KR100389726B1 - 안정한 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제 - Google Patents

안정한 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제 Download PDF

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쥬가이 세이야쿠 가부시키가이샤
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Abstract

과립구 콜로니 자극 인자 및 과립구 콜로니 자극 인자 1 중량부 당 1 중량부 이하의 약학적으로 허용가능한 하나 이상의 계면활성제를 함유하고, pH 가 7 이하인, 과립구 콜로니 자극 인자를 함유하는 안정한 제제.

Description

안정한 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제 {A STABLE GRANULOCYTE COLONY-STIMULATING FACTOR-CONTAINING FORMULATION}
본 발명의 분야
본 발명은 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제, 구체적으로는 용기 (container) 내벽에 대한 흡착, 응집, 중합, 산화 등으로 인한 활성 성분의 손실 및 비활성화를 예방함으로써 안정화되는 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제에 관한 것이다.
종래 기술
과립구 콜로니-자극 인자 (이하 "G-CSF" 로도 불림) 는 호중구 의 전구체 세포에 작용해서 그의 증식 및 분화를 증진시켜 성숙하게 하는 분자량 약 20,000 의 당단백질이다.
당업계는 구강기저부 (floor of mouth) 암을 앓는 환자의 종양 세포로부터 수집한 세포주를 배양해서 고순도의 인간 G-CSF 를 정제했기 때문에, 인간 G-CSF 유전자를 성공적으로 클론화했고, 현재는, 재조합 인간 G-CSF 를 유전자공학에 의해 동물 세포 안에서 다량 생산할 수 있다. 당업계는 또한 상기 정제된 G-CSF 를 항전염제 (일본 특허 번호 2116515) 로서 시장에 공급하는 제품으로 전환하는데도 성공했다.
G-CSF 는 매우 적은 양으로 사용되고, 즉 G-CSF 0.1 내지 1000 ㎍ (바람직하게는 5 내지 500 ㎍) 을 함유하는 제제를 성인에게 보통 일주일에 1회 내지 7회 투여한다. 그러나, 상기 G-CSF 는 앰풀, 주사기 등의 벽에 흡착한다. G-CSF 는 또한 불안정하고 온도, 습도, 산소, 자외선 등의 외부 요소에 쉽게 영향받아서 응집, 중합 또는 산화를 포함하는 물리적 또는 화학적 변화를 거쳐 활성이 크게 손실되는 결과를 초래한다.
따라서, 안정한 G-CSF 제제를 시장에 공급하기 위한 다양한 제형을 고안해왔다. 예를 들어, 아세트산, 락트산, 시트르산, 말레산, 인산 또는 그의 염 또는 아르기닌 또는 그의 염으로부터 선택되는 완충제를 함유하는 제제가 제안되었다 (일본 특허 출원 번호 505610/96). G-CSF 1 중량부 당 안정화제로서 계면활성제 1 내지 10,000 중량부를 함유하는 G-CSF 제제 또한 제안되었다 (일본 특허 출원 번호 146826/88). 후자의 공표는 계면활성제의 수준, 구체적으로는 그의 하한치가 G-CSF 의 손실을 예방하고 G-CSF 함유 액체 제제의 안정화를 달성하는데 중요하다는 것을 개시한다.
본 발명의 목적은 제조 과정의 복잡성을 감소시킬 수 있고, 장기간에 걸친 저장에 대해 더욱 안정한 G-CSF 제제를 제공하는 것이다.
본 발명의 요약
상기 목적을 달성하기 위해 예의 연구한 결과, 안정화제로서 계면활성제를 심지어 매우 소량 함유한 경우에도 안정한 G-CSF 액체 제제를 수득할 수 있다는 발견에 기초해서 본 발명을 완성했다.
따라서, 본 발명은 과립구 콜로니-자극 인자 및 과립구 콜로니-자극 인자 1 중량부 당 약학적으로 허용가능한 계면활성제 하나 이상을 0.0001 중량부 내지 1중량부를 함유하고 pH 가 7 이하인 안정한 과립구 콜로니-자극 인자를 제공한다.
