 담마란-20(22), 24-디엔-3β,6α,12β-트리올 트리아세테이트를 제조하였다. 담마란-20(22), 24-디엔-3β,6α,12β-트리올 트리아세테이트를 에탄올 5 mL과 에틸아세테이트 5 mL에 녹이고 10% 팔라디움-챠콜 20 mg을 가하고 30 ℃에서 파르 반응기로 30 psi 수소가스 압력 하에서 14시간 진탕하여 반응시켰다. 셀라이트를 통과시켜 여과하여 촉매를 제거하고 감압 하에서 농축하여 실리카겔 20 g으로 칼람크로마토그래피(용매: 디클로로메탄 : 에틸아세테이트 = 6 : 1)하여 목적화합물을 얻었다. 150 mg of dammaran-20 (22), 24-diene-3β, 6α, 12β-triol, prepared according to the methods of Planta Medica 62, 86 (1996), were dissolved in 2 mL of pyridine and acetic anhydride 2 After adding mL and leaving at room temperature for 24 hours, it was concentrated under reduced pressure to prepare dammaran-20 (22), 24-diene-3β, 6α, 12β-triol triacetate. Dammaran-20 (22), 24-diene-3β, 6α, 12β-triol triacetate is dissolved in 5 mL of ethanol and 5 mL of ethyl acetate, 20 mg of 10% palladium-charcoal is added and 30 psi into a Parr reactor at 30 ° C. The reaction was stirred for 14 hours under hydrogen gas pressure. The mixture was filtered through celite to remove the catalyst, concentrated under reduced pressure, and purified by column chromatography with 20 g of silica gel (solvent: dichloromethane: ethyl acetate = 6: 1) to obtain the target compound.

또한, 다음의 제제예에서는 본 발명에 따른 일반적인 약제 조성물을 설명한 것으로서, 다음 각각의 경우에서 유효성분은 상기 실시예 2에서 제조한 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1)을 나타내며, 경우에 따라서는 본 발명에 포함되는 다른 화합물과 동등한 효과 용량으로 대체할 수도 있다.In addition, the following formulation examples have described the general pharmaceutical composition according to the present invention, the active ingredient in each case of the following 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) prepared in Example 2 -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 1), and in some cases, may be replaced by an effective dose equivalent to other compounds included in the present invention.

제제예 1. 정제의 제조Formulation Example 1 Preparation of Tablet

유효화합물(화합물번호 1) 5 g, 유당 15 g, 셀룰로오스메틸칼시움 2.5 g 과 결정셀룰로오스 2.5 g을 잘 혼합한 후 정제를 제조하는 통상적인 공정에 따라 50 mg 정제를 제조하였다.5 g of an effective compound (compound No. 1), 15 g of lactose, 2.5 g of cellulose methylcalcium and 2.5 g of crystalline cellulose were mixed well, and then 50 mg of tablets were prepared according to a conventional process of preparing tablets.

제제예 2. 과립제의 제조Formulation Example 2 Preparation of Granules

유효화합물(화합물번호 1) 5 g, 유당 15 g, 셀룰로오스메틸소디움 2.5 g 과 결정셀룰로오스 2.5 g을 잘 혼합한 후 습식법으로 과립제를 제조하는 통상적인 공정에 따라 과립제를 제조하였다.5 g of an effective compound (compound No. 1), 15 g of lactose, 2.5 g of cellulose methyl sodium, and 2.5 g of crystalline cellulose were mixed well, and granules were prepared according to a conventional process of preparing granules by a wet method.

제제예 3. 경질캅셀제의 제조Formulation Example 3 Preparation of Hard Capsule

유효화합물(화합물번호 1) 5 g, 유당 10 g, 셀룰로오스메틸칼시움 2.5 g 과 결정셀룰로오스 7.5 g을 잘 혼합한 후 정제를 제조하는 통상적인 공정에 따라 50 mg 경질캅셀제를 제조하였다.5 g of an effective compound (compound No. 1), 10 g of lactose, 2.5 g of cellulose methylcalcium and 7.5 g of crystalline cellulose were mixed well, and then 50 mg of hard capsules were prepared according to a conventional process of preparing tablets.

제제예 4. 연질캅셀제의 제조Formulation Example 4 Preparation of Soft Capsule

유효화합물(화합물번호 1) 5 g, 대두유 42 g, 대두레시틴 1.5 g, 황납 1.5 g을 잘 혼합한 후 연질캅셀제를 제조하는 통상적인 공정에 따라 100 mg 연질캅셀제를 제조하였다.5 g of an effective compound (Compound No. 1), soybean oil 42 g, soybean lecithin 1.5 g, and lead 1.5 g were mixed well, and then 100 mg soft capsule was prepared according to a conventional process of preparing a soft capsule.

