KR100274101B1 - 9-시스 레틴산을 함유하는 약제학적 조성물 - Google Patents

Abstract

9-시스 레틴산, 이의 염 및 에스테르는 악성 종양 및 전악성종양성 상피 병변, 피부 광손상, 피지 분비 증가에 의해 유발된 질환, 및 건선의 치료에 사용될 수 있다.

Description

9-시스 레틴산을 함유하는 약제학적 조성물

본 발명은 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르를 함유하는 신규한 약제학적 조성물에 관한 것이다.

또한, 본 발명은 의약용 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르에 관한 것이다.

다른 면에서, 본 발명은 하기에 기술하는 바와 같은 의학적 증상에 대한 의약 제조에서 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르의 용도에 관한 것이다.

본 발명에 따라서, 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르가 상피 병변에 대하여 레티노이드와 관련된 제한된 독성 또는 다른 부작용을 나타내는 항과형성, 항이형성, 항신생물성 종양의 예방 및 치료 특성을 가짐이 밝혀졌다. 상기 특성을 포함하는 병리학적 상태의 치료는 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르를 전신 또는 국소 투여함으로써 효과적으로 치료될 수 있다.

본 발명의 한 양태에 있어서, 전암성 상피 병변(premalignant epithelial lesion), 즉 암전구성 병변(precancerous lesion)을 갖는 포유동물에 투여된 경우, 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르는 병변의 진행을 지연시킨다. 이 화합물은 이들 전암성 병변 또는 암전구성 병변의 세포 성장 및 분화를 억제하고 세포 회복을 유발한다. 이경우, 이들 병변의 상피 암으로의 진행이 방지된다.

이러한 병변이 암으로 진행되는 것을 지연시키기 위해 전암성 또는 암전구성 상피 병변을 치료할 경우, 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르를 이들 병변의 진행을 지연시키기 위한 유효량으로 이러한 병변으로 고통받는 환자에게 경구 또는 국소 투여한다. 양은 병변의 양 및 크기와 환자의 요구도에 따른다.

9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르는 특히 흉부, 피부, 결장, 방광, 식도, 위, 후두, 폐 또는 구강의 상피 자체의 전암성 병변 또는 암전구성 병변을 치료하는데 효과적이다. 바람직한 양태에 있어서, 이들 화합물은 각종 백반, 특히 입 및 혀의 백반과 같은 전암성 병변 또는 암전구성 병변 뿐만 아니라 흉부의 전암성 병변 또는 암전구성 병변을 치료하는데 사용될 수 있다.

본 발명의 또 다른 양태에 있어서, 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르는 상피 기원의 암 또는 종양을 치료하는데 사용되어 이들 종양의 진행을 지연시킬 수 있다. 이들 화합물의 항암 또는 항종양 특성에 따라서, 이 화합물로 종양을 치료하면 이들 종양의 크기와 수 모두가 경감된다. 종양치료제로서 이 화합물을 사용할 경우, 이 화합물은 특히 흉부, 피부, 결장, 방광, 식도, 위, 후두, 폐 또는 입 종양의 진행을 지연 시키는데 효과적이다. 9-시스 레틴산은 전암성 병변 또는 암전구성 병변을 갖는 환자를 치료하는 것과 관련하여 상기 기술된 방식으로 환자에게 투여될 수 있다.

상술된 바와 같은 치료를 하기 위해서는, 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르를 9-시스 레틴산 및 이 화합물과 혼용성인 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는 조성물로서 전신 또는 국소 투여한다. 이러한 조성물을 제조할 경우, 모든 통상의 약제학적으로 허용되는 담체를 사용할 수 있다. 이 약물을 경구 투여할 경우, 일반적으로 규칙적인 간격, 편리하게는 식사 시간 또는 하루 한번 투여한다. 이 화합물은 국소 및 경구 투여되는 경우 비교적 무-독성임이 증명되었다.

9-시스 레틴산에 의해 효과적으로 치료되는 전암성 병변 및 암전구성 상피 병변 또는 종양을 포함하는 상태의 예로는 화학작용성 각화증, 비소 각화증, 색소성건피증, 보웬(Bowen)의 질병, 백반, 점막(예: 입, 혀, 인두 및 후두)의 이형성, 형성 장애 및 유두종, 이형성 및 형성 장애와 같은 기관지 점막의 암전구성 변화(특히 심한 흡연자 및 석면 및/또는 우라늄을 사용하여 작업하는 사람에게 빈번함), 자궁 경관의 형성 장애 및 백반, 외음 발육이상, 방광의 암전구성 변화(예: 방광의 이형성 및 형성장애, 유두종) 뿐만 아니라 장관의 폴립(polyp)이 있다. 9-시스 레틴산에 의해 효과적으로 치료되는 상피 기원의 종양 또는 반-악성 종양 또는 악성 종양 자체의 예로는 흉부 종양, 피부 종양(예: 기저 세포 암), 방광 종양(예: 표재성 방광 암), 결장 종양, 식도 종양, 위 종양, 후두 종양 및 폐 종양이 있다.

상피 자체의 암전구성 병변 및 악성 종양의 치료는 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르 단독 또는 수술, 방사선 치료요법, 호르몬 치료요법, 또는 표준 화학요법(세포증식억제제 및 세포 독성제) 또는 생물학적 반응 조절제(인터페론, 인터류킨 또는 다른 사이토킨)를 사용한 치료와 같은 다른 방법과 병행하여 수행할 수 있다.

