KR0133998B1 - Pharmaceutical composition for treating gastrointestinal - Google Patents

Abstract

본 발명은 위액내에서의 강산, 단백질분해효소인 펩신, 고온등의 단백질변성 및 분해 조건에 대해 인간상피세포 성장인자(hEGF, Human epidermal growth factor)의 안전성을 증가시킴으로써 위궤양에 대한 약효를 향상시킨 신규한 의약조건물로서 인간상피세포성장인자에 카제인제 및 펩스타틴제제중에서 선택된 1종 이상의 성분이 배합됨을 특징으로 하는 위장질환 치료용조성물에 관한 것이다.The present invention improves the efficacy of gastric ulcers by increasing the safety of human epidermal growth factor (hEGF) against protein denaturation and degradation conditions such as strong acid, protease pepsin, and high temperature in gastric juice. The present invention relates to a composition for treating gastrointestinal diseases, characterized in that the human epidermal growth factor is blended with at least one component selected from casein and pepstatin.

Description

위장질환 치료용 의약 조성물Pharmaceutical composition for treating gastrointestinal diseases

제1도는 에탄올법을 이용하여 랫트에 유발시킨 급성궤양에 대한 본 발명에 따른 조성물의 항궤양효과를 나타낸 것이다.Figure 1 shows the anti-ulcer effect of the composition according to the invention against acute ulcer induced in rats using the ethanol method.

본 발명은 위·십이지장궤양 질환의 치료에 적합한 위장질환 치료용 의약 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a pharmaceutical composition for treating gastrointestinal diseases suitable for the treatment of gastrointestinal ulcer disease.

본 발명은 특히, 십이지장궤양 뿐 아니라 위궤양 치료에 보다 효과적인 경구용 의약조성물로서, 종래에 유로가스트론으로도 알려진 인간 상피세포 성장인자(human epidermal growth factor, 이하 hEGF)에 카제인제제 및 펩스타틴제제중에서 선택된 1종 이상의 성분이 배합됨을 특징으로 하는 신규의 위장질환 치료용 조성물에 관한 것이다.In particular, the present invention is an oral pharmaceutical composition that is more effective in treating gastric ulcer as well as duodenal ulcer, among which casein and pepstatin are known to human epidermal growth factor (hEGF), also known as eurogastron. The present invention relates to a novel composition for treating gastrointestinal diseases, characterized in that at least one selected ingredient is blended.

본 발명에 있어서 위궤양 치료의 유효성분으로 사용되어 우수한 효과를 나타내는 인간 상피세포 성장인자는 53개의 아미노산으로 구성된 분자량 약 6000달톤의 단백질로서, 사람의 뇨에서 분리된 유로가스트론과 동일한 물질로 알려져 있다(참조 : Cohen, S.(1962), J. Biol. Chem. Vol.248, p1555-1562); Savage, C.R., et al.(1973) J. Biol. Chem. Vol.248, p7669-7672; Savage, C.R.(1972) J. Biol. Chem. Vol.247, p7612-7621).Human epidermal growth factor, which is used as an active ingredient in the treatment of gastric ulcer in the present invention and shows an excellent effect, is a protein having a molecular weight of about 6000 Daltons composed of 53 amino acids and is known to be the same substance as eurogastron isolated from human urine. (Cohen, S. (1962), J. Biol. Chem. Vol. 248, p1555-1562); Savage, C.R., et al. (1973) J. Biol. Chem. Vol. 248, p7669-7672; Savage, C. R. (1972) J. Biol. Chem. Vol. 247, p7612-7621).

hEGF는 포유동물세포 특히 상피세포의 세포분열을 촉진시킬 뿐 아니라(참조 : Sporn, M.B., et al.(1985) Nature Vol.313, p745-747; Spron, M.B. et al.(1980) N. Engl. J. Med. Vol.303, p878-880) 위산분비를 억제하는 작용이 있어(참조 : Elder, J.B., et al.(1975) Gut Vol.16, p887-893) 경구로 투여시 만성 위궤양을 효과적으로 치료하며(참조 : US patent 4,820,690; Olsen, P.S., et al.(1986) Gut Vol.27, p1443-1449; Olsen, P.S.(1986) Gastroenterology Vol.190, p911-917) 위의 점막 세포를 보호, 재생시킴으로써 위·십이지장 궤양의 치료에 효과적인 약물로서 인식되어 왔다.(참조 : Makato, Itoh., et al.(1998) J. Clin. Gastroenterology Vol.10(Suppl.1), pS7-S12; Kontrek, S.J., et al.(1986) Gastroenterology Vol.90, p911-917).hEGF not only promotes cell division of mammalian cells, especially epithelial cells (Sporn, MB, et al. (1985) Nature Vol. 313, p745-747; Spron, MB et al. (1980) N. Engl J. Med. Vol. 303, p878-880) has a role in inhibiting gastric acid secretion (Elder, JB, et al. (1975) Gut Vol. 16, p887-893). Effective treatment (US Pat. No. 4,820,690; Olsen, PS, et al. (1986) Gut Vol. 27, p1443-1449; Olsen, PS (1986) Gastroenterology Vol. 190, p911-917) It has been recognized as an effective drug for the treatment of gastric and duodenal ulcers by regeneration. (Mato, Itoh., Et al. (1998) J. Clin. Gastroenterology Vol. 10 (Suppl. 1), pS7-S12; Kontrek , SJ, et al. (1986) Gastroenterology Vol. 90, p911-917).

이러한 hEGF의 위나 십이지장 궤양조직에 대한 탁월한 피부재생효과와 점막보호효과 및 산분비억제작용으로 인하여 이미 hEGF를 약제로 개발하려는 시도가 이루어져 왔으며, 뇨에서 분리한 유로가스트론에 시메티딘을 병용투여하여 궤양치료를 시도한 바(EP 출원번호 0161816)도 있다.Due to the excellent skin regeneration, mucosal protection, and acid secretion effects of the hEGF on the stomach or duodenal ulcer tissues, attempts have already been made to develop hEGF as a drug, and ulceration by using cimetidine in combination with eurogastron isolated from urine There is also an attempt to treat (EP Application No. 0161816).