본원에서 사용되는, 안정화란 25 ℃ 에서 6 개월간 저장 후 또는 40 ℃ 에서 2 주간 저장 후 잔류하는 G-CSF 의 백분율이 95 % 이상인 것을 의미한다.
도면의 간단한 설명
도 1 은 40 ℃ 에서 2 주간 촉진 시험 후 pH 및 잔류하는 G-CSF 의 백분율 사이의 관계를 나타내는 그래프이다.
도 2 는 40 ℃ 에서 2 주간 촉진 시험 후 pH 및 탈시알릴화된 G-CSF 의 생성비 사이의 관계를 나타내는 그래프이다.
도 3 은 패킹 후 24 시간 경과 후 G-CSF 1 중량부 당 폴리소르베이트 20 의 중량 및 흡착 억제율 사이의 관계를 나타내는 그래프이다.
본 발명의 가장 바람직한 실시형태
임의의 고순도의 인간 G-CSF 가 본 발명의 액체 제제로서 사용될 수 있다. 구체적으로는, 포유류의 것, 특히 인간 G-CSF 와 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 지니고 있는한 천연원으로부터 유도 될 수 있거나 유전자 재조합에 의해 수득할 수 있다.
유전적으로 재조합한 G-CSF 는 천연 G-CSF 의 것과 동일한 아미노산 서열을 갖거나 또는 그것이 상기 생물학적 활성을 갖는한 상기 아미노산 서열에 하나 또는 다수의 아미노산의 삭제, 치환 또는 첨가를 포함할 수 있다. 본 발명에서의 G-CSF 는 임의의 방법으로 제조될 수 있는데, 예를 들어, 인간의 종양 세포주를 배양해서 다양한 기술에 의해 추출 및 정제할 수 있거나 또는 대장균, 효모, 중국 햄스터 난소 (CHO), C127 등의 세포에서 유전자공학으로 생산한 후 다양한 방법으로 추출 및 정제할 수 있다. 가장 바람직하게는 G-CSF 는 CHO 세포에서 유전자 재조합으로 생산된다.
본 발명의 안정한 G-CSF 함유 제제를 수득하는데 있어서 적절한 계면활성제의 전형적인 예는 비이온성 계면활성제, 예를 들어 소르비탄 모노카프릴레이트, 소르비탄 모노라우레이트, 소르비탄 모노팔미테이트와 같은 소르비탄 지방산 에스테르; 글리세린 모노카프릴레이트, 글리세린 모노미리스테이트, 글리세린 모노스테아레이트와 같은 글리세린 지방산 에스테르; 데카글리세릴 모노스테아레이트, 데카글리세릴 디스테아레이트, 데카글리세릴 모노리놀레에이트와 같은 폴리글리세린 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노팔미테이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 트리스테아레이트와 같은 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 소르비톨 테트라스테아레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 테트라올레에이트와 같은 폴리옥시에틸렌 소르비톨 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 글리세릴 모노스테아레이트와 같은 폴리옥시에틸렌 글리세린 지방산 에스테르; 폴리에틸렌 글리콜 디스테아레이트와 같은 폴리에틸렌 글리콜 지방산 에스테르; 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르와 같은 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르; 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 글리콜 에테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 프로필 에테르, 폴리옥세에틸렌 폴리옥시프로필렌 세틸 에테르와 같은 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌알킬 에테르; 폴리옥시에틸렌 노닐 페닐 에테르와 같은 폴리옥시에틸렌 알킬 페닐 에테르; 폴리옥시에틸렌 피마자유, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유 (폴리옥시에틸렌 수소화 피마자유) 와 같은 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유; 폴레옥시에틸렌 소르비톨 밀랍과 같은 폴리옥시에틸렌 밀랍 유도체; 폴리옥시에틸렌 라놀린과 같은 폴리옥시에틸렌 라놀린 유도체; 6 내지 18 개의 HLB 를 갖는 폴리옥시에틸렌 스테아르산 아미드와 같은 폴리옥시에틸렌 지방산 아미드; 양이온성 계면활성제, 예를 들어, 나트륨 세틸술페이트, 나트륨 라우릴술페이트, 나트륨 올레일술페이트와 같은 C10 내지 18 의 알킬기를 갖는 알킬 술페이트; 2 내지 4 의 평균 EO 몰수 및 나트륨 폴리옥시에틸렌 라우릴술페이트와 같은 C10 내지 18 의 알킬기를 갖는 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르 술페이트; 나트륨 라우릴술포숙시네이트와 같은 C8 내지 18 의 알킬기를 갖는 알킬 술포숙신산 에스테르염; 천연 계면활성제, 예를 들어 레시틴; 글리세로인지질; 스핑고미엘린과 같은 스핑고인지질; 탄소원자수 12 내지 18 의 지방산의 수크로오스 지방산 에스테르를 포함한다. 하나 또는 둘 이상의 상기 계면활성제가 본 발명의 액체 제제에 첨가될 수 있다.