제제예 5. 주사제의 제조Formulation Example 5 Preparation of Injection

유효화합물(화합물번호 1) 5 g을 폴리에틸렌글리콜 5 g, 에탄올 5 mL, 인산화 생리식염수 400 mL에 가온하여 용해시키고 냉각한 후 인산화 생리식염수를 첨가하여 500 mL가 되도록 하여 멸균여과기로 여과하여 통상적인 공정에 따라 1 mL씩 바이알에 충진하여 주사제를 제조하였다.5 g of the active compound (Compound No. 1) was dissolved in 5 g of polyethylene glycol, 5 mL of ethanol and 400 mL of phosphorylated physiological saline, cooled, and added to phosphorus saline to make 500 mL. The injection was prepared by filling the vials 1 mL according to the process.

또한, 다음의 참고예 및 비교참고예에서는 상기 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 △20-진세노사이드를 제조하기 위한 산 분해 방법을 수행한 예이다. 참고예 1과 2는 본 발명에 의해 유기산과 지방족알콜의 혼합용액 조건에서 산 분해방법을 수행한 예이고, 비교참고예 1과 2는 일반적으로 알려진 산 분해 방법을 수행한 예이다.In addition, the following Reference Examples and Comparative Reference Example In the above formula (2a) or △ 20 represented by the following general formula 2b - an example of performing the acid decomposition method for producing a ginsenoside. Reference Examples 1 and 2 are examples of carrying out an acid decomposition method under a mixed solution of an organic acid and an aliphatic alcohol according to the present invention, and Comparative Reference Examples 1 and 2 are examples of carrying out a known acid decomposition method.

참고예 1. 진세노사이드 Rg5 와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 제조Reference Example 1 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rg5 and Ginsenoside Rk1

프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 1 g과 구연산 1 g을 99.8% 에탄올 10 mL에 녹이고 85 ℃에서 12시간 가열하였다. 반응물을 부탄올 200 mL에 희석시키고 소디움하이드록사이드 2 g을 물 60 mL에 녹인 것으로 세척하고 부탄올층을 물 60 mL씩 2회 세척하고 감압 하에 농축하여 0.4 g을 얻었다. 1 g of ProtoPanaxadiol-based ginsenoside mixture and 1 g of citric acid were dissolved in 10 mL of 99.8% ethanol and heated at 85 ° C. for 12 hours. The reaction was diluted with 200 mL of butanol, washed with 2 g of sodium hydroxide in 60 mL of water, and the butanol layer was washed twice with 60 mL of water and concentrated under reduced pressure to obtain 0.4 g.

참고예 2. 진세노사이드 Rg5 와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 제조Reference Example 2 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rg5 and Ginsenoside Rk1

프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 1 g과 구연산 1 g을 95% 에탄올 10 mL에 녹이고 85 ℃에서 12시간 가열하였다. 반응물을 부탄올 200 mL에 희석시키고 소디움하이드록사이드 2 g을 물 60 mL에 녹인 것으로 세척하고 부탄올층을 물 60 mL씩 2회 세척하고 감압하에 농축하여 0.41 g을 얻었다. 1 g of ProtoPanaxadiol-based ginsenoside mixture and 1 g of citric acid were dissolved in 10 mL of 95% ethanol and heated at 85 ° C. for 12 hours. The reaction was diluted in 200 mL of butanol, washed with 2 g of sodium hydroxide in 60 mL of water, and the butanol layer was washed twice with 60 mL of water, and concentrated under reduced pressure to obtain 0.41 g.