또한, 본 발명에 따라서, 환장의 피부에 국소 적용된 9-시스 레틴산 및 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 이의 가수분해성 에스테르는 광 손상과 관련된 상태를 반전시킨다는 것이 밝혀졌다. 그러므로, 햇빛에 노출되어 손상된 환자의 피부에 9-시스 레틴산의 화합물을 국소 적용함에 의해, 주름, 탄력섬유 분해 및 빠른 노화의 작용을 반전시켜 피부의 외관을 개선시킬 수 있다.

9-시스 레틴산 및 약제학적으로 허용되는 이의 염과 이의 가수분해성 에스테르의 국소 투여를 통해, 피부 손상의 회복을 촉진시켜 피부가 더욱 부드럽고 젊어지도록 한다.

본 발명에 따라서, 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르를 환자에게 경구 또는 국소 투여하는 경우, 피지 분비가 감소된다는 것이 또한 밝혀졌다. 따라서, 피지 분비 및 여드름 병변을 감소시키는 작용을 하는 당해 화합물의 투여는 여드름, 지성 모발 및 지성 두피와 같은 질환을 치료하는 수단을 제공한다. 이러한 방법에 있어서, 당해 화합물은 여드름 또는 지성 두피 및 지성 모발과 같은 피지 과분비에 의해 유발되는 질환의 예방 또는 이들의 치료에 사용될 수 있다.

피지 생성 및/또는 분비의 억제는 여드름과 같은 질환의 치료 및/또는 예방에 효과적이다는 것이 공지되었다. 피지 분비가 증가하면 비듬, 지성 피부, 지성 모발, 화이트헤드(whitechead) 및 블랙헤드(blavkhead)를 포함하는 지루와 같은 상기 피부학적 상태를 유발할 수 있다.

본 발명에 따라서, 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르의 국소 및 경구 투여는 염증성 및 비-염증성과 같은 모든 형태의 여드름을 치료하는데 효과적이다.

본 발명의 다른 측면에 있어서, 건선으로 고통받는 환자에게 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르를 경구 또는 국소 투여할 경우 건선을 치료하는데 효과적이라는 것이 밝혀졌다. 이러한 투여는 피부에 있어 건선 질환의 영향을 감소시킨다.

약제학적으로 허용되는 염은 약제학적으로 허용되는 제제중에 사람 환자에게 투여가능하고 9-시스 레틴산에 대해 화학적으로 허용되는 모든 염을 포함한다. 이러한 통상의 약제학적으로 허용되는 모든 염을 사용할 수 있다. 사용될 수 있는 통상적인 염에는 예로써, 나트륨 또는 칼륨과 같은 알칼리 금속 염, 칼슘 또는 마그네슘과 같은 알칼리 토금속 염 및 암모늄 또는 알칼리 암모늄 염들을 포함하는 염기 염들이 포함된다.

본 발명에 따라서, 9-시스 레틴산은 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르 형태로 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물 및 방법에 있어서는 특정의 약제학적으로 허용되는 가수분해성 에스테르가 사용될 수 있다. 이들 에스테르중에는 벤질(OBzl) 또는 저급 알킬, 할로, 니트로에 의해 치환된 벤질; 또는 저급 알킬(예: t-부틸); 또는 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸; 또는 9-플루오레닐메틸과 같은 방향족 에스테르가 있다.

본 발명에 따라서, 9-시스 레틴산 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르는 약제학적으로 허용되는 경구 또는 국소용 조성물로 제공될 수 있다. 이러한 본 발명의 약제학적 조성물은 9-시스 레틴산 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염 및 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르를 혼용성인 약제학적으로 허용되는 담체 물질과 함께 함유한다. 모든 통상적인 담체 물질이 사용될 수 있다. 이 담체 물질은 경구 투여하기에 적합한 유기 또는 무기 불활성 담체 물질일 수 있다. 적합한 담체는 물, 젤라틴, 아라비아 고무, 락토오즈, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 탈크, 식물성 오일, 폴리알킬렌-글리콜, 황색와셀린 등이 있다. 또한, 약제학적 제제는 다른 약제학적 활성제를 함유할 수 있다. 풍미제, 방부제, 안정화제, 유화제, 완충제 등과 같은 추가의 첨가제를 약제학적 조제의 허용되는 실행 정도에 따라 가할 수 있다.

약제학적 제제는 (a) 정제, 캅셀제, 환제, 산제, 입제 등과 같은 경구 투여용 고체 형태; 및 (b) 액제, 현탁제, 연고제, 크림제, 겔제, 미분된 산제, 에어로졸 등과 같은 국소투여용 제제를 포함하는 통상의 특정 형태로도 제조될 수 있다. 약제학적 제제는 멸균될 수 있고/있거나 방부제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 삼투압을 변화시키기 위한 염 및/또는 완충제와 같은 보조제를 함유할 수 있다.