바람직한 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 더욱 바람직하게는 폴리소르베이트 20, 21, 40, 60, 65, 80, 81, 85, 가장 바람직하게는 폴리소르베이트 20 및 80 이다.
본 발명의 G-CSF 함유 제제에 첨가되는 계면활성제의 양은 전형적으로 G-CSF 1 중량부 당 0.0001 내지 1 중량부, 바람직하게는 G-CSF 1 중량부 당 0.01 내지 1 중량부, 더욱 바람직하게는 G-CSF 1 중량부 당 0.2 내지 1 중량부, 훨씬 더 바람직하게는 G-CSF 1 중량부 당 0.2 내지 0.8 중량부, 가장 바람직하게는 G-CSF 1 중량부 당 0.4 내지 0.8 중량부이다. 구체적으로는 제제 1 mL 당 G-CSF 125 ㎍ 또는 250 ㎍ 를 함유할 때, 바람직하게는 100 ㎍ 의 계면활성제가 첨가된다. 그러므로, G-CSF 1 중량부 당 0.4 중량부 또는 0.8 중량부의 계면활성제가 특히 바람직하다. 안정화제로서 알부민과 같은 임의의 단백질이 첨가되지 않았을 경우, 계면활성제의 존재하에 장기간에 걸친 저장 후 잔류하는 G-CSF 의 백분율은 G-CSF 1 중량부 당 1 중량부를 초과하여 감소하는 경향이 있다. G-CSF 1 중량부 당 계면활성제 1 중량부 이하 조차도 용기에 대한 G-CSF 의 흡착을 억제하기에 충분할 수 있다.
본 발명의 바람직한 G-CSF 함유 제제는 안정화제로서의 단백질이 실질적으로 없다. 시장에 있는 몇몇 제품은 G-CSF 의 화학적 또는 물리적 변화를 억제하기 위하여 안정화제로서 인간 혈청 알부민 또는 정제된 젤라틴과 같은 단백질을 함유한다. 그러나, 안정화제로서의 단백질 첨가는 바이러스의 오염 또는 다른 문제들을 제거하기 위한 매우 복잡한 과정을 포함한다.
본 발명의 G-CSF 함유 제형물은 pH 가 7 이하, 바람직하게는 5 내지 7, 더욱 바람직하게는 6 내지 6.8, 가장 바람직하게는 6.2 내지 6.8 이다. 후에 개시되는 바와 같이, 40 ℃ 에서 2 주 동안 촉진 시험 후 잔류하는 G-CSF 의 백분율은 pH 7 이하에서 안정하다. 상기 관점으로부터, pH 는 바람직하게는 약 7.0 이하이다. 40 ℃ 에서 2 주간 촉친 시험 후 측정된 탈시알릴화된 G-CSF 의 생성비는 pH 4 이하에서 탈시알릴화된 생성물 함량의 빠른 증가를 보였다. 상기 관점으로부터, pH 는 바람직하게는 약 5 이상이다. 주입 제제로서 투여하기 위해, 인간 신체에 덜민감한 중성에 대한 바람직성을 더 고려하면, pH 는 가장 바람직하게는 6.2 내지 6.8 이다.