비교참고예 1. 프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물의 제조Comparative Reference Example 1 Preparation of Protoparanaxadiol Ginsenoside Mixture

인삼의 70% 에탄올 추출물분말 250 g을 물 1000 mL에 녹이고 소디움하이드록사이드 50 g을 가하여 용해시킨 후 수포화부탄올 1200 mL씩 4회 추출하여 프로토파낙사트리올계 진세노사이드를 제거하였다. 수층을 냉각시킨 후 6N 염산 200 mL를 냉각시킨 것을 가하여 중화하고 수포화부탄올 1400 mL씩 4회 추출하여 감압하에서 농축하였다. 농축물을 300 mL의 메탄올에 용해시킨 후 여과한 여액을 감압하에서 농축하여 프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 42 g을 얻었다.250 g of 70% ethanol extract powder of ginseng was dissolved in 1000 mL of water and dissolved by adding 50 g of sodium hydroxide, followed by extracting four times of 1200 mL of saturated butanol to remove the protofa natri triol ginsenoside. After the aqueous layer was cooled, 200 mL of 6N hydrochloric acid was cooled, neutralized, 1400 mL of saturated butanol was extracted four times, and concentrated under reduced pressure. The concentrate was dissolved in 300 mL of methanol, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to give 42 g of a mixture of ProtoPanaxadiol Ginsenosides.

비교참고예 2. 진세노사이드 Rg5 와 진세노사이드 Rk1의 혼합물 제조Comparative Reference Example 2 Preparation of a Mixture of Ginsenoside Rg5 and Ginsenoside Rk1

프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물 1 g과 구연산 1 g을 물 10 mL에 녹 이고 85 ℃에서 12시간 가열하였다. 반응물을 부탄올 200 mL에 희석시키고 소디움하이드록사이드 2 g을 물 60 mL에 녹인 것으로 세척하고 부탄올층을 물 60 mL씩 2회 세척하고 감압 하에 농축하여 0.41 g을 얻었다.1 g of ProtoPanaxadiol-based ginsenoside mixture and 1 g of citric acid were dissolved in 10 mL of water, and heated at 85 ° C. for 12 hours. The reaction was diluted in 200 mL of butanol, washed with 2 g of sodium hydroxide in 60 mL of water, and the butanol layer was washed twice with 60 mL of water and concentrated under reduced pressure to give 0.41 g.

상기 참고예 1과 2 및 비교참고예 2에서 각각 제조한 시료를 고속액체크로마토그래피로 분석하였다. 컬럼은 Capcell pak MG C18(4.6×250 cm), 검출 203 nm, 용출용매는 (A) 10% 아세토니트릴/물, (B) 90% 아세토니트릴/물을 시간대 별로 비율 차이를 두어 실시하였다. 그 결과는 도 1에 나타내었다.Samples prepared in Reference Examples 1 and 2 and Comparative Reference Example 2 were analyzed by high performance liquid chromatography. The column was Capcell pak MG C18 (4.6 × 250 cm), detection 203 nm, the elution solvent (A) 10% acetonitrile / water, (B) 90% acetonitrile / water was carried out with a time difference ratio. The results are shown in FIG.

도 1에서 P1은 20S-진세노사이드 Rg3, P2는 20R-진세노사이드 Rg3, P3은 진세노사이드 Rk1, P4는 진세노사이드 Rg5를 나타낸다. 비교참고예 2의 방법에 의해 프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물을 수용액 중에서 유기산 분해하면, 진세노사이드 Rg3(P1+P2)와 진세노사이드 Rk1괴 진세노사이드 Rg5가 피크 면적비율로 대략 1:1로 생성된다. 이에 반하여, 참고예 1과 2의 방법에 의해 99.8% 에탄올 용액 또는 95% 에탄올 용액에서 유기산 분해하면, 진세노사이드 Rg3는 극소량 생성하고 대부분 90% 이상은 △20-진세노사이드인 진세노사이드 Rk1과 진세노사이드 Rg5가 생성됨을 확인할 수 있다.In FIG. 1, P1 represents 20S-ginsenoside Rg3, P2 represents 20R-ginsenoside Rg3, P3 represents ginsenoside Rk1, and P4 represents ginsenoside Rg5. When the organic acid was decomposed in an aqueous solution by the method of Comparative Reference Example 2, ginsenoside Rg3 (P1 + P2) and ginsenoside Rk1 ingot ginsenoside Rg5 were approximately 1 in peak area ratio. Generated as: 1. On the other hand, Reference Example 1 and when the organic acid decomposes at a 99.8% ethanol solution or 95% ethanol solution by the method of 2, ginsenoside Rg3 is a very small amount to create and most more than 90% △ 20 - ginsenoside of ginsenoside Rk1 It can be seen that ginsenoside Rg5 is formed.

또한, 본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 진세노사이드 유도체의 암 예방, 암전이 억제 및 암 치료 효과를 알아보기 위하여, 다음의 실험예 1 내지 5와 같은 방법으로 생물학적 활성효과를 측정하였다.In addition, in order to determine the cancer prevention, cancer metastasis inhibition and cancer treatment effect of the ginsenoside derivative represented by the formula (1) according to the present invention, the biological activity effect was measured in the same manner as in Experimental Examples 1 to 5.