피부에 국소 투여하기 위해서, 상술한 화합물은 바람직하게는 연고제, 팅크제, 크림제, 겔제, 액제, 로숀제, 분무제, 현탁제, 샴푸, 모발 비누, 향료 등으로 제조된다. 사실상, 두피 또는 피부에 적용하기 위해 사용되는 통상의 조성물을 본 발명에 따라서 사용할 수 있다. 본 발명의 제제를 함유하는 조성물을 적용하는 바람직한 방법중에는 겔, 로숀 및 크림의 형태가 있다. 피부에 국소 투여하기 위한 약제학적 제제는 상술한 활성 성분을 이러한 제제에 통상적으로 사용되는 무-독성의, 치료학적으로 불활성인 고체 또는 액체 담체와 혼합시킴으로써 제조될 수 있다. 이들 제제는 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 활성 성분을 약 0.01중량% 이상 함유해야 한다. 활성 성분인 9-시스 레틴산이 비교적 무-독성이고 무-자극성이기 때문에, 국소용 조성물에서는 0.15% 초과한 양으로 사용될 수 있다. 이들 제제는 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 활성 성분을 약 0.01 내지 0.15중량% 함유하는 것이 바람직하다. 이들 제제는 피부에 하루에 1회 또는 2회 적용하는 것이 또한 바람직하다. 이들 제제는 환자의 요구도에 따라 적용할 수 있다. 본 발명을 수행할 경우, 활성 성분을 수용액 또는 에틸 알콜과 같은 알콜 용액으로 적용시킬수 있다.

상기 기술한 국소용 제제를 제조할 경우, 국소용 제제의 약제학적 조제 분야에서 통상적인 방부제, 증점제, 향료 등과 같은 첨가제를 사용할 수 있다. 또한, 통상의 산화방지제 또는 통상의 산화방지제의 혼합물을 상술한 활성제를 함유하는 국소 제제에 혼입할 수 있다. 이들 제제중에 사용될 수 있는 통상의 산화방지제 에는 N-메틸-α-토코페롤아민, 토코페롤, 부틸화 하이드록시아니솔, 부틸하 하이드록시톨루엔, 에톡시퀸 등이 포함된다. 본 발명에 따라서 사용되는, 활성 성분을 함유하는 크림계 약제학적 제형은 지방산 알콜, 반-고체 석유 탄화수소, 1,2-에틸렌글리콜 및 유화제를 함유하는 수성 유액으로 구성된다.

본 발명에 따르는 활성제를 함유하는 연고 제형은 반-고체 석유 탄화수소와 활성 물질의 용매 분산액의 혼합물을 포함한다. 본 발명에 사용하기 위한 활성 성분을 함유하는 크림 조성물은 바람직하게는 습윤제, 점도 안정화제 및 물의 수상, 지방산 알콜, 반-고체 석유 탄화수소 및 유화제의 오일상 및 수성 안정화제-완충 용액중에 분산된 활성 성분을 함유하는 상으로부터 형성된 유제를 포함한다. 안정화제를 국소용 제제에 가할수 있다. 통상적인 특정 안정화제를 본 발명에 따라서 사용할 수 있다. 오일 상에 있어서, 지방산 알콜 성분은 안정화제로서 작용한다. 이들 지방산 알콜 성분은 탄소수 약 14 이상인 포화된 장쇄 지방산의 환원으로부터 유도된다. 또한, 모발을 위한 국소용 제제에 일반적으로 사용되는 통상의 향료 및 로숀을 본 발명에 따라서 사용할 수 있다. 또한, 경우에 따라, 본 발명의 국소용 제제중에 통상의 유화제를 사용할 수 있다.

바람직한 경구 투여 제형은 정제, 경질 또는 연질 젤라틴 캅셀제, 메틸셀룰로오즈 또는 소화관에서 쉽게 용해되는 다른 적합한 물질의 캅셀제를 포함한다. 본 발명에 따라 예상되는 경구 투여량은 의사의 처방에 의해 결정된 개개 환자의 요구도에 따라 변화된다. 그런, 일반적으로 일일 투여량은 환자의 체중 1kg당 약 0.1mg 내지 약 3mg, 바람직하게는 약 0.025mg 내지 약 1.5mg이 사용된다. 이 투여량은 환자의 요구도에 따라서 의사에 의해 결정된 투여량 계획에 따라 투여될 수 있다.

본 명세서에 열거된 치료학적 활성 물질을 경구 단위 투여 제형에 장내 투여를 위한 바람직한 양으로 혼입시키는 것도 또한 본 발명의 범위 내이다. 그러나, 각 투여 제형이 치료학적으로 불활성인 적합한 충전제 및 희석제와 함께 본 발명의 활성 물질을 약 1mg 내지 약 50mg 함유하는 방식으로 제제를 제형화하는 것이 바람직하다. 특히, 이러한 투여량을 연질 젤라틴 캅셀제 및 정제에 혼힙시키는 것이 바람직하다.

본 발명에 따르는 용도에 있어서 9-시스 레틴산의 효능은 하기 기술하는 바와 같은 시험 모델에서 입증될 수 있다.

A. 사람 종양 세포주 및 실험용 종양에 있어 9-시스 레틴산의 종양 억제 효과

사람의 변형된 상피 세포주의 성장 및 증식에 대한 억제 효과.

9-시스 레틴산을 사람 종양 세포주 SCC 15(혀의 인상 세포 암) 및 A 431(외음부 인상 세포 암)에 대해 시험한다. 사립체성(mitochondrial) 효소 활성에 의해 MTT 염료[3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움-브로마이드]를 감소시키는 생존 세포의 능력에 의해 증식을 측정한다(참조: Mosmann T. Rapid colorimetric assay for vellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxic assays. J. Immunol. Methods 65: 55-63, 1983).