본 발명의 G-CSF 함유 제제는 희석제, 용해제, 등장제, 부형제, pH-조절제, 진정제, 황-함유 환원제, 산화방지제 등을 포함할 수 있다. 예를 들어 등장제는 폴리에틸렌 글리콜; 및 덱스트란, 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 글루코오스, 프룩토오스, 락토오스, 자일로오스, 만노오스, 말토오스, 수크로오스, 라피노오스와 같은 당을 포함한다. 황-함유 환원제는 N-아세틸시스테인, N-아세틸호모시스테인, 티옥트산, 티오디글리콜, 티오에탄올아민, 티오글리세롤, 티오소르비톨, 티오글리콜산 또는 그의 염, 나트륨 티오술페이트, 글루타티온, 및 술프히드릴-함유 화합물, 예를 들어 탄소원자수 1 내지 7 의 티오알카노산을 포함한다. 산화방지제는 에리토르브산, 디부틸히드록시톨루엔, 부틸히드록시아니솔, α-토코페롤, 토코페롤 아세테이트, L-아스코르브산 또는 그의 염, L-아스코르빌 팔미테이트, L-아스코르빌 스테아레이트, 나트륨 비술피트, 나트륨 술피트, 트리아밀 갈레이트, 프로필 갈레이트 또는 에틸렌디아민 테트라아세트산 디나트륨염 (EDTA) 와 같은 킬레이트화제, 나트륨 피로포스페이트, 나트륨 메타포스페이트를 포함한다. 부형제로서 글리신, 시스테인, 트레오닌, 시스틴, 트립토판, 메티오닌, 리신, 히드록시리신, 히스티딘, 아르기닌과 같은 아미노산을 첨가할 수 있다. 통상 액체 제제에 첨가되는 다른 성분은 또한 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 인산나트륨, 인산칼륨, 중탄산나트륨과 같은 무기염; 및 시트르산나트륨, 시트르산칼륨, 아세트산나트륨과 같은 유기염을 포함한다.
본 발명의 액체 제제에 포함되는 G-CSF 의 양은 처리되는 질병의 특성, 질병의 심각성, 환자의 나이 또는 다른 요소들에 좌우되지만, 통상 1 내지 1000 ㎍/mL, 바람직하게는 10 내지 800 ㎍/mL, 더욱 바람직하게는 50 내지 500 ㎍/mL 이다.
본 발명의 액체 제제는 액체 제제의 당업계에 공지된 수성 완충제, 예를 들어 포스페이트 및/또는 시트레이트 완충제에 상기 화합물을 용해시킴으로서 제조할 수 있다. 바람직한 포스페이트 완충제는 인산일수소나트륨 - 인산이수소나트륨 연속물이고, 바람직한 시트레이트 완충제는 시트르산나트륨 완충제이다.
본 발명의 안정화된 G-CSF 함유 제제는 보통 주입 (피하, 정맥내 또는 근육내 주입) 또는 경피, 점막, 비측 또는 폐로의 투여와 같은 비경구적 경로를 통하여 투여되지만, 경구 투여될 수도 있다.
본 발명의 G-CSF 함유 제제는 보통 밀봉 및 멸균된 플라스틱 또는 유리 용기에 패킹된다. 용기는 정의된 투여 형태, 예를 들어 앰풀, 바이알, 또는 일회용 시린지로서 제공될 수 있거나, 또는 주입을 위한 주머니 또는 병과 같은 큰 투여 형태로서 제공될 수 있다. 바람직하게는, G-CSF 함유 제제는 바이알, 앰풀 또는 예비충진된 시린지에 패킹된 투여 형태로서 제공된다.
본 발명의 G-CSF 함유 제제는 하기 실시예에 나타낸 바와 같이 심지어 40 ℃ 에서 2 주간 촉진 시험 후 또는 25 ℃ 에서 6 개월간 저장 후에도 잔류하는 G-CSF 의 매우 우수한 백분율을 보인다. G-CSF 의 당쇄는 장기간의 저장동안 결합될 수 있는 하나 또는 두개의 말단 시알르산을 갖는다. 본 발명의 G-CSF 함유 제제는 심지어 40 ℃ 에서 2 주간 촉진 시험 후에도 탈시알릴화된 생성물의 저 생산율을 유지하는 것을 발견했다. 또한, 본 발명의 G-CSF 함유 제제는 바이알 또는 시린지와 같은 용기의 형태에 상관없이 용기로의 흡착을 충분히 억제할 수 있고, 40 ℃ 에서 2 주간의 촉진 시험 및 25 ℃ 에서 6 개월간의 저장 후 잔류하는 G-CSF 의 매우 우수한 백분율을 보인다.