실험예 1. In Vitro 암세포 성장억제 효과Experimental Example 1. In Vitro cancer cell growth inhibitory effect

살포로다민 B방법(J. National Cancer Institute, 82, 1107 (1990))에 따라 암세포 성장억제 효과를 측정하였다. 세포성장 50% 저해 농도 ED50는 다음 표 1에 나타내었다.The effect of inhibiting cancer cell growth was measured according to the sparhodamine B method (J. National Cancer Institute, 82, 1107 (1990)). Cell growth 50% inhibition concentration ED 50 is shown in Table 1 below.

In Vitro 암세포 성장억제 효과(ED50 : μg/mL) In Vitro cancer cell growth inhibitory effect (ED 50 : μg / mL) 시험군Test group 암 세포Cancer cell A549 A549 SK-OV-3 SK-OV-3 SK-MEL-2 SK-MEL-2 XF498XF498 HCT15 HCT15 화합물번호 1 Compound number 1 5.19 5.19 6.54 6.54 5.28 5.28 5.91 5.91 5.67 5.67 진세노사이드 Rg5 Ginsenoside Rg5 13.90 13.90 14.36 14.36 14.23 14.23 15.07 15.07 16.22 16.22 진세노사이드 Rg3 Ginsenoside Rg3 58.62 58.62 63.72 63.72 16.64 16.64 26.32 26.32 63.54 63.54 화합물번호 2 Compound number 2 23.30 23.30 17.40 17.40 14.30 14.30 27.40 27.40 13.90 13.90 진세노사이드 Rh3Ginsenoside Rh3 32.14 32.14 29.33 29.33 19.46 19.46 38.86 38.86 25.76 25.76 화합물번호 3 Compound number 3 38.92 38.92 43.16 43.16 15.81 15.81 35.51 35.51 28.02 28.02 진세노사이드 F4 Ginsenoside F4 57.24 57.24 44.27 44.27 36.43 36.43 47.16 47.16 54.63 54.63 화합물번호 4 Compound number 4 11.05 11.05 11.21 11.21 11.89 11.89 9.23 9.23 11.26 11.26 진세노사이드 Rh4 Ginsenoside Rh4 23.16 23.16 19.04 19.04 25.11 25.11 21.80 21.80 14.76 14.76 화합물번호 5 Compound number 5 14.70 14.70 11.70 11.70 21.70 21.70 24.50 24.50 17.40 17.40 화합물번호 6 Compound number 6 16.70 16.70 17.50 17.50 17.70 17.70 24.60 24.60 26.60 26.60 독소루비신 Doxorubicin 0.03 0.03 0.14 0.14 0.04 0.04 0.08 0.08 0.02 0.02

상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물들은 인간 유래 비소세포 폐암 세포(A549), 난소암 세포(SK-OV-3), 흑색종 세포(SK-MEL-2), 뇌암 세포(XF498), 대장암 세포(HCT15)에 대하여 기존의 진세노사이드보다 2 내지 3배 강한 항암력을 나타내었다. 특히, 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1)은 폐암 및 간암의 치료에 사용되고 있는 진세노사이드 Rg3 보다는 폐암 세포와 대장암 세포에 대하여서 11배 강한 항암효과를 나타내었다.As shown in Table 1, the compounds according to the present invention are human-derived non-small cell lung cancer cells (A549), ovarian cancer cells (SK-OV-3), melanoma cells (SK-MEL-2), brain cancer cells (XF498 ), 2 to 3 times stronger anticancer activity than conventional ginsenosides against colon cancer cells (HCT15). In particular, 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 1) is used for the treatment of lung cancer and liver cancer. It showed 11 times stronger anticancer effect on lung cancer cells and colon cancer cells than ginsenoside Rg3.