그러나 hEGF를 유효성분으로 하는 지금까지의 위장질환 치료제들은 다른 위궤양치료용 약물들과의 단순한 배합에 의해 각각의 약물작용에 의한 궤양치료를 시도하였을뿐 단백질제제인 hEGF의 위액내 안정성을 증대시킴으로써 hEGF의 약효를 증대시키고자 하는 어떠한 연구도 이루어지지 않았으므로 hEGF의 위궤양에 대한 우수한 약효에도 불구하고 경구로 투여시 위내에 존재하는 강산 및 단백질분해효소 등의 작용으로 인해서 hEGF가 쉽게 변성되거나 절단 파괴되어 hEGF의 궤양치유효과를 완전히 발휘하지 못하는 문제점이 있었다.However, up to now gastrointestinal diseases treatments using hEGF as an active ingredient have attempted to cure ulcers by the action of each drug by simple combination with other drugs for treating gastric ulcers. Since no studies have been conducted to increase the efficacy of HEGF, despite the excellent efficacy against gastric ulcers of hEGF, hEGF is easily denatured or cleaved due to the action of strong acid and protease in the stomach when orally administered. There was a problem that hEGF did not fully exhibit the ulcer healing effect.

따라서 본 발명자들은 오랜동안 위내에서의 hEGF의 안정성을 유지시키기 위한 여러방면에 걸친 실험을 계속한 끝에 hEGF의 위액내 안정성을 증가시킬 수 있는 특정의 안정화제를 함께 배합시키면 hEGF의 궤양 치료효과를 상당히 증대시킬 수 있다는 사실을 발견하고 본 발명을 완성하게 되었다.Therefore, the present inventors have continued to conduct various experiments to maintain the stability of hEGF in the stomach for a long time, and when combined with a specific stabilizer that can increase the stability in the gastric juice of hEGF, the therapeutic effect of hEGF can be significantly improved. The present invention has been completed by discovering that it can be increased.

일반적으로 단백질의약품은 거대분자로 구성되어 있으므로 분자량이 작은 합성의약품과는 달리 주변의 환경변화에 의해 물리화학적 변화가 쉽게 이루어지며 이에 따른 단백질의 기능이나 활성도에 있어서 급격한 감소가 유발되어진다. 역가에 영향을 끼치는 단백질의 화학적변화에는 강산이나 강알칼리의 조건 또는 고온에 의한 가수분해(proteolysis), 디아미네이션, 산화등이 해당되며, 물리적인 변화에는 강산, 강알칼리, 심한 온도변화에 의한 단백질의 변성, 응집, 침전등이 있다(참조 : Manning, M.C., et al.(1989) Pharmaceutical Research Vol.6, No.11, p903-918). 따라서, 이러한 단백질의 특성상 단백질의약품을 경구투여하는 경우에는 낮은 생체 이용율 뿐 아니라 위내의 급격한 환경변화로 인해서 대부분의 단백질이 활성도를 소실하게 되므로 정맥이나 피하주사등의 제형을 사용하는 것이 일반적이다.In general, since protein drugs are composed of macromolecules, unlike synthetic drugs having a small molecular weight, physicochemical changes are easily made due to environmental changes in the surroundings, and thus a rapid decrease in protein function or activity is caused. Chemical changes in proteins affecting potency include strong acid or strong alkali conditions, proteolysis, demination and oxidation by high temperature, and physical changes include strong acid, strong alkali, and protein changes caused by severe temperature changes. Denaturation, aggregation, precipitation, etc. (Manning, MC, et al. (1989) Pharmaceutical Research Vol. 6, No. 11, p903-918). Therefore, in the case of oral administration of protein drugs due to the nature of these proteins, it is common to use formulations such as intravenous or subcutaneous injection because most proteins lose their activity due to rapid bioavailability and rapid environmental changes in the stomach.

본 발명에 따른 조성물의 유효성분인 hEGF는 비교적 분자량이 작고 단단한 구조로 이루어져 있으므로 타 단백질에 비해 외부 환경변화에 의한 활성도의 소실율이 비교적 적은것으로 알려져 있지만, 위나 장내와 같은 극심한 환경조건에는 물리화학적 구조변화에 따른 활성도의 감소가 일어나게 되며, 이와 같은 hEGF의 위내 안정성에 주로 영향을 끼치는 요소로는 온도, 산도 및 위내 단백질 분해효소인 펩신을 들 수 있다. 따라서, 강산 및 고온의 조건하에서는 단백질 분해효소인 펩신의 존재에 의해 신속히 변성 분해되어 여러종류의 분해산물로 변형되어지고 이러한 분해물의 활성도는 온전한 단백질에 비해 50% 미만으로 나타났다(참조 : Fujiko, Araki., et al.(1989) Chem. Phar m. Bull. Vol.37, No.2, p404-406).HEGF, an active ingredient of the composition according to the present invention, has a relatively small molecular weight and is composed of a rigid structure, so that the loss rate of activity due to external environmental changes is relatively low compared to other proteins, but the physicochemical structure in severe environmental conditions such as stomach and intestine The change in activity occurs, and the main factors affecting the gastric stability of hEGF include pepsin, which is temperature, acidity and intragastric protease. Therefore, under strong acid and high temperature conditions, it was rapidly denatured by the presence of pepsin, a protease, and transformed into various kinds of degradation products, and the activity of these degradation products was less than 50% compared to intact proteins (see Fujiko, Araki). et al. (1989) Chem. Phar m. Bull.Vol. 37, No. 2, p404-406).

따라서, 본 발명의 목적은 hEGF의 위내 안정성을 증대시키기 위해서 위내 중요한 단백질 분해 효소인 펩신의 저해제로서 펩스타틴제제(참조 : Aoyagi, T., et al.(19 172) J. Antibiot. Vol.25, p689-694) 및/또는 강산 및 펩신에 대한 물리적 차단제로서 카제인제제를 hEGF와 배합시켜 위내에서의 hEGF의 분해를 저가시킴으로써 hEGF의 약효를 극대화시킨, 위궤양치료에 이상적인 의약조성물을 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a pepstatin preparation (Aoyagi, T., et al. (19 172) J. Antibiot. Vol. 25 as an inhibitor of pepsin, an important proteolytic enzyme in the stomach, to enhance the gastric stability of hEGF. , p689-694) and / or casein as a physical blocker against strong acids and pepsin in combination with hEGF to lower the degradation of hEGF in the stomach, thereby providing an ideal pharmaceutical composition for the treatment of gastric ulcers.