결과

사람 인상 세포 암 SCC 15(혀)

-배양 7일후 대조군의 생존 세포(%)

대조군(DMSO) 100 ± 11.4

9-시스 레틴산(3·10^-7M) 54 ± 7.5 p 〈 0.0025

인터페론 α(IFNα)(1000U/ml) 60 ± 8.3 p 〈 0.005

9-시스 레틴산 + IFNα 20 ± 2.5 p 〈 0.001

3 ×10^-7M의 농도의 9-시스 레틴산은 증식을 46%까지 억제하고, IFNα와 혼용시에는 심지어 80%까지 억제한다.

사람 인상 세포 암 A 431(외음부)

-배양 7일후 대조군의 생존 세포(%)

대조군(DMSO) 100 ± 8.7

9-시스 레틴산(3·10^-7M) 36 ± 1.8 p 〈 0.001

IFNα(1000U/ml) 42 ± 0.9 p 〈 0.0005

9-시스 레틴산 + IFNα 23 ± 1.4 p 〈 0.001

3 ×10^-7M의 농도의 9-시스 레틴산은 증식을 64%까지 억제하고, IFNα와 혼용시에는 심지어 77%까지 억제한다.

9-시스 레틴산은 2개의 시험된 사람 상피 암 세포주에 있어 현저한 성장-억제 효과를 갖는다.

다른 변형된 세포주에 대한 9-시스 레틴산의 효과에 대해 9-시스 레틴산을 추가로 조사한다. 증식 검정은 바이러스를 함유하는 세포주상에서 수행한다. 사람 유두종 바이러스 16(HPV 16)을 포함하는 변형된 케라티노사이트 세포주인 SKv-11을 4개의 복제물을 사용하는 2개 시험으로 9-시스 레틴산에 의한 증식의 억제에 관해 시험한다. 5·10⁴세포/웰을 이글스 배지(Eagle's medium)에 도말하여 2일 동안 배양한다. 10^-6M 농도의 레티노이드 및 이에 상응하는 DMSO 대조군을 배양하기 전 및 후에 혈구계로 세포를 직접 계수한다. 성장 억제는 대조군과 비교하여 %로 나타낸다.

결과: 10^-6M 농도 9-시스 레틴산은 사람의 변형된 케라토사이트 SKv-11의 증식을 32.4%(p 〈 0.001)까지 억제한다.

B. 종양 세포 유발된 맥관형성에 대한 9-시스 레틴산의 효과

현재 종양의 무제한적 성장이 맥관형성에 의존하는 세포가 확립되어 있다. 종양 세포집단의 증가는 종양을 집중시키는 새로운 모세혈관의 증가가 선행되어야 한다. 따라서, 맥관형성을 억제함으로써, 종양 성장이 억제된다[참조: Folkman J. How is vlood vessel growth regulated in normal and neoplastic tissue? G.H.A. Clowed Memorial Award Lecture. Cancer Res. 46: 467-473, 1986; Sidky YA and Borden EC. Inhibition of angiogenenesis by interferons: Effects on tumor- and lymphocyte-induced vascular responses. Cancer Res. 47: 5155-5161, 1987].

맥관형성 검정은 상술한 바와 같다[참조: Sidky YA and Auerbach R.Lymphocyte induced angiogenesis: A quantitative and sensitive assay of the graft-host reaction, J. exp Med 141: 1084-1100, 1975, Majewski S et al. Inhibition of tumour-induced angiogenesis by systemically administered protamine sulphate. Int J Cancer 33: 831-833, 1984]. 9-시스 레틴산을 시험할 경우 2개의 검정을 사용한다. 제1 검정에서는, 레티노이드를 마우스에 주사하기 전에 세포주에 시험관내에서 가한다. 제2 검정에서는, 종양 세포주를 피하 주사하기 전에 레티노이드를 마우스 복강내로 생체내 주사한다.

방법: 2개의 종양발생성 세포주의 세포인, SKv-e2 및 HeLa와 비-종양발생성 세포주의 세포, SKv-el을 10^-7M 농도의 9-시스 레틴산과 함께 48시간 동안 시험관내 에서 예비 배양시킨 다음, 세포를 계수하고 TC 199 배지내에서 세척한다. 세포 농도를 배지 0.1ml당 2·10⁵생존 세포로 조정하고, X-레이 조사되고 레티노이드-비처리된 Balc/c 마우스의 피하내로 경피 주사한다. 대조군에 DMSO와 함께 예비 배양 시킨 종양 세포를 주사한다. 맥관형성 효과를 상기 참조된 방법에 따라서 측정한다.