하기 실시예는 본 발명을 제한하지 않고 본 발명을 더 예시한다.
실험 과정
250 mg 의 G-CSF, 0.1 g 의 폴리소르베이트 20 및 30 g 의 D-만니톨의 혼합물을 칭량하고, 인산나트륨 완충제를 사용하여 하기 표 1 에 나타낸 다양한 pH 로 조절한 후, 총 1 L 의 양으로 맞추었다.
pH G-CSF 폴리소르베이트 20 만니톨 인산나트륨 총 양
4.0 250 mg 0.1 g 30 g 25 mM 에 해당 1 L
5.0 250 mg 0.1 g 30 g 등량 1 L
5.5 250 mg 0.1 g 30 g 등량 1 L
6.0 250 mg 0.1 g 30 g 등량 1 L
6.5 250 mg 0.1 g 30 g 등량 1 L
7.0 250 mg 0.1 g 30 g 등량 1 L
7.5 250 mg 0.1 g 30 g 등량 1 L
8.0 250 mg 0.1 g 30 g 등량 1 L
각각의 제형된 용액을 무균적으로 제조하고 여과한 후, 각각 1 mL 를 무균적으로 바이알에 패킹하고 밀봉하여 G-CSF 액체 제제를 제조하였다.
따라서 G-CSF 250 ㎍/mL 를 함유하는 무균적으로 제조된 제제를 40 ℃ 에서 2 주간 배양하도록 했다.
각 바이알 안의 G-CSF 의 함량을 하기 방법 1 에 따라 측정했다. 각 바이알안의 탈시알릴화된 G-CSF 의 함량을 하기 방법 2 에 따라 측정했다.
방법 1
순수한 물, 아세토니트릴 및 트리플루오로아세트산을 C4 역상 컬럼 (4.6 mm×250 mm, 300 Å) 상에서 이동상으로서 사용했다. G-CSF 의 함량을 역상 고성능 액체 크로마토그래피로 결정했다. 5 ㎍ 에 해당하는 양의 G-CSF 를 주입하고 G-CSF 를 아세토니트릴 구배로 용출하고 215 nm 의 파장에서 분광학적으로 검출했다.
상기 방법에 의해 측정된 G-CSF 함량을 하기 등식에 따라 40 ℃ 에서 2 주간 촉진 후 잔류하는 백분율 (%) 을 계산하는데 사용했다.
잔류 백분율 (%) = [( 40 ℃ 에서 2 주간 촉진후 G-CSF 의 함량 ) / ( 촉진하지 않은 G-CSF 의 함량 )] ×100
방법 2
탈시알릴화된 G-CSF (당쇄의 모든 시알르산이 결합된) 및 G-CSF (그대로의) 를 양이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피로 측정했다. 즉, 둘 모두를, 이동상으로서 20 mM Tris-HCL 완충제 (pH 7.4) 를 사용한 양이온 교환 컬럼 (TSK 겔 DEAE) 상에서 NaCl 구배 (0 내지 500 mM) 로 용출하고 215 nm 의 파장에서 분광학적으로 검출했다.
상기 방법에 의해 측정된 탈시알릴화된 G-CSF 및 그대로의 G-CSF 의 값을 하기 등식에 따라 40 ℃ 에서 2 주간 촉진 후 탈시알릴화된 G-CSF 의 생성비 (%) 를 계산하는데 사용했다.
탈시알릴화된 G-CSF 의 생성비 (%) = {( 탈시알릴화된 G-CSF ) / [( 탈시알릴화된 G-CSF ) + ( 그대로의 G-CSF )]} ×100
실시예 1: 잔류하는 G-CSF 의 백분율에 있어서 pH 변화의 효과
표 1 에 나타낸 pH 의 변화에 대해 제조된 액체 제제를 40 ℃ 에서 2주간 촉진 시험한 후 잔류하는 G-CSF 의 백분율을 방법 1 의 등식에 따라 계산했다. 결과를 도 1 에 나타냈다.