이하, 본 발명의 구성에 대해 좀더 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the configuration of the present invention in more detail.

본 발명에 따른 조성물에서 유효성분으로 사용되는 hEGF는 그 공급원으로서 대장균에서 대량발현하여 순수 정제한 재조합 인간 상피세포 성장인자를 사용하였으며, 99% 이상으로 순수정제된 재조합 hEGF(참조 : 대한민국 특허출원 93-6980)를 이용하였다.The hEGF used as an active ingredient in the composition according to the present invention used a recombinant human epithelial growth factor purified purely by mass expression in Escherichia coli as a source thereof, and a recombinant hEGF purified purely by 99% or more (see Korean Patent Application 93 -6980).

또한, 본 발명에 따르는 의약조성물은 인간 상피세포 성장인자 1중량부에 대해 카제인제제 250 내지 3000중량부, 및 펩스타틴제제 0.1 내지 1.0중량부를 사용하는 것이 바람직하며, 여기서 펩스타틴 제제란 펩스타틴 A 또는 그 유도체를 의미하고, 카제인 제제란 카제인, 카제인염, 바람직하게는 카제인 소듐염, 또는 카제인포스포펩티드를 의미한다.In addition, the pharmaceutical composition according to the present invention preferably uses 250 to 3000 parts by weight of casein agent and 0.1 to 1.0 parts by weight of pepstatin agent based on 1 part by weight of human epidermal growth factor, wherein the pepstatin agent is pepstatin A Or a derivative thereof, and a casein preparation means a casein, a casein salt, preferably a casein sodium salt, or a casein phosphopeptide.

한편, 본 발명의 조성물을 형태로 사용하는 경우 위내에서 hEGF가 어느정도로 안정해지는가에 대해 조사하고자 수용체 결합활성 측정법으로 측정한 결과 카제인제제 및/또는 펩스타틴제제에 의한 hEGF가 현저하게 안정화됨을 확인하였고, 랫트를 이용한 급성궤양 및 만성궤양 모델에서의 항궤양효과를 실험한 결과로부터도 카제인제제 및/또는 펩스타틴제제를 hEGF에 첨가하였을때 hEGF만을 단독투여한 군에 비해 월등한 항궤양 효과 및 궤양치유효과를 나타냄을 학인할 수 있었다(실시예 참조). 따라서, 이러한 실험결과는 우유의 주성분이 되는 카제인제제 또는 펩신저해제인 펩스타틴제제가 위산 및 펩신에 의해 hEGF의 급격한 물리적 변성과 화학적 파괴를 방지하여 단백질의 활성도를 안정하게 유지시킴으로써 발생된 궤양부위에 대한 hEGF의 효력을 증강시킨다는 사실을 입증하는 것으로 생각된다.On the other hand, when using the composition of the present invention in the stomach to determine the degree of stabilization of hEGF in the stomach as a result of measurement by receptor binding activity measurement result confirmed that the hEGF stabilized by casein and / or pepstatin preparations significantly The results of experiments on the anti-ulcer effects in acute and chronic ulcer models using rats, rats, and anti-ulcer effect and ulcer were superior to the case where hEGF alone was added when casein and / or pepstatin were added to hEGF. It can be confirmed that the healing effect is shown (see Examples). Therefore, these experimental results indicate that casein or pepsin inhibitor, which is the main ingredient of milk, prevents the rapid physical denaturation and chemical destruction of hEGF by gastric acid and pepsin, thereby maintaining the protein activity stably. It is believed to demonstrate the fact that it enhances the potency of hEGF.

본 발명의 조성물을 바람직하게는 경구용 제제로 사용되는데, 이와 같이 경구용으로 사용될 경우, 일반적으로 체중 60킬로그램인 성인의 1일 용량으로 0.03 내지 1.2밀리그람의 hEGF에 0.1 내지 3그람의 카제인제제 및/또는 0.01 내지 0.3 밀리그람의 펩스타틴제제를 함유하는 조성물로 사용하며, 본 발명의 보다 바람직한 의약조성물은 체중 60킬로그람인 성인의 1일 용량으로 0.06 내지 0.6밀리그람의 hEGF에 0.2 내지 1.2그람의 카제인제제 및/또는 0.02 내지 0.18밀리그람의 펩스타틴제제를 함유하는 조성범위내에서 제조하는 것이 이상적이다.The composition of the present invention is preferably used as an oral preparation, and when used orally as such, 0.1 to 3 grams of casein agent in 0.03 to 1.2 milligrams of hEGF in a daily dose of an adult who is generally 60 kilograms in weight and And / or is used in a composition containing 0.01 to 0.3 milligrams of pepstatin preparation, the more preferred pharmaceutical composition of the present invention is 0.2 to 1.2 grams of casein in 0.06 to 0.6 milligrams hEGF at a daily dose of 60 kilograms of adult weight It is ideal to prepare within a range of formulations containing a formulation and / or a pepstatin formulation of 0.02 to 0.18 milligrams.

또한, 1회 경구형 제제의 투여용량은 정제나 캅셀제의 경우 1정 또는 1캅셀 중 hEGF 30 내지 90마이크로그람, 카제인 염 100 내지 200밀리그람, 펩스타틴 10 내지 30마아크로그람의 중량으로 함유하는 것이 바람직하고, 기타 액제, 산제, 과립제 등의 함유량은 제형에 따라 적절히 조절한다.In addition, the dosage amount of a single oral preparation should be contained in the weight of hEGF 30 to 90 micrograms, casein salt 100 to 200 milligrams, pepstatin 10 to 30 micrograms in one tablet or capsule in the case of tablets or capsules. Preferably, the content of other liquids, powders, granules and the like is appropriately adjusted depending on the dosage form.

본 발명에 따른 의약조성물의 성인에 대한 투여용법은 통상적인 경구용 제제중의 1형태인 정제로 투여할 경우 1일 2 내지 3회, 1회 1 내지 2정씩 복용하는 것이 바람직하다.In the administration of the pharmaceutical composition according to the present invention to adults, it is preferable to take two to three times a day and one to two tablets once when administered as a tablet in one form of a conventional oral preparation.