결과

a) Balc/c 마우스에서 세포주 SKv-e2(종양 발생성), HeLa(종양 발생성) 및 SKv-el(비-종양발생성)의 맥관형성 능력에 있어 9-시스 레틴산에 의한 시험관내 예비배양 효과

혈관의 평균 수

SKv-e2 HeLa SKv-el

대조균 34.7 ± 3.7 32.5 ± 2.7 26.3 ± 1.5

9-시스 레틴산 23.6 ± 4.2 23.8 ± 2.9 25.6 ± 2.2

p 〈 0.001 P 〈 0.001 P 〈 0.1

2개의 종양발생성 세포주에 의해 유도된 새로운 혈관 형성에 대한 9-시스 레틴산의 억제 효과와는 대조적으로, 9-시스 레틴산은 비-종양발생성 세포주(subline)에 의해 유도되는 맥관형성을 억제시키지 않는다.

b) 생체 내에서 9-시스 레틴산에 의한 Balc/c 마우스의 예비처리에 의한 세포-유도된 맥관형성 효과의 억제

혈관의 평균수

대조균 9-시스 레틴산

HeLa(종양발생성) 28.3±0.8 16.3±1.8 p 〈 0.001

SKv-12(종양발생성) 30.3±2.6 15.3±1.0 p 〈 0.001

SKv-e2(종양발생성) 31.3±2.7 19.7±0.6 p 〈 0.001

SKv-el(비-종양발생성) 19.7±3.7 24.3±5.6 p 〉 0.1

3개의 종양발생성 세포주의 세포를 사용하여 주사한 경우 9-시스 레틴산으로 처리된 마우스는 새로운 혈관의 형성을 억제한다. 비-종양발생성 세포주를 사용하는 경우 맥관형성 억제 효과가 없다.

9-시스 레틴산은 종양 세포주에 의해 유도된 새로운 혈관의 형성을 시험관내 및 생체내에서 억제한다. 신혈관생성은 종양 성장을 위한 필요 조건이기 때문에, 9-시스 레틴산은 증식 억제 및/또는 분화 유도를 통한 직접적인 종양 억제 효과 뿐만 아니라 맥관형성 억제 효과에 의하여 종양 성장을 간접적으로 억제하는 작용을 한다.

C. 마우스에 있어서, 화학적으로-유발된 피부 유두종에 대한 9-시스 레틴산의 효과

피부, 호흡기, 소화관 및 뇨관 뿐만 아니라 유선의 화학적으로-유발된 종양의 예방 및 치료 효과는 익히 입증되었다[참조: Bollag W. and Hartmann HR. Prevention and therapy of cancer with retinoids in animal and man. Cancer Surverys 2: 293-314, 1983]. 9-시스 레틴산은 마우스의 설정된 피부 유두종에 대해 현저한 치료 효과가 있어 이들 상피 종양을 퇴화시킨다. 이 유두종 시험은 레티노이드의 종양 억제 스크리닝에 대한 표준 시험이다.

결과

투여량 마우스 1 마리 당 유두종 직경의

mg/kg 복강내 투여 평균 합계의 변화(%)

대조균 +23.5 ± 2.1

9-시스 레틴산

400 -43.3 ± 2.4 p 〈 0.0005

200 -24.8 ± 4.5 p 〈 0.0005

9-시스 레틴산은 마우스의 설정된 화학적으로-유발된 피부 유두종에 대해 실질적인 치료학적 종양 억제 효과를 가져서 이러한 상피 종양을 퇴화시킨다.

D. 건선 억제 활성에 대한 9-시스 레틴산의 효과

건선 억제 활성은 단락 C에 인용된 시험 모델에 있어서 마우스에서 화학적으로-유발된 피부 유두종을 퇴화시키는 능력에 의해 측정할 수 있다. 유두종 시험은 레티노이드의 건선 억제 효과에 대한 표준 시험이다[참조: Teelmann K, Bollag W. The relevance of the mouse papilloma test as a predictor of retinoid activity in human psoriasis. Dermatologica 180: 30-35, 1990].

단락 C에 주어진 데이타로부터 알 수 있는 바와 같이, 9-시스 레틴산은 사람에 있어 건선 억제 활성을 예측하기 위한 상기한 모델에서 현저한 치료학적 효과를 갖는다.

E. 여드름 및 피지 억제에 있어 9-시스 레틴산의 활성

여드름의 병인학은 이의 병리학에 있어서 중요한 역할을 하는 과량의 피지 분비, 과각화(hyperkeratinization), 및 세균성 전이증식에 따른 다인자성이다.

하기 2개의 모델을 여드름 억제 활성에 대한 척도로서 사용한다.

1. 인체 피지세포 증식 억제 검정은 사람에 있어서 여드름에 대해 임상적으로 시험된 화합물과 강하게 관련이 있음을 보여준다[참조: Doran T.I. and Shapiro S.S. Retinoid effects on sebocyte proliferation, In "Retinoids, Part B. Cell Differentiation and Clinical Applications". Methods in Enzymology, Volume 190, Ed. L. Packer, Academic Press, pp. 334-338, 1990)].

2. 리노(rhino) 마우스 각화 억제 검정도 또한 항-여드름 활성의 척도로서 사용되어 왔다[참조: Mezick J.A., Bhatia M.C., and Capetola R.J. Topical and systemic effects of retinoids on horn-filled utriculus size in the rhino mouse. A model to quantify "andtikeratinizing" effects of retinoids. J Invest Dermatol 83, 110-113, 1984. Mezick J.A., Bhatia M.C., Shea L.M., Thorne E.G., and Capetola R.J. Anti-acne activity of retinoids in the Rhino-mouse. In: Models of Dermatology, Maibach and Lowe(eds), Karger(Basel), volume 2, pp. 59-63, 1985].