7 이하의 pH 에서, 잔류하는 G-CSF 의 백분율은 75 % 이상이었다.
실시예 2: 탈시알릴화된 G-CSF 의 생성에 있어서 pH 변화의 효과
표 1 에 나타낸 pH 의 변화에 대해 제조된 액체 제형물을 40 ℃ 에서 2주간 촉진 시험한 후 탈시알릴화된 G-CSF 의 생성율을 방법 2 의 등식에 따라 계산했다. 결과를 도 2 에 나타냈다.
약 5 내지 7 의 pH 범위에서, 탈시알릴화된 G-CSF 의 생성율이 매우 낮았다.
실시예 3: G-CSF 의 용기에 대한 흡착에 있어서 계면활성제의 농도의 효과
250 mg 의 G-CSF 및 5.844 g 의 염화나트륨의 혼합물에 폴리소르베이트 20 을 첨가해서 하기 표 2 에 나타낸 농도가 되도록 하고 혼합물을 인산나트륨 완충제를 사용하여 pH 6.5 로 조절하고 총 양이 1 L 가 되도록 했다.
폴리소르베이트 20 G-CSF 염화나트륨 인산나트륨 완충제 pH 총 양
0 g 250 mg 5.844 g 15 mM 에 해당 6.5 1 L
0.02 g 250 mg 5.844 g 등량 6.5 1 L
0.05 g 250 mg 5.844 g 등량 6.5 1 L
0.1 g 250 mg 5.844 g 등량 6.5 1 L
0.2 g 250 mg 5.844 g 등량 6.5 1 L
0.5 g 250 mg 5.844 g 등량 6.5 1 L
표 2 에 나타낸 각각의 G-CSF 제형된 용액을 무균적으로 제조 및 여과한 후,각각 1 mL 를 무균적으로 바이알에 패킹 (Murase 유리로 만들어진 미처리 백색 바이알 (5 mL)) 하고 패킹 후 및 패킹 후 24 시간 경과 후 즉시 방법 1 에 기재된 역상 고성능 액체 크로마토그래피로 G-CSF 함량을 계산했다.
상기 방법에 의해 측정한 G-CSF 함량을 패킹 후 24 시간 경과 후 하기 등식에 따라 흡착 억제율 (%) 을 계산했다.
흡착 억제율 (%) = [( 패킹 후 24 시간 경과 후 G-CSF 의 함량 ) / ( 패킹 후 즉시 G-CSF 의 함량 )] ×100
결과를 하기 표 3 및 도 3 에 나타냈다.
중량부 *) 흡착 억제율
0 94.5 %
0.08 95.0 %
0.2 97.5 %
0.4 97.0 %
0.8 100 %
2 99.5 %
*) 중량부: G-CSF 1 중량부 당 폴리소르베이트 20 의 중량부
흡착억제율은 심지어 폴리소르베이트 농도가 G-CSF 1 중량부 당 1 중량부 이하일 때도 충분했다.
실시예 4: 바이알 또는 시린지에 패킹된 제제의 안정성
총 양이 1 L 이고 인산나트륨 완충제를 사용하여 pH 를 6.5 로 조절한 250 mg 의 G-CSF, 0.1 g 의 폴리소르베이트 20 및 7 g 의 염화나트륨을 포함하는 제형된 용액을 무균적으로 제조 및 여과한 후, 각각 1 mL 를 무균적으로 바이알 (상기 참조) 또는 시린지 (Becton Dickinson Co., Ltd. 에 의해 제조된 1 mL 의 긴Hypac SFC) 에 패킹 및 밀봉하여 하기 표 4 에 나타난 G-CSF 액체 제제를 제조했다.
G-CSF 폴리소르베이트 20 염화나트륨 인산나트륨 완충제 pH 총 양
250 mg 0.1 g 7.0 g 15 mM 6.5 1 L
이에따라 무균적으로 제조된 250 ㎍/mL 의 G-CSF 를 함유하는 제제를 40 ℃ 에서 2 주간 또는 25 ℃ 에서 6 개월간 배양하도록 했다.