본 발명의 조성물은 약학적으로 허용되는 담체 즉, 안정제, 부형제, 희석제 등을 1종이상 첨가하여 이용함으로써 캅셀제, 정제, 액제, 산제 또는 과립제 형태의 제제방법을 통해서 제형화할 수 있는데, 이들 제형들에 대해 각 제형별 안정성 시험을 수행한 결과, 각 제형의 경시적 변화가 나타나지 않을 뿐 아니라 장시간 보관시에도 안정한 것으로 확인되었다.The composition of the present invention can be formulated through a preparation method in the form of capsules, tablets, liquids, powders or granules by using one or more pharmaceutically acceptable carriers, that is, stabilizers, excipients, diluents, etc., these formulations As a result of performing a stability test for each formulation, it was confirmed that not only does not change with each formulation over time, but also is stable even when stored for a long time.

한편, 이미 독성이 없는 것으로 공지된 각 성분들을 배합시킴으로써 기존의 약효에 비해 특별한 효과를 달성하고 있는 본 발명에 따른 조성물을 마우스에 적용시켜 임상증상, 생사여부, 및 육안적 관찰을 해 본 결과, 실험동물들 모두 생존했으며 특이한 임상적 증상도 나타내지 않았고 실험 종료 후 육안적 해부소경도 정상적이었으므로 본 조성물을 투여에 의한 급성독성을 유발시키지 않는 것으로 확인되었다.On the other hand, by combining the components already known to be non-toxic by applying a composition according to the present invention that achieves a special effect compared to the existing medicinal effects to the clinical symptoms, life and death, and visual observation, All the animals survived and did not show any specific clinical symptoms and the visual dissection was normal at the end of the experiment.

이하, 본 발명을 실시예를 통하여 더욱 구체적으로 설명하고자 하나, 어떤 형태로든 본 발명이 다른 실험예 및 실시예에 의해서 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, but the present invention in any form is not limited to other Experimental Examples and Examples.

[실험예 1 : hEGF의 제조]Experimental Example 1: Preparation of hEGF

대한민국 특허 출원 제93-6979호 인간 상피세포 성장인자(hEGF) 발현벡터 및 그를 이용한 hEGF의 제조방법에 기술된 바에 따라 형질전환체인 대장균 JM101(Escherichia coli JM101 : KCCM-10027)으로부터 유전자 재조합 hEGF를 대량생산해 내고, 대한민국 특허출원 제93-6980호 재조합 인간 상피세포 성장인자의 정제방법에 따라 순수정제하고 동결건조시켜서 순도 99% 이상인 1.5그람의 hEGF를 수득하였다.As described in Korean Patent Application No. 93-6979, a human epidermal growth factor (hEGF) expression vector and a method of preparing hEGF using the same, a large amount of recombinant hEGF was transferred from Escherichia coli JM101 (Escherichia coli JM101: KCCM-10027). Produced and purified according to the method of purifying recombinant human epidermal growth factor of Korean Patent Application No. 93-6980 and lyophilized to obtain 1.5 grams of hEGF having a purity of 99% or more.

[실험예 2 : 인공위액에서 hEGF의 안정화 효과]Experimental Example 2: Stabilization effect of hEGF in artificial gastric juice

밀리리터당 50마이크로그람의 hEGF에 밀리리터당 5밀리그람의 우유 카제인 소듐염(Sigma C8654) 및 밀리리터당 20나노그램 농도의 펩스타틴 A(Sigma P4265)를 배합하여 조제하였다. 염하나트륨 2.0그람과 염산 24밀리리터를 물에 가하고 용해시켜 1리터를 만든 용액(대한약전 제6개정, 일반시험법, 붕해시험법 제1액) 1밀리리터당 상기 조제된 조성물 및 0.5밀리그람 펩신을 함유하는 인공위액 0.18밀리리터를 잘 혼합한후 37℃의 온도에서 60분간 반응시키고 10N 수산화나트륨으로 pH 7.2까지 중화시켜 반응을 중지시켰다. 잔존하는 hEGF의 활성도 측정은 수용체 결합활성 측정법(참조 : Rieman, M.W., et al.(1987) Peptides Vol. 8, p877-885)을 이용하였으며 생리식염수에 녹인 hEGF의 활성도를 100% 기준으로하여 각 처리군의 잔존 활성도를 측정하였다. 각 군당 hEGF의 활성측정은 3회 실험하여 그 평균치로 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.50 micrograms per milliliter of hEGF were formulated with 5 milligrams of milk casein sodium salt (Sigma C8654) per milliliter and pepstatin A (Sigma P4265) at a concentration of 20 nanograms per milliliter. Contain the composition prepared above and 0.5 milligram pepsin per milliliter of a solution prepared by dissolving 2.0 grams of sodium chloride and 24 milliliters of hydrochloric acid in water and dissolving 1 liter (1st solution of the KP, General Test Method, and Disintegration Test Method 1). 0.18 milliliter of artificial gastric fluid was mixed well, and then reacted at a temperature of 37 ° C. for 60 minutes and neutralized with 10N sodium hydroxide to pH 7.2 to stop the reaction. The remaining activity of hEGF was measured by measuring receptor binding activity (Rieman, MW, et al. (1987) Peptides Vol. 8, p877-885), and each 100% of hEGF was dissolved in physiological saline. The remaining activity of the treated group was measured. Activity measurement of hEGF per each group was calculated by the average of three experiments, the results are shown in Table 1 below.

표 1의 결과에서 보는 바와 같이, 카제인 소듐염과 펩스타틴 A성분을 각각 첨가시킨 hEGF의 조성물은 hEGF만으로 구성된 단일제제보다 인공위액조건에서 월등이 높은 수용체 결합 활성도를 나타내므로 이로부터 카제인 소듐염과 펩스타틴 A성분이 hEGF의 안정화 정도에 끼치는 영향을 알 수 있으며, 따라서 위궤양 치료용 제제로서의 우수한 효과를 제시하는 것이라고 볼 수 있다.As shown in the results of Table 1, the composition of hEGF to which the casein sodium salt and the pepstatin A component were added, respectively, showed higher receptor binding activity under artificial gastric fluid conditions than the single agent composed of hEGF alone. It can be seen that the effect of the pepstatin A component on the degree of stabilization of hEGF, thus suggesting an excellent effect as an agent for treating gastric ulcer.