1. 피지세포 증식

I. 방법

피지 세포를 미용 수술 동안 제거된 안면 피부에서 기원한 성인 인체 피지선 으로부터 분리하여 마우스 3T3 섬유아세포의 층에서 배양한다(참조: Doran T.I.,Baff R., Jacobs P., and Pacia E. Characterization of human sebaceous cells in vitro. J Invest Dermatol 96, 341-348, 1991]. 세포를 시험 화합물이 없는 배지에 도말한 다음, 주어진 시험 화합물을 신선한 배지에서 처음 도말한지 24 내지 48시간 후 도말한다. 시험 화합물을 함유하는 신선한 배지에서 48시간 마다 배양물을 수득한다. 수거하는 날에 배양물을 PBS중 0.03% EDTA로 세정하여 3T3 섬유아세포만 제거한 다음, 0.05% 트립신/0.03% EDTA 중에서 배양한다. 세포를 현탁시키고, 격렬하게 혼합하여 단일 세포 현탁액을 제조하고 혈구계로 계수한다. 결과는 희석액으로만 처리된 대조 배양물과 비교하여 피지세포의 증식을 50%까지 억제시키는데 필요한 화합물의 양(IC₅₀)dmf μM로 측정한다.

Ⅱ. 결과

9-시스 레틴산은 시험관 내에서 0.1μM의 IC₅₀의 사람 피지세포의 증식을 억제시키는 활성을 갖는다.

2. 리노 마우스 소실(Utricle) 감소, 각화 억제 검정

I. 방법

생후 6 내지 8주된 암컷 리노 마우스(hr^hrhr^hr)를 잭슨(Jackson) 실험실로부터 수득한다. 1 그룹에 여섯 마리씩 사용한다. 화합물은 아세톤 중에 이들을 용해시켜 제조한다. 이 시험 화합물을 마이크로피펫으로 마우스의 등에 적용한다. 시험물질 100μ1를 5일 동안 연속 3주에 걸쳐 매일 투여한다. 마우스를 CO₂흡입에 의해 희생시킨다. 등으로부터 피부판을 잘라내어 조직학 시험을 위해 보존시킨다. 진피로부터 분리된 표피를 와이어 메쉬 조직학 카세트(wire mesh histological cassettes)에 놓고 70%, 80%, 95%, 100% 에탄올, 및 크실렌 중에 각 단계에서 2시간 동안 탈수시킨다. 피부 샘플을 크실렌 욕으로부터 제거하고 유리 현미경 슬라이드에 올려놓는다. 울티메쥐(Ultimage) 시스템을 사용하는 이미지 분석을 사용하여 소실의 평균 면적을 측정한다. 마우스 1마리당 대략 150 소실이 분석된다.

Ⅱ. 결과

리노 마우스에 3주일 동안 국소 적용한 후 리노 마우스 소실 크기를 감소시키는 9-시스 레틴산의 효과

화합물 투여량 소실 크기 변화 %

(용액 %) (mg/kg) (μ²)

(평균 ± SD)

9-시스 0.001% 0.04 2593 ± 559 -52

레틴산 0.01% 0.4 1425 ± 267 -74

0.1% 4.0 1210 ± 76 -78

대조군 비히클 5420 ± 42 ---

모든 p 값은 화합물-처리된 그룹 대 비히클-처리된 그룹의 비교에 대해 〈 0.001이다. 스튜던트(Student)의 t-시험은 통계적 측정을 위한 수행한다.

9-시스 레틴산은 이러한 각화 억제 및 여드름 억제 검정에 있어 활성이 있다.

F. 9-시스 레틴산을 사용한 심상성 여드름 환자의 치료에 대한 임상적 데이타

연령이 15 내지 48세, 평균 연령은 27세인 2명의 남자 및 6명의 여자로 이루어진 8명의 환자를 1 내지 3개월 동안 9-시스 레틴산으로 치료한다. 8명중 2명은 1개월, 2명은 2개월 및 4명은 3개월 동안 치료한다. 환자 5명은 면포반, 7명은 구진, 6명은 농포가 생기고, 1명은 소결절이 생긴다. 환자 7명은 얼굴에만 병변이 생기고, 1명은 얼굴 및 등에 병변이 생긴다. 9-시스 레틴산을 다음 제형으로 수득한다: 에탄올-프로필렌글리콜(50/50)의 용액중 활성 화합물 0.01%. 이 용액을 여드름 병변이 존재하는 부위에 하루 1번 저녁때 적용한다.

병변(면포반, 구진, 농포 및 소결절)을 기선에서 및 1개월, 2개월 및 3개월 치료후 별도로 계수한다. 기선 계수로부터 총 병변 계수의 감소률을 각 환자에 대해 측정하고 평균치를 계산한다. 결과는 다음과 같다: 1개월 후 총 병변 계수(환자 8명)는 평균 48% 감소하고, 2개월(환자 6명)후 72% 감소하며, 3개월(환자 4명)후 77%로 감소한다. 피부에 자극에 대해 특히 주의한다. 환자 2명에 있어서, 치료 초기에 약간의 홍반 및 약간의 낙설(scaling)이 관찰되는데, 이것은 일시적이고 치료를 계속함에도 불구하고 1 내지 2주일 내에 없어진다. 환자들은 이러한 부작용을 거의 인지하지 못한다.