실험예 2. 인체 암세포주 HT-1080(Fibrosarcoma)을 이용한 누드마우스 Xenograft 모델에서의 종양 성장억제 효과Experimental Example 2 Effect of Tumor Growth Inhibition on Nude Mouse Xenograft Model Using Human Cancer Cell Line HT-1080 (Fibrosarcoma)

암컷 Balb/c 누드마우스(8주령, 체중 18 g, 군당 8 마리)에 암세포 1×107 세포/mL의 농도로 마우스 당 0.3 mL씩 피하로 이식하였다. 암세포를 이식한 다음날(1 일)부터 실험 종료 전날까지 시료와 용매(대조군: 0.2% 트윈-80수용액)를 경구로 마우스 체중 20 g당 0.2 mL씩 매일 1회 총 13회 투여하였다. 양성대조물질 아드리아마이신은 2 mg/kg을 2일에 1회씩 복강 투여하였다. 암세포 이식 후 7일부터 실험 종료 일까지 6회 종양의 크기를 개체별로 측정하였다. 종양의 크기는 캘리퍼를 이용하여 3 방향을 측정한 후, 다음 수학식 1로 표현하여 다음 표 2에 나타내었다.Female Balb / c nude mice (8 weeks old, 18 g body weight, 8 per group) were implanted subcutaneously with 0.3 mL per mouse at a concentration of 1 × 10 7 cells / mL of cancer cells. Samples and solvents (control: 0.2% Tween-80 aqueous solution) were administered orally once a day, a total of 13 times daily, from 20 days after the cancer cell transplant (day 1) to the day before the end of the experiment. Positive control adriamycin was intraperitoneally administered 2 mg / kg once every two days. The tumor size was measured six times from the 7th day after the cancer cell transplant to the end of the experiment. Tumor size was measured in three directions using a caliper, and then expressed in the following Equation 1 is shown in Table 2 below.

종양 부피 = (길이× 폭× 높이)/2Tumor Volume = (Length × Width × Height) / 2

경구 투여에 의한 종양 성장 억제 효과Tumor growth inhibitory effect by oral administration 시험군Test group 투여량 (mg/kg)Dose (mg / kg) 종양 부피 (mm3)Tumor volume (mm 3 ) 0일0 days 7일7 days 8일8th 9일9th 10일10 days 12일12 days 14일14 days 대조군Control 00 0.000.00 211.6± 55.6211.6 ± 55.6 409.6± 79.3409.6 ± 79.3 557.9± 71.8557.9 ± 71.8 669.2± 51.0669.2 ± 51.0 792.6± 62.9792.6 ± 62.9 1056.6± 101.81056.6 ± 101.8 화합물번호 1Compound number 1 33 0.000.00 179.6± 31.6179.6 ± 31.6 313.0± 43.5313.0 ± 43.5 406.6± 59.5406.6 ± 59.5 505.5± 65.2505.5 ± 65.2 563.5± 41.8563.5 ± 41.8 841.2± 103.2841.2 ± 103.2 화합물번호 2Compound number 2 1010 0.000.00 148.3± 23.6148.3 ± 23.6 278.0± 33.5278.0 ± 33.5 311.6± 49.0311.6 ± 49.0 376.2± 45.8376.2 ± 45.8 408.6± 51.3408.6 ± 51.3 504.3± 73.8504.3 ± 73.8 아드리아마이신Adriamycin 22 0.000.00 33.1± 9.933.1 ± 9.9 34.9± 11.734.9 ± 11.7 51.2± 20.851.2 ± 20.8 89.6± 34.889.6 ± 34.8 148.3± 54.0148.3 ± 54.0 242.9± 70.3242.9 ± 70.3

상기 표 2에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물들은 3, 10 mg/kg 용량으로 경구 투여하였을 때 우수한 항암작용을 나타내었다.As shown in Table 2, the compounds according to the present invention showed excellent anticancer activity when administered orally at 3, 10 mg / kg doses.

실험예 3. 암세포 전이 억제 효과Experimental Example 3. Effect of inhibiting cancer cell metastasis

B16F10 멜라노마 세포를 배양한 후 세포를 트립신-EDTA를 이용하여 분리하고 0.85% 식염수로 희석하여 2.5× 106 세포/mL로 맞추었다. 준비된 암세포 현탁액을 1개 군당 6마리씩으로 한 암컷 S.P.F. C57BL/6마우스에 한 마리당 0.2 mL씩 꼬리정맥내로 주사한 후 4시간 뒤 약물 투여를 시작하여 13일까지 마우스 체중 20 g당 0.2% 트윈-80 수용액으로 하여 0.2 mL씩 매일 경구 투여하였다. 양성대조군 아드리아마이신 2 mg/kg 은 2일에 1회씩 복강 주사하였다. 세포 이식 14일 후 마우스를 부검하여 암세포가 전이된 폐를 적출하여 중성 포르말린 용액에서 고정하였으며 고정된 폐는 사진 촬영 후 암 콜로니 수를 육안으로 계수하여 다음 표 3에 나타내었다.After culturing B16F10 melanoma cells, the cells were separated using trypsin-EDTA and diluted to 0.85% saline to 2.5 × 10 6 cells / mL. The prepared cancer cell suspension was injected into the tail vein in a female SPF C57BL / 6 mouse with 6 rats per group into the tail vein 4 mice after 4 hrs. As an aqueous solution, 0.2 mL was administered orally daily. Positive control adriamycin 2 mg / kg was intraperitoneally injected once every two days. After 14 days of cell transplantation, mice were autopsied and lungs from which cancer cells had metastasized were extracted and fixed in neutral formalin solution. The fixed lungs were visually counted after photographing and shown in Table 3 below.