[실험예 3 : 급성 항궤양 효과(에탄올 법)]Experimental Example 3: Acute Anti-ulcer Effect (Ethanol Method)

본 발명에 따른 신규 조성물의 항궤양에 대한 직접적인 효과를 확인하기 위해서 에탄올에 의한 급성궤양을 유발시켜 (참조 : Tarnawsk, et al. (1985) AM. J. Med. Vol. 79, p19-23) 실험하였다. 실험동물로는 각 그룹별로 200-250그람의 SD계 웅성 쥐를 24시간 절식시킨후, 10마리씩 취하여 약물을 경구 투여하고 1시간 지난다음 1.5밀리리터의 99.5% 에탄올을 경구투여하여 궤양을 유발시켰다 에탄올 투여 4시간 후에 각 쥐의 위를 개복, 궤양면적을 측정하였다. 시험물질 투여군의 궤양에 대한 영향을 대조물질 투여군의 위궤양 면적과 비교하여 대조군의 궤양지수를 100%로 하여 억제율(Inhibition rate)과 발생율(Incidence)을 계산하였다.In order to confirm the direct effect on the antiulcer of the novel composition according to the present invention, acute ulceration by ethanol was induced (Tarnawsk, et al. (1985) AM. J. Med. Vol. 79, p19-23). Experiment. In experimental animals, 200-250 grams of SD male rats were fasted for 24 hours in each group, and 10 rats were taken orally after drug administration. After 1 hour, oral administration of 1.5 milliliters of 99.5% ethanol induced ulcers. After 4 hours of administration, the stomach of each rat was opened and the ulcer area was measured. Inhibition rate and incidence were calculated by comparing the effect on the ulcer of the test group with the area of gastric ulcer of the control group.

약물의 효력은 스튜덴스 티-시험(Student's t-test)를 이용하여 대조군과 시험물질군간의 유의성을 검증하여 확인하였고, 실험결과는 하기 표 2에 나타내었다.The efficacy of the drug was confirmed by verifying the significance between the control group and the test substance group using Student's t-test, and the experimental results are shown in Table 2 below.

(* : P0.05, ** : P0.01, 대조군과 비교하여 유의적으로 다름(significantly different from control)(*: P0.05, **: P0.01, significantly different from control)

상기 결과로부터 알 수 있듯이, hEGF를 단독투여하는 경우에는 위내의 산성성분과 단백질 분해효소인 펩신의 작용으로 인해서 궤양유발억제효과가 미약하였으나, 카제인소듐염 및/또는 펩스타틴 A를 병행하여 투여하는 경우에는 hEGF에 대한 카제인의 물리적보호와 펩스타틴에 의한 화학적 방어 역할로 인해서 hEGF의 궤양유발 억제효과가 상당히 증가되었음이 뚜렷하게 나타났다. 한편 제1도는 상기 실험결과의 대표적인 예를 도시한 것이다.As can be seen from the above results, when hEGF was administered alone, the effect of inhibiting the ulcer induced by the action of acidic components in the stomach and pepsin, a protease, was weak, but casein sodium salt and / or pepstatin A were administered in parallel. In the case of hEGF, the physical protection of casein and the role of chemical defense by pepstatin showed a significant increase in the ulcer-inducing effect of hEGF. 1 is a representative example of the experimental results.

[실험예 4 : 급성 항궤양 효과(스트레스법)]Experimental Example 4: Acute Anti-ulcer Effect (Stress Method)

본 발명에 따른 신규 hEGF 조성물의 급성 항궤양 효과를 스트레스에 의한 궤양유발에 의한 방법 (참조 : Brodie, et al., (1960) Gastroenterology Vol.38, p353-360)으로 측정하였다. 각 그룹별로 체중 200 내지 250그람의 웅성랫트를 10마리씩 취하여 24시간 절식시킨후 약물을 경구투여하고 10분후에 고정틀에 1마리씩 고정시키고, 23 내지 25도의 온도로 조정된 수조에 흉골돌기까지 침수시켜 스트레스를 가해주었다. 20시간 후에 위장을 적출하고 대만부를 따라 펼친다음 위점막을 확대경(×10)을 통하여 점막상에 부착된 출혈부분과 손상부분의 면적을 측정하여 궤양지수를 산출하였다. 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.The acute antiulcer effect of the novel hEGF composition according to the present invention was measured by the method of ulceration induced by stress (Brodie, et al., (1960) Gastroenterology Vol. 38, p353-360). Take 10 male rats weighing 200-250 grams for each group and fast for 24 hours, orally administer the drugs and fix them one by one in a fixed frame 10 minutes later, and immerse them to the sternum process in a water bath adjusted to a temperature of 23 to 25 degrees. Stressed out. After 20 hours, the stomach was removed, stretched along the Taiwanese area, and the ulceration index was calculated by measuring the area of the bleeding part and the damaged part attached to the mucosa through the magnifier (× 10). The results are shown in Table 3 below.

(* : P0.05, ** : P0.01, 대조군과 비교하여 유의적으로 다름)(*: P0.05, **: P0.01, significantly different than the control group)

상기의 결과에서 보는 바와 같이, 카제인포스포펩티드 및/또는 펩스타틴이 첨가된 hEGF 조성물에 의한 스트레스성 궤양의 생성억제작용은 실시예 2의 에탄올 궤양에 대해서와 마찬가지로 hEGF 단일제제에 비해 현저한 항궤양 효과를 나타내었다.As can be seen from the above results, the inhibition of stress ulcer production by the casein phosphopeptide and / or pepstatin-added hEGF composition was markedly anti-ulcer as compared to the ethanol ulcer of Example 2, as compared to the ethanol ulcer of Example 2. The effect was shown.