9-시스 레틴산으로 여드름을 치료하면 모든-트랜스 또는 13-시스 레틴산으로 달성된 것과 비교하여 매우 우수한 결과가 수득된다. 성공적인 국소 치료요법을 위해 요구되는 약물 농도는 0.01%이고, 동일한 치료 결과를 성취하기 위해 필요한 모든-트랜스 레틴산 또는 13-시스 레틴산의 0.05% 농도보다 현저하게 낮다. 또한, 9-시스 레틴산의 치료학적 유효 농도는 모든-트랜스 레틴산 또는 13-시스 레틴산보다 실질적으로 훨씬 적은 부작용을 유발시킨다.

G. 광 손상에 있어서 9-시스 레틴산의 활성

I. 방법

털이 없는 마우스에 UVB를 조사하고, 그 후에, 피부 손상을 회복시키기 위해 9-시스 레틴산을 국소 처리한다.

조사되고 처리된 부분의 피부를 회복 정도에 대해 조직학적으로 평가한다. 표피부터 압착된 탄력소 층까지 확장하여 정상화된 진피의 외관에 의해 회복을 정의한다. 회복 정도는 이들 부위의 너비에 의해 반영된다.

방법은 문헌[참조: Bryce G. F., Bogdan N. J., Brow C. C. Retinoic acids promote the repair of the dermal damage and the effacement of wrinkles in the UVB-irradiated hairless mouse. J. Invest. Dermatol. 91, 175-180, 1988]에 기술되어 있다.

Ⅱ. 결과

치료 회복 주름

면적(㎟ ×10^-3) 스케일(0 내지 4)

(ED₅₀) (ED₅₀)

대조군 0.21 ± 0.12 3.1 ± 0.3

9-시스 레틴산

10μg 0.57 ± 0.48 2.6 ± 0.7

30μg 0.87 ± 0.34 1.8 ± 0.3^**

100μg 7.37 ± 2.04^**0.3 ± 0.1^***

200μg 6.46 ± 1.57^**0^***

대조군에 대해 **p 〈 0.01 *** p 〈 0.001

H. 급성 독성

급성 독성은 퓰린스도르프 알비노(Fullinsdorf albino) 마우스로 측정한다. 9-시스 레틴산을 평지 오일에 현탁시키고 하나의 단일 투여량으로 복강내 투여한다. 마우스의 치사량(LD) 10%, 50% 및 90%를 단일 투여량의 적용후 24시간, 10일 및 20일 후에 기록한다. 각 그룹에 대해 마우스 10마리를 사용한다.

결과(투여한 화합물의 mg/kg)

24시간 10일 20일

LD 10% 〉 4000 1200 1200

LD 50% 〉 4000 1400 1400

LD 90% 〉 4000 1800 1800

하기 실시예들은 본 발명에 의해서 제공된 9-시스 레틴산을 함유하는 약제학적 제제를 설명한다. 9-시스 레틴산 화합물은 또한 (E,Z,E,E,)-3,7-디메틸-9-[2,6,6-트리메틸-1-사이클로헥센-1-일]-2,4,6,8-노나테트라엔산으로 명명할 수 있다.

[실시예 1]

로숀(용액)

바람직한 양

9-시스 레틴산 0.02 - 0.30g

프로필렌 글리콜 5.00- 20.00g 10.00g

PEG-글리세릴 코코에이트* 0.00- 20.00g 10.00g

dl-α-토코페롤 0.001- 0.50g 0.02g

아스코르빌 팔미테이트 0.01 - 0.20g 0.10g

프로필 갈레이트 0.001- 0.02g 0.002g

시트르산, 무수물** 0.00 - 0.20g 0.01g

이소프로판올*** 40.00-90.00g 50.00g

물을 첨가 100.00g 100.00g(각각의 ml)

* 또는 다른 텐사이드(tensides)

** 또는 EDTA와 같은 다른 착화제

*** 또는 에탄올과 같은 다른 알콜

[실시예 2]

겔

바람직한 양

9-시스 레틴산 0.02 - 0.30g

프로필렌 글리콜 5.00- 20.00g 10.00g

PEG-글리세릴 코코에이트* 0.00- 20.00g 10.00g

dl-α-토코페롤 0.001- 0.50g 0.02g

아스코르빌 팔미테이트 0.01 - 0.20g 0.10g

프로필 갈레이트 0.001- 0.02g 0.002g

시트르산, 무수물** 0.00 - 0.20g 0.01g

이소프로판올*** 40.00-90.00g 50.00g

HPMC**** 0.50 -5.00g 3.00g

방부제***** 적당량 적당량

물을 첨가 100.00g 100.00g

* 또는 다른 텐사이드

** 또는 EDTA와 같은 다른 착화제

*** 또는 에탄올과 같은 다른 알콜

**** 하이드록시프로필 메틸셀룰로오즈 또는 중성 카보머(Carbomer),

메틸 셀룰로오즈, 나트륨 카복시 메틸 셀룰로오즈와 같은 다른 중합체

***** 파라벤 에스테르(메틸, 에틸, 프로필, 부틸), 소르브산, 벤조산과 같은 방부제

[실시예 3]

크림

바람직한 양

9-시스 레틴산 0.02 - 0.30g

글리세롤 0.00- 10.00g 5.00g

Na₂EDTA 0.001- 0.50g 0.03g

글리세라이드* 5.00 - 20.00g 10.00g

세틸 알콜 0.50 - 5.00g 1.00g

스테아릴 알콜 0.50-5.00g 1.00g

글리세롤 모노 스테아레이트 1.00-8.00g 4.00g

세타에레트** 0.50-5.00g 2.00g

dl-α-토코페롤 0.001- 0.50g 0.02g

방부제*** 적당량 적당량

물을 첨가 100.00g 100.00g

* 예를 들면, 카프릴릭/카프릭/트리글리세라이드, 카프릴릭/카프릭/리놀레익 트리글리세라이드, 천연 글리세라이드 뿐만 아니라, 예를 들면 프로필렌 글리콜, 디카프릴레이트/디카프레이트 및 스테아릴 스테아레이트, 올레일 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트와 같은 왁스.