각 바이알 또는 시린지의 G-CSF 의 함량을 방법 1 에 따라 측정하고, 40 ℃ 에서 2 주간의 촉진 후 잔류하는 G-CSF 의 백분율 및 25 ℃ 에서 6 개월간의 저장 후 잔류하는 G-CSF 의 백분율을 방법 1 의 등식에 따라 계산했다.
결과를 하기 표 5 에 나타냈다.
용기형태 잔류 백분율
40 ℃에서 2 주간의 촉진 25 ℃ 에서 6 개월간의 저장
바이알 89.6 % 98.4 %
시린지 90.7 % 97.9 %
바이알 및 시린지 모두에서, 40 ℃ 에서 2 주간의 촉진 후 75 % 이상의 잔류 백분율 및 25 ℃ 에서 6 개월간의 저장 후 95 % 이상의 잔류 백분율에 의해 나타난바와 같이, 본 발명의 G-CSF 제제는 탁월한 안정성을 보였다.
G-CSF 1 중량부 당 1 중량부 이하와 같은 매우 소량의 계면활성제를 함유하는 본 발명의 G-CSF 함유 제제는, 제제에 소량으로 존재하는 G-CSF 의 온도, 습도, 산소, 자외선 등과 같은 외부 요소에 의해 야기되는 응집, 중합, 산화 또는 용기벽에 대한 흡착으로 인한 활성 성분의 손실 또는 활성의 감소에 관한 문제를 효과적으로 해결할 수 있다. 그러므로, 본 발명은 복잡성 및 제조 과정에서의 비용을 감소시키고 심지어 장기간에 걸친 저장동안에도 안정한 액체 제제를 제공한다.

Claims (12)

  1. 과립구 콜로니-자극 인자 1 중량부 당 1 중량부 이하의 약학적으로 허용가능한 하나 이상의비이온성계면활성제, 및당쇄를 가지는과립구 콜로니-자극 인자를 함유하고,pH 가 5 내지 7인, 안정한 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제로서,안정화제로서의 단백질이 실질적으로 없는 제제.
  2. 제 1 항에 있어서, 계면활성제를 과립구 콜로니-자극 인자 1 중량부 당 0.2 내지 1 중량부 범위의 양으로 함유하는 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제.
  3. 제 2 항에 있어서, 계면활성제를 과립구 콜로니-자극 인자의 1 중량부 당 0.2 내지 0.8 중량부 범위의 양으로 함유하는 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제.
  4. 제 2 항에 있어서, 계면활성제를 과립구 콜로니-자극 인자 1 중량부 당 0.4 내지 0.8 중량부 범위의 양으로 함유하는 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제.
  5. 제 2 항에 있어서, 계면활성제를 과립구 콜로니-자극 인자 1 중량부 당 0.4 중량부 또는 0.8 중량부의 양으로 함유하는 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제.
  6. 삭제
  7. 제 1 항에 있어서, 계면활성제가 소르비탄 지방산 에스테르, 글리세린 지방산 에스테르, 폴리글리세린 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 글리세린 지방산 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 지방산 에스테르, 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르, 폴리옥시에틸렌 폴리옥시프로필렌 알킬 에테르, 폴리옥시에틸렌 알킬 페닐 에테르, 폴리옥시에틸렌 경화 피마자유, 폴리옥시에틸렌 밀랍 유도체, 폴리옥시에틸렌 라놀린 유도체, 폴리옥시에틸렌 지방산 아미드와 같은비이온성 계면활성제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 구성원인 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제.
  8. 제 1 항에 있어서, 계면활성제가 폴리소르베이트 20 및 폴리소르베이트 80 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르인 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제.
  9. 삭제
  10. 제 1 항에 있어서, pH 가 6 내지 6.8 인 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제.
  11. 제 1 항에 있어서, pH 가 6.2 내지 6.8 인 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제.
  12. 제 1 항에 있어서, 바이알, 앰풀 또는 예비충진된 시린지에 패킹되는 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제.
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