[실험예 5 : 만성 궤양에 대한 치유효과(초산법)]Experimental Example 5: The healing effect on chronic ulcers (acetic acid method)

본 발명에 따른 조성물의 만성궤양에 대한 궤양 치유효과를 초산궤양법(참조 : Takagi, K., et al.(1969) Japan J. Pharmacol. Vol.19, p418)으로 실험하였다.The ulcer healing effect on the chronic ulcer of the composition according to the present invention was tested by acetic acid ulceration method (Takagi, K., et al. (1969) Japan J. Pharmacol. Vol. 19, p418).

각 실험군당 200 내지 250그람의 SD계 웅성랫트 10마리씩을 24시간 동안 절식시킨 후, 위장의 외장막에 30마이크로리터의 30% 초산을 주입하고 20일간 약물을 투여하였다. 그후 각 쥐의 위를 개복한 후 궤양면적을 측정하여 치유효과를 비교하였으며, 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.Ten SD rats of 200-250 grams per each experimental group were fasted for 24 hours, and then 30 microliters of 30% acetic acid was injected into the gastrointestinal envelope and the drug was administered for 20 days. Then, after opening the stomach of each rat was measured by comparing the healing effect by measuring the ulcer area, the results are shown in Table 4 below.

(* : P0.05, ** : P0.01, 대조군과 비교하여 유의적으로 다름)(*: P0.05, **: P0.01, significantly different than the control group)

상기 표 4의 결과로부터 알 수 있듯이, 주성분인 hEGF에 카제인 소듐염 또는 펩스타틴 A가 첨가된 본 발명에 따른 조성물은 hEGF 단독 투여군에 비해 만성 위궤양의 치유에 월등한 치료효과를 나타내었을 뿐 아니라 카제인 소듐염과 펩스타틴을 hEGF와 함께 투여한 군에서는 휠씬 더 우수한 궤양치유 효과를 보여주었다.As can be seen from the results of Table 4, the composition according to the present invention to which the casein sodium salt or pepstatin A is added to the main ingredient hEGF as well as casein showed a superior therapeutic effect in the treatment of chronic gastric ulcer compared with the hEGF alone administration group Sodium salt and pepstatin with hEGF showed a much better ulcer healing effect.

[실시예 1]Example 1

본 발명에 따른 제제예Formulation Example According to the Present Invention

제제예 1 : 캅셀제(1)Formulation Example 1 Capsule (1)

hEGF : 240밀리그람hEGF: 240 mg

카제인 소듐염 : 630그람Casein sodium salt: 630 grams

락토오스 : 1351그람Lactose: 1351g

스테아린산 마그네슘 : 8그람Magnesium Stearate: 8 grams

상기 용량은 1회 4000캅셀의 제조용량으로서 주성분 및 부형제를 혼합한 후 1캅셀에 500밀리그람씩 통상의 방법으로 충전한다. 이 제제는 1일 3회, 1회 1 내지 2캅셀씩 복용한다.The above dose is a manufacturing dose of 4,000 capsules at a time, and after mixing the main ingredient and the excipient, 500 milligrams are filled in one capsule in a conventional manner. This preparation is taken 1 to 2 capsules three times a day.

제제예 2 : 캅셀제(2)Formulation Example 2: Capsule (2)

hEGF : 240밀리그람hEGF: 240 mg

펩스타틴 A : 80밀리그람Pepstatin A: 80 mg

락토오스 : 1991그람Lactose: 1991 Grams

스테아린산 마그네슘 : 8그람Magnesium Stearate: 8 grams

상기 용량은 1회 4000캅셀의 제조용량으로서 주성분 및 부형제를 혼합한 후 1캅셀에 500밀리그람씩 통상의 방법으로 충전한다. 이 제제는 1일 3회, 1회 1-2캅셀씩 복용한다.The above dose is a manufacturing dose of 4,000 capsules at a time, and after mixing the main ingredient and the excipient, 500 milligrams are filled in one capsule in a conventional manner. This preparation is taken 1-2 capsules three times a day.

제제예 3 : 캅셀제(3)Formulation Example 3: Capsule (3)

hEGF : 240밀리그람hEGF: 240 mg

카제인 소듐염 : 640그람Casein sodium salt: 640 grams

펩스타틴 A : 80밀리그람Pepstatin A: 80 mg

락토오스 : 1351그람Lactose: 1351g

스테아린산 마그네슘 : 8그람Magnesium Stearate: 8 grams

상기 용량은 1회 4000캅셀의 제조용량으로서 주성분 및 부형제를 혼합한 후 1캅셀에 500밀리그람씩 통상의 방법으로 충전한다. 이 제제는 1일 3회, 1회 1 내지 2캅셀씩 복용한다.The above dose is a manufacturing dose of 4,000 capsules at a time, and after mixing the main ingredient and the excipient, 500 milligrams are filled in one capsule in a conventional manner. This preparation is taken 1 to 2 capsules three times a day.

제제예 4 : 정제(1)Formulation Example 4: Tablet (1)

hEGF : 240밀리그람hEGF: 240 mg

카제인 소듐염 : 640그람Casein sodium salt: 640 grams

락토오스 : 1151그람Lactose: 1151 Grams

스테아린산 마그네슘 : 8그람Magnesium Stearate: 8 grams

아카시아 파우다 : 100그람Acacia Powder: 100 grams

전분글리콜산 나트륨 : 100그람Sodium starch glycolate: 100 grams

아카시아 파우다 100그람을 물 1000밀리리터에 완전히 용해시키고 여기에 따로 물 10밀리리터에 hEGF 240밀리그람을 용해 및 균질화시킨 액을 부가하여 10분간 천천히 교반하여 결합액을 조제하였다. 그후 카제인 소듐염과 락토오스를 상기 용량으로 리본믹서에 가한 후, 결합액을 가하여 연합하고 직경 1밀리리터의 체가달린 제립기를 이용하여 제립한 후 송풍 건조시켰다. 그후 직경 1.2밀리미터의 체가달린 정립기를 이용하여 정립한후 정립물에 스테아린산 마그네슘과 전분글리콜산나트륨을 가한후 균질하게 혼합하고 타정하였다. 타정시 중량은 1정당 500밀리그람으로 타정하였다. 이 제제는 1일 3회, 1회 1내지 2정씩 복용한다.100 grams of acacia powder was completely dissolved in 1000 milliliters of water, and a solution obtained by dissolving and homogenizing 240 milligrams of hEGF was added to 10 milliliters of water, and stirred slowly for 10 minutes to prepare a binding solution. Thereafter, casein sodium salt and lactose were added to the ribbon mixer at the above capacity, and then the binder solution was added and coalesced. The granules were granulated using a granule with a 1 milliliter sieve and blow-dried. Thereafter, the granules were sieved using a 1.2 mm diameter sieve sieving machine, and magnesium stearate and sodium starch glycolate were added to the sieved material, followed by homogeneous mixing and tableting. The tableting weight was tableted to 500 milligrams per tablet. This preparation is taken 3 times a day, once or twice a day.