** 세테라레이트(Ceteareth) 5-30, 또는 폴리소르베이트 20-80, 지방산의 소르비탄 에스테르, PEG의 지방산 에스테르와 같은 다른 유화제.

*** 파라벤 에스테르(메틸, 에틸, 프로필, 부틸), 소르브산, 벤조산과 같은 방부제

[실시예 4]

연질 젤라틴 캅셀에 대한 충전 연제(fill mass)

9-시스 레틴산 5.00-50.00mg

오일* 1 - 3 부

왁스 혼합물** 1 - 5부

충전 용적 1 - 6 미님(minim)

* 천연 식물성 오일, 예로는 대두 오일, 땅콩 오일 및 합성 글리세라이드

** 천연 왁스 및 합성 왁스 또는 부분적으로 수화된 지방의 조성물

[실시예 5]

1. 활성 물질 200mg을 함유하는 경질 젤라틴 캅셀제

조성 : 캅셀 1개당

9-시스 레틴산 20.0mg

젤라틴 불룸(Gelatin Bloom) 30 70.0mg

말토덱스트린 MD 05 108.0mg

dl-α-토코페롤 2.0mg

나트륨 아스코르베이트 10.0mg

미세결정성 셀룰로오즈 48.0mg

마그네슘 스테아레이트 2.0mg

(캅셀 성분의 중량) 206.0mg

공정:

활성 물질을 젤라틴, 말토데스트린, dl-α-토코페롤 및 나트륨 아스코르베이트의 용액에서 습윤 분쇄한다.

습윤 분쇄된 현탁액을 분무-건조시킨다.

분무-건조된 분말을 미세결정성 셀룰로오즈 및 마그네슘 스테아레이트와 혼합한다.

이 혼합물 각각 260mg을 적합한 크기와 색상을 갖는 경질 젤라틴 캅셀에 충전시킨다.

[실시예 6]

2. 활성 물질 200mg을 함유하는 정제

조성:

정제 핵(kernel):

9-시스 레틴산 20.0mg

무수 락토오즈 130.5mg

미세결정성 셀룰로오즈 80.0mg

dl-α-토코페롤 2.0mg

나트륨 아스코르베이트 10.0mg

폴리비닐피롤리돈 K30 5.0mg

마그네슘 스테아레이트 2.5mg

(핵 중량) 250.0mg

필름 피복:

9-하이드록시프로필 메틸셀룰로오즈 3.5mg

폴리에틸렌글리콜 6000 0.8mg

활석 1.3mg

산화철, 황색 0.8mg

이산화티탄 0.8mg

(필름의 중량) 7.4mg

공정:

9-시스 레틴산을 무수 락토오즈 및 미세결정성 셀룰로오즈와 혼합한다.

이 혼합물을 폴리비닐피롤리돈, dl-α-토코페롤 및 나트륨 아스코르베이트의 용액/분산액으로 수 중에서 과립화한다.

과립 물질을 마그네슘 스테아레이트와 혼합시킨 후, 중량 250mg인 핵으로 압착시킨다.

이 핵을 상술한 조성의 용액/현탁액으로 필름 피복시킨다.

[실시예 7]

활성 물질 50mg을 함유하는 사셰제(sachet):

조성:

9-시스 레틴산 50.0mg

락토오즈, 미세분말 990.0mg

미세결정성 셀룰로오즈 1400.0mg

나트륨 카복시메틸 셀룰로오즈 14.0mg

dl-α-토코페롤 5.0mg

나트륨 아스코르베이트 20.0mg

폴리비닐피롤리돈 K30 10.0mg

마그네슘 스테아레이트 10.0mg

풍미제 1.0mg

(사셰의 충전 중량) 2500.0mg

공정:

9-시스 레틴산을 락토오즈, 미세결정성 셀룰로오즈 및 나트륨 카복시메틸 셀룰로오즈와 혼합한다.

이 혼합물을 폴리비닐피롤리돈, dl-α-토코페롤 및 나트륨 아스코르베이트의 용액/분산액으로 수 중에서 과립화한다.

이 과립을 마그네슘 스테아레이트 및 풍미제와 혼합한다.

이것을 적합한 크기의 사셰에 충전시킨다.

Claims (2)

1. 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르 및 치료학적으로 불활성인 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 전암성 또는 암전구성 상피 병변 또는 상피 종양 치료, 구강의 백반 치료, 또는 흉부, 자궁 경관, 결장, 방광, 식도, 위, 후두, 폐 또는 구강의 상피 종양 치료용 약제학적 조성물.
2. 9-시스 레틴산, 약제학적으로 허용되는 이의 염 또는 약제학적으로 허용되는 이의 가수분해성 에스테르 및 치료학적으로 불활성인 약제학적으로 허용되는 담체를 함유하는, 광 손상된 피부와 연관된 상태 치료용 약제학적 조성물.