폐로 암전이 억제효과Lung metastasis inhibitory effect 시험군Test group 투여용량(mg/kg)Dose (mg / kg) 폐에 암 콜로니 수 (평균± SD)Number of cancer colonies in the lungs (mean ± SD) 대조군Control 00 152.2± 26.1152.2 ± 26.1 화합물번호 1Compound number 1 33 80.0± 9.880.0 ± 9.8 화합물번호 1Compound number 1 1010 72.5± 8.672.5 ± 8.6 아드리아마이신Adriamycin 22 96.8± 14.796.8 ± 14.7

상기 표 3에서 보는 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물은 3, 10 mg/kg을 경구 투여했을 때 강력한 암세포 전이 억제작용을 나타내었으며, 양성 대조군으로 사용한 아드리아마이신 2 mg/kg 복강투여한 것보다 우수한 효과를 나타내었다.As shown in Table 3, the compound according to the present invention showed a strong cancer cell metastasis inhibitory effect when administered orally, 3, 10 mg / kg, it was superior to the 2 mg / kg intraperitoneal administration of adriamycin used as a positive control The effect was shown.

실험예 4. 혈관 신생 억제 효과Experimental Example 4. Angiogenesis inhibitory effect

3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1)과 진세노사이드 Rg3를 1% 메틸셀룰로오스 생리식염수에 녹이고 부화시작 4일에 Chick embryo chorioallantoic membrane에 약물을 주입하고(1개군 당 계란 14개) 37 ℃에서 48시간 배양하고 혈관 형성이 저지된 것을 계산하여 그 결과를 다음 표 4에 나타내었다. 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammarane-3β, 12β-diol (Compound No. 1) and ginsenoside Rg3 in 1% methylcellulose After dissolving in saline and injecting the drug into the Chick embryo chorioallantoic membrane on the 4th day of incubation (14 eggs per group) and incubated for 48 hours at 37 ℃ and calculated the inhibition of blood vessel formation is shown in Table 4 below.

CAM assay 에 의한 화합물의 혈관 신생억제 효과Angiogenesis Inhibitory Effect of Compounds by CAM Assay 시험군Test group 투여량 (μg/계란)Dose (μg / egg) 혈관 신생 억제율 (%)Angiogenesis inhibition rate (%) 화합물번호 1Compound number 1 1One 25.6± 7.825.6 ± 7.8 화합물번호 1Compound number 1 1010 51.4± 11.451.4 ± 11.4 화합물번호 1Compound number 1 100100 90.2± 8.290.2 ± 8.2 진세노사이드 Rg3Ginsenoside Rg3 1010 27.8± 6.927.8 ± 6.9 진세노사이드 Rg3Ginsenoside Rg3 100100 53.2± 12.153.2 ± 12.1 진세노사이드 Rg3Ginsenoside Rg3 10001000 85.8± 13.685.8 ± 13.6

상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1)은 기존의 진세노사이드 Rg3보다 10 배 강한 혈관신생 억제 효과를 나타내었다.As shown in Table 4, 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 1) is conventional It showed an angiogenesis inhibitory effect 10 times stronger than ginsenoside Rg3.

실험예 5. 발암물질에 의한 발암 억제 효과 (암 발생 예방 효과)Experimental Example 5. Carcinogenic inhibitory effect by carcinogens (cancer prevention effect)

암을 발생시키기 위하여 발암제 7, 12-디메틸벤즈(a)안트라센(DMBA)를 등피부에 국소적으로 1회 도포하고 프로모터인 크로톤오일을 매주 3회씩 도포하는 2단계 프로토콜을 채택하였다. 체중 24 g 전후의 스위스 알비노 마우스를 군당 30마리씩 배분하였다. 대조군에는 DMBA(100μg/50μL아세톤/마우스)를 처리하고 2주 후부터 실험이 끝날 때까지 크로톤오일 0.1 mL를 1주일에 3회씩 도포하였다.To develop the cancer, a two-step protocol was applied to the carcinogen 7, 12-dimethylbenz (a) anthracene (DMBA) topically once in the back skin and to the promoter croton oil three times a week. Swiss albino mice at around 24 g of body weight were distributed per group. The control group was treated with DMBA (100 μg / 50 μL acetone / mouse) and 0.1 mL of croton oil was applied three times a week from 2 weeks until the end of the experiment.