제제예 5 : 정제(2)Formulation Example 5: Tablet (2)

hEGF : 240밀리그람hEGF: 240 mg

펩스타틴 A : 80밀리그람Pepstatin A: 80 mg

락토오스 : 1791그람Lactose: 1791 Grams

스테아린산 마그네슘 : 9그람Magnesium Stearate: 9 grams

아카시아 파우다 : 100그람Acacia Powder: 100 grams

전분글리콜산 나트륨 : 100그람Sodium starch glycolate: 100 grams

아카시아 파우다 100그람을 물 1000밀리리터에 완전히 용해시키고 여기에 따로 물 10밀리리터에 hEGF 240밀리그람을 용해 및 균질화시킨 액을 부가하여 10분간 천천히 교반하여 결합액을 조제하였다. 그후 펩스타틴 A와 락토오스를 상기 용량으로 리본믹서에 가한후, 결합액을 가하여 연합하고 직경 1밀리리터의 체가 달린 제립기를 이용하여 제립한 후 송풍 건조시켰다. 그후, 직경 1.2밀리미터의 체가달린 정립기를 이용하여 정립한 후 정립물에 스테아린산 마그네슘과 전분글리콜산나트륨을 가한후 균질하게 혼합하고 타정하였다. 타정시 중량은 1정당 500밀리그람으로 타정하였다. 이 제제는 1일 3회, 1회 1 내지 2정씩 복용한다.100 grams of acacia powder was completely dissolved in 1000 milliliters of water, and a solution obtained by dissolving and homogenizing 240 milligrams of hEGF was added to 10 milliliters of water, and stirred slowly for 10 minutes to prepare a binding solution. Thereafter, pepstatin A and lactose were added to the ribbon mixer at the above capacity, and then the binder solution was added and coalesced. The granules were granulated using a granulator with a sieve of 1 milliliter in diameter and then blow-dried. Thereafter, the granules were sieved using a 1.2 mm diameter sieve sieving machine, and magnesium stearate and sodium starch glycolate were added to the sieved material, followed by homogeneous mixing and tableting. The tableting weight was tableted to 500 milligrams per tablet. This preparation is taken 1 to 2 tablets three times a day.

제제예 6 : 정제(3)Formulation Example 6 Tablet (3)

hEGF : 240밀리그람hEGF: 240 mg

카제인 소듐염 : 640그람Casein sodium salt: 640 grams

펩스타틴 A : 80밀리그람Pepstatin A: 80 mg

락토오스 : 1151그람Lactose: 1151 Grams

스테아린산 마그네슘 : 8그람Magnesium Stearate: 8 grams

아카시아 파우다 : 100그람Acacia Powder: 100 grams

전분글리콜산나트륨 : 100그람Sodium starch glycolate: 100 grams

아카시아 파우다 100그람을 물 1000밀리리터에 완전히 용해시키고 여기에 따로 물 10밀리리터에 hEGF 240밀리그람을 용해 및 균질화시킨 액을 부가하여 10분간 천천히 교반하여 결합액을 조제하였다. 그후 카제인 소듐염과 펩스타틴 A, 그리고 락토오스를 상기 용량으로 리본믹서에 가한후, 결합액을 가하여 연합하고 직경 1밀리미터의 체가달린 제립기를 이용하여 제립한 후 송풍 건조시켰다. 그후 직경 1.2밀리미터의 체가달린 정립기를 이용하여 정립한 후 스테아린산 마그네슘과 전분글리콜산나트륨을 가한후 균질하게 혼합하고 타정하였다. 중량은 1정당 500밀리그람으로 타정하였다. 이 제제는 1일 3회, 1회 1 내지 2정씩 복용하였다.100 grams of acacia powder was completely dissolved in 1000 milliliters of water, and a solution obtained by dissolving and homogenizing 240 milligrams of hEGF was added to 10 milliliters of water, and stirred slowly for 10 minutes to prepare a binding solution. Thereafter, casein sodium salt, pepstatin A, and lactose were added to the ribbon mixer at the above-mentioned doses, then combined by adding a binding solution, granulated using a granulator with a 1 mm diameter sieve, and air-dried. After sizing was performed using a 1.2 mm diameter sieve sieving machine, magnesium stearate and sodium starch glycolate were added, followed by homogeneous mixing and tableting. The weight was compressed to 500 milligrams per tablet. This preparation was taken 3 times a day, once or twice tablets.

제제예 7 : 액제Formulation Example 7 Liquid

hEGF : 6밀리그람hEGF: 6 milligrams

카제인 포스포펩티드 : 16그람Casein phosphopeptide: 16 grams

펩스타틴 A : 2밀리그람Pepstatin A: 2 mg

액상과당 : 70그람Liquid fructose: 70 grams

안식향산나트륨 : 1그람Sodium benzoate: 1 gram

구연산 : 2.5그람Citric Acid: 2.5 grams

정제수 적량을 가해 최종 1000밀리리터가 되도록 한다.Appropriate amount of purified water is added to the final 1000 milliliters.

정제수 600밀리리터에 카제인 포스포펩티드를 가하여 완전히 용해시킨 후 hEGF, 펩스타틴 A, 과당, 안식향산나트륨, 구연산을 순차적으로 가하고 교반기로 혼합하여 완전히 균질화시켰다. 적절한 필터로 멸균시킨 후 1회 용량이 10밀리리터가 되도록 포장하였다. 이 제제는 1일 3회, 1회 10 내지 20밀리리터로 복용한다.Casein phosphopeptide was added to 600 milliliters of purified water and completely dissolved. Then, hEGF, pepstatin A, fructose, sodium benzoate, and citric acid were sequentially added and mixed with a stirrer to homogenize completely. After sterilization with an appropriate filter, the package was packed so that one dose was 10 milliliters. This preparation is taken 10 to 20 milliliters three times a day.