3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1) 투여군을 3군으로 나누고, 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1)을 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg 용량으로 트윈-80 수용액에 용해시켜 DMBA(100 μg/50μL 아세톤/마우스) 처치 1주일 전부터 1일 1회씩 실험이 끝날 때까지 경구투여하고 DMBA 처치 후 1주일에 3회씩 크로톤오일 0.1 mL를 실험기간 중 계속 도포하였다.3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosil] dammaran-3β, 12β-diol (Compound No. 1) administration group was divided into three groups, and 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammarane-3β, 12β-diol (Compound No. 1) at 1 mg / kg, 3 mg / kg, 10 mg / kg Dose was dissolved in Tween-80 aqueous solution and administered orally 1 week before DMBA (100 μg / 50 μL acetone / mouse) treatment until the end of the experiment and 0.1 mL of croton oil 3 times a week after DMBA treatment. The application was continued.

실험기간 16주 동안 1주일에 1회씩 피부에 발생된 파필로마를 관찰 측정하였으며 파필로마는 직경 1 mm 보다 큰 것으로 2번 계속 관찰된 것을 계측하였다. 그 관찰 결과를 다음 표 5에 나타내었다.Papilloma generated on the skin was observed once a week for 16 weeks during the experimental period. Papilloma was larger than 1 mm in diameter and continuously observed twice. The observation results are shown in Table 5 below.

발암 억제 효과(발암 예방 효과)Carcinogenic inhibitory effect (carcinogenic effect) 시험군Test group 투여량Dosage 누적 파필로마 수 Cumulative Papilloma Number 종양 무게 (mg) Tumor weight (mg) 종양 인시던스(%) Tumor Incidence (%) 종양 발생 잠복기간(주) Tumor incubation period (weeks) 대조군Control -- 43.0± 0.9  43.0 ± 0.9 246.5± 12.2 246.5 ± 12.2 100± 0.0 100 ± 0.0 10.8± 0.1 10.8 ± 0.1 화합물번호 1Compound number 1 1 mg/kg1 mg / kg 11.8± 0.9  11.8 ± 0.9 118.5± 6.7 118.5 ± 6.7 71.3± 4.7 71.3 ± 4.7 11.7± 0.2 11.7 ± 0.2 화합물번호 1Compound number 1 3 mg/kg3 mg / kg 8.6± 0.2 8.6 ± 0.2 96.0± 6.4 96.0 ± 6.4 66.1± 4.5 66.1 ± 4.5 11.1± 0.3 11.1 ± 0.3 화합물번호 1Compound number 1 10 mg/kg 10 mg / kg 7.3± 0.5 7.3 ± 0.5 37.5± 2.4 37.5 ± 2.4 62.2± 2.3 62.2 ± 2.3 12.6± 0.1 12.6 ± 0.1

상기 표 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 3-O-[β-D-글루코피라노실(1→2)-β-D-글루코피라노실]담마란-3β,12β-디올 (화합물번호 1)은 1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg를 경구적으로 투여했을 때 발생된 암의 파필로마 수, 종양 무게, 종양 인시던스(Incidence)가 현저히 감소하였으며 암 발생 잠복기간도 현저히 늦추어져 있음을 관찰하였다. 따라서, 본 발명의 화합물은 항암효과 뿐만 아니라 암 발생 예방 효과도 우수한 것으로 관찰되었다.As shown in Table 5, 3-O- [β-D-glucopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] dammaran-3β, 12β-diol according to the present invention (Compound No. 1) ) Significantly decreased the number of papilloma, tumor weight, tumor incidence, and latent cancer development by oral administration of 1 mg / kg, 3 mg / kg and 10 mg / kg. Observation was made. Therefore, the compound of the present invention was observed to be excellent in anti-cancer effect as well as cancer development prevention effect.

실험예 6. 급성독성 실험Experimental Example 6. Acute Toxicity Test

체중 20 g인 ICR계 마우스 20 마리씩을 1개군으로 하고 본 발명에서 제조한 화합물 1, 화합물 2, 화합물 3, 화합물 4, 화합물 5, 화합물 6을 각각 0.5% 셀룰로오스메틸셀룰로오스에 용해하거나 현탁시켜 2000 mg/kg을 경구적으로 1일 1회 7일간 투여하였다. 투여하고 2주간 관찰하였으나 사망하는 동물은 없었다.20 ICR mice, each weighing 20 g, were used as one group and 2000 mg of Compound 1, Compound 2, Compound 3, Compound 4, Compound 5, and Compound 6 prepared in the present invention were dissolved or suspended in 0.5% cellulose methylcellulose. / kg was administered orally once a day for 7 days. Two weeks after administration, no animals died.

본 발명에 따른 상기 화학식 1로 표시되는 진세노사이드 유도체는 시험관내 및 생체에서 항암력이 우수하고 신생혈관 생성억제 효과, 암전이 억제 효과 등이 우수하므로 항암제 및 암전이 억제제로 유용할 뿐만 아니라 암 발생 억제효과 역시 탁월하므로 암 예방제로서도 유용하다. 또한, 상기 화학식 1로 표시되는 진세노사이드 유도체는 동물 실험에서 급성독성이 없는 것으로 판명되었기에 안전하게 투여할 수 있는 의약품 및 기능성 소재로도 응용될 수 있다.Ginsenoside derivative represented by the formula (1) according to the present invention is not only useful as an anticancer agent and a cancer metastasis inhibitor, because it is excellent in anticancer activity in vitro and in vivo and excellent in angiogenesis inhibitory effect, cancer metastasis inhibitory effect It is also useful as a cancer preventive agent because it is excellent in inhibiting development. In addition, the ginsenoside derivative represented by Formula 1 has been found to be acutely toxic in animal experiments, and thus may be applied to pharmaceuticals and functional materials that can be safely administered.

Claims (4)

진세노사이드 Ra1, Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rc, Rd, Rg1, Re, 또는 이들의 혼합물, 또는 프로토파낙사디올계 진세노사이드 혼합물을, Ginsenosides Ra1, Ra2, Ra3, Rb1, Rb2, Rc, Rd, Rg1, Re, or a mixture thereof, or a protopanaxadiol-based ginsenoside mixture, 탄소수가 1 내지 6의 저급 지방족 알콜 용매 내에서 50 내지 100 ℃ 온도 조건으로 유기산에 의한 산 분해 반응을 수행하여 다음 화학식 2a 또는 화학식 2b로 표시되는 화합물, 또는 이들의 혼합물을 제조하는 방법 :A method for preparing a compound represented by the following Chemical Formula 2a or Chemical Formula 2b, or a mixture thereof, by performing an acid decomposition reaction with an organic acid in a lower aliphatic alcohol solvent having 1 to 6 carbon atoms at a temperature of 50 to 100 ° C.
Figure 112005068520022-pat00003
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Figure 112005068520022-pat00004
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 상기 화학식 2a 또는 2b에서, R1은 수소원자, C2∼C24의 아실기, 글루코스기, 또는 글루코실(1→2)글루코스기를타 나내고; R2는 수소원자, 히드록시기, C2∼C24의 O-아실기, O-글루코스기, 또는 람노실(1→2)글루코스기를 나타낸다.In Formula 2a or 2b, R 1 represents a hydrogen atom, an acyl group of C 2 to C 24 , a glucose group, or a glucosyl (1 → 2) glucose group; R 2 represents a group O- acyl group of a hydrogen atom, a hydroxy group, C 2 ~C 24, O- glucose group, or a person nosil (1 → 2) glucose. 제 1 항에 있어서, 상기 유기산은 구연산, 주석산, 호박산, 락틱산, 사과산, 말레익산, 푸마르산, 개미산 및 초산 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1, wherein the organic acid is selected from citric acid, tartaric acid, succinic acid, lactic acid, malic acid, maleic acid, fumaric acid, formic acid and acetic acid. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 유기산은 전체 반응용액에 대하여 0.1 내지 30 부피% 농도 범위 내에서 사용하는 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1 or 2, wherein the organic acid is used within the concentration range of 0.1 to 30% by volume based on the total reaction solution. 제 1 항에 있어서, 상기 저급 지방족 알콜은 메탄올 또는 에탄올인 것을 특징으로 하는 방법.The method of claim 1 wherein the lower aliphatic alcohol is methanol or ethanol.
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