제제예 8 : 산제/과립제Formulation Example 8 Powder / Granule

hEGF : 240밀리그람hEGF: 240 mg

카제인 소듐염 : 640그람Casein sodium salt: 640 grams

펩스타틴 A : 80밀리그람Pepstatin A: 80 mg

락토오스 : 408그람Lactose: 408g

만니톨 : 902그람Mannitol: 902 grams

아카시아 파우다 : 50그람Acacia Powder: 50 Grams

아카시아 파우다 50그람을 물 200밀리리터에 용해시킨후, 이 아카시아 파우다액에 hEGF 240밀리그람을 용해시킨 수용액 10밀리리터를 균질하게 혼합시켰다. 적당한 믹서에 카제인 소듐염, 펩스타틴 A, 락토오스, 및 만니톨을 혼합한 후 아카시아 파우다 용액으로 연합하였다. 연합후 대한약전 제6개 정의 제제총칙에 따른 통상의 제조방법에 따라 제조하였다. 이때 1회 용량은 500밀리그람으로 하며 1일 3회, 1회 1-2포씩 복용한다.After 50 grams of acacia powder was dissolved in 200 milliliters of water, 10 milliliters of an aqueous solution in which 240 milligrams of hEGF was dissolved in the acacia powder was mixed homogeneously. Casein sodium salt, pepstatin A, lactose, and mannitol were mixed in a suitable mixer and then combined with acacia powder solution. It was prepared according to the conventional manufacturing method according to the sixth definition of the Korean Pharmacopoeia after the association. At this time, the dose should be 500 milligrams three times a day, once or 1-2 doses.

[실시예 2]Example 2

안정성시험Stability test

1) 검체 : 전기 실시예 1중 제제예 1,2에 따라 제조된 캅셀제 및 정제의 2개 제형을 검체로 하였다.1) Specimen: Two formulations of capsules and tablets prepared according to Formulations 1 and 2 in Example 1 were used as specimens.

2) 보존조건 : 온도, 습도에 대한 안정성시험2) Storage condition: Stability test for temperature and humidity

포장형태 : 갈색유리용기에 넣고 알루미늄 캡으로 기밀한 상태Package type: Airtight in a brown glass container with aluminum cap

저장온도 : 25±1℃, 75% RH(±5%)Storage temperature: 25 ± 1 ℃, 75% RH (± 5%)

저장기간 : 4개원Storage period: 4 won

3) 측정시기 : 시험개시와 1개월, 2개월, 4개월마다 수행3) Measurement time: start of test and perform every 1 month, 2 months, 4 months

4) 시험방법 : hEGF의 역가 측정은 리만의 수용체 결합활성 측정법(참조 : Rieman, M. W., et al.(1987) Peptides Vol. 8, p877-885)을 이용하여 한 로트(Lot)당 3개의 검체를 시험하여 3개 로트의 평균치를 역가로서 나타내었다. 그 시험결과 하기 표 5에 기재하였다.4) Test method: hEGF titer was measured in three samples per lot using Riman's receptor binding activity assay (see Rieman, MW, et al. (1987) Peptides Vol. 8, p877-885). Was tested to represent the average of three lots as titers. The test results are shown in Table 5 below.

이상의 결과로부터, 본 발명에 따른 조성물로 제조된 캅셀제(제제예 1,2,3) 및 정제(제제예 4,5,6)는 모두 실온조건에서 4개월간 안정함을 알 수 있으므로 보관조건인 4℃에서는 적어도 1년 이상의 안정성이 있음을 예상할 수 있다.From the above results, it can be seen that the capsules (Preparation Examples 1, 2, 3) and tablets (Preparation Examples 4, 5, 6) prepared with the composition according to the present invention are all stable for 4 months at room temperature conditions. At ℃, it can be expected that there is at least one year of stability.

Claims (7)

인간 상피세포 성장인자(hEGF : Human epidermal growth factor)에 카제인제제 및 펩스타틴제제중에서 선택된 1종 이상의 성분이 배합됨으로 특징으로 하는 위장질환 치료용 조성물.A composition for treating gastrointestinal diseases, characterized in that the human epidermal growth factor (hEGF) is blended with one or more components selected from casein preparations and pepstatin preparations. 제1항에 있어서, 카제인제제가 카제인, 카제인소듐염, 또는 카제인포스포펩티드임을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1, wherein the casein agent is casein, casein sodium salt, or casein phosphopeptide. 제1항에 있어서, 펩스타틴제제가 펩스타틴 A 또는 그 유도체임을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 1, wherein the pepstatin agent is pepstatin A or a derivative thereof. 제1항에 있어서, 인간 상피세포 성장인자 1중량부에 대해 카제인제제 250 내지 3000중량부, 펩스타틴 제제 0.1 내지 1.0중량부를 사용함으로 특징으로 하는 조성물.The composition according to claim 1, wherein 250 to 3000 parts of casein agent and 0.1 to 1.0 part by weight of pepstatin preparation are used based on 1 part by weight of human epidermal growth factor. 제1항에 있어서, 체중 60kg당 1일 복용량으로 인간 상피세포 성장인자는 0.03 내지 1.2mg, 카제인제제는 0.1 내지 3.0g, 펩스타틴제제는 0.01 내지 0.3mg의 범위내에서 함유함을 특징으로 하는 조성물.The method according to claim 1, wherein the human epidermal growth factor is contained in the range of 0.03 to 1.2 mg, casein preparation 0.1 to 3.0 g, pepstatin preparation 0.01 to 0.3 mg at a daily dose per 60 kg body weight Composition. 제1항에 있어서, 경구용 제제로 제조됨을 특징으로 하는 조성물.A composition according to claim 1, which is prepared as an oral preparation. 제6항에 있어서, 경구용 제제가 캅셀제, 정제, 액제, 산제, 과립제중에서 선택됨을 특징으로 하는 조성물.7. The composition of claim 6, wherein the oral formulation is selected from capsules, tablets, solutions, powders, and granules.